PRUEBAS

INMUNODIAGNOSTICAS
INMUNOLOGIA 2009
Dra. Virginia Bolaos de Corzo
Departamento de Microbiologa

FMVZ - USAC

 Las

respuestas inmunitarias contra la

mayora de los antigenos inducen la
produccin especifica de anticuerpos y
linfocitos T efectores.
Este reconocimiento entre el antigeno
anticuerpo o linfocito sienta las bases del
diagnostico inmunolgico.

 El

estudio de las inmunoreacciones se

realiza mediante el empleo de tcnicas
inmunolgicas basadas en la deteccin
de y evaluacin de la respuesta humoral
( anticuerpos y complemento) o de base
celular (linfocitos T y fagocitos).

SEROLOGIA

La medicin de las interacciones AntigenoAnticuerpo con fines diagnsticos.

Se realizan en 2 vas:
Utilizacin de anticuerpos especficos para
detectar el antigeno.(diagnostico directo)
Utilizacin de antigenos especficos para
detectar anticuerpos. (diagnostico indirecto)

 La

reaccin entre el Ag y el Ac es de
naturaleza fsica y qumica.
La fuerzas que los mantienen unidos,
son de tipo no covalente, como la
atraccin electrosttica, los puentes de
hidrgeno y las fuerzas de Van der
Waals y la exclusin del agua.

 Afinidad

de un anticuerpo es la fuerza o
intensidad de la unin, entre un sitio de
unin del anticuerpo y un determinante
antignico.
Avidez: es la fuerza con la que el
anticuerpo multivalente se une a un
antgeno multivalente.

Especificidad; capacidad de los anticuerpos de

distinguir y reaccionar con una estructura
qumica entre muchas.
Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona
con otro antgeno, cuando este y el antgeno
que estimulo la produccin del anticuerpo
especifico comparten un epitopo idntico o
muy similar.

REACTIVOS

Muestra: suero.
Se debe obtener en forma asptica.
No usar anticoagulante.
Dejar coagular la sangre en forma inclinada.
No refrigerar hasta que el coagulo se haya
retrado.
Transportar en refrigeracin.
Almacenar el suero en congelacin.

VOLUMEN RECOMENDADO

La cantidad de sangre que se obtendr

depende de la especie animal:
Bovinos
10 ml.
Equinos
10 ml.
Cerdos
5 ml.
Ovinos y caprinos 5 ml.
Pollos
1 ml.
Gallinas
2 ml.
Perros y gatos
2 3 ml.

REACTIVOS

1.

2.
3.

ANTIGENOS.
Constituidos por el microorganismo o parsito.
Antigenos crudos: presentan el inconveniente de
dar reacciones heteroespecificas.
Antigenos puros.
Antigenos altamente purificados:
Anticuerpos monoclonales.
Grmenes recombinantes.

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO

Se debe leer con detenimiento los instructivos de la

pruebas.
Los sueros deben estar en buenas condiciones no
hemolisados.
El suero debe agitarse suavemente, pues los
anticuerpos sedimentan.
Los antigenos debern conservarse en refrigeracin.
Realizar controles de calidad a los antigenos,
peridicamente.
Monitorear la temperatura del laboratorio (18 26
grados centigrados)

BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO

El tiempo de incubacin debe controlarse con

precisin.
No se debe mantener los reactivos a
temperatura ambiente mas de lo necesario.
Manejar los materiales que se usaron como si
fueran infecciosos.
Utilizar controles positivos y negativos.
No se debe hacer modificaciones al protocolo
de la prueba recomendado.

CARACTERISTICAS DESEABLES EN LAS PRUEBAS

DE INMUNODIAGNOSTICO

Utilizar pequeas cantidades de reactivos.

Sensibles y especificas.
Estandarizada y validada.
Reproducible.(nter laboratorios)
Antigenos inactivados.
Sencilla.
Equipo y reactivos accesibles, econmicos.

CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS

INMUNODIAGNOSTICAS
1.

Pruebas de unin primaria.

Miden la cantidad de inmunocomplejos (unin
antigeno-anticuerpo), utilizando
radioistopos, colorantes fluorescentes o
enzimas.
Radioinmunoanalisis (RIA)
ELISA
Inmunofluorescencia.

Los anticuerpos o antgenos marcados reciben

el nombre de conjugado. Los anticuerpos
conjugados suelen ser monoclonales o
antinmunoglobulinas especificas.
Se les llama sistemas competitivos. Se
establece competencia por los sitos de unin
disponibles entre el reactivo conocido, (ag, o
ac) aadido al ensayo a concentracin
limitada, y el elemento a investigar.

Pruebas de union secundaria

Los complejos se agregan y originan

fenmenos perceptibles visualmente. Son
reacciones no reversibles.
Dependen en gran medida del estado fsico
del antigeno, de la temperatura, de los
electrolitos presentes en la reaccin, de la
afinidad y avidez en la interaccin antigenoanticuerpo, proporcin entre ambos, tipo de
inmunoglobulina presente.

CATEGORIAS DE PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
2.

Pruebas de unin secundaria:

La reaccin antigeno anticuerpo va
seguida de una segunda reaccion.
Si el antigeno es soluble la reaccin que
se da es de precipitacin.
Si el antigeno es particulado
(suspensin) la reaccin es de
aglutinacin.

 Son

de menor sensibilidad que las

primarias, pero mas clsicas.

PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA

Aglutinacin:

en placa, en tubo.
Precipitacin: Inmunodifusion en agar,
inmunoelectroforesis
Hemoaglutinacin.
Inhibicin de la hemoaglutinacin.
Fijacin de complemento.
Neutralizacin y Seroneutralizacion
realizadas in vitro.

CATEGORIAS DE PRUEBAS
INMUNODIAGNOSTICAS
Pruebas

de unin terciaria.
Evalan la capacidad de los anticuerpos de
neutralizar la capacidad biolgica de un
antigeno ( virus, toxinas).
Identificacin de toxinas.
Identificacin de virus
Medir la actividad de un anticuerpo para
neutralizar a un microorganismo.
Pruebas de proteccin (anticuerpos)

 Se

basan en la medicin de las

manifestaciones biolgicas que el
sistema inmune desarrolla frente a un
antgeno en el animal, incluyendo la
evaluacin del efecto protector real de
los anticuerpos o su capacidad de
neutralizar la accin biolgica del
antgeno.

OBJETIVOS DE LA SEROLOGIA

Identificacin de problemas de salud.

Determinacin de la distribucin de una enfermedad.
Determinacin de la incidencia y prevalencia de una
enfermedad.
Evaluacin del sistema inmune del individuo o de una
poblacin.
Medicin de la inmunidad materna.
Programacin de calendarios de vacunacin.
Evaluacin de programas o campaas de
vacunacin.