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PREINFORME DE LABORATORIO DE BIOQUMICA

METABLICA

1. ACTIVIDAD URESICA EN MUESTRAS DE ORIGEN BIOLGICO


2. CAPACIDAD AMORTIGUADORA
(P

Y POTENCIAL AMORTIGUADOR

DE MUESTRAS BIOLGICAS

3. DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE),


EN FORRAJES, POR EL MTODO DE FENOL-CIDO SULFRICO

ERNESTO CARLOS MARTELO DIAZ


CODIGO: 7.920.500
CCAV: Simn Bolvar

MARIA GABRIELA ROMERO

ESCUELA ECAPMA
MAYO DE 2014

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA


UNAD

ERNESTO CARLOS MARTELO DIAZ CCAV: SIMON BOLIVAR, CARTAGENA


emartelo@unadvirtual.edu.co

PREINFORME DE LABORATORIO DE BIOQUMICA


METABLICA

LABORATORIO 1
INTRODUCCIN
La ureasa (EC 3.5.1.5) es una enzima que cataliza la hidrlisis de urea a dixido
de carbono y amonaco. La reaccin ocurre de la siguiente manera:
(NH2)2CO + H2O CO2 + 2NH3.
Se encuentra principalmente en semillas, microrganismos e invertebrados. La
ureasa es esencial en el ciclo del nitrgeno ya que la mayora de las plantas solo
pueden utilizar el nitrgeno en forma de nitrato y amonio
MAPA CONCEPTUAL

MENTEFACTO

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METABLICA

MATERIALES Y MTODOS.
CUADRO I: LISTA DE EQUIPOS UTILIZADOS
Materiales y equipos requeridos
MATERIA / EQUIPO

CARACTERSTICA

Tubo de ensayo
Gradillas
Pinzas
Erlemeyer
Pipetas graduadas
Matraz aforado
Bao termostatado
Beaker
Vareta
Soporte Universal
Muestras

Pyrex mediano
Metlica
Para bureta
125 ml
5 a 10 ml
100 ml
Temperatura 37 C
400 ml
25 ml
Metlico
Suelo, forraje, harina

CUADRO II: LISTA DE REACTIVOS UTILIZADOS


Reactivos a utilizar

REACTIVOS

FORMULA

CONCENTRACION

Clorur de mercurio
cido Clorhdrico
Clorur de Sodio
Urea
Ureasa

HgCl2
HCI
NaCl
H2NCONH
En Buffer

1%
0,1N
1%
0,25M
0,5%

PROCEDIMIENTO: Extraccin y solubiliza ion de ureasas en harina suelos o


forraje (mtodo salting out): peso de la muestra +/- 1g, 10ml de NaCl 1 % en un
tubo de centrifuga, agitar por 5 minutos, centrifugar a 3500 mpr por 5 minutos, el
precipitado se descarta, tomar el sobrenadante y medir Vf = VS, rotular tubos de

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METABLICA
ensayo: EHAU (extracto de harina para actividad ureasica), ESAU ( extracto de
suelo para actividad ureasica, EFAU( extracto de forraje para actividad Ureasica).
CUANTIFICACIN DE LA AU: mezclar los reactivos como indica la tabla de la
gua en la pgina 5.
TITULACIN: tara y alistar montaje y enrazar la ureta con HCl 0.1 N, tomar 3 ml
de B en Erlenmeyer con 3 gota de indicador tashiro, color azul verdoso prueba
positiva para ion NH4. Titular B hasta color rosado violaceo (prueba positiva para
ion NH4, registrar en tabla de datos ml de HCl gastados, repetir procedicmiento
anterior con ST y las muestras.
EN LABORATORIO Peso muestras: Wm; Extraccin con NaCl 1%;
Centrifugacin; Filtracin; medida sobrenadante: Vs; Titulacin con HCl; Registro
de mL gastados: VHCl; Tabla de datos

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METABLICA

Indicadores
Muestras/Tubos

Wm(g)

Vf(mL)

V HCI(mL)

Suelo
Harina
Forraje
Standar
Blanco
Tipo de muestras
analizadas

Origen, ubicacin, geografa, regin,

RESULTADOS ESPERADOS:
La actividad de la enzima ser mayor en el suelo, intermedia en forrajes y menor
en la harina, igualmente con la cantidad de HCl 0.1 N gastado.

GLOSARIO:
RBE: Reaccin Bioqumica Enzimtica, sigue cinemateca Michaelliana
AU: Actividad ureasica: velocidad con que la ureasa hidroliza la urea, hasta
convertirla en Amonio y gas carbnico
NNP: Nitrgeno No proteico: Nitrgeno presente en molculas orgnicas como la
urea e inorgnicas como Amonio y el Nitrato (NO3-) Urea

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METABLICA

LABORATORIO 2
Ttulo de la prctica: Carbono orgnico, materia orgnica y capacidad
amortiguadora de suelos
INTRODUCCION
El suelo es un mezcla heterognea y contiene componentes orgnicos e
inorgnicos, con capacidad amortiguadora, que es el potencial qumico que tienen
los sistemas edficos para regular y controlar su pH, cuando son sometidos a
procesos de acidificacin y alcalinizacin; esta regulacin se da por la presencia
de sistemas amortiguadores biolgicos, de la materia orgnica e inorgnica del
suelo.

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METABLICA

MATERIALES Y MTODOS.
Materiales & equipos requeridos

Material / Equipo
Caractersticas
Erlenmeyer De 125mL
Pipetas graduadas De 10mL
Esptula metlica
Probeta graduada De 100mL
Bureta De 25mL
Soporte universal Metlico,
con pinza para bureta.
Beaker De 250mL
Potencimetro

Material / Equipo Caractersticas


Erlenmeyer De 125mL
Pipetas graduadas De 10mL
Esptula metlica
Probeta graduada De 100mL
Bureta De 25mL
Soporte universal Metlico, con pinza para bureta.
Beaker De 250mL
Resistor cuyo valor de resistencia es Variable. De esta manera, se
puede controlar la intensidad de corriente que fluye.

Equipo de titulacin Bureta y


Equipo de titulacin Bureta y un matraz Erlenmeyer.
un matraz Erlenmeyer.
Balanza analtica
Espectrofotmetro
Celdas espectrofotomtricas
Embudos
Papel filtro
Muestras de suelo

Balanza analtica
Sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre
valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de
radiaciones y la concentracin o reacciones qumicas que se miden
en una muestra
El embudo es un material empleado para canalizar lquidos y
materiales gaseosos granulares en recipientes con bocas angostas.
Papel que se corta en forma circular y se introduce en un embudo
de filtracin, con el fin de ser filtro para las impurezas insolubles y
permitir el paso a la solucin a travs de sus poros
Fraccin de suelo

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METABLICA

REACTIVOS A UTILIZAR
REACTIVO
cido sulfrico
Dicromato de potacio, 1N
cido fosoforico
Difelinamina
Hidroxido de Sodio 0, 1N
cido Clorhidrico 0, 1N
Fenolftaleina
Agua destilada

FROMULA
H2SO4

CONCENTRACION
Concentrado

K2Cr2O7 1N
H3PO4
C12H11N
NaOH 0 1N
HCL 0 1N
C20H14O4
H2O

Solucion Bufer fosfato

PROCEDIMIENTO
En Campo

Se deben muestrear 500 g de suelo

En laboratorio

Carbono Orgnico (CO), Mtodo de titulacin volumtrica


Carbono Orgnico (CO), Mtodo Espectrofotomtrico
Capacidad amortiguadora , Mtodo Potenciomtrico

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METABLICA

DIAGRAMA DE FLUJO

Datos para determinacin de carbono orgnico, mtodos volumtricos y


espectrofotomtricos

Muestras

Peso (Wm)

VFeSO4

Absorbancia (A)

M1
M2
Blanco (B)

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METABLICA

Datos pontenciomtricos para capacidad amortiguadora de suelos


Muestras

Peso (Wm)

Volumen(mL)

pH1

pH2

Suelo 1
Suelo 2
Agua
Destilada
Solucin
Buffer

RESULTADOS ESPERADOS:

Hallar los valores de carbono orgnico, materia orgnica y Nitrgeno total

en las muestras estudiadas.


Hallar los valores de capacidad y potencial amortiguador de las muestras
analizadas

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LABORATORIO 3
Ttulo de la prctica: Determinacin de carbohidratos no estructurales, en forrajes,
por el mtodo de fenol-cido sulfrico
INTRODUCCIN
La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos
vivos, y cataliza la reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno en agua
y oxgeno. En esta prctica, la actividad de catalasa se determinar por el mtodo
permanganomtrico, en el cual se titula el perxido residual, es decir, el que no
particip en la RBE, con una solucin de permanganato de potasio (KMnO4) de
concentracin conocida
MENTEFACTO DIAGRAMA CONCEPTUAL

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METABLICA

MATERIALES Y EQUIPOS

MATERIA / EQUIPO

CARACTERSTICA

Soporte universal
Pipeta Graduada
Probeta Graduada
Beaker
Tubos de ensayo
Erlemeyer
Bureta

Metlico con pinzas para bureta


De 5 y 10 ml
De 100 ml
De 400 ml
Con gradilla
De 125 ml
De 25 ml

REACTIVOS A UTILIZAR
REACTIVO
Buffer fosfato

FROMULA
H2O2

CONCENTRACION
0,03 M

cido sulfrico

H2SO4

2N

Permanganato de fosfato

KMnO4

0,01 M

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METABLICA
PROCEDEMIENTO
EN CAMPO:

Se toman frutas, verduras y suelos concentrados en muestras picadas o


pulverizada (2g) para determinar los extractos de las mismas para la
catalasa.

EN LABORATORIO:

Wm, centrifugacin, filtracin, Vf, agitacin, rotulacin y determinacin de


extracto para catalasa.

ESQUEMA
3. Filtrar
& medir
volumen
del
mismo

2.
LLevar
la al
Beaker

1. Pesar
la
muestra

4. Agitar
mezcla

5. Tapar
y rotular

Muestras /tubos
Indicadores

Wm (g)

Vf (mL)

VKMnO4 (mL)

Suelo

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METABLICA

Harina

Forraje
Verdura
Blanco
Tipo de muestras
Analizadas

Origen, ubicacin
geogrfica, regin,
agro climatologa

RESULTADOS ESPERADOS:
Determina la cantidad de carbohidratos totales No estructurales, basndose en su
contenido de almidones hidrolizables y azcares solubles.

GLOSARIO
ESPECTROFOTMETRO: Instrumento usado en el anlisis qumico que sirve
para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una
misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la
concentracin o reacciones qumicas que se miden en una muestra.
TRANSMITENCIA: Es una magnitud que expresa la cantidad de energa que
atraviesa un cuerpo en la unidad de tiempo (potencia).
ABSORBENCIA: Es la cantidad de intensidad de luz que absorbe la muestra.

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METABLICA

BIBLIOGRAFIA
Granados, J.,(2010),Modulo Bioqumica Metablica, Unidad 2,cap 2; ECAPMA;
UNAD
Granados, J.,(2010),Protocolo prcticas de laboratorio, Paginas 3-8; ECAPMA;
UNAD
Granados., J; Garca, J.,(2000),Fsico-Qumica Aplicada; Cap 11, Ed Antropos,
Bogot, Colombia
http://amortiguadoresbiologicos.blogspot.com/
es.wikipedia.org/wiki/Compuesto_orgnico
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www.wordreference.com/definicin/heterogneo
http://es.wikipedia.org/wiki/Absorbancia
http://es.wikipedia.org/wiki/transmitencia

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