@uimica Procedimiento analitico para la determinacién de metales en tejido de peces (Micropogonias furnieri) por espectroscopia atémica Riménes*, C, Dias, M. Pamares® S. Alleyne I. Torres, C Aguilar 2S “Departamento de andiisis, Instituto de Materiales » Reactivos, Universidad de La Habana, **Departamento de Quimica Anatitica, Facultad de Quimica, Universidad de La Habana + Resumen Se establecié un procedimiento analitico para ls determinacion directa de Cu, Fe, Zn, por |) fa de Absorcién At6mica con Llama (EAA) y paral dterminacin de Co, Ni Po, Ca Cu, Cr. Bi, Ba, por Espectrometra de Emisién con Plasma Acoplado per Induccién | (EEA-PAD en mnestras de misculo de corvina procedentes dela bahia de Cienfuegos. Se estudio un || procedimientode digestin de lamuestraque emplea HNO, -H 0 praponignasestusoensusitucion que wlliza mezcla de HNO, y HCIO, para la digestin de est ipo de tej. Laexactitud se evalué empleando una muestra de referencia certifieada de tejido de pez perro det | Canadian National Research Couneil (CNC) y por el método de aiadido-recobrado. En todos los casos la recuperacién se encuentré entre un 90-105 4. La precisién de las determinaciones se evalus 5 % para la espectrometrfa de através del coeficiente de variacién, enconteandose valores entre 0 absorcién atémica, y entre 5-45 % para la emisin de plasma acoplado por induccién, Palabras Claves: Metales pesados, EAA, EEA-PAI, tejido de peces. procedimiento de digestisn + Abstract ‘An analytical procedure for the direct determination of Cu, Fe. Zn by flame Atomie Absorption |) spectrometry (AAS) and for, Co, Ni, Pb, C4, Si, AI, B, Fe, Zn, Cu, Cr. Bi. Ba by nduetively Coupled Plasma Emision Spectrometry (ICP-AES) in corvina’s muscle from Cienfuczos hay was established. ‘The sample digestion procedure was modified changing the usually employed mixture HNO,-HCIO, by a mixture of HNO,- H,O, which results less time consuming and more efficient The evaluation of the accuracy was performed analyzing a certified reference material of dogfish tissue from the Canadian National Research Couneil (CNRC) and by standard addition. Recoveries between 90-105 % were found in all cases. The relative standard deviation was used as a measure of the precission and values between 0,5-2,5 % for atomic absorption spectrometry and between 5-45. % for Inductively coupled plasma emission spectrometry were found. Key words: Heavy metals, AAS, ICP-AES, fish tissue, digestion procedure, + Introduccion de bastante importancia, Las ciudades de La Habana, ‘Matanzas, Cardenas, Santiago de Cuba y Cienfuegos Muchas de las principales ciudades de Cuba se esténentrelasmayores cuyasbabfassehan estudiado han asentado y desarrollado cerca del mar y son desde 1983 con el fin de determinar los orf actualmente, tanto centros industrialescomopuertos niveles de metales pesados y, consecuentemente | 32 raerecomendar medidas para resolver los posibles problemas de contaminacién, En lamargen noreste de la bahfa de Cienfuegos se desarrolla, principalmente, 1a actividad urbano- industrial; los residuos que se generan se vierten de forma directa ¢ indirecta, esta tiltima mediante las corrientes fluviales que desembocanaeste ecosistema que son; Damujf, Arroyo inglés, Salado, Caunao y Arimao /1/. La especie Micropogonias furnieri, conocida comiinmente como corvina, ha sido evaluada satisfactoriamente como bioindicadora de contaminacién ambiental por metales pesados en la bahia de Cienfuegos /2/, donde también se cuenta ccon Ia experiencia de estudios previos realizados sobre diferentes aspectos de la biologia de peces comerciales /3,4/, Como es bien conocido, el problema de ta contaminacién —provocada por metales es actualmente un tema al que se le continiia dedicando la mayor atencidn, ya que uno de los principales problemas que éstos presentan es su elevada persistencia en el ambiente, pues , a diferencia de los contaminantes orginicos, no se degradan ni quimica ni biolégicamente en la naturaleza, a pesar de que los compuestos que los contienen sf pueden alterarse. Uno de los problemas mas graves de su persistencia es la amplificaci6n biol6gica en la cadena tr6fica, Como consecuencfa de este proceso losniveles de metales en los miembros superiores de Jacadena pueden alcanzar valores mayores a los que se encuentran en el aire o en el agua, Ello puede provocar que muchas plantas o animales Heguen a constituir un peligro para la salud y producir intoxicacién en los organismos superiores, cuando se ingieren como alimento, tre losmetales més perjudiciales se encuentran: Hg, Pb, As, Cd, Cu, Zn, Ni, Co, Cr, V, etcétera; ademas entre otros elementos presentes en las agtias y medios marinos cuyos contenidos es necesario conocer y controlar se encuentran: Fe, Ca, Mg, Mn, Sr, etcétera Por otra parte, tanto la BAA. como la de EEA- PAI, son actualmente dos de las técnicas analiticas aplicadas con mayor éxito en la determinacién de ‘metales en muestras ambientales, por poseer una serie de ventajas como son, sencillez del procedimiento,sensibilidad adecuada paralamayoria de los niveles de metales estudiados y relativamente pocas interferencias EI objetivo del presente trabajo consiste en desarrollar procedimientos analiticos por ambas, técnicas, incluyendo la optimizacién del método de digestién de muestra, para la determinacién directa de Zn, Fe, Cu, Ni, Mn, Co, Pb, C4, Si, Al, B, Cr, Ba, y Bien misculo de corvina procedente de diferentes enfuegos, puntos de la bahfa de € + Métodos experimentales Reactivos Se utilizaron patrones primarios de 1 000 mg/L. calidad Spectrosol para todos los elementos, Los patrones secundarios de diferentes ‘jones se prepararon a partir de los primarios mediante diluciones concentra patrones convenientes, Los reactivos empleados durante el estudio del proceso de digestién de 1a muestra fueron, HNO, 70% y d= 1,41 g/mL (Analar), HCIO, 60 %,¥ d= 1,53 g/mL (Merck) y H,O, 30 % v/v (BDH). Se preparé un patrén de fésforoa partirde H,PO, = 1,685 g/mL. (Analar), el cual fue estandarizado previamente con una solucin cle NaOH de 0,1081 M (BDH) Durante todo el trabajo se emple6 agua desionizada y todas las soluciones se envasaron en recipientes plasticos. Preparacién de muestras EI trabajo experimental se Hlev6 a cabo con 4 muestras de misculo de Micropogonias furnieri (corvina) de la bahia de Cienfuegos, las cuales se Hiofilizaron, desmenuizaron, tamizaron y conservaron en frascos plisticos para facilitar su manejo y conservacién Vol HN—_————————— Las muestras se tomaron de diferentes zonas de dicha bahfa. En cada punto se procesaron 6 ejemplares adultos con un tamafio entre 1 1-20cm. El muestreo fue realizado por el Centro de Investigaciones Marina (CIM). Leyenda de las muestras Muestra I: Bahia de Cienfuegos zona de Damuji Muestra I: Bahia de Cienfuegos zona Camaronera Muestra III: Bahfa de Cienfuegos zona de la Corona Muestra IV: Bahia de Cienfuegos zona de Calsita Equipos La cristateria usada se lavé con detergente, se enjuagé con agua y con agua desionizada, ‘TABLA 1: CONDICIONE! posteriormente se dejé en contacto con HINO, (1:1) durante 24 horas. Finalmente se enjuagé con abundante agua desionizada /5,6/ Los equipos empleados fueron: -Liofilizadora EDWARDS.HIGH.VACUUM. -Espectrémetro de Absorcién Atémica marca PYE- UNICAM modelo SP-9 con limpara de cétodo hucco y Hama aire-acetileno, -Espectrmetro Simuttineo de Plasma Acoplado por Induccién POLYVAC-1000, Hilger Analytical En las tablas 1 y 2 se muestran las condiciones instrumentales para las determinaciones por EAA y EEA-PAL S INSTRUMENTALES E} Elmers [jmp [4 Fijocaie | Flujo CH; | Paso de banda ima) (om) (mm-eqv.) (mm-cqv) (om) [0 1489 yw 0 amy | 35 uM 02 a | 35 uM 02 TABLA 2; CONDICIONES INSTRUMENTALES EEA-PAT Potencia 1.25 kW 2 27.12 MHz Altura de observacién 14 mm por encima de la bobina de induceién tipo Fassel Antorcha - Flujos de gases a = Pasa 14 Limin ~ Auxiliar _ E Transporte 0.8 Limin Camara de nebulizacién Tipo Scott Nebulizador MeinhaD 1-30 _ Tiempo de integracién 10S Flujo de introducci6n de muesira 7 1 mLImin EXT 1200‘Se compararon dos procedimientos de digesti6n de las muestras de corvina: mezela HNO,,. + HCIO, ., (4:1) y HNO,,, +H,0, (30%), pues son éstas algunas de las variantes de digestién por via himeda recomendadas en ta literatura. para materiales biol6gicos /7, 8/ Para realizar el experimento, se pesaron 1 000 g demuestra y en un caso se afladieron 10 mL de HINO, ,, +2 gotas HO, (30 4%) y en otro caso 10 mi de mezela HNO, + HCIO, (4:1) La digestién se efectué en placa calefactora, Se trasvas6 a un matraz aforado de 50 mL y se enras6 con agua desionizada, El proceso de digestion para Ja primera variante transcurri6 en 30 min; cuando se uus6 Ia mezcla HNO, +HCIO, , , el tiempo fue aproximadamente de 2 h. De los matracesaforados de 50 mL. que contenfan ladisoluci6n de la muestra, seefectuaron diluciones; apropiadas para cada elemento en el caso necesario y se realizé la medicién Las curvas de calibracién se obtuvieron a partir de cinco multipatrones, Para la determinacién por EAA con Hama, los. intervalos de concentracién para Fe y Cu fueron 0,01-4 mg/L y para el Zn, 0,05-0,6 mg/L. Para la determinacién por EEA- PAI el intervalo de concentracién para todos los elementos fue de 0,01-4mg/L. Seefectud una prueba de aftadido-recobrado para comprobar si durante cl proceso de digestién se producfan pérdidas de los analitosto contaminacién Para realizar los experimentos de aftadido- recobrado se pes6 la muestra por triplicado y se realizaronadicionesde cadaelementoantes y después de la digestisn. + Resultados y discusién Digestién Con el objetivo de verificar que no existian pérdidas de los analitos durante Ia digestién, se realizé una prueba de afiadido-recobrado antes y después de la misma. Se comprobé que no existen diferencias significativas para ningiin elemento (a= 0,05), lo que demostrd que durante el proceso de digestion no ocurren pérdidas de los analito de interés /111,Sedecidié continuar trabajando con a digestion HNO,-H,O, ya que es mas rpida, emplea menor iddereactivos y lamuestraestémenosexpuesta a contaminacién; ademas en la literatura se recomiienda su empleo para las detetminaciones por EAA /9, 10. anti En las figuras 1 y2 se reflejan los por cientos de recuperacién de los elementos de imerés y se correlacionan las recuperaciones encontradas antes y después de la recuperacién est entre un 90-105 %, lo que da una ‘medida de la exactitud del procedimiento propuesto, omo se observa, la stig EEAPAL 10. a 2 5 | - | recuperein (AAD) Fig. 1. Verificacién de la exactitud del proceso de digestién por BEA-PAL. , Co, Ni, Fe, Mn, B, Pb, Cd, Zn, Sr, AL, Ba Adicién: 2mgiL_m=6 AAD: Adicin Antes de la Digestion ADD: Adicién Después de la Digestin Elementos: eT 35 |EAA 120 00 20 % recuperacién (ADD) 1 0 80 20 100 10 120 % recuperacién (AAD) Fig. 2. Verificacién de Ia exactitud del proceso de digestiin por EAA. Elementos: Cu, Co, Ni, Fe, Ma, Pb, Cd, Zn, Sr, Bi Adicin: 2 mg/L AAD: Adicin Antes de la Digestion ‘Se comprobs la influencia del HNO, utilizado en la digesti6n en la determinacién de los analitos por BAA. Para ello, se prepararen los patrones de calibraciénen medio acuoso y en medio écido (n= 3), y se realizaron las mediciones correpondientes, ‘Mediante la aplicacién de la prueba de Cochran /12/ se verificé la homocedasticidad de las dispersiones obtenidas. para ambos medios. Seguidamente se realiz6 una comparacién de las pendientes mediante la prueba t Student (c= 0,05), comprobando que no existen diferencias significativas entre éstas para ninguno de los elementos a determinar. Para el caso del Fe, por ejemplo, los valores tabulados y experimentales del estadigrafo t fueron: ajay 2776 texp=0,108. En la figura 3 se muestra también paral caso del Fe, lacorrelacidn existente entre las absorbancias de Vol. XII, ‘cada patrén en ambos medios. Como se evidenci del valor del coeficiente de correlacién existe una ‘buena correspondencia entre las sefiales en cada uno de los medios comparados, por lo que pueden prepararse los patrones en H,O para evaluar los contenidos de los elementos por EAA en la muestra, digerida. Influencia del HINO, en Ia determinacién de Fe por EAA. 0,999CO Procedimiento analitico propuesto para la digestion Pesar 1 000 g de misculo de corvina liofilizado y trasvasar a un beaker de 50 mL; afadir 10 mL de HNO, ,, y 2 gotas H,O, 30. % ; calentar en placa calefactora (T=150 °C) hasta disolucién; enfriar y twasvasar aun matraz aforado de 50 mL; enrasarcon agua desionizada Interferencias Las concentraciones de Ca, Mg, K, P,Na, en las muestras analizadas se mantienen en valores relativamente bajos (Ca= 25, Mg= 45, K= 140, P= 300 mg/L). Resultados previos de nuestro laboratorio /12/ indican que para estas ‘jones no existen influencias significati sobre la intensidad de los analitos. Sin embargo ‘ottos autores reportan /13/ que la presencia de altos contenidos de fésforo puede producir efectos significativos en la determinacién de los analitos por EEA-PAL zo amano 00 Por estas razones, como el fésforo es el componente mayoritario que se encuentra en mayor proporcin en este tipo de muestras, se estudié su influencia en la determinacién por EEA- PAL. Para realizar el estudio de la Interferencia Espectral (IE) y el Efecto de Matriz (EM) causado por el fésforoen la determinacién por BE: PAI, se prepararon muestras sintéticas. en el intervalo de concentracién de 250-1 000 mg. de este macrocomponente, La IE debida al f6sforo se evalud midiendo la intensidad de la sefial de cada elemento (I) para las diferentes concentraciones de fésforo. En la figura 4 se muestra, a modo de ejemplo, el comportamiento para Cry Pb, observindose que existe una relativa estabilidad del parimetro evaluado cuando aumenta Ja concentracién del interferente. Esto evidencia la no existencia de interferencia espectral. 700400 9601080100 P (git) 4. Influencia de Ia interfere El célculo de EM se lev6 a cabo mediante la expresién /141: ia espectral del fésforo sobre Pb y Cr por EEA-PAI. Donde: T,,:intensidad det analito en presencia de la matriz Je intensidad de la matriz en el canal del analito 1; imensidad del analito en ausencia de la matriz Ig intensidad del blanco (HINO, SL aes 37 |El EM del fésforo no resulta significativo (<5 %) segin se aprecia en la figura 5; sin embargo se observan las misma tendencias generales reportadas para otros macrocomponentes como son: aumento del EM con la concentracién del elemento mayoritario, aumento del EM con el potencial de excitacién total del analito: Cu=382ev Cr=12.9lev Ph= 14,78 ev P (mgit) “= Ph Crs Cu Fig, 5. Ffecto de matriz (EM) del fésforo por PALEEA. Evaluacién de la precision Se realiz6 una compatacién de los Coeficientes de Variacién (CV) de los elementos analizados por ambos métodos (EEA- PAI, EAA) para evaluar la precisién, En la figura 6 se puede observar que para el caso de las determinaciones por EAA los CV estan en el imtervalo de 0,5-2.5 %, indicativos de una buena precisién en la determinacién (<3 %). Para la determinacién por EEA-PAI los CV se encuentran en el intervalo de 5-45 %. En este caso, 1a. precisién no resulta satisfactoria para algunos elementos, lo cual se atribuye a que algunos de ellos se encuentran cen concentraciones del orden del Iitnite de deteccién, tliat Hal ; mba ® med Teas Fig. 6. Comparacién de la precisién por EEA-PAL y EAA. EXD vara 2000Evaluacién de la exactitud Para evaluat la exactitud del método ademds de la prueba de afiadido-recobrado mostrada en las figuras 1 y 2, se analiz6 un material estandar de referencia de tejido de muisculo de pez petro (DORM-2 ) del CNRC por EEA- PALy EAA. Los resultados se muestran en la tabla 4. Como se puede apreciar, existe una buena correspondencia entre los valores reportados en el material estindar de referencia y los encontrados al aplicar el método propuesto, Jo cual corrobora la exactitud del procedimiento desarrotlado, TABLA 4: RESULTADOS OBTENIDOS EN LA MUESTRA DE REFERENCIA Elemento Conceniracién reportada (me/L) | Concentracién encontrada (mg/L eae ate 284020 186° cu 087-0010 0.185° Zn 0512-40082 04M? O.480e Mn 0.073 40,007 0.069° Ni 1388+ 0,064 0350" En lastablas 5 y 6 se muestran los resultados obtenidos por ambos métodos al evaluar las 4 muestras de corvina. TABLA 5: RESULTADOS OBTENIDOS POR EAA (n= 6, a= 0,05) MUESTRA | MUESTRA ID NUESTRA Ill NUESTRA IV yoi8 Elemento (mgl) | cu | 1960 (00m) 13) NO] - | | ND Fe | 04s |oo2s] 52 | 0s0o fooage| 75 | 069 [aos] a4 | 0790 loote] 19 | \ | za | aase [oo] 04 [ara Yoana | 0s | ovo | ont | a7 | caee joe) 12 Vol. XI, N° 1, 2000,TABLA 6: RESULTADOS OBTENIDOS POR EAA-PAI (n= 2) { MuestRal =| MUESTRATI | "MUESTRA II MUESTRAIV —-= 5 psp th [ Xx ] x x | Xx [Elem (monty) § i (mgtj] § |CVfimgty} § |CV amo) } § }e¥ | | | fof op _ lal } | cu | 183 | 003 | 17 | no |-}no] - }-]no] - | - | | a | | | | | | | | re | 049 | 0004 | +1 | 044 | oo0s |o7| 075 | 00s |12| 029 | o0ce | 0 zn | 043 | oor | 28 | 092 | 002 | 7 | 0.42 | 0.005 |1.3{ 0.40 | 0.007 | 1 o.o6t |0.0007| 1.2 ND: No Detectable Conelusiones Se establecié un procedimiento anatitico para la determinacién de Fe, Cu, Zn por EAA con llama y de Al, B, Si, Fe, Cu, Zn, Co, Ni, Cd, Pb, Mn, Sr, Ba Cr por EEA-PAI en tejido de miisculo de corvina, cuy exactitud y precisién en general resulian adecuadas para la tarea analitica planteada. Se verificd que en las condiciones de trabajo no se presentan Efecto Matri: (EM) ni Interferencias Espectrales (IE) por EEA-PAI. Esto permitié el empleo de patrones de calibracién sin matriz para et andlisis de las muestras naturales, obteniéndose exactitudes entre (90-105 %). En el caso de EAA, no se evidenciaron interferencias quimicas de la matric y se verificé que no es necesario el uso de patrones en medio dcido para la calibracién. (CY Bivtiograsia 1. Ablanedo, N. Gonzilez, Heal. ; Evaluaciéa de la contaminacién en los sedimentos de I bahfa. de Cienfuegos, Cuba, An, Ins, Invest, Mar. Punta Betin, nim. 21, 1992, pigs. 5-12. 2, Gonzslez,H."Heavy Metalsin Sediments and Fishes from Cienfuegos Bay”, CIMAB, C. Habana, Cuba, 1995, Comunieacién personal QD vara nv, 2000lar, C. Gonzilez Sansén, G. etal. , Estructura de las comunidades de peces en la bahia de Cienluegos en a Guanaroea, Rev. Inv. Marinas, vol, 13, nim. pigs, 222-232, 1992, 4. 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Arizona. 269, 1098, i Inuctively Coupled Plasma Agradecimiento Los autores desean agradecer al Concurso Alma Mater de la Universidad de La Habana, bajo cuyo auspicio se realiz6 este trabajo. ‘N"1, 2000Copyright of Revista Cubana de Quéd#237:mica is the property of Direccion de Informacion Cientifico-Tecnica Universidad de Oriente. The copyright in an individual article may be maintained by the author in certain cases, Content may not be copied or emailed to multiple sites or posted to a listserv without the copyright holder's express written permission. However, users may print, download, or email articles for individual use.