Ctedra: Bioqumica bsica de macromolculas.

Cecilia Cargnel

INFORME TRABAJO PRCTICO

Electroforesis en gel de poliacrilamida.

Principios tericos:
La electroforesis es una tcnica analtica separativa que consiste en la
migracin de partculas elctricamente cargadas por la accin de un campo
elctrico.
La movilidad electrofortica libre depender de:
la carga, tamao y forma de la partcula
viscosidad y fuerza inica del medio.
Para determinar el peso molecular se hacen correr una serie de protenas
patrones (marcadores) de PM conocidos, cercano al de la protena en estudio.
En el TP se trabajar en condiciones desnaturalizantes con SDS y con y
sin reductor (-mercaptoetanol), y luego de la corrida se tie con coomasie
brillant blue.
Materiales y Metodologa:
Tubos: dimetro: 2,7 cm. longitud: 15cm.
Placas: ancho: 8cm., longitud: 10- 14cm., espesor variable: 0,75-0,15cm.
Equipo bsico necesario:
-

Cubas electroforticas verticales para tubos o placas.

Fuente de poder estabilizada 300 V 50 mA.

Para realizar la corrida electrofortica, se sembraron las siguientes muestras:

Carril 1: Suero
Carril 2: -globulinas desaladas
Carril 3: Elucin (Buffer Fosfato 7mM pH8): IgG (con reductor)
Carril 4: Elucin (NaCl 1M, crom Int. Inico): IgA e IgM
Carril 5: Marcadores (LMM)
Carril 6: Elucin (Buffer Fosfato 7mM pH8): IgG (sin reductor)

Ctedra: Bioqumica bsica de macromolculas.

Cecilia Cargnel

Resultados:

Referencias:
A: albmina
B: cadenas livianas de Igs
C: cadenas pesadas de Igs
D: cadenas pesadas de Igs
E: cadena pesada de IgG
Conclusiones:
En la corrida I, se puede observar una leve marca de la Inmunoglobulina G en
el carril 3 (D).
En la corrida II se observan los marcadores. Las corridas de los carriles 3 y 4
no se pueden observar debido a que se cometieron algunos errores en la
preparacin del gel, y al momento de sembrar, se perdi mucha cantidad de
muestra.
Se puede concluir que as marcas que se observan por debajo de los 18,4 kDa
(B y D) a pesar de tener un peso molecular bajo, son las cadenas livianas de
las inmunoglobulinas.