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disociacion de aminoacidos

disociacion de aminoacidos

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B. TITULACION DE LA ALANINA 1.

Disociación del grupo carboxilo: La curva de titulación de un aminoácido puede ser analizada de la misma manera descrita para el ácido acético. Por ejemplo considere a la alanina, la cual contiene ambos, un grupo carboxilo y un grupo amino. A un pH bajo (ácido ), ambos de estos grupos son protonados (ver figura 1.9 en el libro ). A medida que el pH de la solución se eleva el grupo COOH de la forma I puede disociarse donando un protón al medio. La liberación de un protón lleva a la formación de un grupo carboxilato, COO-. Ésta estructura es mostrada como forma II la cual es la forma dipolar de la molécula. Ver figura en el libro 2.9. (nota: esta forma es también llamada un zwitterion y esta forma es la forma de la alanina esto es que tiene una carga neta de 0 ). 2. Aplicación de la ecuación de Henderson-Hasselbalch: La constante de disociación de un grupo carboxilo es llamada K1, no Ka, porque la molécula contiene un segundo grupo titulable. La ecuación de Henderson-Hasselbalch puede ser usada para analizar la disociación del grupo carboxilo de la alanina de igual manera como se describió para el ácido acético. K1= [H+] [II] [I] donde I (ver figura 1.9 en el libro) es la forma totalmente protonada de la alanina, y II es la forma isoeléctrica de la alanina. Esta ecuación puede ser reorganizada a: pH = pK1 + log [II] [I] 3. Disociación del grupo amino: El segundo grupo titulable de la alanina es el grupo amino ( -NH3 ) .Ver libro figura 1.9. este en un ácido mucho más débil que el grupo COOH y por tanto tiene una constante de disociación más pequeña (K2). Nota: su pKa es, por tanto, más grande. La liberación de un protón a partir de un grupo amino protonado de la forma II resulta en la forma totalmente deprotonada de la alanina, la cual es la forma III. Ver figura 1.9 del libro. 4. pKs de la alanina: Las disociaciones secuenciales de protones a partir de los grupos amino y carboxilo de la alanina están resumidos en la figura 1.9. Cada uno de los grupos titulables tiene un pKa que es numéricamente igual al pH al cual exactamente la mitad de los protones han sido removidos de ese grupo. El pKa para el grupo más ácido COOH es el pK1, el pKa para el grupo siguiente más ácido (NH3+) es el pK2. 5. Curva de titulación de la alanina: Aplicando la ecuación de Henderson Hasselbalch a cada grupo ácido disociable, es posible calcular la curva de titulación completa del ácido débil. La figura 1.10 (ver libro) muestra el cambio en el pH que ocurre durante la adición de una base a la forma totalmente protonada de la alanina (I) para producir la forma completamente deprotonada (III). Note lo siguiente: a. par buffer: el par COOH/COO- puede servir como un buffer en la región de pH cerca del pK1 y el par NH3+/NH2 puede amortiguar en la región cerca del pK2. b. Cuando el pH es igual al pK: cuando el pH es igual al pK1 (2.3) iguales cantidades de las formas I y II de la alanina existen en la solución. Cuando el pH es igual al pK2 (9.1), iguales cantidades de las formas II y III están presentes en la solución. c. Punto isoeléctrico: a pH neutro, la alanina existe predominantemente en la forma dipolar II en la cual los grupos amino y

carboxilo están ionizados, pero la carga neta es cero. El punto isoeléctrico (pl) es el pH al cual un aminoácido es eléctricamente neutro, esto es, donde la suma de las cargas positivas iguala la suma de las cargas negativas. Nota: para un aminoácido como la alanina el cual sólo tiene dos hidrógenos disociables (uno del grupo carboxilo alfa y otro del grupo amino alfa), el pl es el promedio de pK1 y pK2: pl= [2.3 + 9.1 /2 =5.7. ver figura 1.9. El pl es el punto medio entre pK1 (2.3) y pK2 (9.1). este punto corresponde al pH donde la estructura II (carga neta de cero ) predomina, y en donde existen también iguales cantidades de la forma I (carga neta de +1) y de la forma III (carga neta de –1). 6. CARGA NETA DE LOS AMINOACIDOS EN PH NEUTRO: A pH fisiológico, todos los aminoácidos tienen un grupo cargado negativo COO- y un grupo positivamente cargado NH3+. Ellos son entonces iones bipolares (zwitterion ). Nota: las sustancias como los aminoácidos que pueden actuar tanto como un ácido o como base son definidos como anfotéricos y son referidas como anfolitos (electrolitos anfotéricos). C. TITULACION DE LAS HISTIDINA La histidina es un ejemplo de un aminoácido que contiene 3 grupos químicos los cuales pueden reversiblemente ganar o perder un protón : el grupo carboxilo, el grupo imidazol de la cadena lateral, y el grupo alfa amino. Ver figura 1.11 en el libro. Nota: el grupo R o sustituyente de la histidina tiene un pK2 de 6.0 y puede servir como un buffer a pH fisiológico. 1. Curva de titulación de la histidina: La adición sostenida de una base a la histidina totalmente protonada resulta en la liberación secuencial de protones del grupo carboxilo (pK1= 1.8), el grupo imidazol (pK2= 6.0), y el grupo amino (pK3=9.2). La curva de titulación es mostrada en la figura 1.2. 2. Punto isoeléctrico de la histidina: El punto isoeléctrico (pl) para la histidina es calculado primero identificando la forma isoeléctrica ( la cual tiene una carga neta de cero) del aminoácido ( forma III de la figura 1.11) y luego promediando los valores de los pKs más cercanos. Pl= (pK2 +pK3) = (6.0 + 9.2) = 7.6 22 Este cálculo requiere que la forma isoeléctrica sea identificada. Esto depende en conocer el orden en el cual los protones se pierden a partir de un aminoácido en particular, porque este orden determina los cambios de las formas intermediarias. Los valores de pKa para los grupos sustituyentes de algunos de los 20 aminoácidos más comúnmente encontrados son mostrados en la figura 1.2 y 1.5.

PAtron electroforetico:

ELECTROFORESIS EN ACETATO DE

CELULOSA

Se usa para la separación y caracterización de proteínas y otras moléculas. El soporte consiste en tiras delgadas de acetato de celulosa, con propiedades de adsorción mínimas, por lo que se evita

la formación de colas y los solutos pueden ser separados en bandas bien definidas. Otras ventajas son: 1) La separación es muy rápida 2) Se pueden analizar cantidades de muestra pequeñas 3) Las tiras pueden hacerse transparentes 4) La tira se puede disolver, recuperando los componentes separados 5) Presentan un fondo bajo cuando se separan compuestos radiactivos Entre sus desventajas figuran que captan poca agua y son más susceptibles a la evaporación que el papel. Son también más susceptibles al flujo electro-endosmótico. Las proteínas de suero se pueden separar mediante esta técnica. Sus puntos isoeléctricos están entre 4,9 (Albúmina) y 7,4 (Gamma-globulinas). Al realizar la electroforesis con un tampón de pH = 8,6, todas las proteínas del suero tendrán carga negativa. La albúmina, al tener el punto isoeléctrico más alejado del pH, tiene más carga negativa y avanza más rápido, quedando más cerca del polo positivo que las gamma-globulinas, que migran muy poco por ser el pH próximo a su pI. Las restantes proteínas séricas quedan situadas entre estas dos. En suero humano la composición normal es: Albúmina ........... 54-62% α - globulinas ....... 9-15% β - globulinas ....... 8-13% γ - globulinas ....... 14-19% En el suero de rata la distribución de bandas es diferente, separándose sólo las β - y γ -globulinas, la albúmina y una banda proteica de mayor movilidad electroforética que la albúmina, denominada prealbúmina. La disminución de la proteína total puede indicar:
• •

Desnutrición Síndrome nefrótico

Enteropatía por pérdida de proteínas gastrointestinal

El aumento de las proteínas alpha-1 globulina puede indicar:
• • •

Enfermedad inflamatoria crónica (por ejemplo artritis reumatoidea, LES) Enfermedad inflamatoria aguda Malignidad

La disminución de las proteínas alfa-1 globulinas pueden indicar:

Deficiencia de alfa-1 antitripsina

El aumento de las proteínas alfa-2 globulinas puede indicar:
• •

Inflamación aguda Inflamación crónica

La disminución de las proteínas alfa-2 globulinas puede indicar:

Hemólisis

El aumento de las proteínas beta globulinas puede indicar:
• •

Hiperlipoproteinemia (por ejemplo, hipercolesterolemia familiar) Terapia de estrógenos

La disminución de las proteínas beta globulinas puede indicar:
• • •

Trastorno de coagulación congénito Coagulopatía de consumo Coagulación intravascular diseminada

El aumento de las proteínas gama globulinas puede indicar:
• • • • • •

Mieloma múltiple Enfermedad inflamatoria crónica (por ejemplo artritis reumatoidea, LES) Hiperinmunización Infección aguda Macroglobulinemia de Waldenstrom Enfermedad hepática crónica

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