CONCEPTOS Y TCNICAS DE BIOTECNOLOGA I

2010

BIORREACTORES
Dra. Marina de Escalada Pl

Biotecnologa
El uso integrado de la ingeniera, la
bioqumica y la microbiologa para
conseguir la aplicacin tecnolgica de las
capacidades de los microorganismos,
clulas de tejido cultivado y sus partes
(Federacin Europea de Biotecnologa)

Esencia multidisciplinaria de la
biotecnologa

Biotecnologa: historia y evolucin

Alimentos y bebidas fermentadas: ej. Cerveza, sumerios 6000 AC y
egipcios 4000 AC.
Pasteur (1865):
Etanol, butanol, acetona, glicerol.
Acidos orgnicos. Ej. Ctrico.
Tratamiento aerobio de aguas residuales.

Antibiticos (1940):
Penicilina:
Descubrimiento Alexander Fleming (1928).
1939 Produccin en batch, concentracin final alcanzada: 0,001 g penicilina/litro
caldo sesenta aos ms tarde alcanzaba los 50 g/l.

Tecnologa de la estructura de la clula animal: vacunas.

Era post antibiticos (1960-1975):

Aminocidos. Protena celular (SCP). Enzimas (detergentes). Tecnologa de
las clulas y las enzimas inmovilizadas. Tratamiento anaerbico de aguas de
desecho (biogas). Polisacridos bacterianos (goma xantn).

Nueva Biotecnologa (1975-):

Tecnologa de los hibridomas: pruebas diagnsticas con anticuerpos
monoclonales (1980)
Ingeniera gentica (1974).
Insulina humana (1982)

Bibliografa
Bioprocess Engineering. Basic concepts.
Michael Shuler & Fikret Kargi. Prentice
Hall International Series.
Bioprocess Engineering Principles.
Pauline Doran. Academic Press.

Metabolitos primarios
-Molculas generalmente sencillas, que participan de los caminos
metablicos esenciales. Son casi idnticos en todos los organismos.
-Son ms baratos y sencillos de producir, tienen bajo contenido de
actividad biolgica y frecuentemente son commodities.
1. Componentes esenciales de las clulas/microorganismos:
protenas, cidos nuclicos, polisacridos (gelanos, xantanos) y
polisteres, cidos grasos (insaturados), esteroles.
2. Derivados del metabolismo intermedio: azcares (fructosa,
ribosa), cidos orgnicos (gluconato, cido lctico,
ctrico, actico, propinico, succnico, fumrico), alcoholes
(xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminocidos (Lys,
Thr, Glu, Trp, Phe), vitaminas (B2, B12), nucletidos
saborizantes (cidos inocnico y guanlico), polisacridos y
polisteres de reserva.
Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos

Metabolitos secundarios
-Molculas mas complejas, que participan de caminos metablicos
no-esenciales, pero confieren capacidades de supervivencia en
situaciones de stress.
-Son muy variados y su estructura es fuertemente dependiente de la
especie y variedad utilizada para su produccin. Se generan en
condiciones particulares y son ms valiosos y complicados de
producir , alto contenido de actividad biolgica
-Generalmente son productos especiales (alto precio). Funcionan
en los organismos que los producen como:
- Armas contra otros microorganismos (antibiticos, toxinas,
inhibidores enzimticos, pesticidas)
-Factores de crecimiento (hormonas)

Reactores Biolgicos
Reactores que emplean
enzimas

Homogneos
Heterogneos (Enzima inmobilizada)

Equivalente a reactores qumicos.

Valen expresiones para reactores homogneos
CatalizadorEnzima se desactiva fcilmente con la TC

Reactores que emplean

microorganismos

Hay que considerar las

limitaciones al transporte

Homogneos
Heterogneos
(microorganismos inmobilizados)

Cintica enzimtica

G<0condicin
termodinmica.
Energa de activacin: (Ea)
energa necesaria para
formar el complejo
activado.
Catalizadordisminuye la
Ea al buscar una ruta
alternativaacelera la
velocidad de reaccin

 Enzimas: Catalizadores biolgicos protenas.

Deben unirse al substrato para lograr su accin cataltica
mediante:
Puentes de Hidrgeno.
Interacciones inicas
Interacciones hidrofbicas o fuerzas de van der Waals

TEMPERATURA: S/Arrhenius a>T, >velocidad

OJO!! Con la temperatura de desnaturalizacin

pH DEL MEDIO: influye sobre la estructura

terciaria de la enzima
La velocidad de una reaccin
catalizada por una enzima
depende

Competitivos
INHIBIDORES

No-Competitivos
Acompetitivos

CONCENTRACION DE SUBSTRATO: [S]

a > [S] > posibilidad de unin E-S favorece la reaccin

Ecuacin de Michaelis-Menten
[S]>>Km
Se comporta como una
reaccin de Orden cero

[S]Km
r

VMax [S]
[S ] Km

[S]<<Km
Se comporta como una
reaccin de 1er Orden

VMax [S ]
r
[S ] Km
VMax: mx velocidad que se puede
alcanzar para una dada concentracin.
(saturacin). Cuando [E-S][E0]r k3 [E0]
= VMax
Km: constante de afinidad de M-M, su
inversa se relaciona con la afinidad
aparente de la enzima por el substrato.
Corresponde [S] para la cual r = VMax/2.
Es independiente de [E0].
Vara con T, pH, fuerza inica

Cintica de crecimiento microbiano

Cuantificacin del crecimiento.

Modelos cinticos.

Modelos cinticos de crecimiento controlados por

sustrato

Modelos cinticos - Inhibicin

Inhibicin por sustrato
Inhibicin por producto
Inhibicin por productos txicos

Competitiva
No competitiva
Acompetitiva

Cintica de crecimiento microbiano

Mtodos Directos

Mtodos Directos
Turbidimetra con espectrofotmetro
Volumen de material celular luego de la
centrifugacin.

Mtodos Indirectos
Dosaje de componentes celulares (Ej:
dosar nitrgeno o protena celular.
Seguimiento de sustrato y/o productos
resultantes de la actividad metablica.

Bioreactores - Diseo

Batch o discontinuos
Tiempo muerto (t1):
Preparacin del reactor (esterilizacin y carga).
Sembrado
Recuperacin del producto del reactor

t1 debe considerarse dentro del clculo de

tiempo de proceso y depende del diseo del
reactor y caractersticas del proceso (3-10 hs).
La mayora de los batch operan con una
relacin Xf/X0 10-20.

Reactor batch
Volumen constante (VR = cte)
Cerrado para fase lquida: FS = F0 = 0
La concentracin final de biomasa, Xf,
depende del rendimiento y
de la cantidad de sustrato limitante

Cultivos continuos
Turbidostato
Quimiostato
FPI (ms utilizado en sistemas
inmovilizados)

Balance de masa

SIN CONSIDERAR METABOLISMO

ENDOGENO

KS D
S
m D
X Y

M
X /S

KS ( D k d )
S
m D kd
X YXM/ S ( S0 S ) (

( S0 S )

Con formacin de producto

D
)
D kd

Con formacin de producto

KS ( D k d )
S
m D kd

KS D
S
m D
X YXM/ S ( S0 S ) (

EFECTO DEL METABOLISMO

ENDOGENO

D
YXM/ S
D qP
YP / S

X YXM/ S ( S0 S ) (

D
YXM/ S
D kd q P
YP / S