Tema 6. Enzimologa. Principios de la catlisis enzimtica.

Cintica
enzimtica: ecuacin de Michaelis-Menten. Inhibicin enzimtica:
irreversible y reversible. Tipos de inhibicin reversible. Mecanismos de
regulacin de la actividad enzimtica. Isoenzimas

Jos C. Rodrguez Rey

Departamento de Biologa Molecular

Algunos enzimas utilizados en pruebas diagnsticas

LA ASPIRINA ES UN INHIBIDOR IRREVERSIBLE DE LAS CICLOOXIGENASAS

COX

Aspirina
Acetil-saliclico

COX acetilada
(inactiva)

Salicilato

De Nelson et al. Principles of

Biochemistry. 4th Ed. Freeman

LOS ENZIMAS

DEFINICIONES DE ENZIMAS

COFACTORES Y COENZIMAS

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Biochemistry. 4th Ed. Freeman

CLASES DE ENZIMAS Y NOMENCLATURA

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Biochemistry. 4th Ed. Freeman

LAS ENZIMAS AUMENTAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES

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LA CATALISIS DISMINUYE LA ENERGIA DE ACTIVACION

GSP
GB

Energa de activacin
Energa de fijacin

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El centro activo del enzima crea un entorno especfico para el sustrato en el

que la reaccin es ms favorable

Quimotripsina

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EFECTO DE LA DISMINUCION DE LA ENTROPIA EN EL AUMENTO DE LA

VELOCIDAD DE REACCION
Reaccin

Incremento de velocidad

105

108
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El sustrato interacciona con los aminocidos del centro activo y con los
cofactores

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Encaje inducido de la hexoquinasa

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Las enzimas utilizan la energa de fijacin para disminuir la energa

necesaria para la catlisis

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CONSTANTES Y UNIDADES CINETICAS DE LOS ENZIMAS

Nmero de recambio (Kcat) es el nmero de molculas de sustrato convertidas en

producto por unidad de tiempo (en condiciones de saturacin de sustrato)

La ecuacin de Michaelis- Menten

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Representacin de dobles recprocos (Lineweaver- Burke)

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De Nelson et al. Principles of

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Dependencia del pH de los enzimas

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Principales tipos de inhibicin

Irreversible.
Reversible.
Competitiva
Acompetitiva (solamente en enzimas con dos sustratos)
Mixta (solamente en enzimas con dos sustratos)
No competitiva (solamente terica)

LA ASPIRINA ES UN INHIBIDOR IRREVERSIBLE DE LAS CICLOOXIGENASAS

COX

Aspirina
Acetil-saliclico

COX acetilada
(inactiva)

Salicilato

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Inhibicin competitiva

El inhibidor tiene una estructura

similar al sustrato y compite con l
por el centro activo del enzima.
Cuando ocupa el centro activo impide
la fijacin del sustrato.
La inhibicin puede revertirse
simplemente por la adicin de ms
sustrato.

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Freeman

La inhibicin competitiva modifica la KM, pero no la velocidad mxima

KM= KM aparente
depende de la
concentracin del
inhibidor y de la
afinidad del inhibidor
por el enzima.
=1+

[I]
KI

Inhibicin acompetitiva
El inhibidor se une a un sitio
diferente al centro activo
El inhibidor solamente se une
cuando el centro activo est
ocupado por el sustrato.
La unin afecta a la velocidad
mxima.
Aunque la unin del inhibidor
no afecta a la afinidad del E
por el sustrato, la
concentracin de sustrato
necesaria para alcanzar la
vmax aumenta y por lo tanto la
Km tambin resulta
modificada.
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La inhibicin acompetitiva modifica tanto la KM como la

velocidad mxima

= 1 +

[I]
KI

Inhibicin mixta

El inhibidor se fija tanto al

enzima como al complejo ES.
Est afectado por las dos
constantes: KI y KI

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Cintica de una inhibicin mixta

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Regulacin de las rutas metablicas

G
H

Principales estrategias de regulacin

enzimtica*

Enzimas alostricos (Los moduladores se unen a otros sitios de

regulacin diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
Modificacin covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
as se regulan de forma diferente)
Rotura proteoltica de precursores inactivos

* Idealmente la regulacin tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algn intermedio importante) acta como
regulador.

Enzimas alostricos

Los moduladores se unen a sitios diferentes del centro activo y cambian

la estructura del enzima (a diferencia de los inhibidores acompetitivos).
Cuando el modulador es el propio sustrato se denominan enzimas
HOMOTROPICOS. Si es diferente se denominan HETEROTROPICOS.
Son mayores y ms complejos (ms subunidades que los otros enzimas).
Suelen poseer varias subunidades.
Poseen una cintica que no responde al modelo de Michaelis- Menten.

Aspartato transcarbamilasa (12 subunidades. En azules y prpura las tres

subunidades catalticas. De Nelson et al. Principles of Biochemistry. 4th Ed.
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Cintica de un enzima alostrico

homotrpico

La cintica sigmoidea
sugiere un efecto
cooperativo

El equivalente de la
Km se denomina K0,5

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Cintica de un enzima alostrico

heterotrpico

Los activadores
hacen que la cintica
se aproxime ms a la
de M-M.

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Principales estrategias de regulacin

enzimtica*

Enzimas alostricos (Los moduladores se unen a otros sitios de

regulacin diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
Modificacin covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
as se regulan de forma diferente)
Rotura proteoltica de precursores inactivos

* Idealmente la regulacin tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algn intermedio importante) acta como
regulador.

Los enzimas pueden sufrir modificaciones covalentes que afectan a su actividad

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La fosforilacin es el mtodo de regulacin utilizado por las principales

hormonas que controlan el metabolismo energtico (Ej: Regulacin de la

Glucgeno fosforilasa heptica*)

Insulina

Glucagn, Adrenalina
(receptor adrenrgico)

Glucagn, Adrenalina
(receptor adrenrgico)

* La glucgeno fosforilasa se activa por fosforilacin, pero otros enzimas se inactivan

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Los enzimas poseen normalmente ms de un sitio de fosforilacin

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La actividad del enzima sufre cambios discretos en su actividad

dependiendo del nmero de residuos fosforilados.

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Principales estrategias de regulacin

enzimtica*

Enzimas alostricos (Los moduladores se unen a otros sitios de

regulacin diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
Modificacin covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
as se regulan de forma diferente)
Rotura proteoltica de precursores inactivos

* Idealmente la regulacin tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algn intermedio importante) acta como
regulador.

Principales estrategias de regulacin

enzimtica*

Enzimas alostricos (Los moduladores se unen a otros sitios de

regulacin diferentes del centro activo y cambian la actividad del
enzima)
Modificacin covalente que cambia la estructura y la actividad del
enzima
Isoenzimas (diferentes tejidos poseen diferentes formas del enzima y
as se regulan de forma diferente)
Rotura proteoltica de precursores inactivos

* Idealmente la regulacin tiene lugar en las primeras reacciones de la ruta. En

ocasiones el propio producto final de la ruta (o algn intermedio importante) acta como
regulador.

Muchas proteasas se activan por proteolisis

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