Informe:

Cromatografa
Laboratorio de Qumica Orgnica

Grupo A11 : Mart Carrera Barbier;Rosala

Rizo Ortega

Contenido
1.

Entorno terico......................................................................................................................................2

2.

Parte experimental................................................................................................................................3
2.1.

Material empleado........................................................................................................................3

2.2.

Reactivos empleados...................................................................................................................3

2.3.

Montajes.......................................................................................................................................4

2.4.

Procedimiento...............................................................................................................................5

3.

Resultados y Discusin.........................................................................................................................7

4.

Conclusiones.........................................................................................................................................9

5.

Bibliografa...........................................................................................................................................10

1. Entorno terico
a) Introduccin
El botnico ruso Mikhail S. Tsvet instaur el uso de la cromatografa en
los estudios cientficos alrededor de los aos 20. Us este mtodo en
la separacin de los pigmentos naturales que se encuentran en las
plantas. Las carotenoides y clorofilas son las responsables de dar
color a dichos pigmentos.
La cromatografa es una tcnica de separacin utilizada en el mbito
de la qumica. En esta prctica se han utilizado dos mtodos de
separacin. Por un lado, la cromatografa por capa fina y por otro lado
la cromatografa en columna.
Las tcnicas de separacin slo sirven para separar ya que nos dan
ninguna otra informacin acerca de la naturaleza de los componentes
separados, de ah que en la mayora de los casos estas tcnicas o
mtodos de separacin van acompaados de otros mtodos de
anlisis con el fin de identificar y a veces cuantificar los componentes
separados.
b) Cromatografa. Definicin
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los
componentes a separar se distribuyen entre dos fases, una de las
cuales est en reposo (fase estacionaria) mientras que la otra (fase
mvil) se mueve en una direccin definida.
El proceso cromatogrfico se caracteriza por la dificultad en el paso
de los distintos componentes dela muestra a travs de la fase
estacionaria a medida que son arrastrados por la fase mvil (elucin).
Dicha dificultad provoca la retencin de dichos componentes en
menor o mayor grado segn las diferencias entre las constantes de
distribucin existentes ente la fase estacionaria y la mvil.
c) Cromatografa. Conceptos
Fase estacionaria
Es una de las dos fases que forman un sistema cromatogrfico. Puede
ser un slido, un gel o un lquido. Si es un lquido, puede estar
distribuido en un slido, el cual puede o no contribuir al proceso de
separacin.

Fase mvil
Fluido que se filtra a lo largo de la fase estacionario, en una direccin
definida. Puede ser un lquido (cromatografa lquida, LC), un gas
(cromatografa de gases, GC) o un fluido supercrtico (cromatografa
con fluido supercrtico).

Elucin
Proceso en el que la fase mvil se desplaza a lo largo de la fase
estacionaria transportando los componentes a separar. El proceso de
elucin se puede detener mientras todos los componentes de la
muestra estn an en el lecho cromatogrfico o continuar hasta que
lo hayan abandonado.
Efluente
Nombre que se la da en el momento que la fase mvil abandona la
columna.
d) Tipos de Cromatografa
Cromatografa en columna
La caracterstica fundamental de la cromatografa clsica en columna
es que el gradiente de presin viene necesario para el
desplazamiento de la fase mvil viene dado por la gravedad. Los
lechos cromatogrficos utilizados para columnas, son generalmente
de un solo uso y se preparan en el propio laboratorio.

Figura1. Esquema de una columna de gravedad.

El recipiente es normalmente un tubo de vidrio que mediante una

llave de paso se regula el flujo de la fase mvil. Es muy importante
que la fase estacionaria est distribuida de forma homognea, sin
fracturas ni burbujas de aire, siendo tambin fundamental que los
extremos de la columna sean planos para evitar eluciones
simultneas de ms de una fraccin, especialmente si la capacidad
de separacin de la columna no es muy grande. El mtodo ms
recomendable de llenado consiste en aadir al tubo, una vez colocado
en posicin vertical, una pasta formada 1con la fase estacionaria y un
disolvente de menor actividad que la fase mvil, dejando salir el
disolvente sobrante a medida que la fase estacionaria va
sedimentando.
La capacidad de separacin de las columnas de gravedad no es muy
grande ya que su eficacia viene dada por el tamao de las partculas
de la fase estacionaria ya sta debe ser bastante alto para permitir un
caudal razonable de la fase mvil. La relacin entre el dimetro y la
longitud de la columna es tambin importante, ya que columnas
demasiado cortas no proporcionarn espacio suficiente para lograr la
separacin deseada.
Mediante alguna otra tcnica como la cromatografa en capa fina se
analizan los productos obtenidos a medida que van saliendo de la
columna por elucin. Para ello se recogen un gran nmero de
pequeas fracciones.
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en capa fina se utiliza en un lecho abierto formado por
una capa fina de fase estacionaria soportada sobre una superficie
plana. La elucin se consigue por el movimiento capilar ascendente
de la fase mvil. Las fases estacionarias utilizadas normalmente para
cromatografa en capa fina son, almina o gel de slice para
cromatografa de adsorcin. El proceso se lleva a cabo en recipientes
cerrados, por ascensin del disolvente, debiendo colocarse en el
interior del recipiente cubriendo una de sus paredes una capa de
papel de filtro impregnado en la fase mvil (disolvente) para
conseguir una atmsfera saturada en ella. Una vez desarrollada la

1 Pasta formada: en esta prctica se ha utilizado gel de slice como fase estacionaria

placa, la visualizacin de los

cromatogramas
se
realiza
mediante iluminacin con luz
ultravioleta, si a ojo humano no
es posible verlos.
Tras
el
desarrollo,
la
identificacin de cada componente de la mezcla se realiza midiendo
el desplazamiento relativo de cada mancha en la placa respecto a un
compuesto patrn o al frente del disolvente, definindose para cada
banda sus valores Rf(A) o Rf(B) respectivamente (Figura 2).

Figura 2. Esquema para el clculo del desplazamiento

relativo entre componentes.

2. Parte experimental
2.1. Material empleado
-

Columna de cromatografa
Erlenmeyer de 250 mL
Tubos de ensayo
Gravillas de plstico
Botes con cierre hermtico
Capas finas para CCF
Probeta graduada
Embudo
Matraz redondo de 200 mL
Gel de slice

2.2.Reactivos empleados
Producto

Benzonitrilo

Acetanilida

Diclorometano

Acetato de etilo

Ciclohexano

Estructura

Peligros

2.3. Montajes
Para realizar la prctica de separacin por cromatografa
de columna, se han utilizado 3 montajes.

Ilustracin 1: Cromatografa en capa fina

Ilustracin 2: Cromatografa de columna

Ilustracin 3: Eliminacin de disolvente a presin reducida

2.4.Procedimiento
En primer lugar se prepara la muestra que se desea separar. En este caso, la mezcla est compuesta por
0,5 g de acetanilida y 0,5 g de benzonitrilo. Se disuelve en unos 10 mL de diclorometano una pequea
porcin de la muestra.
Para determinar el eluyente que permite separar mejor los componentes de esta mezcla, se realizan tres
cromatografas de capa fina.
Para ello se recortan tres capas de cromatografa de dimensiones 10 por 5 cm. A 1,5 cm de la base de las
capas se traza una lnea con lpiz suavemente.
Se preparan tres botes que puedan cerrarse hermticamente. En cada uno de ellos, se vierte
aproximadamente un cm de altura de disolvente: en el primero se vierte ciclohexano, en otro
diclorometano y en el ltimo acetato de etilo. En cada bote, se introduce un poco de papel de filtro para
saturar el ambiente del interior del bote de vapor de disolvente.
Se pincha con una micropipeta un poco de la muestra diluida en cada una de las capas finas. Se
introducen entonces las capas en los botes y se cierran estos hermticamente. Se deja subir el eluyente
por las capas hasta que llega a un cm del extremo superior.
Se sacan entonces las capas, se traza una lnea en el lmite de eluyente. Se observa el resultado con luz
UV, y se marcan las manchas observadas, causadas por la migracin de los componentes de la muestra.
Se selecciona el eluyente que permite una mejor separacin. En este caso, se trata del diclorometano
para recoger el primer producto y del acetato de etilo para recoger el segundo. Se razona la eleccin en el
apartado de resultados.
A continuacin se prepara la columna de cromatografa. Se pesan 100 g de gel de slice en un matraz en
el que se pueda hacer el vaco (p.e. un matraz kitasatos) y se sumerge el gel en el primer eluyente:
diclorometano. Se aplica vaco al recipiente.
Se lava la columna con el eluyente, y se comprueba su correcta circulacin por esta. Se vierte entonces el
gel de slice en la columna. Se deja asentar el gel unos minutos y a continuacin se vierte un poco de
arena sobre el gel, de forma que queden unos 2 cm sobre el gel, y unos 2 cm de eluyente sobre la capa
de arena.
Se disuelve el resto de la muestra en 20 mL de diclorometano. A continuacin, se debe sembrar la
muestra en el gel de slice. Para ello, se rebaja el nivel de eluyente hasta la capa de arena, se vierta la
muestra disuelta, y seguidamente se aade eluyente en pequeas cantidades. Es recomendable enjuagar
el recipiente de la muestra con eluyente e introducir este en la columna para no perder muestra.
A partir de la siembra, la columna de cromatografa debe mantenerse inundada siempre, y con la llave
abierta. Se recoge el eluyente que sale de la columna. Mediante micropipeta, se pincha el lquido en una
capa de cromatografa y se observa con luz UV para ver los productos que vayan saliendo.
Cuando se observa que el primer producto ha salido por completo, se cambia de eluyente, y se contina
el mismo proceso. Despus de la completa recoleccin del segundo producto, se detiene la
cromatografa.
Para identificar formalmente ambos productos, se realiza una cromatografa de capa fina, siguiendo el
proceso descrito anteriormente, de comparacin. En una misma capa fina, se pinchan los dos productos

recogidos y un producto de referencia, en este caso se escogi la acetanilida como referencia y el

diclorometano como eluyente.
Por ltimo, para estudiar la recuperacin de producto, se vierte todo el eluyente que contenga el producto
escogido, en este caso se escogi la acetanilida, en un matraz redondo. Se rotavapora el disolvente y se
pesa el producto recuperado.

3. Resultados y Discusin
3.1.Seleccin de eluyentes
Para seleccionar los eluyentes ms apropiados a la separacin que se desea realizar, se llevan a cabo
tres CCF de la mezcla con eluyentes diferentes.
Se obtienen las capas siguientes:

Se observa que el ciclohexano no permite separar satisfactoriamente los componentes de la mezcla. El

diclorometano y el acetato de etilo permiten separar los componentes. El diclorometano es muy afn a uno
de los componentes, mientras que no arrastra el otro. Por tanto se selecciona este eluyente para arrastrar
el primer producto. En cambio, el acetato de etilo permite arrastrar ambos, la diferencia de afinidad con
los distintos componentes no es muy grande.

4. Conclusiones

5. Bibliografa