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La unidad de organizacin de los seres vivos es la clula. Esta puede ser estudiada bajos
distintos aspectos: morfolgico, qumico y fisiolgico.
A cada uno de estos aspectos le corresponden mtodos de estudios particulares.
METODOS DE ESTUDIOS MORFOLOGICOS
Los estudios morfolgicos se realizaron mediante el uso de
denominados microscopios
instrumentos de aumento
Se tienen dos lentes: Objetivo y ocular y un objeto. Este objeto lanza un rayo paralelo
sobre el lente objetivo que pasa por el foco y un rayo que pasa por el foco y se refleja
paralelo, formando con el choque de estos 2 rayos la imagen 1, que entra a ser objeto para
el lente ocular (2do lente), esta imagen 1 que es "objeto" refracta un rayo por el centro del
lente y otro rayo paralelo que pasa por el foco formando asi con las prologanciones de estos
rayos la imagen 2, que es la imagen final observada por nosotros.
Aumento:
Es la proporcin entre el tamao de la imagen
o b s e r v a d a a l microscopio y el tamao real del objeto. El aumento total puede
calcularse como el producto del aumento del ocular por el del objetivo.
Cada lente objetivo lleva inscripto su aumento: 5X, 10X, 40 X o 100X. (el signo X significa
aumento)
La imagen aumentada producida por el objetivo, es tomada por el ocular, y magnificada
nuevamente. La imagen definitiva (que es invertida, respecto a la original)
resulta del producto entre el aumento del objetivo por el aumento del ocular.
Por ej:
OCULAR 10x
OBJETIVO: 40x
El nivel de observacin se halla limitado por el poder de resolucin del microscopio utilizado.
El poder de resolucin de cada microscopio, determina entonces, un limitado rango de
dimensiones dentro del cual deber estar la estructura biolgica en estudio para que pueda
ser discriminada.
MO
Interferencia de rayos
luminosos
Luz (fotones)
Lentes: ocular, objetivo,
condensador
Vivas o muertas
Coloreada o no
ME
Dispersin de electrones
Filamento de tungsteno
Bobinas electromagnticas
Lmite de
resolucin
Longitud de onda
Aumento
Nivel de
observacin
Estructuras
Muertas
Sin coloracin o con aumento
de contraste con tcnicas
especiales
10 A a 2 A
0.056 A
20000X a 160.000X con lente
intermedia. 1.000.000X o ms
con aumento fotogrfico
Ultraestructura
La observacin por transmisin (de fotones o electrones) exige que los objetos a estudiar
respondan a ciertas condiciones de espesor y contraste.
Para que la luz o los electrones puedan atravesarlos, el espesor no debe exceder de 10
micrmetros y 0.1 de micrmetro respectivamente.
Nivel de
observacin
Instrumento
Dimensin
Nivel de estructura
biolgica
Macroscpico
Lmite inferior 0.1 mm
Microscpico
Lmite inferior 0.1
micrmetro (m)
Submicroscpico
Lmite inferior 10 A
Desde 0.2 mm
rgano
Microscopio comn
Varios tipos de
microscopios
Microscopio de
polarizacin
Microscopio electrnico
Difraccin de rayos X
Tejidos
Clulas
Bacterias
Componentes celulares
Virus
Macromolculas
Molculas y tomos
Microscpico
Lmite inferior 1 A
ACTIVIDAD N1:
El area le proveer de un preparado fijo con una letra impresa en el portaobjetos, para su
observacin.
1) Ajuste preliminar e iluminacin del campo.
a) Usar el tornillo macromtrico para elevar el tubo o bajar la platina con el fin de que los
objetivos no la toquen al hacer girar el revlver.
b) Girar el revlver de modo que el objetivo de menor aumento (el ms corto) quede alineado
por el ocular.
c) Abrir el diafragma todo lo posible y seleccionar la iluminacin correcta. Para ello utilizar el
condensador y el diafragma, y mover el espejo de manera que capte la luz del foco que tiene
sobre la mesada.
2. Enfoque.
a) Usar el tornillo macromtrico y elevar el tubo o mover la platina hasta que haya un espacio
de aproximadamente 1 cm entre el objetivo de menor aumento y la superficie de la platina.
b) Colocar el portaobjetos sobre la platina y sostener con las pinzas. Mirar a travs del ocular
y elevar lentamente hasta obtener una visin clara.
c) Realizar un enfoque fino de la estructura con el tornillo micromtrico hasta observar con
total nitidez.
d) Hacer girar el revlver y el portaobjetivo de modo que el objetivo de gran aumento quede
alineado con el ocular (asegurndose que el extremo del objetivo no toque el cubreobjeto. Si
esto ocurre debe repetirse toda la secuencia).
e) Si el preparado no se observa con nitidez usar el tornillo micromtrico para el
enfoque final.
f) Si se va a usar el objetivo de inmersin (el ms largo) depositar una gota de aceite
de cedro sobre el portaobjeto. Bajar lentamente el objetivo hasta tocar el preparado y enfocar
con el micromtrico.
3. Prctica.
a) Observe el portaobjetos que presenta la letra A y describa tal coma lo ve a simple vista y
a travs del microscopio ptico.
b) Observe el preparado que posee la letra F. Describa su posicin tal como lo ve a simple
vista y a travs del microscopio ptico.
c) Mire a travs del ocular y mueva el portaobjetos hacia delante lentamente.
Hacia que lado se mueve la letra?
d) Mueva el portaobjetos hacia la derecha. En que direccin se desplaza la letra?
e) Como es la imagen que recibe su ojo con respecto al objeto?
..
..
Actividad N2:
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Clula procaritica
Finalidad:
Estudio de las formas y agrupaciones bacterianas
Materiales:
Celula eucariotica
Finalidad
Observacin de levaduras
Hemos elegido para esta parte del trabajo prctico las levaduras, hongos eucariontes
unicelulares que se utiliza para conseguir una fermentacin industrial (Saccharomyces
cerevisiae) y que es un organismo capaz de respirar aerbica o anaerbicamente
Pueden hallarse aisladas o en pequeos grupos. Algunas presentan brotes que han sido
originados por el proceso de gemacin (reproduccin sexual).
Materiales:
Levadura fresca de panadera
Tubo de ensayo
Porta y cubreobjeto
Mtodo
1. Tomar una pequea porcin de levadura y colocarla en un tubo de ensayo
2. Agregar agua tibia en cantidad suficiente como para conseguir una suspensin muy
diluida.
3. Colocar una gota de la suspensin en un portaobjeto y cubrir con el cubreobjetos.
4. Observar primero con bajo aumento y luego con el mayor, sin usar el de inmersin
Resultados:
1) Dibujar una parte del campo con las levaduras a pocos aumentos.
2) Dibujar a gran aumento, sealando, si lo observa, ncleo y brotes.
Diagnostico:
Aumento; ...
Cuestionario:
Aumento:..
1) Identifica sobre el siguiente dibujo cada uno de los componentes del microscopio
descritos ms arriba:
2) Indica qu partes del microscopio estn relacionadas con cada una de las
siguientes funciones:
Sirven para aumentar el tamao aparente del objeto que estamos observando
__________________________________________________________________
Sirven para iluminar correctamente la preparacin
____________________________________________________________
Sirven para sujetar o mover otras partes del microscopio
__________________________________________________________________
3) Las preparaciones se montan empleando unos pequeos vidrios como los que
aparecen en los siguientes dibujos. Seala cmo se llama cada uno de ellos.
M. ptico
M E de
transmisin
ME de
barrido
12) En qu unidades se medirn estructuras tales como las siguientes (Expresa para cada una
de ella su tamao aproximado y luego ordnalas de mayor a menor dimensin) :
a- hgado
b- un paramecio
c- un glbulo rojo
d- un glbulo blanco
e- una bacteria
f- una mitocondria
g- un cloroplasto
h- una neurona
i- el espesor de una membrana
j- la molcula de ADN
13).- Qu instrumentos permitiran observar y estudiar estructuras en cada uno de los niveles
anteriores?
14) En el siguiente cuadro, seale con qu instrumento ptico o electrnico podr observar
cada estructura
TIPOS CELULARES O
ESTRUCTURAS
Microtbulos
Estructuras subcelulares
Virus
Micoplasmas, ricketsias
Bacterias y algas cianofceas
Levaduras
Protozoos y algas unicelulares
Clulas vegetales en general
Clulas animales en general
Ovulo humano
Ovulo de avestruz
Acetabularia (alga )
DIAMETRO PROMEDIO
INSTRUMENTO
4 nm
nm-m
10 nm - 0.1m
0.1m-1m
0.5 m -5m
5m
10-200m
10-200m
10-60m
100m
75 mm
80-100 mm
OBJETIVOS
BASES TEORICAS
Las bases tericas que figuran en las guas de TP tienen como funcin introducir a los
alumnos en el conocimiento del tema a fin de lograr su mejor desempeo durante el mismo,
no pudiendo suplir, al conocimiento que deber lograr mediante la consulta bibliogrfica de
cada caso.
En el TP N 1 se puso de manifiesto que dado que las clulas deben cumplir mltiples
papeles en la enorme gama de seres vivos diferentes, existe tambin una gran diversidad
celular.
Hay, una gran variedad de tamaos y formas celulares y en cada caso la estructura final y la
presencia o desarrollo de estructuras especiales es generalmente consecuencia del proceso
de diferenciacin que permite a las clulas cumplir con una funcin particular.
El siguiente cuadro sinptico presenta un resumen de las diversas estructuras que
presentan las clulas animales y vegetales
Cubiertas celulares
glucoclix
cutculas
pared celular(vegetales)
Membrana plasmtica
Citoplasma
Organelas
citoplasmticas
Sistema vacuolar
citoplasmtico
Retculo endoplsmico
Aparato de Golgi
Envoltura nuclear
Lisosomas
Mitocondrias
Ribosomas
Plstidos (vegetal)
Peroxisomas
Citoesqueleto
Citosol
Nucleo
envoltura nuclear
carioplasma o matriz nuclear
cromatina (cromosoma en divisin)
nuclolo
Toda clula durante su vida pasa por dos perodos,uno de divisin y otro de
interfase o no divisin
Fijacin:
Tratamiento qumico o fsico que mata rpidamente las clulas y conserva sus
estructuras evitando la aparicin de fenmenos de autlisis o desintegracin.
La observacin por transmisin slo proporciona datos si ciertas regiones del objeto
absorben la luz ms que otras ,es decir, si este objeto presenta contrastes.
En general, los constituyentes celulares tienen muy pocos contrastes unos con
respecto a otros, por lo cual se deben emplear ciertos artificios para aumentarlos.
Es posible amplificar las diferencias muy pequeas que existen entre las diversas
regiones de la clula, recurriendo a montajes pticos que utilizan la naturaleza
ondulatoria de la luz, es el caso del microscopio de contraste de fases y del
microscopio de interferencia.
Por otra parte, se pueden crear artificialmente contrastes a nivel de ciertas
estructuras celulares, para lograrlo, se realizan combinaciones, entre sus
constituyentes qumicos y productos que absorben ciertas longitudes de onda de
luz, llamados colorantes.
Como las clulas vivas poseen un espesor medio de 10 m slo pueden estudiarse en
microscopios lumnicos, clulas aisladas o reunidas formando una capa delgada.
En la mayora de los casos las condiciones de espesor se logran efectuando cortes de no
ms de 5 m, para evitar que la superposicin de estructuras haga la imagen confusa.
Para efectuar cortes con micrtomo es necesario endurecer la muestra (por
congelacin, inclusin en parafina, etc.) previa fijacin.
Tratamiento qumico o fsico que mata rpidamente las clulas y conserva sus estructuras
evitando la aparicin de fenmenos de autlisis o desintegracin.
La observacin por transmisin slo proporciona datos si ciertas regiones del objeto
absorben la luz ms que otras, es decir, si este objeto presenta contrastes.
En general, los constituyentes celulares tienen muy pocos contrastes unos con respecto a
otros, por lo cual se deben emplear ciertos artificios para aumentarlos.
Es posible amplificar las diferencias muy pequeas que existen entre las diversas regiones
de la clula, recurriendo a montajes pticos que utilizan la naturaleza ondulatoria de la luz,
es el caso del microscopio de contraste de fases y del microscopio de interferencia.
Por otra parte, se pueden crear artificialmente contrastes a nivel de ciertas estructuras
celulares, para lograrlo, se realizan combinaciones, entre sus constituyentes qumicos y
productos que absorben ciertas longitudes de onda de luz, llamados colorantes.
TINCIN HEMATOXILINA-EOSINA
La tincin hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina. La tincin
hematoxilina y eosina es uno de los mtodos mas populares de tincin utilizado en histologa
y medicina diagnostica.
Hematoxilina
Se utiliza en histologa para teir los componentes aninicos (cidos) de los tejidos, a los que
da una coloracin violeta. Tie intensamente los ncleos de las clulas, dado que estos
contienen cidos nucleicos ricos en radicales cidos.
Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante bsico,
ya que el componente cromgeno reside en el complejo catinico (bsico) de la misma. Es
de notar que la tincin histolgica por hematoxilina no indica tanto la constitucin qumica de
los componentes celulares, sino la densidad de cargas elctricas negativas de los mismos.
Eosina
La eosina es un colorante basfilo (tiene afinidad por las sustancias alcalinas), de uso
ampliamente extendido en el mbito industrial, desde la industria textil hasta el estudio
biolgico e histolgico.
El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica o bsica,
tie estructuras cidas (basfilas) en tonos Azul y Prpura, como por ejemplo los ncleos
celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos (acidfilos) en tonos de color
rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como el citoplasma.
Resultados
Ncleo celular: Azul
Citoplasma: Rosa
Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
Glbulos rojos: Rojo, anaranjado
Fibrina: Rosa
CIDO PERYDICO DE SCHIFF (PAS)
La tcnica de Schiff, es una reaccin colorimtrica que se usa comnmente en citoqumica.
Utiliza PAS, cido perydico de Schiff, o leucofucsina. La reaccin oxida los grupos
funcionales diol en glucosa y otros azcares, creando aldehdos que reaccionan con el
reactivo de Schiff para dar un color prpura-magenta.
Es una tincin utilizada para detectar glucgeno y otros polisacridos en los tejidos permite
la tincin de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas
membranas celulares, clulas caliciformes en la mucosa del intestino, fibras reticulares que
estn rodeados por hidratos de carbono, etc.
PARTE PRACTICA:
OBSERVACION DE DIFERENTES TEJIDOS Y LOCALIZACION DE ORGANELAS.
Clula vegetal
Finalidad:
*Realizacin de la preparacin microscpica.
*Observacin de los componentes celulares tpicos de una clula vegetal y las
caractersticas del tejido elegido
Materiales:
*Cebolla.
*Acido actico al 50%
*Lugol, azul de metileno o hematoxilina.
*Pinzas, tijera, escalpelo, portas y cubres, cuentagotas.
Mtodo:
1) Interesa como material, la epidermis interna de una escama de bulbo de cebolla.
Para obtenerla, se corta una cebolla en dos mitades. Se separa manual-mente en
cascos, sacando entre cada dos cascos una capa fina y translcida, que es,
precisamente, la epidermis interna, y se lleva a una cubeta de agua (o cpsula de
Petri) para que se desenrolle.
2) Cortar dos trozos de esta epidermis.
3) Un trozo se coloca entre porta y cubre con una gota de agua, cuidando que
quede bien extendido y sin burbujas de aire
4) El otro trozo se sumerge en cido actico al 50% durante 1 2 minutos
(fijacin); luego en el colorante elegido, durante 2 min y posteriormente se coloca
entre porta y cubre para su observacin.
Observacin:
(Recordar que para observar preparados sin teir, debe reducirse la entrada de luz, y
en todos los casos, comenzar con aumentos dbiles)
Las clulas de la epidermis de la cebolla, poligonales y grandes, se hallan
ntimamente adheridas unas con otras.
La pared se destaca muy clara teida por el colorante.
En las clulas vivas se ven los ncleos aplanados (con 2 o ms nucleolos) adosados
a la pared. A medida que las clulas van degenerando, el ncleo se redondea y
tiende a situarse en el centro.
Diagnstico:......................
Coloracin:...................
Aumento:..............
Plstidos
Objetivo:
Reconocer cloroplastos, cromoplastos y leucoplastos en material vegetal fresco
Caractersticas: Estas organelas exclusivas de la clula vegetal y algas
eucariontes, pueden diferenciarse en plstidos incoloros o leucoplastos y
plstidos coloreados cromoplastos y cloroplastos.
A.-Los leucoplastos estn rodeados por una doble membrana, no contienen
pigmentos y se caracterizan por acumular sustancias de reserva.
B.-Los cromoplastos tambin estn limitados por una doble membrana y
presentan pigmentos diferentes de la clorofila.Su funcin es dar color a las
flores y frutos,a fin de dotarlos de una coloracin atractiva para los animales
que intervienen en la polinizacin y dispersin defrutos y semillas.
C.-Los cloroplastos, de importancia fundamental para la clula vegetal, ya que en
A
Diagnostico.
Aumento-
B
Diagnostico..
Aumento
Diagnostico.
Diagnostico..
Clula animal
Finalidad:
de clulas anucleadas y mononucleadas
Observacin
Diagnstico:......................
Coloracin:...................
Aumento:...............
Diagnstico:......................
Coloracin:...................
Aumento:...............
Finalidad:
Reconocer la localizacin del RER en clulas secretoras de un acino
pancretico
Caractersticas:
El RER constituye la mayor parte del sistema vacuolar citoplasmtico ( o sistema
de endomembranas).Est formado por tbulos y sacos aplanados cuya superficie
externa presenta ribosomas asociados, encargados de la sntesis de protenas.
Por esta razn se encuentra muy desarrollado en clulas que participan
activamente en la sntesis de protenas, como por ejemplo las clulas de los
acinos pancreticos que producen las enzimas del jugo pancretico.
Funciones del RER
1.-Sostn mecnico
2.-Acumulacin y procesamiento de protenas exportables
3.-Intercambios entre la matriz citoplasmtica y los compartimentos del
retculo (los iones y las molculas pequeas que son transportados a travs de
las membranas del retculo)
4.-Distribucin intracelular de sustancias
Observacin al M.O. del RER en clulas de acino pancretico
El pncreas es una glndula de secrecin mixta (endcrina y excrina). Como
glndula excrina produce un jugo que contiene enzimas importantes para la
digestin del alimento
El jugo pancretico va ser vertido en el intestino por un conducto. Las clulas que
sintetizan las enzimas se hallan dispuestas en las glndulas en pequeos acmulos,
cada uno de los cuales se llama acino. En ellos, las clulas estn dispuestas
rodeando una pequea luz central hacia donde envan su secrecin, que luego
pasar a un sistema de conductos. Cada clula del acino se asemeja a una porcin
de un pastel con base ancha y vrtice estrecho.
La secrecin, de acuerdo a esta disposicin es liberada por el vrtice de la clula
pudindose verse porque aparece en forma de cuerpos redondeados denominados
grnulos de zimgeno (o granulos de secrecion, contienen protenas enzimticas
inactivadas).
El citoplasma cercano a la base de la clula tiene color azul oscuro que pone de
manifiesto una considerable cantidad de ARN que se concentra en esta parte. Esta
gran cantidad de RNA debe su presencia a que se estn sintetizando protenas
activamente.
Con el ME se observa que estas partes basales que se tien intensamente
presentan vesculas aplanadas y tbulos membranosos muchas veces dispuestos
paralelamente, con ribosomas adheridos a sus superficies externas
Mtodo de tincin: Azul de toluidina
Diagnstico:...............................................................................................................
Coloracin..................................................................................................................
Aumento.....................................................................................................................
Aparato de Golgi-Dictiosomas
Finalidad
Reconocer la localizacin del aparato de Golgi en corte de epiddimo
Caractersticas: Es una parte diferenciada del sistema de endomembranas.
Al ME se observa como un apilamiento de sacos aplanados, dispuestos
concntricamente, con una cara convexa (proximal) y una cncava (distal), con
bordes dilatados y vesculas y vacuolas ubicadas cerca de esos bordes.
En las clulas que presentan una estructura polarizada su ubicacin es definida y
se presenta entre el ncleo y el polo de la clula, donde se libera la secrecin
El tamao y distribucin dentro de la clula y otras caractersticas (como el n de
sacos apilados) vara de acuerdo al estado metablico de la clula.
El aparato de Golgi en clulas animales es nico y bien desarrollado. En clulas
vegetales, en cambio, se divide en numerosas estructuras y recibe el nombre de
dictiosoma.
Todo el sistema vacuolar citoplasmtico parece ser una estructura muy dinmica.
Es muy probable que esa dinmica est dada por el flujo de membranas o
interconversiones entre las membranas de las distintas estructuras que lo
componen.
Funciones del aparato de Golgi
1.-Circulacin intracelular de sustancias
2.-Sntesis de polisacridos complejos (ejemplo: celulosa)
3.-Formacin de glucoprotenas de secrecin
4.-Concentracin, condensacin y empaquetamiento de sustancias de
Diagnstico:.............................
.................................................
.................................
Coloracin: ..
................................................
Aumento:..................................
....
Clulas caliciformes
Finalidad
*Reconocer vesculas de secrecin en clulas caliciformes,
en corte de vellosidad intestinal.
Diagnstico:...............................................................................................................
Coloracin..................................................................................................................
Aumento.....................................................................................................................
BIBLIOGRAFIA
Alberts,B;Bray D;Lewis,U y col.Biologa Molecular de la clula.Ed Omega.
Espaa.1986
Berkaloff y col. Biologa y Fisiologa celular.Ed Omega.Espaa.1987.
Curtis Helen. Biologa.Ed Panamericana.BsAs.1992
De Robertis y De Robertis. Biologa celular y molecular.Ed El Ateneo.1986
ACTIVIDADES DE AUTOEVALUACION
1.- Diferencie:
Ncleo de nucleolo
REL de RER
cloroplastos de mitocondrias
2.-Cules son las principales diferencias entre una clula animal y una
clula vegetal?
3.-Cul es la interaccin entre ribosomas, retculo endoplasmtico, aparato de Golgi y
vesculas de secrecin, en la sntesis y envo del nuevo material de membrana y en la
exportacin de protenas por la clula?
4.-En funcin de los conocimientos de la relacin organelas-funcin que componentes
esperara que fuesen los ms destacados en cada uno de los siguientes tipos celulares?
-clula muscular
-espermatozoide
-clulas de las hojas verdes
-glbulos blancos
5) Por qu el REL no puede funcionar como RER ?
6) Que funcin cumplen las vacuolas en una clula? Por Que luego de un rato de mantener
el preparado de la clula vegetal en un portaobjetos vemos que se comienzan a arrugar?
FOTOSINTESIS y RESPIRACION
INTRODUCCION:
Es probable que, el primer organismo fotosinttico, haya aparecido hace
3000/3500 millones de aos atras. La atmsfera en la que evolucionaron las primeras
clulas no tena oxgeno libre. Con el advenimiento de la fotosntesis, los organismos
logran modificar el ambiente, y de tal forma, que en nuestros das la vida terrestre es
posible gracias a este proceso.
Esencialmente, en la Fotosntesis, las plantas captan la energa lumnica y la
emplean para formar carbohidratos y oxgeno libre a partir de CO2 y H2O . Los
carbohidratos los utilizan como materia prima y la energa qumica, para su crecimiento;
el exceso lo almacenan como reserva, en forma de Almidon, Inulina, etc.
El proceso fotosinttico en su forma mas sencilla y concreta, consiste en:
Impulsar con la energa solar, una corriente de electrones desde el agua a un
aceptor cuyo potencial lo capacite para cederlo a una molcula de CO2 que de
esta manera se reduce.
Para que ste fenmeno se lleve a cabo es ademas necesario, la clorofila, el
pigmento que poseen todos los vegetales verdes.
LA FOTOSINTESIS COMPRENDE DOS ETAPAS
Etapa lumnica
Ocurre en los tilacoides y se utiliza la energa luminosa
Se sintetizan productos que van a ser utilizados en la etapa siguiente como el ATP y el
NADPH , ademas se genera oxgeno que se libera a la atmsfera (O2) y agua.
Etapa oscura
Ocurre en el estroma del cloroplasto y es independiente de la presencia o ausencia de
luz.
En esta etapa se produce la fijacin y reduccin del dixido de carbono, mediante una
serie de transformaciones metablicas, resultando finalmente un compuesto orgnico
que va a ser utilizado en otros procesos metablicos con el fin de obtener energa
biolgicamente til para la clula.
6CO2 + 6H2O
Objetivos
A partir de los conocimientos referidos a los fenmenos de fotosntesis y respiracin,
el objetivo del presente prctico es desarrollar en el alumno la capacidad de:
- Interpretacin de tablas
- Interpretacin de grficos
Razonamiento y resolucin de un problema experimental
A continuacin se describen dos experimentos tpicos en el estudio del fenmeno de la
fotosntesis, el ensayo I: Disco de hoja flotante y el ensayo II: Determinacin de la
liberacin de 02 / fijacin de CO2 por utilizacin de un indicador de pH.
Dichos experimentos fueron desarrollados para responder a los siguientes objetivos
- Inferir la existencia del desprendimiento de ciertos gases en un vegetal
- Determinar el efecto de presencia o ausencia de la luz como fuente de energia
- Relacionar el desprendimiento de O2 con la presencia o no de Clorofila
- Relacionar los procesos de fotosntesis y respiracin
Luego de leer e interpretar la etapa experimental y los diferentes resultados
obtenidos, razone en particular, discuta en grupo y redacte las probables causas que
generaron los resultados obtenidos
ESPINACA
REPOLLO BLANCO
Colocar 3 ml de Solucin
de Infiltracin a cada tubo
Retirar la Solucin de
Infiltracin y agregar 10 ml de
la Solucin de Bicarbonato a
cada tubo.
Llevar a una fuente de luz a los
tubos 1 y 3
y dejar en total oscuridad al tubo
2
LIBERACION DE OXIGENO/FIJACION
ANHIDRIDO CARBONICO
DE
RESULTADOS
ETAPA EXPERIMENTAL I
Los discos sedimentados en los diferentes tubos experimentales comenzaron a
ascender en funcin del tiempo. Se recabaron los valores obtenidos y al cabo de una
hora de ensayo se obtuvieron los siguientes resultados.
Tabla 1 Cantidad de discos que ascendieron al final del ensayo (60 min) en los
diferentes tubos experimentales.( Media n= 5)
TUBO
DETALLE
Espinaca +
Luz
Espinaca + Oscuridad
Jaspeada +
Luz
TIEMPO INICIAL
TIEMPO FINAL
arriba
abajo
arriba
abajo
10
10
arriba
abajo
arriba
abajo
10
Arriba
abajo
arriba
abajo
10
Tabla 2 Cantidad de discos que ascendieron en los diferentes tubos experimentales en funcin
del tiempo. ( Media n= 5)
Tubo
1
2
3
T
0
I
5
E
10
M
15
P
O
20 25
(en min )
30 45
60
10
10
Grfico 1: Evolucin del ascenso de los discos vegetales en funcin del tiempo en los
diferentes tubos experimentales. .( Media n= 5) (Tubo 1 ____ , Tubo 2 ......... y Tubo 3 - - - - )
10
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Tiemp o en mi nutos
Cuando se incorpor a los resultados el correspondiente desvio estandar para cada uno de los
puntos analizados se obtuvo el siguiente grfico
Grfico 2: Evolucin del ascenso de los discos vegetales en funcin del tiempo en los
diferentes tubos experimentales. .( Media Desvio estndar, n= 5)
N de discos flotantes
10
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
Tiempo en minutos
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
50
55
60
ETAPA EXPERIMENTAL II
T
0
Tubo
1
E
10
10
10
M
15
P
O
20 25
(en min )
30 45
60
N de discos flotantes
10
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Tiempo en minutos
Grfico 3: Evolucin del descenso de los discos vegetales en funcin del tiempo
( Media n= 5) (Tubo 1 ____ )
55
60
12) Cual es la causa que explique los resultados obtenidos en la segunda etapa (ver
Tabla 3 y Grfico 3)
ENSAYO II
LIBERACION DE OXIGENO/FIJACION DE ANHIDRIDO CARBONICO
ENSAYO CON INDICADOR DE pH
Materiales y drogas necesarios:
Pipetas de 5 y de 10 ml, tubos de ensayo, papel cartulina negro, estufa de cultivo, vaselina, Azul de
Bromotimol pH 7.8-8.0, Elodea o Microphillum (un brote)
Importante: La solucin de Azul de Bromotimol en esas condiciones de pH es de color azul y vira
al amarillo cuando el pH baja, es decir, cuando el medio se acidifica , volviendo a tomar el color
azul cuando el medio se alcaliniza
Etapa Experimental
En una serie de 4 tubos de ensayo se colocaron los reactivos y las cantidades que se indican a
continuacin en la Tabla N 1
Tabla N 1:
TUBO N
AZUL DE
BROMOTIMOL
10 ml
10 ml
10 ml
10 ml
SI
SI
NO
NO
SI
NO
SI
NO
O.5 ml
O.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
INSUFLAR
AIRE
ELODEA
(un brote)
VASELINA
El paso que consisti en insuflar aire se realiz con una pipeta burbujeando la
solucin del Azul de Bromotimol acidificando el medio hasta hacerlo virar.al color
amarillo
Vuelque en la Tabla N 2 el color que estima que presentar la muestra en cada tubo
al iniciar la experiencia
Inicio de la Experiencia
1- Los tubos 1 y 2 se expusieron a la luz. Los tubos 3 y 4 se cubrieron con cartulina
negra y se colocaron en estufa a 30 C
2- Se esper 90 minutos
Colocar 10 ml de la solucin
de Azul de Bromotimol
Col
ocar
la planta acutica en los tubos 1 y 3
30 C
Oscuridad
TUBO 1
TUBO 2
TUBO 3
TUBO 4
INICIO
FINAL
RESPIRACIN CELULAR
La respiracin celular ocurre en la mayora de las clulas de plantas y animales. Tiene lugar
en la mitocondria, donde la energa de los nutrientes convierte ADP a ATP, el cual es
utilizado para todas las actividades celulares que requieren energa.
En este Practico Ud. va a analizar que sucede en el proceso de respiracin con semillas de
maz y investigara el efecto de la temperatura sobre la velocidad de respiracin.
De que manera puede ser medida la velocidad de respiracin?
El algodn protege el
organismo del KOH
custico.
Diseo Experimental
En este experimento se comparan las velocidades de respiracin en semillas de maz
germinadas, a la velocidad en semillas en estado latente (semillas secas). Ud. va a poder
comparar a dos diferentes temperaturas: 12oC and 22oC. Adems, Ud. podr comparar estas
velocidades a un control no metablico.
Porque es importante tener un control?
Es importante que los tres viales contengan un igual volumen de contenidos. Ud. debe
adicionar bolitas de vidrio al vial con semillas en estado latente, puesto que las semillas
secas ocupan menos espacio que una igual cantidad de semillas germinadas.
Recomendaciones :
1. Ud. necesita usar una capa de algodn no absorbente entre el KOH y las semillas.
2. El tapn debe estar firmemente colocado para un cierre hermtico. Chequee que las
semillas o las bolitas no bloqueen el orificio de la pipeta.
3. Deje los respirmetros equilibrar por algunos minutos en sus respectivos baos de
agua. Esto minimiza los cambios de volmenes debidos a cambios en la temperatura
del agua
4. Al vial#2, sume
25 semillas de maz
no germinadas, y
suficiente bolitas
de vidrio para
igualar el volumen
del vial#1
5. Al vial#3, sume
un igual volumen
de bolitas de
vidrio, su control
no metablico.
Sume un
peso a
cada vial.
Vial 2
No
germ
o
Vial 3
Control
o
Vial 1
germin
o
Vial 2
No
germin
Vial 3
control
12 C
12 C
12 C
22 C
22 C
22 C
0 minuto
0.08
0.09
0.09
0.12
0.11
0.085
5 minutos
0.24
0.17
0.099
0.72
0.24
0.09
10 minutos
0.39
0.22
0.1
1.27
0.33
0.091
15 minutos
0.5
0.23
0.1
1.7
0.38
0.09
20 minutos
0.61
0.26
0.095
2.12
0.43
0.091
Cuestionario
Sobre la base del grfico responda las preguntas.
1. Cul de los siguientes aseveraciones es verdadera (basado en los datos)?.
La cantidad de oxigeno consumido por maz germinado a 22oC es aproximadamente dos veces la
cantidad de oxigeno consumido por las germinadas de maz a 12oC
La cantidad de oxigeno consumido es igual en ambos casos, en semillas de maz no germinadas y
germinadas durante el periodo inicial de 0 a 5 minutos.
La cantidad de oxigeno consumido en las semillas germinadas a 12 oC a los 10 minutos es 0.4 ml
O2/minute
o
o
La cantidad de oxigeno consumida es mayor para semillas no germinadas a 12 C que a 22 C.
Si el experimento fuera desarrollado por 30 minutos la velocidad de consumo de oxigeno debera
decrecer.
Cuando se indica que la Mitosis da lugar a dos clulas idnticas a partir de una clula
madre, se lo hace desde dos puntos de vista:
1.- con respecto a la informacin gentica
2.- en relacin con el nmero de cromosomas
EL PROCESO DE DIVISION MITOTICA:
Para poder estudiarlo con mayor claridad, en la divisin mittica se pueden distinguir
varias etapas. Adems, debe considerarse lo que ocurre antes del comienzo del
proceso, lo cual es clave para poder comprender la divisin en su totalidad.
INTERFASE
Si las dos clulas producto de una divisin mittica han de recibir el mismo
nmero de cromosomas que tena la clula madre que les dio origen, es evidente
que - antes de comenzar el proceso - el material gentico de esta ltima debe
duplicarse. En ese momento, cada cromosoma pasar de estar formado por una
cromtide (una molcula de ADN), a estar formado por dos cromtides (dos
molculas de ADN). Ambas molculas de ADN son idnticas entre s, es decir,
ambas llevan exactamente la misma informacin gentica. Dicho de otro modo, los
cromosomas pasarn de simples a dobles.
Para ser exactos, en este momento no podemos hablar con propiedad de
cromosomas. El material gentico en esta etapa de la vida de la clula se ve al
microscopio como una red difusa y laxa a la que llamamos cromatina. No es que los
PROMETAFASE
Se denomina as a la transicin entre la profase y la metafase. Se trata de un
perodo muy corto durante el cual los cromosomas quedan en aparente desorden.
Posteriormente, las fibras del huso acromtico invaden la zona central y sus
microtbulos se extienden entre los polos de la clula.
METAFASE
Los cromosomas, completamente condensados, se unen a algunas de las
fibras del huso acromtico y se ordenan en el plano ecuatorial de la clula.
ANAFASE
Durante esta etapa los centrmeros de los cromosomas se dividen
longitudinalmente, por lo que ambas cromtides de todos los cromosomas se
separan y comienzan a dirigirse hacia los polos, unidos a fibras del huso acromtico.
En la anafase los microtbulos que forman el huso se acortan entre un tercio y un
quinto de su longitud.
Aqu podremos observar a los cromosomas en forma de V; los metacntricos
con brazos iguales, los submetacntricos con brazos distintos.
TELOFASE
El final de la migracin de los cromosomas a los polos de la clula seala el
principio de esta etapa:
los cromosomas comienzan a descondensarse, por lo cual vuelven a asemejarse
a filamentos delgados.
la envoltura nuclear de las clulas hijas se organiza y se torna visible. Lo mismo
ocurre con el nuclolo.
Lo que hemos visto hasta aqu ha ocurrido a nivel del ncleo celular. A esta divisin a
nivel nuclear se la conoce como cariocinesis.
No obstante, durante la telofase tambin se da una divisin citoplasmtica. A
esta divisin se la denomina citocinesis. En las clulas animales, el citoplasma se
constrie en la zona central de la clula, comenzando desde la periferia y
progresando hacia el centro. Esta constriccin se acenta y profundiza hasta que la
clula se divide, quedando los componentes citoplasmticos de la clula madre
repartidos entre las dos clulas hijas.
Si volvemos ahora a la cigota de la cual hablbamos al principio, vemos como
a travs de la divisin mittica, se ha dividido en dos clulas idnticas a ella, que
sufrirn posteriores divisiones por este mismo proceso.
De esta manera, la mitosis aparece como la base del proceso de crecimiento. Ms
tarde, ste estar acompaado por el fenmeno de diferenciacin. Adems del
crecimiento, tambin la mitosis es el proceso por el cual se produce la regeneracin
de tejidos y clulas.
OBJETIVOS DEL TRABAJO PRCTICO:
Se espera que los alumnos
En el plano conceptual:
Distingan y comprendan los principales fenmenos que ocurren durante la
divisin de clulas somticas.
Comprendan el proceso de divisin mittica en trminos de la conservacin de la
identidad de la informacin gentica y de la constancia del nmero cromosmico.
En el plano procedimental:
Observen cromosomas en las distintas etapas mitticas y registren los resultados
de dichas observaciones.
Observen imgenes animadas del proceso y extraigan las ideas principales.
DESARROLLO:
Primera parte: Observacin de cromosomas en clulas de raz de cebolla en
divisin (coloracin: hematoxilina frrica; aumento: 400X), identificacin de las
etapas mitticas y registro.
A.- Usted deber observar los preparados que se le presentarn, buscar e identificar
las etapas mitticas correspondientes y dibujarlas en los campos que figuran a
continuacin:
INTERFASE
METAFASE
PROFASE
PROMETAFASE
ANAFASE
TELOFASE
MEIOSIS
OBJETIVOS
-Distinguir en observacin microscpica ncleos interfsicos y ncleos en
division
-Observar e identificar las distintas fases meioticass. .
-Observar fases meiticas en microfotografas.
-Relacionar los procesos de meiosis y gametognesis.
Introduccin:
Los procesos de mitosis y meiosis, sus fases y resultados, fueron exhaustivamente
analizados en las clases tericas previas al trabajo prctico. Por lo tanto, solo se
revisarn los conceptos bsicos de cada tema.
MEIOSIS:
Es un proceso que comprende dos divisiones nucleares, seguidas de sus
correspondientes divisiones citoplasmticas.
A partir de una clula diploide, se obtienen en la primera divisin meitica, dos
clulas haploides (con cromosomas constitudos por dos cromtidas), y en la
segunda divisin meitica, cada una de ellas da lugar a dos clulas haploides
as se obtienen cuatro clulas haploides, a partir de la diploide original.
Como recordar, en la Profase I meitica ocurre intercambio de material gentico
entre cromosomas homlogos, por lo que las cuatro clulas producto de meiosis, son
geneticamente diferentes entre s y con respecto a la que les diera origen. La meiosis
ocurre en clulas sexuales, y tiene como resultado la formacin de gametas (vulos y
espermatozoides haploides).
A ste proceso se lo llama GAMETOGENESIS y segun el resultado sea la formacin
de vulos o espermatozoides, al proceso lo denominamos Ovognesis o
Espermatognesis.
c.
Los homlogos unidos como en diacinesis se asocian por sus centrmeros a las
fibras del huso, ubicndose en el plano ecuatorial de la clula.
ANAFASE I
Se separan los homlogos cada uno hacia polos distintos de la clula. Hacia finales
de esta etapa puede observarse el comienzo de la citocinesis ( divisin del
citoplasma ). Cabe aclarar que la migracin de los cromosomas hacia polos opuestos
de la clula es al azar.
TELOFASE I
Los cromosomas ubicados en los polos de la clula se reagrupan. Cada polo recibe
la mitad del nmero de cromosomas de la clula origina. Se completa la citocinesis.
Luego de este perodo puede existir un intervalo llamado intercinesis.
MEIOSIS II - Divisin ecuacional
Esta segunda divisin es muy parecida a la Mitosis, excepto que no va precedida por
una duplicacin del ADN.
Al comienzo de esta divisin los cromosomas pueden haberse dispersado un poco,
pero vuelven a condensarse.
Tambin aqu describimos varios perodos.
PROFASE II
Se organiza nuevamente el huso acromtico. Los cromosomas se unen a las fibras
del mismo por sus centrmeros.
METAFASE II
Los cromosomas ( cada uno formado por dos cromtidas ) se ubican en el plano
ecuatorial.
ANAFASE II
embrionarias
...........................
Mitosis
espermatogonias
...........................
Crecimiento
espermatocito
...........................
Meiosis I
espermatocito II
Meiosis II
............................
espermtidas
............................
Diferenciacin
espermatozoides
OVOGENESIS
Clulas germinales
Mitosis
Crecimiento
embrionarias
.......................
ovogonias
.......................
ovocito I
Inicio meiosis I
detencin en profase I
.......................
ovocito I
.......................
Completamiento
de meiosis I
ovocito II
Meiosis II
.......................
o
o
o
corpusculos polares
vulo
.......................
CUADRO COMPARATIVO
MEIOSIS
MITOSIS
En clulas somticas
.............................................
NO
..............................................
Una divisin nuclear
Producto final:
2 clulas diploides
a partir de 1 celula diploide
...............................................
...............................................
...............................................
...............................................
1.-
2.-
4.-