CENTRFUGAS

La centrifugacin es un procedimiento fsico que permite

la separacin de partculas, bien sean clulas, orgnulos,
molculas, etc. en base a la diferente velocidad a la que
sedimentan en un medio acuoso bajo la accin de un campo
centrfugo. Este campo se aplica en unos aparatos denominados:
centrfugas por medio de la rotacin de una de las piezas, llamada
rotor, a gran velocidad dentro de una cmara acorazada en la que
puede estar la temperatura controlada (para evitar la degradacin
de muestras termosensibles) y en ocasiones bajo vaco (para evitar
el calentamiento del rotor por el rozamiento con el aire).
Como ya sabis (Ver Fig.2.1), todo cuerpo sometido a un
movimiento giratorio segn una trayectoria circular de radio R
con una velocidad angular w experimenta una fuerza (Fc.) que
tiende a alejar al cuerpo del centro de giro.

Esta fuerza se conoce como Fuerza Centrfuga y su valor

vendr expresado por:

donde: m = masa del cuerpo.

El nmero de veces que la fuerza centrfuga supera a la
fuerza de gravedad se denomina Factor Centrfugo, el cual nos
permite evaluar la eficiencia de una centrfuga operada bajo estas
condiciones al compararla con el proceso regulado solo por la
gravedad. El Factor Centrfugo se expresa como:

donde: C = RCF = Factor centrfugo.

Fc = Fuerza centrfuga (Kg.).
p = Peso del objeto o partcula (Kg.).
m = masa del cuerpo (Kg.).
g = aceleracin de la gravedad (9.81 m/s2).
w = velocidad angular (radianes/s).
R = Radio de giro (m).
N = Revoluciones por minuto (rpm)
Para un clculo aproximado puede utilizarse la expresin:

Debemos destacar que el Factor Centrfugo se denomina

tambin como "G" o "Z", planteando que determinada centrfuga

genera un campo centrfugo de tantas "g". Las rpm, las g y el

radio se pueden relacionar entre s por medio de unos diagramas
denominados:
Nomogramas.
As,
podemos
trabajar
indistintamente con unos valores u otros o realizar ciclos de
centrifugaciones idnticos con rotores o centrfugas distintas entre
s. En la siguiente pgina se presenta uno de ellos. Trazando una
lnea recta entre 2 valores de los 3 que tenemos presentados
podemos despejar el valor restante que no conocamos.

En todos los tipos de rotores existentes es fundamental

colocar siempre bien equilibradas las cargas (en forma simtrica)
para evitar desgastes anormales de rodamientos y vibraciones
excesivas en las subidas y bajadas de velocidad.

Existen 2 tipos de rotores:

+De ngulo fijo: Los tubos se alojan con un ngulo fijo

respecto al eje de giro. Se usan habitualmente para volmenes
grandes. El caso extremo es el de los rotores verticales en que
los tubos se sitan paralelos al eje de giro. Los rotores de
ngulo fijo se emplean principalmente para sedimentar
materiales hasta que formen una masa muy compacta en el
fondo del tubo (pellet) y despus por decantacin, separar
fcilmente el sobrenadante del sedimento. Resultan muy
eficaces para este propsito debido a que el material se mueve
nicamente un corto trecho hasta la pared del tubo de la
centrfuga, aqu se acumula y resbala rpidamente hasta el
fondo del tubo.

+Basculantes: Los tubos se hallan dentro de unos cestillos que

cuelgan. Estos cestillos estn unidos al rotor con un eje y
cuando la centrfuga gira, se quedan suspendidos en direccin
perpendicular a la del rotor.

Se usan en la centrifugacin zonal (o en bandas) a

travs de gradientes de densidad preformados (normalmente de
sacarosa o glicerol) o bien para separar partculas con
coeficientes de sedimentacin muy similares. La sacarosa es el
material ms comnmente usado debido a su pureza, bajo coste
y su no interferencia con la mayora de las mediciones
qumicas, pticas o enzimticas. Si la macromolcula en
estudio es un enzima o una protena inestable, se usa con
frecuencia el glicerol puesto que muchas protenas son ms
estables y se desnaturalizan ms difcilmente en presencia de
glicerol.

Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de

velocidades de giro:
A. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas.
De pequeo tamao y normalmente sin refrigeracin.
Alcanzan una velocidad mxima de 6.000 rpm. tiles para
la separacin de partculas grandes como clulas o
precipitados de sales insolubles.

Las centrfugas microfuge o biofuge seran una variante de

las anteriores que permiten llegar a velocidades de hasta
13.000 rpm, siendo los volmenes de trabajo muy pequeos
(microtubos) y pudiendo ser refrigeradas o no. Son tiles en
el campo de la biologa molecular.

B. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades

mximas entre 18.000 y 25.000 rpm (pueden generar
alrededor de 60.000 g). Son refrigeradas y normalmente
tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del
rotor a causa del rozamiento con el aire. Este mismo
sistema de vaco permite que puedan tener un control
ms exacto de la temperatura que aquellas que no hacen
vaco. Son tiles en la separacin de fracciones
celulares, pero insuficientes para la separacin de
ribosomas, virus o macromolculas en general.

C. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que

tienen sistemas auxiliares de refrigeracin para
refrigerar no slo la cmara del rotor donde estn las
muestras sino tambin el motor y adems sistemas
auxiliares de vaco para alcanzar un altsimo nivel de
vaco. Pueden generar ms de 600.000 g, las cuales son
suficientes para separar protenas pequeas. Las
ultracentrfugas se dividen en: analticas y preparativas.
La diferencia ms importante entre ellas es que la
analtica cuenta con un sistema ptico para visualizar la
sedimentacin de la muestra en tiempo real lo que
permite la obtencin de datos precisos de propiedades
de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos
moleculares) siendo ste el objetivo primordial y no la
purificacin de la muestra para un uso posterior, que s
sera el objetivo de la preparativa, til para aislar
partculas de bajo coeficiente de sedimentacin
(microsomas, virus, macromolculas), siendo este tipo
el inmensamente mayoritario de ultracentrfuga.

En este esquema de una ultracentrfuga preparativa de

sobremesa se puede apreciar como existe una barrera de
proteccin primaria de acero (19 mm de grosor) rodeada a su vez
por otra capa de acero (13 mm de grosor) que acta como una
barrera secundaria para dar plena proteccin al operador. En
cualquier centrfuga la parte ms dbil siempre es la tapa superior.

RUTINAS DE MANTENIMIENTO
Las rutinas de mantenimiento que requiere una centrfuga
dependen de mltiples factores tales como de la tecnologa
incorporada, la intensidad de uso, la capacitacin de los usuarios
y las condiciones del ambiente donde se encuentra instalada.

Para los rotores:

+ Registrar la fecha de compra de cada uno de los rotores as
como los datos relativos a modelo y nmero de serie, cumpliendo
las especificaciones que d el fabricante.
+ No sobrepasar las indicaciones de velocidad mxima ni de
densidad de muestras recomendadas por el fabricante. Cada rotor
est diseado para soportar un mximo nivel de esfuerzo que
nunca se debe sobrepasar por seguridad.
+ Utilizar los rotores nicamente en las centrfugas para las que
han sido fabricados. No intercambiar rotores sin antes verificar su
completa compatibilidad.
+ Acatar las recomendaciones relativas a reducir la velocidad de
operacin cuando se trabaja con soluciones de alta densidad,
tubos de acero inoxidable o adaptadores plsticos.
+ Utilizar rotores de titanio si se trabaja frecuentemente con
soluciones salinas.
+ Para el caso de rotores de aluminio proteger la capa de aluminio
anodizado de la que estn recubiertos no utilizando detergentes
alcalinos o soluciones que pudieran retirar dicha pelcula
protectora.
+ Utilizar cepillos plsticos en las actividades de limpieza de los
rotores y detergentes suaves en baja concentracin. Los cepillos

metlicos rayan el recubrimiento protector y esto genera fuentes

de futura corrosin que acortan la vida til del rotor.
+ Lavar el rotor inmediatamente en el caso que se hayan
producido derrames de sustancias corrosivas, secndolo al aire y
no en estufa.
+ Almacenar los rotores en ambientes secos y boca abajo, sin la
tapa correspondiente.
+ Lubricar las roscas y anillos de goma (O-rings) de acuerdo con
las recomendaciones del fabricante.
+ Nunca tratar de abrir una tapa de una centrfuga que est
funcionando ni intentar parar el rotor con la mano.
+ En el caso de rotores de ultracentrfuga siempre que se usen hay
que consignar el rotor y tiempo empleado porque los de aluminio
o titanio sufren fatiga de material y hay que cambiarles el disco de
sobrevelocidad a medida que cumplen el nmero de horas de uso
establecido y desecharlos si se les ha acabado el perodo de vida
til. Este tema ha sido resuelto con los ltimos rotores de fibra de
carbono que presentan entre sus ventajas que son ms ligeros,
ms rpidos (aceleran hasta la velocidad deseada y deceleran
despus ms rpidamente que los convencionales) y tambin son
ms duraderos y se pueden reparar.

Para los tubos (o botellas):

+ Verificar si los tubos son reutilizables o son de un nico uso.
Siempre es preferible usarlos nuevos a que se nos puedan romper
y perder las muestras, teniendo que limpiar despus todo el rotor.
+ Lavar los tubos, adaptadores y dems accesorios a mano usando
un detergente suave diluido en agua y un cepillo de textura suave
que no sea metlico. Evitar usar los lavavajillas para este tipo de
tubos ya que pueden producir rayaduras.

+ Evitar el uso de alcohol y acetona puesto que dichos materiales

afectan la estructura de los tubos. Los fabricantes recomiendan el
tipo de solvente a emplear con cada tipo de material con que se
fabrican los tubos de centrifugacin.
+ Evitar secar los tubos en estufa. Es mejor que se sequen al aire.
+ Almacenar los tubos o botellas en un lugar oscuro, seco y fresco
y alejados de fuentes de vapores qumicos o de fuentes de luz
ultravioleta.
+ Verificar no sobrepasar los niveles mximos de llenado para
evitar su colapso o vertido dentro del rotor.

MANTENIMIENTO PREVENTIVO
Las rutinas de mantenimiento ms importantes que se le
efectan a una centrfuga son:

Periodicidad mensual:
Revisar que el rotor no se haya visto afectado por
derrames. Limpiar la cubeta de la centrfuga con etanol al 70%
que acta tambin como desinfectante. Lubricar el eje con una
grasa tipo Spinkote. Verificar el estado de las juntas de
estanqueidad (sustituir si es necesario o bien solamente lubricar
los anillos de goma con silicona de vaco). Para rotores de
cestillos, lubricar los puntos de apoyo de los cubiletes con grasa
adecuada. Quitar polvo y posibles manchas de la superficie
externa de la centrfuga.
Verificar el estado del mecanismo de cierre de la tapa para
garantizar la seguridad de los operadores.
Comprobar que en teclados de membrana no exista seal
de que los estn manipulando con las uas en vez de con las

yemas de los dedos porque de lo contrario se acaba perforando la

membrana de proteccin.

Periodicidad anual:
Verificar el estado de las escobillas del motor y sustituir
si es necesario (normalmente solo para centrfugas bastante
antiguas). Hoy en da casi todas llevan motores de induccin sin
escobillas y rodamientos sin mantenimiento.
Comprobar el estado de la toma de aire y limpiarlo o
sustituir el filtro si dispone de l.

Para mquinas refrigeradas efectuar una limpieza del

radiador para que haya un buen flujo de aire y no se pierda
eficacia en el sistema de refrigeracin.
En el caso de centrfugas que lleven bombas de vaco de
aceite, cambiar los aceites tanto a la bomba de vaco como a la
bomba difusora.

PARTE PRCTICA
Como parte prctica se proceder a desmontar, limpiar,
engrasar y volver a montar un rotor de diversos tipos de
centrfuga. Asimismo se ensearn los distintos tipos de
centrfugas y rotores que poseemos en el primer piso del
departamento para investigacin.