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UNIVERSIDAD LATINA DE PANAMÁ FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD Dr. WILLIAM C. GORGAS LICENCIATURA
UNIVERSIDAD LATINA
DE PANAMÁ
FACULTAD DE
CIENCIAS DE LA
SALUD Dr. WILLIAM C.
GORGAS
LICENCIATURA EN
TECNOLOGÍA MÉDICA
PRESENTADO POR:
CINDY IBAÑEZ
YUZEYMA MANZANÉ
ORLANDO SÁNCHEZ
JAISON LOMBARDO
LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10
ACCIÓN ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10

INTRODUCCIÓN OBJETIVOS MARCO TEÓRICO PROCEDIMIENTO DISCUSIÓN CUESTINARIO GLOSARIO CONCLUSIÓN BIBLIOGRAFÍA

INDICE GENERAL

LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10

INTRODUCCIÓN

Las enzimas constituyen la clase de proteínas más amplia y más altamente especializada. Catalizan los millares de reacciones químicas que, colectivamente, constituyen los intermediarios de las células.

La actividad de las enzimas fue reconocida en estudios iniciales de la digestión en el estómago durante el periodo de1780 y 1825. La primera enzima aislada fue en forma cristalina pura fue la ureasa, obtenida de los extractos de Cannavalia enzyformis, por J.B. Summer en 1926, quien demostró que los cristales se encontraban compuestos por proteína, llegando a sugerir que todas las enzimas eran proteínas. Sus puntos de vista no fueron aceptados inmediatamente, sin embargo y no fue hasta el periodo de 1930, durante el cual J. Northrop aisló las enzimas digestivas pepsina, tripsina y quimotripsina en forma cristalina, cuando quedo firmemente establecida la naturaleza proteica de las enzimas.

Las enzimas son catalizadores específicos. Muy a menudo, los grupos funcionales de la enzima son complementados con cofactores. Hay diversos factores químicos que pueden justificar las altas velocidades alcanzadas por las enzimas en las condiciones de pH y temperatura propias de las células. La complementariedad de la enzima con la geometría del estado de transición de la reacción es la causa más notable de su poder catalítico.

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OBJETIVOS

Comprobar la reacción sobre el peróxido de hidrógeno por acción de la enzima catalasa, presente en tejidos animales y vegetales determinando los productos de reacción.

Estudiar algunos factores que afectan la actividad enzimática, como la temperatura, el pH, la concentración del sustrato y de la enzima y la presencia de inhibidores.

Confrontar los conocimientos teóricos adquiridos en clases con las actividades experimentales en el laboratorio

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MATERIALES tubos de ensayo 15 x 125 mm.

BIOLOGÍA # 10 MATERIALES • tubos de ensayo 15 x 125 mm. •Toallas de papel, papel

•Toallas de papel, papel absorbente

# 10 MATERIALES • tubos de ensayo 15 x 125 mm. •Toallas de papel, papel absorbente

•Guantes de látex.

# 10 MATERIALES • tubos de ensayo 15 x 125 mm. •Toallas de papel, papel absorbente

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•Dispositivo para baño maría.

DE BIOLOGÍA # 10 •Dispositivo para baño maría. •Pinzas para tubo de ensayo. MATERIAL BIOLÓGICO:

•Pinzas para tubo de ensayo.

para baño maría. •Pinzas para tubo de ensayo. MATERIAL BIOLÓGICO: •Diversos tejidos de origen animal

MATERIAL BIOLÓGICO:

•Diversos tejidos de origen animal como: hígado de res y de pollo, sesos de res, músculo, y tejidos vegetales como: hojas y raíces, espinacas, etc.

hígado de res y de pollo, sesos de res, músculo, y tejidos vegetales como: hojas y

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 REACTIVOS: •Solución de peróxido de hidrógeno al 3%. pág. 6
LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 REACTIVOS: •Solución de peróxido de hidrógeno al 3%. pág. 6
LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 REACTIVOS: •Solución de peróxido de hidrógeno al 3%. pág. 6

REACTIVOS:

•Solución de peróxido de hidrógeno al 3%.

LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 REACTIVOS: •Solución de peróxido de hidrógeno al 3%. pág. 6

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PROCEDIMIENTO

1. Se harán cortes de varios tejidos animales y vegetales debiendo anotar cuidadosamente su origen, evitando tocarlos con las manos porque se pueden contaminar con las sustancias de la piel del experimentador.

contaminar con las sustancias de la piel del experimentador. 2. Con las pinzas de disección toma

2. Con las pinzas de disección toma un fragmento de 1 cm aproximadamente de cada uno de los tejidos y colócalos en un pedazo de papel absorbente cuidando que los tejidos no se toquen entre sí. Márcalos para su identificación.

pedazo de papel absorbente cuidando que los tejidos no se toquen entre sí. Márcalos para su

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3. En otro pedazo de papel toma cortes de tejidos iguales a los primeros, pero que

hayan sido hervidos previamente. Manéjalos también con las pinzas.

hervidos previamente. Manéjalos también con las pinzas. 4. En dos tubos de ensayo limpios, coloca 5

4. En dos tubos de ensayo limpios, coloca 5 ml de solución de peróxido de hidrógeno

al 3%. Toma una porción de uno de los tejidos hervidos y otro del mismo sin hervir

y colócalos en tubos de ensayo que contengan el peróxido.

mismo sin hervir y colócalos en tubos de ensayo que contengan el peróxido. 5. Observa y

5. Observa y anota los resultados.

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 6. Tomar otro par de tubos y agrégales 5 ml de
LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 6. Tomar otro par de tubos y agrégales 5 ml de
LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 6. Tomar otro par de tubos y agrégales 5 ml de

6. Tomar otro par de tubos y agrégales 5 ml de peróxido de hidrógeno al 3% en cada uno.

10. Se recomienda que los tubos se sujeten con las pinzas para tubo de ensayo, para evitar la transferencia de calor y por lo tanto la activación del peróxido de hidrogeno.

tubo de ensayo, para evitar la transferencia de calor y por lo tanto la activación del

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11. Armar el calorímetro como lo muestra la figura y colocar en el 10 ml de peróxido

de hidrógeno al 3% en la cámara de reacción, moja el bulbo del termómetro y pásalo a través del tapón horadado, el bulbo del termómetro debe tocar el líquido.

12. Anota la temperatura inicial. Una vez que se ha determinado la temperatura

inicial del peróxido de hidrógeno, en el calorímetro, introduce dos gotas de extracto de hígado. Inserta el tapón en su lugar sin que quede apretado, para permitir el escape de cualquier gas que se genere.

para permitir el escape de cualquier gas que se genere. 13. Anota los cambios de temperatura

13. Anota los cambios de temperatura de la cámara de reacción cada 30 segundos,

hasta un periodo de 5 minutos y repite este procedimiento dos veces más con peróxido de hidrógeno fresco y más extracto de hígado.

minutos y repite este procedimiento dos veces más con peróxido de hidrógeno fresco y más extracto

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14. Calcula el promedio de las mediciones de temperatura para cada intervalo de 30 segundos anotando los resultados. Posteriormente realiza una gráfica con los resultados, en el eje de las “x” tiempo en segundos y en el eje de las “Y” temperatura en °C.

con los resultados, en el eje de las “x” tiempo en segundos y en el eje

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MARCO TEORICO

LAS ENZIMAS SON CATALIZADORES EFICACES Y MUY ESPECÍFICOS Las enzimas que catalizan la conversión de uno o más compuestos (sustratos) hacia uno o más compuestos diferentes (productos) aumentan los índices de la reacción no catalizada correspondiente por factores de al menos 106. Al igual que todos los catalizadores, las enzimas no se consumen ni se alteran de manera permanente como consecuencia de su participación en una reacción. Además de ser muy eficientes, las enzimas también son catalizadores en extremo selectivos. Al contrario de casi todos los catalizadores usados en química sintética, las enzimas son específicas tanto para el tipo de reacción catalizada como para un sustrato único o un pequeño conjunto de sustratos estrechamente relacionados. Las enzimas también son catalizadores estereoespecíficos y de manera típica catalizan reacciones de sólo un estereoisómero de un compuesto dado (p. ej., azúcares D, mas no L; aminoácidos de L pero no D). Dado que se unen a sustratos por medio de al menos “tres puntos de fijación”, las enzimas incluso pueden convertir sus­ tratos no quirales en productos quirales.

LAS ENZIMAS SE CLASIFICAN POR EL TIPO DE REACCIÓN Los nombres de uso frecuente para casi todas las enzimas describen el tipo de reacción catalizada, seguido por el sufijo -asa. Así, por ejemplo, las deshidrogenasas eliminan átomos de hidrógeno, las proteasas hidrolizan proteínas y las isomerasas catalizan reordenamientos de la configuración. Los modificadores pueden preceder o seguir al nombre para indicar el sustrato (xantina oxidasa), la fuente de la enzima (ribonucleasa pancreática), su regulación (lipasa sensible a hormona) o una característica de su mecanismo de acción (cisteína proteasa). Cuando es necesario, se añaden designaciones alfanuméricas para identificar múltiples formas de una enzima. A fin de resolver estas dificultades, la International Union of Biochemists (IUB) creó un sistema de nomenclatura de enzimas sin ambigüedad en el cual cada enzima tiene un nombre y número de código singular que identifican el tipo de reacción catalizada y los sustratos comprendidos; así, las enzimas se agrupan en seis clases:

1. Oxidorreductasas (catalizan oxidaciones y reducciones).

2. Transferasas (catalizan la transferencia de porciones, como grupos glucosilo,

metilo o fosforilo).

3. Hidrolasas (catalizan la división hidrolítica de CC, CO, CN y otros enlaces).

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4. Liasas (catalizan la división de CC, CO, CN y otros enlaces mediante eliminación de átomo, dejando dobles enlaces).

5. Isomerasas (catalizan cambios geométricos o estructurales dentro de una molécula).

6. Ligasas (catalizan la unión de dos moléculas acopladas a la hidrólisis de ATP). A pesar de la claridad del sistema de la IUB, los nombres son largos y hasta cierto punto engorrosos, de modo que en general se sigue haciendo referencia a las enzimas por su nombre tradicional, aunque a veces ambiguo. La designación de la IUB para la hexocinasa ilustra tanto la claridad de su sistema como sus complejidades: el nombre que la IUB da a la hexocinasa es ATP:D-hexosa 6-fosfotransferasa; el cual identifica a la hexocinasa como un miembro de la clase 2 (transferasas), subclase 7 (transferencia de un grupo fosforilo), subclase 1 (el alcohol es el aceptor del fosforilo), y “hexosa­6” indica que el alcohol fosforilado está en el carbono seis de una hexosa. Sin embargo, se le sigue llamando hexocinasa.

LOS GRUPOS PROSTÉTICOS, LOS COFACTORES Y LAS COENZIMAS TIENEN FUNCIONES IMPORTANTES EN LA CATÁLISIS Muchas enzimas contienen pequeñas moléculas no proteínicas y iones metálicos que participan de manera directa en la unión de sustrato o catálisis. Denominados grupos prostéticos, cofactores y coenzimas, éstos extienden el repertorio de capacidades catalíticas más allá de las proporcionadas por el número limitado de grupos funcionales presentes en las cadenas laterales aminoacilo de péptidos.

Los grupos prostéticos están estrechamente integrados en la estructura de una enzima Los grupos prostéticos se distinguen por su incorporación estrecha y estable hacia la estructura de una proteína mediante fuerzas covalentes o no covalentes. Los ejemplos son fosfato de piridoxal, flavina mononucleótido (FMN), flavina adenina dinucleótido (FAD), pirofosfato de tiamina, biotina y los iones metálicos de Co, Cu, Mg, Mn y Zn. Los metales son los grupos prostéticos más comunes. Cerca de un

y los iones metálicos de Co, Cu, Mg, Mn y Zn. Los metales son los grupos

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tercio de todas las enzimas que contienen iones metálicos unidos de manera estrecha se llama metaloenzimas. Los iones metálicos que participan en reacciones redox por lo general forman complejos con grupos prostéticos como el hem o agrupaciones de hierroazufre. Los metales también pueden facilitar la unión y orientación de sustratos, la formación de enlaces covalentes con intermediarios de reacción (CO2+ en la coenzima B12), o interactuar con sustratos para hacerlos más electrofílicos (con pocos electrones) o nucleofílicos (ricos en electrones).

Los cofactores se asocian de manera reversible con enzimas o sustratos Los cofactores desempeñan funciones similares a las de grupos prostéticos, pero se unen de una manera transitoria y disociable a la enzima o a un sustrato como ATP. Por ende, al contrario de los grupos prostéticos asociados de manera estable, para que ocurra catálisis debe haber cofactores en el medio que rodea a la enzima. Los cofactores más comunes también son iones metálicos. Las enzimas que requieren un cofactor ion metálico se llaman enzimas activa- das por metal para distinguirlas de las metaloenzimas para las cuales los iones metálicos sirven como grupos prostéticos.

Las coenzimas sirven como transbordadores de sustrato Las coenzimas sirven como transbordadores o agentes de transferencia de gruporeciclables, que transportan muchos sustratos desde su punto de generación hacia su punto de utilización. La asociación con la coenzima también estabiliza sustratos como átomos de hidrógeno o iones hidrido que son inestables en el ambiente acuoso de la célula. Otras porciones químicas transportadas por coenzimas son grupos metilo (folatos), grupos acilo (coenzima A) y oligosacáridos (dolicol).

Muchas coenzimas, cofactores y grupos prostéticos son derivados de vitamina B Las vitaminas B hidrosolubles proporcionan componentes importantes de muchas coenzimas. Varias coenzimas contienen, además, las porciones adenina, ribosa y fosforilo de monofosfato de adenosina (AMP) o difosfato de adenosina (ADP).

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LA CATÁLISIS OCURRE EN EL SITIO ACTIVO Una importante información de principios del siglo xx acerca de la catálisis enzimática provino de la observación de que la presencia de sustratos hace a las enzimas más resistentes a los efectos desnaturalizantes de las temperaturas altas. Dicha observación llevó a Emil Fischer a proponer que las enzimas y sus sustratos interactúan para formar un complejo de enzima-sustrato (ES) cuya estabilidad térmica fue mayor que la de la enzima en sí. Este conocimiento impactó de manera profunda sobre la comprensión tanto de la naturaleza química como de la conducta cinética de la catálisis enzimática. Fischer razonó que la especificidad en extremo alta con la cual las enzimas reconocen sus sustratos cuando forman un complejo ES era análoga a la manera en la cual una cerradura mecánica distingue la llave apropiada. Esta “cerradura” enzimática recibe el nombre de sitio activo. En casi todas las enzimas dicho sitio adopta la forma de una hendidura o bolsa sobre la superficie de la enzima o, para algunas enzimas multiméricas, en la interfaz entre subunidades. Como su nombre lo indica, el sitio activo es mucho más que tan sólo un sitio de reconocimiento para sustratos que se unen. Proporciona un ambiente tridimensional que protege a los sustratos contra solvente y facilita la catálisis. También se une a cualesquiera cofactores y grupos prostéticos que la catálisis pudiera requerir. Dentro del sitio activo, las moléculas de sustrato están alineadas en estrecha proximidad y en orientación óptima a los grupos funcionales de residuos peptidilo aminoacilo, cofactores y grupos prostéticos que se encargan de catalizar su transformación química hacia productos

cofactores y grupos prostéticos que se encargan de catalizar su transformación química hacia productos pág. 15
cofactores y grupos prostéticos que se encargan de catalizar su transformación química hacia productos pág. 15

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LAS ENZIMAS EMPLEAN MÚLTIPLES MECANISMOS PARA FACILITAR LA CATÁLISIS Las enzimas usan diversas combinaciones de cuatro mecanismos generales para lograr notorio aumento catalítico de los índices de reacciones químicas.

Catálisis por proximidad: Para que las moléculas reaccionen, deben acercarse hasta ubicarse dentro de la distancia formadora de enlace de otra. Mientras más alta sea su concentración, con mayor frecuencia se encontrarán una con otra y mayor será el índice de su reacción. Cuando una enzima se une a moléculas de sustrato en su sitio activo, crea una región de concentración local alta de sustrato. Este ambiente también orienta las moléculas de sustrato de manera espacial en una posición ideal para que interactúen, lo que origina aumentos del índice de al me- nos mil veces.

Catálisis acidobásica: Los grupos funcionales ionizables de cadenas laterales aminoacilo y (cuando están presentes) de grupos prostéticos, contribuyen a la catálisis al interactuar como ácidos o bases. La catálisis acidobásica puede ser específica o general; por “específica” se alude a protones (H3O+) o iones OH. En la catálisis específica para ácido o específica para base, el índice de reacción es sensible a cambios de la concentración de protones, pero independiente de las concentraciones de otros ácidos (donadores de protón) o bases (aceptores de protón) presentes en solución o en el sitio activo. Se dice que las reacciones cuyos índices muestran capacidad de respuesta a todos los ácidos o bases presentes, están sujetas a catálisis por ácido general o por base general.

Catálisis por tensión: Las enzimas que catalizan reacciones -líticas que comprenden la ro- tura de un enlace covalente típicamente se unen a sus sustratos en una conformación muy desfavorable para el enlace que sufrirá la división. Tal conformación imita la del intermediario de estado de transición, especie transitoria que representa la transición o el pun- to medio en la transformación de sustratos en productos. La tensión resultante estira o deforma el enlace al cual se dirige, esto lo debilita y lo hace más vulnerable a división. Linus Pauling, laureado con el premio Nobel, fue el primero en sugerir una función para la estabilización de estado de transición como un mecanismo general mediante el cual las enzimas aceleran los índices de reacciones químicas. Los químicos a menudo aprovechan el conocimiento del estado de transición de una reacción catalizada por enzima para

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LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10 diseñar y crear inhibidores de enzima más eficaces, llamados análogos de

diseñar y crear inhibidores de enzima más eficaces, llamados análogos de estado de transición, como farmacóforos potenciales.

Catálisis covalente El proceso de catálisis covalente comprende la formación de un enlace covalente entre la enzima y uno o más sustratos. La enzima modificada después se convierte en un reactivo. La catálisis covalente introduce una nueva vía de reacción cuya energía de activación es más baja y, por ende, es más rápidaque la vía de reacción en solución homogénea. Sin embargo, la modificación química de la enzima es transitoria; en el momento en que se completa la reacción, la enzima vuelve a su estado no modificado original. De este modo, su función permanece catalítica. La catálisis covalente se observa con particular frecuencia entre enzimas que catalizan reacciones de transferencia de grupo. Los residuos sobre la enzima que participa en la catálisis covalente por lo general son cisteína o serina y, en ocasiones, histidina. La catálisis covalente a menudo sigue un mecanismo de ping-pong: uno en donde el primer sustrato es unido y su producto se libera antes de la unión del segundo sustrato

LOS SUSTRATOS INDUCEN CAMBIOS CONFORMACIONALES EN ENZIMAS Si bien el “modelo de cerradura y llave” de Fischer permitió comprender la especificidad extrema de interacciones entre enzima y sustrato, la rigidez implícita del sitio activo de la enzima no explicó los cambios dinámicos que acompañan a la catálisis. Esta desventaja fue abordada por el modelo de adaptación inducida de Daniel Koshland, que declara que cuando los sustratos se aproximan y se unen a una enzima, inducen un cambio conformacional, una modificación análoga a colocar una mano (sustrato) dentro de un guante (enzima). Un corolario es que la enzima induce cambios recíprocos en sus sustratos y aprovecha la energía de unión para facilitar la transformación de sustratos en productos. El modelo de adaptación inducida se ha confirmado de manera amplia por medio de estudios biofísicos de movimiento de enzimas durante unión a sustrato.

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EL ANÁLISIS DE CIERTAS ENZIMAS AYUDA AL DIAGNÓSTICO El análisis de enzimas en el plasma sanguíneo ha desempeñado una función fundamental en el diagnóstico de varios procesos morbosos. Muchas enzimas son constituyentes funcionales de la sangre; entre algunos ejemplos están seudocolinesterasa, lipoproteína lipasa, así como componentes de la cascada de eventos en la coagulación de la sangre y la disolución de coágulo. Otras enzimas se liberan hacia el plasma después de muerte o lesión celular; si bien estas últimas no desempeñan una función fisiológica en el plasma, su aparición o sus concentraciones son de utilidad en el diagnóstico y el pronóstico de enfermedades y lesiones que afectan tejidos específicos. Después de lesión, la concentración plasmática de una enzima liberada puede aumentar en etapas tempranas o tardías, y declinar de manera rápida o con lentitud. Las proteínas del citoplasma tienden a aparecer con mayor rapidez que las de organelos subcelulares. La rapidez con la cual las enzimas y otras proteínas son eliminadas del plasma varía con su susceptibilidad a proteólisis y permeabilidad a través de los glomérulos renales. El análisis cuantitativo de la actividad de las enzimas o de otras proteínas liberadas por lo general en plasma o suero, aunque también en orina o en diversas célulasproporciona información respecto del diagnóstico, el pronóstico y la respuesta al tratamiento. En el análisis de la actividad enzimática de manera característica se emplean valoraciones cinéticas estándar de índices de reacción inicial. De manera alternativa, las radioinmunovaloraciones (RIA) proporcionan cuantificación de la cantidad absoluta de una enzima o de proteína no catalítica. Las enzimas ayudan al diagnóstico de infarto de miocardio (MI) Una enzima útil para enzimología diagnóstica debe ser hasta cierto punto específica para el tejido u órgano bajo estudio, aparecer en el plasma u otro líquido en un momento útil para el diagnóstico (la “ventana diagnóstica”) y prestarse a la valoración automatizada. Las enzimas que se utilizan para confirmar un MI ilustran el concepto de una “ventana diagnóstica” y proporcionan una perspectiva histórica sobre el uso de diferentes enzimas para este propósito. La detección de una enzima debe ser posible en el transcurso de algunas horas, luego de un MI para confirmar un diagnóstico preliminar y permitir el inicio de terapia apropiada. De este modo, las enzimas que sólo aparecen en el plasma 12 h o más después de lesión, tienen utilidad limitada. Las primeras enzimas usadas para diagnosticar MI fueron la aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT) y lactato deshidrogenasa (LDH). Sin embargo, la AST y la ALT resultaron no ser las idóneas, puesto que aparecen en el plasma con relativa lentitud y no son específicas para el músculo cardiaco.

Hoy, en casi todos los laboratorios clínicos para el diagnóstico de MI, la CK se ha complementado mediante la troponina. Sin embargo, dado que la CK-MB también se libera en el momento de lesión de músculo estriado, la valoración de las

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concentraciones plasmáticas de CK aún se usa para evaluar trastornos del músculo estriado, como distrofia muscular de Duchenne. La troponina es un complejo de tres proteínas comprendidas en la contracción muscular en los músculos estriado y cardiaco, no así en el músculo liso. La medición inmunológica de las concentraciones plasmáticas de troponinas cardiacas I y T proporciona indicadores sensibles y específicos de daño del músculo cardiaco. Las concentraciones de troponina aumentan 2 a 6 h después de un MI y permanecen elevadas durante 4 a 10 días. Además del MI, otro tipo de daño del músculo cardiaco también aumenta las concentraciones séricas de troponina. Así que las troponinas cardiacas sirven como un marcador de todo el daño del músculo cardiaco. La búsqueda de marcadores adicionales para enfermedad cardiaca como albúmina modificada por isquemia y la evaluación simultánea de un espectro de marcadores diagnósticos por medio de proteómicaaún es un área activa de investigación clínica. También es factible emplear enzimas en el laboratorio clínico como herramientas para determinar la concentración de metabolitos críticos; por ejemplo, la glucosa oxidasa suele utilizarse para medir la concentración plasmática de glucosa. Cada vez con mayor frecuencia se emplean enzimas como recursos para el tratamiento de lesión y enfermedad. El activador del plasminógeno hístico (tPA) o la estreptocinasa se usan en el tratamiento de MI agudo, mientras que la tripsina ha sido utilizada en el tratamiento de fibrosis quística.

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GLOSARIO

ACTIVIDAD ESPECIFICA: Número de unidades de enzima por miligramo de proteína. Medida de la pureza de la enzima y llega a ser máxima y se mantiene constante cuando la enzima se halla en estado puro.

APOENZIMA: Proteína parte del sistema enzimático responsable de sus especificidad

CENTRO ACTIVO: región tridimensional a la que se une el sustrato, y los cofactores, si participan, formada por una composición de grupos funcionales que determinan la afinidad, la especificidad y la capacidad de transformación química del sustrato por la enzima.

CENTRO ALOSTERICO: Es el centro de unión para el modulador y es altamente específico para el mencionado metabolito.

COCIENTE Kcat/ Km: Equivale a una constante cinética aparente de segundo orden para la reacción entre la enzima libre y el sustrato libre. También denominada constante de especificidad, permite comparar el grado discriminación de una enzima por sustratos diferentes que pueden competir.

de una enzima por sustratos diferentes que pueden competir.  COENZIMA: Molécula orgánica compleja localizada en

COENZIMA: Molécula orgánica compleja localizada en la enzima que se necesita para comenzar la actividad. Cofactor orgánico requerido para la actividad de ciertas enzimas y que, con frecuencia contiene una vitamina como elemento estructural.

COFACTOR: Sustancia inorgánica u orgánica de bajo peso molecular, cuya presencia es necesaria para actividad de una enzima, pero no sufre una alteración permanente en la reacción. La mayor parte de las coenzimas derivan metabólicamente de las vitaminas. Puede ser un metal como Mg, Mn, Zn o Fe. Estable frente al calor.

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COMPLEMENTARIEDAD GEOMETRICA: Establecida entre enzima y sustrato y determina el número y la direccionalidad de estos enlaces y, en última instancia, es la causa de la especificidad y la afinidad de la unión.

CONSTANTE DE VELOCIDAD: En relación con las reacciones químicas, una constante que relacione la velocidad de una reacción concreta con las concentraciones de sustratos

ENERGÍA DE ACTIVACIÓN: Cantidad de energía (expresada en calorías) necesaria para que todas las moléculas de un mol, a una temperatura determinada puedan alcanzar dicho reactivo.

ENZIMA: Catalizadores específicos y potentes que posibilitan la coexistencia de un elevado número de reacciones química dentro de la célula. En la mayoría de los casos son de naturaleza proteica pero se conocen algunas que son RNA

ENZIMAS ALOSTERICOS: Enzimas cuya actividad catalítica viene modulada por la captación de un metabolito específico, que se fija en un lugar distinto del centro catalítico, se denomina también enzimas reguladoras.

ENZIMA REGULADOR (ALOSTERICO): Enzima que ejerce una función reguladora, por su capacidad de experimentar cambios de sus actividad catalítica, al captar un metabolito modulador especifico

ESTADO DE TRANSICIÓN: Estado rico en energía de las moléculas interactuantes, en la cima de la barrera de activación. Velocidad de reacción química es proporcional a la concentración de las especies del estado de transición. La temperatura y catalizador aumenta la velocidad de la reacción.

GRUPO PROSTETICO: Cofactor unido íntimamente a la porción proteica de la enzima.

HIDROLASAS (ENZIMAS): Reacciones de hidrólisis. Añaden agua a través de los enlaces, hidrolizándolos.

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ISOENZIMAS O ISOZIMAS: Formas diferentes pero relacionadas de una enzima que catalizan la misma reacción. A menudo difieren tan solo en unas pocas sustituciones de aminoácidos. Formas múltiples de una enzima que interfieren en su afinidad por el sustrato o en su actividad máxima.

ISOMERASAS (ENZIMAS): Reacciones de isomerización.

LIASAS (ENZIMAS): Adición de dobles enlaces. Añaden agua, amoniaco o dióxido de carbono a través de enlaces dobles, o remueve estos elementos para producir enlaces dobles.

LIGASAS (ENZIMAS): Formación de enlaces con ATP.

SITIO ACTIVO: Lugar de una molécula enzimática al que se une el sustrato y donde se facilita la reacción, a menudo es hendidura o bolsillo situado en la superficie de la enzima.

OXIDO-REDUCTASAS: Reacciones de trasferencia electrónica. Actúan sobre muchos grupos químicos para añadir o retirar átomos de hidrogeno.

pH ÓPTIMO: pH al cual la actividad es máxima por encima o por debajo de este pH la actividad desciende, pH en el cual la enzima muestra su máxima actividad catalítica.

RESIDUOS CATALITICOS: Residuos que participan directamente en la formación y la ruptura de enlaces químicos.

SUSTRATO: Sustancia sobre la que se actúa. Compuesto sobre el que actúa una enzima de un modo especifico.

TRANSFERASAS (ENZIMAS): Trasferencia de grupos funcionales entre moléculas aceptoras y donadoras. Las cinasas son transferasas especiales que regulan el metabolismo al transferir fosfatos desde el ATP a otras moléculas.

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VELOCIDAD INICIAL: cuando la cantidad de sustrato es aun insignificante en relación con el total presente en la mezcla. Se acepta como velocidad inicial la determinada antes que el consumo de sustrato haya alcanzado el 20% del total originalmente presente.

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DISCUSIÓN

Pudimos comprobar que el peróxido de hidrógeno efectivamente es descompuesto por la catalasa liberando oxígeno ya que al hacer nuestro experimento pudimos observar la reacción por medio de burbujas (demostrándonos el oxígeno liberado).

La enzima catalasa transforma rápidamente el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Al momento de macerar el hígado y suministrarle el agua oxigenada (H2O2) pudimos observar en cuestión de segundos que esto es efectivamente verídico ya que, como habíamos mencionado anteriormente, se observan burbujas indicándonos la presencia de agua y la liberación de oxígeno.

La desnaturalización de las proteínas que no es otra cosa que quitarle las propiedades a las enzimas, en este caso siendo proteínas del hígado, esta desnaturalización se lleva a cabo por cambios ambientales, en este caso, al momento de la cocción del hígado dando lugar a la descomposición de las enzimas. Esto lo pudimos comprobar al momento de poner el pedazo de hígado en el recipiente con agua oxigenada ya que no observamos ningún cambio en éste porque no había presencia de enzimas.

2H2O + O2 Esto es porque el peróxido de

1. De descomposición: 2H2O2

hidrógeno da lugar a la formación de agua y la liberación de oxígeno en estado gaseoso. La liberación del Oxígeno, es notable a la vista cuando se comienza a producir un burbujeo al contacto del agua oxigenada con el hígado de pollo.

2. Irreversible: 2H2O2 2H2O + O2 La reacción es irreversible porque los

productos que se obtienen, al pertenecer a las reacciones del metabolismo, son utilizadas prácticamente al instante, como productos de nuevas reacciones. En nuestro dispositivo, el oxígeno liberado, se desplazaba por completo hacia el otro recipiente, evitando así que volviera a formarse peróxido de hidrógeno una vez más.

La enzima catalasa produce una velocidad máxima con el peróxido de hidrógeno haciendo que la reacción se acelere.

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CUESTIONARIO

1) ¿Cuál es el cambio total de temperatura que tuvo lugar en la cámara de reacción?

5°C

2) ¿Cuál es la fuente del calor determinado en este experimento?

La reacción del H2O2 con la Catalasa es una reacción que libera calor (Reacción exotérmica).

3) Si la catalasa es una enzima que rompe el peróxido de hidrógeno formando oxígeno y agua, ¿De qué manera se muestra en nuestro experimento la presencia o ausencia de catalasa en los tejidos?

La presencia de burbujas indica que la reacción química de descomposición del peróxido de hidrogeno en agua y oxigeno es positiva.

4) De los tejidos experimentados, ¿Cuál de ellos es el más activo?, ¿Cuáles el menos activo?

El más activo es el hígado de res y los menos activos los tejidos vegetales. Los tejidos hervidos no presentaron actividad.

5) ¿Qué se puede inferir de los resultados obtenidos, sobre la actividad de la catalasa en los tejidos hervidos y sin hervir?

Los tejidos previamente hervidos demuestran que la acción del calor sobre ellos afecto el estado natural de las enzimas presentes, lo que llamamos comúnmente desnaturalización enzimática.

6) Frecuentemente se utiliza peróxido de hidrógeno como antiséptico y se observa que al aplicarlo a una herida se produce burbujeo, ¿Qué es lo que indica este hecho?

Indica la presencia de Catalasa en los tejidos en donde se aplica el Peróxido de Hidrogeno.

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CONCLUSIÓN

El Metabolismo puede dividirse en anabolismo y catabolismo, y la reacción que se llevó a cabo en esta práctica, es un claro ejemplo del catabolismo ya que se descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. Esta reacción es exergónica pues libera más energía de la que se absorbe. En el experimento puede comprobarse porque, en el frasco donde se pone el hígado y el agua oxigenada puede percibirse un aumento de temperatura.

Finalmente, gracias a este experimento, podemos comprobar que, de acuerdo a lo que hemos tratado en clase sobre las enzimas, son éstas las que se encargan de acelerar vertiginosamente la velocidad de una reacción y además tienen la característica de poseer una estricta especificidad, pues la catalasa reacciona exclusivamente con el peróxido de hidrógeno.

LABORATORIO DE BIOLOGÍA # 10

BIBLIOGRAFÍA

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BIOLOGIA. CONCEPTOS Y RELACIONES / 3 ED.

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CAMPBELL, NEIL A.

Editorial: PEARSON

ISBN: 9684444133