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Autor:

PAOLA OLIVARES G.
CLAUDIA DURN L.

Universidad de la Serena
Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera En Alimentos
2004

OLIVARES, P. DURN, C.

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Paola Olivares G.
Claudia Durn L.
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Edicin:
2004 ReCiTeIA.
Cali Valle Colombia
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Paola Olivares G. Claudia Durn L.
Universidad de la Serena
Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera En Alimentos/

Introduccin

Los mtodos espectroscopios de anlisis se basan en la medida de la radiacin electromagntica

emitida o absorbida por la materia. Los mtodos de emisin utilizan la radiacin emitida cuando
un soluto es excitado por energa trmica, elctrica, o energa radiante. Los mtodos de
absorcin, por el contrario, estn basados en la disminucin de la potencia (o atenuacin) de la
radiacin electromagntica como consecuencia de la absorcin que se produce en su interaccin
con el soluto.
Los mtodos espectroscpicos se consideran como una de las mejores y ms utilizadas tcnicas
instrumentales a disposicin del cientfico, para la adquisicin de informacin tanto cuantitativa
como cualitativa.
Los mtodos espectroscpicos se clasifican segn la regin del espectro electromagntico que
est implicada; siendo las ms importantes las regiones de rayos X, ultravioleta, visible,
infrarroja, microondas y radiofrecuencia.
1.1

Absorcin de Radiacin Electromagntica:

Se denomina absorcin al proceso por el cual una especie, en un medio transparente, capta
selectivamente ciertas frecuencias de la radiacin electromagntica.
Los mtodos de absorcin poseen la considerable ventaja de producir poca o ninguna alteracin
en el sistema estudiado.
1.2

El espectro electromagntico:

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1.3

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Colormetros:

Los colormetros utilizan el ojo humano como detector y el cerebro como transductor. Sin
embargo, el ojo y el cerebro solamente pueden comparar colores. Como resultado, los mtodos
calormetros requieren siempre la utilizacin de uno o mas patrones en el momento en el que se
realiza el anlisis. Otras desventajas consisten en que el ojo humano responde a un intervalo
espectral relativamente limitado (400 a700 nm), y es incapaz de realizar la comparacin
requerida si la solucin del soluto contiene una segunda sustancia coloreada. Finalmente el ojo no
es tan sensible a pequeas diferencias en la absorbancia como lo es un detector fotoelctrico; en
general, no se pueden discernir diferencias de concentracin menores del 5 por 100
aproximadamente.
1.4

Fotmetros:

Un fotmetro es un dispositivo sencillo relativamente barato para los anlisis por absorcin,
posee fcil mantenimiento y resistencia que pueden no tener espectrofotmetros ms sofisticados.
Adems, cuando en el anlisis no se necesita una pureza espectral elevada (y frecuentemente es
as), el fotmetro proporciona medidas tan precisas como las obtenidas con instrumentos ms
complejos.
1.5

Espectrofotmetros:

Un espectrofotmetro est equipado con un monocromador de prisma o red, que permite la

seleccin de cualquier longitud de onda dentro de la capacidad del instrumento. Los
espectrofotmetros son adecuados para realizar medidas en las regiones ultravioleta, visibles e
infrarroja.
1.6

Determinacin de la relacin entre la absorbancia y al concentracin:

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Los patrones de calibracin para un anlisis fotomtrico o espectrofotomtrico deben ser tan
semejantes como sea posible a la composicin total de las muestras, y deben abarcar un intervalo
razonable de concentraciones del soluto. En raras ocasiones, o casi nunca, se puede suponer que
se cumple la Ley de Lambert-Beer y utilizar un patrn nico para determinar la absortividad
molar; todava es an menos prudente basar los resultados de una anlisis es un valor de
absortividad molar obtenido de la literatura.
2
2.1

2.2

2.3

3
3.1

Materiales y Mtodos
Experimento:
Medicin cuantitativa del poder reductor de un glcido con el mtodo de Somogyi-Nelson.
Mtodo:
Someter al procedimiento de Somogyi-Nelson soluciones de glucosa de concentraciones
diferentes y conocidas y solucin de concentracin desconocida.
Medir en el fotocolormetro la intensidad del color desarrollado, habiendo seleccionado
previamente el filtro apropiado para el instrumento.
Reactivos
Patrn de glucosa, solucin 0.2 g/l.
Solucin de glucosa de concentracin desconocida
Reactivo de Somogyi
Reactivo de Nelson
Procedimiento:
Colocar 1 ml de solucin de glucosa de distintas concentraciones de diferentes tubos
numerados (rango de 6 tubos aproximadamente).
Colocar 1 ml de solucin de concentracin desconocida (hacerlo en duplicado).
Agregar a todos los tubos 1 ml de reactivo de Somogyi, mezclar. Tratar en igual forma el
tubo blanco.
Colocar todos los tubos, sumergindolo en agua fra de la llave, cuidando de no agitarlos para
evitar la reoxidacin del ion cuproso.
Agregar 1 ml de reactivo de Nelson a cada uno de los tubos. Mezclar.
Agregar 7 ml de agua destilada a todos los tubos. Mezclar.
Seleccione el filtro apropiado para el experimento de acuerdo al color desarrollado.
Medir en el fotocolormetro el color desarrollado, ajustando a 100% de absorbancia del
instrumento con el blanco de la reaccin.
Resultados
Registro:

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Confeccionar una grfica con los resultados obtenidos, colocando en la abscisa las
concentraciones de glucosa y en la ordenada las lecturas del fotocolormetro.
Calcular el factor de calibracin.
Calcular en microgramos/ml y en micromoles/ml.
3.2
1g

Clculos:
1x106 ug
0.2 g
x g____/
x = 200.000 ug

a) 200.000 ug
20 ug
x = 0.1 ml

100 ml
x ml /

b) 200.000 ug
40 ug
x = 0.2 ml

100 ml
x ml /

c) 200.000 ug
80 ug
x = 0.4 ml

100 ml
x ml /

d) 200.000 ug
160 ug
x = 0.8 ml

100 ml
x ml /

e) 200.000 ug
200 ug
x = 1.0 ml

100 ml
x ml /

Tubos
Solucin glucosa
patrn 0.2 g/l
Agua destilada
Concentracin de
glucosa en ug

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Tubo blanco 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

Tubo 6

0 ml

0.1 ml

0.2 ml

0.4 ml

0.8 ml

1.0 ml

1.0 ml

0.9 ml

0.8 ml

0.6 ml

0.2 ml

0 ml

0 ug

20 ug

40 ug

80 ug

160 ug

200 ug

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Absorbancias a distintas longitudes de onda:

Longitud de onda =
Longitud de onda =
Longitud de onda =
480
540
600
Tubo blanco 0
0.108
0.094
0.110
20
0.062
0.117
0.218
40
0.121
0.247
0.464
80
0.285
0.513
0.899
160
0.465
0.908
1.651
200
0.596
1.151
2.102
X1
0.224
0.436
0.796
X2
0.229
0.440
0.804
# La absorbancia del tubo blanco sirve para restarle la Absorbancia a los dems tubos debido a
que en esta no se encuentra la concentracin de glucosa.
[ ] glucosa ug/ml

Constante de calibracin:
Longitud de onda =
540
K2 x 10-3
5.8
6.1
6.4
5.6
5.7
K2 : 5.8 x 10 3

Longitud de onda =
600
K3
0.010
0.011
0.011
0.010
0.011
K3 : 0.011

Determinacin de la concertacin de la muestra desconocida:

Longitud de onda =
Longitud de onda =
480
540
Concentracion 1
77.2 ug
75.2 ug
Concentracion 2
78.9 ug
76 ug

Longitud de onda =
600
1 ug
80.4 ug

Concentraciones
20 ug
40 ug
80 ug
160 ug
200 ug
K promedio

Longitud de onda =
480
K1 x 10 3
3.1
3.0
3.5
2.9
2.9
K1 : 3.0 x 10 3

Conclusin:

La mejor longitud de onda que pasa por el origen es de 540, registrando la concentracin de la
muestra problema con los datos de la absorbancia y la constante de calibracin promedio de
aquella longitud de onda. Demostrando as la ley de Lambert-Beer que establece una
proporcionalidad directa entre la concentracin e intensidad del color de una sustancia en
solucin medida como absorbancia.
El papel que cumple los reactivos de Somogyi y Nelson es: el reactivo de Somogyi al actuar este
con la glucosa el cual es una azcar reductor, reduce al ion cprico en ion cuproso, en medio
alcalino caliente. El reactivo de Nelson posee cido arsenico-molibdoso Mo+4 el cual solubiliza

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al ion cprico, reducindose a Mo+2 (suboxidomolibdeno), dando un color azul proporcional a la

cantidad de glucosa presente.
5

Bibliografa

(1) Manual de laboratorio de Bioqumica General .

(2) Sook/West : Qumica Analitica, tercera edicin.

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