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Test de Ames
Test de Ames
RESUMEN
Este trabajo se enmarca en un estudio de clasificacin de corrientes llevado a cabo en
junio de 1997; las estaciones se ubicaron en efluentes municipales, industriales y ro.
Se concentraron 24 muestras con resinas XAD2, eluidas con cloruro de metileno,
analizadas con la Prueba de Ames empleando cepas TA98 y TA100 de Salmonella
typhimurium con y sin activacin metablica. El 100% de las respuestas fueron
positivas. El rango de los resultados vario de 2.11E+07 a 3.36E+09 (TA98) y de
2.12E+07 a 6.49E+09 (TA100) Rev/L. Los valores ms altos fueron de 3.10E+09 (PB1)
y 3.36E+09 Rev/L (VV) para TA98 S9; y de 1.12E+09 (VV 23:00) y 6.49E+09 Rev/L
(VV) para TA100 +S9. Los resultados analticos muestran mutagenicidad directa e
indirecta en todas las muestras. Es recomendable usar la Prueba de Ames en
programas de monitoreo y analizar la actividad mutagnica de extractos orgnicos de
aguas recurriendo a este ensayo por su sensibilidad y confiabilidad.
INTRODUCCION
La preocupacin por la presencia documentada de sustancias qumicas txicas y el
descubrimiento de mutgenos en el ambiente aumenta da con da a causa del riesgo
de cncer y enfermedades hereditarias en la poblacin expuesta. Las cuencas
hidrogrficas son las receptoras de los desechos generados por las actividades
industriales, agrcolas y domsticas. Aunque cuentan con mecanismos fsicos, qumicos
y biolgicos mediante los cuales pueden asimilar los residuos, se presentan
inconvenientes cuando los contaminantes alcanzan niveles que superan tal capacidad
de asimilacin, provocndose serias implicaciones ambientales. Con esta perspectiva
se realiz el estudio de clasificacin del ro Pnuco, una de las corrientes ms
importantes de la Repblica Mexicana.
Sup
2
(km )
Ebano
375.00
Pnuco
3,277.81
Pueblo Viejo
286.24
Ciudad Madero
62.90
Tampico
68.10
Fuente: Anuarios estadsticos
Localidad
Urb Rural
3
139
3
581
5
59
Pob
Cobertura (%)
Actividad
AP
Alc
Econmica
39,030 78.0
35.0 Agrcola, ganadera
93,414 48.7
35.9 Agrcola, ganadera
48,054 56.3
35.4 Agrcola, servicio
171,041 93.0
89.0 Industriales, servicio
278,948 97.0
94.0 Industriales, servicio
de los estados de San Luis Potos, Veracruz y Tamaulipas, (INEGI 1996).
Estaciones de muestreo
Las estaciones de muestreo consideradas en el presente trabajo se circunscriben a las
establecidas en la zona conurbada TampicoCiudad Madero, donde se manifiesta la
influencia de la marea y consecuentemente la cua salina. Se incluyen tres estaciones
de cuerpo de agua superficial, laguna y ro, una descarga de agua residual municipal y
siete descargas de aguas residuales industriales. La ubicacin de estos puntos se
localiza antes de los aportes o aprovechamientos, considerando tambin las descargas
de aguas residuales municipales e industriales, y despus de recibir su influencia (Tabla
2). De la misma forma, se establecieron estaciones para muestrear las descargas. Las
Tipo de estacin
Clave
I
Descarga municipal
Latitud
(N)
Longitud
(W)
22 12'30"
22 1258.2"
97 51'03"
97 5200.6"
Laguna Carpinteiro
II
Superficial
Laguna Carpinteiro
Vertedero 7
III
IV
22 1447.3"
22 15'13"
a
b
c
V
VI
VII
VIII
Descarga industrial
Descarga industrial
Descarga sanitaria
Descarga industrial
Descarga industrial
Descarga industrial
Ro, superficial, profunda
22 15'34"
97 48'16"
22 1532.6"
97 4756.8"
97 4920.4"
97 48'45"
- Vertedero 7 ( IV )
Zona poniente: una de las dos lneas principales de alcantarillado de la refinera que
descargan al ro Pnuco, localizada entre el Muelle N 4 y N 5 de la Terminal
Martima.
- Drenaje Pluvial Metro ( a y b )
Las aguas de este canal se conforman con las descargas intermitentes de la zona de
acondicionamiento del agua de la Refinera: aguas de retrolavado de filtros y de
regeneracin de resinas. El caudal que aporta se estim en 20-30 L/s.
- Vertedero varadero ( c )
Efluente del separador tipo API (II etapa), en el canal recolector del efluente, despus
del vertedero (promedio de dos muestreos, 140 L/s).
- Canal varadero ( V )
Zona oriente: otra de las dos lneas principales de alcantarillado de la refinera que
descargan al ro Pnuco y la de mayor caudal, se localiza entre el Muelle Petroqumica
y Muelle N 1 de la Terminal Martima Madero.
Laguna
del
Chairel
.
Av
Mi
ram
ar
Playa
Miramar
CD. MADERO
SIMBOLOGA
L
NA
CA
Lmite de Ciudad
Avenidas
Ros
Descarga Municipal
Descarga Industrial
O
AN
IC
ER
AM
TAMPICO
uco
Pn
Ro
R1
Vertedero 7 1/2
Canal
Varadero
Playa
Hermosa
Laguna
del
Carpintero
Puente Mataredonda
Moralillo
Ro
Pn
uco
Laguna
Tamiahua
T
Av .
PTA. B-1
amp
ico
Puente
El Prieto
Alt
o
Lago
Pueblo Viejo
Lmina 1
Estuario
P.
Matarredonda
Ro
IV
L. Pueblo Viejo
Dren Oriental
Pnuco
R.
Chicayn
R
o
M
oc
tez
um
a
Golfo de Mxico
Refinera
III
C.
Chijol
n
a
mp
Ta
Morali
llo
L. Chila
Tampico
II
o
R
Las
Adjuntas
(Hidrometr
a)
L. Chairel
L. Carpintero
SIMBOLOGA
Poblado
Estaciones
Industria
Afluentes
Septiembre, 1997
Lmina 2
GOLFO DE MEXICO
MTODOS
En laboratorio se determinaron 39 parmetros convencionales de calidad del agua (22
fsicos, qumicos y materia orgnica; 3 biolgicos; 10 metales pesados; 4
cromatrogrficos y clorofila) y mutagenicidad.
Prueba de ames
El volumen de la muestra fue de 1 litro y se conserv a 4C. Once estaciones de
muestreo fueron caracterizadas en un muestreo y codificadas como se indica en la
Tabla 3. El anlisis de mutagenicidad se efectu lo ms pronto posible y, en funcin de
las caractersticas de la muestra, se emplearon dos mtodos: extraccin con resinas y
directo.
Tabla 3. Clasificacin de la
genotoxicidad de efluentes (Houk,
1992)
Genotoxicidad
Extrema
Alta
Moderada
Baja
Revertantes/L
> 107
105 - 107
103 - 105
102 - 103
RESULTADOS Y DISCUSION
Contenido orgnico, inorgnico en las descargas municipales e industriales
Los dos principales indicadores de materia orgnica e inorgnica en el cauce principal
del ro Pnuco mostraron el siguiente comportamiento:
1) La DBO5 oscil de 1 a 5 mg/L, indicando concentraciones adecuadas en el ro, an
cuando las descargas, en la mayora de los casos, alcanzaron concentraciones
mayores a 50 mg/L (y en las descargas variaron desde 42 hasta 346 mg/L en
promedio). En el ro la zona de recuperacin acta inmediatamente despus de la
descarga, disminuyendo la carga orgnica en el cauce.
2) A diferencia de la DBO5, la DQO tuvo un comportamiento ascendente a lo largo del
ro desde la estacin Planta de bombeo 1 hasta la desembocadura al Golfo de
Mxico. Las concentraciones variaron de 50 mg/L hasta 280 mg/L, y en algunas
descargas de la refinera registraron valores superiores a los 600 mg/L, lo cual indica
alteraciones por descargas municipales e industriales. Las descargas que alteran la
calidad del agua del ro en la mayora de los casos aportan cerca de 100 mg/L de
DQO como mnimo hasta 450 mg/L como valor mximo.
Compuestos txicos
En cuatro de las siete descargas industriales descritas en la Tabla 2, correspondientes
todas ellas a la refinera Madero, se encontraron compuestos con 4 o 5 anillos
bencenicos. Los HPAs con este nmero de anillos tienden a ser ms carcinognicos
que aquellos con un sistema de anillos menor o mayor, debido a que son txicos en
concentraciones cercanas a 0.2mg/L. Ocasionalmente, se observan respuestas
Dren Pluvial
Canal
Metro
Varadero
Varadero
Tolueno
Benceno
0.70000
0.52000
0.71000
0.45000
0.19000
0.22000
1.20000
0.74000
m+p xileno
0.37000
0.38000
0.15000
0.59000
o-xileno sps
Etilbenceno
0.26000
0.12000
0.24000
0.12000
0.08000
0.05000
0.36000
0.18000
0.00050
0.00850
0.00293
0.01130
Fenantreno /antraceno
Fluoreno
0.00040
0.00020
0.02100
0.01280
0.00800
0.00272
0.01362
0.00740
Pireno
0.00020
0.00480
0.00132
0.00280
Naftaleno
Antraceno
0.00013
0.00010
0.44853
0.07580
0.18500
0.020700
Acenaftaleno
Fluoranteno
0.00913
0.00790
Acenafteno
Benzo(g,h,i) perileno
Vertedero
0.00130
0.00127
0.00080
0.00220
0.00281
0.00520
0.00252
Segn Rand y Petrocelli (1985) los HPAs con pesos moleculares que oscilan del
naftaleno (PM, 128) al fluoranteno y pireno (PM, 202) causan toxicidad aguda a los
organismos acuticos; los autores reconocen que los datos no reflejan adecuadamente
el impacto potencial de niveles bajos de HPAs en exposiciones crnicas sobre los
organismos y el ecosistema. La exposicin crnica a bajas concentraciones de HPAs en
agua, sedimento y alimentos pueden producir respuestas subletales en los organismos
acuticos, como los detectados en la prueba de Ames. Estas respuestas pueden ser
perjudiciales para la sobrevivencia de los organismos de ciclos de vida largos y pueden
inducir mutaciones y cncer en especies sensibles.
Prueba de Ames
Los valores ms altos para las cepas TA98 y TA100 sin activacin metablica (-S9) se
registran en las muestras provenientes de las estaciones Planta de Bombeo N 1 y
Vertedero 71/2 con 3.10+E09 y 1.12+E09 Revertantes/L respectivamente; y para las
cepas TA98 y TA100 con activacin metablica (+S9) fueron los correspondiente a las
estaciones Vertedero Varadero con 3.36+E09 y 6.49+E09 Revertantes/L
respectivamente (Tabla 5).
Nombre
Planta de Bombeo 1 (08:00)
(17:15)
Laguna del Carpinteiro
Laguna del Carpinteiro
Vertedero 71/2 (23:50)
(03:40)
(14:20)
(16:05)
Drenaje Pluvial metro (23:15)
(03:15)
(07:40)
(11:45)
(15:40)
Vertedero Varadero (23:00)
(07:00)
(03:00)
(03:40)
(11:00)
Canal Varadero (04:30)
(08:15)
(17:00)
Estacin Ro
Ro
Salida descarga refinera
Tipo
Descarga municipal
Afluente, superficial
Efluente, superficial
Descarga industrial
Descarga industrial
Descarga industrial
Descarga industrial
Ro (boca), prof.,
Rev/L (TA98)
-S9
+S9
N.D.
3.10E+09
3.E+07
4.E+08
N.D.
2.11E+07
9.E+07
3.E+07
N.D.
N.D.
N.D.
8.E+07
2.E+08
1.E+08
N.D.
N.D.
2.E+08
2.E+09
1.E+08
N.D.
N.D.
N.D.
N.D.
N.D.
9.E+07
1.E+09
3.E+08
1.E+08
7.E+08
2.E+08
2.E+08
9.E+08
1.E+08
2.E+08
2.E+08
1.E+08
1.E+08
1.E+09
8.E+08
2.E+09
3.36E+09
4.E+08
2.E+09
1.E+08
6.E+08
N.D.
N.D.
5.E+08
Rev/L (TA100)
-S9
+S9
N.D.
N.D.
N.D.
3.E+08
1.12E+09
2.E+08
9.E+08
2.12E+07
4.E+07
1.E+08
3.E+08
8.E+07
N.D.
1.E+09
N.D.
N.D.
N.D.
6.E+08
N.D.
N.D.
9.E+07
N.D.
N.D.
N.D.
7.E+08
N.D.
N.D.
6.E+08
1.E+09
7.E+08
N.D.
1.E+08
1.E+08
4.E+08
6.E+08
6.E+08
2.E+08
1.E+09
5.E+09
6.49E+09
5.E+09
2.E+08
2.E+08
2.E+08
1.E+09
1.E+09
1.E+09
2.E+08
N.D. = No detectado
De las 24 muestras analizadas nicamente en cuatro muestras los resultados fueron
positivos en las dos cepas por muestra, TA98 y TA100, con y sin S9. El mbito de las
potencias mutgenicas fue de 2.11+E07 a 3.36+E09 Revertantes/L para TA98 y de
2.12+E07 a 6.49+E09 Revertantes/L para TA100, lo que indica que los efectos
mutgenicos en Salmonella typhimurium son altos y que la genotoxicidad, en todas las
muestras es extrema con base a la clasificacin propuesta por Houk (1992; Tabla 3).
En el mbito de los 11 puntos de muestreo evaluados los valores correspondientes a
E+09 se ubicaron en los puntos extremos de las estaciones de monitoreo (lmina 1),
Planta de bombeo N 1 y Ro, descargas de tipo municipal e industrial respectivamente
y en las estaciones dentro de la refinera Dren Pluvial Metro y Vertedero Varadero;
lo cual nos sugiere que la prdida de potencial txico o transformacin de algunos
compuestos presentes por efectos del incremento en la salinidad, luz, oxgeno, entre
otros factores, es mnimo. El valor de E+09 permanece en ambos extremos, aunque el
valor en el punto intermedio correspondiente a Laguna de Carpinteiro (lmina 2, punto
II) es de E+09 lo cual se observa en la Grfica 1 y en la Tabla 4.
9.E+09
8.E+09
Re
ve
rta
nt
es/
L
7.E+09
6.E+09
5.E+09
4.E+09
3.E+09
2.E+09
1.E+09
0.E+00
1
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
Estaciones
TA98 -S9
TA98 +S9
TA100 -S9
TA100 +S9
5.E+09
4.E+09
Revertantes/L
4.E+09
3.E+09
3.E+09
2.E+09
2.E+09
1.E+09
5.E+08
0.E+00
Estacin
TA98 -S9
TA98 +S9
TA100 -S9
TA100 +S9
10
11
12
13
14
As mismo, se observa que los valores ms homogneos son los correspondientes a las
cepas con activacin metablica.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Efluentes industriales y municipales
Los lmites mximos permisibles de contaminantes para las descargas de aguas
residuales en aguas y bienes nacionales establecidos en la NOM001ECOL1996 no
son cumplidos por las descargas municipales e industriales, ya que rebasan la mayora de
los siguientes parmetros: Materia Flotante, SST, SS, Grasas y Aceites, Demanda
Bioqumica de Oxgeno al quinto (DBO5), Demanda Qumica de Oxgeno (DQO),
Coliformes fecales y Nitrgeno total.
Compuestos txicos
Considerando la alta capacidad de dilucin de ro Pnuco, y con base en los criterios de
calidad de EUA, Canad y la Comunidad Europea, se pueden considerar como de
riesgo los naftalenos y los xilenos, debiendo contemplarse la necesidad de remocin de
fenol, naftaleno y xileno en el diseo de cualquier futura planta de tratamiento de las
aguas.
Mutagenicidad
En la prueba de Ames en todos los casos se presentaron resultados positivos, con
cargas genotxicas diarias que recibe el ro en el intervalo desde 6.49 E+09 hasta 2.10
E+07 Revertantes/L y que afectan al ecosistema acutico.
Adems de ello, todos estos valores representan genotxicidad extrema, lo cual
refuerza la necesidad de incorporar otros parmetros que permitan caracterizar los
nuevos tipos de compuestos orgnicos mutgenicos a efecto de poder estar en
posibilidad de prever y, consecuentemente, contribuir a evitar las consecuencias
negativas que este tipo de descargas genera en la salud de los humanos.
As mismo, puede suponerse que los resultados positivos de toxicidad evaluados con la
aplicacin de la Prueba de Ames se deben a la presencia de aproximadamente 15
compuestos txicos, de los cuales algunos tienen 4 anillos bencnicos que son los ms
carcinognicos y mutagnicos, que se detectan entre los intervalos de 5 a 100 g/L o
por arriba de este intervalo.
Sistemas de tratamiento
Los sistemas biolgicos de tratamiento permiten reducir el contenido de materia
orgnica disuelta en un mbito del 80 al 90%. Debido a la presencia de compuestos
txicos orgnicos, estos tipos de sistemas son muy sensibles a sobrecargas (grasas y
aceites mayor a 50 mg/L) y a la variacin del substrato (tipo y concentracin de
compuestos orgnicos). Esto ltimo con frecuencia provoca problemas de inestabilidad
de la calidad del efluente.
Diversos estudios sobre la aplicacin de procesos biolgicos para la degradacin de
compuestos orgnicos txicos indican la necesidad de aplicar sistemas biolgicos ms
avanzados para obtener mayores eficiencias y estabilidad en el tratamiento. Algunos de
los mtodos que se recomiendan son, entre otros: los siguientes: adicin de carbn
activado, para obtener mejores eficiencias y mayor estabilidad en el sistema de lodos
activados; enriquecimiento de la biomasa con microorganismos especficos, por su
mayor especificidad en la biodegradacin de los txicos orgnicos; tiempo de retencin
hidrulico de 24 horas y una edad de la biomasa entre 20 y 30 das, para la remocin
de naftaleno caracterstico para las descargas de refineras.
Monitoreo
Los resultados positivos en todas los casos con cargas genotxicas diarias que recibe
el ro en el intervalo de 6.49E+09 hasta 2.10E+07 Revertantes/L y que afectan al
ecosistema acutico exige mejorar los resultados de los programas de monitoreo y de
caracterizacin de los cuerpos de agua a efecto de poder evaluar la dinmica fsica,
qumica y biolgica del medio ambiente bajo investigacin. Stahl (1991) report que los
ensayos Salmonella/ microsomal (Prueba de Ames) son un mtodo que puede usarse
en estudios ambientales debido a que los datos que proveen son eficientes para la
deteccin y aislamiento de compuestos orgnicos.
La evidencia anteriormente expuesta permite confirmar la necesidad de considerar el
uso de la Prueba de Ames (ensayo de Salmonella microsomal) para aislar y evaluar
productos qumicos potencialmente mutgenicos que no puedan ser detectados a nivel
traza por otros mtodos de anlisis, as como la posibilidad de realizar un diagnstico
que forzosamente debe depender de la clase de compuestos involucrados en el medio
ambiente bajo estudio, de la propuesta de proceso de tratamiento de la descarga y de
la evaluacin de la eficiencia de remocin de tal sistema de tratamiento.
Consecuentemente, en el anlisis de muestras ambientales deber considerarse como
necesario la integracin de estos mtodos analticos a efecto de estar en posibilidad
real de investigar los efectos ambientales y el destino de las especies qumicas en el
planeta, papel que puede desempear la prueba de Ames con el objetivo aportar
informacin temprana sobre los posibles riesgos a la salud y al ecosistema.
BIBLIOGRAFIA
Coriell Institute for Medical Research. (1986). Ames Salmonella mutagenicity assay
protocol. Department of Microbiology, Copewwod Stret, Camden, NJ, 08103, USA.
13 p.
Houck, U.S. (1992). The genotoxicity of industrial wastes and effluents A review.
Mutation Research, 277:91-138.
Maron M.D., y Ames N.B., (1983). Revised methods for the Salmonella mutagenicity
test,.Mutation Research, 113; 173 -215.
Rand, M.G. y R.S. Petrocelli. (1985). Fundamentals of aquatic toxicology. Methods and
applications. Hemisphere Publishing Corporation, Washington, USA, 666 pp.