k

OFICINA ESPANOLA
DE
PATENTES Y MARCAS

19

k
kInt. Cl. : A23J 1/14

11 N
umero de publicacion:
7

51

ESPANA

2 142 659

A23J 1/00

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

12

kNumero de solicitud europea: 97900909.9

kFecha de presentacion : 29.01.1997
kNumero de publicacion de la solicitud: 0 886 476
kFecha de publicacion de la solicitud: 30.12.1998

T3

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54 Ttulo: Extracci
on de protenas de semillas oleaginosas.

73 Titular/es: B.M.W. Canola Inc.

72 Inventor/es: Murray, Edward D.

74 Agente: D
avila Baz, Angel

30 Prioridad: 31.01.1996 US 594909

64 Niagara Street, Winnipeg

Manitoba R3N 0T9, CA

45 Fecha de la publicaci
on de la mencion BOPI:

16.04.2000

45 Fecha de la publicaci
on del folleto de patente:

ES 2 142 659 T3

16.04.2000

Aviso:

k
k
k

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacion en el Boletn europeo de patentes,
de la mencion de concesion de la patente europea, cualquier persona podra oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposicion debera formularse por escrito y estar
motivada; solo se considerara como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposici
on (art 99.1 del Convenio sobre concesion de Patentes Europeas).
Venta de fasc
culos: Oficina Espa
nola de Patentes y Marcas. C/Panam
a, 1 28036 Madrid

ES 2 142 659 T3

DESCRIPCION
Extracci
on de protenas de semillas oleaginosas.
Campo de la invenci
on
La presente invencion se refiere a la preparacion y la purificaci
on de materiales protenicos
de semillas oleaginosas y harinas protenicas.
Antecedentes de la invenci
on
Las tecnicas de procesamiento de semillas
oleaginosas comerciales actuales ponen enfasis en
la producci
on de aceite superdesgomado brillante
y dan como resultado la retirada del aceite de gomas, materiales jabonosos, arcillas blanqueadoras
y pigmentos, que son materiales obtenidos como
subproductos y que se eliminan a
nadiendolos de
nuevo a la harina resultante de triturar las semillas oleaginosas para retirar el aceite.
La adicion de tales materiales a la harina de
semillas oleaginosas da como resultado una situaci
on en la que no es posible extraer de tales harinas aislados protenicos que contienen por
encima de aproximadamente 90 % de protena
usando tecnicas de aislamiento medioambientalmente sensibles. La grasa presente en las harinas
comerciales da como resultado normalmente una
concentracion de la grasa junto con la protena en
tecnicas de procesamiento convencionales.
Los niveles de protena que pueden alcanzarse
con tecnicas de procesamiento convencionales generalmente no superan de aproximadamente 70 a
75 % en peso y su funcionalidad en sistemas alimenticios esta deteriorada en virtud de la interferencia de la grasa. Adem
as, la presencia de la
grasa en el producto protenico seco puede conducir a rancidez y otros problemas relacionados
con la grasa, incluyendo escasa solubilidad, aglomeracion, etc., as como decoloracion resultante
del co-procesamiento de pigmentos en la harina
con la grasa.
Un enfasis de un programa de reproducci
on de
plantas de semillas oleaginosas es hacia mejorar
el rendimiento de aceite de las semillas oleaginosas y en efecto se han desarrollado cultivares, por
ejemplo, para canola (colza), que tienen un rendimiento superior en terminos de aceite. Sin embargo, tal producci
on de aceite mejorada tiene el
efecto de incrementar la proporci
on de grasa que
esta presente en la harina de semillas oleaginosas
como resultado de la adicion de los subproductos
procedentes del refinado de aceites a la harina de
semillas oleaginosas.
Aunque es posible retirar al menos parcialmente tales grasas de las harinas de semillas
oleaginosas mediante extraccion con disolventes
org
anicos, el uso de disolventes org
anicos, especialmente a temperaturas elevadas, tiende a desnaturalizar la protena, deteriorando de ese modo
la funcionalidad del producto, y, adem
as, da lugar a un problema de eliminaci
on y recuperacion
que no es medioambientalmente seguro.
En la Patente de EE.UU. N 4.208.323 del
presente inventor, se describe un procedimiento
para el aislamiento de protenas de diversas fuentes. Los materiales de fuentes de protenas que
se emplean en tal procedimiento pueden venir de
una variedad de fuentes, incluyendo semillas oleaginosas. Las harinas de semillas oleaginosas que
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estaban disponibles en 1980, en el momento de

la expedicion de la patente, no tenan los niveles
de contaminaci
on por grasas que est
an presentes en las harinas de semillas oleaginosas actuales y, como consecuencia, el procedimiento que se
describe en la patente anterior no puede producir a partir de las harinas de semillas oleaginosas
actuales productos de materiales protenicos que
tengan el contenido de protena de m
as de 90 %,
que es una propiedad de los materiales protenicos
producidos mediante el procedimiento producido
en la patente. Es necesario emplear una modificacion significativa de tal procedimiento para permitir que se produzcan tales productos a partir
de harinas de semillas oleaginosas actuales, incluyendo harinas prensadas en fro.
USP 4.285.862, del presente inventor, describe
la preparaci
on y purificaci
on de un producto de
aislado protenico sustancialmente no desnaturalizado que contiene al menos aproximadamente
90 % en peso de protena, y en la forma de una
masa protenica amorfa que se forma sedimentando una fase solida a partir de una dispersi
on
acuosa de micelas protenicas que consiste en restos protenicos anfiflicos homogeneos y formada
a partir de al menos un material de fuente de
protena de plantas. El producto, denominado
masa micelar protenica o PMM, sustancialmente no tiene contenido de lquido, sustancialmente no tiene contenido de lisinoalanina y tiene
sustancialmente el mismo contenido de lisina que
la protena de almacenamiento en el material de
fuente. En la presente invenci
on, tales materiales
se producen a partir de harina de semillas oleaginosas que tiene un contenido de grasa significativo mediante una modificacion del procedimiento
descrito en esta tecnica anterior.
Sumario de la invenci
on
La presente invencion busca evitar este problema de la tecnica anterior al proporcionar un
procedimiento que es capaz de proporcionar un
aislamiento de protena purificada de alto contenido de protena a partir de harina de semillas
oleaginosas actual contaminada con grasa.
De acuerdo con la presente invenci
on, se proporciona un procedimiento para preparar un aislado protenico, que comprende (a) extraer una
harina de semillas oleaginosas que tiene un contenido de grasa de hasta aproximadamente 10 % en
peso de la harina con una soluci
on salina acuosa
de calidad alimentaria que tiene una fuerza i
onica
de al menos aproximadamente 0,2 y a un pH de
aproximadamente 5 a aproximadamente 6,8 a una
temperatura de aproximadamente 15 a aproximadamente 75 C para provocar la solubilizacion
del material protenico y algo de grasa en la harina de semillas oleaginosas y para formar una
solucion de protena, (b) separar la soluci
on de
protena de la harina de semillas oleaginosas residual, lo que puede efectuarse antes o despues de
la etapa (c), (c) retirar la grasa de la soluci
on
de protena para proporcionar una soluci
on de
protena desengrasada, (d) incrementar la concentracion de protena de la soluci
on de protena desengrasada mientras se mantiene la fuerza i
onica
de la misma sustancialmente constante para formar una soluci
on de protena desengrasada concentrada, (e) diluir la solucion de protena desen-

ES 2 142 659 T3

grasada concentrada hasta una fuerza i

onica por
debajo de aproximadamente 0,2 para provocar la
formaci
on de partculas discretas de protena en
la fase acuosa en la forma de micelas protenicas
microscopicas altamente agregadas, (f) sedimentar las micelas protenicas para formar una masa
de aislado protenico al menos parcialmente en la
forma de una masa micelar protenica, similar a
gluten, gelatinosa, pegajosa y amorfa, (g) separar el aislado protenico del lquido sobrenadante,
y (h) secar el aislado protenico separado para
proporcionar un polvo protenico secado sustancialmente no desnaturalizado y que tiene un contenido de protena de al menos aproximadamente
90 % en peso.
En la presente invencion, es necesario efectuar la etapa o etapas de retirada de grasa antes
de la etapa de diluci
on que produce las micelas
protenicas, ya que de otra manera la protena y
la grasa se copurifican durante la etapa de formacion de micelas y a continuacion no es posible
elaborar un aislado protenico de la pureza requerida ya que la grasa diluye la protena.
Breve descripci
on del dibujo
La Figura 1 es un diagrama esquem
atico de
un procedimiento de aislamiento de protena de
acuerdo con una modalidad de la invenci
on que
se aplica a harina de c
anola pero tambien generalmente a otras harinas de semillas oleaginosas;
y
la Figura 2 es un diagrama esquem
atico de
un procedimiento de aislamiento de protena de
acuerdo con otra modalidad de la invenci
on que se
aplica a harina de semillas oleaginosas de canola
pero tambien generalmente a otras harinas de semillas oleaginosas.
Descripci
on general de la invenci
on
Las etapas implicadas en el procedimiento de
la invencion se muestran en forma de los organigramas del procedimiento de las Figuras 1 y 2.
La etapa inicial del procedimiento de esta invencion implica solubilizar material protenico de
harina de semillas oleaginosas, particularmente
harina de c
anola, aunque el procedimiento puede
aplicarse a otras harinas de semillas oleaginosas, tales como harina de soja y harina de colza.
Tal material protenico pueden ser las protenas
presentes naturalmente en semillas de canola u
otras semillas oleaginosas o el material protenico
pueden ser protenas introducidas mediante manipulaci
on genetica pero que poseen propiedades hidr
ofobas y polares caractersticas de las
protenas. La harina de c
anola puede ser cualquier harina de c
anola resultante de la retirada
de aceite de canola de semillas de canola con niveles variables de protena no desnaturalizada, resultante, por ejemplo, de metodos de extracci
on
con hexano caliente o extrusion del aceite en fro.
Seg
un se analiza anteriormente, tal harina de semillas oleaginosas contiene una proporcion significativa de grasa, hasta aproximadamente 10 % de
la harina.
Una solucion salina de calidad alimentaria se
usa en la solubilizaci
on de protena, y la sal de calidad alimentaria habitualmente es cloruro s
odico,
aunque pueden usarse otras sales, tales como cloruro pot
asico. La solucion de sal de calidad alimentaria tiene una fuerza i
onica de al menos apro-

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ximadamente 0,2 para permitir que se efect

ue
la solubilizacion de cantidades significativas de
protena. A medida que la fuerza i
onica de la
solucion salina se incrementa, el grado de solubilizacion de protena en el material de fuente se incrementa inicialmente hasta que se alcanza un valor m
aximo. Cualquier incremento posterior en la
fuerza ionica no incrementa la protena total solubilizada. La fuerza i
onica de la solucion salina de
calidad alimentaria que provoca la solubilizacion
maxima de protena vara dependiendo de la sal
en cuestion y la fuente de protena elegida.
En vista del mayor grado de diluci
on requerido para la precipitaci
on de protena con fuerzas
ionicas crecientes, habitualmente se prefiere utilizar un valor de la fuerza i
onica menor que aproximadamente 0,8, y mas preferiblemente un valor
de aproximadamente 0,3 a aproximadamente 0,6.
Sin embargo, se han usado valores de la fuerza
ionica de hasta 5,0. En la modalidad ilustrada en
las Figuras 1 y 2, se usa una soluci
on de NaCl
0,5M para solubilizar protena en la harina de
canola.
La solubilizacion salina de la protena se efect
ua a una temperatura de aproximadamente 5
a aproximadamente 35 C, preferiblemente acompa
nada por agitaci
on para disminuir el tiempo
de solubilizacion, que es habitualmente de aproximadamente 10 a aproximadamente 60 minutos.
Se prefiere efectuar la solubilizacion para extraer
sustancialmente la cantidad m
axima de protena
del material de fuente.
El lmite de temperatura inferior de aproximadamente 5 C se elige debido a que la solubilizacion es poco pr
acticamente lenta por debajo de
esta temperatura, mientras que el lmite de temperatura superior de aproximadamente 35C se
elige debido a que el crecimiento microbiano se
hace inaceptablemente r
apido por encima de esta
temperatura.
La solucion salina acuosa de calidad alimentaria y la harina de semillas oleaginosas tienen un
pH natural de aproximadamente 5 a aproximadamente 6,8 para permitir que se forme el aislado
protenico mediante la ruta micelar, seg
un se describe con mas detalle posteriormente. El valor de
pH optimo para el rendimiento maximo del aislado protenico vara dependiendo del material de
la fuente de protena elegido.
En y cerca de los lmites del intervalo de pH,
la formaci
on del aislado protenico se produce s
olo
parcialmente a traves de la ruta micelar y con rendimientos inferiores a los alcanzables en cualquier
parte del intervalo de pH. Por estas razones, se
prefieren valores de pH de aproximadamente 5,3
a 6,2.
El pH de la solucion salina de calidad alimentaria puede ajustarse hasta cualquier valor deseado dentro del intervalo de aproximadamente 5 a aproximadamente 6,8 para usar en la
etapa de extraccion mediante el uso de cualquier
acido de calidad alimentaria, habitualmente acido
clorhdrico, o alcali de calidad alimentaria, habitualmente hidr
oxido s
odico, convenientes, seg
un
se requiera.
La concentracion de material de fuente de
protenas en la soluci
on salina de calidad alimentaria durante la etapa de solubilizaci
on puede
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variar ampliamente. Valores de concentracion

tpicos son de aproximadamente 5 a aproximadamente 15 % p/v.
La etapa de extraccion de protenas con la solucion salina acuosa tiene el efecto adicional de
solubilizar ciertas grasas en la harina de canola,
lo que da como resultado que est
an presentes grasas en la fase acuosa.
La solucion de protena tiene generalmente
una concentraci
on de protena de aproximadamente 10 a aproximadamente 100 g/l, preferiblemente de aproximadamente 30 a aproximadamente 70 g/l, junto con de aproximadamente 1
a aproximadamente 10 g/l de grasa solubilizada.
La solucion de protena puede muestrearse con
respecto al contenido de grasa mediante metodos
de ensayo de grasas totales estandar.
Como se observa en la Figura 1, la fase acuosa
total resultante de la etapa de extracci
on puede
separarse a continuaci
on de la harina de c
anola
residual, de cualquier manera conveniente, tal
como empleando una prensa de c
amara de aire,
seguido por centrifugaci
on para retirar la harina
residual. El residuo de harina separado puede secarse para la eliminacion. Alternativamente, el
residuo de harina puede separarse despues de la
primera etapa de retirada de grasa descrita posteriormente, seg
un se ilustra en la modalidad de
la Figura 2.
La solucion de protena se somete a continuacion a una operaci
on de desengrasado, para
retirar al menos una proporci
on de la grasa de la
misma. La operacion de desengrasado puede efectuarse enfriando la soluci
on acuosa de protena
hasta una temperatura por debajo de aproximadamente 15C, preferiblemente por debajo de
aproximadamente 10 C y particularmente en el
intervalo de aproximadamente 3 a aproximadamente 7 C, generalmente sin agitacion, para hacer que la grasa se separe de la fase acuosa para
la retirada mediante cualquier operaci
on de separacion conveniente, tal como decantaci
on, centrifugacion y/o filtraci
on de finos, por ejemplo,
usando un filtro de bolsa GAF de 5 m. La
solucion de protena enfriada puede muestrearse
con relacion al contenido de grasa para determinar la grasa retirada enfriando. En las modalidades ilustradas, la grasa se decanta de la superficie
de la solucion, tal como mediante el uso de una
bomba, y la soluci
on desengrasada puede someterse a filtracion de finos para retirar grasa precipitada residual, seg
un se observa en la Figura 1.
Alternativamente, en la modalidad de la Figura
2, la separaci
on de harina residual puede efectuarse despues de la etapa de enfriamiento mediante centrifugaci
on de la solucion de protena
desengrasada.
La operacion de desengrasado se efect
ua generalmente para retirar de aproximadamente 30 a
aproximadamente 90 %, preferiblemente de aproximadamente 70 a aproximadamente 90 %, de la
grasa contenida en la soluci
on acuosa de protena
y permite que la soluci
on de protena desengrasada se procese adicionalmente para producir un
aislado protenico que tiene un alto contenido de
protena.
La solucion acuosa desengrasada de protena
se concentra a continuacion para incrementar la
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concentracion de protena de la misma mientras

que mantiene la fuerza i
onica de la misma sustancialmente constante.
La etapa de concentracion puede efectuarse
mediante cualquier tecnica de membrana selectiva conveniente, tal como ultrafiltraci
on o diafiltraci
on. La etapa de concentracion tiene el
efecto beneficioso de incrementar el rendimiento
de aislado micelar protenico que puede obtenerse
a partir del procedimiento, y de este modo incrementar la eficacia global del procedimiento de
aislamiento de protena.
El grado de concentraci
on de la solucion de
protena puede denominarse el factor de reducci
on de volumen. A medida que el factor de
reduccion de volumen, expresado como la relacion
del volumen de la soluci
on antes de la concentracion al volumen de la soluci
on concentrada, y
de ah la concentraci
on de protena, se incrementa
desde 1,0, el rendimiento obtenible se incrementa
hasta que se alcanza un m
aximo.
Una vez que se alcanza el rendimiento obtenible maximo, disminuciones adicionales en el volumen de la soluci
on concentrada son beneficiosas
solo con respecto al volumen de lquido requerido
para la diluci
on posterior durante la etapa de aislamiento de protena.
El factor de reducci
on de volumen al que se alcanza el rendimiento maximo obtenible depende
del material de fuente de protena en cuestion y
del pH de la soluci
on de protena. Se prefiere
usar un factor de reducci
on de volumen de aproximadamente 3,0 a aproximadamente 10, ya que
el rendimiento obtenible m
aximo frecuentemente
resulta del uso de estos valores. Un factor de
reduccion de volumen de al menos aproximadamente 1,1 se usa habitualmente y a medida que
los factores de reduccion de volumen se hacen bastante altos la viscosidad de la solucion de protena
se hace bastante alta, lo que puede conducir a dificultades en el procesamiento, inhibiendose de ese
modo la utilizacion de valores mayores.
La concentracion puede efectuarse a cualquier
temperatura conveniente, tpicamente de aproximadamente 20 a aproximadamente 45 C, y durante el perodo de tiempo para efectuar el grado
de concentracion deseado. La temperatura y
otras condiciones usadas dependen en alg
un grado
del equipo de membrana usado para efectuar la
concentracion y de la concentracion de protena
de la solucion.
La concentracion de la solucion de protena en
esta etapa no solo incrementa el rendimiento global del procedimiento sino que tambien disminuye
la concentracion de sal del aislado de protena final despues del secado. La capacidad para controlar la concentraci
on de sal del aislado es importante en aplicaciones del aislado en las que las
variaciones en las concentraciones de sal afectan
a las propiedades funcionales y sensoriales en una
aplicacion alimentaria especfica.
Como se sabe bien, la ultrafiltraci
on y tecnicas
de membrana selectiva similares permiten que
las especies de bajo peso molecular pasen a su
traves mientras que impiden que las especies de
peso molecular superior lo hagan. Las especies
de bajo peso molecular incluyen no s
olo las especies ionicas de la sal de calidad alimentaria

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sino tambien materiales de bajo peso molecular

extrados del material de fuente, tales como carbohidratos, pigmentos, etc. La separacion de pesos moleculares de la membrana se elige habitualmente para asegurar la retenci
on de sustancialmente todas las protenas en la soluci
on.
La eliminacion de especies de bajo peso molecular de la soluci
on extrada durante la etapa
de concentracion permite que la concentraci
on
de protena se incremente sin la precipitacion de
la misma, mucho mas all
a de la concentraci
on
maxima obtenible durante la etapa de extracci
on.
La solucion de protena concentrada puede someterse a una etapa de retirada de grasa adicional enfriando la solucion de protena concentrada hasta una temperatura por debajo de aproximadamente 15 C, preferiblemente por debajo
de aproximadamente 10C, particularmente dentro del intervalo de aproximadamente 3 a aproximadamente 7 C, para hacer que la grasa se separe
de la fase acuosa y retirar la grasa que se separa
de la solucion de protena concentrada. Pueden
usarse cualesquiera de los procedimientos de separacion de grasa descritos anteriormente para la
primera etapa de desengrasado, solos o en combinacion, para la retirada de la grasa de la soluci
on
de protena concentrada enfriada. La operaci
on
de desengrasado adicional da como resultado generalmente la retirada de aproximadamente 30 a
aproximadamente 90 % de la grasa residual, preferiblemente de aproximadamente 70 a aproximadamente 90 %, hasta una concentraci
on de grasa
residual de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 g/l de soluci
on de protena concentrada.
La solucion de protena puede muestrearse con
respecto al contenido de grasa para determinar la
grasa retirada mediante enfriamiento. La grasa se
decanta de la superficie de la soluci
on, tal como
mediante el uso de una bomba, y la soluci
on desengrasada se somete a filtracion de finos para
retirar la grasa precipitada residual.
La solucion de protena concentrada resultante de las etapas de concentraci
on y desengrasado, que tiene generalmente una concentraci
on
de protena de aproximadamente 40 a aproximadamente 200 g/l, dependiendo de la concentraci
on
de protena inicial y el factor de reducci
on de volumen usados, se diluye hasta una fuerza i
onica
de menos de aproximadamente 0,2, generalmente
a
nadiendo la soluci
on de protena concentrada a
una masa de agua que tiene el volumen requerido
para alcanzar la disminuci
on de fuerza ionica requerida.
La masa de agua a la que se alimenta la solucion de protena concentrada tiene habitualmente una temperatura menor de aproximadamente 25C, y preferiblemente tiene una temperatura de aproximadamente 3 a aproximadamente
15C, ya que se obtienen rendimientos mejorados
de aislado de protena con estas temperaturas m
as
fras.
La disminuci
on en la fuerza ionica provoca
la formaci
on de una masa turbia de moleculas
de protena altamente agregadas en gotculas
protenicas discretas en forma micelar. Las micelas protenicas se dejan sedimentar para formar
una masa de aislado protenico similar a gluten,
pegajosa, amorfa, densa, coalescida y agregada.

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La sedimentacion puede estar ayudada, tal como

mediante centrifugacion. Tal sedimentaci
on inducida disminuye el contenido de lquido de la masa
de aislado protenico, disminuyendo de ese modo
el contenido de humedad generalmente de aproximadamente 70 % en peso hasta aproximadamente
95 % en peso hasta un valor generalmente de aproximadamente 50 % en peso a aproximadamente
80 % en peso de la masa de aislado total. Disminuir el contenido de humedad de la masa de aislado de este modo tambien disminuye el contenido
de sal ocluida del aislado, y de ah el contenido
de sal del aislado secado.
La fuerza ionica hasta la que se diluye la solucion de protena concentrada por debajo de
aproximadamente 0,2 afecta a la eficacia de la
micelizacion y de ah al rendimiento del aislado
que se obtiene. Por esta razon, la fuerza i
onica
habitualmente se disminuye hasta un valor menor
que aproximadamente 0,15 y preferiblemente menor que aproximadamente 0,1. La capacidad para
obtener buenos niveles de aislado protenico en
el intervalo de fuerza ionica de aproximadamente
0,1 a aproximadamente 0,2 en esta invencion contrasta marcadamente con el procedimiento de la
tecnica anterior mencionado anteriormente en el
que la fuerza i
onica debe disminuirse por debajo
de 0,1 para obtener rendimientos razonables.
La diluci
on se efect
ua preferiblemente hasta
una fuerza i
onica en el intervalo de aproximadamente 0,06 a aproximadamente 0,2, ya que
se obtienen rendimientos optimos en este intervalo, y no se requieren vol
umenes excesivos de
agua para un beneficio adicional para una fuerza
ionica por debajo de aproximadamente 0,06. El
lmite inferior de fuerza i
onica para la soluci
on
de protena diluida est
a dictado m
as por consideraciones economicas practicas del volumen de
licor que por consideraciones de capacidad de funcionamiento del procedimiento. En la modalidad
ilustrada, la soluci
on de protena concentrada se
diluye en aproximadamente 1:15 de agua.
El aislado sedimentado, en la forma de una
masa protena similar a gluten, gelatinosa, pegajosa, aglomerada y amorfa, denominado masa
micelar protenica o PMM, se separa de la fase
acuosa residual, tal como mediante decantacion
de la fase acuosa residual de la masa sedimentada.
La PMM puede usarse en forma h
umeda o puede
secarse, mediante cualquier tecnica conveniente,
tal como secado por pulverizacion, liofilizacion o
secado en tambor a vaco, hasta una forma seca.
La PMM seca tiene un alto contenido de protena,
habitualmente por encima de aproximadamente
90 % de protena (calculado como N Kjeldahl X
6,25), y est
a sustancialmente no desnaturalizada
(seg
un se determina mediante calorimetra de exploraci
on diferencial). La PMM seca aislada de
la harina de semillas oleaginosas grasa tambien
tiene un bajo contenido de grasa residual, que
puede estar por debajo de aproximadamente 1 %.
La capacidad para alcanzar altos niveles de
protena no desnaturalizada contrasta marcadamente con los niveles de protena obtenidos mediante tecnicas convencionales. El alto contenido
de protena no desnaturalizada que se alcanza
mediante la aplicacion del procedimiento de la
invencion a harinas de semillas oleaginosas con
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grasa actuales es comparable con el obtenible mediante el procedimiento de USP 4.208.323 para
materiales de fuentes de protena que se describen en la patente.
Las operaciones de desengrasado u
nicas que
se llevan a cabo seg
un se describe anteriormente
de acuerdo con la invencion permiten alcanzar el
alto nivel de protena en un procedimiento no desnaturalizante a partir de harina de semillas oleaginosas contaminada con grasa. El procedimiento
de la invencion permite proporcionar un producto
de exclusion lquido de masa micelar protenica
modificada, llamado aqu MPMMLE.
La invencion se ilustra mediante los siguientes
Ejemplos:
Ejemplo 1
Este Ejemplo ilustra la preparaci
on de un aislado protenico de harina de semillas oleaginosas
de canola de acuerdo con una modalidad de la
invencion de acuerdo con el procedimiento de la
Figura 1.
Harina de c
anola comercial (50 kg) se a
nadi
oa
500 litros de una soluci
on acuosa de cloruro s
odico
(0,5M) elaborada a partir de agua corriente, todo
contenido en un sistema de 600 litros. La mezcla se removio durante 4 horas 8 C con agitacion
a 76,0 rpm con un mezclador de tipo de alabes.
Toda la mezcla se sometio a continuaci
on a una
etapa de prensado con una prensa de c
amara de
aire de tipo Wilmes. El lquido recuperado de la
prensa se centrifug
o a continuacion en un clarificador Westphalia que produca un extracto de
sal/protena en bruto de 13 mg de protena/ml
de extracto y un volumen total final de 477 litros.
La solucion de sal/protena en bruto se enfri
o a continuacion hasta 6 C durante 16 horas,
tiempo despues del cual una capa de grasa haba
ascendido hasta la parte superior de la soluci
on.
Esta capa superior se separ
o por bombeo y la
solucion protenica restante se filtr
o a traves de
un filtro de tipo de bolsa con una porosidad nominal de 5 micras para retirar partculas restantes de cascara y material de la pared celular mas
partculas residuales de grasa.
La solucion clarificada se concentro en un
sistema de ultrafiltraci
on de fibras huecas con
una separaci
on de pesos moleculares de 30.000
hasta un volumen final de 50 litros con una concentracion de protena de aproximadamente 120
mg/ml. El concentrado de 50 litros resultante se
enfri
o de nuevo hasta 6 C durante 16 horas y se
form
o una pelcula de grasa peque
na en la superficie de la solucion, esta pelcula se recogio y se
descart
o.
El extracto lquido con alto contenido de
protena se diluy
o 15 veces en agua corriente
on, se ob(6C). Inmediatamente durante la diluci
serv
o que se formaba una turbidez blanca. Sin
agitaci
on, esta turbidez protenica (provocada por
la agregaci
on de protena debido a la asociaci
on
hidr
ofoba de las protenas de harina de c
anola)

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se dejo sedimentar en el recipiente de dilucion.

El agua de diluci
on superior se separ
o por bombeo y la masa protenica viscosa precipitada se recogi
o y se seco por pulverizaci
on. Se observ
o mediante calorimetra de exploracion diferencial que
el aislado protenico resultante (91 % de protena,
seg
un est
a) era natural con alta funcionalidad en
diferentes aplicaciones alimentarias. El nivel de
grasa final del aislado era 0,93 %.
Ejemplo 2
Este Ejemplo ilustra la preparaci
on de un aislado protenico a partir de harina de colza extrada con disolvente de acuerdo con una modalidad adicional de la invenci
on usando el procedimiento de la Figura 2.
Harina de una colza Polish comercial que contena 32,5 % de protena (seg
un est
a), 10,1 % de
grasa y 6,1 % de humedad se extrajo en la relaci
on de 10 % p/v en agua que contena 1,46 %
de sal. El sistema de extraccion se mezclo duun se desrante 2 horas a 25 C, se proceso seg
cribe en el Ejemplo 1 para retirar harina residual y a continuaci
on se enfrio hasta 8C y se
dej
o sedimentar durante 1 hora. Despues de este
perodo de sedimentacion, aproximadamente 200
g de grasa se retiraron de la parte superior del
sistema de sedimentacion, y el sistema acuoso se
centrifug
o a continuaci
on para retirar material
en partculas. El sobrenadante se diafiltr
o y a
continuacion se concentr
o sobre una membrana
con una separacion de pesos moleculares calculada en 30.000 daltons. Esta etapa de membranas
combinadas requera 4,5 horas y produca un extracto protenico con un nivel de s
olidos total de
4,1 % (43,9 % de protena, base seca). El extracto
protenico se diluy
o 15 veces en agua corriente
fra (2 C), una turbidez de micelas blancas de
protena agregadas se formaba inmediatamente
durante la diluci
on. Esta masa micelar se dejo
sedimentar durante 14 horas a 3 C, el agua de
diluci
on superior se decant
o y la masa protenica
viscosa se recogio del fondo y se seco para formar
el producto protenico final.
Ejemplo 3
Este Ejemplo ilustra el uso de una harina preparada a partir del prensado (exclusion) en fro
de semillas de canola.
Semillas de canola intactas se alimentaron a y
se trituraron dentro de una prensa de extrusi
on
en fro (tipo Monforts), los tacos resultantes se
trituraron, los residuos de semillas compactados
(menos el aceite extruido) se molieron en un molino estandar (tipo Fitz) para dar una consistencia similar a la de la harina de canola comercial.
Este material se proceso a continuacion mediante
el procedimiento de extraccion y recuperaci
on de
protena que se describe en el Ejemplo 2. La turbidez tpica de micelas protenicas formada durante la diluci
on y la masa micelar viscosa se
recogieron y se secaron para formar el producto
protenico final.

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REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento para preparar un aislado
protenico, caracterizado por:
(a) extraer una harina de semillas oleaginosas que tiene un contenido de grasa de hasta
10 % de la harina con una soluci
on salina
acuosa de calidad alimentaria que tiene una
fuerza ionica de al menos 0,2 y a un pH de
5 a 6,8 a una temperatura de 5 a 35C
para provocar la solubilizacion de protena
y grasa en dicha harina de semillas oleaginosas y formar una soluci
on acuosa de
protena,
(b) separar la soluci
on acuosa de protena
de harina de semillas oleaginosas residual,
(c) retirar la grasa de la soluci
on acuosa de
protena para proporcionar una soluci
on de
protena desengrasada,
(d) incrementar la concentracion de protena de dicha soluci
on de protena desengrasada mientras se mantiene la fuerza ionica
de la misma sustancialmente constante para
formar una soluci
on de protena desengrasada concentrada,
(e) diluir la soluci
on de protena desengrasada concentrada hasta una fuerza i
onica
por debajo de 0,2 para provocar la formacion de partculas discretas de protena
en la fase acuosa al menos parcialmente en
la forma de micelas protenicas,
(f) sedimentar las micelas protenicas para
formar una masa de aislado protenico al
menos parcialmente en la forma de una
masa micelar protenica, similar a gluten,
gelatinosa, pegajosa y amorfa,
(g) separar el aislado protenico del lquido
sobrenadante, y
(h) secar el aislado protenico separado para
proporcionar un polvo protenico secado
sustancialmente no desnaturalizado y que
tiene un contenido de protena de al menos
90 % en peso.
2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que dicha solucion salina acuosa
de calidad alimentaria tiene una fuerza i
onica de
0,3 a 0,6.
3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, en el que dicha etapa de extracci
on
se efect
ua durante de 10 a 60 minutos.
4. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicha solucion salina acuosa de calidad alimentaria
tiene un pH de 5,3 a 6,2.
5. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicha solucion acuosa de protena tiene una concentracion de 10 a 100 g/l de protena y de 1 a 10
g/l de grasa solubilizada.
6. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la
grasa se retira de la soluci
on acuosa de protena
enfriando la soluci
on acuosa de protena para hacer que la grasa se separe de la fase acuosa y a
continuacion separando la grasa de la fase acuosa.

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7. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 6, en el que dicha grasa se separa por decantacion, centrifugaci
on y/o filtraci
on de finos.
8. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 6 o 7, en el que dicha soluci
on acuosa
de protena se enfra hasta una temperatura por
debajo de 15C para efectuar la retirada de 30
a 90 % de la grasa de dicha soluci
on acuosa de
protena.
9. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que dicha
solucion acuosa de protena se enfra hasta de 3
a 7 C.
10. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, en el que dicha
etapa de enfriamiento se efect
ua sobre la soluci
on
acuosa de protena antes de dicha separaci
on de
la harina de semillas oleaginosas residual y dicha
harina de semillas oleaginosas residual se separa
de la solucion acuosa de protena despues de la
separaci
on de la grasa de la fase acuosa.
11. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, en el que dicha
etapa de enfriamiento se efect
ua sobre la soluci
on
acuosa de protena despues de la separacion de la
solucion acuosa de protena de la harina de semillas oleaginosas residual.
12. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que se
retira de 70 a 90 % del contenido de grasa de la
solucion acuosa de protena.
13. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que
la solucion de protena desengrasada se concentra
mientras se mantiene la fuerza ionica de la misma
usando una tecnica de membrana selectiva.
14. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 13, en el que la soluci
on de protena desengrasada se concentra en un factor de reducci
on
de volumen de 3,0 a 10.
15. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 13 o 14, en el que dicha concentraci
on se
efect
ua a una temperatura de 20 C a 45 C.
16. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que la
solucion de protena desengrasada concentrada se
somete a una etapa de retirada de grasa adicional
antes de dicha etapa de diluci
on.
17. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 16, en el que dicha etapa de retirada
de grasa adicional se efect
ua enfriando la soluci
on
de protena desengrasada concentrada para hacer
que la grasa se separe de la solucion acuosa y a
continuacion separando la grasa de la fase acuosa.
18. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 17, en el que la grasa se separa por decantacion, centrifugaci
on y/o filtraci
on de finos.
19. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 17 o 18, en el que dicha solucion acuosa
de protena se enfra hasta una temperatura por
debajo de 15C para efectuar la retirada de 30
a 90 % de la grasa de dicha soluci
on acuosa de
protena.
20. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 19, en el que
dicha soluci
on de protena desengrasada concentrada se enfra hasta de 3 a 7 C.
21. El procedimiento de acuerdo con una cual7

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quiera de las reivindicaciones 17 a 20, en el que

se retira de 70 a 90 % del contenido de grasa de
la solucion de protena concentrada.
22. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en el que la
etapa de diluci
on se efect
ua a una temperatura
de menos de 25 C.
23. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 22, en el que la etapa de diluci
on se
efect
ua alimentando la soluci
on de protena concentrada a una masa enfriada de agua que tiene
una temperatura de 3 a 15C.

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24. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 22 o 23, en el que dicha diluci

on se
efect
ua hasta una fuerza i
onica de 0,06 a 0,12.
25. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, en el que dichas micelas protenicas se sedimentan mediante
centrifugacion.
26. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25, en el que
dicha harina de semillas oleaginosas es harina de
canola, harina de colza o harina de soja.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva

del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposici
on Transitoria del RD
2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicaci
on
del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a Espa
na y solicitadas antes del
7-10-1992, no producir
an ning
un efecto en Espa
na
en la medida en que confieran protecci
on a productos qumicos y farmaceuticos como tales.

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Esta informaci
on no prejuzga que la patente este o
no includa en la mencionada reserva.

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