Kit ELISA de la prueba PLAC

Inmunoensayo enzimtico para la determinacin

cuantitativa de Lp-PLA2 en el plasma y suero humano

90123

www.plactest.com

diaDexus, Inc.
349 Oyster Point Blvd.
South San Francisco, CA 94080 USA
Tel: 1-877-PLACTEST (1-877-752-2837)
Fax: 1-650-246-6499
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mdi Europa GmbH
Langenhagener Str. 71
30855 Hannover-Langenhagen, Germany
Clave de smbolos
Nmero de catlogo

Dispositivo mdico de diagnstico in vitro

PLATE

Placa recubierta con

anticuerpos

Lote

CAL

Calibrador

Fecha de caducidad

CONTROL LOW

Control bajo

Guardar entre 2 y 8 C

CONTROL HIGH

Control alto

Irritante

WASH

Buffer de lavado

Consulte las instrucciones de uso

CONJ

Conjugado

Fabricante

TMB

Substrato TMB

Representante autorizado en la Comunidad

Europea

STOP

Solucin de paro

Conformidad europea

Lea este inserto completamente antes de utilizar el producto. Siga las instrucciones
cuidadosamente cuando realice las pruebas. Si no se siguen las instrucciones se pueden
obtener resultados inexactos.
Este producto est cubierto por los nmeros de patentes norteamericanas: www.diadexus.com/legal/patents.php
European Patent Nos. 658205 and 673426
Patentes adicionales pendientes.

y PLAC son marcas comerciales de diaDexus, Inc., registradas en los Estados Unidos.
P/N 30035-07ES

2012-11-08
Copyright 2012 diaDexus, Inc. Todos los derechos reservados.

USO PREVISTO

El kit ELISA de la prueba PLAC de diaDexus es un inmunoensayo enzimtico para la determinacin

cuantitativa de Lp-PLA2 (fosfolipasa A2 asociada a lipoprotenas) en plasma o suero humano, para usarlo
junto con la evaluacin clnica y la valoracin de riesgo del paciente, como ayuda en la prediccin del
riesgo de cardiopata coronaria e ictus isqumico asociados con la aterosclerosis.

RESUMEN Y EXPLICACIN
La Lp-PLA2 es una serina lipasa calcio-independiente que est asociada tanto con una lipoprotena de
baja densidad (LDL) y, en menor medida, con una lipoprotena de alta densidad (HDL) en el plasma y el
suero humano [1] y se diferencia de otras fosfolipasas, tales como cPLA2 y sPLA2 [2]. La Lp-PLA2 es
producida por macrfagos y otras clulas inflamatorias y se expresa en lesiones aterosclerticas
avanzadas en mayor concentracin que en las lesiones tempranas [3,4]. Varias lneas de evidencia
sugieren que la oxidacin de LDL juega un papel crtico en el desarrollo y progresin de la aterosclerosis
[5,6]. La Lp-PLA2 participa en la modificacin oxidativa de LDL hidrolizando la fosfatidilcolina oxidada
generando lisofosfatidilcolina y cidos grasos libres oxidados, ambos, productos altamente
proinflamatorios que contribuyen a la formacin de placas aterosclerticas [7,8,9]. La Lp-PLA2 ha
demostrado variaciones intra- e inter-individuales modestas, acorde con otros marcadores de lpidos
cardiovasculares y sustancialmente menores que la protena C-reactiva (PCR). Adems, la Lp-PLA2 no
se eleva en condiciones inflamatorias sistmicas, y puede ser un marcador ms especfico de
inflamacin vascular. La variacin biolgica relativamente pequea de la Lp-PLA2 y su especificidad
resultan valiosas en la deteccin y monitoreo del riesgo cardiovascular [10,11].
Se encontraron niveles elevados de Lp-PLA2, medidos por inmunoensayo, en pacientes con cardiopata
coronaria (CHD, Coronary heart disease) probada angiogrficamente, comparados con controles
apareados por edad [1]. En un estudio retrospectivo, de casos y controles, se analizaron muestras de
hombres hipercolesterolmicos (n=1740), el West of Scotland Coronary Prevention Study (Estudio de
prevencin coronaria del oeste de Escocia, WOSCOPS), se observ que los sujetos del quintil ms alto
de los niveles de Lp-PLA2 presentaron el doble de riesgo de sufrir cardiopata coronaria comparados
con los del quintil ms bajo [12]. Adems, se demostr que la asociacin de Lp-PLA2 con riesgo de CHD
es independiente de LDL y otros marcadores de inflamacin: la protena C-reactiva, el nmero de
glbulos blancos y fibringeno. Los autores del estudio establecieron en sus conclusiones, Elevados
niveles de fosfolipasa A2 asociada a lipoprotena parecen ser un fuerte factor de riesgo para la
cardiopata coronaria, ste es un hallazgo que tiene implicaciones para la aterognesis y la valoracin
del riesgo. En otro informe, en el que se utilizaron muestras del estudio Atherosclerosis Risk in
Communities (Riesgo de aterosclerosis en comunidades, ARIC), y se hizo el seguimiento de 12.819
hombres y mujeres aparentemente sanos, de mediana edad (45 a 64 aos), durante seis a ocho aos,
se descubri que la Lp-PLA2 era un importante indicador del riesgo de CHD. Para individuos con LDL
inferior a 130 mg/dL, la Lp-PLA2 fue significativamente e independientemente asociada con un riesgo
dos veces ms alto para sufrir episodios de CHD, tales como revascularizacin, infarto de miocardio y
muerte por cardiopata [13].
El estudio ARIC se volvi a analizar para determinar el riesgo de accidente cerebrovascular asociado con
el aumento de los niveles de Lp-PLA2. Se identificaron un total de 223 eventos cerebrovasculares en el
grupo de estudio, de estos 194 (87%) fueron isqumicos asociadas con aterosclerosis, segn la
clasificacin de los investigadores del estudio ARIC. Esta proporcin de ictus isqumico con el total es
consistente con el porcentaje encontrado en la poblacin general [14]. Los resultados de este estudio
indicaron que la Lp-PLA2 era un fuerte indicador de estos ictus isqumicos, con casi el doble de aumento
en el riesgo, incluso despus del ajuste de la tensin sangunea, los lpidos, la diabetes, el ndice de
masa corporal y otros marcadores inflamatorios [15].

PRINCIPIO DE LA PRUEBA
El kit ELISA de la prueba PLAC de diaDexus es un inmunoensayo enzimtico de tipo sndwich que
utiliza dos anticuerpos monoclonales altamente especficos para la medicin directa de la concentracin
de Lp-PLA2 en plasma y suero humano. El sistema de ensayo utiliza anticuerpos monoclonales anti-LpPLA2 (2C10), dirigidos contra la Lp-PLA2 para la inmovilizacin en fase slida en la placa de micropozos.
La muestra se coloca en la placa de micropozos y se incuba durante 10 minutos a una temperatura de
20 a 26 C. En seguida, se agrega un segundo anticuerpo monoclonal anti-Lp-PLA2 (4B4) marcado con
2

la enzima peroxidasa de rbano (HRP) y se hace reaccionar con el antgeno inmovilizado a una
temperatura ambiente de 20 a 26 C durante 180 minutos, lo que provoca que las molculas de Lp-PLA2
queden capturadas entre la fase slida y los anticuerpos marcados con la enzima. Los pocillos se lavan
con buffer suministrado para eliminar todo el antgeno no unido. A continuacin, se aade el sustrato,
tetrametilbenzidina (TMB), y se incuba a una temperatura ambiente de 20-26 C durante 20 minutos, lo
que da lugar a la aparicin de un color azul. El desarrollo del color se detiene con la adicin de la
solucin de para que cambia el color a amarillo. La absorbancia de la conversin enzimtica del sustrato
se determina espectrofotomtricamente a 450 nm y es directamente proporcional a la concentracin de
Lp-PLA2 presente. Se usa un conjunto de calibradores Lp-PLA2 para realizar el grfico de una curva
estndar, graficando absorbancia contra concentacin de Lp-PLA2, por medio de la cual se determina la
concentracin de Lp-PLA2, por la que se puede determinar la concentracin de Lp-PLA2 en la muestra de
la prueba. Se suministran dos niveles de controles para supervisar el rendimiento dentro del rango clnico
del ensayo.

REACTIVOS Y MATERIALES
Materiales provistos con el kit: (suficiente para 96 pocillos)
N. DE
SMBOLO
DESCRIPCIN DEL COMPONENTE
REFERENCIA
60001

PLATE

60006
60007
60008
60009
60010
60011
60002

CAL

WASH

60003

CONJ

60004

TMB

60005

STOP

65009

CONTROL
LOW

65010

CONTROL
HIGH

FMD-01-026

Placa recubierta con anticuerpos

Placa de micropozos recubierta con
anticuerpos monoclonales de ratn antiLp-PLA2 (2C10)
Calibradores
(0, 50, 100, 250, 500 y 1000 ng/mL)
Antgeno recombinante Lp-PLA2 de
diaDexus (DDX-RA) en un diluyente
estabilizante de protenas

Buffer de lavado 20X

Detergente no inico en una solucin
amortiguada
Conjugado
Anticuerpo monoclonal de ratn anti-LpPLA2 (4B4) conjugado con peroxidasa
de rbano en un reactivo amortiguado
con protenas transportadoras bovinas y
murinas
Reactivo TMB
3,3,5,5-tetrametilbenzidina en un buffer
ligeramente cido
Solucin de paro
HCl 1N
Control bajo (~150 ng/mL)
Antgeno recombinante Lp-PLA2 de
diaDexus (DDX-RA) en una matriz
lquida amortiguada con protena (BSA)
Control alto (~350 ng/mL)
Antgeno recombinante Lp-PLA2 de
diaDexus (DDX-RA) en una matriz
lquida amortiguada con protena (BSA)
Certificado de anlisis - Rangos de
control
Los rangos de control para cada lote
aparecen indicados en el certificado de
anlisis
3

CANTIDAD
1

1 juego, 0,25 mL
cada uno

50 mL

23 mL

11 mL

11 mL
1 frasco,
0,5 mL

1 frasco,
0,5 mL

1 en cada kit

MATERIALES NECESARIOS, NO INCLUIDOS:

Pipetas de precisin de uno o varios canales: 0,02mL, 0,10mL, 0,20 mL

Puntas de pipeta desechables (se debe utilizar una nueva punta de pipeta para cada adicin de
las diferentes muestras o reactivos durante el procedimiento de ensayo)
Mezclador vortex o equivalente
Agua desionizada
Utilizar lector de placas de micropozos con un ancho de banda de 10 nm o menos y una
densidad ptica (D.O.) en el rango de 3 o ms a 450 nm.
o Antes de usarlo, asegrese que el lector de placas de micropozos est en buenas
condiciones segn el manual del instrumento.
Software capaz de realizar un ajuste de curva punto a punto para el clculo de la concentracin
del analito a partir de la densidad ptica (opcional)

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

Para uso en diagnstico in vitro.

Trate todas las muestras de sangre, calibradores y controles, y la placa de micropozos como
material biolgico potencialmente peligroso.
La exposicin de las muestras a temperatura ambiente debe minimizarse a menos de 6 horas
(incluyendo tiempo utilizado para la extraccin de sangre, el procesamiento, el transporte y el
tiempo de anlisis de la muestra en el laboratorio). Esto no incluye la incubacin en la placa
ELISA.
El almacenamiento de las muestras a -20 C durante ms de 24 horas no est recomendado.
Algunos componentes estn etiquetados con precauciones de seguridad. Consulte la seccin de
Informacin sobre seguridad del producto.
Deseche los reactivos sobrantes de acuerdo a los reglamentos aplicables.
No utilice los reactivos despus de su fecha de caducidad.
No mezcle reactivos con diferente nmero de lote.
No use el producto si existen evidencias de contaminacin.
La hemlisis puede afectar los resultados. No analice muestras hemolizadas.
Se recomienda incluir en cada anlisis los controles bajo y alto. Si los valores de control no se
encuentran dentro de los lmites de aceptacin, repita el ensayo. Es posible que sea necesario
realizar pruebas de control de calidad adicionales en conformidad con los reglamentos locales y
estatales.
Para evitar resultados errneos, almacene los materiales segn se indica.
Los rangos de control provistos se derivaron de pruebas replicadas de lotes de control
especficos utilizando los kits ELISA de la prueba PLAC y deben utilizarse como orientacin. Las
medias de los laboratorios individuales pueden variar de los valores listados. Las variaciones
entre los laboratorios pueden ser ocasionadas por diferencias en tcnicas o por la variabilidad de
los reactivos. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos aceptables.

PREPARACIN Y ALMACENAMIENTO DE LOS REACTIVOS

Almacene los kits de la prueba sin abrir entre 2 y 8 C inmediatamente despus de haberlo recibido.
Adems, mantenga la placa de micropozos en la bolsa de aluminio sellada con desecante para minimizar
la exposicin a la humedad. Los kits de la prueba abiertos se mantendrn estables hasta la fecha de
caducidad indicada, siempre que se conserven como se ha descrito anteriormente.
Prepare el buffer de lavado 1X diluyendo el buffer de lavado 20X (WASH) 1:20 con agua desionizada.
Mezcle 1 parte de WASH con 19 partes de agua desionizada. Conserve a temperatura ambiente (entre
20 y 26 C). Utilice el buffer de lavado 1X en un plazo de cuatro semanas desde la fecha de preparacin.
Deseche esta solucin preparada, si observa crecimiento microbiano.

RECOLECCIN Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS

El ayuno no es necesario.
Tome las muestras de sangre en:
o tubos con gel de separacin para suero o plasma
o tubos para obtener plasma con heparina o EDTA
o cualquier tubo de recoleccin de suero.
Procese las muestras mediante procedimientos de separacin estndar.
o Las muestras se deben centrifugar y separar en el transcurso de las cuatro horas
posteriores a la venopuncin, siguiendo las buenas prcticas de laboratorio, pero no
despus de que hayan transcurrido 36 horas desde la extraccin de sangre. Las
muestras se deben almacenar refrigeradas (de 2 a 8 C).
Muestras de sangre sin procesar (separar):
o Almacene y transporte las muestras con paquetes fros, para asegurar que se mantenga
la temperatura (de 2 a 8 C) y procselas en mximo 36 horas siguientes a la toma.
Muestras procesadas:
o Las muestras se deben almacenar refrigeradas de 2 a 8 C durante un mnimo de 24
horas despus de que la muestra haya sido extrada antes de que pueda tener lugar la
prueba.
o Las muestras se pueden analizar hasta 7 das despus de que la muestra haya sido
extrada siempre que se hayan almacenado de 2 a 8 C.
o Para un almacenamiento a largo plazo, las muestras de suero/plasma se deben
almacenar al menos a -70 C. Una vez descongelada, la muestra se puede analizar
hasta 7 das despus, siempre que se haya almacenado de 2 a 8 C. Las muestras
pueden congelarse y descongelarse dos veces sin que eso afecte la cuantificacin de la
Lp-PLA2.

PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO

Calibracin
Cada anlisis de placas de micropozos o tiras se debe calibrar utilizando una curva de calibracin
completa (6 puntos). La curva estndar es generada utilizando el modelo de ajuste de curva punto a
punto. Verifique la curva de calibracin con al menos dos niveles de controles siguiendo los requisitos del
laboratorio. Calibre y analice los controles en cada corrida.
Control de calidad
Analice los controles alto y bajo con cada corrida. Si los valores de control no se encuentran dentro de
los lmites de aceptacin, repita el ensayo. Es posible que sea necesario realizar pruebas de control de
calidad adicionales, en conformidad con los reglamentos locales, estatales y/o federales o los requisitos
de acreditacin.
Pasos de preparacin
1. Deje que la placa de micropozos, el conjugado (CONJ), el buffer de lavado y el TMB lleguen a
temperatura ambiente (20 a 26 C) antes de su uso.
2. Saque de la bolsa de aluminio la placa de micropozos y retire de el marco el nmero necesario de
tiras de micropozos recubiertos. Vuelva a sellar completamente la bolsa de aluminio que contiene las
tiras no utilizadas, junto con el desecante incluido en la bolsa, y almacnela de 2 a 8 C.
3. Prepare el buffer de lavado 1X diluyendo el buffer de lavado 20X 1:20 con agua desionizada (1 parte
de buffer de lavado y 19 partes de agua desionizada). Conserve a temperatura ambiente (entre 20 y
26 C). Utilice el buffer de lavado 1X en un plazo de cuatro semanas desde la fecha de preparacin.
4. Si las muestras a utilizar estn congeladas, deje que se descongelen completamente a 2-8 C y
mantngalas en hielo o entre 2-8 C, en todo momento hasta su uso.
5. Conserve los controles de 2 a 8 C o en hielo hasta su uso.
6. Mezcle completamente las muestras y controles, con ayuda de un mezclador tipo vortex. Evite la
formacin de espuma.

Incubacin de las muestras

1. Una vez mezclados, administre 20 L de los calibradores, las muestras y los controles en los
pocillos correspondientes a cada uno, con una pipeta de precisin adecuada de bajo volumen. Utilice
una pipeta calibrada y una punta nueva para cada calibrador, control o muestra.
2. Deje que las muestras se incuben en la placa durante 10 2 minutos antes de aadir el conjugado.
3. Una vez que el conjugado haya alcanzado la temperatura ambiente (20 a 26C), pipetee 200 L en
los pocillos correspondientes de la placa de micropozos. No toque las muestras con la punta de la
pipeta al adicionarlo, con el fin de evitar una contaminacin. Si llega a tocar la muestra, cambie la
punta de la pipeta y siga aadiendo el conjugado a los pocillos.
4. Incube durante 3 horas a temperatura ambiente (20 a 26C).
5. Al final del periodo de incubacin, lave cuatro (4) veces los micropocillos con al menos 300 L del
buffer de lavado 1X (una vez preparado y a temperatura ambiente). (NO USE AGUA DEL GRIFO o
DESTILADA).
6. Golpee suavemente la placa de micropozos sobre papel absorbente despus del ltimo lavado.
Inmediatamente (en menos de 2 minutos), proceda al siguiente paso. No permita que se seque la
placa de micropozos.
Incubacin del sustrato
1. Pipetee 100 L de reactivo TMB a temperature ambiente en cada pocillo.
2. Mueva suavemente la placa de micropozos sobre una superficie plana de 10 a 15 segundos para
que se mezcle.
3. Incube la placa de micropozos a temperatura ambiente (20 a 26C) durante 20 minutos en la
oscuridad.
4. Detenga la reaccin, aadiendo a cada pocillo 100 L de la solucin de paro a temperature
ambiente.
5. Mueva suavemente la placa de micropozos sobre una superficie plana por 20 a 30 segundos para
que se mezcle. Es importante asegurarse de que el color azul cambie completamente a color
amarillo.
6. Seque la humedad de la parte inferior de la placa de micropozos con una toalla de papel.
7. En el transcurso de los 15 minutos posteriores a la adicin de la solucin de paro, lea la densidad
ptica (D.O.) a 450 nm mediante un lector de placas de micropozos.

NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO

Almacene todos los reactivos de la prueba de 2 a 8 C. Con excepcin de los calibradores y los
controles, deje que los reactivos lleguen a temperatura ambiente (20 a 26C) antes de usarlos.
Un frasco de 23 ml de reactivo puede requerir una hora o ms para llegar a la temperatura
ambiente. Mantenga los calibradores y los controles de 2 a 8 C o en hielo hasta su uso.
Deje que la placa de micropozos llegue a temperatura ambiente (20 a 26C) antes de abrir la
bolsa. Guarde las tiras en la bolsa de aluminio con desecante para minimizar la exposicin a la
humedad. Mantenga siempre las tiras no utilizadas dentro de la bolsa de aluminio con desecante
y asegrese de sellarla completamente.
Tenga siempre preparado el reactivo del paso siguiente entre 2 y 3 minutos antes de la etapa de
lavado.
Para obtener una medicin exacta de las muestras, la adicin de las muestras, los calibradores y
los controles debe ser precisa. Pipetee cuidadosamente utilizando nicamente equipos
calibrados.
Este ensayo se puede llevar a cabo mediante cualquier mtodo de lavado validado.
La carga de muestras en la placa debe completarse en 20 minutos o menos. El uso de placas de
transferencia sin fijacin y pipetas multicanal puede facilitar el proceso de carga.
Las microplacas deben incubarse al aire libre. No utilice los selladores de placas o cubiertas.
No utilice un agitador de placas durante las etapas de incubacin.

CLCULO DE LOS RESULTADOS

1. Construya una curva de calibracin representando la absorbancia obtenida para cada calibrador en
el eje "Y" frente a la concentracin de Lp-PLA2 en ng/mL en el eje "X". Utilice un ajuste de curva
punto a punto con el software informtico adecuado para construir la curva de calibracin.
2. Usando el valor de absorbancia para cada muestra y control, determine la concentracin
correspondiente de la Lp-PLA2 en ng/mL en la curva de calibracin.

EJEMPLO DE CURVA DE CALIBRADOR

En una curva de calibracin, las lecturas de D.O. a 450 nm se representan en el eje "Y" del grfico, frente
a las concentraciones Lp-PLA2 (ng/mL) que se muestran en el eje "X". Esta curva de calibracin sirve
nicamente para efectos ilustrativos. El usuario debe generar una curva de calibracin para cada ensayo
realizado.
Absorbancia
(D.O. a 450 nm)
0,048
0,348
0,623
1,269
1,868
2,402

Absorbancia (450 nm)

Lp-PLA2
(ng/mL)
0
50
100
250
500
1000

Lp-PLA2 (ng/mL)

LIMITACIONES
Procedimiento

Se obtendrn resultados fiables y reproducibles cuando el procedimiento del ensayo se lleve a

cabo con una comprensin completa de las instrucciones del prospecto (inserto) y siguiendo las
buenas prcticas de laboratorio.
Los procedimientos de lavado son fundamentales. Un lavado insuficiente dar lugar a una mala
precisin y a lecturas de absorbancia falsamente elevadas .
Como con cualquier sistema de inmunoensayo, particularmente los que emplean anticuerpos
monoclonales de ratn, existe la posibilidad de interferencia por los anticuerpos antimurnicos

humanos (HAMA) u otras interferencias heteroflicas presentes en la muestra, que podran

producir valores falsamente elevados o disminuidos.
Al igual que ocurre con cualquier mtodo analtico, existe la posibilidad de que sustancias o
factores no probados (p. ej. tcnicos o de procedimiento) interfieran en la prueba y provoquen
resultados falsos. Los resultados deben considerarse en conjuncin con otros procedimientos
clnicos y analticos.

Interpretacin clnica

Los niveles de Lp-PLA2 deben interpretarse junto con los hallazgos clnicos y otras pruebas
diagnsticas.
Esta prueba no sustituye a las pruebas de colesterol en sangre u otros factores de riesgo
tradicionales identificados para la cardiopata coronaria o el ictus isqumico.

VALORES ESPERADOS
Muestras de sujetos masculinos (n=251) y sujetos femeninos (n=174) aparentemente saludables, en un
rango de edad clnicamente relevante que va desde 40 a 70 aos, fueron evaluadas con el kit ELISA de
la prueba PLAC de diaDexus. La poblacin de referencia fue representada por los siguientes grupos
tnicos: AfroAmericanos n=26, Caucsicos n=390, Hispanos n=8 y no especificados n=1. En la siguiente
tabla aparecen las distribuciones de los valores Lp-PLA2 para toda la poblacin y divididas por gnero:
Lp-PLA2 ng/mL

126

Sujetos
femeninos
(n=174)
120

Sujetos
masculinos
(n=251)
131

20

174

169

179

33

201

188

205

50

235

228

244

67

262

252

268

80

289

285

293

95

369

342

376

Percentil

Todos (n=425)

Se presentan estos rangos de referencia nicamente como directrices y no pretenden sealar "valores
crticos" o lmites de decisiones mdicas. Cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos de
referencia. Se puede encontrar una gua para establecer intervalos de referencia en CLSI Standard C28A2 (How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline Second Edition). Basndose en la concentracin media de Lp-PLA2 en la poblacin de 235 ng/mL, se ha
sugerido usar ese valor como un umbral de decisin clnica [16]. Ms recientemente, un panel de
consenso de expertos ha sugerido aplicar un umbral de decisin de 200 ng/mL, basados en un
significativo conjunto de publicaciones relacionadas con la evaluacin del riesgo de la Lp-PLA2 [17].

CARACTERSTICAS DE RENDIMIENTO
Sensibilidad
El lmite mnimo de deteccin es 0,34 ng/mL, calculado mediante la interpolacin de la media ms dos
desviaciones estndar de 20 repeticiones del calibrador de 0 ng/mL de Lp-PLA2.
Precisin del ensayo
La variabilidad de intraensayo e interensayo se determin analizando cuatro pools (mezcla) de muestras
de suero humano con concentraciones de Lp-PLA2 correspondientes a todo el rango de calibracin del
ensayo. Las mezclas de suero se analizaron por duplicado, con dos tiras distintas cada da, durante 5
das, en cuatro placas al da, utilizando un solo lote de reactivos. A continuacin se resumen los datos:
8

Mezcla de sueros

Concentracin media
de Lp-PLA2 (ng/mL)

1
2
3
4

143
211
368
830

%CV
intraensayo
n=80
6,2
4,1
5,1
9,5

%CV
interensayo
n=20
4,6
5,1
8,5
8,7

%CV
total
n=80
7,7
6,6
9,9
12,8

En un estudio de repetibilidad llevado a cabo en un conjunto de 108 muestras de suero, los resultados
del ensayo determinados a partir de los primeros pocillos (ensayo de un solo punto) se compararon con
los resultados promedio de dos mediciones sucesivas (pocillos duplicados). Las concentraciones de LpPLA2 de las muestras resultaron en un rango de entre 87 y 575 ng/mL, y el %CV promedio entre
repeticiones fue del 2,3%. En el anlisis de regresin lineal, los resultados de un solo punto estn
altamente correlacionados con el promedio de los resultados por duplicados: coeficiente de correlacin
r=0,997 (pendiente 1,0 y ordenada en el origen -1,3 ng/mL).
Linealidad
Se mezclaron seis muestras de suero con concentraciones conocidas y elevadas de Lp-PLA2 con seis
muestras de suero con concentraciones conocidas y bajas de Lp-PLA2. El porcentaje de recuperacin se
determin dividiendo el valor medido entre el valor esperado, multiplicado por 100. El porcentaje de
recuperacin promedio fue del 93%, lo que demuestra la linealidad de las muestras diluidas en un rango
de 151 a 810 ng/mL de Lp-PLA2.
Sustancias interferentes
Se evaluaron sustancias endgenas encontradas en sangre y sustancias exgenas (medicamentos con
y sin receta mdica) para determinar la interferencia en el ensayo. Se aadieron posibles sustancias
interferentes a cinco muestras de suero individuales con valores de Lp-PLA2 comprendidas entre 163 y
908 ng/mL. No se observ ninguna interferencia apreciable para las siguientes sustancias en los niveles
de adicin analizados.
Endgenas
Posible interferente Concentracin de la
prueba
Bilirrubina
20 mg/dL
Colesterol
500 mg/dL
Hemoglobina
1250 mg/dL
Triglicridos
3000 mg/dL
Albmina total*
~6500 mg/dL

Exgenas (medicamentos sin receta, etc.)

Posible interferente Concentracin de la
prueba
Paracetamol
1,66 mol/L
Aspirina
3300 mol/L
Atorvastatina
20 mol/L
Bisulfato de clopidogrel
140 mol/L
Difenhidramina
19,6 mol/L
Fenofibrato
125 mol/L
Lisinopril
0,74 mol/L
Metformina
310 mol/L
Niacina
6500 mol/L
Pravastatina
10 mol/L
Tolbutamida
2400 mol/L
Vitamina C
227 mol/L
Warfarina
64,9 mol/L

* 2,5 g/dL de albmina aadidas a la

mezcla de plasma, presumiblemente de
4 g/dL de albmina

ESTUDIOS CLNICOS
Cardiopata coronaria
Para determinar la eficacia del kit ELISA de la prueba PLAC de diaDexus como factor pronstico del
riesgo para la cardiopata coronaria (CHD), se midieron los niveles de Lp-PLA2 en 1348 muestras de
plasma con EDTA del banco de un gran estudio epidemiolgico llevado a cabo en varios centros,
denominado Atherosclerosis Risk In Communities (Riesgo de aterosclerosis en comunidades, ARIC),
patrocinado por National Institutes of Healths National Heart, Lung, and Blood Institute (Instituto Nacional
de Salud del Corazn, los Pulmones y la Sangre). Se hizo el seguimiento a los participantes para
estudiar el desarrollo de CHD durante seis a ocho aos. Las muestras utilizadas para la prueba PLAC
eran de participantes con edades comprendidas entre los 47 y 69 aos, que no tenan CHD en el
momento de la extraccin de sangre. Este fue un estudio de casos-cohorte, donde las muestras de todos
los casos con CHD (607) se analizaron junto con 741 participantes apareados correctamente sin CHD en
el momento censor (controles).*
Se utilizaron los modelos de regresin de Cox para evaluar la asociacin de Lp-PLA2 y CHD en un
anlisis de una sola variable (Modelo 1), un anlisis de una sola variable ajustado a los datos
demogrficos (Modelo 2), y un modelo con mltiples variables ajustado a los datos demogrficos y otros
factores de pronstico (Modelo 3). Se utilizaron los puntos de corte de los terciles alto y bajo de Lp-PLA2,
generados a partir de los datos del estudio ARIC establecidos (420 y 310 ng/mL, los percentiles 67 y 33
respectivamente), los ndices de peligro de los anlisis de regresin de Cox demostraron que la Lp-PLA2
era un factor pronstico significativo de riesgo significativo para CHD, para los niveles ms alto e
intermedio, cuando se comparaban con el nivel ms bajo de Lp-PLA2, para todos los participantes (vase
Tabla 1). Se debe observar que diferentes puntos de corte pueden ser apropiados para diferentes
poblaciones clnicas.
* NOTA: 86 resultados (5,5%) se encontraron fuera del criterio de aceptacin del ensayo y se excluyeron
de los anlisis de datos.

Tabla 1. ndices de riesgo de CHD para sujetos en todos los niveles de LDL
ndice de riesgo de Lp-PLA2 (IC del 95%, valor de p)*
Lp-PLA2
N. de casos de
CHD/total de sujetos
en la categora
Modelo 1
Modelo 2
Modelo 3

Tercil 1
127/366
(34,7%)
1,0

Tercil 2

Tercil 3

192/444
(43,2%)

288/538
(53,5%)

1,49

2,50

(1,11 a 1,99, p=0,008)

(1,89 a 3,31, p<0,001)

1,0

1,24

1,76

(0,92 a 1,66, p=0,154)

(1,32 a 2,36, p<0,001)

1,0

1,71

2,12

(1,06 a 2,75, p=0,029)

(1,29 a 3,48, p=0,003)

*Se us el tercil ms bajo con valores de Lp-PLA2 <310 ng/mL como grupo de referencia.
Modelo 1: anlisis con una sola variable
Modelo 2: ajustado por edad, raza y gnero
Modelo 3: Modelo 2, ms ajuste segn el estado actual de tabaquismo, tensin sangunea, diabetes, HDL,
LDL, PCR e Interaccin Lp-PLA2 - LDL

Se encontr una interaccin estadstica entre Lp-PLA2 y LDL. Por lo tanto, result apropiado evaluar los
ndices de riesgo de Lp-PLA2 en los subgrupos LDL alto y bajo. El valor medio de LDL para la poblacin
cohorte fue 130 mg/dL. Esto defini los subgrupos LDL alto y bajo. Las tablas 2a y 2b representan el
anlisis de una sola variable de los ndices de riesgo en los subgrupos de LDL alto y bajo. Los ndices de
riesgo se calcularon a partir de la regresin de Cox empleando el mtodo ponderado de cohorte de
casos con el ajuste Barlow, n=1348.

10

Tabla 2a. ndices de riesgo de CHD para sujetos con LDL <130 mg/dL
ndice de riesgo de Lp-PLA2 (IC del 95%)*
Lp-PLA2

ndice de riesgo
N. de casos de
CHD/total de sujetos
en la categora

Tercil 1

Tercil 2

1,0
51/215
(23,7%)

Tercil 3

2,17

3,52

(1,41 a 3,36)

(2,25 a 5,49)

75/195
(38,5%)

77/163
(47,2%)

*Se us el tercil ms bajo con valores de Lp-PLA2 <310 ng/mL como grupo de referencia.

Los puntos de corte de la Lp-PLA2 se basan en la poblacin del estudio ARIC en todos los niveles de LDL.

Tabla 2b. ndices de riesgo de CHD para sujetos con LDL >130 mg/dL
ndice de riesgo de Lp-PLA2 (IC del 95%)*
Lp-PLA2

ndice de riesgo
N. de casos de
CHD/total de sujetos
en la categora

Tercil 1

Tercil 2

Tercil 3

3,15

3,66

5,10

(2,08 a 4,77)

(2,43 a 5,51)

(3,43 a 7,57)

110/234
(47,0%)

126/247
(51,0%)

169/294
(57,5%)

*Se us el tercil ms bajo para el subgrupo con LDL <130 con valores de Lp-PLA2 <310 ng/mL como grupo de referencia.
Los puntos de corte de la Lp-PLA2 se basan en la poblacin del estudio ARIC con LDL 130 mg/dL.

En el subgrupo de LDL alto, los grupos de terciles especficos del subgrupo ofrecieron puntos de corte de
350 y 460 ng/mL; el ndice de riesgo aument con valores ms altos de Lp-PLA2. Por lo tanto, para
individuos con un LDL alto, se debe considerar un punto de corte Lp-PLA2 ms alto. Est justificado
realizar investigacin adicional para evaluar la interaccin Lp-PLA2 - LDL en el subgrupo con LDL alto.
Para el total de la poblacin, la Lp-PLA2 fue un factor pronstico significativo de riesgo para CHD para los
grupos alto e intermedio frente al grupo bajo (de referencia) de Lp-PLA2.
Ictus isqumico
Se evaluaron los niveles de Lp-PLA2 en el estudio ARIC para determinar su eficacia como factor
pronstico del riesgo de ictus. Se identificaron un total de 223 episodios de ictus en el grupo de estudio,
de estos 194 (87%) fueron ictus isqumicos asociados con aterosclerosis, segn la clasificacin de los
investigadores del estudio ARIC. Se dise un estudio de casos-cohorte similar, donde las muestras de
todos los casos de ictus isqumico (194) se analizaron con 762 participantes apareados apropiadamente
sin CHD o ictus en el momento censor (controles).
Al igual que en el estudio de riesgo de CHD, se utilizaron los modelos de regresin de Cox para evaluar
la asociacin de Lp-PLA2 e ictus en un anlisis de una sola variable (Modelo 1), un anlisis de una sola
variable ajustado a los datos demogrficos (Modelo 2), y un modelo de mltiples variables ajustado a los
datos demogrficos y otros factores de pronstico (Modelo 3), y todos los factores, incluyendo el estado
CHD (Modelo 4). En este estudio se aplicaron los mismos puntos de corte de terciles (420 y 310 ng/mL,
los percentiles 67 y 33 respectivamente), al igual que en los anlisis anteriores. Se mostr que la
condicin de CHD, por s misma, es un factor pronstico de riesgo, con un ndice de riesgo de 2,26 en un
modelo completamente ajustado. Los ndices de riesgo de los anlisis de regresin de Cox demostraron
que la Lp-PLA2 era un factor pronstico de riesgo significativo e independiente para el ictus isqumico
para los terciles ms altos, cuando se comparaban con el tercil ms bajo de Lp-PLA2, para todos los
participantes, con un aumento cercano al doble, incluso despus del ajuste de la diabetes, los lpidos, la
tensin sangunea, el estado de consumo de tabaco, el ndice de masa corporal (IMC) y otros
marcadores inflamatorios, as como el estado de CHD (vase la Tabla 3).

11

Tabla 3. ndices de riesgo de ictus isqumico para todos los sujetos

ndice de riesgo de Lp-PLA2 (IC del 95%, valor de p)*
Lp-PLA2

Tercil 1

Tercil 2

Tercil 3

N. de casos de ictus
isqumico/total de
sujetos
Modelo 1

47/283
(16,6%)

44/305
(14,4%)

103/368
(28,0%)

1,0

0,85
(0,57 a 1,29, p=0,45)
0,89
(0,59 a 1,35, p=0,58)
0,89
(0,58 a 1,36, p=0,59)
0,86
(0,56 a 1,31, p=0,48)

1,79
(1,27 a 2,52, p=0,0010)
2,09
(1,46 a 3,01, p=0,0001)
1,81
(1,22 a 2,69, p=0,0034)
1,75
(1,18 a 2,60, p=0,0057)

Modelo 2

1,0

Modelo 3

1,0

Modelo 4

1,0

*Se us el tercil ms bajo con valores de Lp-PLA2 <310 ng/mL como grupo de referencia.

Modelo 1:
Modelo 2:
Modelo 3:
Modelo 4:

anlisis con una sola variable

ajustado por edad, raza y gnero
Modelo 2, ms ajuste segn diabetes, LDL, HDL, tensin sangunea, tabaquismo, IMC y PCR
Modelo 3, ms ajuste segn CHD

Se llevaron a cabo anlisis adicionales para determinar si la Lp-PLA2 era predictiva de ictus isqumico en
todo el rango de tensin sangunea sistlica (SBP, systolic blood pressure) en la poblacin, y para
determinar si la tensin sangunea y la Lp-PLA2 eran aditivas en la valoracin del riesgo de ictus
isqumico. Los puntos de corte de los terciles de tensin sangunea sistlica fueron asignados por los
percentiles 33 y 67 de la poblacin (113 y 130 mm Hg, respectivamente). La poblacin del estudio se
er
er
dividi en rango bajo, medio y alto (1 , 2 y 3 tercil) de SBP y el rango bajo y alto de Lp-PLA2 (por
debajo y por encima de la media, 377 ng/mL en el estudio ARIC). El riesgo relativo de cada grupo se
er
compar con el riesgo de episodios asociados con el grupo en el 1 tercil de SBP y el grupo por debajo
de la mediana de Lp-PLA2 (Tabla 4).

Tabla 4. ndices de riesgo de ictus isqumico: Efectos aditivos de Lp-PLA2 y tensin

sangunea sistlica
Lp-PLA2

SBP
(mm Hg)

<113
113 a 130
>130

N. de casos de
ictus isqumico/
total de sujetos en
la categora
29/270
(10,7%)
60/337
(17,8%)
105/349
(30,1%)

Por debajo de
la mediana
68/478
(14,2%)

Por encima de
la mediana
126/478
(26,4%)

1,00

2,29
(p=0,03)
3,53
(p=0,0004)
6,75
(p<0,0001)

2,05
(p=0,06)
3,52
(p=0,0005)

Los individuos con concentracin de Lp-PLA2 por encima de la mediana del estudio ARIC y el tercil
superior de la tensin sangunea sistlica (>130 mm Hg) presentaron un ndice de riesgo de 6,75
(p<0,0001), comparado con los individuos que estaban por debajo de la mediana de Lp-PLA2 y en el
tercil ms bajo de tensin sangunea. Estos resultados indicaron que la Lp-PLA2 y la tensin sangunea
eran aditivos en su capacidad para predecir el riesgo, y que los individuos en los grupos ms altos de
ambas variables tenan el mayor riesgo de sufrir ictus isqumico asociado con aterosclerosis.

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INFORMACIN SOBRE SEGURIDAD DEL PRODUCTO

Juego de calibradores
(1-6), Control bajo y alto
R36/38
[Xi]
S26/36/37/39

Buffer de lavado 20X

R36/38
[Xi]
S26/36/37/39

Solucin de paro
R34/41
[Xi] S26/36/37/39

Conjugado, Reactivo TMB

[Xi]

R34

Causa quemaduras

R36

Irrita los ojos

R38

Irrita la piel

R41

Riesgo de lesiones oculares graves

En caso de contacto con los ojos, lvese inmediatamente con abundante agua y consulte a un
mdico
Use indumentaria y guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara

S26
S36/37/39

REFERENCIAS
[1]

Caslake MJ, Packard CJ, et al. (2000). Atherosclerosis 150: 413-9.

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Kudo I and Murakami M. (2002). Prostaglandins Other Lipid Mediat 68-69: 3-58.

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13