CAPITULO 1 5 Principios de bioenergética y ciclo del ATP En la légica molecular de la vida (Introduccién, pag. 7). se puede considerar a las células como maquinas quimicas ca- paces de trabajar en condiciones de temperatura, presién y volumen esencialmente constantes. Al igual que las maquinas fabricadas por el hombre, todos los organismos vivos deben obtener su energia del entorno circundante. Los organismos fotosintéticos utilizan la energia radiante de la luz solar, mientras que los organismos heterétrofos utilizan la energia inherente a la estructura de las moléculas organicas nutrien- tes obtenidas del entorno. Estas formas de energia son trans- formadas por las células en la energia quimica del trifosfato de adenosina (ATP), el cual actia como transportador energético en aquellos procesos celulares que precisan una aportacién de energia. En este capitulo desarrollaremos los principios quimicos y termodinamicos que regulan la funcién del sistema del ATP en la energética de las células vivas, Estos principios son fundamentales en todos los aspectos del metabolismo inter- mediario, y se subrayaran repetidamente en los capitulos siguientes. Ciclo del ATP El ATP fue descubierto por primera vez en los extractos musculares por los norteamericanos C. Fiske y Y. Subbarow, ¢ independientemente por K. Lohmann en Alemania, en 1929; durante algin tiempo se creyé que el ATP se hallaba prima- riamente relacionado con la contraccién muscular, hasta que al comienzo de los afios 40 se puso de manifiesto el alcance completo del papel del ATP en todas las células, al cristalizar cierto nimero de observaciones iniciales en un cuadro signifi- cativo. Enumeraremos algunas de ellas. En los afios 30 se puso claramente de manifiesto, sobre todo a partir de las investigaciones de los bioquimicos alemanes Otto Warburg y Otto Meyerhof, que el ATP procede del ADP a través de reacciones enzimaticas acopladas durante la degradacién anae- robica de la glucosa a Acido lactico en el musculo (pag. 429). Posteriormente, H. Kalckar en Dinamarca y V. Belitzer en la Unién Soviética demostraron que el ATP también se genera a partir del ADP durante las oxidaciones aerobias en los tejidos animales, en el proceso de Ia fosforilacién oxidativa eePARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO (pag. 524), en concordancia con una hipétesis inicial de V. A. Engelhardt. La certidumbre de que el ATP es a su vez empleado en las funciones que precisan energia, se tuvo al fin cuando Engelhart y M. N. Lyubimova descubrieron que el ATP se hidroliza con produccién de ADP y de fosfato por la miosina, la proteina contractil principal del misculo, y cuando C. F. Cori y G. T. Cori en los Estados Unidos, asi como otros investigadores admitieron la necesidad de ATP en la fosforilacién de la glucosa, que adquiere asi un estado mas «energizado» para efectuar la biosintesis del glucégeno. Estas y otras muchas observaciones fueron reunidas en 1941 por Fritz Lipmann, en una hipétesis general sobre la transfe- rencia de energia en las células, a la que Kalckar aporté Fioura 15-1 Cicio det ATP. En la parte superior se muestra el ciclo tal como fue trazado por Lipmann en 1941. Utilizando sus propias palabras: . [F. Lipmann, Adv. Enzymol., 1: 122 (1941)]. En la parte inferior de la figura aparece tuna version en la que se muestran los usos principales de la energia. del ATP, / ff / /g § ie desecho Acido adenilico conductor Utilizacion Alimento, \ combustible \ yO 7 Transporte __Contraccién Osxidacién productora de Biosintesis oe ae energia de las moléculas (trabajo eetre, i Sia (trabajo (trabajo combustibles guimico) ae may A__ ADP +P, 398Ficura 15-2 Modelo espacial compacto y estructura del ATP. Véase también la figura 12-8. Capitulo 15 Principios de bicenergética y ciclo del ATP también importantes contribuciones. Lipmann sostenia la tesis de que el ATP acta de modo ciclico como transportador de la energia quimica de las reacciones catabélicas 0 degradativas del metabolismo, las cuales proporcionan energia quimica para los diversos procesos celulares que necesitan aporte de energia (fig. 15-1). El ATP se genera a partir del ADP mediante reacciones de fosforilacién ligadas o acopladas a expensas de la energia que se libera en la degradacién de las moléculas combustibles, Se postulé que el ATP generado de este modo, cedia su grupo fosfato terminal a moléculas aceptoras especi- ficas que resultaban activadas energéticamente, siendo enton- ces capaces de efectuar diversas funciones que precisan de energia en la célula; por ejemplo, la biosintesis de las macro- moléculas de la célula (trabajo quimico), el transporte activo de iones inorganicos y de nutrientes de la célula a través de ‘fas membranas en contra de gradientes de concentracién {trabajo osmético) y la contraccién muscular (trabajo mecéni- co). Al liberarse la energia del ATP para atender a estos procesos de consumo de energia, el ATP experimenta una escisién en ADP y fosfato inorganico. El ADP se refosforila a continuacién a expensas de la oxidacién de combustibles que liberan energia para formar ATP, completando de este modo el ciclo de energia celular. Se consideré que el grupo fosfato terminal del ATP experimentaba un recambio cons- tante, siendo continuamente transferido a moléculas de acep- tor y remplazado por grupos fosfato que alcanzaban un estado «energético> superior durante la degradacién catabélica de Jos combustibles celulares. Para comprender el funcionamiento del ATP como agente molecular de enlace en el flujo de la energia quimica, desde la oxidacién de los combustibles hasta los diversos procesos que consumen energia, debemos examinar, en primer lugar, algunas propiedades quimicas del ATP, y contemplar los prin- cipios fisicos que rigen la transferencia de energia por reac- ciones quimicas. Localizacién y propiedades del ATP, ADP y AMP La estructura del ATP (pag. 321 y fig. 15-2) deducida, en principio, por Lohmann en 1930, fue confirmada finalmente mediante una sintesis quimica total por Alexander Todd y colaboradores, en 1948. Se ha encontrado ATP, ADP y AMP en todas las formas de vida examinadas, tanto del mundo animal como vegetal. La suma de sus concentraciones en la fase acuosa de las células vivas permanece relativamente constante, estando sus cantidades comprendidas entre 2 y ee KAR ~ N - o wk i cH -0—P—0—P—0-—P—01 yA 0. Ney OH 399PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO 10 mM, segun las especies. En células de metabolismo activo, Ficura 15-3 la concentraci6n de ATP excede generalmente mucho a la Complejos metélicos del ATP y del ADI suma de las concentraciones de ADP y AMP. Estos nucleé- En los complejos de Mg” los dos tidos se hallan presentes no solo en el citoplasma soluble, sino = 97"? °* fosfato terminales son los ligandos. también en organulos como las mitocondrias y los ntcleos. Veremos mas adelante que la compartimentacién intracelular Mg?* del ATP constituye un rasgo importante en la regulacién ce- - oN lular del metabolismo (pag. 547). l | | A pH 7,0, tanto el ATP como el ADP son aniones muy Adenina-ribosa —Q—-P—O—P—O—P—C cargados. El ATP posee cuatro protones ionizables en sus i I I grupos fosfato condensados; el ADP posee tres. Tres de los cuatro protones del ATP se hallan totalmente ionizados a pH 7,0; el cuarto posee un pK’ de 6,95 y se halla, por tanto, ‘ Mg?* disociado alrededor del 50 % a pH 7,0. Veremos que la ele- so vada concentracié6n de cargas negativas, situadas muy cerca ae | | unas de otras en torno al grupo trifosfato del ATP, constituye Adenina-ribosa—O—P—O—F—O- un factor importante en su funcién de transferencia de energia. O O En las células intactas, el ATP y el ADP se-hallan presentes en gran parte como complejos 1:1 MgATP* y MgADP- de- bido a la elevada afinidad de los grupos pirofosfato por los cationes divalentes y las concentraciones relativamente eleva- das de Mg* en el fluido intracelular. La afinidad del ATP por el Mg** es de unas 10 veces la del ADP. En la mayor parte de reacciones enzimaticas, en las que el ATP participa como dador de fosfato, su forma activa es el complejo MgATP® (fig. 15-3). MgATP2- oo oO MgADP- Energia libre La descripcién de la base fisicoquimica de Ja funcién del ATP en el ciclo energético de la célula necesita la consideracién de algunos de los principios de equilibrio termodinamico, de la misma forma en que se aplican a las reacciones quimicas. La primera ley de la termodinamica es el principio de con- servacién de Ja energia: en cualquier proceso, la energia total del sistema y de su entorno permanece constante. Aunque la energia no se crea ni se destruye durante un proceso deter- minado, puede transformarse de una forma en otra; por ejem- plo, la energia quimica puede transformarse en energia tér- mica, radiante, eléctrica o mecanica, La segunda ley de la termodinamica establece que en todos los procesos, la entropia del sistema m4s la de su entorno, es decir, la entropia del «universo», experimenta siempre un in- cremento hasta alcanzar el equilibrio, en cuyo punto la entropia es la maxima posible en las condiciones de temperatura y de presién que prevalecen. La entropia es un término que podria considerarse como desorden o libertad. Dicho de otra manera, la segunda ley establece que la fuerza inductora fundamental de todos los procesos fisicos y quimicos, es la tendencia de la entropia del universo a alcanzar un valor maximo. Sin embargo, los cambios de entropia son de utilidad limi- tada en cuanto a prediccién de la direccién y posicién del equilibrio de las reacciones quimicas. O sea que la entropia no siempre puede medirse ni calcularse directamente en los procesos quimicos. Ademas, debemos poseer informacién no solamente acerca de los cambios entrépicos del sistema sino también de los del entorno. Un criterio mas util que el del cambio de entropia es el que se ha derivado para la prediccién 400Fioura 15-4 Resumen de las relaciones de la energia libre y de la entropia entre un sistema y su entorno cuando la temperatura, la presién y el volumen del sistema son constantes. La entropia del sistema + la del entorno, 0 la energia libre del sistema aislado, constituyen ef criterio para la prediccién de la direccién de las reacciones quimicas en las condiciones dadas. EI entorno: la entropia del entorno puede aumentar, permanecer constan- te o disminuir Universo = sistema + entorno: la entropia del universo aumenta siem- pre y tiende a alcanzar un valor maximo Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP de la direccién y posicién del equilibrio de las reacciones guimicas; es decir, la variacién de energia libre, que es aquella forma de energia capaz de efectuar trabajo en condiciones de temperatura y presién constantes. La relacién entre la varia- cién de energia libre de un sistema reaccionante y la entropia en condiciones de temperatura y presién constantes, como las que existen en las células vivas, se resume en la ecuacién AG = AH- TAS en la que AG es la variacién de energia libre del sistema, AH es la variacién de entalpia, T’ es la temperatura absoluta y AS es la variacién de entropia. Los términos de energia AG y AH se expresan en calorias, AS en cal grado” y la tempe- ratura en grados kelvin. La variacién de energia libre AG puede definirse como la fraccién de la variacién total de energia que es capaz de efectuar trabajo a medida que el sis- tema tiende hacia el equilibrio a temperatura, presion y volu- men constantes. En la figura 15-4 se resumen estas rela- ciones. Variacion de la energia libre estandar de las reacciones quimicas Consideraremos ahora la relacién fundamental entre la va- riacion de la energia libre de una reaccién quimica y su cons- tante de equilibrio, relacién que es basica para todos los aspectos de la energética bioquimica. Para la reaccién general aA + bB == cC+dD (a) en la que a, b, c y d son el nimero de moléculas de A, B, C y D que participan en la reaccién, la variacion de energia libre AG a presion y temperatura constantes viene dada por nll" AG =AG"+ RT nara @) en la que los corchetes indican concentraciones molares, R es la constante de los gases, T es la temperatura absoluta expresada en grados kelvin y AG? es la variacién de energia libre estandar de la reaccién. En la ecuacién (2), observamos que la variacién de energia libre de una reaccién es la suma de dos términos. El primer término, AG* o sea la variacion de energia libre estandar, es una constante fija cuyo valor es caracteristico para una reac- cién quimica determinada. Constituye una medida del des- censo de energia libre de dicha reaccién, cuando se permite que tenga lugar en condiciones estandar definidas arbitraria- mente; se definira con mas precision mas adelante. El segundo término es una variacién que refleja las concentraciones de los reaccionantes y de los productos de dicha reaccién. Po- demos calcular, por tanto, la variacién de energia libre para cualquier reaccién quimica a una temperatura determinada si conocemos su variacién de energia libre estandar caracteris- tica, la concentracién de los reaccionantes y la de los pro- ductos. Si permitimos que la reaccién (1) tenga lugar hasta alcanzar 401PARTE 2. CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE POSFATO el equilibrio, la energia libre del sistema disminuiré durante la conduccién hacia tal equilibrio, y es en el transcurso de este proceso cuando la reaccién seré teéricamente capaz de reali- zar trabajo a presién y temperatura constante. Finalmente, el sistema alcanzaré su punto de equilibrio, en el que ya no se produce ulterior cambio quimico neto. En este punto, la ener- gia libre del sistema se halla en el minimo para el conjunto de condiciones dado. El valor de AG es ahora cero y el sis- tema ya no es capaz de efectuar trabajo. En el punto de equilibrio la ecuacién (2) se transforma en 0=AG°+RT mf SE @) que reordenada se convierte en ar in (SLD) (4) act (Artay puesto que la constante de equilibrio K’a, (véase pag. 48) para la ecuacién (2) es Cj Ke TATE ) podemos sustituir K’., en la ecuacién (4) y obtener la ecua- cién general AG =—RAT In Keg o bien AG =—2,303RT log Kg ®) Cuando la constante R de los gases se expresa en calorias como unidades de energia (R = 1,98 cal mol K~), se obtiene AG en calorias por mol. Cuando la constante de los gases se expresa en julios como unidades de energia (R = 8,31 J mol K-!), se obtiene AG® en julios por mol. La ecuacién (6) puede ser utilizada, por tanto, para calcular AG*, la variacién de energia libre estandar a partir de la constante de equilibrio K’,, para cualquier reaccién determinada a cualquier tempe- satura. Definamos ahora la variacién de energia libre estandar con mayor precisién, Podemos hacerlo por dos caminos diferentes, que pueden ayudarnos a clarificar su verdadero significado. 1, La variacion de energia libre estandar de una reaccién quimica determinada es la diferencia entre la suma de Jas energias libres de los productos y la suma de las energias libres de los reaccionantes; cada uno de los. reaccionantes y de los productos debe hallarse en su estado estandar. El estado estandar de los componentes de las reacciones ‘en disolucién acuosa se acepta convencionalmente como una concentracién 1,0 ma la temperatura de 25°C o 298°K y la presién de 1,0 atmésfera.. [En energética bioquimica, la distincién entre disolucién molal (m) y molar (M) no se observa estrictamente; en lo sucesivo, 402Capitulo 15- Principios de bioenergética y ciclo del ATP tomaremos -concentraciones molares en todas las deduc- ciones y célculos termodinamicos]. Cada compuesto qui- mico posee una energia libre caracteristica en virtud de su estructura molecular. La variacién de energia libre estan- dar AG® de una reaccién quimica puede expresarse por la-ecuacién general AG* = E Gora — E Great ~ Para. el caso especial. de la reaccién (1), AG* viene dado por AG® = (cGo-+ dG) — (aG, + bG3) 2, La variacién de-energia libre estandar puede definirse de una segunda manera. La variacién de energia libre estandar 4G para la reacci6n (1) es la cantidad de ener- gia libre absorbida o perdida por mol cuando A y B se transforman en C y D en condiciones tales que las con- centraciones de A, B, C y D permanecen 1 M, mientras que la conversién se est realizando en condiciones estan- dar de temperatura y presién. Es de la mayor importancia comprender claramente la dife- rencia entre AG*, la variacién de energia libre estandar y AG, Ja variacién real o variacién observada de energia libre. Esta diferencia puede explicarse por analogia, AG* es una constante para cualquier reaccién quimica determinada a una temperatura dada, lo mismo que el valor del pK’ de un acido débil es una constante fija a una temperatura determinada (pag. 49). Por otra parte, el valor de AG varia con las con- centraciones de: los reaccionantes y las: de los productos, lo mismo -que varia el pH de una disolucién de un Acido débil con la-concentracién de sus formas aceptoras y dadoras de protones (pag. 48). El valor de AG solamente es igual al de ‘AG*- cuando todos los reaccionantes y los productos se hallan a-concentracién 1,0.M; del mismo modo que el pH de una.disolucién de un acido débil es igual a su pK’ cuando la concentracién de-sus especies dadoras y aceptoras de pro- tones es. 1,0.M. Es, por tanto, el valor: de SG el que determina si una reac- cién quimica se-producisé en la direccién escrita, partiendo de una concentracién determinada de reaccionantes y de produc- tos. Recuérdese que una reaccién quimica solamente se produ- ciré si AG posee signo negativo; es decir, solamente si dis- minuye la energia libre del sistema, Por otra parte, una reac- cién quimica cuya variacién de energia libre estindar, AG*, es positiva, puede todavia realizarse en el sentido en que se halla escrita si las concentraciones de los reaccionantes y de los productos son tales que el valor de AG sea negativo, Cuando una reaccién quimica, a temperatura y presién constantes, presenta una disminucién de energia libre, puede efectuar, tedricamente, una cantidad de trabajo que es ener- géticamente equivalente a la disminucién de energia libre. En. realidad, una reacci6n quimica solamente realiza trabajo si de algin modo puede acoplarse para utilizar la energia. El valor-de AG* de una reaccién quimica representa el tra- bajo maximo que puede realizar tericamente; la cantidad efec- 403PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO tuada en realidad, puede ser mucho menor o nula segin la eficacia del sistema o aparato empleado para el acoplamiento. Reacciones exergnicas y endergénicas La ecuacién (6) nos permite calcular la variacién de energia libre estandar AG* de cualquier reaccién quimica determinada a partir de su constante de equilibrio que, a su vez, puede calcularse mediante medidas analiticas. Si la constante de equilibrio de una reaccién es 1,0, entonces AG* = 0,0, y no se produce variacién de energia libre cuando 1,0 mol del reac- cionante o reaccionantes se convierte por completo en pro- ducto © productos, hallandose todos en concentracién 1,0 M. Si la constante de equilibrio es mayor que 1,0, la variacion de energia libre estandar, AG*, es negativa. Si la constante de equilibrio es menor que 1,0, AG es positivo. Las reacciones quimicas con una variacién de energia libre estandar negativa se'denominan exergénicas; tales reacciones se verifican es- Pponténeamente en la direccién en que se hallan escritas par- tiendo de concentraciones 1,0 M de todos los componentes. Las reacciones con una variacién de energia libre estandar Positiva reciben el nombre de endergénicas; no se verifican de modo esponténeo en la direccién en que estdn escritas cuando Jas concentraciones iniciales de los reaccionantes y de los pro- ductos son 1,0 M y, por el contrario, tienden a verificarse en la direccién opuesta. La tabla 15-1 muestra la relacién cuantitativa entre la variacién de energia libre estandar, AG®, y la magnitud de la constante de equilibrio, K’., Convenciones de Ia energética bioquimica Deben especificarse ahora algunas importantes convenciones del anélisis termodinémico de los sistemas bioquimicos. 1, Siempre que el agua sea un reaccionante o un producto en un sistema acuoso diluido, su actividad termodinémica © su concentracién se toman como unidad, aun sabiendo que la concentracién molar del agua en sistemas acuosos diluidos es en realidad de 55,5 M aproximadamente, 2. En la energética bioquimica, el pH 7,0 es designado por Jo general como estado de referencia, en lugar de pH 0,0 (al que la concentracién de ion hidrégeno es 1,0. M) como se emplea normalmente en quimica-fisica. La variacién de energia libre estandar a pH 7,0 se representa por AG* y la que tiene lugar a pH 0,0 por AG*, 3. Los valores de AG” utilizados en la energética bioquimica suponen que el estado estandar de cada uno de los reac- cionantes y de cada uno de los productos capaces de ioni- zarse es el de la mezcla de las formas ionizadas y no ionizadas que existen a pH 7,0. Por tanto, los valores de AG” basados sobre pH = 7,0 no deben ser empleados necesariamente a valores de pH diferentes, ya que la extensién de la ionizacién de uno o mas componentes puede variar con el pH. Ademés, una variacién del pH puede conducir a una diferencia en el nimero de iones H* y OH captados o liberados durante una reaccién. La variacién de AG* con el pH para algunas reacciones bio- quimicas es bastante grande y a veces‘de célculo dificil. 404 ‘Tasta 15-1, Relacién entre la constante de equilibrio y la variacién de energia libre estindar a 25°C.Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP 4. Las variaciones de energia libre estandar de los sistemas bioquimicos han sido expresadas, hasta ahora, en calorias como unidades (0 kilocalorias), pero una comisién interna- cional ha recomendado recientemente su expresién en ju- lios © kilojulios por mol (1 cal equivale a 4,184 J; 1 keal equivale, por tanto, a 4,184 kJ). En el texto expresare- mos las variaciones de energia en kilocalorias por mol, mientras que en las tablas de valores de energia libre vendrén expresadas en kilocalorias y kilojulios. Un ejemplo del céleulo de AG” A modo de ejemplo, podemos efectuar ahora el célculo de la variacién de la energia libre estandar a partir de los datos del equilibrio del enzima fosfoglucomutasa, que cataliza la xeaccién reversible Glucosa-I-fosfato = glucosa-6-fosfato ” El anflisis quimico muestra que si pattimos de una concen- tracién 0,020 M de glucosa-1-fosfato, afiadimos el enzima y dejamos que’ transcurra la reaccién en el sentido directo, o si partimos de glucosa-6-fosfato 0,020 M y dejamos transcurrir Ja reaccién en el sentido inverso, la mezcla final en equilibrio, en ambos casos, sera 0,001 M en glucosa-1-fosfato y 0,019 M en glucosa-6-fosfato, a 25°C y pH 7,0. Podemos calcular ahora la constante de equilibrio: A partir de este valor de K’sq se puede calcular la variacién de energia libre estandar, AG*, mediante la ecuacién (6): AG’ = — RT In Kg — 1,987 x 298 In 19 — 1,987 x 298 x 2,303 log 19 = — 1745 cal molt Si en lugar del valor de 1,987 cal mol K+ para la constante de los gases R utilizamos el valor equivalente de 8,314 J mol K+, la ecuacién (6) nos dard la variacién de energia libre estandar directamente en julios es decir, —7,301 J mol. La magnitud de las variaciones de energia libre estandar de las reacciones bioquimicas es de tal indole que resulta mas conveniente expresarlas en kilotalorias o en kilojulios que en calorias 0 en julios. El valor de AG para Ja reaccién de la fosfoglucomutasa anterior sera, por tanto, de —1,745 kcal mol", 6 7,301 kJ mol, Como el signo de la variacién de ener- gia libre estandar que hemos calculado para la ecuacién (7) es negativo, la conversién de glucosa-1-fosfato en glucosa-6- fosfato es un proceso exergénico. Aditividad de las variaciones de energia libre estandar Las variaciones de energia libre estandar de las reacciones quimicas son aditivas en cualquier secuencia de reacciones con- secutivas. Podemos considerar como ejemplo las siguientes reacciones consecutivas, que se hallan acopladas o ligadas por 405PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO intermediarios comunes; es decir, que B, el producto de la primera reaccién, es el reaccionante de la segunda reacci6n y C, producto de esta segunda reaccién, es el reaccionante en la tercera reaccién: Variacion de cng ie Reaccidn — "eitinder A—B acy eee AG? c—-+D AG; La suma de estas reacciones es A -» D, cuya variacion de energia libre estandar, AG,”, es la suma algebraica de los va- lores de AG” de las etapas individuales, cada una con su signo correspondiente: AG? = AG?’ + AGY + AG?’ Esta propiedad es utilisima para el célculo de la variacién de energia libre estandar de una reaccién cuando su.constante de equilibrio no puede determinarse directamente. En tal caso, la reacci6n puede acoplarse a una o varias reacciones diferen- tes de constantes de equilibrio conocidas y constituir una se- cuencia cuyo equilibrio global puede medirse-m&s facilmente. En el ejemplo anterior, conociendo los valores de AG,’,,AG2”, y AG.”, podemos calcular el de AG:”. Calculo de AG” a partir de las energias libres estandar de formacién Otro camino para llegar al valor de AG” para una reaccién quimica determinada es el cAlculo a partir de la energia libre esténdar de formacién de los sustratos y de los productos. Los resultados de muchas mediciones termodinémicas han demos- trado que cada tipo de compuesto organico posee una energia libre estandar de formacién, AG¢”, definida como la disminu- cién de energia libre que se produce cuando se forma un mol del compuesto a partir de sus elementos, hallandose cada uno de ellos en su estado estandar y en la relacién estequiométrica adecuada. Se han calculado las energias libres estandar. de formacién de muchos compuestos biolégicos, algunas de las cuales aparecen en la tabla 15-2. El valor de AG? de una reaccién quimica es igual a la suma de las energias libres estandar de formacién de los productos menos la suma de las energias libres estandar de formacién de los reaccionantes, teniendo en cuenta Ja estequiometria real de la reaccién: AG? = E AGF prod Z AGF react Calculemos ahora, mediante la relacién. anterior, la variacién de energia libre estandar, AG”, de la siguiente reaccién cata- lizada por el enzima fumarase, utilizando los datos de la tabla 15-2: Fumarato + H,O = malato °" = AGP aslato — (AG, temarat + AGFx40) = —201,98 — (144,41 — 56,69}: —0,88 kcal mol-? ‘Tapa 15-2. Energias libres estindar de formacién en disoluciones acuosas 1M a pH 70 y 25°C. ace" Sustanci kcal mol" kj mol Acetato~ 88.99 —3723 cis-Aconitato™ 220,51 —922.61 L-Alanina = 88,75 -8713, Ton amonio ~1900 ~79,50 L-aspartato™ = 166,99 —698,69 Ton bicarbonato —140,33 —587,14 Disxido de carbono (gas) 94.45 —395.2 Etanol , 43,39 — 181.6 Fumarato 14441 — 60421 2-0-Glucosa 219.22 -91721 Glicerina 11676 —488.64 Ton hidrégeno =9.55 96 Ton hidroxils ~37.60 3 @-Oxoglutarato™ = 190,62 -797.56 Lactato~ -12376 —517381 1-Malato” 201.98 —845.08 Oxalacetato™ —190,53 —797,18 Piruvato™ 11344 —474.63 Succinate” 164.97 —690.23 Agua (liquida) —56,69 —237,2Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP ‘Taota 15-3, Variacién de energia libre estindar de algunas reacciones quimicas en sistemas. acuosos diluidos, a pH 7.0 y 25°C. ace Reaccién kcal mol" KJ mot! Hidrélisis: Anhidridos de écido: Anhidrido acético + H:O —+ 2 acetato =218 =912 Pirofosfato + HiO —» 2 fosfato —80 -334 Basteres: Acetato de etilo + H,O —+ etanol + acetato ~47 -197 Glucosa-6-fosfato + HiO —+ glucosa + fosfato -33 -138 Amidas: Glutamina + H,O —+ glutamato + NH? —34 —42. Glicilglicina + H,O —> 2 glicina —22 -92 Glucésidos: Sacarosa + H,O —> glucosa + fructosa -70 23 Maltosa + H;O —» 2 glucosa ~40 ~167 Esterificacién: Glucosa + fosfato —> glucosa-6-fosfato + H.O +33 +138 -\7 7 04 =167 Eliminacién: Malato —> fumarato + H.O +0,75 +314 Oxidacion: Glucosa + 60; —+ 6CO; + 6HO 686 2870 Acido palmitico + 230; —> 16CO; + 161.0 —2338 9,782 Aunque el error en este tipo de célculos puede ser muy gran- de debido a que el valor de AG” representa generalmente una diferencia pequefia entre dos términos grandes, este método viene a ser casi siempre la Gnica via apta para obtener el valor de AG” de.una reaccién. Obsérvese que AG* para la reac- cién de la fumarase calculada por este procedimiento, difiere de este valor de —0,75. kcal mol obtenido mediante otro tipo de medicién tal:como aparece en la tabla 15-3. Las variaciones de energia libre esténdar de cierto niime- ro de reacciones biolégicas importantes, calculadas bien a partir de mediciones de equilibrio o de las energias libres es- tandar de formacién, se consignan en la tabla 15-3. Obsérvese que la oxidacién de las moléculas organicas por el oxigeno molecular se produce con descensos de gran calibre de la energia libre, Estas oxidaciones constituyen la principal fuente de energia de las células aerobias. Energia libre estandar de hidrélisis de los compuestos con enlace fosfato EI resto de este capitulo trata principalmente de las relaciones energéticas entre diversos compuestos fosforilados que parti- cipan en la transferencia de la energia quimica en la célula. A este objeto se emplea un patrén normalizado para expresar la tendencia termodinamica, o potencial, de un grupo fosfato de una molécula a ser transferido a otra molécula en una reac- cién catalizada enzimaticamente, de manera que se pueda pre- decir en qué direccién se efectuara la transferencia de dicho grupo fosfato y en qué punto la reaccién alcanzara el equili- brio. El patrén termodinamico viene proporcionado por la 407PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCIN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO ‘Tabta 15-4, Energia libre estindar de hidrélisis de algunos compuestos fosforilados. Potencial de transferencia et grape Compuesto kcal mol KJ. mol fosfato * Fosfoencipiruvato 14,80 -61,9 14,8 3-fosfogliceril-fosfato <0 49318 Fosfocreatina —10,30 -3l 10,3 Fosfato de acetilo 10,10 42,3 10,1 Fosfoarginina 7.70 322 77 ATP (—> ADP + P,) 7:30 30.5 73. Glucosa-1-fosfato 5,00 —20,9 5.0 Fructosa-6-fosfato 3,80 159 38 Glucosa-6-fosfato =330 0-138 33 Glicerilo-L-fosfato ~220 —92 22 * Definido como —AG* (kcal mol"). comparacién de la tendencia del grupo fosfato en diferentes compuestos fosforilados, a ser transferido a una molécula estandar capaz de aceptarlo, arbitrariamente escogida, o sea agua. La transferencia de un grupo fosfato desde una molé- cula capaz de cederlo, R-O—PO};, a la molécula del agua se expresa mediante la reacci6n R—O—PO,* + HOH == R—OH + HO—PO,? Reconocemos que esta reaccién representa, en realidad, la hidrélisis del éster fosforico R-O—PO;*. Asi, con objeto de obtener alguna impresién de la tendencia relativa de transfe- rencia de los grupos fosfato en diversos compuestos fosfato biolégicos, debemos determinar sus energias libres estandar de hidrélisis. Debe quedar claro, desde un principio, que los compuestos biolégicos con enlaces fosfato no experimentan, normalmente, simples reacciones de hidrélisis en la célula intacta; la eleccién del agua como aceptor de fosfato estandar para la comparacién termodinamica, es completamente arbi- traria, La tabla 15-4 muestra la energia libre estandar de hidré- lisis de cierto nimero de compuestos fosfato importantes que se encuentran en las células, entre ellos el ATP. Observamos que el ATP posee un valor de AG” de —7,3 kcal mol* (—305 kJ mol!) y se encuentra en la parte media de la escala de energia de los compuestos fosfato. Veamos cémo se ha determinado este valor. Energia libre estandar de hidrélisis del ATP En principio, el camino mas sencillo de llegar al valor de AG” para la reaccién ATP + HOH == ADP + fosfato (8) es determinando su constante de equilibrio a pH 7.0 y calcu- Jando AG” de la relacién [ecuacién (6)] AG? 2,303RT log Key 408Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP Sin embargo, la medida directa de la constante de equilibrio para la hidrélisis del ATP no es practica, ya que la reacci6n en el punto de equilibrio, ha avanzado tanto en la direccién de la hidrélisis, que los métodos analiticos asequibles no son lo suficientemente sensibles como para determinar con exacti- tud cuando se ha alcanzado el equilibrio y cuales son las concentraciones exactas en el equilibrio de ATP, ADP y fosfato. Constituye un serio problema practico la determina- cién de AG” para cualquier reaccién que posea un valor de AG” muy negativo (o muy positivo). En realidad, el valor de AG* para la hidrélisis del ATP, que designaremos como AG*sre, puede obtenerse aprovechando la naturaleza aditiva de los valores de AG” de las reacciones consecutivas. En prin- cipio, la variacién relativamente grande de energia libre es- tandar para la hidrélisis del ATP, puede dividirse en dos 0 més etapas'énergéticamente menores que pueden medirse mas facilmente, Por ejemplo, puede dejarse reaccionar el ATP con la _glucosa en presencia del enzima hexoquinasa, para rendir ADP y glucosa-6-fosfato. La constante de equilibrio de esta reaccién se mide y, a partir de ella, se calcula la variaci6n de energia libre estandar: hhexoquinasa, ATP +glucosa = ADP + glucosa-6-fosfato (8) Keg= 661 AG} =—4,0 kcal mol-* A continuacién se efectéa la medicién de la constante de equi- librio y el célculo de la variacién de energia libre estandar, AG", para la hidrélisis de glucosa-6-fosfato para rendir glu- cosa y fosfato, catalizada por la glucosa-6-fosfatasa: ucoss-6- Fostatase Glucosa-6-fosfato + H,O —==— glucosa + fosfato (10) Ka=171 AGY =—3,3 kcal mol La suma de las reacciones (9) y (10) es la ecuacién para la hidrélisis del ATP, ATP + H,O0 == ADP + fosfato Puesto que los valores de AG*’ de las dos reacciones son adi- tivos, la energia libre estandar de hidrélisis del ATP puede calcularse a partir de ellos: AGrp = AG?’ + AGS’ 4,0 + (~3,3)=—7,3 kcal mol Otro método para la determinacién de AG para la hidr6- lisis del ATP a ADP y fosfato es el que proporcionan las medidas del equilibrio de la reaccién ATP +glutamato+ NH, === ADP + fosfato + glutamina (11) que es catalizada por el enzima glutamina-sintetasa. La reace cién puede considerarse como constituida por dos componen- tes. El componente exergénico, que proporciona energia libre, es la reaccién ATP + H,O == ADP + fosfato (12) 409PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO El componente endergénico, que precisa del consumo de ener- gia libre, es Glutamato + NH, == glutamina+ H,O (a3) La suma de ambas reacciones es, por supuesto, la reaccién (11). La variacién de la energia libre estandar, AG:”, de la reac- cién (13) es conocida y vale +3,4 kcal mol. Si puede me- dirse la constante de equilibrio y la variacién de la energia libre estandar, AG,”, de la reaccién total (11), podemos calcu- lar la variacién de energia libre estandar AG,” para la reac- cién (12) utilizando el principio de la aditividad de las va- riaciones de la energia libre estandar. Se ha encontrado que AG,” de la reaccién global (11) es —3,9 kcal mol. La variacién de energia libre estandar AG,” para la hidrélisis del ATP se calcula a continuacién del modo siguiente: AG? = AG? + AG?’ —3,9= AG} + 3,4 AG}' =—7,3 kcal mol" Los valores de AG*’ de la hidrélisis del ATP, a ADP y fosfato, que se encuentran en otros libros de texto y trabajos de investigacién, varian algo, en parte debido a dificultades analiticas para la obtencién de valores precisos de las cons- tantes de equilibrio de las reacciones empleadas, tal como se mencioné anteriormente, y en parte por el hecho de que las mediciones efectuadas en laboratorios diferentes no siempre han sido realizadas en las mismas condiciones de temperatura, pH y concentracién de Mg”, cada una de las cuales puede influir muy marcadamente sobre la energia libre de hidrélisis del ATP, como veremos mas adelante. Los valores mas se- guros de AG” para la hidrélisis del ATP a ADP y fosfato, a pH 7.0, 25°C y en presencia de Mg? 20 mM, se hallan com- prendidos entre —7 y —8 kcal mol!, Utilizaremos en este libro el valor de AGare” = —7,3 kcal mol! (—30,5 kJ mol) (véase Bibliografia). En cualquier caso, lo realmente impor- tante en la funcién del ATP como intermediario en el trans- porte de la energia quimica, no es tanto el valor absoluto de AGare” como su valor en relacién con los valores de AG” de hidrélisis de los dadores de grupos fosfato al ADP, biolé- gicamente importantes, y los valores de AG* de los compues- tos fosforilados formados por transferencia del fosfato ter- minal del ATP a diversos aceptores durante el ciclo del ATP (tabla 15-4), tal como veremos mas adelante. El grupo fosfato terminal del ADP posee también una ener- gia libre estandar de hidrolisis a pH 7,0 relativamente grande: ADP + H,O == AMP + P, AG” =—7,3 kcal mol~* Sin embargo, el grupo fosfato del AMP posee un valor in- ferior AMP + H,O == adenosine + P, 4G" = —3,40 kcal mol" Recordemos (pag. 321) que los enlaces entre los grupos fos- fato adyacentes del ATP y del ADP son enlaces anhidrido, mientras que el enlace entre el acido fosférico y la ribosa en 410Capitulo 15 Principios de bicenergética y ciclo del ATP el AMP. es un enlace éster. En general, los enlaces anhidrido poseen una energia libre estandar de hidrélisis mucho mayor que la de los enlaces éster. Base estructural de la variacién de energia libre durante la hidrélisis del ATP jCuales son los rasgos estructurales de la molécula de ATP que confieren a su grupo fosfato terminal una energia libre estandar de hidrélisis mas negativa, a pH 7,0 (6G” = —7,3 kcal mol), que la de otros compuestos con fosfato que se hallan por debajo de él en Ja escala termodinamica (ta- bla 15-7)? yPor qué es més negativa, por ejemplo, que la de la glucosa-6-fosfato, cuya energia libre de hidrélisis para liberar- glucosa y fosfato es de solamente —3,3 kcal mol? Todo éllo equivale a preguntar por qué el equilibrio de hidro- isis del grupo fosfato se halla mucho més desplazado en la direccion de completatse la reaccién en el caso del ATP que para la glucosa-6-fosfato. Debido a’que la energia libre estandar de hidrélisis es una medida de la diferencia entre la energia libre de los productos y-la de kos reaccionantes, la respuesta a esta cuestién reside en las propiedades ‘de los productos y de los reaccionantes. El ion fosfato, a pH préximo a 7,0, es un hibrido en resonan- cia ei el que el doble enlace formal posee un significative caracter de enlace simple, y el enlace simple formal opuesto posee un considerable caracter de enlace doble. Tales hibridos en resonancia ‘son~mas’ estables (es decir, contienen menos energia libre) que lo que indican sus estructuras formales; se estabilizan: por una cantidad de energia llamada energia de estabilizacién por resonancia. Los grupos fosfato del ATP, el ADP-y el AMP, asi como de otros diversos compuestos fosforilados son todos hibridos en resonancia, que se estabi- lizan mediante cantidades diferentes de energia de resonancia, Jas cuales dependen de la configuracién electrénica de los grupos funcionales adyacentes, Cuando tales compuestos ex- perimentan ‘/hidrélisis se produce un cambio significativo en la energia de resonancia que se refleja de diferentes modos. Asi ocurfe que la diferencia de energia de resonancia entre los reaccionantes y los productos es mayor para la hidrélisis del ATP que para la hidrélisis de la glucosa-6-fosfato. Ademas, a pH 7,0, las moléculas de ATP poseen por término medio unas 3,5 cargas negativas situadas muy préximas, las cuales se repelen mutuamente con fuerza. Al hidrolizarse el grupo fosfato terminal, se elimina en parte esta tensién eléctrica en el interior del grupo trifosfato complejo, debido a la separa- cién de los aniones HPO? y ADP*. A causa de la carga negativa de tales aniones, se repeleran entre si, y por tanto, no se recombinarén con facilidad para formar el ATP. En contraposici6n, cuando la glucosa-6-fosfato experimenta hidré- lisis, la glucosa, uno de los productos, no posee carga neta; dado que la molécula de glucosa y el ion fosfato no se repelen ‘mutuamente, tienen una mayor tendencia a recombinarse. Los dos atomos de fésforo terminales del ATP poseen una fuerte tendencia para atraer electrones, lo cual convierte al enlace anhidrido del fosférico en mas susceptible a la hidrélisis que el simple enlace éster de la glucosa-6-fosfato. Otra consecuen- cia de la diferencia de configuracién electronica de los reac- 411PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO cionantes y de los productos, es que el ADP y el fosfato se hallan mas fuertemente hidratados que el propio ATP, lo que constituye otro factor que tiende a impulsar la hidrélisis del ATP a su casi total realizacién. En general, los anhidridos de Acido, por ejemplo, el grupo pitofosfato del ATP y el grupo acil-fosfato del 3-fosfogli- ceril-fosfato son compuestos de elevado contenido energético cuya AG” de hidrélisis es muy negativa. Otras clases de compuestos que poseen AG” muy negativas son los ésteres endlicos (el fosfoenolpiruvato), los tioésteres (acetil-CoA) y los. derivados de la fosfoguanidina (fosfocreatina). En to- dos los casos la configuracién electronica especial del enlace que experimenta la hidrélisis, o la que se halla préxima a él, es la responsable, en iltimo término, de los valores fuerte- mente negativos de AG” de hidrélisis. El término energia del enlace fosfato empleado a veces por 5 los bioquimicos, no e confundirse con el término energia de enlace utilizado por los quimico-fisicos, que designa la energia necesaria para romper un enlace entre dos Stomos. En realidad, se necesita una cantidad relativamente grande de energia para romper un enlace quimico covalente, el cual no existiria si no fuese completamente estable. Aunque durante la hidrélisis de los ésteres fosféricos se rompe un enlace P—O, otro nuevo se forma también. La energia del enlace fosfato representa de modo especifico la diferencia entre la energia libre de los productos y la energia libre de los reaccionantes cuando un compuesto fosforilado experimenta su hidrélisis. Lo enlaces fosfato de alto contenido de energia, es decir, aquellos cuya hidrélisis se verifica con AG negativa, se sim- bolizan, a veces, con la tilde ~, mientras que los grupos fos- fato de alto contenido energético se representan por ~P. Asi, el ATP puede simbolizarse por A-R—P ~ P ~ P, el ADP por A~R—P ~ P y la fosfocretina por P ~ Cr, Condiciones que afectan a la AG” de hidrélisis del ATP Son varios los factores que influyen sobre la magnitud de la Fioura 15-5 energia libre de hidrélisis del ATP. Los datos de la figu- Efecto de! pH sobre la energia libre de ta 15-5 muestran que AGarp experimenta un fuerte incremento _/idrdlisis del ATP (AGuar). a medida que aumenta el pH. Esto constituye un reflejo del hecho de que los pk’s de las diltimas etapas de ionizacin del ATP, del ADP y del fosfato son diferentes: a HATP == ATP + Ht HADP?- == ADP* + Ht H,PO, == HPO, + Ht 6,95 La presencia de Mg* alterara también el valor de AGarp. Las = -4Gare especies iénicas ATP+, ADP* y HPO? forman complejos con el Mg* en las reacciories reversibles Mg" + ATP == MgATP*- Mgi* + ADP®- == MgADP- . Mg* + HPO’ == MgHPO, Ademas, las especies iénicas HATP*, HADP* y H,PO; forman también complejos con el Mg”. Puesto que la afinidad 6 del Mg para cada una de las seis especies de fosfatos es 6 7 @ diferente y esta afinidad crece a su vez con el pH, resulta pH 412Ficura 15-6 Efecto de la concentracién de Mg" sobre la energia libre de hideolisis del ATP a pH 7,0. ~aCare 1020 30 40 50 [Mg?*], mM Capitulo 15. Principios de bioenergética y ciclo del ATP claro que los efectos del pH y de la concentracién del ion Mg* sobre el AGurp pueden ser muy complejos. La figura 15-6 muestra el efecto de la concentracién creciente de Mg* sobre Ja Garr a pH 7,0. El valor de SGarp, para un pH determi- nado, concentracién de Mg” y fuerza iénica puede obtenerse mediante graficas preparadas por métodos de ordenadores electronicos (véase Bibliografia). Por ultimo, las concentraciones de ATP, de ADP y de fosfato en las células intactas estan muy alejadas de las con- centraciones esténdar, 1 M, en las que se basan los valores de SG* para todas las reacciones. Después de efectuar las correcciones apropiadas para la concentracién intracelular de Mg* y-el pH, asi como para las concentraciones reales en el estado estacionario de ATP, ADP y de fosfato en la fase acuosa intracelular, se ha calculado que la energia libre de hidrélisis del ATP en las células intactas es de .— 12,5. kcal mol aproximadamente. Para que la comparacién entre las diversas reacciones tenga solidez, se emplea el valor de AG” = —7,3 kcal mol para la variacién de energia libre estandar, pero esta completamente claro que deben aplicarse correcciones bastante grandes a este tipo de célculos si es que han de reflejar las condiciones intracelulares reales y los procesos que tienen lugar en dichas condiciones. Resulta evi- dente, ademés, que la energia libre de hidrélisis del ATP en Ja célula no es necesariamente‘constante; puede variar de vez en cuando e incluso por su lovalizacién en Ja célula, segan el pH, la concentracién de Mg” y las concentraciones de ATP, de ADP y de fosfato en cualquier momento y lugar. Potencial de transferencia del grupo fosfato Los compuestos fosforilados hallados en las células se clasi- fican, frecuentemente, como compuestos de alto contenido energético o con bajo contenido energético, segiin sea la mag- nitud de los valores del AG* de su hidrélisis, Por ejemplo, el ATP. es clasificado habitualmente como un fosfato de ele- vado contenido energético. Sin embargo, los valores de AG” para diversos fosfatos, que aparecen en la tabla 15-4, en la que se hallan ordenados en sentido decreciente, muestran que existe una clara division de los fosfatos en dos clases. Por otra parte, varios compuestos fosforilados .poseen valores de AG” mucho mas negativos que el mismo ATP, que exhibe un valor intermedio en esta escala termodinamica. Los com- puestos situados en la parte superior de la escala, como por ejemplo el 3-fosfogliceril-fosfato, tienden a hidrolizarse mas completamente en el equilibrio que los que se hallan situados en la parte inferior de dicha escala, y poseen, por ejemplo, una constante de equilibrio de hidrélisis superior. Cualquier compuesto situado en la escala por encima del ATP tenderé a perder su grupo fosfato y a cederlo a una molécula capaz de aceptar dicho grupo, la cual se hallaré en la parte inferior de la escala, como por ejemplo el ADP, siem- pre que se halle presente un catalizador capaz de promover su transferencia, De modo parecido el ATP tendera a ce- der su grupo fosfato a su aceptor situado por debajo de él en la escala, como por ejemplo la p-glucosa. Asi, esta escala nos informa acerca de la tendencia termodinamica 0 poten- cial del grupo fosfato de los diferentes fosfatos, a experimen- 413PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO tar transferencia. La expresién de potencial de transferencia del grupo fosfato; se emplea frecuentemente para indicar la «presién» del grupo fosfato; a veces se da como una magnitud adimensional con signo positivo, como aparece en la ta- bla 15-4. El hecho de que el ATP posea un valor intermedio en esta escala resulta de especial significacion, ya que el ATP desem- pefia el papel de un interm comin en la mayor parte de las reacciones de transferencia de grupos fosfato en la célula catalizadas por enzimas: el ADP puede aceptar un grupo fosfato de un compuesto fosforilado que se halle situado por encima de él en la escala, y el ATP que se forma puede ceder dicho grupo fosfato a una molécula capaz de aceptarlo tindiendo un fosfato situado mas abajo en la escala. Principio del intermediario comin: reacciones acopladas En dos reacciones consecutivas en las cuales un producto de Ja primera, actiia como sustrato en la segunda, como en el ejemplo A+B—>C+D D+E—+F+G se dice que las reacciones se hallan acopladas mediante un intermediario comin, en este caso el componente D. El tnico medio mediante el cual la energia puede ser transferida de una reaccién a la otra en condiciones isotérmicas (aparte del fe- némeno de fluorescencia), es el de que ambas réacciones posean un intermediario de reaccién comin. Casi todas las reacciones metabélicas de la célula se realizan segén secuencias conse- cutivas de esta clase. En las reacciones consecutivas responsa- bles de la transferencia de energia a través del ATP, ‘Ja ener- gia quimica se transfiere desde un dador ‘de un grupo fosfato de energia elevada al ADP, conservandose en forma de ATP como producto de la reaccién. En la reaccién siguiente, en la que el ATP actéa como sustrato, su grupo fosfato terminal se transfiere a una molécula capaz de aceptarlo, provocando en ella su transformacién en un compuesto'con wn coritenido energético mas elevado. El ATP es, por tanto, el intermediario comiin que desempefia el papel de enlazar o acoplar reacciones enziméticas, que se efectian con la-transferencia de ‘grupos fosfato, comportandose de este modo como un vehiculo para Ja transferencia de Ia energia quimica. En realidad, la trans- ferencia de la energia quimica a través de intermediarios co- munes constituye un atributo general de las: reacciones: qui- micas consecutivas, y no precisa, necesarfamente, de grupos fosfato o de ATP. De hecho, veremos que existen ‘otros mu- chos grupos distintos del fosfato, por ejemplo, los atomos de hidrégeno, los grupos amino y acetilo, que son transferidos enzimaticamente mediante reacciones consecutivas’ con’ inter- mediarios comunes. Sin embargo, las. células utilizan fund: mentalmente grupos fosfato con objeto de transferir la energi en las rutas metabélicas centrales. Examinemos ahora més de cerca las variaciones de energia libre que se producen’1) en la transferencia enzimética de un grupo fosfato desde una molécula de un dador-al ATP, y 2)-1a-transferencia enzimatica del ‘grupo fosfato terminal del ATP a-una molécula de aceptor’de fosfato,’con objeto de 414Froura 15-7 Transferencia de un grupo fosfato desde el 3-fosfogliceril-fosfato al ADP. e 3-fosfogliceril- fosfato 2HeOH * O- —_ St ADP? {| fata po a I oe Josfoglicerato Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP ver-en forma mas cuantitativa cémo funciona el sistema ATP ADP, como intermediario comin en la corriente priteipal:de transferencia de energia quimica de la célula. ‘Transferencia enzimStica de grupos fosfato al ADP Desde el punto de vista del metabolismo, existen dos clases generales de fosfatos de alto contenido energético, en los cuales la AG” de hidrélisis es més negativa que la del ATP, que podran servir, tanto, como dadores de fosfato para al ‘ADP (tabla 15.4). Los miembros del primer grupo, entre Jos que se hallan el 3-fosfogliceril-fosfato y el fosfocnolprava- to, se generan durante la degradacién enzimatica, liberadora de energia, o catabolismo. de las moléculas combustibles. Los miembros del segundo grupo, entre los que se halla la fosfo- cretina y la fesfoerginina, actéan como depésitos de energia quimica en los misculos. Examinemos las reacciones enzima- ticas mediante las cuales estos componentes ceden sus grupos fosfato al ADP. Tanto el Jefoafogiveril fost fosfato como el fosfoenolpiruvato se producen durante la glucdlisis (pag. 427), proceso de degra- dacién de la glucosa a Acido lactico en el que una cantidad considerable de energia es cedida al misculo y a otras células, En realidad, estos compuestos no experimentan hidrdlisis en la célula sino que sus grupos fosfato son transferidos al ADP. En el caso del 3-fosfogliceril-fosfato la reaccién catalizada por 3-fosfogticerato-quinasa, es la siguiente 3-fosfogliceril fosfato + ADP = 3-fosfoglicerato + ATP (14) La variaci6n de energia libre estandar de esta reaccién se ha calculado a partir de. su constante de equilibrio (K’ = 2,070) y es de —4;50 kcal mol-!, Considerando el valor verdadera- mente muy elevado de la constante de equilibrio y el valor negativo, bastante grande de AG”, esta claro que esta reaccién, si se parte de concentraciones 1 M de reaccionantes y de productos, avanzaré muy acentuadamente hacia la derecha; en el equilibrio, casi el 99,9 % del ADP se habré transfor- mado en ATP por transferencia de los grupos fosfato del 3-fosfogliceril fosfato al ADP, y la energia se conservara en el ATP formado. Obsérvese, a partir de los datos de la ta- bla 15-4, que el valor de AG” de la reaccién (14), 0 sea, —4,50 kcal mol", es igual a la diferencia entre AG” de hi- dtélisis del 3-fosfogliceril fosfato y AG” de la hidrélisis del ATP, o sea —11,8 —(—7,3) = —4,5 kcal mol", Asi 4,5 / 11,8 x. 100 = 38 % de la energia libre global de hidrélisis del 3-fosfogliceril fosfato se ha empleado para «introducir» su grupo fosfato en el ADP, mientras que el 62 % restante se halla conservado ahora en el ATP formado, Resulta claro segiin este ejemplo que si sabemos el valor de AG” para la hidrélisis de un fosfato, podemos predecir el valor de AG” para la reaccién en la que su grupo fosfato es transferido al ADP, o viceversa, El 3-fosfogliceril-fostato debe su elevado potencial de transferencia de grupo al hecho de que es un anhidrido de Scido (fig. 15-7). De una manera semejante el fosfoenolpiruvato, que también se forma durante la degradacién de la glucosa a Acido lactico 415PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO (pag. 441), cede su grupo fosfato al ADP en una reaccién catalizada por la piruvato-quinasa Fosfoenol-pituvato + ADP = piruvato + ATP (15) En realidad, esta reaccién tiene lugar en dos etapas (fig. 15-8). En la primera la forma enolato del piruvato se forma después de realizada la transferencia del grupo fosfato al ADP. A pH 7,0 el enolato capta un prot6n, convirtiéndose rapida- mente en la forma ceto, probablemente de modo no enzimatico: esta etapa es la responsable de Ja mayor parte del impulso termodinamico, La reaccién global posee una constante de equilibrio positiva muy grande, y por tanto un valor de AG” negativo también grande, a saber, —7,5 kcal mot-!, indicando que en el equilibrio, casi todas las moléculas de fosfoenolpiru- vato han cedido sus grupos fosfato al ADP. Podemos obser- var de nuevo que el valor de AG” para esta reaccién, es igual a la diferencia entre el AG” para la hidrélisis del fosfo- enolpiruvato y la de hidrélisis del ATP; es decir, —14,8— (—7,3) = —7,5 kcal mol, De este modo, a través de estas dos reacciones de transferencia de grupos fosfato, la mayor parte de la energia de la degradacién de la glucosa a lactato se transfiere al ADP y se conserva como ATP, en condicio- nes de ser facilmente utilizada por las reacciones en las que se consume energia. Los fosfatos que desempefian el papel de depésito o alma- cenadores de energia del enlace fosfato se designan, frecuen- temente, como fosfagenos; los mas importantes son la fosfo creatina (fig. 15-9), presente en el tejido nervioso y en el misculo de los vertebrados, y la fosfoarginina, (fig. 15-10) que se encuentra en los invertebrados. En ambas, el atomo de fésforo se halla unido directamente a un atomo de nitré- geno de un grupo guanido. El grupo fosfato es transferido enzimaticamente desde estos compuestos al ADP por los en- zimas creatina-quinasa y arginina-quinasa, respectivamente. La teaccién de la fosfocreatina es la siguiente: Fosfocreatina + ADP = creatina + ATP 4G” = —3,0 kcal mol! Los valores de AG” negativos, significativamente grandes, in- dican que esta reaccién tiende también a realizarse hacia la derecha, si se parte de concentraciones 1 M de los reaccio- antes y de los productos. Obsérvese, de nuevo, que el AG" ‘de esta reaccién puede predecirse a partir de los valores de AG de hidrélisis de la fosfocreatina y del ATP. Muchos ‘gxperimentos sobre el mecanismo y la ruta de las reacciones de transferencia de fosfato enzimaticas entre el ATP y diver- 49 aceptores de fosfato, frecuentemente mediante empleo de gxigeno isotépico como marcador, han demostrado que no es oO al grupo fosférico el que se transfiere (-0-PGo) , sino el o oO ‘grupo fosfo (-P&0) , como se muestra en la figura 15-11. 416 Ficura 15-8 Transferencia de un grupo fosfato desde el fosfoenol-pieuvato al ADP. La causa principal del gran valor negative de AG” para esta reaccién es la conversién no enzimatica del enol-piruvato, el producto inmediato, en la forma cefo que predo- mina a pH 7 y que se muestra mas abajo. eae No Fosfoenol- . piruvato -o—P—o- + ADP [ganas Conversion no enzimatica de la forma enol a forma ceto del piruvato. ope | Se o=4Ficura 15-9 Estructura y modelo espacial compacto de la fosfocreat OH Hy ole on™ | Aa No o- Figura 15-10 Estructura de la fosfoarginina. gi o O=P ~N—C—N—(CH,),—CH—C i a) a NH *NH; Adenina Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP ‘Transferencia de grupos fosfato desde el ATP a diversos aceptores En la segunda fase de su funcién como transportador de energia, el ATP puede ceder su grupo fosfato terminal a una gran variedad de moléculas capaces de aceptar el fosfato en reacciones catalizadas por enzimas especificos. Entre estos aceptores se hallan la Deglucosa y la D-glicerina. El enzima hexoquinasa cataliza la reaccién ATP + p-glucosa = ADP + p-glucosa-6-fosfato (16) AG* = —4,00 kcal mot! Obsérvese que el AG*’ de esta reaccién es fuertemente nega- tivo, indicando con ello que los grupos fosfato tenderan a transferirse a la glucosa si se parte de concentraciones 1 M de todos los reaccionantes y de todos los productos. Por tanto, en esta reaccion la direccién de la transferencia de los grupos fosfato se realiza hacia fuera del ATP, mientras que en las reacciones (14) y (15) se efectuaba hacia. dentro del ADP, para formar ATP. La diferencia es que el producto fosfori- lado resultante de la transferencia del grupo fosfato desde el ATP a la glucosa, es decir, la glucosa-6-fosfato, posee una energia libre estindar de hidrélisis inferior (menos negativa) que la del ATP (véase tabla 15-4), mientras que el 3-fosfo- gliceril-fosfato y el fosfoenolpiruvato poseen valores de AG” mayores (mas negativos) que el ATP. Obsérvese de nuevo que el valor de AG® para la reaccién (16) puede predecirse a partir de los valores de AG” de hidrélisis del ATP y de la glucosa-6-fosfato (tabla 15-4). De este modo, el grupo fosfato terminal del ATP puede ser transferido a cierto nimero de diferentes moléculas sillares, proceso que las «energiza», pre- par&ndolas para las reacciones biosintéticas subsiguientes. Rutas enzimaticas de la transferencia de fosfato La figura 15-12 es un diagrama de las reacciones enzimaticas de transferencia de fosfato en la célula. Una importante ca- racteristica del sistema ATP-ADP. es la conexién primaria entre fosfatos de alto y de bajo contenido de energia. Los grupos fosfato se transfieren, en primer lugar, por accién de fosfotransferasas especificas desde compuestos de contenido Fioura 15-11 Transferencia enzimitica del grupo fosfato terminal det ATP a un aceptor ROH. Estas reacciones se producen por lo general debido a un desplazamiento nucleofilico sobre el stomo de fésforo. El grupo transferido es —POs*. AdeninaPARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCIGN DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOSFATO 18 Fosfoenolpiruvato Fioura 15-12 Flajo de grupos fosfato desde tos dadores 14) Dadores P de fosfato de energia clevada hasta los elevada energia aceptores de baja energia, a través del sistema ATP-ADP. La direccién del Flujo tiene lugar hacia compuestos que poseen un potencial de grupo fosfato bajo, saponiendo condiciones esténdar y que todos fos reaccionantes y los productos se allan en concentracion 1 M. 2 Potencial de transferencia de grupos fosfato » 2 ol energético elevado hasta el ADP, como en el ejemplo Fosfoenolpiruvato + ADP “=~ piruvato+ ATP El ATP asi formado se convierte después en el dador de fosfato en una segunda reaccién enzimatica para formar un fosfato con bajo contenido de energia, de este modo ADP + p-glucosa-6-fosfato EI resultado neto es la transferencia de un grupo fosfato desde el dadot de elevada energia al aceptor de baja energia, a través del sistema ATP-ADP como mediador. La reaccién global es, por tanto, Fosfoenolpituvato + p-glucosa ==. piruvato + D-glucosa-6-fosfato Como resultado de las dos reacciones acopladas, la glucosa se ha convertido, mediante su fosforilacién, en un compuesto con mayor contenido de energia, la glucosa-6-fosfato, que puede ser considerado como una forma energéticamente acti- vada de la glucosa, y que puede actuar como precursor en la biosintesis del glucégeno y del almidén, consumidores de ener- gia (pag. 657). En casi todas las reacciones de transferencia de fosfato entre los metabolitos, el ADP desempeiia el papel de aceptor inter- mediario de fosfato, mientras que el ATP hace de dador intermediario de fosfato, en reacciones semejantes a las an- teriores. Variacin de energia libre estindar y reversibilidad biolégica de las reacciones enziméticas En el tema anterior hemos visto que cuando el valor del AG” de una reaccién es negativo y relativamente grande, la reac- cién tiende a producirse hacia la derecha como esta escrita y si se parte de concentraciones 1 M de todos los reactivos y 418Capitalo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP de todos los productos, y que la posicién exacta del equilibrio podré predecirse a partir del valor de AG. Asi, hemos visto que los grupos fosfato tenderan a transferirse, por ejemplo, desde el fosfoenolpiruvato al ADP, y del ATP a la glucosa, ya: que cada una de estas etapas transcurre con un valor nega- tive:de AG", Ja: primera con AG” = —7,5 kcal mol" y la se- gunda con-AG* = —4,0 kcal mol. Esta es, en realidad, la direccién-de. la transferencia del -grupo fosfato en la célula intacta: Sinsembargo;no podemos llegar necesariamente a la con- clusion de que porque una reaccién enzimética determinada posea un fuerte valor megativo para su variacién de energia libre estandar, haya de ser irreversible en la célula. Se sabe que algunas reacciones enzimaticas que poseen un valor de AG” de —4,0 kcal mol, por ejemplo la catalizada por la hexoquinasa, son esencialmente irreversibles en la célula, mien- tras que otras reacciones que poseen aproximadamente el mis- mo valor de AG”, pueden desplazarse en ambas direcciones en la‘ célula."Como se ha sefialado anteriormente (pag. 401), los valores de AG”. para las-reacciones quimicas suponen que las concentraciones de todos los reaccionantes y productos son 1 M, muy diferentes de las concentraciones que realmente existen en la célula, Resulta por tanto completamente posible, que. una reaccién.dada, enzimaticamente. catalizada, como A = B, con un valor de AG" = —4,0 kcal mol", avance hacia la izquierda'en el interior de Ia célula, siempre que A se halle presente a ung concentracién muy baja y B lo esté en-concen- tracién muy elevada. Por ejemplo, si A est siendo constante- mente -eliminado, a velocidad elevada mediante otra reaccién, y se-mantiene asi su concentracién practicamente despreciable, B se convertiré completa y rapidamente en A. E! anilisis termodinémico de las reacciones individuales del metabolismo precisa, por tanto,; del conocimiento’de las concentraciones reales de log metabolitos importantes en la célula, asi como de sus veloctdades de formacién y de empleo. Almacenadores de grupos fosfato de energia elevada Debe insistirse mucho en que el ATP no actda primordial- mente como depositario. de la energia quimica, sino que lo hace como transmisor o transportador de esta energia. La cantidad de ATP existente en la célula en un instante dado sélo suficiente para un corto periodo, Sin embargo, algunas células poseen fosfatos que actéian como almacenadores de energia, por ejemplo la fosfocreatina. La figura 15-12 muestra el papel de almacenador de la. fosfocreatina, la cual se forma en la transferencia enzimatica directa de.un grupo fosfato desde el ATP a la creatina, cuando la concentracién del ATP es elevada; no existe otra ruta para la formacién de fosfocreatina. Ademés, la tnica ruta conocida para la desfosforilacién de la fosfocreatina es la inversién de la reaccién mediante la cual se forma. El depésito de fosfocreatina se lena, por tanto, de grupos fosfato cuando el ATP esta presente en concentra- cién elevada, pero cuando desciende su concentracién y se eleva con ello la de ADP, los grupos fosfato son devueltos al ADP desde la fosfocreatina. El sistema de la fosfocreatina es especialmente importante en el misculo esquelético, en el que puede proporcionar la energia quimica necesaria para 419PARTE 2 CATABOLISMO Y PRODUCCION DE LA ENERGIA DEL ENLACE FOBFATO efectuar contracciones musculares durante varios minutos (cap. 27). Se halla también en el miisculo liso y en las células nerviosas, pero solamente en cantidades muy pequefias en el higado, el rifisn y otros tejidos de los mamiferos, y no se encuentra en absoluto en las bacterias. La fosfoarginina actiia de un modo semejante en los masculos de algunos inverte- brados, por ejemplo en el cangrejo y en la langosta. Algunos microorganismos almacenan grupos fosfato de energia elevada en forma de granulos insolubles que contienen polimetafosfato, un polimero lineal de tamafio indefinido (fig. 15-13). Estos granulos se tifien de un modo caracteristico con colorantes basicos; reciben el nombre de granulos. de volutina, Los grupos fosfato pueden liberarse del polimeta- fosfato por enzimas especificos. Canalizacién de los grupos fosfato a través de otros nucleésido-5’-trifosfatos Aunque el sistema del ATP-ADP es el transportador obliga- torio de grupos fosfatos en el flujo principal de transferencia de la energia celular, intervienen también, en dicha transfe- rencia de energia celular, los 5’-difosfatos y 5’-trifosfatos de otros ribonucleésidos y 2-desoxirribonuclesidos (cap. 12). Los 5’-di y trifosfatos de diversos ribonucledsidos desempefian no solamente el papel de precursores energéticamente activos en la sintesis del RNA, sino que canalizan también grupos fosfato de contenido energético elevado hacia otras reacciones biosintéticas especificas (fig. 15-14). Todos estos canales se conectan con el ATP a través de la accién del enzima nucleésido-difosfato-quinasa, que se encuentra en las mito- condrias y en el citoplasma soluble de las células; cataliza las reacciones reversibles del tipo mostrado en la figura 15-15. Este enzima es relativamente poco especifico con respecto a sus sustratos. No solamente transfiere fosfato entre el ATP y cualquier NDP, sino también entre cualquier NTP y cual- quier NDP, aunque las velocidades de tales reacciones depen~ den de la naturaleza de los sustratos. La constante de equili- brio para todas estas transferencias de grupo fosfato es apro- ximadamente de 1,0 a pH 7,0, ya que la energia libre estandar de hidrolisis del grupo fosfato terminal de todos los ribo- nuclebsido y desoxirribonucleésido-5’-trifosfatos es aproxima- damente la misma. La figura 15-14 muestra también que cada tipo de nucles- sido-5‘-trifosfato desempefia una funcién especializada, El tri- fosfato de uridina (UTP) es el dador inmediato de fosfato (y por tanto el dador de energia) de muchas reacciones que tienen lugar en los tejidos animales y que conducen a la sintesis de los polisacaridos (pags. 655 y 657). Andlogamente, el trifosfato de citidina (CTP) es el dador dé energia para varias reacciones de la biosintesis de los lipidos (pag. 684). La figura 15-14 muestra también que los desoxirribonucledsido- 5’-trifosfatos canalizan a los grupos fosfatos de energia ele- vada hacia Ja sintesis del DNA. Papel del AMP y del pirofosfato Hemos visto que el ADP es el producto de muchas reacciones gue utilizan el ATP en la célula asi como también el aceptor 420 Figura 15-13, Estructura del polimetafostato. é -o-b=o 6 “0-0Ficura 15-14 Canalizacién de grupos fosfato de energia elevada, hacia diferentes rutas biosintéticas a través de los 5'-trifosfatos de los ribonucledsidos y desoxirribonucleésidés. DNA Figura 15-15 Reacciones catalizadas por la nucleésido- difosfato-quinasa. ATP + UDP == ADP + UTP ATP + GDP == ADP +GTP ATP + CDP = ADP + CTP GTP + UDP = GDP + UTP ATP + dCDP = ADP + dCTP GTP + dADP = GDP + dATP Capitulo 15 Principios de bioenergética y ciclo del ATP directo: del fosfato en las reacciones productoras de energia de la glucélisis y de la fosforilacién oxidativa. Sin embargo, en muchas reacciones celulares que utilizan el ATP, los dos grupos fosfato terminales del ATP se separan enzimstica- mente de una sola ver en forma de pirofosfato (PP;), siendo el AMP el otro producto. Tenemos como ejemplo la activa- cién enzimatica de un acido graso para formar su éster con el coenzima A, importante intermediatio , Adv. Enzymol., 18: 99-162 (1941). Establecimiento clasico del ciclo del ATP. ROSING, J. y EC. SLATER:

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