Evaluacin de mtodos analticos

- Calibracin

Estadstica aplicada a la
evaluacin de mtodos analticos

- Lmites de deteccin y de cuantificacin

- Linealidad
- Selectividad
- Precisin
- Veracidad y exactitud

Curso de Estadstica para el Laboratorio

Clnico

- Incertidumbre
- Contaminacin

Ref Docs CLSI: EP5, EP6, EP9, EP10, EP17, EP28

IUPAC
SEQC

Conceptos previos
Veracidad.- grado de concordancia entre el valor medio de una serie
grande de medidas y el valor del mensurando que se acepta como
referencia. No puede tomar valores numricos
Sesgo (Bias).- Expresin cuantitativa de la veracidad: diferencia entre
el resultado esperado para el test y el valor aceptado como verdadero.
En general, la desviacin/diferencia se estima en medidas replicadas
entre un mtodo aceptado (definitivo, referencia, o diseado para
comparacin) y el mtodo evaluado, y se expresa en las unidades de la
medida o en porcentaje.

Conceptos previos
Exactitud (Accuracy).- En esencia significa ausencia de error.
Concordancia entre el resultado de una prueba y el valor aceptado
como verdadero.
Incluye componentes aleatorios de la medida y componentes
sistemticos (sesgo) [ISO 3534: 3.11]
Estrictamente slo se debe aplicar a resultados y no a mtodos
analticos, individuos o laboratorios.

Refleja el error total sistemtico [ISO 3534: 3.13]

Conceptos previos
Precisin.- Grado de concordancia de diversas medidas
independientes entre s, obtenidas en determinadas condiciones. No
puede tomar valores numricos.
Depende slo de la distribucin de los errores aleatorios y no tiene
relacin con el valor verdadero del valor especificado.
Imprecisin.- Expresin cuantitativa de la precisin. Dispersin de
los resultados obtenidos en determinadas condiciones

Conceptos previos
Condiciones de precisin Intermedia Se obtienen los resultados con
el mismo mtodo y sistema de medida pero en condiciones
operacionales distintas que pueden referirse a tiempo, calibracin,
operador y equipo.
Especificar los elementos que cambian: inter-ensayo, intra-dia, interda, intra-laboratorio
Condiciones de Repetibilidad Condiciones en que se obtienen
resultados independientes con el mismo mtodo, en materiales idnticos,
en el mismo laboratorio, por el mismo operador y con el mismo
equipamiento durante un corto periodo de tiempo (ISO 3534-1);
(precisin intra-ensayo)
Condiciones de Reproducibilidad Se obtienen resultados del mismo
test con el mismo mtodo en diferentes laboratorios con diferentes
operadores y diferentes equipos (ISO 5725-1).

Conceptos previos

Conceptos previos
Incertidumbre Estimacin asociada a un resultado de un test que
caracteriza el rango de valores en lo que se considera que estn los
verdaderos valores. [ISO 3534: 3.25]

ISO 5725 Discute las medidas de precisin intermedia y proporciona

notacin acerca de las condiciones en que varan tiempo, calibracin,
operador y equipo.
Estimadores de la imprecisin:

Incertidumbre (de medida): Parmetro, asociado con el resultado de una

medida, que caracteriza la dispersin de los valores que podran ser
atribuidos razonablemente al mensurando [GUM: 2.2.3]

Repetibilidad Precisin estimada bajo condiciones de repetibilidad [ISO

3534: 3.15]
Reproducibilidad Precisin estimada
reproducibilidad. [ISO 3534: 3.20]

bajo

condiciones

de

Precisin interensayo Precisin estimada cuando se obtienen los

resultados en series analticas diferentes, en el mismo laboratorio con el
mismo mtodo y el mismo material

La ilustracin clsica de la exactitud y la

precisin en trminos de una diana no se
corresponde con la descripcin actual. La
exactitud se refiere a la combinacin de
errores sistemticos y aleatorios, no slo a
los errores sistemticos.

Conceptos previos
Los conceptos bsicos en la evaluacin de la incertidumbre son los
siguientes:
el conocimiento de toda magnitud que influya en el mensurando es, en
principio, incompleto y puede expresarse como una funcin de densidad
de probabilidad (FDP) para los valores atribuibles a la magnitud
basndose en ese conocimiento;
el valor esperado de la FDP se considera la mejor estimacin del valor de
la magnitud;
la desviacin tpica de la FDP se considera la incertidumbre tpica
asociada a esa estimacin;
la FDP se basa en el conocimiento de una magnitud que puede
inferirse de
- mediciones repetidas evaluacin de tipo A;
- juicio cientfico basado en toda la informacin existente sobre la
posible variabilidad de la magnitud evaluacin de tipo B.

Conceptos previos

Incertidumbre asociada con el valor de un test debida a errores

aleatorios que ocurren normalmente cuando se procesa el test.

Esta componente de la incertidumbre se demuestra con la dispersin de

valores observados cuando un mensurando se mide repetidamente en
el mismo espcimen mediante un mtodo adecuado. En el laboratorio
clnico esta dispersin se asocia a la imprecisin, como estimacin
cuantitativa bsica de la confianza que se puede tener en un resultado.

Conceptos previos
Principales fuentes
cuantitativo:

de

incertidumbre

de

un

mtodo

diagnstico

Incertidumbre asociada con el valor numrico asignado al

mensurando presente en el material calibrador usado en el mtodo en
evaluacin.
Esta incertidumbre ha de ser estimada por el fabricante del calibrador,
o por el laboratorio si se trata de un calibrador no comercial. El
mtodo para estimar la incertidumbre del valor del calibrador
depender de cmo se determinen sus valores (ej, gravimetra,
mtodo definitivo, etc), pero para la mayora de los mtodos se
requieren los mtodos A y B descritos en GUM.

Conceptos previos
A efectos prcticos, se recomienda emplear la imprecisin de los datos
obtenidos mediante el control de calidad de la prctica diaria como
estimacin cuantitativa de la incertidumbre de la medida.
Para los clnicos, la dispersin de los resultados de los tests en torno al
valor de decisin clnica es la principal imprecisin con efecto potencial
que afecta a la interpretacin y el manejo clnico.
Cuando se conoce la estimacin de la incertidumbre del calibrador y la
imprecisin analtica del mtodo, la estimacin de la incertidumbre total
de los resultados medidos puede calcularse sumando ambas
estimaciones.

Conceptos previos

Conceptos previos
Error (de medida)
Es el resultado de una medida menos el verdadero valor del
mensurando
Dado que el verdadero valor no puede ser determinado, en la
prctica se emplea un valor verdadero convencional. [VIM: 3.10]

Qu incluye la medida de la incertidumbre?

ISO 15189, 5.6.2: Fuentes que contribuyen a la incertidumbre incluyen
muestreo, preparacin de muestra, seleccin de una porcin de
muestra, calibradores, materiales de referencia, equipo usado,
condiciones ambientales, condicin de la muestra y cambios de
operador.

Error aleatorio (de un resultado) Componente del error que, en el

curso de un nmero de tests de la misma caracterstica vara de forma
impredecible.
No es posible corregir el error aleatorio. [ISO 3534: 3.9]

La incertidumbre de la medida de un test es la suma de las

incertidumbres asociadas con las etapas de la tcnica requeridas para
efectuar un test de acuerdo con el procedimiento operacional estndar
del mtodo.

Resultado de una medida menos la media que resultara de obtener un

nmero infinito de medidas del mismo mensurando llevadas a cabo
bajo condiciones de repetibilidad [VIM; 3.13]

Evaluacin de mtodos analticos

Conceptos previos
Error sistemtico Componente del error que, en el curso de un
nmero de tests de la misma caracterstica, permanece constante o
vara de manera predecible.
Los errores sistemticos y sus causas pueden ser conocidos o
desconocidos. [ISO 3534: 3.10]
Diferencia entre la media que resultara de obtener un nmero infinito de
medidas del mismo mensurando llevadas a cabo bajo condiciones de
repetibilidad y el verdadero valor del mensurando [VIM; 3.14];
a) El error sistemtico es igual al error total menos el aleatorio;
b) Al igual que el verdadero valor, el error sistemtico y sus causas no
pueden conocerse completamente.

Detecci
Deteccin de valores aberrantes
Dixon: slo permite detectar un valor aberrante en cada paso. Distribucin normal

Q=

x n x n 1
x n x1

Horn:
(1) Normalizar los datos originales (BoxCox)
(2) Estimar Q1, Q3 y IQR para los datos transformados

=0.001

=0.002

=0.005

=0.01

=0.02

=0.05

0.999

0.998

0.994

0.988

0.964

0.949

0.921

0.889

0.847

0.766

=0.1

=0.2

0.895

0.869

0.824

0.782

0.729

0.643

0.559

0.452

0.822

0.792

0.744

0.698

0.763

0.731

0.681

0.636

0.587

0.507

0.433

0.344

0.716

0.682

0.633

0.591

0.542

0.467

0.398

0.314

0.675

0.644

0.596

0.555

0.508

0.436

0.370

0.291

10

0.647

0.614

0.568

0.527

0.482

0.412

0.349

0.274

15

0.544

0.515

0.473

0.438

0.398

0.338

0.284

0.220

20

0.491

0.464

0.426

0.393

0.356

0.300

0.251

0.193

25

0.455

0.430

0.395

0.364

0.329

0.277

0.230

0.176

30

0.430

0.407

0.371

0.342

0.310

0.260

0.216

0.165

(3)0.976
Definir
las 0.886
2 bisagras
de Tukey:
0.941
0.782
0.679 IQR
0.561 y Q3 +1.5 IQR.
Q1 - 1.5

(4)0.646
Son posibles
valores
aberrantes los que queden fuera
0.563
0.484
0.387
Reed

r=

xn xn 1 1
>
xn x1
3

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Estudio de la imprecisi
imprecisin e inexactitud

Estudio de la imprecisi
imprecisin e inexactitud

Imprecisin intraensayo (Repetibilidad)

Valor cuantitativo que indica la dispersin de una serie de medidas
replicadas de un analito realizadas enla misma serie analtica.
Una serie analtica (run) es el conjunto de resultados obtenidos en el
periodo de tiempo en el que se consideran estables las caractersticas del
mtodo
Imprecisin total (Reproducibilidad)
Valor cuantitativo que indica el grado de dispersin de las medidas
replicadas de un analito en un periodo ms largo de tiempo, de modo que se
incluyen todas las principales causas conocidas de error de la medida.
Se mide como la suma de varias fuentes de error de la medida, incluida la
imprecisin intraensayo

Asumiendo un 5% de probabilidad estadistica de falso rechazo:

(a) Si intra < 2/3 total, el experimento deber realizarse durante 5d y
constar de 4 replicados por nivel y serie analtica
PROTOCOLO ADECUADO CUANDO LA VARIACION INTERDIA
ES UN COMPONENTE IMPORTANTE DE LA IMPRECISION
TOTAL
(b) Si intra > 2/3 total, el experimento deber realizarse durante 3d y
constar de 3 replicados por nivel y serie analtica
PROTOCOLO ADECUADO CUANDO LA VARIACION INTERDIA
NO ES UN COMPONENTE IMPORTANTE DE LA IMPRECISION
TOTAL.
(c) Si relacin entre intra y total es desconocida, debe realizarse el
experimento de 5d, con 4 replicados por nivel.

CLSI EP15

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Estudio de la imprecisi
imprecisin

Estudio de la imprecisi
imprecisin
Valor terico
Da 1

Imprecisin intraensayo
(Repetibilidad)

Imprecisin total
(Reproducibilidad)

Da 2

Da 3

S int ra =

(x
d =1 i =1

di

xd )

B=

D (n 1)

int ra = CV x d

S total =

(x
d =1

x)2

n 1 2
S int ra + B
n

Valor de Verificacin INTRA

Valor de Verificacin GLOBAL

0,023
0,015
0,021
0,015
0,025
0,024

Imprecisin intraensayo

total

0,285
0,585
0,291
0,585

gl

gl = D (n 1)

Evaluacin de mtodos analticos

2,82
2,53
3,10
2,82
2,92
3,35
2,73
3,29
3,23
2,71

Imprecisin global

int ra C

total = CV x

D: n das
N: n replicados

Sintra
intra
Stotal
Total
C(gl=6)=16,24
C(T=8)=19,48

Anlisis imprecisin intra

Anlisis imprecisin global

1,13

0,66
1,23
0,82
1,37
0,61
1,19
0,61
1,07
0,48
1,26
0,50
1,18
0,64
1,30
0,66
1,10
0,67
1,15
Resultados Globales
0,080
0,091
0,124
0,246
0,106
0,100
0,124
0,246

Imprecisin segn EP-15

D 1

intra > 2/3 total

0,62

0,06
0,08
0,08
0,05
0,05
0,09
0,05
0,09
0,09
0,10

T=

(n 1)S int ra + nB
n2 B2
n 1 4

S int ra +
D 1
D
2

Evaluacin de mtodos analticos

Estudio de la imprecisi
imprecisin: APLICACIONES

Estudio de la inexactitud

Imprecisin intraserial
Estudio previo a la estimacin de la imprecisin interdiaria.
Definicin del valor ptimo alcanzable por la imprecisin
interdiaria para un determinado procedimiento de medida.
Imprecisin interdiaria
Seleccin de procedimientos de medida.
Establecimiento de intervalos de tolerancia de materiales
de control interno.
Interpretacin objetiva de la significacin de un cambio
entre dos valores consecutivos de una magnitud bioqumica.
Estimacin de la incertidumbre.

Comparacin de resultados obtenidos en muestras de pacientes con el

mtodo en estudio (xi) y con los de otro mtodo (xi)
Importante: definir la desviacin clnicamente tolerable entre ambos
mtodos
Clculo del sesgo de cada muestra individual:
bi=xi - xi
% bi=100 . (xi - xi)/ xi
I

b=

b
i =1

Sb =

(b b )
i =1

n 1

Recuperacin.- Comparacin del resultado obtenido al medir el

constituyente en estudio medido en materiales de referencia con los
valores esperados

CLSI EP15

Evaluacin de mtodos analticos

Clculo de la diferencia de cada muestra individual:
bi=xi - xi
% bi=100 . (xi - xi)/ xi
bi-
(bi- ) 2
-1
-3,5
12,25
6
3,5
12,25
-6
-8,5
72,25
9
6,5
42,25
4
1,5
2,25
-3
-5,5
30,25
1
-1,5
2,25
0
-2,5
6,25
10
7,5
56,25
1
-1,5
2,25
1
-1,5
2,25
3
0,5
0,25
4
1,5
2,25
-2
-4,5
20,25
0
-2,5
6,25
6
3,5
12,25
5
2,5
6,25
-2
-4,5
20,25
9
6,5
42,25
5
2,5
6,25
50
357
0
2,5 >2 mg/dL
4,33
4,46
500 t19=2,539
76
127
256
303
29
345
42
154
398
93
240
72
312
99
375
168
59
183
213
436

x'i

77
121
262
294
25
348
41
154
388
92
239
69
308
101
375
162
54
185
204
431

bi

10
5
Bias

xi

Evaluacin de mtodos analticos

Linealidad: Ventajas del an
anlisis de regresi
regresin polin
polinmica

Estudio de la inexactitud

0
0

100

200

300

400

500

Mejor aprox que chequear la bondad del ajuste

Ambos tienen dos vertientes (lineal y no lineal), pero el mtodo
polinmico cuenta con un modelo espercfico y paramtrico para la
alternativa no lineal, que facilita la identificacin de condiciones de no
linealidad e incluye la repetibilidad en el estudio, de modo que:
se estima la magnitud de la no linealidad a cada nivel

-5

se controla la falta de repetibilidad en el estudio de la no linealidad

-10
Mtodo de referencia

tS b
n

se aporta un modelo estadstico testable

puede ser fcilmente programado en software disponible
SIEMPRE el Primer paso ha de ser la inspeccin visual: Representacin
grfica
CLSI EP6

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Linealidad: Evaluaci
Evaluacin polin
polinmica de la linealidad (Kroll
(Kroll))

Linealidad: Muestras deseables (efecto matriz)

Se asume de antemano que el conjunto de datos no es lineal

- Pool de muestras de pacientes: alto y bajo

Mtodo paramtrico: asume que los datos pueden representarse por

una funcin lineal o curva y que el error aleatorio sigue una normal
Se requieren mltiples medidas de entre 5 y 9 concentraciones
diferentes obtenidas por dilucin o por formulacin. No es preciso que
sean equidistantes

- Pool de muestras de pacientes diluido con diluyente recomendado

- Pool de muestras de pacientes suplementado con el analito a estudiar
- Controles comerciales, calibradores o materiales de estudio de
linealidad

El anlisis consta de dos partes:

- Pool diluido con salino u otros diluyentes distintos del recomendado

-Chequear si un polinomio de grado 2 ajusta los datos mejor que una

recta

- Material de control diluido con volumen diferente del estipulado

- Establecer si la diferencia entre el mejor ajuste no lineal y el lineal es

recta o parbola?
recta o cbica?
inferior a la permitida para el mtodo

140

150

160

170

180

190

200

140

150

160

170

180

190

- Soluciones acuosas

N Muestras recomendado

Objetivo

niveles

replicados

Establecer rango lineal

9 - 11

2-4

Validar un mtodo propio /modificado

7-9

2-3

Confirmar la linealidad comercial

5-7

200

Evaluacin de mtodos analticos

Linealidad: Procedimiento

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin
LB: Lmite de Blanco: resultado ms alto que indica que no hay analito
presente

Grados de libertad df = L R - Rdf

L: n de niveles de concentracin
R: n de replicados de cada nivel
Rdf: n de gl consumidos por el anlisis de regresin (n de coeficientes)

DLi = p ( xi ) (b0 + b1 xi )

LD: Lmite de Deteccin: menor cantidad de analito detectada con una

probabilidad establecida
LQ: Lmite de Cuantificacin: menor cantidad de analito determinada
cuantitativamente con una incertidumbre establecida

Si algn coeficiente es estadsticamente significativo, se estudia el grado de

desviacin de la linealidad del modelo de menor error estndar de la regresin

Error de Tipo I: asumir incorrectamente que una muestra contiene el

analito (prob: )

Si las DL observadas para cada nivel son menores que el error aleatorio
establecido, aunque se haya detectado no linealidad estadsticamente
significativa, sta no es importante porque el error est dentro de lo asumido
para el mtodo (segn el estudio de repetibilidad)

Error Tipo II: asumir incorrectamente que no hay analito presente (prob: )

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin: aproximaci
aproximacin convencional
convencional

Lmite de detecci
deteccin

Generar resultados replicados en blancos

LD = Media + x . SDb
Aadir media o mediana de los replicados?
Qu mltiplo X (2-10) elegir basados en el error ?
Alternativa: concentracin muy baja
LD = 0 + x . SDb

Otras Aproximaciones
Modelos para errores Tipo 1 y Tipo 2
CLSI EP17, ISO 11843
Relacin Seal vs. Ruido
Lmites de Confianza para la relacin de varianzas
Lmite del rango lineal (regresin)
Sensibilidad ISO/VIM definicin (pendiente de la recta de
calibracin)

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Lmite de detecci
deteccin

Introduccin al procedimiento estadstico:

El lmite de deteccin (LD) de un ensayo es una caracterstica que
habitualmente se informa con la imprecisin y el sesgo.
Frecuentemente, se estima slo sobre la base de medidas repetidas
del blanco y se informa como la media ms 2 DS de las medidas del
blanco (ESTO NO ES CORRECTO).
De acuerdo con los estndares ISO, el LD de un
ensayo debera estimarse teniendo en cuenta los
errores de tipo I y II.

Lmite de Blanco (LB):

Lmite que slo es excedido con una probabilidad del 5% por una
medida de un blanco.
El resultado ms alto que es probable obtener cuando el analito
no est presente en la muestra.
LB = p95 de todas las medidas de
muestras de blanco
Para una distribucin Gaussiana de
los valores del blanco,
LB= B+ 1.645 x B,
donde B y B son la media y DS de
las medidas del blanco

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Lmite de detecci
deteccin

LB no es la concentracin de analito en una muestra, sino el

umbral para el resultado medido, de modo que
un resultado LoB, es no detectado,
un resultado > LoB, es detectado.

Lmite de deteccin (LD): Menor cantidad real de analito

existente en una muestra que puede ser detectada con una
probabilidad establecida (habitualmente, 95%).
La cantidad de analito de LB no es LD, sino que LB < LD.

Una muestra con una

concentracin verdadera
exactamente igual al LB tendr
slo un 50% de probabilidad de
proporcionar un valor que se
interprete como la presencia de
analito.

Otros trminos para LB (CLSI):

valor crtico (ISO)
umbral para la deteccin de seal

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Lmite de detecci
deteccin

Con una muestra que tenga como verdadera concentracin el

LD, slo el 5% de las medidas se declararn errneamente
como no diferentes del blanco.

Lmite de cuantificacin (LQ): menor cantidad de analito presente

en una muestra que puede detectarse con fiabilidad y a la cual el
error total cumple los requerimientos del laboratorio para la
exactitud.
Dependiendo del objetivo del error definido, el LQ podra ser igual
al LD o mucho mayor.
No puede ser inferior al LD.
Ejemplo:
Ensayo para cuantificacin del RNA de la hepatitis C vrica (HCV)
en suero o plasma
LB ( = 1%):
3100 copias / mL
LD ( = 5%):
5500 copias / mL
LQ (requerimiento para exactitud: sesgo 10% y CV 20%: error
total 50%:
9000 copias/mL

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Lmite de detecci
deteccin

Uso del trmino Sensibilidad Analtica

El lmite de deteccin no debera confundirse con la sensibilidad analtica
(en muchos laboratorios clnicos y aplicaciones diagnsticas, sensibilidad
analtica se emplea como sinnimo de lmite de deteccin).
De acuerdo con ISO, la sensibilidad analtica es
la pendiente de la funcin de calibracin.
La funcin de calibracin relaciona la media de las concentraciones
medidas con las concentraciones reales; cuanto mayor sea la pendiente,
ms sensible es el ensayo para ligeros cambios en la cantidad de analito.
Por tanto el concepto es distinto al de lmite de deteccin

Incluso si la pendiente de la funcin de calibracin es pronunciada, la

menor concentracin que puede detectarse con fiabilidad puede ser
grande si hay una gran variacin de la seal medida.
Por otra parte, un mtodo con moderada sensibilidad analtica (pendiente
moderada de la funcin de calibracin) y muy baja variacin aleatoria de
la seal puede tener un lmite de deteccin bajo.

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Lmite de detecci
deteccin

Informe de intervalos para los resultados Cuantitativos: el informe de

valores cuantitativos depende de dnde estn los resultados observados
con relacin a los lmites analticos a niveles bajos.
0

LB

LD

LQ

LB < Resultado LD
Analito detectado; no cuantificable;
concentracin <LQ
Resultado LB
Sustancia no detectada;
concentracin <LD

LB < Resultado LQ
a) Analito detectado; concentracin < LQ
b) informar resultado advirtiendo acerca
de la posible mayor incertidumbre
LB LQ
Informe de resultado
(incertidumbre si se solicita)

Relacin entre LD para mtodos cuantitativos y el Intervalo de 95%

en torno al cutoff para mtodos cualitativos
El lmite de deteccin es tambin un importante criterio para tests
cualitativos en los que existe un continuo fondo de seal del instrumento,
los resultados se informan como Positivo o Negativo.
Una definicin til para el punto de corte en mtodos cualitativos es
la concentracin verdadera a la que medidas repetidas de un test en
la misma muestra dan resultados positivos en el 50% de los casosy
negativos el otro 50%. A concentraciones cercanas al valor de corte,
algunos resultados sern positivos y algunos negativos. Las
concentraciones por encima o por debajo del valor de corte a las
cuales el 95% de los resultados son positivos o el 95% negativos,
respectivamente, se denominan intervalo del 95% del valor de corte
para el mtodo (NCCLS documento EP12-A).

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Lmite de detecci
deteccin
Para determinar LB y LD
Frmula General: LD = LB + 1.65 SD
LD = LB + 1.65 SDS (alfa = beta = 5%)
LB = p95 de las medidas del blanco
SDS= Estimacin de la SD conjunta de las medidas en muestras de
baja concentracin de analito

Si el resultado Negativo de un test cualitativo significa Ausencia de

sustancia y uno positivo significa Presencia de Sustancia,
entonces el punto final superior del intervalo del 95% entorno al
cutoff es el LD.

Para determinar LB, se recomienda un mnimo de 60 medidas de

uno o varios blancos
En el caso de = 5% y N=60,
LB = p95 = promedio de las medidas de orden 57 y 58

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin

Evaluacin de mtodos analticos

Lmite de detecci
deteccin y l
lmite de cuantificaci
cuantificacin

Para determinar el LD, la desviacin estndar se obtiene a partir de

medidas repetidas de muestras con muy baja concentracin. Se
recomienda un mnimo de 60 resultados obtenidos de varias (4-6)
muestras de bajo nivel. La SDS se calcula conjuntamente si es
aceptable hacer un pool. Una estimacin del LD se obtiene
Segn LD = LB+ cSDS

15 Valores Blanco ms altos (U/L)

Muestras de Bajo nivel: 0.05 0.2 UI/L
(Comprobada N y Homogeneidad S2) 10 pacientes, una muestra de cada uno
10 rplicas por muestra
SDs=0.0299
gl=10(10-1)=90
f = N S K = 100 10 = 90

El Factor c se deriva del percentil 100% - de una distribucin estandar

Gaussiana y el factor de correccin se aplica debido a que SDS es un
estimador sesgado de la desviacin estndar poblacional

c =

1.645
1
4f

c =

donde f = Ns k son los grados de libertad de SDS.

Para = 5% y 60 resultados obtenidos de K=5 muestras
1.645
c =
= 1.653
de concentracin baja (f = 60 K),
1
1

4 55

Evaluacin de mtodos analticos

Incertidumbre en el laboratorio clnico

1) Definir el mensurando
Principio analtico
compuesto para el que est diseado el mtodo de anlisis (unidades)
limitaciones diagnsticas del mtodo
otras sustancias con posible reaccin cruzada que afecten a la
interpretacin clnica

1.645
1.645
= 1.6494
=
1
1
1
4 90
4f

LD = LB + C s
LD=0.0544+1.6494x0.0299=0.104UI/L
p95=0.0544

Evaluacin de mtodos analticos

Incertidumbre en el laboratorio clnico
2) Estimar la incertidumbre de la medida
La mayora de los tests se interpretan frente a unos valores de referencia
adecuados al mtodo
Se estima la incertidumbre mediante la imprecisin a largo plazo (6m)
del control de calidad habitual, expresado con lmites de confianza del
95%, como 1.96 DS o 1.96 CV%.
Si los resultados se interpretan frente a un valor de decisin clnica
obtenido por otro mtodo, la incertidumbre del resultado incluye
cualquier error sistemtico (sesgo).
Conviene conocer dicho sesgo a travs de la trazabilidad del calibrador
o por control de calidad externo

Evaluacin de mtodos analticos

3) Cuantificar las incertidumbres: Ajuste para propsitos clnicos
Hay dos formas de determinar las incertidumbres individuales:
a. Calculndolas por medios estadsticos a partir de medidas repetidas
(Tipo A)
b. Estimando valores de otras fuentes (Tipo B)
Tipo A: Incertidumbres estndar calculadas a partir de series de n
medidas
Se calcula el promedio de las n medidas independientes

SD experimental de una nica medida

SD experimental de la media
La DS se usa directamente como
Incert ( x j ) = s (q ) incertidumbre estndar del correspondiente
componente xj medido n veces

Evaluacin de mtodos analticos

Incertidumbre en el laboratorio clnico

3) Cuantificar las incertidumbres: Ajuste para propsitos clnicos

Un objetivo analtico puede no ser clnica ni fisiolgicamente relevante
El objetivo de comparacin debera ser relevante para la aplicacin
clnica del resultado del test.
Se admite internacionalmente que se aproxime ese valor objetivo con
base en la variacin biolgica intra-individual del mensurando
Existen 3 niveles de objetivo analtico para la
imprecisin basados en la variacin biolgica
intra-individual
Optimo: CVA = 0.25 x CVI
Deseable: CVA 0.50 x CVI
Minima: CVA 0.75 x CVI
Para frmacos, el componente de variacin biolgica
intra-individual puede, si es clnicamente til, basarse
en variables farmacocinticas como la vida media
plasmtica del compuesto (t) y la pauta de
dosificacin (T):
Deseable: CVA 0.25 [ (2T/t 1) / (2T/t + 1) ] x 100

Evaluacin de mtodos analticos

Evaluacin de mtodos analticos

Incertidumbre en el laboratorio clnico

3) Cuantificar las incertidumbres: Ajuste para propsitos clnicos
Si los resultados del test se interpretan en funcin de valores de decisin
clnica o de referencia determinados por diferente mtodo, el sesgo
debera contemplarse como una parte de la estimacin de la
incertidumbre de la medida y utilizar un objetivo analtico apropiado
Optimo: BA = 0.125 (CVI2 + CVG2)1/2
Deseable: BA 0.250 (CVI2 + CVG2)1/2
Minimo: BA 0.375 (CVI2 + CVG2)1/2
BA = Sesgo, componente sistemtico del error
CVI = Coeficiente de variacin (intra-individual), derivado de la variacin
biolgica intra-individual del mensurando especificado (analito).
CVG = CV de la variacin biolgica inter-individual

Evaluacin de mtodos analticos

Para estimar la incertidumbre de la medida de un resultado
calculado por suma o diferencia de medidas independientes
(esto es, medidas cuya covarianza es nula).

Para mtodos donde tanto sesgo como imprecisin

deban cumplir criterios adecuados para la
aplicacin clnica, conviene combinar ambos
parmetros como Error Total permisible (ETp),
estableciendo nuevos niveles de tolerancia:
Optimo: ETp = 1.65 (0.25 CVI ) + 0.125 (CVI2 +
CVG2)1/2
Deseable: ETp 1.65 (0.50 CVI ) + 0.250 (CVI2 +
CVG2)1/2
Minimo: ETp 1.65 (0.75 CVI ) + 0.375 (CVI2 +
CVG2)1/2

Evaluacin de mtodos analticos

Para estimar la incertidumbre de la medida de un resultado
calculado por producto o cociente de medidas independientes
(esto es, medidas cuya covarianza es nula).