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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS


BIOQUIMICA GENERAL

PRCTICA 5.1
I.-CURVA TIPO DE AZCARES REDUCTORES
GRUPO: 4QM1SECCIN DE LABORATORIO: 2

Introduccin
Las curvas de calibracin son
empleadas
para
medir
la
concentracin de una sustancia en
una muestra por comparacin con
una
serie
de
elementos
de
concentracin conocida.
Se basa en la existencia de una
relacin en principio lineal entre un
carcter medible (en ste caso, la
absorbancia) y la variable a
determinar (la concentracin). Para
ello, se efectan disoluciones de
muestras de contenido conocido y
se produce una lectura y el
establecimiento de una funcin
matemtica, que en esta prctica
no utilizaremos porque se estn
minimizando errores, ya que se
tiene muchas fuentes de error y con
ste mtodo lo que se pretende
observar es la linealidad de los
puntos (tubos problema). Y para
esto se considerar como un
parmetro ptico-mtrico.
Objetivo.
Construir una curva de calibracin,
mediante la cual se puedan medir
las
lecturas
de
absorbancia
obtenidas en los experimentos de
cintica enzimtica

EQUIPO: 5

Anlisis de resultados.
Para
la determinacin
de
la
actividad de la enzima invertasa se
utiliz un ensayo indirecto en el que
los productos de reaccin se
detectaron
espectrofotomtricamente despus
de que se convirtieron en derivados
coloreados. La extensin de la
hidrlisis enzimtica de sacarosa en
glucosa ms fructosa
se valor
mediante el mtodo del cido 3,5dinitrosaliclico (DNS), el cual se
basa en la reduccin del DNS (de
color amarillo) por la glucosa u otro
azcar reductor al cido 3-amino-5nitrosaliclico (de color rojo ladrillo)
(Chaplin, 1986), se detect la
presencia
por
lectura
de
la
absorbancia en la zona de 540-570
nm (luz verde).
Como se puede observar en las
grficas 1, los resultados obtenidos
no fueron los ideales pues debamos
obtener una grfica lneal, pero se
puede considerar que esta dentro
de un intervalo aceptable de error.
Probablemente el error pudo ser
debido a varios factores, uno de
ellos fue que tanto de parte del
equipo como de la seccion, las

pipetas que se utilizaron durante la


prctica, algunas de ellas estaban
sucias; tambin se pudo deber a la
falta de precisin al medir los mL
necesarios para cada tubo, o que la
graduacin que tenan no era la
indicada para medir los volumenes
requeridos y al momento de sacar
los tubos del bao no se interrumpi
la reaccin con el bao de hielo al
mismo tiempo. Se observa en
ambas graficas donde se encuentra
una mayor dispersin de los datos
es entre la concentracin de
0.00004 y 0.0000.

a
determinar
(la
concentracin).
Al modificar alguno de los
factores
usados
en
la
realizacin de esta prctica,
obtuvimos un estndar para
comparar como cambia la
accin de la enzima sobre el
analito.
Una curva nos sirve de
referencia para determinar el
comportamiento
de
una
muestra incgnita mediante
interpolacin.

Referencias.

Con las curvas obtenidas se


realizaron las grficas de tendencia
lineal correspondientes que se
ajustan a los datos, el R2 obtenido
para la ecuacin de la recta fue de
0.9943 (Ver Grfica 1), teniendo
en cuenta que el R2 es cercano a 1,
los datos no tuvieron mucha
dispersin y se puede considerar
que tiene una mayor precisin y por
lo tanto es conveniente utilizarla
como la curva tipo de azucares
reductores.
Conclusiones.
La
absorbancia
es
directamente proporcional a
la concentracin de azcar
reductor.
La curva de calibracin se
basa en la existencia de una
relacin en principio lineal
entre un carcter medible
(la absorbancia) y la variable

Ting, S.V. 1956.


Rapid
Colorimetric
Methods
for
Simultaneous Determination
of Total Reducing Sugars and
Fructose in Citrus Juices.
Agric. Food Chem. Vol. 4(3)
263-266.
Captulo 5: Anlisis de
regresin.
http://www.ugr.es/~bioestad/_privat
e/cpfund5.pdf . Fecha de consulta:
28/Feb/2014.

Extraccin y ensayo de la
actividad
invertasa
de
levadura de panadera .
http://www.uco.es/dptos/bioq
uimica-biolmol/pdfs/31%20INVERTASA
%20ENSAYO.pdf. Fecha de
consulta: 28/Feb/2014.
Azcares - Docencia UAM-I
docencia.izt.uam.mx/lyanez/analisi
s/practicas/azucares.rtf . Fecha de
consulta: 28/Feb/2014.