HPLC

La cromatografa lquida de alta resolucin, es en definitiva una

cromatografa en fase lquida en columna a la cual se aplica una sobrepresin
que permite acelerar el proceso de separacin.
Su gran ventaja es la disminucin del tiempo de anlisis, aun incluso en
mezclas muy complejas (productos biolgicos). Adems, permiten el anlisis
de sustancias termolbiles que no podran ser manejadas por vaporizacin
en un cromatgrafo de gases (se descomponen al vaporizarse).
En esencia, la fase mvil lquida (constituida por un disolvente adecuado
que vehicula a la muestra) se bombea a travs de un sistema de separacin
compuesto por un prefiltro y una columna, esta ltima conteniendo la fase
estacionaria, a una elevada presin. Por su distinta interaccin entre las dos
fases, la muestra es retenida con variable intensidad, eluyendo separada de
la columna.

ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN MOLECULAR

Esta tcnica permite cuantificar parmetros en disolucin, en base a la
absorcin que los mismos realizan a una determinada longitud de onda del
espectro ultravioleta-visble (entre 100-800 nm, mas o menos). Dicha
cuantificacin se rige por la ley fundamental de Lambert-Beer, en la cual se
basan todos los clculos que suceden a la deteccin de la radiacin.
Las distintas variaciones de los clculos empleados, se originan a
consecuencia de las modificaciones del esquema bsico del proceso,
constituido por: una fuente emisora policromtica, un selector de
radiaciones (monocromador), un receptculo de dimensiones y material
adecuado que contenga la solucin y un detector de radiacin. A su vez la
solucin, contiene la muestra a analizar y un reactivo que provoca
(enzimtica o qumicamente) un producto que absorba a la longitud de onda
adecuada, todo en condiciones de temperatura y pH controladas.
Las modificaciones antes mencionadas intentan, en cualquier caso,
mantener al mnimo las interferencias que se puedan producir en el proceso.
Por ello, se emplean fuentes de energa estables, reactivos que generen
productos lo ms especfico posible, mediciones bicromticas o
policromticas.