Facultad de Estudios Superiores-Zaragoza

UNAM

ELECTROFORESIS
CAPILAR

PRINCIPIOS DE ELECTROFORESIS
CAPILAR
GELES VS
CAPILARES
GELES

CAPILARES

Gel de Poliacrilamida
Carriles mltiples
La muestra se carga en un pozo en la
superficie del gel

Polmeros
Un solo capilar
Inyeccin electrocintica

PRINCIPIOS EN COMUN
DNA cargado negativamente migra hacia el extremo positivo.
Los fragmentos de DNA son separados por tamao. Los mas pequeos migran ms
rpido.

FUNDAMENTO
El termino electroforesis se emplea para describir la
migracin de partculas cargadas bajo la accin de un
campo elctrico (electrocintica).
La electroforesis constituye una tcnica de separacin
basada en diferentes velocidades (movilidad) de un
conjunto de solutos (sustancia), sometidos a la accin
del campo elctrico.

ELECTROFORESIS
El capilar del electrodo se coloca dentro
de la muestra
Se aplica voltaje
El DNA cargado negativamente entra en
el capilar y migra hacia el nodo (+) en
el otro extremo del capilar
Los iones compiten con los productos
de secuenciacin durante la inyeccin!!
No hay reduccin en el volumen de la
muestra
La inyeccin es afectada directamente
por la intensidad del voltaje y su
duracin
POLIMEROS
POP- 4. Menos viscoso (corridas rpidas), principalmente para anlisis de
fragmentos o secuenciacin de fragmentos cortos de DNA <500pbs
POP-6. Ms viscoso (corridas lentas), principalmente para secuenciar
fragmentos largos de DNA >500 pbs
POP-7. Menos viscoso (corridas rpidas), pero excelente para secuenciacin
de DNA (lecturas cercanas de 1000 pbs) y anlisis de fragmentos

BOMBA

POLMERO
BUFFER

CELDA DE
DETECCIN
CAMARA DE CCD

CAPILAR
ES

Los Fluorocromos unidos a cada fragmento

de DNA son excitados por el lser mientras
pasan la ventana de deteccin.
La Fluorescencia emitida por cada
fluorocromo es colectada por la cmara de
CCD y despus convertida en un
electroferograma.
Los fragmentos ms pequeos, pasan
primero por la ventana de deteccin.

COMO SE CONVIERTEN LOS DATOS CRUDOS EN UN

ELECTROFEROGRAMA?

La fluorescencia es colectada por el instrumento y el

software Data collection, y se guarda como un
archivo de datos crudos. Este archivo es
posteriormente transferido al software Gene Mapper
para la asignacin de tamao y genotipificacin

RUN
CYCLE
Calentamiento
del horno

Coleccin de
datos

Llenado de
Capilares con
Polmero fresco

Electroforesis

Pre-corrida

Inyeccin
electrocintica