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Ácidos Nucleicos
Ácidos Nucleicos
La unin de estas bases a una pentosa constituye un nuclesido. La unin de tipo ster
entre un nuclesido y el cido fosfrico se llama nucletido (Figuras 1a y 1b).
Existen 2 tipos de cidos nucleicos (AN): el cido desoxirribonucleico (DNA) y el cido
ribonucleico (RNA), y estn presentes en todas las clulas. El DNA y el RNA se
diferencian porque (Figura 2):
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Las bases nitrogenadas tienen poco inters bioqumico como sustancias libres, salvo en las
vas biosintticas y degradativas de los AN. Una excepcin importante es el cido rico
(Figura 6), un derivado prico que constituye el producto final de la degradacin de las
purinas. Normalmente se elimina por la orina, pero en circunstancias patolgicas puede
cristalizar originando clculos renales o la gota.
NUCLESIDOS
Los nuclesidos son -N-glicsidos de ribosa o desoxirribosa, en los que el sustituyente
en posicin del carbono 1 de la pentosa es una base prica o pirimidnica (Figura 1a).
Los nuclesidos que contienen ribosa se llaman ribonuclesidos y los que contienen
desoxirribosa son los desoxirribonuclesidos. Por convencin, la numeracin de los
carbonos del anillo de la pentosa incluye un apstrofo para diferenciarlos de los tomos de
los anillos de la base nitrogenada. Los ribonuclesidos ms importantes son la adenosina
(A), guanosina (G), timidina (T), uridina (U) y citidina (C). Los desoxirribonuclesidos
reciben los mismos nombres, pero con el prefijo desoxi: desoxiadenosina (dA),
desoxiguanosina (dG), etc. (Figura 1b).
Los nuclesidos tienen poco inters bioqumico como sustancias libres, salvo en las vas
biosintticas y degradativas de los AN. Una excepcin importante es la Sadenosilmetionina (SAM), que se forma por condensacin de adenosina y metionina y es
un agente metilante muy enrgico (Figura 6).
NUCLETIDOS
Los nucletidos son steres fosfricos de nuclesidos. El fosfato confiere carcter cido a
la molcula y normalmente se encuentra esterificado al hidroxilo en posicin 5', aunque,
excepcionalmente, tambin pueden hacerlo en 3' o en 2' (Figura 7). Los nucletidos se
representan con la letra mayscula correspondiente al nuclesido del que derivan ms la
letra p minscula, que repesenta al grupo fosfato y se antepone a la letra mayscula de la
base si el fosfato est esterificado en posicin 5' o se pone detrs si el fosfato est
esterificado en posicin 3'. As, el smbolo pA denota la adenosina-5'-fosfato, y el smbolo
Ap a la adenosina-3'-fosfato.
A veces, los nucletidos contienen ms de un grupo fosfato, unidos entre s mediante un
enlace anhidro. En este caso, cada grupo se representa por una letra p. De esta forma, pAp
representa a la 5',3'-adenosina difosfato, ppA representa a la adenosina-5'-difosfato (ADP)
y pppA a la adenosina -5'-trifosfato (ATP).
Los nucletidos trifosfato son particularmente importantes en el metabolismo, ya que la
hidrlisis de los enlaces fosfato (de alta energa) proporciona la energa necesaria para
impulsar multitud de procesos celulares. Las 3 molculas de cido fosfrico se distinguen
mediante los prefijos , y (Figura 8). Cada tipo de nucletido trifosfato parece haberse
especializado en rutas metablicas distintas:
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Los nucletidos cclicos, en los que el cido ortofosfrico esterifica dos hidroxilos (el 3' y
el 5') de la misma ribosa, actan como segundos mensajeros en la respuesta hormonal.
Los ms comunes son la adenosina-3',5'-monofosfato o AMP cclico (AMPc) la
guanosina-3',5'-monofosfato o GMP cclico (GMPc) (Figura 9).
Otros nucletidos actan como coenzimas o grupos prostticos:
La coenzima A est compuesta por cido pantotnico (una vitamina), mercaptoetilamina y una molcula de ADP (Figura 12). Interviene en
reacciones de acilacin, en las que el grupo acilo entrante se incorpora a la
coenzima A mediante un enlace tioster, muy reactivo.
POLINUCLETIDOS
Los polinucletidos son cadenas lineales de nucletidos unidas por enlaces fosfodister.
En este tipo de enlace, los grupos fosfato estn esterificados a los hidroxilos 5' y 3' de dos
nucletidos consecutivos (Figuras 13a y 13b).Cada polinucletido contiene un OH libre
en el grupo fosfato en posicin 5' (extremo 5') y un OH libre en posicin 3' (extremo 3').
En la cadena de un polinucletido se pueden distinguir dos partes:
Los dos polinucletidos que se pueden encontrar en los seres vivos son el cido
ribonucleico (RNA) y el cido desoxirribonucleico (DNA).
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El RNA transferente (RNAt) tiene un peso molecular aproximado de 25 kDa (7590 nucletidos). Se conocen unos 60 RNAt distintos, y se encuentran en todas las
clulas. Pueden contener nucletidos poco usuales (cido pseudouridlico, cido
inoslico) e incluso bases caractersticas del DNA como la timina. Presenta un
plegamiento complejo, denominado plegamiento en hoja de trbol, en el que la
cadena de polinucletido presenta alternancia de zonas lineales y zonas apareadas.
Cada RNAt posee un triplete de bases denominado anticodn, que se une por
complementariedad de bases a un codn del RNA mensajero. Por su extremo 3'
estn unidos a un aminocido. Es, por tanto, una molcula clave en el proceso de
traduccin (o sntesis de protenas) ya que determina qu aminocido se va a
incorporar en la secuencia de una protena durante el proceso de traduccin
(Figura 18).
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Es muy probable que el RNA fuese el primer biopolmero que apareci sobre la Tierra.
En un ambiente similar al que debi existir en la Tierra primitiva pudieron formarse
espontneamente cadenas cortas de RNA, pero no de DNA o protenas. Adems, se
conocen casos en los que las molculas de RNA se cortan y empalman por sitios
especficos, en ausencia de protenas. Estas molculas de RNA con actividad cataltica se
denominan ribozimas. Estos primitivos mecanismos de maduracin del RNA
contribuyeron probablemente a que se consiguiera con xito la primera sntesis de
protena dirigida por una cadena de polinucletidos (un gen) (Figura 23). En una etapa
posterior, a partir del RNA se formara el DNA, que llegara a convertirse en un depsito
seguro de informacin gentica, ya que se trata de una molcula qumicamente ms
estable.
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El anlisis qumico del contenido molar de las bases de DNA procedente de diversos
organismos revel que en todos los casos [A]=[T] y que [G]=[C], o lo que es lo mismo,
[A+G]=[T+C] ([purinas]=[pirimidinas]). Esta es la llamada ley de Chargaff (Figura 25).
En 1953, James Watson y Francis Crick combinaron los datos qumicos y fsicos del
DNA, y propusieron un modelo en el que las dos hebras estn enrolladas una alrededor de
la otra formando una doble hebra helicoidal. Las dos cadenas de polinucletido se
mantienen equidistantes, al tiempo que se enrollan en torno a un eje imaginario. Cada
hebra tiene una orientacin diferente: A cada lado de la doble hlice de DNA, el extremo
3'-OH de una de las hebras se enfrenta al extremo 5' de la otra. En otras palabras, las dos
hebras son antiparalelas. La doble hlice es dextrgira. Esto quiere decir que si alguien
mira a la molcula a lo largo de su eje longitudinal, en cualquier direccin, cada hebra
sigue una trayectoria en el sentido de las agujas del reloj a medida que se aleja del
observador (Figura 26a).
En este modelo, el esqueleto azcar-fosfato (la secuencia alternante de desoxirribosa y
fosfato, unidos por enlaces fosfodister 5'-3') sigue una trayectoria helicoidal en la parte
exterior de la molcula mientras que las bases se dirigen desde la cadena al eje central
imaginario. Las bases de una hebra estn enfrentadas con las de la otra, formando los
llamados pares de bases (PB). Las dos bases que forman un PB estn en el mismo plano y
dicho plano es perpendicular al eje de la hlice. Las parejas formadas son siempre una
purina y una pirimidina, de forma que ambas cadenas estn siempre equidistantes, a unos
11 una de la otra. Los PB adoptan una disposicin helicoidal en el ncleo central de la
molcula, ya que presentan una rotacin de 36 con respecto al par adyacente (Figura
26b), de forma que hay 10 PB por cada vuelta de la hlice. Las bases se unen entre s
mediante puentes de hidrgeno. La A se empareja siempre con la T mediante dos
puentes de hidrgeno, mientras que la C se empareja siempre con la G por medio de 3
puentes de hidrgeno (Figura 26c).
El apareamiento de bases es una de las caractersticas ms importantes de la estructura
del DNA porque significa que las secuencias de bases de ambas hebras son
complementarias. Este hecho tiene implicaciones muy profundas con respecto al
mecanismo de replicacin del DNA, ya que la separacin de las dos hebras del DNA y la
sntesis de las hebras complementarias da lugar a dos molculas iguales a la original.
La hlice presenta dos surcos helicoidales externos, uno de ellos ancho y profundo
(surco mayor) y el otro estrecho y poco profundo (surco menor). Las protenas que
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Esta estructura de doble hlice del DNA no es la ms habitual. En las clulas eucariotas,
el DNA forma la cromatina. En la cromatina, el DNA se enrolla en torno a unas protenas
llamadas histonas empaquetndose de forma muy compacta (Figura 29). En procariotas,
as como en las mitocondrias y cloroplastos, el DNA se presenta en forma circular, en la
que la doble hlice se cierra por sus extremos. Este DNA circular puede presentar diversos
grados de superenrrollamiento (Figura 30). En virus, el DNA puede presentarse como una
doble hlice cerrada, como una doble hlice abierta o simplemente como una nica hebra
lineal.
En cuanto a la composicin de bases en el DNA, la relacin A=T y C=G siempre se
cumple, pero no hay regla que rija las concentraciones totales de G+C y de A+T.
Normalmente la composicin de bases de una molcula de DNA de un organismo se
expresa como su contenido en G+C. En organismos superiores, este valor est prximo a
0,5, pero en los organismos inferiores (bacterias) este valor vara mucho de un gnero a
otro. As, en el gnero Clostridium es de 0,27; en Sarcina es de 0,76 y en Escherichia es
de 0,5.
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Una disolucin de DNA desnaturalizado puede ser tratada de forma que recupere su
configuracin nativa. El proceso se llama renaturalizacin, y se obtiene un DNA
renaturalizado. Para que tenga lugar la renaturalizacin deben cumplirse dos requisitos:
La concentracin salina debe ser alta ([NaCl] entre 0,15 y 0,5 M) para eliminar la
repulsin entre los grupos fosfato de las dos hebras.
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sufre un proceso de maduracin que genera los principales tipos de RNA celulares:
RNAm, RNAr y RNAt (Figura 36b).
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Esta conclusin se vio reforzada por otra serie de experimentos encaminados a demostrar
que la fraccin que contena el DNA de los neumococos S muertos no estaba
contaminada por otros tipos de biomolculas. Se inyect al ratn:
Esta serie de experimentos no deja lugar a dudas sobre la naturaleza del factor de
transformacin, que es un DNA y no una protena como se sospechaba en aquella poca.
2.- EXPERIMENTO DE HERSHEY Y CHASE
Los bacterifagos (o fagos) son virus que atacan a las bacterias. Los fagos de la serie Tpar (T2, T4 y T6) atacan a la enterobacteria Escherichi coli. Estos fagos constan de una
cabeza proteica que alberga en su interior una molcula de DNA. De la cabeza surge un
tallo que acaba en una serie de filamentos (Figura 39). Tanto el tallo como los filamentos
estn formados por protenas. Como estos fagos contienen nicamente DNA y protenas,
el problema de determinar cul de los dos alberga la informacin gentica se aborda de
forma ms directa que en el experimento anterior.
El virus es capaz de reconocer a determinadas protenas de la superficie de las bacterias
susceptibles y se unen a ellas. Una vez fijados a la superficie celular, inyectan el
contenido de la cabeza (el DNA) en el interior de la bacteria. Este DNA se aprovecha de
la maquinaria biosinttica de la bacteria para crear varios cientos de copias de s mismo y
de las protenas que componen el virus. Una vez completada la sntesis, el DNA y las
protenas se ensamblan para formar nuevas copias del virus. Al final del proceso, la
bacteria se destruye (lisis) y los nuevos virus son liberados al medio donde pueden iniciar
nuevos ciclos de infeccin. Toda esta serie de acontecimientos constituyen el llamado
ciclo ltico del fago (Figura 39).
Como los virus de la progenie heredan los caracteres fenotpicos del virus primitivo,
Hershey y Chase disearon un sistema para averiguar si la informacin necesaria para
crear nuevas copias del virus era transmitida por el DNA o por las protenas. Utilizaron
tcnicas de marcaje radioactivo para construir dos poblaciones de bacterifagos T2
distintas (Figura 40):
Una poblacin de fagos creci en un medio que contena 35S. El 35S marca a las
protenas que contienen residuos de Cys o Met y por lo tanto, esta poblacin
contiene protenas radioactivas y DNA no radioactivo, ya que el DNA no
contiene S
La segunda poblacin de virus creci en un medio que contena 32P. El 32P marca
los cidos nucleicos, pero no a las protenas, de forma que esta poblacin contiene
DNA radioactivo y protenas no radioactivas
Ambos tipos de virus fueron utilizados por separado para infectar a clulas de E. coli
susceptibles. Despus de la infeccin y antes de que se completara el ciclo ltico
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sometieron a las clulas a una fuerte agitacin mecnica (con una batidora de vaso) para
desprender de la superfice de la clula a todos los virus que pudiesen estar adheridos, y
despus, por centrifugacin, separaron las clulas de las partculas vricas. Las clulas,
ms pesadas que las envolturas vricas y con el material gentico del virus en su interior,
se acumularon en el fondo del tubo. A continuacin midieron la radioactividad asociada
a las clulas.
Las clulas presentaban radioactividad nicamente cuando se haca el experimento
con la poblacin de fagos que creci en presencia de 32P (y cuyo DNA era radioactivo).
Cuando se realizaba el experimento con la poblacin de fagos que creci en presencia de
35S (y cuyas protenas eran radioactivas), las clulas no contenan radioactividad (Figura
40). Como los virus que surgen de ambos ciclos lticos son absolutamente normales, este
experimento indica que las caractersticas genticas del fago han sido comunicadas a
la progenie mediante el DNA, no mediante la protena.
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