OBJETIVO

Determinar la presencia de bacterias coliformes fecales en las

muestras de lechugas compradas en el Mercado de Abasto.
Detectar si la muestra comprada en el Mercado de Abasto es apta para
el consumo humano

INTRODUCCION
Este proyecto se inicia al momento de observar en el Mercado de Abasto diferentes
productos que requieren de una buena conservacin, y que los mismos son
comprados en su mayora por personas que desconocen las condiciones que debe
tener un de alimento al momento de ser consumido. Por lo que la lechuga fue el
alimento ms atractivo. Adems, es una de las hortalizas fundamentales para una
dieta saludable. Segn estudios realizados este tipo de hortalizas ha sido asociada
con brotes de origen Microbiano, por ser un alimento de consumo crudo, lo que
agrega un riesgo en la transmisin de microorganismos. algunos factores como
fertilizacin, agua de riego contaminada, las practicas de cosecha, los riesgos en la
preparacin y hbitos de consumo contribuyen a la proliferacin microorganismos
de patgenos humanos.
La lechuga es una planta delicada que merece ser comida fresca, en el caso de
necesitar conservarse, lo ideal es aplicar una temperatura de 0C y una humedad
relativa mayor del 95%.

METODOLOGA
Se seleccion 2 lechugas que son usadas comnmente en la dieta de los
panameos. Las dos muestras fueron compradas en el Mercado de Abasto y
cosechadas en Tierras Altas de la Provincia de Chiriqu.
Los muestreos se realizaron el da jueves 21 de junio, aproximadamente una de la
tarde (1:00 pm) luego al llegar a la universidad las muestras fueron colocadas en la
refrigeradora
Muestra 1 y 2: Esta lechuga fue comprada en los establecimientos que se
encuentran en la entrada del local estaba colocada sobre un mueble de madera.
Se coloca en una bolsa ziploc sobre la balanza y se pesan 10g de hoja de lechuga
luego se tapa y se le vierte los 90ml de agua peptonada se cerr la bolsa y se
comenz a homogenizar y triturar las hojas de lechugas dentro de la bolsa esto se
hizo por un minuto.

Realizacin de la Prueba Presuntiva

De este homogenizado se inocularon nueve tubos de ensayo:
Los

primeros tres tubos tenan caldo Lauril

Triptosa doble con capsula de durhan se
inocularon utilizando una pipeta para luego
poder pasar el homogenizado al caldo
colocndole 10ml a cada tubo.
Los siguientes tres tubos tenan el medio
de cultivo de caldo Lauril Triptosa simple y
capsula de durhan con la ayuda de una
pipeta le colocamos a cada tubo 1ml del
homogenizado.
Los tres ltimos tubos tenan caldo Lauril
Triptosa simple y capsula de durhan con la
ayuda de una pipeta le colocamos 0.1ml
del homogenizado a cada tubo.
Luego se incubaron los tubos entre 3537C durante 48 horas. Todo este
procedimiento se realizo con la muestra 2
los mismos parmetros a seguir.
Los tubos positivos deben mostrar
crecimiento y presentar gas en la capsula
de durhan.

PRUEBA CONFIRMATIVA
Para realizar esta prueba tomamos todos los
tubos positivos que nos dieron en la prueba
presuntiva y para esto necesitamos 9 tubos
de caldo bilis verde brillante con capsula de
durhan y con la ayuda de una pipeta se pudo
pasar las diferentes muestras (0.1, 1ml, 10ml)
Se tom 1ml de cada tubo en el cual se le
haba colocado
0.1, 1 y 10 ml del
homogenizado que tena como medio de
cultivo caldo Lauril Triptosa simple cuyo
resultados fueron positivos y se colocaron los
tubo
de
bilis
verde
brillante.
Este
procedimiento se realizo con la muestra # 2.
Luego se incubaron los tubos entre 35-37C
durante 48 horas.

PRUEBA COMPLETA
Los tubos positivos que dieron en la prueba confirmativa se utilizaron para
inocular en platos Petri que tiene como medio de cultivo Agar el cual es un
medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y aislamiento de
Microorganismos Gram negativos En este medio se aslan y diferencian
bacilos entricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la
lactosa. El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como
inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias
que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona
de precipitado de sales biliares el cual es debido a una cada en el pH por la
fermentacin de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa
permanecen incoloras.

PASAR A MEDIOS EMB

Luego de hacer el esparcido se puede ver que en todos los platos hubo
crecimiento se utilizaron tres platos EMB para sembrar las colonias ms
diferenciadas que fueron las de color, morada, lila, rosada.
Se realiz tincin y luego se procedi a montar las placas

OBSERVACIN AL MICROSCOPIO
Se pudieron ver bacterias gran negativas ya que este medio es solo para
que pueden crecer bacterias gram negativas.

RESULTADOS
Muestras # 1 (Lechuga)

Muestra # 2 (Lechuga Romana)

Tubo 1 (10ml)

Tubo 2 (10ml)

Tubo 3 (10ml)

Tubo 1 (10ml)

Tubo 2 (10ml)

Tubo 3 (10ml)

Tubo 1
(1ml)
+

Tubo 2
(1ml)
+

Tubo 3
(1ml)
+

Tubo 1
(1ml)
+

Tubo 2
(1ml)
+

Tubo 3
(1ml)
+

Tubo 1
(0.1ml)
+

Tubo 2
(0.1ml)
+

Tubo 3
(.01ml)
+

Tubo 1
(0.1ml)
+

Tubo 2
(0.1ml)
+

Tubo 3
(0.1ml)
+

Cuadro # 1Cremiento en Caldo Lactosado Simple y doble .

Podemos ver que el cuadro #1 todos los tubos fueron positivos de (0.1, 1ml, 10ml) esto nos permiti
buscar en la tabla la combinacin de nmeros ms probables el cual fue 3-3-3 lo que nos indica que el
numero de bacterias por tubo fue de mayor o igual a 2,400 NMP/100ml en un numero de confianza de 95%

Muestras # 1 (Lechuga)

Muestra # 2 (Lechuga Romana)

Tubo 1 (10ml)

Tubo 2 (10ml)

Tubo 3 (10ml)

Tubo 1 (10ml)

Tubo 2 (10ml)

Tubo 3 (10ml)

Tubo 1
(1ml)

Tubo 2
(1ml)

Tubo 3
(1ml)

Tubo 1
(1ml)

Tubo 2
(1ml)

Tubo 3
(1ml)

Tubo 1
(0.1ml)

Tubo 2
(0.1ml)

Tubo 3
(.01ml)

Tubo 1
(0.1ml)

Tubo 2
(0.1ml)

Tubo 3
(0.1ml)

Cuadro #2 Crecimiento en Caldo Bili Verde Brillante.

Nmero ms probable
El mtodo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos
especficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir
de muestras
Muestra #1
Combinacin
numero

Tubo 1 (10ml)
de
3

Tubo2(1ml)
3

Tubo3(0.1ml)
2

Numero ms probable: 11OONMP/100ml

Muestra #2
Combinacin
numero

Tubo 1 (10ml)
de
3

Numero ms probable: 210NMP/100ml

Tubo2(1ml)
2

Tubo3(0.1ml)
2

DISCUSIN
Segn los resultados obtenidos, los niveles en las dos muestras sobrepasaron
los lmites permitidos por la FDA para este tipo de alimento. Es por esto que se
debe tomar en cuenta la desinfeccin de la lechuga y la correcta manipulacin
que incluye diariamente el cuidado personal.
En este estudio se encontr un alto contenido de Klebsiella ssp, Enterobacter y
un bajo contenido de E.coli. Esto lo sustentamos en base a que las colonias
lactosa (+) dan colonias de color violeta, las de E. coli presentan un caracterstico
brillo verde metlico, las de Enterobacter presentan un color violeta sin brillo
metlico (ojo de buey) y estos fueron los resultados obtenidos
El grupo de coliformes ha sido siempre el principal indicador de la calidad de
agua y alimento. El numero de coliforme en una muestra se usa como criterio de
contaminacin y por lo tanto de calidad sanitaria de la misma.
Este tipo de alimento con alto contenido de coliforme puede provocar en la
poblacin, sobre todo en las ms susceptible en (nios,embarazadas y adultos
mayores) enfermedades gastrointestinales, que podran incluso causar la muerte.
Diversos estudios sealan que los ndices de contaminacin fecal de los
productos hortculados son mayores en las reas de mercado en las de cultivo.

CONCLUSIN
La calidad de la lechuga nacional en este puesto de venta no es ptima y la
humedad excesiva ha mermado los rendimientos.
Los lechugas que se comercializan en algunos puestos de ventas en el
mercados de abastos presentan elevados niveles de contaminacin por
especies de Kliebsiellasp
En base a los resultados obtenidos en la lechuga, la presencia de bacterias
(Klebsiella y E. Coli), puede ser producto de la contaminacin accidental de
agua, suelo, o actividades humanas no higinicas, incluyendo manipulacin
, almacenamiento y conservacin.
La contaminacin fecal de los productos hortcolas son mayores en las
reas de mercado que en las de cultivo

RECOMENDACIONES
Es oportuno sealar que para la
descontaminacin de los vegetales de
organismos patgenos, adems de la
limpieza se recomienda el empleo de una
operacin de desinfeccin con alguna
sustancia clorada,
Deben manipularse adecuadamente para
eliminar los agentes contaminantes y
patgenos
Lave adecuadamente sus manos con agua y
jabn.
Desinfecte las superficies que tendrn
contacto con alimentos.
Separe los utensilios que se utilizan para
alimentos cocidos de las herramientas
usadas para la preparacin de otros de
consumo crudo.
Si se preparan alimentos en grandes
cantidades las medidas se deben extremar
Educar a las personas de los cuidados y
medidas que se deben tomar al momento de
consumir alimentos crudos.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFA
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