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AMBIENTAL
Biorremediacin
Monitoreo
Control de la
ambiental
polucin
AGROPECUARIO
MEDICINA
APLICACIONES
UTILES
Diagnstico
Rendimiento de
Calidad de
cosechas
alimentos
Salud animal
Biosensores
Bioprocesos
Vacunas
Teraputica
Cultivo de clulas y
tejidos
Ingeniera gentica
HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido
Anticuerpos monoclonales
Ingeniera de protenas
Bioqumica
Ingeniera
Bioqumica
Microbiologa
Biologa Celular
Inmunologa
CONOCIMIENTO
Computacin
CIENTIFICO
Biologa Molecular
Gentica
Fisiologa
DEFINICION
Segn la Organizacin de
Cooperacin y Desarrollo
Econmicos:
Es la aplicacin de los
principios cientficos y de la
ingeniera al procesamiento de
materiales por agentes
biolgicos para proveer bienes y
servicios.
PRINCIPIOS
CIENTIFICOS Y DE LA
INGENIERIA:
Conjunto muy amplio
de disciplinas que ponen
especial nfasis en la
Microbiologa,
Bioqumica, Biologa
Molecular, Gentica,
Inmunologa e
Ingeniera Bioqumica y
Qumica.
MATERIALES:
Incluye a aquellos
orgnicos e
inorgnicos, en tanto
los agentes biolgicos
son, en general,
catalizadores
biolgicos; en
particular,
microorganismos,
clulas animales,
clulas vegetales, virus
y enzimas.
BIENES:
Todos los productos
(alimentos, productos
farmacuticos, recuperacin
de metales, etc.)
SERVICIOS:
Lo relacionado
especficamente con las
prestaciones tales como
purificacin de agua o
tratamiento de efluentes y
extraccin de derrames de
petrleo.
AREAS TEMATICAS
PRIORITARIAS
SALUD:
Vacunas (desarrollo de
vacunas por procedimientos
que utilicen ingeniera
gentica).
Reactivos de diagnstico:
Desarrollo de reactivos por
tcnicas inmunolgicas
(enzimo-inmunoensayos o
por ingeniera gentica).
AREA AGRICOLA:
Diagnstico de fitopatgenos en plantas
de inters econmico.
Desarrollo de agentes de control biolgico
y plantas.
Desarrollo de plantas transgnicas
resistentes a las plagas, enfermedades y
herbicidas. Modificacin del contenido
celular en macromolculas.
Mtodos de mejoramiento de especies a
travs de tcnicas no convencionales.
Aceleracin en la obtencin de hbridos.
Utilizacin de marcadores moleculares.
Identificacin y caracterizacin de genes
de inters.
AREA PECUARIA:
SANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de mtodos para
el diagnstico de
enfermedades animales.
Produccin de nuevas
vacunas virales, bacterianas
y parasitarias por tcnicas de
avanzada.
PRODUCCION ANIMAL:
Manipulacin y sexado de
embriones.
Hormonas para el
mejoramiento de la
produccin animal.
PRODUCCION DE
INSUMOS
INDUSTRIALES:
Mejoramiento y control
de calidad de las
industrias de alimentos,
incluyendo derivados
lcteos, vinos y cervezas.
Tratamiento biolgico de
efluentes.
HISTORIA DE LA
BIOTECNOLOGIA
Hablando de generacin
espontnea, veamos
algunas recetas
interesantes
Me maravill el hecho de
que este animal hubiese
podido nacer, crecer y vivir
all. Pero el cantero me dijo
que no haba por qu
asombrarse, pues varias veces
haba hallado animales de sta
y de otras clases en lo ms
recndito de las piedras, sin
que existiese el menor indicio
de una abertura. Se puede
explicar as el nacimiento y la
vida de estos animales: son
engendrados a partir de alguna
sustancia hmeda de las
piedras, cuya humedad, al
entrar en putrefaccin,
produce tales seres.
Los descubrimientos de
Pasteur, Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming
(1928) revolucionaron el
tratamiento de las
enfermedades infecciosas con
el descubrimiento de los
antibiticos.
Durante la Segunda Guerra
Mundial comienza la tercera
era biotecnolgica, por la
necesidad de contar con
ciertos medicamentos para
que las vctimas no murieran
de sepsis bacteriana.
Entrando ya en
tema
El desarrollo de un proceso
de produccin a gran escala,
en forma exitosa, es el
resultado de acelerar e
intensificar un concepto
original, generalmente un
procedimiento de laboratorio
o a pequea escala.
La actividad de
desarrollo se concentra
en tres reas principales:
Ingeniera de fermentacin.
EL FERMENTADOR
DEFINICION OPERATIVA:
Contenedor en el que se
mantiene un medio ambiente
favorable para la operacin de
un proceso biolgico deseado.
En cuanto al biorreactor:
Para cada proceso
biotecnolgico, el sistema
de contencin ms
apropiado debe disearse
para brindar el mejor medio
ambiente, optimizado para
el crecimiento celular y
actividad metablica.
Equipos accesorios.
Vlvulas de seguridad
Manmetros
Vlvulas de control
Tuberas
Control de temperatura
Control de pH
Control de espumas
Puntos de muestreo
BIOLOGICO
QUIMICO
FISICO
AIREACION Y AGITACION.
La agitacin es necesaria para:
1- incrementar la velocidad de
transferencia de oxgeno desde
las burbujas de aire al medio
lquido; los microorganismos
no pueden utilizar oxgeno
gaseoso, sino solamente el que
se encuentra en disolucin.
2- aumentar la velocidad de
transferencia de oxgeno y
nutrientes desde el medio a las
clulas. Debido al movimiento
se evita que las clulas creen
reas estancadas con bajos
niveles de oxgeno y
nutrientes.
3- impedir la formacin de
agregados celulares.
4- aumentar la velocidad de
transferencia de productos
metablicos de las clulas al
medio.
5- aumentar la tasa o la
eficiencia de la transferencia
de calor entre el medio y las
superficies de refrigeracin
del fermentador.
Tipos de fermentador:
Crecimiento en suspensin.
En el crecimiento en suspensin,
los organismos estn sumergidos
y dispersados en el medio
nutritivo y su movimiento sigue al
del medio.
En los sistemas con soporte,los
organismos crecen como una
monocapa o pelcula sobre una
superficie en contacto con un
medio nutritivo.
En la prctica, sin embargo, los
sistemas en suspensin poseen
una pelcula de organismos en la
superficie del contenedor y en
sistemas con soporte,
encontramos organismos
dispersos en el medio nutritivo.
TECNOLOGIA DE
BIOPROCESOS FERMENTACION
PRINCIPIOS DE
CRECIMIENTO
MICROBIANO
El crecimiento de
microorganismos puede
verse como el incremento
en el material celular,
expresado en trminos de
masa o nmero de clulas.
El incremento en biomasa
puede determinarse
gravimtricamente o
numricamente para
sistemas unicelulares.
Tiempo de duplicacin:
Se refiere al tiempo
requerido para duplicar el
peso de la biomasa.
Tiempo de generacin:
Se refiere al tiempo
necesario para duplicar
el nmero de clulas.
En un proceso biotecnolgico,
existen tres formas de hacer
crecer a los microorganismos en
un biorreactor:
-Por lotes (batch)
-Semi-continuo
-Continuo
El ambiente nutricional
dentro del biorreactor
cambia en forma continua y,
por lo tanto, fuerza
cambios en el metabolismo
celular.
Eventualmente, la
multiplicacin celular cesa
por desaparicin o
limitacin de nutrientes y
acumulacin de productos
txicos de excrecin.
En un sistema de cultivo
perfectamente mezclado,
se pasa medio estril al
biorreactor, a un flujo
constante y una mezcla de
cultivo (medio, productos
de desecho y organismos)
emergen del mismo a la
misma velocidad,
manteniendo el volumen
total del cultivo, dentro del
biorreactor, constante.
Ventajas de un proceso
por lotes:
Las principales son: menor
riesgo de contaminacin,
flexibilidad operacional
cuando los fermentadores
se utilizan para distintos
productos, un control ms
cercano de la estabilidad
gentica del organismo, una
mejor coordinacin con
estadios del proceso entre
lotes previos y posteriores.
Esterilizacin:
Esterilizacin de fermentadores.
En el laboratorio, el mtodo
estndar de esterilizacin es
el calor: 120C de calor
hmedo durante 15 min o
160C de calor seco durante,
al menos, 1 hora. A escala
industrial, el calor seco es
prohibitivamente caro, salvo
en casos muy especiales y se
utiliza, habitualmente, la
esterilizacin por calor
hmedo.
El calentamiento se
consigue mediante:
Inyeccin de vapor en el
medio, por lo que el medio
se prepara ligeramente
ms concentrado para
compensar la dilucin por
el vapor condensado.
El medio se calienta por
conduccin, haciendo
pasar vapor por la camisa
de termostatizacin.
Procesamiento
posterior de la
muestra.
Purificacin.
El diseo y la operacin
eficiente de los procesos de
purificacin, son elementos
vitales para obtener los
productos deseados para
uso comercial.
Deberan reflejar la
necesidad de no perder ms
que lo absolutamente
necesario del producto
final.
El procesamiento involucrar
ms de una etapa:
-Destilacin
-Centrifugacin
-Filtracin
-Ultrafiltracin
-Extraccin con solventes
-Adsorcin
-Tamices moleculares
-Electroforesis
-Cromatografa de afinidad
-Liofilizacin
TECNOLOGIA
UTILIZANDO
ENZIMAS
La tecnologa de enzimas
involucra la produccin,
aislamiento, purificacin, uso
en forma soluble y,
finalmente, la inmovilizacin
de las enzimas para su
utilizacin en gran variedad
de biorreactores.
La utilizacin de sistemas
enzimticos libres de
clulas, presenta ventajas
respecto de los procesos
qumicos que involucran un
nmero de reacciones
secuenciales.
En fermentacin, el uso de
microorganismos como
catalizadores puede
presentar las siguientes
limitaciones:
INGENIERIA
GENETICA E
INGENIERIA
PROTEICA DE
ENZIMAS
La utilizacin de estas
tcnicas ha posibilitado
producir enzimas
industriales con muy buena
calidad y pureza.
Crecimiento de microorganismos
conteniendo la enzima de utilidad
Purificacin de
la enzima
Determinacin de
la secuencia parcial
de aminocidos
Sntesis de
oligonucletidos
Purificacin de mARN
total
mARN
ADN
Identificacin de clones
Transformacin de microorganismos
Produccin industrial de enzima
Objetivos en la preparacin de
enzimas modificadas:
1. Aumentar la actividad de las
enzimas
2. Mejorar la estabilidad
3. Permitir que funcionen en un
ambiente diferente
4. Cambiar el pH o temperatura
ptimos
5. Cambiar la especificidad para
que utilice un sustrato
diferente
6. Cambiar la reaccin
catalizada
7. Aumentar la eficiencia de un
proceso
ENZIMAS
INMOVILIZADAS
ESTERILIZACION Y
ESTERILIDAD
La esterilizacin es el proceso
de conseguir la esterilidad,
para la que no existen grados:
un objeto, superfcie o sustancia
es, o no es, estril.
Si es estril no contiene
organismos viables o clulas
presentes y, si se le protege
contra la contaminacin, la
condicin estril permanecer
indefinidamente.
La desinfeccin implica que el
material ha sido tratado a fin
de eliminar o reducir el riesgo
de organismos patgenos, pero
no implica que todos los
organismos viables hayan sido
inactivados.
La esterilizacin se utiliza
para:
1. Asegurar que un proceso se
lleva a cabo solamente con
el organismo deseado
2. Permitir la utilizacin
segura de los productos
3. Evitar la contaminacin
ambiental
4. Impedir el deterioro de un
producto
La esterilizacin se lleva a
cabo:
Eliminando los organismos
viables como en la filtracin
Matndolos de una de las
siguientes formas:
1. Calentando en presencia o
ausencia de agua
2. Irradiando con radiaciones
ultravioleta, gamma o X
3. Tratando con productos
qumicos en solucin o en
forma gaseosa
Radiacin
La radiacin ultravioleta no
es muy penetrante y no se
puede confiar en ella como
agente esterilizante, a menos
que se pueda garantizar la
exposicin directa del
organismo contaminante.
Los rayos gamma y X son ms
tiles debido a su alto poder
de penetracin.
Determinacin de la destruccin
de microorganismos:
Tiempo trmico letal: tiempo
ms corto que lleva destruir los
microorganismos a una
temperatura determinada
Punto trmico letal:
temperatura ms baja que se
necesita para matar a los
organismos en 10 minutos.
Para ambos se necesita saber el
tamao inicial de la poblacin y
las condiciones precisas. No son
particularmente tiles.
Mtodos prcticos:
Calentamiento:
Para comparar las capacidades
relativas de esterilizacin de los
diferentes procesos de
calentamiento, se requiere una
unidad de letalidad.
La unidad escogida es el efecto letal
de un minuto de calentamiento, a la
temperatura de 121oC.
F = t * 10(T-121)/z
Donde t= tiempo de aplicacin del
tratamiento letal; T= temperatura
en oC y z= aumento de temperatura
requerido para reducir el perodo de
calentamiento en un 90% (es decir el
valor z).
En la industria alimentaria el
peligro ms serio para la salud
es la presencia de Clostridium
botulinum, el formador de
esporas patognico ms
resistente al calor, as como el
agente ms txico.
En esterilizacin clnica:
Calor hmedo:
Vapor a 134oC (30 psi), 3 min
Vapor a 126oC (20 psi), 10 min
Vapor a 121oC (15 psi), 15 min
Vapor a 115oC (10 psi), 20 min
Procesos discontinuos:
Autoclaves:
Todo el aire debe ser
eliminado antes del ciclo de
calentamiento, ya que mezclas
de aire y vapor a una presin
determinada alcanzarn una
temperatura ms baja que la
del vapor puro a la misma
presin.
Calentamiento indirecto:
Pasando vapor de agua a travs
de una espiral de intercambio
de calor o de una camisa. El
calor en este procedimiento es
menos eficiente que por
inyeccin directa y, en ambos
casos, permanecen los
problemas de enfriamiento,
generalmente conseguido
mediante espirales.
Esterilizacin por
radiaciones:
Normalmente se lleva a cabo
con una fuente de cobalto-60
o de cesio-137.
El efecto letal es siempre
mayor en presencia de
oxgeno y alto contenido en
agua.
La unidad de medida de la
dosis de radiacin es el rad,
equivalente a una energa de
absorcin de 100 ergs/g de
aire. El Roentgen (R) es 83
ergs/g de aire.
Esterilizacin qumica:
Formaldehdo: solamente
efectivo si se puede
garantizar que entre en
contacto con los organismos
contaminantes. Pobre
difusibilidad y poder de
penetracin. Olor picante y
duradero. Solamente en
casos especiales.
Perxido de hidrgeno:
poderoso agente oxidante
que mata clulas vegetativas
y esporas con actividad
creciente con la
concentracin, temperatura
y normalmente pH. Sus
productos de degradacin
son inocuos.
Oxido de etileno y de
propileno: pueden utilizarse en
forma gaseosa. El de etileno
es ms efectivo pero
altamente txico, irritante y
violentamente explosivo en
mezclas con aire. Su efecto
letal sobre las bacterias
depende de la humedad; las
condiciones ptimas incluyen
40-80% de humedad relativa
y temperatura de 60oC
durante 3-4h, para una
concentracin de gas de 8001000 mg/l. El proceso se
utiliza cuando el equipo puede
ser daado por altas
temperaturas.
Evaluacin de la eficiencia de
esterilizacin:
1. Termosensores
2. Tubos de Browne: tubos de vidrio
cerrados con 0,15 ml de un fluido
rojo que cambia a verde al aumentar
el calor
3. Tiras de papel impregnadas con
esporas: bioindicadores. Se incuban
luego del tratamiento para evaluar la
supervivencia
4. Tiras indicadoras: responden al calor
hmedo entre 115-123oC. Indican la
dosis de calor por distancia recorrida
de un colorante azul
5. Cinta adhesiva de autoclave: indica
que el vapor, a un mnimo de 120oC,
alcanz la cinta cuyas rayas se tornan
de blancas a negras. No asegura
esterilidad sino que un objeto ha sido
procesado mediante vapor.