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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGIA MOLECULAR

PRCTICA N 9
ESTUDIO DE ORGANELAS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS,
CLOROPLASTOS Y PLASTIDIOS.
I.INTRODUCCIN:
Mediante esta prctica reconoceremos las siguientes organelas
celulares: Mitocondrias, lisosomas, cloroplastos y plastidios para seguir
conociendo la estructura de la clula ,teniendo un conocimiento terico
previo a la prctica la cual nos ayuda a desenvolvernos durante el
procedimiento de la prctica .
Al final de la prctica lograremos cumplir los objetivos trazados para
la prctica, finalmente sacaremos las conclusiones de lo observado
durante la prctcia.
II. OBJETIVO:
Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las
mitocondrias presentes slo en el citoplasma de las clulas Eucariotas,
que vienen a constituir las centrales de energa porque producen y
almacenan energa bajo la forma de ATP.
Las clulas tienen vesculas membranosas que contienen enzimas
hidrolticas que permiten la digestin intracelular y que corresponden a
los lisosomas los cuales pueden pueden ser identificados en
protozoarios con una tincin vital.
Con el uso de suero fisiolgico observar plastidos en las clulas
vegetales eucariticas, los que contienen pigmentos y pueden sintetizar
y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son plastidos
incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidn, los Proteinoplastos
que acumulan protenas, los Elaioplastos que acumulan grasas y aceites
esenciales. Los Cromoplastos son plastidos coloreados como el Caroteno
que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la
Xantofila de color amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento
de color verde y cuya funcin principal es realizar la fotosntesis.
III.MARCO TEORICO:
Siguiendo con el tema de aclarar algunos conceptos, en el idioma ingls una
palabra se puede traducir en 5 a 6 trminos diferentes al espaol, esto es lo que
pasa con el concepto de ORGANELA. Una ORGANELA ( ORGANELO o ELEMENTO
CELULAR ), es un cuerpo membranoso interno, rodeado por el CITOSOL, debe
diferenciarse de los orgnulos ( o MICROCUERPOS ), pues estos ltimos no
poseen membrana. Debe aclararse este asunto de que no todo lo que se
encuentra en el interior de una clula se llama ORGANELA u ORGANELO.
Las ORGANELAS son estructuras membranosas y hay otras estructuras que no

tienen membrana pero que se llaman MICROCUERPOS, adems muestran una


diferencia de tamao muy notable al compararla con las ORGANELAS.

La forma correcta de clasificar las ORGANELAS es de acuerdo a


la CANTIDAD DE MEMBRANAS que stas posean,
existiendo ORGANELAS de 1, 2 y 3 membranas .
A Continuacin explicaremos con detalles las organelas a observar en la
presente prctica de la laboratorio

LISOSOMAS:

Los lisosomas son orgnulos relativamente


grandes,
formados
por
el retculo endoplasmtico rugoso y luego empaquetadas por el complejo de
Golgi, que contienen enzimas hidrolticas y proteolticas que sirven para
digerir los materiales de origen externo (heterofagia) o interno (autofagia)
que llegan a ellos. Es decir, se encargan de la digestin celular.1 Son
estructuras esfricas rodeadas de membrana simple. Son bolsas de enzimas
que si se liberasen, destruiran toda la clula. Esto implica que la membrana
lisosmica debe estar protegida de estas enzimas. El tamao de un lisosoma
vara entre 0,1-1,2 m.

Cuando
se
forman,
los lisosomas
se
cargan
con
enzimas
de
funcin hidroltica;
este
tipo
de lisosoma, conocido como LISOSOMA
PRIMARIO, puede ser el que tiene una apariencia homognea en su interior (1).
a partir de este, el lisosoma se encarga de degradar la mayora de los tipos de
molculas
bioqumicas
que
hay
en
la
clula.
Las otras formas (los LISOSOMAS SECUNDARIOS, como el 2 y 3) son
heterogneos y pueden recibir nombres variados como lisosomas con
formas mielnicas (4), cuerpos multivesiculares (5), o cuerpos residuales (6).
estos
tipos
se
producen
por
efecto
del
almacenamiento
en
el lumen dellisosoma de sustancias que no pueden degradarse ms o por la
transformacin en lisosomas de otro tipo de orgnulos como son
losautofagosomas y los endosomas.

Sus funciones son: acumular agua aumentando el volumen de la clula


sin aumentar el tamao del citoplasma ni su salinidad; almacenar
sustancias energticas, txicas, venenos, sustancias de desecho, etc.
Constituyen el medio de transporte de sustancias entre orgnulos del
sistema endomembranoso. En clulas animales existen adems vacuolas
fagocticas, pinnocticas y pulstiles.
Entre las inclusiones, las funciones ms importantes son almacenar
resinas o ltex.
Enzimas ms importantes del lisosoma:
Lipasas, que digiere lpidos;
Glucosidasas, que digiere carbohidratos;
Proteasas, que digiere protenas;

Nucleasas, que digiere cidos nucleicos.


LOS CLOROPLASTOS:
los cloroplastos, constituyen los organelos ms conspicuos de una clula
vegetal. Los cloroplstos estn rodeados por una doble membrana, con una
estructura interna constituida por un sistema de membranas, separadas por
una matriz de naturaleza proteica llamada estroma, poseen DNA con una
estructura similar al encontrado en clulas procariticas, as como
ribosomas, embebidos en el estroma.
Su interior (estroma) est recorrido por membranas internas llamadas
tilacoides. En estas membranas se encuentran los pigmentos fotosintticos
y los citocromos transportadores de electrones para efectuar la fase
luminosa de la fotosntesis; en el estroma se realizan las reacciones del ciclo
de Calvin para fijar el CO2 en la fase oscura de la
fotosntesis.
PLASTIDIOS
Son parte caracterstica de las clulas vegetales.
Cada Plastidios est rodeado por una membrana
doble. Dentro de esa doble membrana tenemos el
estroma que es la substancia acuosa contenida en
el Plastidios. Los Plastidios se clasifican de
acuerdo al tipo de pigmento que contengan.
Pigmentos que poseen los plastidios:
Por los pigmentos que poseen los plastidios, son de las siguientes clases:
Cloroplastos: (cloros = verde) : plastidios de color verde, por llevar un
pigmento verde llamado clorofila.
Cromoplastos: (cromo = color) plastillos, pigmentos colorantes como el
pigmento rojo (lecopeno) amarillo(xantofila) anaranjado (caroteno). Son los
que dan color a las flores y a las frutas de muchas plantas.
Leucoplastos: (leucos = blancos) plastidios incoloros que
sirven como centro de almacenado de ciertos materiales
de citoplasma como en el caso
del almidn (amiloplastos).
Oleoplastos: Plastidios incoloros y almacenado de gotitas
de aceitestales como man, semillas de higuerilla, etc.
LAS MITOCONDRIAS son uno de los orgnulos ms
conspicuos del citoplasma y se encuentran en casi
todas las clulas eucariticas. Observadas al
microscopio electrnico de transmisin (M.E.T.),
presentan una estructura caracterstica: la mitocondria tiene forma
alargada u oval de 0,5 a 1 m de dimetro, y entre 1 m y varias micras de
longitud y est envuelta por dos membranas distintas, una externa y otra
interna (la que presentan crestas mitocondriales), muy replegada.

Las mitocondrias son los orgnulos


celulares encargados de suministrar
la mayor parte de la energa
necesaria para la actividad celular,
actan por tanto, como centrales
energticas de
la
clula
y
sintetizan ATP a
expensas
de
los carburantes
metablicos (glucosa, cidos grasos
y aminocidos). Sin mitocondrias, los
animales y hongos no seran capaces
de utilizar oxgeno para extraer toda
la energa de los alimentos y
mantener con ella el crecimiento y la
Mitocondria vista con M.E.T.
capacidad de reproducirse. Los
organismos llamados anaerobios
viven en medios sin oxgeno, y todos
ellos carecen de mitocondrias.
La ultraestructura mitocondrial est en relacin con las funciones que
desempea: en la matriz se localizan los enzimas responsables de
la oxidacin de los cidos grasos, los aminocidos, el cido pirvico y
el ciclo de krebs.

IV- MATERIALES POR MESA:


Muestra de:

Clulas de epitelio
bucal

Zanahoria (caroteno)

Cultivo de protozoarios
(observacin de lisosomas)
Microscopios.

Laminas y laminillas

Hoja de Elodea
(Cloroplastos)

Papa (Amiloplastos)

Bistur

Colorante Rojo neutro

Aj amarillo (Xantofila)

Betarraga
(Antocianina)

Pinza en punta

Solucin Verde Janus


1/10,000

Colorante Lugol

Hisopos

Mecheros de alcohol

Guantes

V.

PROCEDIMIENTO:

A)

OBSERVACION DE MITOCONDRIA EN EPITELIO BUCAL:

1. Con una lmina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra
de la mucosa bucal,
2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lmina,
3. Dejar secar la lmina con la muestra al medio ambiente,
4. Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos,
5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente,
6. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x
B)

OBSERVACION DE LISOSOMAS en PROTOZOARIOS

1. Colocar en una lmina dos gotas cultivo de protozoarios y una gota del
colorante rojo neutro, mezclar dejar reposar 2 minutos..
2. Cubrir con una laminilla y observar el preparado a 10x y 40x . Visualizar
en el interior de los Paramecium a los lisosomas .

C).OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES:

CLOROPLASTOS: Se localizan en las hojas debajo de la epidermis superior.


1. Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua
en una lamina portaobjeto.
2. Cubrir la muestra con una laminilla.
3. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.
CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas
(redondas, elpticas, o aciculares).

1. Realizar cortes finos de zanahoria, aj amarillo, betarraga sobre una


lmina portaobjetos
2. Colocar una gota de agua sobre el corte.
3. Cubrir con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.
AMILOPLASTO: Son organelas que contienen almidn como sustancia de
reserva.
1.
2.
3.
4.

VI.

Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de Lugol.


Agregar un corte transversal fino de papa .
Cubrir con una laminilla.
Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

PROTOCOLO:

VII.CONCLUSIONES

VIII.

CUESTIONARIO:

1. Qu son las patologas mitocondriales?.


Las enfermedades mitocondriales son el resultado del fracaso en el
funcionamiento de las mitocondrias, a su vez, partes constitutivas de las
clulas del organismo, cuya funcin es la de generar la energa necesaria
para mantener la vida y para el desarrollo y correcta funcin de los
rganos y sistemas. Cuando fallan, se genera cada vez menos energa en
el interior de la clula, produciendo lesin o muerte celular. Si este
proceso se repite en todo el cuerpo, los sistemas completos comienzan a
fallar y la vida de la persona que lo sufre est en grave riesgo. Esta
enfermedad afecta principalmente a los nios, pero los brotes en adultos
se estn volviendo cada da ms frecuente. Las enfermedades de las
mitocondrias parecen ocasionar el mayor dao a las clulas del cerebro
corazn, hgado, msculo, rin, y a los sistemas endocrinos y
respiratorios.

Miopata mitocondrial sin afectacin ocular


Oftalmopleja externa progresiva (OEP)
Encefalomiopatas mitocondriales
Sndrome de Kearns-Sayre (SKS)
Epilepsia mioclnica con fibras rojo rasgadas (MERRF)
Miopata mitocondrial con acidosis lctica y episodios similares a ictus
(MELAS)
Neuropata con ataxia y retinitis pigmentosa (NARP)
Miopata con miocardiopata mitocondrial (MCM)
Enfermedad de Leber
Sndrome de Leigh

2. Qu relacin tiene los lisosomas y la autofagia?


Los Pre-lisosomas formados de novo en el citoplasma de una membrana
en forma de copa se llaman phagophore. Los bordes del phagophore se
expanden cada vez ms hasta alcanzar su
forma ms esfrica, encerrando las piezas
engullidas de citoplasma con lo que pudiera
encontrarse dentro, y dando lugar a una
vescula de doble membrana. Farquhar
observ estas vesculas cerradas, que son
conocidas como autofagosomas. Los
autofagosomas toman las molculas
daadas u orgnulos y llevan esa carga a los
lisosomas. Cuando de Duve observ los autofagosomas, se dio cuenta de
que las clulas podran degradar sus propios componentes y nombr al
proceso autofagia .Por lo tanto podemos decir que la relacin que
existe entre los ellos es que las dos van estar involucradas en proceso de
descomposicin, eliminacin,reparacin de las organelas .
3. Por qu las mitocondrias fijan el colorante verde de Janus?.

Para evidenciar mitocondrias es utilizado Verde Jano al 0,01%. Este


producto al reducirse vira del azul al verde brillante. Es un marcador
especfico porque al colocarlo en presencia de mitocondrias, emplea en
su reduccin los electrones de la cadena respiratoria que se encuentra
emplazada en la membrana mitocondrial interna y las colorea de verde
brillante.
Las mitocondrias son teidas con el tinte Janus green B. Despus de la
tincin, la mitocondria tie azul-verdosa, la cual es el color del tinte en su
forma oxidada; en su forma reducida, el tinte es incoloro. ElJanus green se
mantiene en estado oxidado por el sistema de oxidasa citocromo de la
mitocondria.
Esto sucede por la reaccin de oxidacin que sufre la mitocondria
(especialmente su sistema decitocromo oxidasa), al contacto con el verde
de Janus, que se es un colorante monoazoico que (en comparacin con el
oxgeno del ambiente) tiende a oxidar especialmente a las mitocondrias
debido a la gran cantidad de electrones presentes en ellas.
4.Qu funcin cumplen los plastidios en las clula?.
Los plastos, plstidos o plastidios son orgnulos celulares eucariticos, propios de las
plantas y algas. Su funcin principal es la produccin y almacenamiento de importantes
compuestos qumicos usados por la clula. Usualmente, contienen pigmentos utilizados en la
fotosntesis, aunque el tipo de pigmento presente puede variar, determinando el color de la
clula.

IX.REFERENCIAS:
qu funciones cumplen los plastidios?
http://misdeberes.es/tarea/121728
http://respuestas.wikia.com/wiki/La_funcion_de_los_plastidios
Verde de janus
http://www.buenastareas.com/ensayos/Verde-De-Janus/44239939.html
https://espanol.answers.yahoo.com/question/index?
qid=20070401112400AAFA8Nx
PATOLOGAS MITOCONDRIALES
http://www.aepmi.org/publico/patologias.php
Los lisosomas y la autofagia
https://cajalesygalileos.wordpress.com/2012/12/13/los-lisosomas-y-laautofagia-scitable/
Organelas
http://elprofedebiolo.blogspot.com/2010/02/organelas.html
Lisosoma
http://es.wikipedia.org/wiki/Lisosoma
http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/La_celula/conteni
dos11.htm
http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Lisosomas&lang=2
Cloroplastos y otro plastidios
http://es.slideshare.net/sathycrlovehandel/cloroplastos-y-otro-plastidios
Plastidios
http://www.ecured.cu/index.php/Plastidios
Mitocondrias
http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celu
lar/mitocondria.html
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/3er/LaCelula/MITOCONDRIAS.htm
Los lisosomas y la autofagia
https://cajalesygalileos.wordpress.com/2012/12/13/los-lisosomas-y-la-autofagiascitable/

Enfermedades mitocondriales
http://es.slideshare.net/JuFelipeRodriguezM/enfermedades-mitocondriales9301307