PROTENAS

I.

OBJETIVOS:
Realizar pruebas fsicas y qumicas caractersticas de las
protenas.

II.

FUNDAMENTO TEORICO:

Un aminocido, como su nombre indica, es una molcula orgnica con

un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxlico (-COOH; cido). Los
aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que
forman parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una
reaccin de condensacin que libera agua formando un enlace
peptdico. Estos dos "residuos" aminoacdicos forman un dipptido.
Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as,
sucesivamente, para formar un polipptido. Esta reaccin ocurre de
manera natural en los ribosomas, tanto los que estn libres en el
citosol como los asociados al retculo endoplasmtico.
Todos los aminocidos componentes de las protenas son alfaaminocidos, lo que indica que el grupo amino est unido al
carbono alfa, es decir, al carbono contiguo al grupo carboxilo.
Por lo tanto, estn formados por un carbono alfa unido a un grupo
carboxilo, a un grupo amino, a un hidrgeno y a una cadena
(habitualmente denominada R) de estructura variable, que determina
la identidad y las propiedades de los diferentes aminocidos;
existen cientos de cadenas R por lo que se conocen cientos de
aminocidos diferentes, pero slo 20 forman parte de las protenas
y tienen codones especficos en el cdigo gentico.
La unin de varios aminocidos da lugar a cadenas llamadas
polipptidos o simplemente pptidos, que se denominan protenas
cuando la cadena polipeptdica supera los 50 aminocidos o la masa
molecular total supera las 5.000 uma.
Las protenas son macromolculas formadas por cadenas lineales de
aminocidos. El nombre protena proviene de la palabra griega

 ("proteios"), que significa "primario" o del dios Proteo,

por la cantidad de formas que pueden tomar.
Las protenas desempean un papel fundamental para la vida y son
las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son
imprescindibles para el crecimiento del organismo. Realizan una
enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

III.

Estructural (colgeno y queratina)

Reguladora (insulina y hormona del crecimiento),

Transportadora (hemoglobina),

Defensiva (anticuerpos),

Enzimtica (sacarasa y pepsina),

Contrctil (actina y miosina).

MATERIALES REACTIVOS E INTRUMENTOS:
a) 20 Tubos de ensayo

j) Pipetas graduadas

b) 8 tubos de ensayo

k) 2 Vasos de precipitado

c) Varilla de vidrio
d) 3 Probetas de 10 ml,5 ml
y 50 ml

l) 2 Vasos de precipitado de
250 ml

e) Mechero de Bunsen
f) Termmetro

de 100 ml

escala 0-

100C

m) 3 pinzas para tubos de

ensayo
n) luna de reloj

g) Rejilla de asbesto

o) Gradilla

h) Cocina elctrica

p) Goteros

i) Esptula

q) Soporte universal

REACTIVOS

a) Agua destilada

b) Acido sulfrico

j) Solucin de Millon

concentrado

k) Acido actico

c) Acido Nitrico concentrado

l) Reactivo de Biuret

d) Solucin saturada de

m) Acido clorhdrico

cloruro de sodio

concentrado

e) Cloruro de mercurio
(II) al 10

n) Hidrxido de sodio al

25 %

f) Acetato de plomo al 10 %

o) Hidrxido de sodio al 10%

g) Ferrocianuro de potasio

p) Acido sulfrico

al 10 %

concentrado

h) Solucin de sulfato de

q) Reactivo de Schweitzer

cobre (II) al 0,05 %

r) Solucin de cloruro de

i) Solucin ninhidrina al

sodio al 10 %

0,1 %
PARTE EXPERIMENTAL:
IV.

ESQUEMA DEL EXPERIMENTO:

SOLUBILIDAD:
a)

Marcamos

4 tubos de ensayo como: A, B, C, D. vertimos

cada tubo 1 ml de la clara de huevo fresco (para ello se hizo un

pequeo agujero en un huevo

y separamos la clara de la yema en un

vaso de 100 ml).

b)

Luego se aadi a cada tubo por separado 4 ml de: agua fra,

agua caliente, suero fisiolgico, y solucin de NaOH

al 25 %.

Agitamos los tubos.Observamos y tomamos nota de la solubilidad de

la albmina

del huevo en los cuatro disolventes diferentes.

El tubo A fue soluble en agua fra, el tubo B fue

tubo C fue soluble y el tubo D
c)

Con un tenedor

insoluble, el

fue insoluble.

y un plato , se bati lo que qued de la

clara del huevo , hasta punto de nieve ( merengue ).En un vaso

de 100 ml, se puso 15 ml de agua destilada y se aadi el tenedor
del merengue .

La albmina, perdi su solubilidad

d)

En un vaso de 100 ml se verti 10 ml de clara de huevo y

aadimos 40 ml de agua destilada, agitamos y filtramos en un

embudo

poniendo una gasa doblada que actu como material

filtrante. El filtrado le denominamos Solucin

A solucin

madre.
REACCIN DE BIURET: Para reconocer enlaces peptdicos.
En un tubo de ensayo pequeo

pusimos

1 ml de la solucin A y se

aadi 1 ml de hidrxido de Sodio al 10 %

de sulfato de cobre (II)

y 3 gotas de solucin

al 0,05 %, hasta que se

observ

cambios.
Se observ

el color violeta, la prueba

fue positiva por la

presencia de enlaces peptdicos.Al introducir la solucin A con el

Hidrxido de sodio, no pas nada, pero cuando se le aadi gota a
gota sulfato de cobre II al 1%, la solucin fue tornndose de un
color celeste a un color azul bajito, al final de unas cuantas
gotas mas la solucin, se torn de un color violceo, lo que
quiere decir que dio una reaccin positiva, ya que las protenas
por sus uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos del
reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta.
REACCIN NINHIDRINA:
Para reconocer aminocidos.
En un tubo de ensayo mediano se verti
luego

3 ml de la solucin A ,

se le aadi 5 gotas de solucin de Ninhidrina al 0,1 % ,

calentamos hasta ebullicin y luego lo enfriamos .

La prueba

es positiva

la protena efectivamente

- aminocidos.
Se observ un color lila.

tiene enlaces

Cuando se mezcl la solucin A con la Ninhidrina, y se llev al

mechero Bunsen, la solucin cambi de color a un color rosa palo,
tendiendo a prpura, lo cual significa que la prueba dio positiva,
ya que todas las aminas primarias (y por lo tanto tambin los
alfa-aminocidos) reaccionan con la ninhidrina desprendiendo
amonaco, el cual reacciona con otra molcula de ninhidrina
formando un compuesto color lila denominado prpura de Ruhemmans.
REACCIN XANTOPROTEICA:
Para reconocer aminocidos en protenas con anillos bencnicos que
posean
a.

grupos amino o hidroxilo.

En un tubo de ensayo pequeo pusimos 2 ml de solucin A, le

aadimos 3 gotas de HNO3

(c) .Agitamos

y observamos la presencia

de un color blanco.
b.

Cogiendo el tubo con una pinza calentamos suavemente

observamos.
c.
hasta

Luego se le aadi
que la solucin

4 gotas de hidrxido de Sodio al 10 %

se volvi

bsica. la reaccin fue

negativa , no tiene Tirosina

Cuando a la solucin A se le agreg HNO3 concentrado se produjo
un precipitado amarillo en la parte inferior del tubo, mientras
que en la parte superior un color blanco lechoso, esta al llevarla
a bao mara, se intensific el color blanco lechoso, y el color
amarillo, se torn ms claro, despus que se aadi NaOH al 10%,
la solucin se volvi bsica tornndose de color anaranjado
papaya.
Esto se debe a que se produce la nitracin del anillo bencnico
presente en los aminocidos tirosina, fenilalanina y triptfano,
obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven
anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin del cido
picrmico o trinitrofenol)

PRUEBA DEL ANILLO DE

HELLER:

En un tubo de ensayo pequeo se verti

2 ml de HCl (c), por las

paredes del tubo en forma inclinada, aadimos gota a gota la

solucin A y la reaccin fue positiva, se form el anillo de
Heller de color blanquecino.Cuando se introdujo en el tubo de
ensayo la solucin A, y en ella gotas de cido ntrico
concentrado por las paredes del tubo, se form un anillo blanco
lechoso alrededor del anillo.
EFECTO DEL CALOR
En un tubo de ensayo se verti 3 ml de la solucin A y

se lo puso

en un vaso de 250 ml que contenga agua de cao .Introducimos un

termmetro y procedimos a calentar
elctrica.Se observa

lentamente en la cocina

que a la temperatura

de 75 C, coagula,

tornndose de color blanco.Al introducir la solucin A en un

tubo de ensayo, y esta se lo llevo a bao Mara a una temperatura
de 75 C, esta coagulo, se desnaturaliz volvindose insoluble en
agua y precipitando de un color lechoso. Una solucin de A pura,
se coagula, ms rpido y a menor temperatura.
EFECTO DEL ALCOHOL:
En un tubo de ensayo mediano pusimos 3 ml de la solucin A, al
cual le aadimos 5 ml de alcohol etlico comercial ms 2 gotas de
solucin de NaCl al 10 %, agitamos bien y observamos.
La albmina

precipita. Al agregar a la solucin A alcohol

etlico comercial, esta por ser un solvente orgnico solubiliz a

la protena de la clara de huevo.

V.

TABLAS,GRAFICOS,RESULTADOS,etc:

Solubilidad

b)

Agua fra
Clara de
huevo

soluble

REACCION DE BIURET:

Agua

Suero

caliente

fisiolgico

insoluble

NaOH

soluble poco

insoluble muy

viscosa

viscosa

La prueba de Biuret consiste en que los iones de cobre se compleja

con los electrones si aparear del nitrgeno de dos enlaces
peptdicos adyacentes.

El cobre se reduce a Cu2O dando como

resultado el color violeta que se observa cuando la prueba es

positivo.
REACCIN NINHIDRINA

REACCIN XANTOPROTEICA

Esta prueba sirve para caracterizar los aminocidos bencnicos.

En esta prueba se produce la nitracin del anillo bencnico
presente en los aminocidos tirosina, fenilalanina y triptofano,
obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven
anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin del cido
pirmico o trinitrofenol
PRUEBA DEL ANILLO DE

HELLER

EFECTO DEL CALOR

CUESTIONARIO:
1. Responda brevemente:
Qu caractersticas presentan la solucin acuosa de la clara de
huevo?
La mayor parte de las protenas de la clara corresponde a la
ovoalbmina. Otra fraccin proteica de inters en la clara de
huevo es la conalbmina (13% del total); esta albmina tambin
coagula por aumento de la temperatura (como la ovoalbmina) y
tiene gran importancia ya que es transportadora de hierro, hecho
que le confiere propiedades antibacterianas al competir por l con
bacterias que lo requieren para su desarrollo.
Por qu no Se puede filtrar la clara de huevo

en papel filtro?

No por que el papel filtro

posee agujeros muy finos que

permiten el paso de la clara, en cambio con la gasa

no

si se pudo

filtrar por que esta presenta agujeros ms grandes.

La solubilidad de la protena depende del pH?
Si,

la Solubilidad

se mantiene siempre y cuando los enlaces

fuertes y dbiles estn presentes. Si se aumenta la temperatura y

el pH, se pierde la solubilidad.
Qu protena principal en la clara del huevo?
La mayor parte de las protenas de la clara corresponde a la
ovoalbmina. Otra fraccin proteica de inters en la clara de
huevo es la conalbmina (13% del total);
.OBSERVACIONES-CONCLUSIONES:
Cualquier cambio de temperatura o pH en una protena
desnaturaliza a esta misma.
El reactivo de Biuret al identificar a la protena rompe los
enlaces peptdicos que se encuentran en ellos.
El reactivo de milln precipita a las protenas.
El cloruro de mercurio precipita con mayor intensidad a la
albumina.
La xantoproteica reconoce compuestos aromticos en una
protena.
El reactivo de milln reconoce residuos fenlicos.
El etanol disuelve a las protenas.
VI.

BIBLIOGRAFIA:
Gua de laboratorio: Ral Paredes Medina, Protenas II-parte
http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/biotec_FQbiomo
l/Practica3FQB.pdf
http://liceo6.weebly.com/uploads/7/1/5/4/7154339/protenas_lec
he_y_casena.pdf