Micropropagacin de plantas

Micropropagacin

Micropropagacin vs. propagacin vegetativa convencional

Tipos de tcnicas de micropropagacin

Etapas de la micropropagacin y principales problemticas

Costos

Micropropagacin de plantas
Micropropagacin vs. propagacin vegetativa convencional

Micropropagacin de plantas

MICROPROPAGACIN
Tcnica de propagacin vegetativa de plantas en
condiciones in vitro.
Produccin masiva a precios competitivos.

Cultivo asptico de un explanto en un medio de

cultivo artificial y en condiciones ambientales
controladas.

Micropropagacin vs. propagacin vegetativa

convencional

Es posible propagar algunas especies que no se propagan in

vivo.

Se necesita muy poco material de partida.

El crecimiento es mayor por rejuvenecimiento y sanidad.

Se requiere poca rea.

Se elimina el efecto estacional.

Simultneamente se limpia el material.

Micropropagacin de plantas

Micropropagacin de plantas

Tipos de tcnicas de micropropagacin

Por brotacin de yemas axilares.

Por brotacin de yemas adventicias:
directa
indirecta

Micropropagacin de plantas

Etapas de la micropropagacin
Por brotacin de yemas axilares.

Eleccin y preparacin de la planta madre (etapa 0).

Establecimiento del cultivo y eleccin del medio de cultivo (etapa 1).

Multiplicacin (etapa 2).

Elongacin y enraizamiento (etapa 3).

Aclimatacin (etapa 4).

Micropropagacin de plantas

Etapa 0: Eleccin y preparacin de la planta madre.

Crecimiento en condiciones de sanidad

controlada.

Tratamientos de rejuvenecimiento.

Pretratamientos con reguladores de
crecimiento.

Micropropagacin de plantas

Etapa 0: Eleccin y preparacin de la planta madre.

Yemas epicrmicas
Podas severas
Rebrotes
de raz
Rebrotes de tocn

Micropropagacin de plantas

Etapa 0: Eleccin y preparacin de la planta madre.

Brotaciones epicrmicas,
Eucalyptus grandis.

Brotaciones epicrmicas,
Pinus canariensis.

Micropropagacin de plantas

Etapa 0: Eleccin y preparacin de la planta madre.

Pretratamientos con reguladores de crecimiento.

Pulverizaciones con citoquininas

Reversin a estado semi-juvenil

Incremento en el nmero de brotes

Combinacin con tratamientos anteriores

Giberelinas en algunas especies

Rebrotes juveniles,
Acca sellowiana
(BAP)

Micropropagacin de plantas

Etapa 1: Establecimiento del cultivo en condiciones

de asepsia.
Objetivo:
Iniciar el cultivo
Mtodo reproducible
% de xito
Compromiso esterilizacin/tasa de
sobrevivencia

Micropropagacin de plantas

Etapa 1: Establecimiento del cultivo en condiciones de

asepsia.
Procedimiento:
Cortar brotes con caractersticas juveniles.
Lavar con agua y jabn.

Se descartan las hojas, se dejan los pecolos.

Micropropagacin de plantas

Etapa 1: Establecimiento del cultivo en condiciones de

asepsia.
Procedimiento:
Realizar la desinfeccin:
etanol, hipoclorito de sodio,etc.
tiempos

Realizar tres enjuagues con agua destilada

estril.

Micropropagacin de plantas

Etapa 1: Establecimiento del cultivo en condiciones de

asepsia.
Procedimiento:
Cortar segementos nodales, descartando los
extremos basal y apical.

Cada nudo contiene un meristemo axilar.

Micropropagacin de plantas

Etapa 1: Establecimiento del cultivo en condiciones de

asepsia.
Procedimiento:
Introducir un segmento nodal por tubo de
ensayo conteniendo el medio de cultivo.

Tapar y colocar en cmara de crecimiento.

Micropropagacin de plantas

Etapa 1: Establecimiento del cultivo en condiciones

de asepsia.

Eucalyptus grandis

Acca sellowiana

Actinidia deliciosa

Allium cepa

Micropropagacin de plantas

Cules son las principales limitantes en esta etapa?

Contaminacin
Hongos
Bacterias
Virus
Mycoplasmas
Microartrpodos y Trips

Oxidacin

Micropropagacin de plantas

Principales causas de contaminacin fngica:

Esterilizacin superficial inadecuada
Manipulacin
Introduccin de esporas por Trips

Se detecta fcilmente a simple vista.

Gneros de hongos ms frecuentes:

Aspergillus
Candida
Cladosporium
Microsporium
Phialophora

Micropropagacin de plantas

Bacterias:
Principal agente contaminante.
Sntomas sobre el explanto o en el medio de cultivo.
Pueden aparecer luego de varios subcultivos.
Sntomas no visibles, plantas que no sobreviven la aclimatacin.
(Bacterias no patognicas, benficas)
Gneros de bacteria ms frecuentemente observados en cultivos de tejidos in vitro.
(Leifert & Waites, 1990)
Agrobacterium
Bacillus
Enterobacter
Pseudomonas
Lactobacillus
Staphylococcus

3%
13 %
12 %
19 %
11 %
26 %

Micropropagacin de plantas

Cmo puede solucionarse?

Hongos:

Adecuada desinfeccin

Bacterias:

Antibiticos
Uso humano y animal
Efecto bacteriosttico/bactericida

Virus:

Cultivo de meristemas y termoterapia

Micropropagacin de plantas

Oxidacin:
Amarronamiento del explanto y/o el medio.
Inhibicin del crecimiento y muerte del explanto.
Ms marcado en especies que naturalmente tengan altos niveles de
taninos u otros compuestos fenlicos.

Causas:
Accin de enzimas oxidasas que son liberadas o sintetizadas en
respuesta a heridas.
Sustratos distintos segn el tejido.
Fenoles se oxidan a quinonas que a su vez tienen alto poder
oxidante sobre protenas.

Micropropagacin de plantas

Cmo puede solucionarse?

Agua estril 2-3 hs previo a la introduccin.

Empleo de antioxidantes en el ltimo enjuague o en
el medio de cultivo (cido ctrico, ascrbico).

Transferencias frecuentes (cada dos o tres das) a
medio fresco.

Carbono activado.

PVP

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.
Objetivo:
Mximo coeficiente de multiplicacin
Calidad de plantas

Nmero terico de plantas que pueden producirse en

un ao.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.
Procedimiento:

Extraer los explantos que brotaron en la etapa

previa.

Cortar separando brotes individuales o

segmentos nodales (segn el hbito de
crecimiento de la especie).

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.
Procedimiento:

Separar los brotes por tamao.

Colocar en medio de multiplicacin.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.
Medio de cultivo:
Hormonas

Efecto de los reguladores de crecimiento en la sobrevivencia y

multiplicacin de Salix sp.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.

Todos los medios contienen ANA (0,3 M).

Grigoriadou, 2002.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.

Efecto de los reguladores de crecimiento en la

multiplicacin de Malus sp. (4 semanas en cultivo).
Xu, 2007.

Micropropagacin de plantas

Etapa 2: Multiplicacin.
Hbito de crecimiento:

Micropropagacin de plantas

Cules son las principales limitantes en esta etapa?

Variacin somaclonal
Variacin gentica heredable, que surge
en plantas producidas por cultivo de
tejidos.
Desventaja importante cuando el objetivo
es la fidelidad clonal.

Cmo puede solucionarse?

Reducir el nmero de repiques.
Uso racional de reguladores de crecimiento.
Evitar el 2,4 D.

Micropropagacin de plantas

Cules son las principales limitantes en esta etapa?

Hiperhidricidad (Vitrificacin)

Desorden fisiolgico, metablico y morfolgico

inducido por las condiciones de estrs durante el cultivo in vitro.

Micropropagacin de plantas

Etapa 3: Elongacin y enraizamiento.

Elongacin: es necesaria en especies con hbito

de multiplicacin en roseta.

Tratamientos:

Medio sin citoquinina.

Uso de carbn activado.

Uso de giberelinas.

Crecimiento en oscuridad.

Micropropagacin de plantas

Etapa 3: Elongacin y enraizamiento.

Enraizamiento:

In vitro o ex vitro

Auxinas: AIB, ANA

Sustratos

Enraizamiento ex vitro de A. flaccida.

Enraizamiento in vitro de A. sellowiana.

Micropropagacin de plantas

Principal problemtica en esta etapa.

Capacidad de enraizamiento dependiente del genotipo.

Conexin raz parte area

Micropropagacin de plantas

Etapa 4: Aclimatacin
Objetivo:
Optimizar la transferencia del ambiente in vitro a condiciones de
invernculo o campo.
Minimizar prdidas y acelerar el proceso.

PLANTAS OBTENIDAS IN
VITRO:

Hojas delgadas

Tallos dbiles

Races dbiles y poco
funcionales

Conexin tallo-raz incompleta

Baja tasa fotosinttica

PROCESO GRADUAL:

Disminucin de la HR

Crecimiento autotrfico

Condiciones spticas.

Micropropagacin de plantas

Etapa 4: Aclimatacin
Procedimiento:

Micropropagacin de plantas

Etapa 4: Aclimatacin

Micropropagacin de plantas

Etapa 4: Aclimatacin

Plantas in vitro presentan poca capacidad de retencin de agua.

Micropropagacin de plantas

Etapa 4: Aclimatacin

Dark respiration and net photosynthesis measured at 80 mol m-2 s-1 (PPFD)
during acclimatization of micropropagated (A) Spathiphyllum and (B) Calathea,
for in vitro (open symbols) and ex vitro (closed symbols) formed leaves.

Micropropagacin de plantas

Acca sellowiana, Guayabo del pas

Etapa 0

Etapa 1

Etapa 2

Etapa 4
Etapa 3

Micropropagacin de plantas

Micropropagacin por brotacin de yemas adventicias.

Mtodo directo: Saintpaulia ionantha. Violeta africana

Micropropagacin de plantas

Micropropagacin por brotacin de yemas adventicias.

Mtodo indirecto: Prunus sp.

Feeney, 2007.

Micropropagacin de plantas

Micropropagacin por brotacin de yemas adventicias.

Formacin de callo/brotes a partir de explantos foliares en Arndano,

en respuesta al agregado de citoquinina.

Micropropagacin de plantas

Dificultades que presentan las especies leosas in vitro.

Menor capacidad regenerativa

Efecto de dormancia en yemas

Induccin de rejuvenecimiento

Menor tasa de multiplicacin

Mayor oxidacin inicial del explante

Desinfeccin ms dificultosa

Enraizamiento y aclimatacin limitantes

Micropropagacin de plantas

Costos de la micropropagacin
Capital para la instalacin del laboratorio
Costo de la mano de obra
Costo de los materiales
Caractersticas del comportamieno in vitro del material a propagar

Facilidad de establecimiento, rejuvenecimiento, etc.

Tasa de multiplicacin

Enraizamiento in vitro/ex vitro

Prdidas que ocurren en cada etapa del proceso

contaminacin

hiperhidricidad

% plantas que no enraizan

% plantas que no sobreviven la aclimatacin

Micropropagacin de plantas

Costos de la micropropagacin
Componente del costo

Costo capital
(Edificaciones y equipamiento)

27.3

Salarios
(Laboratorio, invernculo, oficina)

63.8

Funcionamiento
(Prod. Qumicos, energa, agua,
mantenimiento, imprevistos)

8.9

En base a un laboratorio que produce 3 millones de plantas al ao

(800 a 1400 m2).