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Normas para Preparacion de Medios
Normas para Preparacion de Medios
MANUAL DE PRCTICAS
BIOTECNOLOGA
LaboratoriodeBiotecnologa
CONTENIDO
Practica 1. Preparacion de las soluciones madre para Medios de Cultivos para
plantas....3
Practica 2. Preparacion de los Agares para cultivo de plantas in vitro.....10
Practica 3. Cutivo in vitro de plantas (semilla)......15
Practica 4: Cultivo in vitr de plantas (organos vegetales)....19
Practica 5: Fermentaciones..23
Practica 6: Glicolisis anaerobica y fermentacin ..26
Practica 7: Fermentacion alcoholica...29
Practica 8. Fermentacion lactica..34
Practica 9: Analisis de tecinicas para deteccion de alimentos OGM
(documental)...37
Practica 10: Extraccion de ADN eucariotico..39
Practica 11: Extraccion de ADN procariotico.43
Practica 12: Electroforesis con geles de Agarosa....46
Practica 13: Reaccion en Cadena de la Polimerasa y sus variantes (PCR)
(Demostrativa y Documental)..50
Practica 14. Secuenciacion de ADN (demostrativa, Documental).53
Practica 15. Prueba diagnosticos (ELISA).55
Practica 16: Bioinformatica y Biotecnologia...58
Practica 17. Biorremediacion (documental)...60
Practica 18. Fitorremediacion......62
Practica 19. Biocombustibles...64
Practica 20. Analisis de contaminacion del agua..67
LaboratoriodeBiotecnologa
LaboratoriodeBiotecnologa
Embudos de pesar
Agitador magntico
Imanes
Vasos de precipitados
Probetas
Matraces aforados
Eppendorf
Compuestos qumicos
Agua destilada
Autoclave
Termoplato
Algodn
Gasas
Tape
Cajas petri estriles
Tubos de ensaye esmerilados con tapa
Procedimiento:
Se establecern 8 equipos de trabajo por cada grupo de prcticas (2 en cada lateral de
una mesa).
Normas generales a la hora de pesar
-
Se debe comprobar los clculos. Y tener en cuenta que los valores de las
soluciones madre estn expresados para un litro
Debe leer las caractersticas del reactivo que se va a pesar. Algunos son
txicos por inhalacin o en contacto con la piel y hay que mantener las debidas
precauciones.
Para medidas desde 0.01 g se utilizar la balanza granataria. Para valores
inferiores la balanza analtica.
Antes de pesar hay que tarar el recipiente donde se est haciendo la pesada.
Nunca se debe pesar directamente sobre el platillo de la balanza, favor de
colocar pesa sustancias.
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LaboratoriodeBiotecnologa
LaboratoriodeBiotecnologa
(g/l)
(NH4 )NO3
1.650
KNO3
1.900
CaCl2.2H2O
0.440
MgSO4.7H2O
0.370
KH2PO4
0.170
FeSO4.7H2O
0.0278
Na2EDTA. 2H 2O
0.0372
MnSO4.H2O
0.0169
ZnSO4.7H2O
0.0086
H3BO3
0.0062
KI
0.00083
Na2MoO4.2H2O
0.00025
CuSO4.5H2O
0.000025
CoCl2.6H2O
0.000025
Mioinositol
0.100
Tiamina HCl
0.0001
Acido nicotnico
0.0005
Piridoxina HCl
0.0005
Glicina
0.002
(NH4)NO3
1.416
Ca (NO3)2 3H2O
1.811
(1.960 si es 4 H2O)
CaCl2 2H2O
0.147
MgSO4 7H2O
0.74
KH2PO4
0.258
FeSO4 7H2O
0.00676
0.0908
K2SO4
1.56
Mn SO4 H2O
0.0338
Zn SO4 7H 2O
0.0212
BO3H3
0.0124
KI
0.00166
Na2MoO4 2H2O
0.0005
Cu SO4 5H2O
0.00005
Co Cl2 6H2O
0.00005
Mioinositol
0.1
Tiamina H Cl
0.001
c. nicotnico
0.001
Piridoxina. HCl
0.001
Biotina D(+)
0.00001
0.001
L-Cystena H Cl
0.001
Pantotenato de Ca
0.1
LaboratoriodeBiotecnologa
16.5
KNO3
19
MgSO4.7H2O
3.7
KH2PO4
1.7
NH4NO3
14.16
CaCl2 2 H2O
1.47
Ca (NO3)2 3 H2O
B (10 X)
KH2PO4
4.4
K2SO4
15.6
D (10 X)
MICRONUTRIENTES (100 X)
Mg SO4 7 H2O
MnSO4.H2O
1.69
ZnSO4.7H2O
0.86
H3BO3
7.4
E (50 X)
Mn SO4 7H2O
1.69
0.62
Zn SO4 7H2O
1.06
KI
0.083
BO3H3
0.6.2
Na2MoO4.2H2O
0.025
KI
0.083
CuSO4.5H2O
0.0025
Na2MoO4 2H 2O
0.025
Cu SO4 5 H2O
0.0025
CoCl2.6H2O
0.0025
Co Cl2 6H2O
0.0025
F1 (100 X)
FeSO4.7H2O
0.278
0.1
Na2EDTA.2H2O
0.372
L-Cistena HCl
0.1
F2 (100 X)
VITAMINAS (20 X)
2.58
C(10 X)
CALCIO, (10 X)
CaCl2.2H2O
Mioinositol
Tiamina HCl
0.002
Acido nicotnico
0.01
Piridoxina HCl
0.01
Glicina
0.04
Biotina D(+)
0.001
Tiamina H Cl
0.1
c. Nicotnico
0.1
Piridoxina
0.1
Pantotenato de Ca
0.1
LaboratoriodeBiotecnologa
Referencias:
lvarez Tinaut, Carmen y Espinosa Borreguero, Francisco. Guiones de prcticas
de Biotecnologa Vegetal. Universidad de Extremadura (Badajoz)
Driver, J.A., Kuniyuki, A.H. (1984). In vitro propagation of Paradox walnut
rootstock. Hort. Science, 19(4).
Murashige, T. And Skoog, F. (1962). A revised medium for rapid growth and
bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologa Plantarum, 15, 473-497.
Revilla Bahillo, ngeles y Ords, Ricardo. Guiones de prcticas de Biotecnologa
Vegetal. Universidad de Oviedo
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Conclusiones:
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LaboratoriodeBiotecnologa
Sacarosa
Algodn
Agar-Agar
Frascos gerber
Tubos de cultivo
Ligas
Papel aluminio
Matraz de 1000ml
Moscas magneticas
Termoplato
Campana de flujo laminar
Agua destilada
Etanol
Soluciones madre del MS
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Procedimiento:
Para la preparacin de los Agares para medio de cultivo para plantas:
El medio de cultivo es el Murashige & Skoogque que consta de una amplia cantidad de
nutrientes los cuales se muestra en la siguiente figura:
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LaboratoriodeBiotecnologa
Someter a calentamiento con agitacin sin que llegue a la ebullicin. Proceda a vaciar
el medio en frascos limpios y asegrese de llenarlos con aproximadamente 50 mL, 2/4
del recipiente o segn vea necesario. Meter a la autoclave para su esterilizacin
(250F, 15 lb, 15 min). Pasado este periodo de esterilizacin, se sacan de la autoclave
y se dejan enfriar y se meten a refrigeracin o bien a una alacena limpia.
Resultados:
Pesado y calentado
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LaboratoriodeBiotecnologa
Esterilizado
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Vaciado
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LaboratoriodeBiotecnologa
Conclusiones:
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Referencias:
Krikoria, A. (1990). Medios de cultivo: generalidades, composicin y preparacin.
Universidad de Nueva York. New York, E.U. 1-19
Mroginski, A. (2008). Establecimiento de cultivos vegetales in vitro. Unidad de
investigacin de Biotecnologa. Cali, Colombia. 1-22
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15
LaboratoriodeBiotecnologa
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LaboratoriodeBiotecnologa
Resultados:
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Conclusiones:
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Referencias:
Serrano G.M, Biotecnologa vegetal, Madrid D.L
Pierik, R.L.M. Cultivo in vitro de plantas superiores, Madrid M.P
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Formol
Cutex
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LaboratoriodeBiotecnologa
Resultados:
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Conclusiones:
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Referencias:
Pierik, R.L.M. Cultivo in vitro de plantas superiores, Madrid M.P
Mroginski, A. (2008). Establecimiento de cultivos vegetales in vitro. Unidad de
investigacin de Biotecnologa. Cali, Colombia. 1-22
Agrios G.N. 1998. Fitopatologa, 3era Edicin, Mxico, 838 pp.
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Practica 5: Fermentaciones.
Objetivo:
El alumno entienda el concepto de fermentaciones, demostrar la formacin del acido
piruvico durante la fermentacin de la glucosa por levadura e identificarlo. .
Introduccin:
La fermentacin es un tipo de catabolismo parcial, que se caracteriza por ser un
proceso de oxidacin incompleta, tpico de los organismos anaerbicos. Se realiza,
pues, sin la intervencin del oxgeno. Durante la fermentacin, la energa obtenida
procede, igual que en la respiracin aerobia, de las reacciones de oxido-reduccin
habidas durante el catabolismo de la glucosa (gluclisis), pero en la fermentacin las
coenzimas reducidas no ceden sus electrones a una cadena cuyo aceptor final es el
oxgeno, sino que los ceden directamente a un compuesto orgnico que se reduce y es
el producto caracterstico de cada fermentacin (lctica, alcohlica...).
Materiales:
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tubos de centrifuga
Tripie, rejilla, anillo, mechero.
Bao mara.
Pipetas de 5 ml. graduadas.
Centrifuga.
Vasos de precipitados de 250 y 600 ml.
Pinzas para tubos de ensaye.
Solucin de glucosa a diversas concentraciones 0.5, 1.0, 2.0%
Suspensin de levadura al 5 % en Na2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de fermentacin antes
de su utilizacin).
cido tricloroactico al 10%
Nitroprusiato de sodio.
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LaboratoriodeBiotecnologa
2,4 dinitrofenil-hidracina.
Hidrxido de amonio concentrado.
Hidrxido de sodio 0.1N
Sulfato de amonio slido.
Nota: un da antes de la prctica llevar su levadura para fermentarla
Procedimiento:
Formacin de Piruvato:
Se deben marcar dos series de tubos de 3 cada una y adicionar 3 ml. de las soluciones
de glucosa a las diferentes concentraciones 0.5, 1.0, 2.0% a ambas series. A una de
las series de tubos adicionarles 3 ml. de suspensin de levadura con fosfatos de
sodio(0.213 g/100 ml) y marcarlos como A; y a la otra serie adicionarle 3 ml. de la
suspensin de levadura con fosfatos de potasio(0.09 g/100 ml) y marcarlos como B.
Posteriormente se colocar todos los tubos en bao mara a 37.C por 30 minutos y
aadir posteriormente a cada tubo 1 ml. de TCA al 10% mezclado vigorosamente y
centrifugar a 2500 r.p.m. por 10 minutos. Separar el sobrenadante y desechar el
precipitado.
Identificacin de Piruvato:
Reaccin con nitroprusiato de sodio
En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y hervirlo. Se le
adicionan 0.5 gr. de sulfato de amonio slido y agitar. Posteriormente agregar dos
gotas del reactivo y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por las paredes del tubo
unas gotas de hidrxido de amonio concentrado, hasta la formacin de dos capas. La
formacin de un anillo verde o azul en la interfase indica afirmativo para la prueba.
Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series.
Reaccin con 2,4 dinitrofenil-hidracina.En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y adicionar 1 ml. del
reactivo, agitar con fuerza y pasar a otro tubo la mitad de la mezcla formada, y
adicionar 1 ml. de NaOH 0.1N. La aparicin de un color rojo indica prueba afirmativa.
Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observar la coloracin
e intensidad de la misma en cada caso.
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LaboratoriodeBiotecnologa
Referencias:
Bamforth W. Charles. 2007. Alimentos, fermentacin y microorganismos. Editorial
Acribia S.A.
Owen P. 1991. Biotecnologia de la fermentacin Principios, procesos y productos.
Editorial Acribia.
Resultados:
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Conclusiones:
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LaboratoriodeBiotecnologa
Procedimiento:
Marcar tres tubos de ensayo y prepararlos de la siguiente manera:
Tubo A:
Llene una tercera parte del tubo con suspesin de levadura y luego agregue agua
destilada hasta llenarlo totalmente.
Tubo B:
Llene una tercera parte del tubo con suspensin de levadura y agrege solucion de
glucosa hasta llenarlo totalmente.
Tubo C:
Llene una tercera parte del tubo con suspensin de levadura, agregue otra tercera
parte con solucion de glucosa y termine de llenarlo con solucion de fluoruro de sodio
(NaF).
Tomar cada tubo y taparlo con un tapon de caucho (tenga cuidado que no quede muy
apretado), invertir suavemente para mezclar. No debe quedar aire en la parte superior
del tubo.
Conectar por medio de la manguera del tapon al tuvo en U que contiene la columna del
liquido a desplazar.
Colocar en bao maria a 37C. Si el procediemitno estubo bien hecho, solo quedara una
columna de aire en la parte superior de la manguera.
Medir la altura del liquido en el tubo en U al conectar.
Examinar los tubos de la siguiente manera (si es posible durante 6 lecturas).
Tubo A: cada tres minuos
Tubo B: cada minuto
Tubbo C: cada 15 minutos
Anotar los resultados en el cuadro
Hacer una grafica con los datos anteriores, coocando en la ordenada el tiempo en
minutos y en la abcisa la produccion de CO2 en mL. Hacer el analisis de la grafica
(anovas).
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LaboratoriodeBiotecnologa
Referencias:
CORN Y STUMPF, Bioqumica Fundamental, Editorial Limusa, 1998
DEVORE G. y Muoz Mena, Qumica Orgnica, Editorial Publicaciones Culturales,
Mxico 1992.
Resultados:
Tubo
A
B
C
Contenido
Levadura y agua
Levadura y glucosa
Levadura, glucosa y
NaF
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Realizar la grafica en papel milimetrico.
Cuestionario:
1. El ATP da el impulso iicial para inicial al glucolisis, fosforilando la glucosa. cul
es la reaccin?.
2. La fructosa 1-6 difosfato origina dos triosas que pueden convertirse una en otra.
cules son estas?
3. Estas triosas en ultimo termino se convierten en acido pirvico o piruvato.
Represente las reacciones respectivas en esta conversin.
4. Los dos productos de la glucolisis piruvato y NADH, se pueden metabolizar
siguiendo dos vas muy diferentes segn el tipo de clula en la cual se generan.
cules son estas dos vas?
5. Escriba la reaccin de la fermentacin del acido lctico. Y diga dos ejemplos de
clulas que la realizan.
6. Escriba la reaccin de la fermentacin alcohlica y diga dos ejemplos de clulas
que la realizan.
7. Escriba la reaccin general de la respiracin celular u oxidacin aerobia.
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LaboratoriodeBiotecnologa
Adecuadas
-------
1 Anillo de Fierro
1 Cuchillo
1 Coladera grande
1 Matraz de destilacin
1 Mechero Bunsen
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2 Pipetas graduadas de 5 ml
2 lts. De Agua
1 Pipeta graduada de 10 ml
1 Pinzas para tubo de ensayo
3 Pinzas universales
1 Pinzas Hoffman
1 Franela
1 Mortero con pistilo
1 Tela de alambre con asbesto
2 Tapones monohoradados
3 Tubos de ensayo de 16x150mm
1 Termmetro
1 Vaso de precipitado de 250 ml
45 cm de Manguera de ltex de 4mm de dimetro
1 Refrigerante
2 Soportes universales
1 Frasco claro con tapa, de 3 a 5 litros, de boca ancha.
1 Frasco claro sin tapa de 200 a 300 m
Procedimiento:
DESARROLLO DE LA PRACTICA
Nota. Esta prctica se llevara a cabo en 3 sesiones de laboratorio.
Primera Sesin
1. Lavar, pelar y hacer trocitos de 2.5 cm aproximadamente de la cscara y de la pulpa
de la pia.
2. Se comprime la pulpa de la pia hasta obtener un volumen aproximado de 200 ml
de jugo.
3. Lavar perfectamente 1 frasco claro de 3.5 lts. de boca ancha.
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LaboratoriodeBiotecnologa
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LaboratoriodeBiotecnologa
Referencias:
CORN Y STUMPF, Bioqumica Fundamental, Editorial Limusa, 1998
DEVORE G. y Muoz Mena, Qumica Orgnica, Editorial Publicaciones Culturales,
Mxico 1992.
Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 8: Fermentacion lctica
Objetivo:
Obtener el yogur por medio de la fermentacin lctica y observar las bacterias
causantes de dicha fermentacin..
Introduccin:
Las fermentaciones son procesos de respiracin anaerobia realizados por ciertas
bacterias y levaduras. En ellos, el aceptor de H+ y electrones cedidos por una molcula
orgnica no es el oxgeno sino otra molcula. Dependiendo de cul sea esta molcula
se obtendrn distintos productos finales. En el caso de la fermentacin lctica, la
molcula aceptora es el cido pirvico y el producto resultante es el cido lctico. Esta
fermentacin se emplea en la industria alimentaria para obtener derivados lcteos
como el yogur. El yogur es un producto producido por la fermentacin natural de la
leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4
% de una asociacin de dos cepas bacterianas. El Streptococcus thermophilus, poco
productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante.
En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas
distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas
arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30 ym de longitud) facilita la
observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio.
Materiales:
Microscopio
Portaobjetos
Asa de platino
Mechero Bunsen
Estufa de cultivo o cuarto de cultivo
Yogurtera
Matraz de 250 mL,
Pipeta de 5 mL,
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Varilla de vidrio
Papel indicador de pH
Xileno
Cristal violeta (o azul de metileno)
Frutos de hueso sanos y enfermos
Procedimiento 1: obtencin del yogur por la fermentacin lctica.
1. Se colocan 100 mL de leche en el matraz y aade 1 mL de yogur.
2. Se deja incubar el matraz en la estufa durante 24 horas a 37 C.
3. Saca el matraz y observa el contenido.
4. Mueve con la varilla para homogeneizarlo e introduce una tipa de papel indicador de
pH.
5. Describe lo observado en el matraz y en el papel indicador.
Para realizar este experimento tambin puedes utilizar un yogurtera domstica.
Procedimiento 2: Observacin de las bacterias causantes de la fermentacin.
1. Con el asa de siembra toma una gota de yogur y depostala sobre un portaobjetos
limpio. Aade una gota de xileno para desengrasar y mzclala con el yogur.
2. Extiende la mezcla y djala secar completamente. Luego pasa el portaobjetos por la
llama del mechero 4 o 5 veces para fijar la preparacin.
3. Aplica el colorante cristal violeta durante 2 minutos.
4. Lava despus con abundante agua destilada hasta que el lquido no salga teido y
deposita sobre ella un cubre cuidando que no se formen burbujas.
5. Observa al microscopio con el objetivo adecuado (utiliza los mayores aumentos)
6. Dibuja lo que has observado.
Referencias:
Murray, R. 1994. BIOQUIMICA DE HARPER. Manual Moreno S.A. de C.V
CORN Y STUMPF, Bioqumica Fundamental, Editorial Limusa, 1998
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Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 9. Analisis de tcnicas para deteccin de alimentos genticamente
modificados (practica documental)
Objetivo:
Conocer las diferentes tcnicas para determinar que un alimento ha sido modificado.
Introduccin:
El muestreo y la preparacin de la muestra son pasos cruciales en el proceso de
deteccin de OGM. La inspeccin de una muestra es menos costosa que la inspeccin
de todo un lote; sin embargo, el contenido de una muestra no siempre refleja el
contenido del lote de muestreo. El procedimiento de muestreo determina la
representatividad de un resultado mientras que la cantidad y calidad de los analitos
puede variar dependiendo de la preparacin de la muestra. Una muestra al azar es
aquella seleccionada en el proceso en la cual cada posible muestra de un lote de
muestreo tiene la misma posibilidad de ser seleccionada. Esto significa que una
muestra al azar produce un estimado imparcial de la medida de inters. En la prctica
una muestra al azar no es siempre fcil de obtener a partir de un lote de muestreo (Asif,
2004).
Material:
Revistas cientficas de alimentos
Revistas cientficas de Biotecnologa
Acceso a internet para accesar a las bases de datos
Procedimiento:
Leer y hacer ensayo de la importancia de realizar anlisis a los alimentos transgnicos,
y dar cuenta del bien o del mal que hacen no solo a la sociedad, sino tambin al
ecosistema.
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LaboratoriodeBiotecnologa
Referencias:
Asif M. 2004. Sampling for Detection of GMO. In: NIBGE-FAO Workshop on GMO
Detection. Capacity and Building in Biosafety of Genetically Modified Crops: GMOs
Detection.
Zafar Y. y Asif M. (ed). National Institute for Biotechnology and Genetic Engineering.
Pakistan.
Resultados:
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Conclusiones:
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Pipeta
Arena
Portaobjeto
Trozo de tela para filtrar
Colorante bsico
Procedimiento:
1. Triturar medio higado de pollo en un mortero. Aadir arena para que al triturar se
puedan romper las membranas de y queden los ncleos sueltos.
2. Aadir al triturado, 50 centmetros cbicos de agua. Remover hasta hacer una
especie de papilla.
3. Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper.
4. Medir el volumen del filtrado con una probeta.
5. Aadir al filtrado un volumen igual de cloruro sdico 2M. Con esto conseguimos
producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina.
6. A continuacin se aade 1 centmetro cbico de SDS. (Nota: Si no se dispone de
este producto puede sustituirse por un detergente de vajillas. La accin de este
detergente es formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN. As nos
quedar el ADN libre de las protenas que tiene asociadas.
7. Aadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hay que hacerlo de forma que el
alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase,
precipita el ADN.
8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin. Sobre la varilla
se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la
agrupacin de muchas fibras de ADN.
9. Esta prctica puede completarse con una tincin especfica de ADN.
Tenemos que tomar una muestra de las fibras que se van depositando sobre la varilla
de vidrio y depositarlas sobre un portaobjeto.
10. Teir durante unos minutos con un colorante bsico.
11. Observar al microscopio.
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LaboratoriodeBiotecnologa
Referencias:
Griffith. 2002. Genetica. Mc. Graw-Hill.
Carey, J., Bamshad M., Jorde L. 2010. Gentica medica. Elsevier Espaa S.A.
Resultados:
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Conclusiones:
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Procedimiento:
Preparar un eppendorf esteril por cada muestra al que se anaden 100 microlitros de
agua molecular estril
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Referencias:
Tagu D., Moussard C. 2006. Fundamentos de las tcnicas de biologa molecular.
Ediciones Pri.
Griffith. 2002. Genetica. Mc. Graw-Hill.
Resultados:
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Conclusiones:
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Una vez solidificado el gel se quitan los peines, sujetndolo con ambas manos y
jalando cuidadosamente hacia arriba.
Posteriormente se translada el soporte para el gel hasta la cmara de electroforesis,
colocando los pozos mas cercanos al borde hacia el polo negativo (de color negro)
debido a que las muestras migrarn hacia el nodo (de color rojo) durante la
electroforesis. Se agrega TBE hasta sumergir el gel unos 2 a 6 mm.
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Resultados:
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En un tubo de 0.5 ml, agregue las siguientes cantidades en el orden indicado (volumen
final de reaccin: 50 l):
1. Agua libre de ADNasas: 18.9 l
2. Muestra: 5 l (sobrenadante del lisado de colonias de Escherichia coli, muestras de
ADN obtenido en prcticas anteriores.).
3. Mezcla maestra (Fermentas buffer + primers): 27l
Con la ayuda de su instructor, programe el termociclador segn las condiciones
requeridas.
Cuando la reaccin haya finalizado, analice el producto obtenido mediante
electroforesis en un gel de agarosa al 2%.
Referencias:
Mathews, C.K, Van Holde, K.E y Ahern, K.G. Bioqumica. Pearson Educacin. Tercera
edicin, Espaa, 2003.
Tagu D., Moussard C. 2006. Fundamentos de las tcnicas de biologa molecular.
Ediciones Pri.
Griffith. 2002. Genetica. McGraw-Hill.
Resultados:
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Conclusiones:
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Procedimiento:
Describir y desarrollar la utilizacin del secuenciador para anlisis.
Describir y analizar la utilizacin del mismo en la actualidad.
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Referencias:
Tagu D., Moussard C. 2006. Fundamentos de las tcnicas de biologa molecular.
Ediciones Pri.
Griffith. 2002. Genetica. McGraw-Hill.
Resultados:
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Conclusiones:
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Cubeta de lavado
Micropipetas
Puntillas
Frasco lavador
Control positivo de albumina bovina
Control negativo de albumina ovina
Muestras m1, m2. M3
Procedimiento:
Tomar la caja de ELISA, aplicaar sobre cada pocillo una muestra de 2 microlitros de
muestra y de control positivo y negativo. Uno por cada divisin. Dejar secar de 5 a 10
min.
Durante ese tiempo se prepara la solucin de bloqueo. Para ello anadir 2.5 gr de
ovoalbmina en 100ml de tampn salino. Aguitar la mezcla hasta conseguir una
dilucin homognea 5%
Una vez pasado el tiempo de la solucin de los pocillos, introducir la solucin de
bloqueo y se deja durante 15 min.
Retirar la solucin de bloqueo y lavar la caja elisa con agua destilada.
Anador sobre cada punto 20 microlitos de anticuerpo anti-albumina bovina conjugando
con peroxidasa, e incubar durante 10 min a temperatura ambiente.
Lavar con agua destilada.
Anadir sobre cada pocillo 10 microlitros del sustrato cromgeno y dejar desarrollar el
color.
Referencias:
Tagu D., Moussard C. 2006. Fundamentos de las tcnicas de biologa molecular.
Ediciones Pri.
Griffith. 2002. Genetica. McGraw-Hill.
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Resultados:
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Conclusiones:
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Practica 16. Bioinformatica y Biotecnologa.
Objetivo:
Introducir las bases de datos accesibles a travs de Internet de importancia en el rea
biolgica. Comprender la utilidad de las mismas como herramientas de acceso a
informacin y programas de cmputo actualizados.
Introduccin:
En las ltimas dcadas, cientficos alrededor del mundo se han dedicado a obtener las
secuencias tanto protenas como de cidos nucleicos. Aunque en sus inicios estos
esfuerzos fueron aislados, poco a poco la cantidad de datos generada se hizo excesiva
para ser manejada por laboratorios aislados. Adems, con el advenimiento de nuevas
tecnologas de secuenciacin, se generaron proyectos conjuntos entre laboratorios
cuyo objetivo nico era la secuenciacin de un genoma en particular. Se hizo
entonces necesaria la organizacin de bancos de datos donde las secuencias
generadas pudieran ser depositadas. Desde el inicio, la comunidad cientfica estuvo de
acuerdo en que estos bancos de datos deberan tener acceso libre a nivel mundial.
Mucho antes de que el genoma humano se completara en el ao 2003,
(http://www.ornl.gov/sci/techresources/Human_Genome/home.shtml),
existan
ya
decenas de este tipo de bancos de datos. Actualmente, existen bancos de datos
definidos, sumamente extensos de los cuales se derivan secciones donde se puede
tener acceso a informacin ms especfica.
Materiales:
Acceso a internet
Acceso a las bases de datos geneticos
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LaboratoriodeBiotecnologa
Procedimiento:
Se visitarn diferentes sitios en Internet y su instructor le indicar las principales
caractersticas de los mismos. Dependiendo del tiempo y el acceso a Internet, se
revisarn los siguientes sitios:
Descripcin
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fundamental methods. 3rd edition, Freeman and Company, New York 1999 Romero
C.S. 1968. Hongos fitopatogenos. Universidad Autnoma de Chapingo. 345 pp.
Conclusiones:
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Practica 17. Fundamentos de la Biorremediacion (documental)
Objetivo:
Que el estudiante comprenda las bases teoricas y practicas de la Biorremediacion.
Que el estudiante explore las posibilidades de la biorremediacion, que se familiarize
con los aspectos quimicos y bioquimicos y que escriba y ejecute en manera de las
posibilidades una propuesta basica de biorremedicaion de suelo y agua.
Introduccin:
La biorremediacin es el uso de seres vivos para restaurar ambientes contaminados.
Es un concepto que no se debe de confundir con depuracin. La depuracin es la
eliminacin, ya sea por mtodos fsico/qumicos o biolgicos, de un contaminante antes
de que ste alcance el medio ambiente. Cuando la contaminacin ya se ha producido,
se precisa restaurar el ecosistema contaminado, para lo que se pueden utilizar diversas
estrategias. Una de ellas es la biorremediacin. Se pueden emplear diversos
organismos en los procesos de biorremediacin. Los ms usados son los
microorganismos (tanto bacterias, como algas y hongos) y las plantas (en procesos
llamados fitorremediacin), pero tambin se pueden utilizar otros seres vivos tales
como los nemtodos (vermiremediacin). Entre los microorganismos destacan
especialmente las bacterias, los seres vivos con mayor capacidad metablica del
planeta. Las bacterias pueden degradar prcticamente cualquier sustancia orgnica. Si
la sustancia se degrada completamente se habla de mineralizacin; este es el proceso
ideal, pero no siempre ocurre. Algunas sustancias no son degradadas sino
transformadas en otras (biotransformacin). La biotransformacin puede ser peligrosa,
ya que la nueva sustancia formada puede ser tan nociva o ms que la de partida.
Finalmente hay sustancias que no son degradadas y se las denomina recalcitrantes.
stas se acumulan durante mucho en el medio ambiente, especialmente si adems son
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Resultados:
Ensayos de los articulos.
Proyecto escrito.
Presentacion del proyecto.
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Conclusiones:
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Materiales:
Arituclos cientificos acerca dela Biorremediacion.
Acceso a las bases de datos.
Acceso a internet.
Trabajo en equipo.
Procedimiento:
La practica se llevara a cabo en equipo de 3 personas, las cuales se organizaran para
la busqueda de informacion y genracion de un miniproyecto.
Se utilizara el uso de las bases de datos donde los estudiantes elegiran 4-5 articulos
deacuerdo al tema (sin repetir).
Se discutiran los articulos en clase y posteriormente realizaran el proyecto escrito y una
presentacion.
Referencias:
Garca H D, Sosa A, CR y SnchezYez, 2007. Biorremediacin de agua domestica
contaminada con aceite residual automotriz. Revista Ingeniera Hidrulica de Mxico.
17:208219
SnchezYaez, JM et al., 2008. Biorremediacin (Antologa). Secretara de Difusin
Cultural y Extensin Universitaria. Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo,
Centro de Investigacin y Desarrollo del Estado de Michoacan, Bionutra, SA de CV.
Morelia, Mich, Mxico. ISBN:9789709542424.
Resultados:
Ensayos de los articulos.
Proyecto escrito.
Presentacion del proyecto.
Conclusiones:
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Probeta
Mechero bunsen
Aceite nuevo de girasol
Hidroxido de sodio
Metanol
Agua destilada
Procedimiento:
1. medimos el numero de litros de aceite con los cuales queremos experimentar
(en este caso 1 litro).
2. Vertimos el aceite vegetal en el vaso de precipitados donde preparamos la
mezcla.
3. Si la temperatura es inferior a 21C o si el aceite vegetal se encentra en estado
solido o espeso, ser necesario calentar los reactivos antes de mezclarlos.
4. Introducimos con mucho cuidado 3.5g de sosa caustica y 0.2 litros de metanol
dentro de un vaso de precipitados.
5. Removemos la mezcla hasta que la sosa haya disuelto en el metanol (se
produce metoxido sdico)
6. Vertimos seguidamente el metoxido de sodio dentro del aceite vegetal.
7. Mezclamos el conjunto de forma vigorosa durante una hora, mantenindolo a
una temperatura constante de aproximadamente unos 4-50C. Para esto lo
colocamos sobre el bunsen siempre controlando la temperatura con un
termmetro.
8. Dejamos que la mezcla repose durante 12 horas.
9. Separamos las dos capas con ayuda de un embudo de decantacin.
10. Dejamos que la glicerina, que aparece como capa oscura y espesa en la parte
inferior del recipiente, se deposite en el fondo durante una semana. Pasado este
tiempo se habr evaporado el resto de metanol y se obtendr un jabon de
gliceria.
11. Luego procedemos al lavado del biodiesel para eliminar cualquier resto de
glicerina u otras impurezas. Aadimos agua y agitamos, dejamos que esta se
asiente en el fondo y desaguamos.
12. Medimos el pH y repetimos el proceso hasta que el pH sea de 6-7.
13. Al final se ha de calentar lentamente para evaporar restos de agua.
Referencias:
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Resultados:
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Practica 20. Anlisis de contaminacin de Agua
Objetivo:
Que el estudiante comprenda el concepto microbiologico de indicador de
contaminacion.
Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua o alimentos mediante el recuento de
mesofilos aerobios y la busqueda de microorganismos coliformes totales, coliformes
fecales y E. Coli
Aplicar tecnicas de cuantificacion de microorganismos totales y comparar con las
tecnicas de determinacion de viables.
Introduccin:
La determinacin de la calidad bacteriolgica reviste gran importancia en el mbito de
la salud pblica ya que permite garantizar la inocuidad del agua destinada al consumo
evitando as epidemias gastrointestinales. El agua destinada al consumo humano
puede ser contaminada por las agua residuales o por desechos humanos y animales
que pueden contener microorganismos patgenos (principalmente intestinales) como
son los causantes de la tifoidea (Salmonella typhi), la disentera (Shigella dysenterieae)
o el clera (Vibrio cholerae) entre otros).
Sin embargo, la deteccin de microorganismos patgenos es poco prctica por las
siguientes razones:
a) No siempre estn presentes en la fuente de contaminacin (material fecal), pero
pueden aparecer repentinamente
b) Al diluirse en el agua, pueden quedar en concentraciones no detectables por los
mtodos de laboratorio
c) Sobreviven relativamente poco tiempo en el agua, por lo que pueden desaparecer
antes de ser detectados
d) Los resultados del anlisis bacteriolgico del agua se obtienen despus que sta ha
sido consumida por lo cual si hay patgenos, la poblacin habr estado expuesta a la
infeccin.
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Materiales:
Agua almacenada
Material por equipo
Frasco de boca ancha con tapn esmerilado
Papel Kraft
1 pipeta de 1mL
Solucin de tiosulfato de sodio 10%
Etanol
Algodn
Hielo raspado (sin sabor)
Bolsa de plstico con cierre (ziploc)
1 pipeta de 1mL
Solucin de tiosulfato de sodio 10%
Material por equipo para el anlisis
2 mecheros
Tripi y tela de asbesto
Gradilla
Equipo Millipore estril
Accesorios de equipo Millipore
1 matraz de 250mL con 150mL de Agar Cuenta Estndar.
5 tubos con 10.0mL de caldo lauril sulfato de sodio (CLSS) triple concentracin (3X)
1 caja con Agar Bilis Rojo Violeta
3 tubos con 9mL de solucin salina estril
Pipetas serolgicas de 10, 5 y 1mL estriles
10 cajas petri estriles de vidrio o plstico estriles
Agua de sabor (10mL)
Hielo raspado (600mL)
Procedimiento 1:
a) Preparacin de los frascos
1. Lavar perfectamente el frasco, eliminando todo resto de jabn o detergente
2. Agregar 0.1mL de tiosulfato de sodio al 10% (0.5mL para frascos de 500mL)
3. Colocar una tira de papel kraft de 1 x 5cm entre tapn y cuello (frascos refractarios
con tapn esmerilado)
4. Cubrir el tapn y el cuello del frasco con papel kraftin
5. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
b) Toma de la muestra
1. Lavarse las manos y desinfectarlas con etanol al 70%
2. Para grifos lo primero es desinfectar el grifo con algodn y etanol y dejar correr el
agua por 3 minutos.
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LaboratoriodeBiotecnologa
Procedimiento 2:
a) Toma de la muestra
1. Comprar con un da de anterioridad 3 vasos de hielo raspado (1.5L) o granizado de los
carritos y colocarlo en la bolsa plstica.
2. Cerrar inmediatamente y refrigerar (no congelar).
3. Llevar las muestras al laboratorio lo ms pronto posible, para analizarlas antes de que
transcurran 2 horas, o 5 horas si se transportan en hielo.
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Resultados:
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