RV-T12 V04 Gerten ISO 11133

Qualittskontrolle
von mikrobiologischen Nhrmedien

(ISO 11133)
Barbara Gerten
12. Jahrestagung Trinkwasserringversuche
Osnabrck
02. Mrz 2011
berblick
1
Stand der Normungsarbeiten DIN EN ISO 11133
DIN EN ISO 11133 Teil 1
Ausblick: DIN EN ISO 11133 berarbeitung zur einteiligen Norm
ISO 11133 Vortrag anllich 12. Ringversuchstagung Osnabrck
B. Gerten | 02. 03.2011
Stand der Normungsarbeiten

DIN EN ISO 11133
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anllich
Ringversuchstagung
Osnabrck
3ISO 11133
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ISO 11133: erstellt durch das Technische Komitee
ISO/TC 34/SC 9: Agricultural Food Products Microbiology
gemeinsam mit ISO/TC 147/WG 12 Water Microbiology AQS
auf deutscher Ebene mit den DIN-Auschssen:
DIN NAL Mikrobiologische Lebensmitteluntersuchung
einschlielich Schnellverfahren
und DIN NAW Wasseruntersuchung UA 3 Mikrobiologie
als DIN EN ISO 11133
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DIN EN ISO 11133 Teil 1:
DIN EN ISO/TS 11133-1:2009
erstmals 2000 als Vornorm erschienen;

2009 erneute Verffentlichung als berarbeitete Vornorm
DIN EN ISO 11133 Teil 2:
als Vornorm 2004 erschienen
DIN EN ISO/TS 11133-2:2004
Norm (Standard): 5 Jahre gltig, dann Besttigung / berarbeitung

fr Wasseruntersuchungen relevante Normen
werden in die DEV-Sammlung bernommen
Vornorm = Technische Spezifikation / TS:
soll noch in der Praxis erprobt werden;
3 Jahre gltig, dann Besttigung oder berarbeitung
Vornormen meist werden nicht in in die DEV-Sammlung bernommen
Bezug: ber den Beuth Verlag, Berlin (www.beuth.de)
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DIN EN ISO/TS 11133 Teil 1:2009

Allgemeine Anleitung fr die
Qualittssicherung
bei der Zubereitung von Nhrmedien
im Laboratorium
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Ringversuchstagung
Osnabrck
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DIN EN ISO/TS 11133 Teil 1: 2009

Allgemeine Anleitung fr die Qualittssicherung bei der
Zubereitung von Nhrmedien im Laboratorium
legt Mindestanforderungen an die qualittsgesicherte
Zubereitung, Lagerung etc. von Nhrmedien fest
Verfahren zur mikrobiologischen Leistungsprfung sind in DIN

EN ISO/TS 11133-2 geregelt
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Es sollten ausreichende Prfungen erfolgen, um Folgendes
nachzuweisen:
- die Annehmbarkeit jeder Charge des Mediums;
- die Eignung des Medium fr den jeweiligen Zweck;
- die Erzielung gleich bleibender Ergebnisse mit dem Medium.
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Anwendungsbereich
Teil 1 der Norm gilt fr folgende vier Arten von Nhrmedien:
- handelsbliche Fertigmedien;
- Medien, die wiederaufzuschmelzen,
zu supplementieren und zu verteilen sind;
- aus handelsblichen Trockenmedien hergestellten Medien;
- aus einzelnen Grundsubstanzen hergestellte Medien.
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Anwendungsbereich
Teil 1 der Norm legt fest:
Mindestanforderungen an die Zubereitung von
Nhrmedien,
die fr die mikrobiologische Untersuchung von Produkten
verwendet werden sollen, die fr den menschlichen
Verzehr oder als Futtermittel vorgesehen sind;
ist auch auf Nhrmedien anwendbar,
die fr die mikrobiologische Untersuchung
aller Arten von Wasser verwendet werden.
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Begriffe
Enthlt Definitionen und Begriffe z.B.:
- Charge von Nhrmedien
- Nhrmedium
Definition nach Beschaffenheit:
chemisch definiertes / chemisch nicht definiertes Medium
flssiges / festes / halbfestes Nhrmedium
Definition nach Verwendung:
Transportmedium, Konservierungsmedium,
Wiederbelebungsmedium, Isolierungsmedium usw.
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Begriffe
- Fertigmedium
flssiges, festes oder halbfestes Medium,
das in entsprechenden Behltnissen in gebrauchsfertiger
Form vorliegt oder nach dem Wiederaufschmelzen
gebrauchsfertig ist
- aus handelsblichen Trockenmedien hergestelltes Medium
Medium in trockener Form,
das vor Gebrauch eine Rehydratisierung und Verarbeitung
erfordert
- aus einzelnen Bestandteilen hergestelltes Medium
Medium, das ausschlielich aus den im vollstndigen
Rezept angefhrten spezifischen Bestandteilen
hergestellt wird
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Begriffe
- Prforganismen
Referenzstamm
Referenz-Stammkultur
Stammkultur
Gebrauchskultur
Subkultur einer Stammkultur
oder ein Referenzmaterial
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Qualittssicherung von Nhrmedien
- Dokumentation
Dokumentation durch den Hersteller
Zertifikat ber die Qualittslenkung und
verwendete Prforganismen,
Ergebnisse der Leistungsprfung mit den
Annahmekriterien usw.
Annahme von Produkten
Unversehrtheit der Verpackung,
Verfalldatum, mitgelieferte Dokumentation;
das Eingangsdatum ist aufzuzeichnen.
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- Lagerung
Trockenmedien und Supplemente:
berprfung der Dichtheit des Verschlusses,
Aufzeichnung des ersten ffnungsdatums,
Begutachtung des Inhalts
(Homogenitt, Farbvernderungen usw.)
Vom Handel gelieferte Fertigmedien:
nach Angaben des Herstellers
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- Lagerung
Im Laboratorium hergestellte Medien:
die Lagerbedingungen sollen eine Vernderung
der Zusammensetzung verhindern,
vor Licht und Austrocknung schtzen,
bei Bedarf bei 5 C 3 C,
Lagerdauer - allgemeine Empfehlung in der Norm:
Platten:
Flaschen und Rhrchen:
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2 4 Wochen
3 6 Monate
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- Lagerung
Im Laboratorium hergestellte (zubereitete) Medien:
Medien mit Zusatz labiler Supplemente:
am Tag der Herstellung
Feste Medien mit chemisch reaktiven und/oder labilen
Substanzen,
die zum Wiederaufschmelzen gelagert werden:
keine Lagerung in groen Mengen
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- Lagerung
Im Laboratorium hergestellte (zubereitete) Medien:
es sollte ein validiertes Verfalldatum vorliegen
- nach den Angaben in dieser Norm
oder in anderen spezifischen Normen
- oder nach den Ergebnissen einer Validierung durch
das Laboratorium,
(dies kann dann, je nach Ergebnis, auch lnger oder
krzer sein als in der Norm)
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- Herstellung von Medien im Laboratorium
Allgemeines
nach Herstellerangaben,
unter Beachtung der Guten Laborpraxis,
Dokumentation aller bedeutsamen Daten wie
Masse/Volumen,
pH-Wert,
Herstellungsdatum,
Sterilisationsbedingungen,
Bearbeiter usw.
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Wasser
Leitfhigkeit bei 25 C:
25 S cm-1 (entspr. spez. Widerstand von 0,4 Mcm)
mikrobielle Kontamination:
sollte 103 ml-1 betragen, vorzugsweise 102 ml-1 !
regelmige Verifizierung nach ISO 6222 (bei 22C)
oder einem gleichwertigen validierten Verfahren erforderlich
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Einwgen und Rehydratisieren
sorgfltiges Einwiegen des Trockenmediums (Einatmen vermeiden !),
schrittweises Mischen mit der erforderlichen Wassermenge ohne
Verklumpung
Lsen und Verteilen

Trockenmedien in der Lsung durch Rhren, evtl. unter Erwrmung,
bis zur Auflsung schnell Verteilen (Dispergieren),
Agar-enthaltende Medien sollten quellen, bis sie unter Rhren
bis zur Auflsung erwrmt werden
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Messen und Einstellen des pH-Wertes
Messen mit einem pH-Messgert
falls erforderlich, vor der Sterilisation so einstellen, dass nach der
Sterilisation und Abkhlung auf 25 C das Medium de n erforderlichen
pH-Wert von 0,2 pH-Einheiten im Inneren aufweist
Hinweis in der Norm:
eine pH-Wert-Einstellung bei handelsblichen Medien
ist nicht erforderlich, vorausgesetzt, es wurde destilliertes oder
deionisiertes Wasser von guter Qualitt verwendet
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Sterilisation durch feuchte Hitze
in der Regel in einem Autoklaven oder
in einem Herstellungs- und Abfllgert fr Medien (Medienprparator)
meist 15 min bei 121 C 3 C
bei Volumina 1000 ml ist der Sterilisationszyklus
ggfls. anzupassen (Achtung: berhitzung !)
Abkhlung der Medien nach dem Autoklavieren erforderlich,
zur Verhinderung des berkochens
bes. bei groen Volumina und empfindlichen Medien
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berprfen
nach dem Autoklavieren, Aufkochen oder der Filtration
sollten smtliche Medien berprft werden
besonders
pH-Wert,
Farbe,
Sterilitt
und physikalische Beschaffenheit
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Verflssigen von Agar-Nhrmedien
im kochenden Wasserbad oder z.B. im Autoklaven mit
Dampfdurchstrmung
in krzestmglicher Zeit, berhitzung vermeiden
Abkhlung des verflssigten Mediums in einem thermostatisch
geregelten Wasserbad auf 47 C 50 C
die erforderliche Zeit hngt vom Volumen und der Anzahl der
Gefe ab
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Verflssigen von Agar-Nhrmedien
verflssigte Medien sollten sobald wie mglich verwendet werden,
Empfehlung nach Norm: nicht lnger als 4 h warmhalten (!)
nicht verwendete Medien drfen fr eine nachfolgende Verwendung
nicht erneut verfestigt werden (!)
das Agar-Temperaturregime ist festzustellen und zu dokumentieren,
indem ein Thermometer in das Agarmedium in einem getrennten
Behlter eingebracht wird
Medien fr das Guplattenverfahren sollten bei 44 C 47 C
temperiert sein
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Herstellung und Lagerung von Medien in Petrischalen
Gieen des verflssigten Mediums:
Schichtdicke in Petrischalen mind. 3 mm
fr Schalen mit 90 mm meist 18 20 ml Medium
mehr Medium ist erforderlich bei lngerer Bebrtung oder
einer Bebrtungstemperatur von mehr als 40 C
Anmerkung in der Norm zum Feuchtigkeitsverlust des
Agarmediums whrend der Bebrtung und der Beeintrchtigung
des Wachstums von Mikroorganismen
abhngig vom Medientyp, Schichtdicke, Inkubationsatmosphre,
Geblse im Brutschrank usw.
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Lagerung der gegossenen Medien:
im Dunkeln und/oder im Khlschrank bei 5 C 3 C
in verschlossenen Beuteln
Kennzeichnung der gegossenen Medien:
mit Herstellungsdatum und/oder Verfalldatum
und Identittsbezeichnung
oder mit alternativen Codierungssystemen
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Haltbarkeitsdauer der gegossenen Medien:
Erhhung der Haltbarkeitsdauer durch Aufbewahrung
in dicht verschlossenen Kunststoffbeuteln
Verhinderung von Kondenswasser:
Platten mssen vor Einlegen in die Beutel vollstndig abkhlen,
vor einer Khllagerung drfen die Oberflchen der Agarplatten
nicht getrocknet werden !
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Konservierung und Erhaltung von Kontrollstmmen
- Allgemeines
Konservierung und Erhaltung der Mikroorganismen
mehrere Verfahren mglich, z.B.:
Lyophilisierung,
Lagerung auf Perlen bei -70 C,
Verwendung von flssigem Stickstoff.
Ein einziges Verfahren ist mglicherweise nicht fr alle
verwendeten Teststmme geeignet
Ablaufschema zur Erhaltung und Herstellung:
siehe Anhang B dieser Norm
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Anhang B.1 Herstellung einer Referenz-Stammkultur aus einem Referenzstamm
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Anhang B.2 Herstellung einer Gebrauchskultur aus einer Referenz-Stammkultur
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- Kontrollstmme von kommerziellen Herstellern
nach Herstelleranweisungen zu verwenden
- Im Laboratorium hergestellte Referenz-Stammkulturen

Haltung unter Vermeidung der Kreuzkontamination, einer Mutation oder einer
Vernderung der typischen Merkmale,
sollten in mehreren Aliquoten aufbewahrt werden
die Wachstumseigenschaften der Referenz-Stammkulturen sollten auf jedem
Medium, auf dem sie eingesetzt werden, vollstndig dokumentiert werden
Referenz-Stammkulturen drfen nicht zur Herstellung von Referenzstmmen
verwendet werden !
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- Stammkulturen
werden blicherweise aus lyophilisierten oder tiefgefrorenen
Referenz-Stammkulturen hergestellt
Vermeidung von Kreuzkontaminationen ist zu beachten
Bei handelsblichen Konservierungssystemen sind die Anweisungen des
Herstellers genau einzuhalten
Stammkulturen drfen nicht zur Herstellung von Referenzstmmen oder
Referenz-Stammkulturen verwendet werden !
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Leistungsprfung von zubereiteten Nhrmedien
- Allgemeines
Verfahren zur Leistungsprfung sind in DIN EN ISO/TS 11133-2 geregelt
- Fertigmedien und Reagenzien

verfgt der Hersteller von Fertigmedien ber ein
Qualittssicherungprogramm, insbesondere nach ISO 9000,
darf er ein Qualittszertifikat ausstellen
unter diesen Bedingungen braucht der Anwender keine
umfangreiche Prfung der Medien durchzufhren
es sollte jedoch sichergestellt sein, dass die vom Hersteller
empfohlenen Lagerbedingungen eingehalten werden
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- Fertigmedien, denen Supplemente zugesetzt werden
es wird mindestens eine qualitative Prfung empfohlen
- Aus handelsblichen Trockenmedien hergestellte Medien

bei Isolierungs- und Zhlmedien sollte mindestens eine halbquantitative
Prfung durchgefhrt werden
bei Prfmedien zur Charakterisierung kann eine qualitative Prfung
ausreichend sein
quantitative Prfungen geben eine grere Sicherheit hinsichtlich der
Qualitt der Medien
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- Aus handelsblichen Trockenmedien hergestellte Medien
Medien ohne Indikatoren oder Selektivsubstanzen:
Verwendung eines einzigen Prfstammes ist ausreichend
Medien mit Indikatoren und/oder Selektivsubstanzen:
Verwendung von Stmmen, mit denen die Funktion
des (der) Indikator(en) und der Selektivitt nachgewiesen
werden kann
Komplexe Medien:
jede Charge sollte mit gut wachsenden positiven und schlecht oder
schwach wachsenden positiven sowie negativen Stmmen geprft werden
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- Aus einzelnen Grundsubstanzen hergestellte Medien
jede Charge sollte mit gut wachsenden positiven und schlecht oder
schwach wachsenden positiven sowie negativen Stmmen geprft werden
es wird empfohlen, zustzlich quantitative Prfungen durchzufhren,
um Qualittstendenzen der Rohstoffe, die Produktivitt des Mediums
und die laboratoriumsinternen Vorschriften zu berwachen
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Anhang B.
Herstellung einer Referenz-Stammkultur und

einer Gebrauchskultur
Anhang C.
- Tabelle mit Fehlern/Abweichungen und mglichen Grnden
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Praktische Anleitung zur
Leistungsprfung von Nhrmedien
ISO 11133
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Praktische Anleitung zur Leistungsprfung
von Nhrmedien
Teil 2 der Norm:
gilt nur fr Medien, die zur Untersuchung von Lebensmitteln
und Futtermitteln sowie Umgebungsproben eingesetzt werden
- handelsbliche gebrauchsfertige Medien oder
Trockenmedien;
- die Nhrmedien, die im Laboratorium aus Grundsubstanzen
hergestellt werden.
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Anwendungsbereich
Teil 2 legt Kriterien und Verfahren fr die Leistungsprfung von
Nhrmedien fest
gilt fr:
kommerzielle Einrichtungen;
nichtkommerzielle Einrichtungen, die an Dritte liefern;
mikrobiologische Laboratorien,
die Medien fr ihre eigene Verwendung herstellen
und die Leistungsfhigkeit dieser Medien bewerten mssen.
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Kriterien fr die routinemige Qualittskontrolle
- Qualitt von Nhrmedien
Sicherstellung von qualitativ bedeutsamen Kriterien wie:
Fllmenge und/oder Schichtdicke;
Aussehen, Farbe und Homogenitt;
Gelkonsistenz;
Feuchtigkeitsgehalt;
pH-Wert;
Pufferkapazitt;
mikrobielle Kontamination.
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- Mikrobiologische Qualittskriterien
Proben:
Die mikrobiologischen Leistungsprfungen sind an einer
Probe durchzufhren, die fr eine Charge von Endprodukten
reprsentativ ist.
Mikrobielle Kontamination:
Von jeder Charge eines Nhrmediums sollte eine geeignete
Menge abhngig von der Chargengre) auf mikrobielle
Kontamination geprft werden.
Zielgrenzwerte fr den Prozentsatz kontaminierter Platten, Rhrchen
oder Flssigmedienbehlter sollten fr jedes Medium festgelegt werden.
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- Wachstum:
Bewertung des Keimwachstums:
a)
quantitativ; oder
b)
halbquantitativ; oder
c)
qualitativ.
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- Wachstum:
quantitative Verfahren:
Bestimmung des Produktivittsverhltnisses
bzw. Selektivittsfaktors im Vergleich zu einem Referenzmediums
Bestimmung einer Wiederfindungsrate durch Zhlen der
gewachsenen Kolonien im Vergleich zu einem Referenzmedium
halbquantitative und qualitative Verfahren:
Bestimmung des Wachstumsindex mit Hilfe eines Referenzmediums
oder einer positiven Kultur
durch einfachen Ausstrich (z.B. Dreisenausstrich)
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46

- Leistungsbewertung und Interpretation der Ergebnisse
eine Charge eines Nhrmediums zeigt zufriedenstellende
Ergebnisse:
wenn alle verwendeten Prforganismen eine Wachstumsleistung
nach den oben gegebenen Festlegungen erbringen
die Charge ist zu akzeptieren, wenn sowohl die allgemeinen als auch
die mikrobiologischen Qualittskriterien erfllt sind
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47

Verfahren zur Leistungsprfung
- Prfstmme:
fr die verschiedenen Nhrmedien in einer
Liste in Anhang B der Norm gegeben
Prfstmme sollen in Zukunft in allen Normen
direkt bei den Medien beschrieben werden
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Verfahren zur Leistungsprfung
- Verfahren fr feste Medien (in der Norm detailliert beschrieben)
Quantitative Ausplattierungsverfahren
Halbquantitatives Ausstrichverfahren auf Grundlage der Ekometrie
Qualitatives Ausstrichverfahren
- Verfahren fr flssige Medien (in der Norm detailliert beschrieben)
Quantitatives Verdnnungsverfahren fr erwnschte und
unerwnschte Mikroorganismen
Halbquantitatives Einrhrchenverfahren fr erwnschte und
unerwnschte Mikroorganismen sowie Mischkulturen
Qualitatives Einrhrchenverfahren
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49

Dokumentation
durch den Hersteller bereitzustellene Informationen
spezifische mikrobiologische Wachstumsmerkmale,
allgemeine Angaben ber die spezifische Charge des Nhrmediums
Rckverfolgbarkeit
Dokumentation und Aufbewahrung der Daten in bereinstimmung
mit dem Qualittssicherungssystem,
Anwendung von Kontrollblttern wird empfohlen
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Anhang A.
Beispiel einer
Kontrollkarte
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Anhang B. Tabellen mit empfohlenen Teststmmen
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52
Ausblick: DIN EN ISO 11133

berarbeitung zur einteiligen Norm
ISO 11133
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53

Ziel: zuknftig soll es eine gemeinsame einteilige Norm
fr alle Medien fr Lebensmittel / (Trink-) Wasser
und fr Anwender und Hersteller geben
voraussichtlich 2011 erster offizieller Entwurf des berarbeiteten,
dann einteiligen Standards fr Lebensmittel- und WasserNhrmedien
voaussichtlich 2012 Verffentlichung als Norm (Standard)
voraussichtlich dann auch bernahme in die DEV-Sammlung
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berblick zum Inhalt der einteiligen Norm:
der Inhalt der DIN EN ISO/TS 11133-1: 2009
Qualittssicherung bei der Zubereitung der Nhrmedien
wird ohne grere Vernderungen bernommen
der Inhalt der DIN EN ISO/TS 11133-2:2004 wurde stark
berarbeitet und es wurde versucht, die besonders die
mikrobiologischen Leistungsprfungen praxistauglicher
zu beschreiben
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55

Neu:
zuknftig mssen alle Nhrmedien, die fr quantitative Prfungen im
Lebensmittel- und Wasserbereich eingesetzt werden, quantitativ
geprft werden (!)
Medien, die mit Membranfiltern eingesetzt werden, sollten auch mit
Membranfiltern geprft werden
die Prfung kann bei Fertigmedien beim Hersteller durchgefhrt werden,
und sollte bei im Laboratorium hergestellten Medien beim Anwender
durchgefhrt werden
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56

Neu:
die Norm wird einen Anhang enthalten, der fr alle im
Wasserbereich relevanten Nhrmedien Teststmme und
Kriterien beschreibt
fr den Anwender ist je Medium die Verwendung eines
Teststammes ausreichend,
Hersteller mssen mehr Stmme prfen
die Teststmme sind mit Nummern aus ReferenzStammsammlungen angegeben, es knnen also
nicht ausschlielich Eigenisolate verwendet werden (!)
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Weiterfhrende Veranstaltung besonders zur praktischen Umsetzung:
17. Kemptener Nhrmedientag - 05. Juli 2011

Praktische Fragen zur Herstellung und Qualittssicherung von Nhrmedien
Demonstration im Nhrmedienlabor / Mikrobiologisches Praxisseminar
Inhalt des Seminars:
Qualittssicherung und Leistungskontrolle aus der Sicht der

Nhrmedienhersteller und Anwender (Erfahrungsberichte und praktische
Demonstrationen im muva-Nhrmedienlabor)
Demonstration fehlerhafter Nhrmedienchargen
Aktueller Stand der Normungsarbeiten (relevante DIN/CEN/ISO-Normen)
Qualittssicherung im mikrobiologischen Labor (Grundlagen)
Firmenausstellung namhafter Nhrmedienhersteller
mehr Informationen unter www.muva.de

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58
Barbara Gerten
Head of Media Development
Merck Millipore
Frankfurter Strasse 250
64293 Darmstadt
Tel.: 06151 / 72 - 5344
barbara.gerten@merckgroup.com
B. Gerten | 02. 03.2011
59
Vielen Dank fr Ihre Aufmerksamkeit !
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60

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Stand der Normungsarbeiten DIN EN ISO 11133

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Ausblick: DIN EN ISO 11133 berarbeitung zur einteiligen Norm

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erstmals 2000 als Vornorm erschienen;

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Verfahren zur mikrobiologischen Leistungsprfung sind in DIN

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ISO 11133 Vortrag anllich 12. Ringversuchstagung Osnabrck

B. Gerten | 02. 03.2011

DIN EN ISO/TS 11133 Teil 1: 2009

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