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BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL

Biorremediacin
Monitoreo
Control de la
ambiental
polucin

AGROPECUARIO

MEDICINA

APLICACIONES
UTILES
Diagnstico

Rendimiento de
Calidad de
cosechas
alimentos
Salud animal

Biosensores
Bioprocesos

Vacunas

Teraputica

Cultivo de clulas y
tejidos
Ingeniera gentica

HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido

Anticuerpos monoclonales
Ingeniera de protenas

Bioqumica
Ingeniera
Bioqumica
Microbiologa

Biologa Celular
Inmunologa

CONOCIMIENTO
Computacin
CIENTIFICO

Biologa Molecular

Gentica
Fisiologa

Nos encontramos frente a


una nueva Revolucin
Industrial llamada
Biotecnologa, no basada en
hierro y acero sino en
microbios que, en manos de
cientficos, se convierten en
minsculas fbricas para
producir frmacos,
compuestos qumicos
industriales, combustibles o
alimentos.

El prefijo BIO se refiere a


bacterias, levaduras y otras
clulas vivas, as como a
componentes de estas
clulas.
La TECNOLOGIA
consiste en relucientes
depsitos de acero, llenos de
microbios, conectados a sus
fuentes de alimentacin y
oxgeno mediante una
intrincada red de vlvulas
que se cierran y abren segn
los ritmos que marca una
computadora.

DEFINICION
Segn la Organizacin de
Cooperacin y Desarrollo
Econmicos:

Es la aplicacin de los
principios cientficos y de la
ingeniera al procesamiento de
materiales por agentes
biolgicos para proveer bienes y
servicios.

PRINCIPIOS
CIENTIFICOS Y DE LA
INGENIERIA:
Conjunto muy amplio
de disciplinas que ponen
especial nfasis en la
Microbiologa,
Bioqumica, Biologa
Molecular, Gentica,
Inmunologa e
Ingeniera Bioqumica y
Qumica.

MATERIALES:
Incluye a aquellos
orgnicos e
inorgnicos, en tanto
los agentes biolgicos
son, en general,
catalizadores
biolgicos; en
particular,
microorganismos,
clulas animales,
clulas vegetales, virus
y enzimas.

BIENES:
Todos los productos
(alimentos, productos
farmacuticos, recuperacin
de metales, etc.)
SERVICIOS:
Lo relacionado
especficamente con las
prestaciones tales como
purificacin de agua o
tratamiento de efluentes y
extraccin de derrames de
petrleo.

AREAS TEMATICAS
PRIORITARIAS
SALUD:
Vacunas (desarrollo de
vacunas por procedimientos
que utilicen ingeniera
gentica).
Reactivos de diagnstico:
Desarrollo de reactivos por
tcnicas inmunolgicas
(enzimo-inmunoensayos o
por ingeniera gentica).

AREA AGRICOLA:
Diagnstico de fitopatgenos en plantas
de inters econmico.
Desarrollo de agentes de control biolgico
y plantas.
Desarrollo de plantas transgnicas
resistentes a las plagas, enfermedades y
herbicidas. Modificacin del contenido
celular en macromolculas.
Mtodos de mejoramiento de especies a
travs de tcnicas no convencionales.
Aceleracin en la obtencin de hbridos.
Utilizacin de marcadores moleculares.
Identificacin y caracterizacin de genes
de inters.

AREA PECUARIA:
SANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de mtodos para
el diagnstico de
enfermedades animales.
Produccin de nuevas
vacunas virales, bacterianas
y parasitarias por tcnicas de
avanzada.
PRODUCCION ANIMAL:
Manipulacin y sexado de
embriones.
Hormonas para el
mejoramiento de la
produccin animal.

PRODUCCION DE
INSUMOS
INDUSTRIALES:
Mejoramiento y control
de calidad de las
industrias de alimentos,
incluyendo derivados
lcteos, vinos y cervezas.
Tratamiento biolgico de
efluentes.

HISTORIA DE LA
BIOTECNOLOGIA

6000 AC: Arte de fermentar.


Los sumerios y babilonios
usaban levaduras para
fabricar cerveza.
4000 AC: Los egipcios
descubrieron la manera de
fermentar pan con la
levadura cervecera.
Libro del Gnesis (9:
20,21): No se dedic a la
labranza y plant una via.
Bebi del vino, se
embriag

Siglo XIV DC: Destilacin de


bebidas alcohlicas. Uso de
bacterias de cido actico para
fabricar vinagre, de bacterias de
cido lctico para conservar la
leche (yogur, por ejemplo).
Siglo XVII: Anthony von
Leeuwenhoek (1632-1723)
descubre el mundo microbiano
con sus microscopios primitivos.
Siglo XIX: El desarrollo
tcnico de los microscopios
permite demostrar el origen de
los microbios y vencer la
creencia de la generacin
espontnea.

Hablando de generacin
espontnea, veamos
algunas recetas
interesantes

Ambroise Par (1517-1590), el


ms clebre cirujano de su
siglo, escribe: Hallndome en
una via de mi propiedad,
prxima al pueblo de Meudon,
hice romper una enorme
cantidad de grandes piedras
slidas. Dentro de una de ellas
se encontr un grueso sapo
vivo, sin que hubiera en la
piedra la menor apariencia de
abertura

Me maravill el hecho de
que este animal hubiese
podido nacer, crecer y vivir
all. Pero el cantero me dijo
que no haba por qu
asombrarse, pues varias veces
haba hallado animales de sta
y de otras clases en lo ms
recndito de las piedras, sin
que existiese el menor indicio
de una abertura. Se puede
explicar as el nacimiento y la
vida de estos animales: son
engendrados a partir de alguna
sustancia hmeda de las
piedras, cuya humedad, al
entrar en putrefaccin,
produce tales seres.

Van Helmont (1577-1644), el


ms grande fisilogo de la poca,
indica lo siguiente para la
obtencin de ratones: un vaso
lleno de trigo se cubre con una
camisa sucia, preferentemente de
mujer. Un fermento originado en
la camisa y transformado por el
olor de los granos, convierte el
trigo mismo en ratones. Esta
metamorfosis dura cerca de
veintin das, o sea el tiempo de
gestacin de ratn y nuestro
naturalista se asombre de su
notable rapidez

Ello, nos dice, es tanto


ms admirable cuanto que los
ratones originados por el trigo
y la camisa no son pequeos
ni lactantes, ni minsculos, ni
deformes, sino muy bien
formados y pueden saltar.

Francesco Redi (1626-1697):


Mdico italiano que demostr
que los gusanos de la carne son
larvas de mosca y que no
aparecen si la carne se guarda
bien tapada (fiambrera).
Lzaro Spallanzani (17291799): Naturalista italiano,
demostr que los microbios
son transportados por el aire;
los mismos no invaden los
frascos cerrados
hermticamente.
Nicolas-Francois Appert (17501841): Desarrolla los primeros
procedimientos de enlatado.

Louis Pasteur (1822-1895): Fue


quien sent las bases de la futura
industria biotecnolgica al
demostrar que todos los procesos
de fermentacin eran el resultado
de la actividad microbiana.
Edward Buchner (1860-1917):
Descubre, dentro de las clulas
microbianas, las sustancias
vitales responsables de todas las
transformaciones qumicas: las
enzimas.

Hasta la primera guerra


mundial, apenas progres la
idea de utilizar bacterias y
levaduras para fabricar otra
cosa que no fuera alcohol.

Sin embargo, las restricciones


impuestas durante el conflicto
anunciaron lo que puede
llamarse como segunda era
biotecnolgica.

La Guerra Mundial (1914-1918)


supuso demandas
biotecnolgicas:
Proceso Neuberg para
producir glicerol (para
nitroglicerina) mediante la
fermentacin dirigida de
Saccharomyces cerevisiae.
Agregando lcali y bisulfito de
sodio al depsito de
fermentacin alcohlica se
fomentaba la produccin de
glicerol.
Proceso Weizmann, usando
Clostridium acetobutylicum,
para la produccin de
disolventes como la acetona
(fabricacin de cordita).

Los descubrimientos de
Pasteur, Robert Koch (18431910) y Alexander Fleming
(1928) revolucionaron el
tratamiento de las
enfermedades infecciosas con
el descubrimiento de los
antibiticos.
Durante la Segunda Guerra
Mundial comienza la tercera
era biotecnolgica, por la
necesidad de contar con
ciertos medicamentos para
que las vctimas no murieran
de sepsis bacteriana.

Puede decirse que la cuarta era


biotecnolgica comienza a
principios de la dcada de 1970,
con el advenimiento de la
Ingeniera Gentica.
El descubrimiento de los
sistemas de restriccin y
modificacin en bacterias y la
aplicacin de las
endonucleasas.
Los trabajos de Milstein y
Kohler sobre la formacin de
hibridomas con la posterior
utilizacin para la produccin
de anticuerpos monoclonales
(1975).

Un hito que merece resaltarse


ocurri en 1982 cuando la
compaa Eli Lilly consigui
la aprobacin de la Food and
Drug Administration de los
Estados Unidos de
Norteamrica para la
utilizacin de insulina
humana clonada y
producida en Escherichia
coli. A esto siguieron los
interferones, hormonas de
crecimiento humana y
bovina, el antgeno de
superficie del virus de la
hepatitis B, etc.

Entrando ya en
tema

El desarrollo de un proceso
de produccin a gran escala,
en forma exitosa, es el
resultado de acelerar e
intensificar un concepto
original, generalmente un
procedimiento de laboratorio
o a pequea escala.

La actividad de
desarrollo se concentra
en tres reas principales:

Desarrollo de los organismos.


Desarrollo del medio de cultivo.

Ingeniera de fermentacin.

EL FERMENTADOR

DEFINICION OPERATIVA:

Contenedor en el que se
mantiene un medio ambiente
favorable para la operacin de
un proceso biolgico deseado.

En cuanto al biorreactor:
Para cada proceso
biotecnolgico, el sistema
de contencin ms
apropiado debe disearse
para brindar el mejor medio
ambiente, optimizado para
el crecimiento celular y
actividad metablica.

Equipos accesorios.
Vlvulas de seguridad
Manmetros
Vlvulas de control
Tuberas
Control de temperatura
Control de pH
Control de espumas
Puntos de muestreo

El medio ambiente puede


considerarse en tres aspectos:

BIOLOGICO
QUIMICO

FISICO

AIREACION Y AGITACION.
La agitacin es necesaria para:
1- incrementar la velocidad de
transferencia de oxgeno desde
las burbujas de aire al medio
lquido; los microorganismos
no pueden utilizar oxgeno
gaseoso, sino solamente el que
se encuentra en disolucin.

2- aumentar la velocidad de
transferencia de oxgeno y
nutrientes desde el medio a las
clulas. Debido al movimiento
se evita que las clulas creen
reas estancadas con bajos
niveles de oxgeno y
nutrientes.
3- impedir la formacin de
agregados celulares.
4- aumentar la velocidad de
transferencia de productos
metablicos de las clulas al
medio.

5- aumentar la tasa o la
eficiencia de la transferencia
de calor entre el medio y las
superficies de refrigeracin
del fermentador.

Tipos de fermentador:
Crecimiento en suspensin.

Crecimiento con soporte.

En el crecimiento en suspensin,
los organismos estn sumergidos
y dispersados en el medio
nutritivo y su movimiento sigue al
del medio.
En los sistemas con soporte,los
organismos crecen como una
monocapa o pelcula sobre una
superficie en contacto con un
medio nutritivo.
En la prctica, sin embargo, los
sistemas en suspensin poseen
una pelcula de organismos en la
superficie del contenedor y en
sistemas con soporte,
encontramos organismos
dispersos en el medio nutritivo.

TECNOLOGIA DE
BIOPROCESOS FERMENTACION

Las etapas en la manufactura


de productos en la tecnologa
de bioprocesos son,
esencialmente, similares
independientemente del
organismo utilizado, del
medio elegido y del producto
buscado.

En todos los ejemplos, se


cultiva gran nmero de clulas
en condiciones controladas.
Los organismos deben
cultivarse y motivarse para
formar el producto deseado,
mediante un sistema de
contencin tcnica y fsica (el
biorreactor) y un medio
correcto en su composicin y
parmetros reguladores del
crecimiento, tales como
temperatura y aireacin.

PRINCIPIOS DE
CRECIMIENTO
MICROBIANO

El crecimiento de
microorganismos puede
verse como el incremento
en el material celular,
expresado en trminos de
masa o nmero de clulas.
El incremento en biomasa
puede determinarse
gravimtricamente o
numricamente para
sistemas unicelulares.

Tiempo de duplicacin:
Se refiere al tiempo
requerido para duplicar el
peso de la biomasa.

Tiempo de generacin:
Se refiere al tiempo
necesario para duplicar
el nmero de clulas.

En un proceso biotecnolgico,
existen tres formas de hacer
crecer a los microorganismos en
un biorreactor:
-Por lotes (batch)
-Semi-continuo
-Continuo

Modos de operacin de los


fermentadores:
Operacin por lotes: El
reactor se carga con la especie
reactiva y, a medida que
procede la reaccin, cambian
las condiciones en el reactor al
consumirse los reactivos y
formarse los productos.
Cuando se ha alcanzado el
nivel deseado de reaccin, se
vaca el reactor, se limpia y el
proceso se repite. Son
procesos que no se encuentran
en estado estacionario.

El ambiente nutricional
dentro del biorreactor
cambia en forma continua y,
por lo tanto, fuerza
cambios en el metabolismo
celular.
Eventualmente, la
multiplicacin celular cesa
por desaparicin o
limitacin de nutrientes y
acumulacin de productos
txicos de excrecin.

La naturaleza compleja del


crecimiento de
microorganismos por lotes,
se muestra tal como sigue:

La fase 1 o lag, es un tiempo


de aparente no crecimiento,
pero estudios bioqumicos
demuestran actividad
metablica, indicando que las
clulas estn en proceso de
adaptacin a las condiciones
ambientales y que un nuevo
crecimiento comenzar,
eventualmente.

Existe, luego, una fase de


aceleracin transitoria
cuando el inculo comienza a
crecer que es seguida,
rpidamente, por una fase
de crecimiento exponencial.
En la fase exponencial, el
crecimiento microbiano
ocurre a la mxima
velocidad posible para ese
microorganismo, con
nutrientes en exceso,
parmetros de crecimiento
ideales y ausencia de
inhibidores.

Sin embargo, en cultivos por


lote, el crecimiento
exponencial es de duracin
limitada y, a medida que las
condiciones nutricionales
cambian, la velocidad de
crecimiento disminuye y se
entra en la fase de
deceleracin, seguida de la
fase estacionaria, donde el
crecimiento global no se
obtiene, por falta de
nutrientes.

La fase final del ciclo es la


fase de muerte, cuando la
velocidad de crecimiento ha
cesado.
La mayora de los procesos
biotecnolgicos por lotes se
detiene antes de esta fase,
debido a la disminucin en el
metabolismo y a la lisis
celular.

Algunos medios para prolongar


la vida de un cultivo por lotes:
-Adicin gradual de
componentes nutritivos
concentrados (carbohidratos),
aumentando el volumen del
cultivo (utilizado para
produccin industrial de
levadura).
-Adicin de medio al cultivo
(perfusin) y extraccin de un
volumen igual de medio usado,
libre de clulas (utilizado para
cultivos de clulas animales).

Operacin continua: Existe


un flujo continuo de reactivos
frescos hacia el reactor y el
producto fluye continuamente
hacia fuera. En algunos
sistemas continuos el medio
nutriente es inoculado con el
cultivo microbiano al entrar al
reactor y los organismos llevan
a cabo su actividad a medida
que el lquido fluye a travs del
sistema y salen del sistema
junto con el medio.

Los organismos pueden


separarse de la corriente
que lleva al producto y
reciclarse para inocular el
lquido de alimentacin.
En un sistema continuo con
mezcla completa, las
condiciones son uniformes
en todo el reactor, en un
equilibrio de mezcla de
nutrientes, organismos y
productos.
La alimentacin del sistema
es medio nutriente libre de
organismos y, en algunos
casos, un inculo de
organismos reciclados.

Esta prctica de cultivo


continuo, provee un
crecimiento casi
balanceado, con pequea
fluctuacin de nutrientes,
metabolitos, nmero celular
o biomasa.
Esto consiste en medio
fresco entrando un sistema
por lotes, en fase de
crecimiento exponencial,
con una remocin
correspondiente de medio
ms clulas.

Este mtodo de cultivo


continuo, permite a los
organismos crecer en
condiciones de estado
estacionario, en las que el
crecimiento ocurre a una
velocidad constante y en un
medio ambiente constante.

En un sistema de cultivo
perfectamente mezclado,
se pasa medio estril al
biorreactor, a un flujo
constante y una mezcla de
cultivo (medio, productos
de desecho y organismos)
emergen del mismo a la
misma velocidad,
manteniendo el volumen
total del cultivo, dentro del
biorreactor, constante.

Ventajas de un proceso
por lotes:
Las principales son: menor
riesgo de contaminacin,
flexibilidad operacional
cuando los fermentadores
se utilizan para distintos
productos, un control ms
cercano de la estabilidad
gentica del organismo, una
mejor coordinacin con
estadios del proceso entre
lotes previos y posteriores.

Desventajas del proceso


por lotes:
La principal es la alta
proporcin de tiempo
improductivo en la operacin
del fermentador, dificultad de
diseo y la operacin de
procesos que no estn en
estado estacionario y la
variabilidad entre lotes.

Los fermentadores deben


ser vaciados, limpiados,
esterilizados y recargados
antes de cada
fermentacin, operaciones
todas esenciales pero no
productivas.
En procesos por lotes,
estas operaciones pueden
tomar tanto tiempo como
la fermentacin misma.
En un proceso continuo,
por el contrario, una
corrida puede durar
semanas o meses, es decir
que el tiempo no
productivo es, en
proporcin, pequeo.

Esterilizacin:
Esterilizacin de fermentadores.
En el laboratorio, el mtodo
estndar de esterilizacin es
el calor: 120C de calor
hmedo durante 15 min o
160C de calor seco durante,
al menos, 1 hora. A escala
industrial, el calor seco es
prohibitivamente caro, salvo
en casos muy especiales y se
utiliza, habitualmente, la
esterilizacin por calor
hmedo.

Esterilizacin del fermentador y


el medio conjuntamente.

El calentamiento se
consigue mediante:
Inyeccin de vapor en el
medio, por lo que el medio
se prepara ligeramente
ms concentrado para
compensar la dilucin por
el vapor condensado.
El medio se calienta por
conduccin, haciendo
pasar vapor por la camisa
de termostatizacin.

Esterilizacin por separado del


fermentador y el medio.

Este sistema ofrece ventajas


ya que reduce el tiempo en el
que el recipiente de
fermentacin es
improductivo: un
fermentador vaco se
esteriliza con relativa
rapidez.

Pasos a tener en cuenta:


-Cambio de escala
-Diseo de medios para
procesos de fermentacin
-Fermentacin en
sustratos slidos
-Tecnologa de cultivos de
clulas de plantas y
animales
-Procesamiento posterior
de la muestra

Procesamiento
posterior de la
muestra.
Purificacin.

El diseo y la operacin
eficiente de los procesos de
purificacin, son elementos
vitales para obtener los
productos deseados para
uso comercial.
Deberan reflejar la
necesidad de no perder ms
que lo absolutamente
necesario del producto
final.

Este procesamiento final


involucrar, principalmente,
la separacin inicial de la
mezcla de cultivo hacia una
fase lquida y una slida, con
la subsecuente
concentracin y purificacin
del producto deseado.

El procesamiento involucrar
ms de una etapa:
-Destilacin
-Centrifugacin
-Filtracin
-Ultrafiltracin
-Extraccin con solventes
-Adsorcin
-Tamices moleculares
-Electroforesis
-Cromatografa de afinidad
-Liofilizacin

TECNOLOGIA
UTILIZANDO
ENZIMAS

La tecnologa de enzimas
involucra la produccin,
aislamiento, purificacin, uso
en forma soluble y,
finalmente, la inmovilizacin
de las enzimas para su
utilizacin en gran variedad
de biorreactores.

La utilizacin de sistemas
enzimticos libres de
clulas, presenta ventajas
respecto de los procesos
qumicos que involucran un
nmero de reacciones
secuenciales.
En fermentacin, el uso de
microorganismos como
catalizadores puede
presentar las siguientes
limitaciones:

1. Una alta proporcin del


sustrato ser utilizada
para convertirse en
biomasa
2. Pueden ocurrir reacciones
secundarias intiles
3. Las condiciones para el
crecimiento de los
microorganismos pueden
ser diferentes de las
requeridas para la
formacin del producto
4. El aislamiento y
purificacin del producto
deseado, a partir de la
mezcla de fermentacin,
puede ser dificultoso.

INGENIERIA
GENETICA E
INGENIERIA
PROTEICA DE
ENZIMAS

La utilizacin de estas
tcnicas ha posibilitado
producir enzimas
industriales con muy buena
calidad y pureza.

Crecimiento de microorganismos
conteniendo la enzima de utilidad

Purificacin de
la enzima
Determinacin de
la secuencia parcial
de aminocidos
Sntesis de
oligonucletidos

Purificacin de mARN
total

mARN

ADN

Clonacin del ADN


en E. coli

Identificacin de clones
Transformacin de microorganismos
Produccin industrial de enzima

Objetivos en la preparacin de
enzimas modificadas:
1. Aumentar la actividad de las
enzimas
2. Mejorar la estabilidad
3. Permitir que funcionen en un
ambiente diferente
4. Cambiar el pH o temperatura
ptimos
5. Cambiar la especificidad para
que utilice un sustrato
diferente
6. Cambiar la reaccin
catalizada
7. Aumentar la eficiencia de un
proceso

ENZIMAS
INMOVILIZADAS

El uso de enzimas en forma


soluble o libre, debe
considerarse como un posible
derroche dado que, en
general, la enzima no puede
recuperarse al final de la
reaccin.
Una nueva rea de tecnologa
enzimtica es la relacionada
con la inmovilizacin de las
enzimas en polmeros
insolubles, tales como
membranas o partculas,
actuando como portadores de
la actividad enzimtica.

Las ventajas de los catalizadores


inmovilizados:
1. Permite el reuso de las enzimas
2. Ideal para operaciones continuas
3. Los productos estn libres de
enzima
4. Permite un mejor control de los
procesos catalticos
5. Mejora la estabilidad de las
enzimas
6. Permite el desarrollo de sistemas
de reaccin multienzimticos
7. Ofrece un potencial considerable
en uso mdico e industrial
8. Reduce los problemas de
tratamiento de efluentes

ESTERILIZACION Y
ESTERILIDAD

La esterilizacin es el proceso
de conseguir la esterilidad,
para la que no existen grados:
un objeto, superfcie o sustancia
es, o no es, estril.
Si es estril no contiene
organismos viables o clulas
presentes y, si se le protege
contra la contaminacin, la
condicin estril permanecer
indefinidamente.
La desinfeccin implica que el
material ha sido tratado a fin
de eliminar o reducir el riesgo
de organismos patgenos, pero
no implica que todos los
organismos viables hayan sido
inactivados.

La esterilizacin se utiliza
para:
1. Asegurar que un proceso se
lleva a cabo solamente con
el organismo deseado
2. Permitir la utilizacin
segura de los productos
3. Evitar la contaminacin
ambiental
4. Impedir el deterioro de un
producto

La esterilizacin se lleva a
cabo:
Eliminando los organismos
viables como en la filtracin
Matndolos de una de las
siguientes formas:
1. Calentando en presencia o
ausencia de agua
2. Irradiando con radiaciones
ultravioleta, gamma o X
3. Tratando con productos
qumicos en solucin o en
forma gaseosa

Las esporas bacterianas


resisten el calor
(termfilas: 200 kPa a
134oC, 1-10 min, vapor de
agua o calor seco a 180oC, 15
min) y, algunas, las altas
dosis de radiacin
(Deinococcus radiodurans:
6000 krad).
La esterilizacin debe ser
capaz de eliminar las
esporas ms resistentes de
las especies ms
resistentes.

Muerte por calentamiento:


En la esterilizacin hmeda,
el vapor a presin tiene
dos funciones
importantes:
1. Condensndose sobre el
material permite que el
calor se transfiera
rpidamente causando un
aumento rpido de la
temperatura
2. Las propias molculas de
agua aumentan, o al menos
mantienen el nivel de
hidratacin dentro de la
espora.

En la esterilizacin por calor


seco, el calor es transferido muy
lentamente y la tendencia es
reducir ms el nivel de
hidratacin y, de esta forma, se
protegen las protenas de las
esporas.
Las esporas son
considerablemente ms
resistentes al calor seco que al
calor hmedo.

Radiacin
La radiacin ultravioleta no
es muy penetrante y no se
puede confiar en ella como
agente esterilizante, a menos
que se pueda garantizar la
exposicin directa del
organismo contaminante.
Los rayos gamma y X son ms
tiles debido a su alto poder
de penetracin.

Determinacin de la destruccin
de microorganismos:
Tiempo trmico letal: tiempo
ms corto que lleva destruir los
microorganismos a una
temperatura determinada
Punto trmico letal:
temperatura ms baja que se
necesita para matar a los
organismos en 10 minutos.
Para ambos se necesita saber el
tamao inicial de la poblacin y
las condiciones precisas. No son
particularmente tiles.

Un parmetro ms til es:


Tiempo de reduccin
decimal o valor D: tiempo en
minutos, a una temperatura
determinada, que se
requiere para reducir la
poblacin viable al 10% de
su valor previo.
Valor-Z: es el cambio de
temperatura que se
requiere para modificar el
valor D por un factor de 10.

Mtodos prcticos:
Calentamiento:
Para comparar las capacidades
relativas de esterilizacin de los
diferentes procesos de
calentamiento, se requiere una
unidad de letalidad.
La unidad escogida es el efecto letal
de un minuto de calentamiento, a la
temperatura de 121oC.

F = t * 10(T-121)/z
Donde t= tiempo de aplicacin del
tratamiento letal; T= temperatura
en oC y z= aumento de temperatura
requerido para reducir el perodo de
calentamiento en un 90% (es decir el
valor z).

En la industria alimentaria el
peligro ms serio para la salud
es la presencia de Clostridium
botulinum, el formador de
esporas patognico ms
resistente al calor, as como el
agente ms txico.
En esterilizacin clnica:
Calor hmedo:
Vapor a 134oC (30 psi), 3 min
Vapor a 126oC (20 psi), 10 min
Vapor a 121oC (15 psi), 15 min
Vapor a 115oC (10 psi), 20 min

Como los valores de D para


las esporas son, a 121oC, del
orden de 0,2 min, un tiempo
de mantenimiento de 15 min
de vapor a 121oC equivale a
75xD, lo que hace la
probabilidad de fallo en
relacin a la supervivencia de
C. botulinum casi
imposiblemente remota.

Procesos discontinuos:
Autoclaves:
Todo el aire debe ser
eliminado antes del ciclo de
calentamiento, ya que mezclas
de aire y vapor a una presin
determinada alcanzarn una
temperatura ms baja que la
del vapor puro a la misma
presin.

Inyeccin directa del vapor:


Si se utilizan inyecciones
directas de vapor se debe
tener en cuenta que entre el
10 y el 20% del volumen final
se debern a condensacin.
Mientras la eficiencia trmica
de este proceso es alta, la
fuerte formacin de espuma
durante el burbujeo puede
limitar la transferencia del
calor.

Calentamiento indirecto:
Pasando vapor de agua a travs
de una espiral de intercambio
de calor o de una camisa. El
calor en este procedimiento es
menos eficiente que por
inyeccin directa y, en ambos
casos, permanecen los
problemas de enfriamiento,
generalmente conseguido
mediante espirales.

Esterilizacin por flujo continuo:


En el diseo del equipo deben
considerarse las tres etapas
del ciclo, para conseguir:
1. Un rpido calentamiento
2. Un tiempo de mantenimiento a
la temperatura de
esterilizacin
3. Un rpido enfriamiento

Esterilizacin por
radiaciones:
Normalmente se lleva a cabo
con una fuente de cobalto-60
o de cesio-137.
El efecto letal es siempre
mayor en presencia de
oxgeno y alto contenido en
agua.
La unidad de medida de la
dosis de radiacin es el rad,
equivalente a una energa de
absorcin de 100 ergs/g de
aire. El Roentgen (R) es 83
ergs/g de aire.

Esterilizacin qumica:
Formaldehdo: solamente
efectivo si se puede
garantizar que entre en
contacto con los organismos
contaminantes. Pobre
difusibilidad y poder de
penetracin. Olor picante y
duradero. Solamente en
casos especiales.
Perxido de hidrgeno:
poderoso agente oxidante
que mata clulas vegetativas
y esporas con actividad
creciente con la
concentracin, temperatura
y normalmente pH. Sus
productos de degradacin
son inocuos.

Oxido de etileno y de
propileno: pueden utilizarse en
forma gaseosa. El de etileno
es ms efectivo pero
altamente txico, irritante y
violentamente explosivo en
mezclas con aire. Su efecto
letal sobre las bacterias
depende de la humedad; las
condiciones ptimas incluyen
40-80% de humedad relativa
y temperatura de 60oC
durante 3-4h, para una
concentracin de gas de 8001000 mg/l. El proceso se
utiliza cuando el equipo puede
ser daado por altas
temperaturas.

Esterilizacin por filtracin:


Filtros profundos: capa
relativament gruesa de fibra
de vidrio, algodn, lana
mineral, celulosa moldeados
como planchas, tapones o
cilindros.
Filtros de pantalla:
membranas hechas de
steres de celulosa u otros
polmeros

Evaluacin de la eficiencia de
esterilizacin:
1. Termosensores
2. Tubos de Browne: tubos de vidrio
cerrados con 0,15 ml de un fluido
rojo que cambia a verde al aumentar
el calor
3. Tiras de papel impregnadas con
esporas: bioindicadores. Se incuban
luego del tratamiento para evaluar la
supervivencia
4. Tiras indicadoras: responden al calor
hmedo entre 115-123oC. Indican la
dosis de calor por distancia recorrida
de un colorante azul
5. Cinta adhesiva de autoclave: indica
que el vapor, a un mnimo de 120oC,
alcanz la cinta cuyas rayas se tornan
de blancas a negras. No asegura
esterilidad sino que un objeto ha sido
procesado mediante vapor.

Pruebas de eficiencia de filtracin:


1. Prueba del azul de metileno:
para distribucin de partcula de
0,02-0,2 micrones
2. Prueba del cloruro sdico: para
que haya esterilizacin, el filtro
debe retener el 99,997%
3. Esporas de Bacillus: rango de
tamao 0,7-1 micrn
4. Prueba del bacterifago T3:
0,03 micrones. Un filtro con
penetracin de llama de sodio de
0,001% tiene un equivalente de
0,000005% B. Subtilis y de
0,00005% de T3.

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