BACTERIAS

DEGRADADORAS DE
HIDROCARBUROS
AISLADAS DE SUELOS
CONTAMINADOS

Belloso Claudio, Carrario Javier

Belloso Claudio
Mendoza 4197 - 2.000 Rosario - Argentina
Tel-Fax: 041-380853 e-mail: belloso@satlink.com
Carrario Javier
Pasaje Mateo Biglioni 761
Corral de Bustos. Crdoba - Argentina
Tel: 0468-22182

Palabras Claves: Bacterias Degradadoras de Hidrocarburos.

n-hexadecano. Resazurina.

RESUMEN
La recuperacin de un ambiente contaminado con hidrocarburos por
medio de la bioremediacin, por ejemplo, exige un adecuado estudio y
caracterizacin de los microorganismos presentes.
Se han logrado aislar bacterias degradadoras de hidrocarburos de
suelos contaminados, se han cultivado en el laboratorio y se han
alimentado con un hidrocarburo puro como nica fuente de carbono.
Estas bacterias, una vez probada su actividad hidrocarburoltica podran
emplearse para acelerar los procesos de biodegradacin.

INTRODUCCION
Los residuos oleosos producidos por la industria petrolera continan
siendo un problema ambiental respecto a su tratamiento y disposicin
final. Industrias enclavadas en un comienzo en lugares muy poco
poblados, hoy, debido al gran crecimiento demogrfico, algunas de
ellas han quedado encerradas dentro de un cerco, en el cual, no solo
est la industria sino tambin su otrora landfarming. La recuperacin de
un ambiente contaminado con hidrocarburos como este por medio de
la bioremediacin, por ejemplo, exige un adecuado estudio y
caracterizacin de los microorganismos presentes.

OBJETIVOS
Aislar cepas bacterianas y estudiar su crecimiento en medios lquidos y
slidos conteniendo hidrocarburos como nica fuente de carbono.

MATERIALES Y METODOS
Matriz: suelo obtenido del Landfarming de Refinera San Lorenzo,
industria petrolera ubicada en la Ciudad de San Lorenzo, Provincia de
Santa Fe.
Extractables en Eter Etlico (E.E.): 3,43 % p/p.
Antigedad del Landfarming: 15 aos.

Aislamientos: Diluciones del suelo al 1% fueron sembradas en tubos

con 5ml de caldo Bushnell - Haas (1) conteniendo 50 l de nhexadecano esterilizado por radiacin UV y 100 l de una solucin
estril de resazurina de 50 ppm. Se hicieron los correspondientes
blancos de indicador y de n-hexadecano. Se incubaron durante cinco
das a 30C.
Se consideraron positivos aquellos cultivos en los cuales vir el
indicador, de azul a rosado. De los cultivos positivos se realiz
posteriormente el aislamiento en Agar Bushnell - Haas suplementado
con n-hexadecano. Al cabo de siete das de incubacin a 30C se
obtuvieron colonias incoloras, pequeas de borde entero e irregular.

RESULTADOS
Para corroborar que las colonias que crecan en medio slido con nhexadecano, tambin podan crecer con el extractable etreo obtenido
del suelo contaminado, se tomaron al azar 12 colonias de las obtenidas
y se las sembr nuevamente en 12 tubos conteniendo Caldo Bushnell Haas con indicador resazurina y con el extractable etreo ahora como
nica fuente de carbono.
Se sembraron paralelamente tubos testigos que contenan la cepa
aislada en Bushnell - Haas con el indicador sin fuente de carbono.
Se incubaron los tubos durante cinco das a 30C, en 7 de los 12 tubos
se pudo observar el viraje del indicador, mientras que en los 12 tubos
testigo no se detect cambio alguno del indicador. De los 7 tubos
positivos se aisl nuevamente en Agar Bushnell - Haas con el
extractable etreo como nica fuente de carbono.

Al cabo de 7 das de incubacin a 30C aparecieron las colonias en las

7 placas.
Mediante el Kit API 20E se pudo identificar solo una de las siete cepas
aisladas, la cual correspondi a Pseudomonas aeruginosa. Las seis
cepas restantes se estudiaron mediante 38 reacciones bioqumicas, no
pudindose lograr finalmente su identificacin (2).
Las cepas estudiadas no identificadas mostraron entre s una similar
taxonoma numrica de alrededor del 30 %.
Cuadro 1. Reacciones Bioqumicas de las cepas aisladas en Kit API
20E

TEST (*)1
ONPG +
ADH LDC ODC CIT
H2S
URE TDA
IND
VP
GEL GLU MAN INO
SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX
NO2
N2
MOB +
McC OF-O OF-F +

CEPAS N
2 3 4 5 6
- - - - - - - + - - - - - - + - - - - + +
- - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - - - + - - - - - + - - + - - - - - + - - - - - - - - - - - - - - - + - - - - + + - - - +
- - - - - - - + + - - + - - - - - + + + +
+ - - - -

7
+
+
+
+
+
+
-

(*) Abreviaturas: ONPG, -galactosidasa; ADH, arginina dehidrolasa;

LDC, lisina descarboxilasa; ODC, ornitina descarboxilasa; CIT, citrato;
H2S, cido sulfhdrico; URE, ureasa; TDA, triptfano desaminasa; IND,
indol; VP, produccin de acetona, GEL, gelatinasa; GLU, glucosa;
MAN, manitol; INO, inositol; SOR, sorbitol; RHA, ramnosa; SAC,
sacarosa; MEL, melibiosa; AMY, amigdalina; ARA, arabinosa; OX,
citocromo oxidasa; NO 2, produccin de NO 2; N2, produccin de N2;
MOB, movilidad; McC, crecimiento en agar Mac Conkey; OF, oxidacin
fermentacin.
CONCLUSION
Aproximadamente un 60% de las cepas aisladas que crecen con nhexadecano como nica fuente de carbono tambin lo hacen con el
extractable etreo. De cualquier manera, algunas cepas pierden la
capacidad de crecer con hidrocarburos como nica fuente de carbono
despus de 2 o 3 transferencias sucesivas por distintos medios. El
mismo hbitat en el cual se desarrollan este tipo de bacterias podra
ser la causa de los cambios observados en sus fenotipos lo cual
conduce a la baja coincidencia con las especies codificadas.
Dichas bacterias podran utilizarse para degradar hidrocarburos en
suelos una vez propagadas en laboratorio y luego inoculadas.

BIBLIOGRAFIA
(1) Bushnell, LD; Haas, HF. The utilization of certain hydrocarbons by microorganisms.
J. Bacteriol. 41: 653-673, 1941.
(2) Holt JG, Krieg NR, Sneath PH, Staley JT, Williams ST. Bergeys Manual of
Determinative Bacteriology 9 th ed., Baltimore, Williams & Wilkins, 1994.