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Editorial Tbar.

Prohibida la reproduccin sin la autorizacin expresa de la editorial

FUNDAMENTOS
DE BIOQUMICA
METABLICA

ERRNVPHGLFRVRUJ

Editorial Tbar. Prohibida la reproduccin sin la autorizacin expresa de la editorial

FUNDAMENTOS
DE BIOQUMICA
METABLICA
COORDINACIN Y DIRECCIN CIENTFICA
Amando Garrido Pertierra
Catedrtico de Bioqumica y Biologa Molecular.
Doctor en Ciencias Qumicas y Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Acadmico de la Real
Academia de Doctores y de la Real Academia de
Farmacia.

Jos M Teijn Rivera


Catedrtico de Bioqumica y Biologa Molecular.
Catedrtico de Fsica y Qumica de I.B. Doctor en
Ciencias Qumicas. Universidad Complutense de
Madrid.

AUTORES
Amando Garrido Pertierra
Catedrtico de Bioqumica y Biologa Molecular.
Doctor en Ciencias Qumicas y Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Acadmico de la Real
Academia de Doctores y de la Real Academia de
Farmacia.
Carmen Villaverde Gutirrez
Catedrtica de Fisiologa. Doctora en Medicina y
Ciruga. Escuela Universitaria de Ciencias de la Salud. Universidad de Granada.
M Dolores Blanco Gaitn
Profesora Titular de Universidad de Bioqumica y
Biologa Molecular. Doctora en Ciencias Biolgicas.
Universidad Complutense de Madrid.

Jos M Teijn Rivera


Catedrtico de Bioqumica y Biologa Molecular.
Catedrtico de Fsica y Qumica de I.B. Doctor en
Ciencias Qumicas. Universidad Complutense de
Madrid.
Carlos Mendoza Otras
Catedrtico de Ciencias Fisiolgicas. Doctor en
Ciencias Biolgicas. Escuela Universitaria de Ciencias de la Salud. Universidad de Granada.
Jess Ramrez Rodrigo
Profesor de Bioqumica y Fisiologa. Doctor en
Ciencias Biolgicas. Escuela Universitaria de Enfermera de Ceuta. Universidad de Granada.

COLABORADORES
Ramn Bordes Gonzlez
Catedrtico de Bioqumica. Doctor en Ciencias Qumicas. E.U. de Ciencias de la Salud. Universidad de
Granada.
Francisco Javier Caldern Montero
Profesor Titular de Fisiologa. Doctor en Medicina y
Ciruga. INEF. Madrid.
Fernando de Jess Franco
Profesor Titular de Farmacologa. Doctor en Farmacia. Universidad Alfonso X el Sabio. Madrid.
Rosa Olmo Lpez
Profesora de Bioqumica y Biologa Molecular. Escuela Universitaria de Enfermera y Fisioterapia.
San Juan de Dios integrada en la Universidad
Pontificia de Comillas. Doctora en Ciencias Qumicas (Bioqumica).

Csar Teijn Lpez


Profesor de Bioqumica y Biologa Molecular. Doctor en Medicina y Ciruga. Colaborador Honorfico
Dpto. de Bioqumica. Universidad Alfonso X El Sabio. Madrid.
Ricardo Ruiz Villaverde
Doctor en Medicina y Ciruga. Facultativo Especialista del Complejo Hospitalario de Jan.
Jess Javier Rojo Gonzlez
Profesor Titular de Anatoma. Doctor en Medicina y
Ciruga. INEF. Madrid.

Beln Castel Segui


Mdico Adjunto del Hospital Universitario San Dureta. Palma de Mallorca.

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Datos de catalogacin bibliogrfica:


FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA
3 edicin
Amando Garrido Pertierra
Jos Mara Teijn Rivera
EDITORIAL TBAR, S.L., Madrid, ao 2006
ISBN digital: 978-84-7360-459-8
Materias: 577, Bioqumica
Formato: 165 240 mm

Pginas: 422

www.editorialtebar.com

Todos los derechos reservados.


Queda prohibida, salvo excepcin prevista en la Ley, cualquier forma de reproduccin, distribucin, comunicacin pblica y transformacin de esta obra sin contar
con la autorizacin expresa de Editorial Tbar. La infraccin de estos derechos puede ser constitutiva de delito contra la propiedad intelectual (arts. 270 y siguientes
del Cdigo Penal).
Fundamentos de Bioqumica Metablica
3 edicin 2009
2006 Editorial Tbar, S.L.
C/ de las Aguas, 4
28005 Madrid (Espaa)
Tel.: 91 550 02 60
Fax: 91 550 02 61
pedidos@editorialtebar.com
www.editorialtebar.com
ISBN digital: 978-84-7360-459-8
Depsito legal:
Diseo editorial: Rebeca Irazbal
Diseo de portada: Omega Estudio Grfico

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Prlogo
La Ciencia avanza, por una parte con nuevos conceptos y
teoras y, por otra, con la invencin de nuevos mtodos e instrumentos. El afn y la curiosidad natural de los hombres por
conocer la naturaleza de los seres vivos les llev, desde los albores de su existencia, a la observacin directa de los organismos enteros y sus partes ms visibles y, en la mayora de las
ocasiones, se ayudaban de materiales que utilizaban en sus tareas domsticas como cuchillos y tijeras. Siglos despus, la invencin y el desarrollo del microscopio permiti estudiar los tejidos y establecer el hecho general de que todos los seres estn
formados por un gran nmero de unidades vivas denominadas
clulas y surgi la teora celular. Estas observaciones aunque
importantes no proporcionaron respuestas a cuestiones fundamentales como qu sustancias componen los seres vivos? y
cmo obtienen los organismos la energa y la utilizan para
manifestar las propiedades de la vida? Las respuestas a estas
preguntas se encuentran en la Bioqumica.
La Bioqumica es una ciencia que estudia los seres vivos a
nivel molecular. Uno de sus objetivos es el aislamiento de compuestos de los seres vivos y la determinacin de sus estructuras;
esto es, un tipo de microanatoma que dilucida la estructura a
la diminuta escala molecular. Por ello su desarrollo ha estado
muy condicionado a la invencin y desarrollo de nuevas tcnicas e instrumentos. stos han permitido a esta ciencia identificar las molculas que constituyen los organismos, las reacciones que transforman unas sustancias en otras y los procesos
que les permiten desarrollar las actividades vitales. De esta forma, la descripcin y el estudio de la inmensa mayora de los
procesos vitales pueden expresarse mediante conceptos, mtodos y procedimientos bioqumicos. Se ha comprobado que a
nivel molecular no hay grandes diferencias entre los organismos y ello ha dado lugar a la teora de la unidad bioqumica de
la vida. En los ltimos aos la utilizacin de refinadas tcnicas
moleculares ha permitido caracterizar la naturaleza del material
hereditario. Los estudios sobre los genomas de los organismos
han refrendado la utilizacin de molculas para describir los

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procesos de la vida, su evolucin y su variedad. El conocimientos de los genes, su descripcin y, sobre todo, su comprensin
est posibilitando entender los aspectos morfolgicos, la evolucin de las especies, el comportamiento de sus productos y la
funcin y disfuncin de ellos. Adems est permitiendo controlar el desarrollo y la diferenciacin de los rganos, el metabolismo y proliferacin de las clulas y, lo que es muy importante,
descifrar la causa y el origen de muchas enfermedades.
Con la idea de facilitar la comprensin de dichos procesos y
mecanismos vitales a los estudiantes de las licenciaturas y diplomaturas de Ciencias de la Salud y, basado en la experiencia
como profesores de la materia, han surgido estos libros de Bioqumica. El primero se dedica a los aspectos estructurales y en
l se describen las sustancias, sus propiedades y las funciones
que realizan en el organismo; en el segundo se tratan los aspectos metablicos, y en l se estudian las transformaciones de las
sustancias las cuales sirven para el funcionamiento normal del
organismo. Al inicio de cada tema se incluye una pequea introduccin que fija el (o los) objetivo(s) a cumplir y, al final, un
resumen que repasa los conceptos ms importantes y un apartado dedicado a aplicaciones clnicas en el que se describen algunos casos prcticos relativos al contenido del mismo.
Los autores desean expresar su agradecimiento a todos los
que han participado en la elaboracin de la obra. Las crticas,
sugerencias y comentarios acerca de los contenidos de la misma sern bien recibidos y tenidos en cuenta en ediciones posteriores.
Queremos agradecer la magnfica labor editorial desarrollada por Beatriz Heras de Editorial Tbar, y la excelente maquetacin de Rebeca Irazbal.

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ndice
Tema 1:

Metabolismo ......................................................................
Introduccin al metabolismo .................................................
Reacciones catablicas y anablicas: etapas .........................
El flujo de energa en las clulas ...........................................
La localizacin de las rutas metablicas en la clula .............
Regulacin del metabolismo .................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

13
13
14
16
17
18
19
19

Tema 2:

La ruta glucoltica .............................................................


La ruta glucoltica .................................................................
Las rutas de los tomos de carbono, la de la energa y la
de los electrones .............................................................
Rutas afluentes de la glucoltica .............................................
La regulacin de la gluclisis .................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

21
21
27
28
30
31
31

Tema 3:

El ciclo de Krebs ...............................................................


La reaccin del complejo piruvato deshidrogenasa ...............
El ciclo de Krebs: reacciones y regulacin .............................
Reacciones anaplerticas ......................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

33
33
37
40
42
43

Tema 4:

La ruta de las pentosas fosfato ......................................


La ruta de las pentosas fosfato ..............................................
Etapa I ..................................................................................
Etapa II .................................................................................
Rendimiento energtico ........................................................
Regulacin de la ruta ............................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

45
45
45
46
49
51
51
52

Tema 5:

Gluconeognesis Glucognesis-glucogenlisis ............


Gluconeognesis ...................................................................
Regulacin de la ruta gluconeognica ...................................
Glucognesis y glucogenlisis ................................................
Los ciclos de substrato ..........................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

53
53
57
59
65
67
67

Tema 6:

Metabolismo Lipdico .......................................................


Digestin, movilizacin y transporte de los lpidos ................
E-oxidacin de los cidos grasos ...........................................
Rendimiento energtico de la oxidacin de los cidos
grasos .............................................................................
Control de la oxidacin de los cidos grasos .........................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

71
71
75
81
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Tema 7:

Tema 8:

Formacin de cuerpos cetnicos. Cetosis o


cetognesis ..................................................................
Formacin de cuerpos cetnicos. Cetosis o cetognesis ........
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

91
91
96
97

Biosntesis de cidos grasos ...........................................


Biosntesis de cidos grasos ..................................................
Biosntesis de cidos grasos saturados a partir de
Acetil-CoA ......................................................................
El complejo cido graso sintasa ............................................
Control de la sntesis de cidos grasos ..................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

100
110
111
113
113

Metabolismo de acilgliceroles y esfingolpidos ...........


Metabolismo de triacilgliceroles .............................................
Hidrlisis y movilizacin de triacilgliceroles ...........................
Metabolismo de glicerofosfolpidos ........................................
Metabolismo de esfingolpidos ..............................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

115
115
117
118
123
126
127

Tema 10: Metabolismo del colesterol .............................................


Biosntesis del colesterol ........................................................
Transporte y excrecin de colesterol ......................................
Regulacin de la biosntesis de colesterol ..............................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

129
129
132
133
134
135

Tema 11: Metabolismo de los derivados del colesterol ...............


Sntesis de hormonas esteroideas ..........................................
Sntesis de cidos biliares ......................................................
Circulacin enteroheptica de las sales biliares .....................
Sntesis de vitamina D ...........................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

137
137
139
141
141
142
143

Tema 12: Lipoprotenas .....................................................................


Lipoprotenas ........................................................................
Receptores de lipoprotenas ..................................................
Metabolismo de las lipoprotenas ..........................................
Regulacin de los depsitos de colesterol en el organismo ....
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

145
145
147
148
153
155
156

Tema 13: Aspectos bioqumicos de la nutricin ...........................


Requerimientos proteicos de la dieta .....................................
Digestin de las protenas. Activacin de enzimas
proteolticas ....................................................................
Absorcin de pptidos y aminocidos ...................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

157
158
160
164
165
166

Tema 14: Degradacin de los aminocidos ...................................


Transaminacin y degradacin oxidativa ..............................
Destino de los esqueletos carbonados de los aminocidos ....
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

169
169
173
190
191

Tema 15: Excrecin del nitrgeno proteico ...................................


Excrecin del nitrgeno proteico ...........................................
Ciclo de la urea .....................................................................
Conexin entre el ciclo de la urea y el ciclo de Krebs ............

193
193
196
198

Tema 9:

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99
99

Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

198
199

Tema 16: Biosntesis de aminocidos .............................................


Biosntesis de amiocidos no esenciales ................................
Biosntesis de amiocidos esenciales .....................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

203
203
208
215
216

Tema 17: Biosntesis de porfirinas ..................................................


Biosntesis de porfirinas y del grupo hemo ............................
Regulacin ............................................................................
Formacin de pigmentos biliares ...........................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

217
217
220
221
223
223

Tema 18: Metabolismo de los nucletidos: biosntesis y


degradacin ........................................................................
Digestin de purinas y pirimidinas: vas de recuperacin o
salvamento .....................................................................
Biosntesis de novo de los nucletidos de purina ..................
Biosntesis de novo de nucletidos de pirimidina ..................
Sntesis de desoxirribonucletidos .........................................
Biosntesis de los desoxirribonucletidos de timina ...............
Degradacin de purinas: sntesis de cido rico ....................
Degradacin de pirimidinas ..................................................
Frmacos anticancerosos que bloquean las vas de
biosntesis de nucletidos ...............................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

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234
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242
243
246
246
249
251

Tema 19: Integracin del metabolismo en mamiferos .................


Absorcin, transporte y regulacin ........................................
Bases bioqumicas de la nutricin .........................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

255
255
261
266
267

Tema 20: Caractersticas metablicas de los principales


rganos ...............................................................................
Hgado ..................................................................................
Cerebro .................................................................................
Corazn ................................................................................
Rin ....................................................................................
Msculo esqueltico ..............................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

269
269
272
273
273
273
276
276

Tema 21: La regulacin hormonal del metabolismo ....................


La accin de las hormonas ...................................................
Hormonas activas en la superficie celular .............................
Receptores ............................................................................
Segundos mensajeros ............................................................
Hormonas activas en el interior de la clula ..........................
Efectos biolgicos ..................................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

279
279
280
280
282
282
283
285
286

Tema 22: Estructura de cromosomas y genes ...............................


Cromosomas .........................................................................
Genes ...................................................................................
ADN: estructura y propiedades .............................................
Mutaciones ............................................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

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289
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293
296
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Tema 23: Replicacin y transcripcin del ADN ............................


Replicacin del ADN .............................................................
ADN polimerasas ..................................................................
Transcripcin .........................................................................
Polinucletido fosforilasa .......................................................
Transcriptasa inversa y replicasas ..........................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

301
301
308
311
316
316
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Tema 24: Sntesis de protenas ........................................................


Ribosomas ............................................................................
Activacin de aminocidos ...................................................
Iniciacin y ciclo de elongacin .............................................
Inhibidores de la sntesis de protenas ...................................
El cdigo gentico .................................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

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329
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333
334

Tema 25: Tecnologa de ADN recombinante .................................


Fundamentos de la clonacin ...............................................
Vectores de clonacin ...........................................................
Estrategia de la clonacin .....................................................
Aplicaciones a las ciencias mdicas .......................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

337
337
341
346
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352

Tema 26: Regulacin de la expresin gnica .................................


El modelo del opern ...........................................................
Genomas eucariticos ...........................................................
Protenas reguladoras de la transcripcin ..............................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

353
353
357
361
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Tema 27: Introduccin a la inmunologa molecular .....................


Sistema Inmunitario ..............................................................
Inmunoglobulinas: estructura y funcin .................................
Clases de inmunoglobulinas ..................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

367
367
376
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380
382

Tema 28: Estructura molecular del msculo .................................


Estructura de la fibra muscular esqueltica ............................
Estructura molecular del msculo esqueltico .......................
Mecanismo de la contraccin muscular .................................
Control de la contraccin muscular por calcio .......................
El msculo cardaco ..............................................................
El msculo liso ......................................................................
Fuentes de energa en el msculo .........................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

383
383
384
386
389
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393
395
396
397

Tema 29: Estructura y funcin del nervio ......................................


Estructura y funcin del nervio .............................................
Sinapsis y neurotransmisores ................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

399
399
405
410
411

Tema 30: Bioqumica de la visin ...................................................


Fotorreceptores .....................................................................
Resumen ...............................................................................
Aplicaciones clnicas ..............................................................

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413
419
419

Bibliografa ...........................................................................................

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TEMA 1

Metabolismo

Introduccin al metabolismo. Reacciones catablicas y anablicas: etapas. El flujo de energa en las


clulas. La localizacin de las rutas metablicas
en la clula. Regulacin del metabolismo.

En la bioqumica estructural hemos examinado las propiedades y estructura de las molculas que constituyen las clulas.
En esta parte, Bioqumica metablica, vamos a estudiar cmo
interaccionan esas molculas para originar y mantener la propiedad que denominamos vida. Para ello, las clulas realizan
un conjunto de reacciones catalizadas por enzimas que se denomina metabolismo. Estas reacciones se llevan a cabo de forma constante desde la absorcin de nutrientes, su degradacin
para obtener energa, la utilizacin de sta, la sntesis de nuevos componentes y la liberacin de productos de deshecho. Todos estos procesos los realiza la clula manteniendo un equilibrio dinmico, autorregulndose y cumpliendo con el principio
de mxima economa.

INTRODUCCIN AL METABOLISMO
El metabolismo se puede definir como el conjunto de reacciones catalizadas enzimticamente que tienen lugar en la clula viva. En l se pueden distinguir cuatro funciones especficas:

El metabolismo es el
conjunto de reacciones que tiene lugar
en las clulas vivas.

1. Obtener la energa qumica de los nutrientes.


2. Transformar las molculas de los nutrientes en unidades
constitutivas o sillares, precursores de los componentes
macromoleculares de las clulas.
3. Unir o ensamblar los sillares en protenas, cidos nucleicos y lpidos, polisacridos y otros componentes celulares.
4. Sintetizar y degradar las biomolculas con funciones especializadas.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Estas funciones no se realizan de forma aislada o independiente sino de forma coordinada y organizada. Cada
orgnulo o subunidad celular posee funciones especficas
para establecer y mantener la vida de la clula. As, algunas
estn comprometidas en generar energa para la absorcin
de sustancias nutritivas, otras en la movilidad celular o en la
sntesis de biomolculas. En los organismos superiores, como
el hombre, existen determinadas clulas o tejidos especializados en funciones como los glbulos rojos para el transporte
de oxgeno, las clulas musculares para la locomocin, las
clulas glandulares endocrinas para la secrecin de hormonas y las clulas nerviosas (neuronas) para la coordinacin
intercelular.
Las secreciones metablicas estn controladas con precisin
por sistemas intrnsecos y extrnsecos, estrechamente interrelacionados. El estado dinmico del metabolismo y sus mecanismos reguladores son las caractersticas ms excepcionales de la
vida, por ello su comprensin es primordial en el entendimiento e interpretacin de los procesos vitales.

REACCIONES CATABLICAS Y
ANABLICAS: ETAPAS

El metabolismo comprende el anabolismo


o conjunto de reacciones de sntesis y el
catabolismo o conjunto de reacciones
de degradacin.

El metabolismo tiene lugar a travs de secuencias de reacciones consecutivas en las que se transforman los intermediarios qumicos o metabolitos.
El metabolismo se divide en catabolismo y anabolismo. El
catabolismo es la fase degradativa del metabolismo en la que
los nutrientes (carbohidratos, lpidos, protenas) provenientes
del medio externo o de los depsitos de la misma clula pueden degradarse generalmente por reacciones oxidativas en productos ms sencillos como cido lctico, cido actico, amonaco, urea o CO2. El catabolismo va acompaado de liberacin
de la energa inherente en la estructura compleja de las grandes
molculas orgnicas. La energa es transformada en forma de
adenosina trifosfato (ATP).
El anabolismo es la fase constructiva o de sntesis del metabolismo. Tambin se denomina biosntesis. En el anabolismo
las pequeas molculas precursoras de las clulas se ensamblan para originar componentes celulares como polisacridos,
cidos nucleicos, protenas y lpidos. Puesto que del proceso de
biosntesis resultan molculas de mayor tamao y complejidad
estructural, requiere energa libre, la cual es proporcionada por
la hidrlisis del ATP. El catabolismo y el anabolismo tienen lugar simultneamente en la clula.

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METABOLISMO

El metabolismo se puede organizar en etapas: tres para el


catabolismo y tres para el anabolismo (Fig. 1.1). En la etapa I
del catabolismo los nutrientes de la clula (lpidos, carbohidratos y protenas) son degradados a sus unidades constituyentes:
grasas, monosacridos y aminocidos. En la etapa II estos productos se convierten en molculas ms sencillas que convergen
en su intermediario comn: acetil-CoA. En la etapa II el grupo
acetilo del acetil-CoA entra en el ciclo de Krebs para ser oxidado a CO2 y H2O, los productos finales del proceso catablico.

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La etapa III del catabolismo es la misma


que la etapa I del
anabolismo y se denomina anfiblica.

Figura 1.1. Las etapas del catabolismo y del anabolismo. La etapa III del
catabolismo y I del anabolismo coinciden, por ello se denomina anfiblica.

El anabolismo tambin transcurre en tres etapas. Comienza con las pequeas molculas de la etapa III del catabolismo, como son los intermediarios del ciclo de Krebs, los
cuales son aminados o transformados en aminocidos, ci-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

dos grasos o monosacridos. En la etapa III del anabolismo


estas molculas se ensamblan para formar protenas, lpidos
y polisacridos.
Hay que destacar dos hechos:
1. Cada etapa en el catabolismo o en el anabolismo implica una serie de reacciones catalizadas enzimticamente.
2. La etapa III del catabolismo coincide con la etapa I del
anabolismo, por eso debido a su funcin doble se denomina anfiblica.

EL FLUJO DE ENERGA EN LAS CLULAS

El ATP es la forma
universal de transporte de la energa que
transfiere al hidrolizarse en ADP y Pi.

El NAD+ es la coenzima de la mayora de


las reacciones de oxidacin. El NADPH, la
coenzima de la mayora de las reacciones de reduccin.

Cuando una molcula como la glucosa es degradada a CO2


y H2O, proporciona por cada mol 686 kcal; sta es la misma
cantidad de calor que se libera cuando se quema en un calormetro; y es que las oxidaciones biolgicas son en esencia combustiones. El calor no puede ser utilizado como fuente de
energa por los organismos vivos, los cuales son esencialmente
isotermos, por eso se dice que es energa degradada o degenerada. Como se sabe, el calor slo puede producir trabajo desde
un recipiente a otro con menor temperatura. Por ello, la energa
contenida en los nutrientes celulares se conserva en forma de
energa qumica que puede realizar trabajo en condiciones isotermas. La energa qumica de los combustibles metablicos se
transforma en adenosina trifosfato (ATP), el cual se forma a
partir de ADP y fosfato inorgnico mediante reacciones enzimticas acoplados a reacciones oxidativas especficas durante
el catabolismo.
El ATP puede difundir a aquellos lugares de la clula en
que se requiere. El ATP es en realidad una forma de transporte de energa qumica que se libera al hidrolizarse el fosfato
terminal y es transferido a aceptores especficos los cuales se
energizan y pueden reaccionar con facilidad y/o unirse a
otras molculas para originar grandes molculas durante el
anabolismo.
Hay otra forma de transferir energa qumica desde las reacciones del catabolismo a aquellas que requieren energa de sntesis y es mediante la forma de tomos de hidrgeno o electrones. Estas molculas portadoras son coenzimas como el
NADH, NADPH o FMNH2 y actan reduciendo a otras molculas o, en ocasiones, transformando su capacidad reductora
en molculas de ATP.

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METABOLISMO

17

LA LOCALIZACIN DE LAS RUTAS


METABLICAS EN LA CLULA
En las clulas de los organismos superiores las rutas metablicas se realizan en orgnulos o compartimentos, lo que facilita el desarrollo de las mismas y su regulacin. Esta conclusin se ha obtenido de trabajos de investigacin en los que se
han separado los orgnulos o subfracciones y, a partir de ellos,
aislado y purificado las enzimas correspondientes. Se ha comprobado, por ejemplo, que las enzimas que catalizan la conversin de glucosa en cido lctico se encuentran en el citosol,
que es la porcin soluble del citoplasma, mientras las del ciclo
de Krebs se localizan en las mitocondrias. De la misma forma
se ha comprobado que las enzimas del transporte electrnico
se encuentran en la membrana interna de las mitocondrias y
las que intervienen en la sntesis de las protenas, en los ribosomas. Una visin ms amplia de la localizacin de las enzimas
en una clula heptica se puede observar en la figura 1.2.

Las enzimas de gluclisis se encuentran


en el citosol y las del
ciclo de Krebs, en las
mitocondrias.

Figura. 1.2. Localizacin de las enzimas de algunas rutas metablicas


en una clula de hgado.

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18

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

REGULACIN DEL METABOLISMO

Existen tres mecanismos por los que se


regula el metabolismo en clulas de organismos superiores.

Como se ha indicado anteriormente, la clula realiza todos


los procesos con la mxima eficacia y utilizando el menor consumo de energa posible. Por ello, el metabolismo celular se encuentra regulado de forma precisa y constante. En realidad y
de forma general se puede establecer que el ritmo del metabolismo se controla por las necesidades energticas de la clula,
esto es, las clulas oxidan las molculas combustibles a la misma velocidad que requieren energa.
La regulacin de las rutas metablicas se puede efectuar
mediante tres clases diferentes de mecanismos. La primera y
ms inmediata respuesta es a travs de las enzimas reguladoras. Estas enzimas ejercen su accin prxima a la cabecera
de las rutas metablicas catalizando la reaccin limitante de
la secuencia. En las rutas catablicas que conducen a la formacin de ATP o NADH estos compuestos son los inhibidores alostricos, mientras en las rutas anablicas es el producto final de la ruta el que acta de inhibidor. Como se ha descrito en el tema 16 de la Parte 1, las enzimas alostricas
suelen ser activadas o estimuladas por moduladores positivos
especficos como ADP y NAD.
El segundo nivel de regulacin metablica se ejerce a travs
del control de la concentracin de una enzima. La concentracin de una enzima en cualquier momento es el resultado de
un equilibrio entre la velocidad de sntesis y su degradacin. La
velocidad de la sntesis de las enzimas vara dependiendo de
las condiciones. Las enzimas que se encuentran presentes en
cantidades constantes en la clula se denominan constitutivas.
Las que son sintetizadas en respuesta a la presencia de algunos
substratos se denominan inducibles. Los genes que especifican
la sntesis de las inducidas estn generalmente reprimidas y
actan nicamente solo en respuesta a la presencia de substratos especficos.
El control metablico se ejerce tambin a un tercer nivel
en los organismos superiores. Las hormonas, sintetizadas y
secretadas por varias glndulas endocrinas, son mensajeros
qumicos que estimulan o inhiben actividades metablicas en
otros rganos y tejidos. Por ejemplo, la deficiencia de la secrecin de insulina por el pncreas origina un defecto en el
transporte de glucosa en las clulas del msculo y del hgado,
lo cual conduce a una serie de efectos metablicos secundarios como un descenso en la biosntesis de cidos grasos a
partir de glucosa y una excesiva formacin de cuerpos cetnicos por el hgado. La administracin de insulina repara estos
defectos.

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METABOLISMO

RESUMEN
El metabolismo es el conjunto de reacciones catalizadas enzimticamente que tienen lugar en las clulas vivas.
Cumple con cuatro funciones especficas que se realizan
de forma coordinada: obtener energa qumica de los nutrientes, transformar estos en molculas sencillas, unir y
transformar estos para obtener los componentes celulares
y sintetizar y degradar las biomolculas especializadas. El
metabolismo se puede dividir en catabolismo o procesos
degradativos y anabolismo o procesos biosintticos. Tanto
el catabolismo como el anabolismo se pueden ordenar en
tres etapas que implica cada una, una serie de reacciones
enzimticas. La energa qumica que se obtiene de los nutrientes se transforma en ATP que es el compuesto portador de energa para los procesos que lo requieren: trabajo
mecnico, biosinttico y de transporte. En las clulas animales los procesos bioqumicos se localizan en diferentes
orgnulos o compartimentos, lo que facilita la regulacin
que se realiza a tres niveles; mediante las enzimas alostricas, la sntesis de enzimas y las hormonas.

APLICACIONES CLNICAS
Las clulas animales no pueden llevar a cabo un metabolismo completo como les sucede, por ejemplo, a las clulas bacterianas, debido a que a lo largo de la evolucin han perdido la
capacidad de sintetizar todos los compuestos que requieren
para la vida. Por ello dependen de otros organismos para el suministro de dichos compuestos. Pero, adems, en ocasiones las
clulas humanas sintetizan enzimas defectuosas o defectivas, o
bien producen cantidades insuficientes de una enzima que se
traduce en un suministro insuficiente de un compuesto metablico esencial. Por ello, una enfermedad metablica puede
derivar de la incorrecta expresin de una enzima.
La determinacin de la actividad de una enzima en los lquidos biolgicos o tejidos constituye un indicador valioso de
una determinada enfermedad metablica.

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19

20

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Tabla 1.1. Algunos ensayos enzimticos que se utilizan en


el diagnstico de enfermedades.
Actividad enzimtica
disminuida

Diagnstico probable

Amilasa

Enfermedad pancretica

Alanina aminotransferasa

Enfermedad cardaca

Aspartato aminotransferasa

Enfermedad cardaca

Glutamato aminotransferasa

Enfermedad cardaca

Fosfatasa cida

Carcinoma prosttico

Fosfatasa alcalina

Enfermedad sea

Creatina

Enfermedad cardaca o muscular

Glucosa 6-fosfato deshidrogenasa

Anemia hemoltica

Lactato deshidrogenasa

Enfermedad cardaca

Hexosa 1-P uridil transferasa

Galactosemia

Glutatin reductasa

Anemia

Elastasa

Enfermedad del colgeno

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TEMA 2

La ruta glucoltica

La ruta glucoltica. Las rutas de los tomos de carbono, la de la energa y la de los electrones. Rutas
afluentes de la glucoltica. La regulacin de la
gluclisis.

La gluclisis (hidrlisis de azcar) es el proceso por el que


los organismos escinden la glucosa en cido lctico en ausencia
de oxgeno molecular con el propsito de obtener energa.
Otros hidratos de carbono utilizan esta ruta para degradarse,
por eso se denomina tambin la ruta central del metabolismo
de carbohidratos, la ruta de Embden-Meyerhof o la fermentacin glucoltica. Hay otros tipos de fermentacin en que el producto final no es el cido lctico, como las fermentaciones alcohlicas o actica.
Los hidratos de carbono constituyen la principal fuente
de energa en la dieta humana (aprox. el 47%) y la mayor
parte corresponde a polisacridos como glucgeno y almidn, el resto a la glucosa y disacridos como lactosa, glucosa y maltosa.

LA RUTA GLUCOLTICA
Los carbohidratos de la dieta son digeridos y absorbidos
en el intestino delgado pasando por va portal a la sangre. En
un perodo de 30-60 minutos despus de la comida se alcanza en sangre, generalmente, un nivel mximo de 130 mg/dl
(7,2 mol/L) que disminuye a las dos o dos horas y media a
70-90 mg/dl. Por la sangre la glucosa llega al hgado donde se
metaboliza ms del 60%. En condiciones normales el hgado
contiene poca glucosa libre ya que bien la convierte en glucgeno o la fosforila a glucosa 6-fosfato, que como es impermeable a la membrana plasmtica la mantiene retenida en la clula
y en el tejido muscular.

La gluclisis anaerbica (fermentacin) y


la gluclisis aerobia
o r i g i n a n p i r u v a t o.
Despus el destino
de este compuesto es
diferente.

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22

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

En el hgado y en el tejido muscular la glucosa se degrada


mediante una serie de intermediarios fosforilados que se denomina ruta glucoltica o ruta de Embden-Meyerhof. En la ruta
glucoltica se pueden considerar dos etapas. La primera sirve
de preparacin y en ella varias hexoras pueden entrar mediante fosforilacin a expensas de ATP. Estos compuestos se convierten en fructosa 1,6-bisfosfato que se excinde para dar dehidoxiacetona fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato.
Fosforilacin de la glucosa. Es la primera reaccin de la
primera etapa y en ella la glucosa se fosforiza a glucosa 6-fosfato a expensas de ATP. Esta reaccin que es irreversible en condiciones intracelulares es catalizada por la hexoquinasa:
hexoquinasa

*D-glucosa  ATP o


D-glucosa-6-fosfato  ADP
m
Mg
'G 0c 4,0 kcal/mol
2

La glucoquinasa acta cuando el nivel


de glucosa es alto en
la sangre.

La hexoquinasa cataliza tambin la fosforilacin de otras


hexosas como fructosa y manosa. La enzima requiere iones
Mg2 que se combinan con ATP para formar el verdadero substrato Mg ATP2, es inhibida por su propio producto y algunos
reactivos sulfhidrilos.
El hgado funciona como un regulador de la glucosa sangunea: cuando los niveles de glucosa son elevados, sta se metaboliza a travs de la ruta glucoltica o almacenada como glucgeno; cuando los niveles son bajos, se moviliza a partir de
* A partir de ahora y mientras no se especifique lo contrario todos los monosacridos y sus derivados son D.

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LA RUTA GLUCOLTICA

23

glucgeno. En el hgado hay una segunda enzima que fosforila


la glucosa en el hgado, la glucoquinasa, que es especfica de la
glucosa; esta enzima tiene menor afinidad por la glucosa que la
hexoguinasa y acta nicamente cuando el nivel de glucosa
sangunea es anormalmente alto, como ocurre en la enfermedad diabetes mellitus.
Isomerizacin de la glucosa 6-fosfato. La conversin
de glucosa 6-fosfato a fructosa 6-fosfato es catalizada por la
fosfogluco isomerasa:
fosfogluco isomerasa
glucosa 6-fosfato o
m fructosa 6-fosfato
Mg2

'G 0c

0,4 kcal/mol

La reaccin transcurre rpidamente en ambas direcciones


debido a su pequea variacin de energa libre. La enzima requiere para su actividad Mg2 o Mn2.
Fosforilacin de fructosa 6-P. Es la segunda reaccin de
fosforilacin por otra molcula de ATP y catalizada por la fosfofructoquinasa (Fig. 2.1).
fosfofructo
quinasa

fructosa 6-fosfato  ATP o


m fructosa 1,6-bisfosfato  ADP
'G 0c 3,40 kcal/mol

Figura 2.1. La primera etapa de la gluclisis. En ella se utiliza ATP


para fosforilar los azcares.

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24

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La fosforilacin de la fructosa 6-P es una reaccin esencialmente irreversible como corresponde al valor de 'G 0c y es
un punto clave en la ruta glucoltica. La fosfofructoquinasa es
una enzima reguladora alostrica, con un peso molecular alto
(360.000); es activada por moduladores positivos como ADP,
AMP y fructosa 2,6-bisfosfato, e inhibida por moduladores
negativos como ATP y citrato. La fructosa 1,6-bisfosfato aumenta la afinidad de la enzima por la fructosa 6-fosfato y disminuye la inhibicin por ATP; adems, su activacin es sinrgica con el AMP.
Escisin de fructosa 1,6-bisfosfato. Esta reaccin es
catalizada por la aldolasa:
aldolasa

La aldolasa rompe la
fructosa 1,6-bifosfato
en condiciones intracelulares a pesar de
su DG0' positivo en
condiciones estndar.

fructosa 1,6-bisfosfato o


dihidroxiacetona fostato 
m
Mg
 gliceraldehdo 3-fosfato
'G 0c 5,73 kcal/mol
2

Aunque esta reaccin tiene un 'G 0c muy positivo en condiciones fisiolgicas, la reaccin transcurre hacia la formacin de
las triosas fosfato porque el gliceraldehdo 3-fosfato desaparece
rpidamente al seguir metabolizndose en la ruta glucoltica.
Interconversin de las triosas fosfato. Puesto que
nicamente el gliceraldehdo 3-fosfato es metabolizado en la
gluclisis toda la dihidroxiacetona fosfato se transforma en
gliceraldehdo 3-fosfato mediante la enzima triosa fosfato isomerasa:
triosa fosfato
isomerasa

dihidroxiacetona fosfato o


m gliceraldehdo 3-fosfato
'G 0c 1,83 kcal/mol
La segunda etapa de la gluclisis. La segunda etapa
de la gluclisis incluye las reacciones de oxido-reduccin y
aquellas de fosforilacin en las que se genera ATP. Puesto que,
como hemos visto, una molcula de glucosa se escinde en dos
de gliceraldehdo 3-fosfato que siguen la misma ruta, por lo
que se considera slo una molcula.
Oxidacin de gliceraldehdo 3-fosfato. Esta reaccin
est catalizada por la gliceraldehdo 3-fosfato deshidrogenasa
que requiere como coenzima NAD.
La gliceraldehdo 3fosfato deshidrogenasa cataliza la reaccin de oxidacin de
la gluclisis.

gliceraldehdo 3-fosfato
deshidrogenasa

gliceraldehdo 3-fosfato  NAD  Pi o


o 1,3-bisfosfoglicerato  NADH
'G 0c 1,5 kcal/mol

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LA RUTA GLUCOLTICA

25

sta es una de las reacciones ms importantes de la secuencia glucoltica puesto que se conserva la energa de oxidacin
del grupo aldehdo del gliceraldehdo 3-fosfato en la forma de
un compuesto rico en energa como es el 1,3-bisfosfoglicerato.
La funcin de NAD es la de portador de electrones o tomos
de hidrgeno. El mecanismo de accin de la enzima es bastante complejo ya que el substrato primeramente se combina con
un grupo  SH del centro activo de la enzima y sta reacciona
con el NAD. El complejo acil-enzima reacciona posteriormente
con el fosfato para producir 1,3-bisfosfoglicerato. Un hecho
que apoya este mecanismo es que la enzima es inhibida por
aquellos reactivos que bloquean el grupo  SH.
Transferencia del fosfato de 1,3-bisfosfoglicerato. El
1,3-bisfofoglicerato transfiere el fosfato al ADP mediante la enzima fosfoglicerato quinasa (Fig. 2.2).
fosfoglicerato
quinasa

1,3-bisfofoglicerato  ADP o


m 3-fosfoglicerato  ATP
'G 0c 4,50 kcal/mol

Figura 2.2. La etapa segunda de la ruta de la gluclisis. Transformacin de


gliceraldehdo 3-fosfato en lactato y formacin de 2 molculas de ATP.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

sta es la primera reaccin glucoltica en que se forma ATP


y, aunque este proceso requiere 7,3 kcal/mol, la reaccin global
es exergnica porque el 1,3-bisfoglicerato es un componente
muy rico en energa y su hidrlisis aporta suficiente energa
para la sntesis de ATP:
1,3-bisfosfoglicerato  H2O o 3-fosfoglicerato  Pi
'G 0c 11,8 kcal/mol
ADP  Pi o ATP  H2O
'G 0c
Suma de las dos reacciones:
La fosfoglicerato quinasa es la primera reaccin de la gluclisis que proporciona
ATP.

7,3 kcal/mol

1,3-bisfosfoglicerato  ADP o 3-fosfoglicerato  ATP


0
c
4,5 kcal/mol
'G total
Isomerizacin del 3-fosfoglicerato. Esta reaccin es catalizada por la fosfoglicerato mutasa y requiere Mg2:
fosfoglicerato mutasa

3-fosfoglicerato o
2-fosfoglicerato.
m
Mg
'G 0c 1,06 kcal/mol
2

Deshidratacin de 2-fosfoglicerato. Esta es la segunda


reaccin de la secuencia glucoltica en la que se genera un enlace fosfato rico en energa; la enzima que cataliza la reaccin
es la enolasa que requiere Mg2 o Mn2 para su actividad:
enolasa

2-fosfoglicerato o
fosfoenolpirato  H2O
m
Mg
'G 0c 0,44 kcal/mol
2

La piruvato quinasa
cataliza la segunda
reaccin de la ruta
glucoltica que proporciona ATP.

Transferencia del fosfato de fosfoenolpirato. El fosfato


rico en energa del fosfoenolpirato es transferido al ADP por la
piruvato quinasa:
piruvato quinasa

fosfoenolpirato  ADP o


m pirurato  ATP
'G 0c 7,5 kcal/mol
La enzima requiere Mg2 o Mn2 y K, y es una enzima reguladora alostrica con la que acta como modulador positivo la
fructosa 1,6-bisfosfato y como moduladores negativos el ATP, el
Ca2 y la alanina.
Reduccin del piruvato. En el ltimo paso de la gluclisis el piruvato es reducido a lactato a expensas de los electrones donados por el gliceraldehdo 3-fosfato a NAD. Estos elec-

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LA RUTA GLUCOLTICA

27

trones son transferidos por NADH y las reacciones catalizadas


por la lactato deshidrogenasa:
lactato
deshidrogenasa


piruvato  NADH  H o
m lactato  NAD
0
'G c 6,0 kcal/mol


En el organismo humano existen al menos cinco formas diferentes de lactato deshidrogenasa o isoenzimas. El corazn, hgado y riones son especialmente abundantes en isoenzimas
del tipo H, que tienen relativamente baja afinidad por piruvato,
mientras el msculo esqueltico es rico en isoenzimas del tipo
M, que tienen gran afinidad por piruvato y tienden hacia la formacin de cido lctico.

La lactato deshidrogenasa cataliza la reaccin de reduccin de


la gluclisis. En condiciones anaerobias o
aerobias insuficientes
oxida el NADH para
que la gluclisis continue funcionando.

LAS RUTAS DE LOS TOMOS DE CARBONO,


LA DE LA ENERGA Y LA DE LOS
ELECTRONES
En la ruta glucoltica existen tres transformaciones qumicas
que estn interconectadas:
La transformacin por la que el esqueleto carbonado de la
glucosa se transforma en el del cido lctico, esto es, el destino
de los tomos de carbono; la de la energa, donde y cmo se
utiliza y forma ATP, y la de los electrones, las reacciones de xido-reduccin.
1. Destino de los tomos de C de glucosa. La molcula de
glucosa de seis tomos de carbono en la ruta glucoltica
se transforma en dos molculas de cido lctico. Si se
enumeran los carbonos asignando el n 1 al del grupo
aldehdo, al escindirse la fructosa 1,6-bisfosfato, los carbonos 1, 2 y 3 se confunden con los 6, 5 y 4, respectivamente, en el gliceraldehdo 3-fosfato y la posicin en
el cido lctico ser:
1

COH
l
H  2C  OH
l
o 2
HO  3C  H
l
H  4C  OH
l
H  5C  OH
l
6
CH2OH
glucosa

(6)(3)
CH3
COH
l
l
(2) (5)
(5)(2)
H C  OH
o 2 H COH
l
l
(3)(6)
(1)(4)c
CH2OPO32
COOH
(1)(4)

gliceraldehdo
3-fosfato

En la gluclisis anaerobia no hay un cambio neto del estado


de oxidacin de la
glucosa en comparacin con el lactato.

lactato

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

2. La secuencia de reacciones en las que se utiliza y se


forma ATP:
glucosa  ATP o glucosa 6-P  ADP
fructosa 6-P  ATP o fructosa 1,6-bisfosfato  ADP
2 1,3 bisfosfoglicerato  2 ADP o
o 2 3-fosfoglicerato  2 ATP
2 fosfoenolpiruvato  2 ADP o 2 piruvato  2 ATP
3. La secuencia de reacciones de xido-reduccin:
2-gliceraldehdo 3-fosfato  2 NAD  2 Pi o
o 2 1,3 difosfoglicerato  2 NADH  2 ATP
piruvato  NADH  H o lactato  NAD
Teniendo en cuenta estos procesos, la ecuacin global de la
gluclisis es:
glucosa  2 ATP  2 NAD  2 Pi  4 ADP 
 2 NADH  2 H o 2 lactato  2 ADP  2 NADH 
 2 H  2 NAD  4 ATP  2 H2O
cancelando los trminos iguales en los dos miembros:
glucosa  2 Pi  2 ADP o 2 lactato  2 ATP  2H2O
Hay que destacar que, aunque existen dos reacciones de
xido-reduccin, no hay un cambio neto en el estado de oxidacin.

RUTAS AFLUENTES DE LA GLUCOLTICA


Adems de la glucosa, otros carbohidratos entran en la ruta
glucoltica para ser degradados. La glucosa de los polisacridos
glucgeno y almidn entran en la ruta a travs de enzimas que
degradan las cadenas unitariamente y mediante procesos perfectamente regulados.
Los disacridos maltosa, lactosa y sacarosa no se encuentran en la sangre de los organismos superiores. Cuando se ingieren con la dieta, son hidrolizados enzimticamente en el intestino delgado en sus componentes hexosas antes de pasar
por va portal al corriente sanguneo:
maltasa

maltosa  H2O o glucosa  glucosa

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LA RUTA GLUCOLTICA

29

lactasa

lactosa  H2O o galactosa  glucosa


invertasa

sacarosa  H2O o fructosa  glucosa


Como la glucosa, la manosa es fosforilada en el hgado:
hexoquinasa

manosa  ATP o manosa 6-fosfato  ADP


La manosa es isomerizada a fructosa 6-fosfato por la fosfomanosa isomerasa:
fosfomanosa isomerasa

manosa 6-fosfato o


m fructosa 6-fosfato
En el hgado de vertebrados la fructosa entra en la gluclisis
por otra ruta. La fructoquinasa cataliza la fosforilacin de la
fructosa:

Todos los carbohidratos en ltimo trmino


se transforman en
fructosa 6-fosfato

fructoquinasa

fructosa  ATP o fructosa 1-fosfato  ADP


La fructosa 1-fosfato se escinde en gliceraldehdo y dihidroxiacetona fosfato mediante la fructosa 1-fosfato aldolasa, una
enzima semejante a la aldolasa de la ruta glucoltica:
fructosa 1-fosfato aldolasa

fructosa 1-fosfato o


m
o gliceraldehdo  dihidoxiacetona fosfato
La dihidroxiacetona fosfato es un intermediario de la gluclisis y el otro producto el gliceraldehdo es fosforilado a gliceraldehdo 3-fosfato, otro intermediario de la gluclisis, mediante
la reaccin:
gliceraldehdo
quinasa
gliceraldehdo  ATP o
gliceraldehdo 3-fosfato 
ADP

La galactosa 1-fosfato es convertida en glucosa 1-fosfato a


travs de las siguientes reacciones:
galactosa 1-fosfato
uridil transferasa

UTP  galactosa 1-fosfato o


m UDP-galactosa  PP
UDP epimerasa

UDP-galactosa o
m UDP-glucosa
glucosa 1-fosfato-uridil
transferasa

UDP-glucosa  PP o UTP  glucosa 1-P


Como se puede observar, el UTP tiene, en estas reacciones,
una funcin muy importante como transferidor de grupos glucoslicos.

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30

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

LA REGULACIN DE LA GLUCLISIS
En la ruta glucoltica existen tres puntos importantes de control (Fig. 2.3). El primero es aquel en que la glucosa se fosforila
a glucosa 6-fosfato por ATP y la hexoquinasa. Otro importante
punto de control es la reaccin catalizada por la fosfofructoquinasa. Esta enzima reguladora es activada por AMP y ADP e inhibida por ATP y citrato. El tercer punto de regulacin es la
reaccin catalizada por la piruvato quinasa, que es activada
por fructosa 1,6-bisfosfato y AMP. Como se puede observar, las
tres enzimas de control estn reguladas por un intermediario
metablico, pero de una manera especial por la concentracin
de AMP, ADP y ATP. De una manera simplificada se puede afirmar que la relacin ADP/ATP regula el flujo metablico de la
ruta. Si esta relacin es alta porque la concentracin de ATP es
baja, la gluclisis se activa para formar ATP. Si, por el contrario,
la relacin ADP/ATP es baja, la clula inhibe la fosfofructoquinasa y se interrumpe la gluclisis para no producir ms ATP.

La hexoquinasa, fosfofructoquinasa y piruvato quinasa son los


principales centros de
control de la gluclisis.

Figura 2.3. Las tres reacciones de control de la gluclisis y


sus efectores positivos y negativos.

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LA RUTA GLUCOLTICA

RESUMEN
La gluclisis es un proceso para obtener energa de la
glucosa en ausencia de oxgeno. Tiene lugar en dos etapas
y estn implicadas 11 reacciones catalizadas enzimticamente. En la primera etapa la glucosa es fosforilada por
ATP y, posteriormente, escindida en dos molculas de Dgliceraldehdo 3-fosfato. Otras hexosas, pentosas y glicerol
entran en la ruta mediante otras reacciones en esta etapa
para converger tambin en D-gliceraldehdo 3-fosfato.
En la segunda etapa el D-gliceraldehdo 3-fosfato es
oxidado por NAD para formar un compuesto rico energticamente, el 1,3-difosfoglicerato, que cede su fosfato al
ADP para obtener ATP y 3-fosfoglicerato; este compuesto
se isomeriza a 2-fosfoglicerato, el cual se deshidrata a fosfoenolpiruvato, que nuevamente dona su fosfato al ADP
para formar ATP y piruvato. El piruvato se reduce a lactato por NADH procedente de la deshidrogeneracin de la
triosa-fosfato. En la ruta glucoltica entran dos moles de
ATP en la primera etapa y se forman cuatro de ATP en la
segunda. Existen en la ruta tres puntos de regulacin, uno
en la entrada y otros dos en la ruta, los cuales sirven de reacciones limitantes de la velocidad glucoltica.

APLICACIONES CLNICAS
Diabetes mellitus y gluclisis
La insulina y el glucagn son dos hormonas esenciales en
el control homeosttico del nivel de glucosa sangunea. Normalmente despus de cada comida experimentamos un aumento de glucosa en sangre. Las clulas E de los islotes de
Langerhaus del pancreas perciben estos niveles de glucosa circulante y liberan insulina que disminuye el nivel de glucemia
principalmente estimulando el transporte activo de la glucosa a
travs de las membranas celulares de los tejidos muscular y
adiposo. Esto es as porque la insulina se fija a una protena receptora especfica de la membrana celular y facilita la entrada
de glucosa. En la enfermedad de diabetes mellitus se produce
un nivel insuficiente de insulina o una hormona defectuosa
con una afinidad disminuida por los centros receptores. Debido a que la glucosa no puede ser captada por las clulas de los
diabticos, una caracterstica de estos enfermos es que el nivel
de glucosa en sangre permanece alta y esto va acompaado

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31

32

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de una mayor excrecin de orina (poliuria) con una constante


deshidratacin. En la diabetes no hay un control de la lipasa,
por lo que se produce una movilizacin excesiva de cidos
grasos que llegan a acumularse en el hgado. La ausencia de
insulina favorece la glucogenlisis y la gluconeognesis por lo
que el estado hiperglucmico se ve exacerbado. El organismo
intenta compensar la falta de glucosa intracelular aumentando
su disponibilidad mediante la gluconeognosis, aun cuando
haya un suministro adecuado de carbohidratos. Como el organismo es incapaz de utilizar la glucosa para obtener energa,
sta debe ser obtenida de los lipidos. Los cidos grasos son
movilizados y convertidos en acetil-CoA en el hgado, pero
este compuesto no puede ser oxidado a CO2 y H2O en el ciclo
de Krebs debido al inadecuado suministro de oxalacetato. Por
ello, el acetil-CoA es dirigido hacia la conversin de cuerpos
cetnicos como cido acetoactico y E-hidroxibutrico. El tejido muscular puede utilizar los cuerpos cetnicos para su metabolismo energtico, pero generalmente su produccin es tan
excesiva que hay una prdida de estas sustancias por va pulmonar y renal. El aceto-acetato se degrada fcilmente a acetona, que es exhalada con el aliento. La excrecin urinaria de
acetoacetato y E-hidroxibuterato produce prdida de Na generndose un estado de acidosis.
La administracin de insulina revierte estos efectos, aunque
se requiere un ajuste de la dieta y una dosis de insulina adecuada.

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TEMA 3

El ciclo de Krebs

La reaccin del complejo piruvato deshidrogenasa.


El ciclo de Krebs: reacciones y regulacin. Reacciones anaplerticas.

Las clulas aerobias obtienen la mayor parte de su energa


de la respiracin, esto es, de la transferencia de electrones
desde las molculas combustibles hasta el oxgeno molecular.
La respiracin implica la mayora de las reacciones de la ruta
glicoltica, hasta el piruvato, pero el proceso oxidativo contina hasta la transformacin en dixido de carbono y agua.
En este tema comenzaremos con la descripcin de la reaccin
catalizada por la piruvato deshidrogenasa, un complejo enzimtico que transforma el piruvato en acetil-CoA. ste es el
compuesto por el que la mayora de los tomos de carbono
procedentes del catabolismo de carbohidratos, cidos grasos
y aminocidos entran en el ciclo de Krebs. El ciclo tiene como
funciones primordiales, el ser la ruta final de la oxidacin de
las molculas combustibles y el de proporcionar molculas
precursoras para las rutas biosintticas. Cuando acta con
este ltimo objetivo, requiere de reacciones denominadas
anaplerticas que le proporcionan metabolitos y evitan que
deje de funcionar.

LA REACCIN DEL COMPLEJO PIRUVATO


DESHIDROGENASA
En el tema anterior hemos estudiado la va glicoltica en que
la glucosa se convierte en piruvato. Para que este compuesto
sea oxidado completamente a dioxido de carbono y agua en el
ciclo de Krebs se requiere:
a) Que el piruvato pase al interior de la mitocondria.
b) Que se transforme en acetil-CoA.

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34

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Las enzimas del ciclo de Krebs se localizan de forma ordenada en el interior de la mitocondria. La membrana mitocondrial es impermeable a los compuestos fosforilados y al acetilCoA, por lo que el piruvato de la ruta glicoltica, que se origina
en el citosol, es transportado, mediante difusin facilitada, al
interior de la mitocondria (Fig. 3.1). Posteriormente, el piruvato, a travs de una descarboxilacin oxidativa, se transforma en
acetil-CoA, segn la ecuacin global:
piruvato  NAD  CoA-SH o acetil-CoA 
 NADH  H  CO2
'G0c 8,0 kcal

La oxidacin del piruvato es una reaccin irreversible en la


que intervienen tres
enzimas y cinco coenzimas.

Figura 3.1. El piruvato procedente de la gliclisis atraviesa la membrana mitocondrial para ser oxidado y descarboxilado a acetil-CoA en la matriz mitocondrial.

La reaccin transcurre con una gran variacin negativa de


energa libre estndar, lo que indica que en la clula viva es
esencialmente irreversible. La reaccin est catalizada por el

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EL CICLO DE KREBS

complejo piruvato deshidrogenasa (PDH) constituido por tres


enzimas:
piruvato deshidrogenasa, dihidrolipoil transacetilasa y
dihidrolipoil deshidrogenasa
y cinco coenzimas:
pirofosfato de tiamina (TPP), cido lipoico, coenzima A
(CoA-SH), nicotinamina adenina dinucletido (NAD), y
flavinadenina dinucletido (FAD).
Este complejo multienzimtico ha sido aislado y purificado
de varios organismos. El de la especie humana tiene un peso
de 8,5 u 106 daltons y est constituido por 30 molculas tetramricas de la piruvato deshidrogenasa, que contiene unida
una molcula de TPP, 60 molculas de dihidrolipoil transacetilasa cada una con una molcula de cido lipoico y seis de dihidrolipoil deshidrogenasa, cada una de las cuales se encuentra
unida a una molcula de FAD. El proceso enzimtico se esquematiza en la figura 3.2. Se ha postulado que la cadena lateral del cido lipoico (lipoil-lisina) acta como un brazo oscilante para transferir grupos acetilo y tomos de hidrogeno (o los
electrones equivalentes), desde una enzima a la siguiente dentro del complejo enzimtico.

Figura 3.2. Descarboxilacin oxidativa del piruvato a acetil-CoA por el complejo piruvato deshidrogenasa. Las sustancias que entran y salen del complejo
aparecen enmarcadas. Las enzimas que intervienen son: E1 piruvato deshidrogenasa, E2 dihidrolipiol transacetilasa, E3 Dihidrolipoil deshidrogenasa.

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35

36

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La reaccin catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa se encuentra en una posicin clave del metabolismo, no
slo porque sirve de conexin entre la ruta glicoltica y el ciclo
de Krebs sino porque el piruvato y el acetil-CoA son componentes de varias rutas biosintticas y degradativas (Fig. 3.3).
As, el piruvato, adems de ser el producto final de la ruta glicoltica, se forma en el catabolismo de aminocidos, en la oxidacin del lactato, y es un precursor de la sntesis de aminocidos, de la glucosa y del lactato. El acetil-CoA se forma en la degradacin de los cidos grasos y de aminocidos y es un
precursor de la sntesis de cidos grasos, cuerpos cetnicos, colesterol y otros lpidos de gran importancia biolgica.

Figura 3.3. La reaccin catalizada por el complejo PDH se encuentra en una


posicin clave del metabolismo. El piruvato y el acetil-CoA son productos finales de varias rutas catablicas y precursores de otras anablicas.

Figura 3.4. El complejo


PDH est regulado de
manera rpida por
NADH y acetil-CoA que
lo hacen como efectores
negativos.

No es de extraar que, dada la posicin tan estratgica del


complejo piruvato deshidrogenasa en el metabolismo, su actividad se encuentre regulada con precisin. Exiten dos niveles de
regulacin sobre el complejo: uno rpido, en el que los productos de la reaccin (acetil-CoA y NADH) actan de inhibidores
(Fig. 3.4) y otro lento mediante modificacin covalente y en el
que participan dos enzimas ms: la PDH quinasa y la PDH fosfatasa (Fig. 3.5). Estas enzimas, que tambin constituyen parte
integral del complejo PDH, regulan la actividad del mismo a
travs de un mecanismo de fosforilacin y desfosforilacin. Va-

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EL CICLO DE KREBS

37

Figura 3.5. El complejo PDH est regulado de manera lenta por un sistema de
fosforilacin/desfosforilacin en el que intervienen la PDH-quinasa y la PDHfosfatasa.

lores elevados de las proporciones NADH/NAD, acetil-CoA/


CoA-SH y/o ATP/ADP actan como efectores positivos de la
PDH quinasa, favoreciendo la formacin de la PDH activa, no
fosforilada, en PDH fosforilada, poco activa. El resultado neto
de este proceso es el descenso del ritmo en la transformacin
piruvato-acetil-CoA.

EL CICLO DE KREBS:
REACCIONES Y REGULACIN
El ciclo del cido ctrico, de los cidos tricarboxlicos, del
cido tricarboxlico o, simplemente, de Krebs, en honor de su
descubridor Hans Krebs, fue la consecuencia de propuestas,
experimentos y deducciones brillantes que han marcado un
hito en la historia y el desarrollo de la Bioqumica. Krebs bas
sus estudios en los realizados previamente por Thumberg,
Szent Gyorgyi, Martius, Knoop y Ochoa y sus primeros resultados los public en 1937 en las revistas Enzymologia y Lanzet.
El carcter cclico se debe a que, despus de una serie de
reacciones, se regenera el compuesto de partida, el oxalacetato.
En cada vuelta del ciclo de Krebs una molcula de acetilo (del
acetil-CoA) de dos tomos de carbono se condensa con una
molcula de cido oxalactico de cuatro tomos de carbono
para formar cido ctrico, un compuesto de seis tomos de carbono. Este ltimo se oxida mediante una secuencia de reacciones, de tal modo que se liberan dos molculas de CO2 y se regenera una molcula de cido oxalacetato. Este compuesto
puede combinarse con otra molcula de acetilo, iniciando el ciclo otra vuelta. En cada vuelta se incorpora una molcula de

El ciclo de Krebs es
la ruta de oxidacin
de todos los combustibles metablicos en
condiciones aerbicas.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

En el ciclo entran dos


tomos de carbono
con el acetil-CoA y se
pierden dos en las reacciones 4 y 5 .

acetilo y se eliminan dos de CO2. Cuando el ciclo est funcionando con fines energticos, una molcula de cido oxalactico sera suficiente para lograr la oxidacin de un nmero infinito de molculas de acetilo. En estas condiciones, por cada
vuelta se liberan cuatro pares de hidrgeno (o sus electrones
equivalentes), los cuales pasarn al oxgeno molecular para obtener energa en forma de ATP.
El conjunto de reacciones del ciclo se muestra en la figura 3.6.
Del funcionamiento del ciclo de Krebs se puede destacar los
siguientes hechos:
1. La primera reaccin del ciclo es la condensacin de una
molcula de acetil-CoA con otra de cido oxalactico
por la accin cataltica de la citrato sintasa. La reaccin

Figura 3.6. Reacciones del ciclo de Krebs. Los nmeros corresponden a las siguientas enzimas: (1) Citrato
sintasa. (2) Aconitasa. (3) Aconitasa. (4) Isocitrato deshidrogenasa. (5) Complejo D-cetoglutarato deshidrogenasa. (6) D-cetoglutarato deshidrogenasa. (7) Succinil CoA sintetasa. (8) Succinato deshidrogenasa.
(9) Fumarasa. (10) Malato deshidrogenasa. Los tomos de carbono del acetil-CoA aparecen en color naranja para que pueda observarse que despus de las dos descarboxilaciones permanecen integrados en la
molcula de succinato.

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EL CICLO DE KREBS

2.

3.

4.

5.

6.

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es irreversible porque la hidrlisis del enlace tioster del


acetil-CoA implica la liberacin de una gran cantidad de
energa ('G0c 7,5 kcal) (Fig. 3.6).
Hay cuatro reacciones catalizadas por deshidrogenasas
que reducen tres molculas de NAD y una de FAD: isocitrato deshidrogenasa, complejo D-cetoglutarato deshidrogenasa, succinato deshidrogenasa y malato deshidrogenasa. En las dos primeras tambin se producen descarboxilaciones.
El complejo D-cetoglutarato deshidrogenasa que cataliza la transfomacin del D-cetoglutarato en succinil-CoA
tiene una estructura similar al de la piruvato deshidrogenasa; como ste, est constituido por tres enzimas y
las mismas coenzimas: TTP, cido lipoico, CoA-SH,
FAD y NAD.
La reaccin catalizada por la succinil-CoA genera un enlace fosfato de alta energa en forma de GTP (equivalente a ATP).
Los tomos de carbono que se liberan en forma de CO2
por cada vuelta del ciclo no son los mismos que los captados como acetilos.
Algunas sustancias inhiben el funcionamiento del ciclo
de Krebs, generalmente porque compiten con los sustratos por las enzimas del ciclo. As, el malonato inhibe la
succinato deshidrogenasa y el fluoracitrato la aconitasa.
Las sales de arsnico inhiben el complejo D-cetoglutarato deshidrogenasa.

La reaccin neta del ciclo es:


acetil-CoA  3 NAD  FAD  GDP  Pi  H2O o
o 2CO2  3 NADH  FADH2  GTP  2H  CoA-SH
Las tres molculas de NADH y la de FADH2 se oxidan en
la cadena de transporte electrnico, como hemos visto en el
tema 28 de Fundamentos de Bioqumica Estructural. El oxgeno molecular no participa directamente en el ciclo de
Krebs, pero ste slo funciona en condiciones aerbicas porque el NADH y el FADH2 nicamente transfieren sus electrones al oxgeno molecular en la cadena respiratoria (Fig. 3.7).
El ciclo est regulado por la accin de enzimas alostricas
que responden a las concentraciones de metabolitos celulares y
que son limitantes en la velocidad metablica del ciclo. En terminos estrictos, el complejo PDH no forma parte del ciclo, pero
su regulacin potencia la sensibilidad del sistema de regulacin
del ciclo al controlar la cantidad de acetil-CoA que se incorpora
al mismo. En el ciclo existen tres reacciones que se pueden

Cada vuelta del ciclo


de Krebs genera un
fosfato de alta energa por una fosforilacin a nivel de sustrato, 3 del NADH y 1
del FADH2. Estos ltimos se reoxidarn
en la cadena respiratoria.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

considerar claves en la regulacin y


que son catalizadas por las siguientes
enzimas (Fig. 3.8):
Citrato sintasa. Cuando aumentan
los niveles de NADH y/o ATP por
encima de lo normal, actan disminuyendo la actividad de la enzima y, por tanto, la formacin de
citrato.
Isocitrato deshidrogenasa. Esta
enzima alostrica es, como la anterior, inhibida por el NADH y
ATP y estimulada por NAD, ADP
y Ca2.
D-Cetoglutarato deshidrogenasa.
Este complejo enzimtico, como
se ha indicado, es anlogo en su
estructura al del piruvato deshidrogenasa. Como este, es inhibido por los productos finales de la
reaccin que cataliza, que en el
caso del complejo D-cetoglutarato
deshidrogenasa, son: el succinilCoA y el NADH.
Se puede subrayar que la velocidad
metablica del ciclo est regulada de
forma general por el producto final de
las reacciones de obtencin de energa
de la respiracin, el ATP, y el producto
final de las etapas de deshidrogenacin
del ciclo, el NADH.

REACCIONES
ANAPLERTICAS
Figura 3.7. El ciclo de Krebs y la cadena respiratoria
estn acoplados por los electrones que fluyen desde
los intermediarios del ciclo a travs de la cadena al
oxgeno molecular.
El ciclo de Krebs se
controla fundamentalmente por tres reacciones y por las
concentraciones intramitocondriales de
NAD+ y NADH.

Aunque el ciclo de Krebs es la va degradativa ms importante para generar


ATP, el ciclo es esencial para la biosntesis de compuestos celulares. As, muchos aminocidos derivan del D-cetoglutarato y del oxalacetato, y la mayora de los tomos de carbono de las porfirinas proceden del succinil-CoA. Cuando esos metabolitos son extrados
del ciclo de Krebs, ste deja de funcionar, puesto que se interrumpe la formacin de oxalacetato.

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EL CICLO DE KREBS

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Figura 3.8. Regulacin del flujo metablico a travs del ciclo de Krebs. Las
tres enzimas alostricas estn controladas por los niveles de varios efectores positivos y negativos.

Para que el ciclo siga actuando a un ritmo normal, existen


reacciones denominadas anaplerticas (de relleno) que reestablecen los niveles de los intermediarios del ciclo. La ms importante es la carboxilacin del cido piruvico para formar cido oxalactico; catalizada por la piruvato carboxilasa
piruvato
carboxilasa

piruvato  CO2  ATP o oxalacetato  ADP  Pi


'G0c 0,5 kcal
La piruvato carboxilasa, que se encuentra en el hgado y
rin, es una enzima alostrica de peso molecular elevado (alrededor de 650.000 daltons) y un elevado nmero de subunidades proteicas. Su modulador positivo es el acetil-CoA (Fig.
3.9). Cuando esta sustancia alcanza un nivel por encima de lo
normal, activa la reaccin favoreciendo la formacin de oxalacetatato, el cual se condensa con el acetil-CoA acumulado para
formar citrato y de esta forma permitir que el ciclo siga funcionando.
En el corazn y en el tejido muscular acta principalmente
la enzima mlica (malato deshidrogenasa dependiente de
NADP) y que cataliza la reaccin:

Los intermediarios
del ciclo de Krebs
que se utilizan en
otras rutas biosintticas deben reponerse
para que el flujo metablico a travs del
ciclo no se detenga.

enzima
malica


piruvato  CO2  NADPH  H o
m L-malato  NADP

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 3.9. La reaccin anaplertica catalizada por la piruvato carboxilasa


permite la reposicin de intermediarios del ciclo de Krebs para que ste contine funcionando. En condiciones biosintticas, al aumentar el nivel de acetilCoA, este compuesto acta como un efector positivo de la piruvato

De estas dos reacciones anaplerticas, la que tiene ms importancia cuantitativamente es la catalizada por la piruvato
deshidrogenasa, cuya actividad aumenta con el ejercicio, el
ayuno y la diabetes. Curiosamente la actividad de la enzima
mlica se encuentra disminuida en diabetes y aumentada tras
la administracin de insulina.

RESUMEN
La reaccin catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa conecta las rutas glicoltica y el ciclo de Krebs,
ya que transforma el cido pirvico en acetil-Co. El complejo est formado por tres enzimas y cinco coenzimas, y
est regulado por modificacin covalente. El ciclo cumple
con dos funciones importantes:
1) Es la ruta degradativa final para la oxidacin de
molculas combustibles.

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EL CICLO DE KREBS

2) Es fuente de molculas precursoras para las rutas


biosintticas.
El ciclo est constituido por una serie de reacciones que
comienzan con la condensacin del grupo acetilo del acetil-CoA con el cido oxalactico, de cuatro tomos de carbono, para formar cido ctrico de seis tomos de carbono. En cada vuelta del ciclo, despus de una secuencia de
reacciones que generan nuevamente cido oxalacetato, se
liberan dos tomos de carbono en forma de CO2 y se originan tres molculas de NADH, una de FADH2 y otra de
GTP. El ritmo del ciclo est controlado, principalmente, por
ATP y NADH, que actan como moduladores negativos
sobre tres enzimas alostricas: citrato sintasa, isocitrato
deshidrogenasa y D-cetoglutarato deshidrogenasa. Cuando el ciclo funciona con fines biosintticos, la reposicin
de los intermediarios se realiza mediante reacciones anaplerticas. Las ms importantes son las catalizadas por la
piruvato carboxilasa y la enzima mlica.

APLICACIONES CLNICAS
Los casos clnicos derivados de una disfuncin del complejo
piruvato deshidrogenasa, ciclo de Krebs y de las reacciones
anaplerticas son consecuencia de una insuficiente actividad
enzimtica debido a una deficiencia en una coenzima o a un
defecto estructural de la protena. Entre los primeros, el caso
ms conocido es el de la deficiencia en vitamina B1, y entre los
segundos, la reducida actividad de las enzimas del complejo piruvato deshidrogenasa, de la fumarasa y de la citrato sintasa.

Deficiencia vitamnica B1
La deficiencia vitamnica B1 ocasiona una enfermedad neurolgica y cardiovascular descrita en 1630 por J. Bonitus que la
denomin beriberi (cordero), porque las personas que padecian esa enfermedad andaban como los corderos. El problema
contina siendo grave en el Extremo Oriente, donde el arroz
que es el alimento bsico, contiene niveles muy bajos de tiamina y practicamente nulos cuando el arroz se descascarilla. Los
pacientes con esta enfermedad suelen tener niveles altos de piruvato, lactato y alanina en sangre, y baja actividad de los complejos piruvato deshidrogenasa y de D-cetoglutarato deshidrogenasa.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los sntomas de esta enfermedad se originan como consecuencia de una hipoavitaminosis B1 o tiamina. La tiamina en el
organismo se fosforila a pirofosfato de tiamina (TPP), que es
una de las coenzimas del complejo piruvato deshidrogenasa, y
del D-cetoglutarato deshidrogenasa, por eso las actividades de
estas enzimas en sangre estn disminuidas en el beriberi.
Una terapia lgica es una dieta baja en carbohidratos y la
administracin de tiamina. La administracin de TPP no es
ms eficaz que la de la tiamina, dado que la coenzima, al ser
un compuesto fosforilado, no atraviesa las membranas. En ocasiones la terapia no es tan sencilla ya que la baja actividad del
PDH puede tener un origen gentico.
Una deficiencia en piruvato carboxilasa produce tambien
un aumento de piruvato y alanina en sangre, ya que el piruvato no puede convertirse en oxalacetato, que es el aceptor de
grupos acetilo en el ciclo de Krebs.

Deficiencia en la actividad fumarasa


Las deficiencias en la actividad fumarasa del tejido cerebral
y del musculo esqueletico ocasionan miopatia mitocondrial.
Los pacientes con encefalomiopata mitocondrial mueren a los
pocos meses de edad. Presentan cantidades anormalmente altas de fumarato en sangre. Las mitocondrias de msculo esqueltico y de hgado, obtenidas mediante biopsias, muestran
una actividad en fumarasa prcticante nula. Sin embargo,
mientras las primeras oxidan lentamente el glutamato y el succinato, las de hgado oxidan ambos sustratos a velocidad normal. La administracin de sustratos gluconeognicos, como el
lactato o la alanina, alivian los efectos de la enfermedad.

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TEMA 4

La ruta de las
pentosas fosfato

La ruta de las pentosas fosfato. Etapa I. Etapa II.


Rendimiento energtico. Regulacin de la ruta.

La ruta de las pentosas fosfato es una ruta alternativa a la


glucoltica, cuyas funciones son obtener poder reductor para las
reacciones de biosntesis y D-ribosa para la sntesis de nuclesidos. La ruta consiste en dos etapas de naturaleza qumica diferente, la primera implica reacciones de xido-reduccin, y la
segunda reacciones en equilibrio de isomerizacin y reagrupamiento molecular. La primera reaccin de la primera etapa regula el flujo del metabolismo a travs de la ruta.

LA RUTA DE LAS PENTOSAS FOSFATO


La ruta de las pentosas fosfato, tambin denominada ruta
de los hexosas fosfato o ruta del fosfogluconato, es otra va de
degradacin de la glucosa con dos funciones primordiales: originar poder reductor en forma de NADPH y obtener pentosas,
concretamente D-ribosa. La primera funcin es especialmente
importante en tejidos que realizan la sntesis de cidos grasos y
esteroides, como son el hgado, las glndulas mamarias, los tejidos grasos y la corteza adrenal. En el msculo esqueltico esta
va no es activa. En la ruta se pueden considerar dos etapas:
una primera que implica reacciones de xido-reduccin y una
segunda que comprende reacciones de condensacin e isomerizaciones moleculares.

La ruta de las pentosas fosfato genera


NADPH para las
biosntesis reductoras y ribosa 5-P para
la biosntesis de nucletidos.

ETAPA I
La primera reaccin es la deshidrogenacin enzimtica de
la glucosa 6-fosfato por la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

para dar 6-fosfoglucolactona. En condiciones fisiolgicas esta


reaccin es reversible, pero el producto de la reaccin rpidamente se hidroliza mediante la 6-fosfogluconolactonasa a 6fosfogluconato con una variacin alta de energa libre, por lo
que el conjunto de las dos reacciones est desplazado claramente hacia la derecha:

Las tres reacciones


de la fase oxidativa
(etapa I) incluyen dos
oxidaciones que producen NADPH.

En la siguiente reaccin el 6-fosfogluconato sufre una descarboxilacin oxidativa por la 6-fosfogluconato deshidrogenasa
que requiere NADP para dar ribulosa 5-fosfato y CO2:

ETAPA II
Esta etapa comprende una serie de condensaciones, isonomerizaciones y reagrupamientos catalizados enzimticamente.

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LA RUTA DE LAS PENTOSAS FOSFATO

47

El producto final de los procesos oxidativos de la etapa I, la


ribulosa 5-fosfato, es convertido en ribosa 5-fosfato por accin
de la ribulosa 5-fosfato epimerasa. En esta reaccin el carbono
3 de la ribulosa es invertido para dar xilulosa 5-fosfato. Alternativamente, la ribulosa 5-fosfato puede ser convertida en la aldolasa correspondiente, la ribosa 5c-fosfato por la ribosa 5-fosfatoisomerasa, una reaccin similar a la conversin de glucosa
6-fosfato en fructosa 6-fosfato.
Estas reacciones son:

Posteriormente aparecen reacciones de reordenamiento de


tomos mediante la accin de dos clases de enzimas: transaldolasas y transectolasas, en las cuales se lleva a cabo la transferencia de unidades de dos y tres tomos de carbono:

Las reacciones de la
etapa II son todas reversibles.

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48

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La sedoheptulosa 7-fosfato y el gliceraldehdo 3-fosfato son


obtenidos de la reaccin entre la xilulosa 5-fosfato y la ribosa
5-fosfato catalizada por la transcetolasa:

CH2OH
l
La transcetolasa transfiere el grupo C O
de una moll
cula a otra y requiere para su actividad pirofosfato de tiamina
TPP, la coenzima que requieren los complejos enzimticos piruvato deshidrogenasa y a-cetoglutanato deshidrogenasa. La
transcetolasa cataliza dos reacciones en las que interviene la
xilulosa 5-fosfato, una es la transformacin de xilulosa 5-fosfato y ribosa 5-fosfato en sedoheptulosa 7-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato y la otra la transformacin de xilulasa 5-fosfato y
eritrosa 4-fosfato en fructosa 6-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato. La sedoheptulosa 7-fosfato es un azcar inusual de siete
tomos de carbono que tambin se encuentra en las reacciones del ciclo de Calvn en la fase de la fotosntesis que no depende de la luz.

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LA RUTA DE LAS PENTOSAS FOSFATO

La transaldolasa cataliza la reaccin entre la sedoheptulosa


7-fosfato y el gliceraldehdo 3-fosfato para producir fructosa 6fosfato y una tetrosa, la eritrosa 4-fosfato. La transferencia imCH2OH
l
C O
l
plica el fragmento de tres tomos de carbono HO  C  H y
l
no requiere coenzima.
En la figura 4.1 se muestra una panormica de la ruta de
las pentosas fosfato en la que se puede apreciar que los productos de la ruta son el gliceraldehdo 3-fosfato y la fructosa 6fosfato, dos intermediarios de la ruta glucoltica.

RENDIMIENTO ENERGTICO
Para conocer el rendimiento energtico de la ruta de las
pentosas fosfato es necesario considerar tres molculas de glucosa 6-fosfato, ya que en la etapa II (Fig. 4.1) se requieren una
molcula de ribosa 5-fosfato y dos de xilulosa 5-fosfato. La ri-

Figura 4.1. La ruta de las pentosas fosfato. Obsrvese que las reacciones de la
etapa I son irreversibles y las de la II, reversibles. Este hecho permite que si la
clula requiere ribosa 5-fosfato y no NADPH se pueda obtener a travs de las
reacciones de la etapa II, mediante los intermediarios de la gluclisis.

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50

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

bosa 5-fosfato y una de las dos molculas de xilulosa 5-fosfato


sirven como precursores para la formacin de una fructosa 6fosfato; la segunda, xilulosa 5-fosfato, ms la eritrosa 4-fosfato
forman otra molcula de fructosa 6-fosfato y una de gliceraldehdo 3-fostato. De forma resumida:
3 glucosa 6-fosfato

o

3 CO2

2 fructosa 6-fosfato

1 gliceraldehdo 3-fosfato
La degradacin completa de una molcula de glucosa requiere, para entender fcilmente el proceso, considerar seis
molculas de glucosa 6-fosfato que originarn 6 CO2, esto es,
tantas molculas de anhdrido carbnico como tomos de carbono tiene la molcula de glucosa (C6H12O6):
6 glucosa 6-fosfato  12 NADP o
o 5 glucosa 6-fosfato  6 CO2  12 NADP  Pi
Dos caractersticas importantes de esta ruta es que no requiere ATP una vez formada la glucosa 6-fosfato y que puede
funcionar en condiciones anaerbicas. Ello es fcil de comprender ya que el NADP se puede regenerar en procesos de
biosntesis, no requiere la cadena respiratoria, y, por tanto, la
ruta permite la produccin anaerobia de pentosas.
En condiciones aerbicas, para que el NADPH se reoxide a
NADP debe reaccionar con NAD, ya que el NADPH es impermeable a la membrana mitocondrial. La transferencia de
hidrgenos del NADPH al NAD se produce por un proceso de
transhidrogenacin. Por consiguiente, cada mol de NADPH
producira un mol de NADH y ste, en presencia de oxgeno,
3 moles de ATP. De esta forma la oxidacin completa de 1 mol
de glucosa por la ruta de las pentosas fosfato producira
12 u 3 36 ATP. A este nmero hay que descontarle un ATP
que se utilizara en la fosforilacin de la glucosa por la hexoquinasa, luego en total seran 35 ATP.

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LA RUTA DE LAS PENTOSAS FOSFATO

51

REGULACIN DE LA RUTA
Las reacciones de la ruta de las pentosas fosfato tienen lugar como las de la glucoltica, en el citosol, y la regulacin se
produce en la primera enzima de la misma, la glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa. La enzima se sintetiza en gran cantidad cuando se ingieren dietas ricas en hidratos de carbono. Cuando una
persona pasa de un estado de inanicin a otro en exceso de hidratos de carbono, la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa heptica puede aumentar ms de 10 veces la concentracin.
La regulacin de la sntesis coexiste con un control fino de
la actividad enzimtica mediante el NADPH como inhibidor
competitivo con una constante de inhibicin muy baja
(Ki 7 PM). La inhibicin es superior al 90% cuando el cociente de la concentracin NADPH/NADP es mayor de 10.
La concentracin celular de la glucosa 6-fosfato es aproximadamente 1 PM; esto limita en cierta medida la actividad de
la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, que tiene una Km en el
rango micromolecular.
Dependiendo de las demandas celulares, una combinacin del flujo de intermediarios de las rutas glucoltica y de las
pentosas fosfato puede estar regulada para producir proporciones adecuadas de NADPH, ribosa 5-fosfato y gliceraldehdo 3-fosfato.

La regulacin del flujo de la ruta de las


pentosas fosfato se
realiza, fundamentalmente, a nivel de glucosa 6-P deshidrogenasa.

RESUMEN
La glucosa 6-fosfato puede ser oxidada a travs de la
ruta de las pentosas fosfato por un conjunto de enzimas
que se encuentra en el citosol de, principalmente, clulas
hepticas, glndulas mamarias, tejido adiposo y corteza
adrenal. Se distinguen dos etapas en funcin de la naturaleza de las reacciones. En la I existen dos reacciones que
requieren como aceptor electrnico NADP, que pasa a
NADPH y es el principal compuesto reductor en la sntesis
de biomolculas como cidos grasos y colesterol. La oxidacin completa de una molcula de glucosa origina
12 NADPH y 6 CO2. Aunque la ruta puede actuar en condiciones anaerbicas, cuando acta en presencia de oxgeno puede producir 35 ATP. La primera enzima de la ruta la
glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, controla el flujo a travs
de la misma; la actividad y la sntesis de la enzima se encuentran perfectamente reguladas.

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52

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

APLICACIONES CLNICAS
Deficiencias de la glucosa 6-fosfato
deshidrogenasa
Se han identificado varios tipos de deficiencia hereditaria de
glucosa 6-fosfato, los cuales producen hipersensibilidad a ciertos frmacos, lo que conduce a una anemia hemoltica.
Aunque los primeros casos se descubrieron al tratar enfermos de paludismo con la droga antimalaria primaquina, posteriormente se han descrito acciones similares en otros frmacos.
Las clulas deficientes en glucosa 6-fosfato deshidrogenasa
tienen una baja produccin de NADPH, el cual es imprescindible para mantener el glutation en forma reducida (GSH). Este
compuesto es esencial para mantener la integridad de la membrana de los eritrocitos o glbulos rojos. Cuando el glutation no
se encuentra en forma reducida, las membranas no conservan
la estructura adecuada y pueden ser destruidas por los frmacos, y esto sucede con mayor facilidad cuando ms viejos son
los eritrocitos. Ello explica el alto porcentaje de eritrocitos jvenes circulantes concentrados en las personas con deficiencia en
glucosa 6-fosfato deshidrogenasa.
Curiosamente esta deficiencia grave en el caso de tratamiento con frmacos ofrece una ventaja a los pacientes que la
presentan y es que tienen menor probabilidad de contraer la
malaria. El parsito de la malaria, Plasmodium falciparum, requiere esencialmente para su crecimiento y desarrollo
NADPH. Las personas con deficiencia enzimtica no aportan
suficiente coenzima reducido para el desarrollo del parsito.
Esta ventaja ha provocado una seleccin natural de los deficientes en la glucosa 6-fosfato deshidrogenasa que la padecen,
ms de 400 millones de personas en el planeta, concentrandose en aquellos pases en que la malaria es una enfermedad
endmica.

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TEMA 5

Gluconeognesis
Glucognesisglucogenlisis

Gluconeognesis. Regulacin de la ruta gluconeognica. Glucognesis y glucogenlisis. Los ciclos


de substrato.

La gluconeognesis es la biosntesis de glucosa y otros hidratos de carbono a partir de molculas precursoras sencillas.
Es uno de los procesos ms importantes de los organismos vivos ya que las clulas requieren glucosa para el normal metabolismo y algunas, como las del cerebro, de manera esencial.
La gluconeognesis difiere de la gluclisis en unas pocas reacciones.
La concentracin de glucosa en sangre debe permanecer
dentro de un intervalo adecuado y el control se consigue mediante la regulacin precisa del metabolismo del glucgeno, un
modelo de regulacin de dos rutas inversas. La diferente regulacin de las reacciones inversas conduce a la formacin de ciclos de substrato, de gran importancia biolgica en la regulacin de la velocidad del flujo metablico.

La mayoria de las reacciones de la ruta


glucoltica y glucognica son las mismas.

GLUCONEOGNESIS
Hemos estudiado que la conversin de glucosa 6-fosfato en
piruvato es la ruta central del catabolismo de hidratos de carbono en la mayora de los organismos, tanto en condiciones
aerbicas como anaerbicas. De manera similar, el proceso inverso, la conversin de piruvato en glucosa 6-fosfato es una
ruta esencial en la biosntesis de monosacridos y polisacridos
en todas las clulas. Esta ruta se denomina gluconeognesis
(Fig. 5.1).
Las fuentes de carbono para la gluconeognesis las constituyen varios precursores obtenidos principalmente a partir de
L-aminocidos, del cido pirvico o del cido lctico. Por ejem-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 5.1. La gluconeognesis es la biosntesis de la glucosa


y otros hidratos de carbono.

La gluconeognesis
es esencial para el
mantenimiento de las
concentraciones normales de glucosa en
sangre.

plo, la sntesis de glucosa en el hgado a partir del cido lctico


de la sangre que aparece durante una intensa actividad muscular y en la que la glucosa es degradada a cido lctico por el
msculo esqueltico.
La mayora de las reacciones en la ruta gluconeognica desde el piruvato a la glucosa son catalizadas por las mismas enzimas de la ruta glucoltica y proceden a la inversa de los pasos
utilizados en la gluclisis (Fig. 5.2). Sin embargo, hay tres pasos
irreversibles en direccin glucoltica que no pueden utilizarse en
direccin gluconeognica. En esta direccin las reacciones deben ser sobrepasadas por reacciones alternativas que son ms
favorables para la sntesis. Estas reacciones son: la formacin
de fosfoenolpiruvato, la formacin de fructosa 6-fosfato y la
formacin de glucosa.

Formacin de fosfenolpiruvato
La primera de estas reacciones es la conversin de piruvato
en fosfenolpiruvato, la cual no puede llevarse a cabo en direccin inversa a la reaccin catalizada por la piruvato quinasa debida a un elevado valor negativo de energa libre ('G 0c
7,5 kcal/mol). En vez de esta reaccin, la fosforilacin de piruvato es conseguida a travs de una secuencia de reacciones
que requiere la cooperacin de enzimas del citoplasma y de la
mitocondria. La primera reaccin de esta secuencia est catalizada por la piruvato carboxilasa mitocondrial:

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

piruvato carboxilasa

piruvato  CO2  ATP o


oxalacetato  ADP  Pi
Acetil-CoA ()
La piruvato carboxilasa es una enzima reguladora que slo
es activa en presencia de su modulador positivo, acetil-CoA, y
requiere como coenzima biotina, a la que se une covalentemente.

Figura 5.2. La gluconeognesis y la gluclisis y las etapas en que divergen.

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56

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El oxalacetato formado es reducido a malato en la mitocondria a expensas de NADH y mediante la malato deshidrogenasa:
malato deshidrogenasa


oxalacetato  NADH  H o
m malato  NAD

El malato difunde fuera de la mitocondria al citoplasma,


donde es reoxidado por la malato deshidrogenasa citoslica:
malato deshidrogenasa


malato  NAD o
m oxalacetato  NADH  H

El oxalato es fosforilado a fosfoenolpiruvato por el GTP


(guanosina trifosfato) mediante la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa:
fosfoenolpiruvato carboxiquinasa
oxalacetato  GTP o
o fosfoenolpiruvato  CO2  GDP
La enzima se ha encontrado en el citoplasma de clulas
hepticas y requiere Mg2 para su actividad.
La ecuacin global de este compuesto de reacciones necesarias para la formacin de fosfoenolpiruvato en piruvato es:
o
piruvato  ATP  GTP m
o
fosfoenolpiruvato

ADP
 GDP  Pi
m
Se requiere, por tanto, dos enlaces fosfatos ricos en energa,
uno procedente del ATP y otro del GTP, esto es
2 u (7,3 kcal/mol)

14,6 kcal/mol

Hidrlisis de fructosa 1,6-bisfosfato


La gluconeognesis
utiliza enzimas especficas para evitar
tres reacciones irreversibles de la gluclisis.

La segunda reaccin en que las rutas glucoltica y gluconeognica divergen es la fosforilacin de la fructosa 6-fosfato por
la fosfofructoquinasa. Esta reaccin irreversible es sobrepasada
gluconeognicamente por la fructosa 1,6-bisfosfatasa
fructosa 1,6bifosfatasa

fructosa 1,6-bisfosfato  H2O o fructosa 6-fosfato  Pi


'G 0c 3,9 kcal/mol
La fructosa 1,6 bisfosfatosa es una enzima reguladora cuya
actividad es inhibida por AMP y ADP.

Hidrlisis de glucosa 6-fosfato


La glucosa 6-fosfato es hidrolizada a glucosa por la glucosa
6-fosfatasa:

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

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glucosa 6-fosfatasa

glucosa 6-fosfato  H2O o glucosa  Pi


'G 0c 3,3 kcal/mol
La enzima se encuentra presente en el hgado pero no en
msculo ni cerebro.
La ecuacin global de la gluconeognesis que implica la
suma de las reacciones biosintticas es:
2 piruvato  4 ATP  2 GTP  2 NADH  2 H  6 H2O o
o glucosa  2 NAD  4 ADP  2 GDT  6P
Por cada molcula de glucosa que se forma se requieren seis
enlaces fosfatos ricos en energa y dos molculas de NADH.
La gluconeognesis tambin puede tener lugar a partir de
algunos aminocidos e intermediarios del ciclo de Krebs. Los
compuestos como citrato, isocitrato, D-cetoglutarato, succinato
y fumarato pueden convertirse en malato, el cual puede pasar
al citosol, convertirse en fosfoenolpiruvato mediante la PEP
carboxiquinasa citoplsmica e incorporarse a la ruta gluconeognica. El esqueleto carbonado de algunos aminocidos
como alanina, glutmico o aspartico pueden convertirse en intermediarios del ciclo de Krebs o en PEP, por ello se les denomina glucognicos, y de esta forma entran en la ruta gluconeognica (Fig. 5.3).

Los precursores gluconeognicos ms


importantes son el
lactato, la alamina, el
glicerol y el propionato.

REGULACIN DE LA RUTA GLUCONEOGNICA


La gluconeognesis est regulada en los tres puntos especficos de la ruta: la piruvato carboxilasa, la fructosa 1,6-bisfosfatasa y la glucosa 6-fosfatasa. La primera est activada por acetil-CoA e inhibida por ADP; la fructosa 1,6-bifosfatasa es activada por ATP e inhibida por ADP y AMP, mientras que la
glucosa 6-fosfatasa est sujeta a la inhibicin por los dos productos: glucosa y fosfato inorgnico (Pi ).
Algunas hormonas juegan un papel clave en la regulacin de
la ruta gluconeognica y, en ocasiones, en la ruta glucoltica simultneamente. As, el glucagn estimula la gluconeognesis
aumentando la actividad de las enzimas como la fosfenolpiruvato carboxiquinasa, al mismo tiempo que inhibe la ruta glucoltica. Este hecho se realiza por una disminucin de la fructosa 2,6bisfosfato, que es un potente activador de la fosfofructoquinasa.
La sntesis de las enzimas claves de la gluconeognesis est
tambin controlada por la accin de las hormonas insulina y
cortisol. La insulina reprime la sntesis de las enzimas mientras
el cortisol la induce. Esto es fcilmente entendible; as, en una

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 5.3. Puntos de control en la ruta gluconeognica.

dieta rica en grasas y pobre en glucosa, sta tiene que ser sintetizada a partir de lactato o glicerol (procedente de la hidrlisis
de trigliceridos), o de los aminocidos glucognicos. Todos estos procesos son estimulados por el cortisol.
Por otra parte, en la ruta gluconeognica existen reacciones
del xido-reduccin que son controladas por la disponibilidad
celular de coenzimas oxidadas y reducidas que se producen en
el proceso de oxidacin de los cidos grasos y en el ciclo de
Krebs.
De forma resumida podemos decir que el control fino de la
ruta gluconeognica se lleva a cabo por las relaciones
NAD ,
NADH

NADP ,
NADPH

ATP
ADP

el acetil-CoA y algunos intermediarios del ciclo de Krebs, mientras el control de la sntesis depende de seales hormonales.

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

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GLUCOGNESIS Y GLUCOGENLISIS
El anabolismo y el catabolismo del glucgeno se producen
a travs de diferentes rutas que estn controladas con precisin
y relacionadas entre s, con el fin de mantener los niveles de
glucosa sangunea adecuados y disponer de glucosa 6-fosfato
para la produccin de ATP.
Prcticamente todas las clulas de animales superiores contienen glucgeno pero las fuentes ms ricas son el tejido muscular y el hgado. En un hombre de 70 kg de peso, el peso del
tejido muscular es aproximadamente la mitad y el del glucgeno 245 g (0,7%), mientras el hgado pesa aproximadamente
1.800 g y el glucgeno que contiene 110 g (6,1%). El hgado
es, pues, el principal reservorio de carbohidratos que se almacena como glucgeno; este proceso anablico se denomina
glucognesis. El glucgeno es una fuente de glucosa mediante
un proceso catablico que se conoce como glucogenlisis. Ambos procesos siguen rutas diferentes y estn regulados independientemente.
Como se ha estudiado anteriormente, el glucgeno es un
homopolisacrido de unidades de glucosa unidas mediante enlaces D (1 o 4) glucosdicos con ramificaciones D (1 o 6) cada
7-12 unidades.
La glucgeno fosforilasa hidroliza los enlaces D (1 o 4) glucosdicos del extremo no reductor de la cadena utilizando fosfato inorgnico:

Los polisacridos de
la dieta se metabolizan mediante hidrlisis a monosacridos.

El almidn y el glucgeno se movilizan


mediante fosforilacin.

(glucosa)n  HPO42 o (glucosa)(n  1)  glucosa 1-fosfato


'G 0c 0,73 kcal/mol
Aunque la reaccin, de acuerdo con el valor de 'G 0c, es reversible, en condiciones intracelulares procede en la direccin
de hidrlisis. La glucgeno fosforilasa acta repetidamente hasta encontrar una ramificacin con enlaces D (1 o 6), entonces
entra en accin la enzima D (1 o 6) glucosidasa, una enzima
desramificante, que hidroliza la unin D (1 o 6).
La glucgeno fosforilasa est situada en un punto estratgico entre el glucgeno almacenado como combustible y el sistema enzimtico para la utilizacin del mismo.
La actividad, como veremos, est regulada con precisin
por una serie de controles bioqumicos y fisiolgicos interconectados.
La fosforilasa del msculo esqueltico, un dmero o un
tetrmero de 97 kcal, puede existir en dos formas interconvertibles: una fosforilasa a y una fosforilasa b; cada una de ellas,
segn el modelo alostrico concertado, se puede encontrar en

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

dos formas: activa (R) e inactiva (T). La fosforilasa b se convierte en a mediante fosforilacin, un proceso catalizado por la
fosforilasa quinasa (Fig. 5.4). La fosforilasa a se desactiva por
hidrlisis del fosfato, una reaccin catalizada por la protena
fosfatasa 1, una fosfatasa que se encuentra en la clula abundantemente.

Figura 5.4. La fosforilasa puede adoptar en cualquiera de sus formas, a y b,


una conformacin T (tensa, inactiva) o R (relajada, activa). La forma b est
casi siempre en el estado T y la forma a, en estado R.

En la regulacin de la
degradacin del glucgeno intervienen
tres factores o seales: metablicas, hormonales y neuromusculares.

La fosforilasa b muscular slo se activa en presencia de elevadas concentraciones de AMP, que acta alostricamente,
unindose al centro activo de la enzima y alterndo la conformacin de la fosforilasa b. El ATP y la glucosa 6-fosfato actan
como efectores negativos. Cuando el msculo requiere energa
(AMP concentracin alta), la fosforilasa b se activa. Por el contrario, la fosforilasa a es totalmente activa independientemente
de los niveles de AMP, ATP y glucosa 6-fosfato.
En la mayora de las condiciones fisiolgicas, la proporcin
de enzima activa es determinada por las velocidades de fosforilacin y desfosforilacin.
La regulacin alostrica de la fosforilasa heptica difiere de
la muscular en dos aspectos importantes:
1. El AMP no activa la fosforilasa b heptica.
2. La fosforilasa a del hgado se desactiva por la unin de
glucosa.
Esto es, la glucosa desplaza el equilibrio de la forma a de R
a T. El hecho principal de la degradacin del glucgeno heptico es liberar glucosa cuando el nivel de esta sustancia en sangre es bajo.
La fosforilasa existe tambin en dos formas: fosforilada,
que es activa y desfosforilada, inactiva. Esta enzima es calciodependiente, en su estado no fosforilado, posee una Km elevada gracias a la presencia del in Ca2; a concentraciones citoslicas normales, la enzima es prcticamente inactiva. La

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

fosforilacin de la enzima por una protena quinasa de AMPcclico aumenta la afinidad de la enzima Ca2 reduciendo el
valor de la Km.
Todas estas etapas de la glucogenlisis se relacionan de una
forma continua mediante factores en que la seal de regulacin
inicial se va ampliando mediante un proceso en cascada (Fig.
5.5). Una molcula de AMP-c activa varias de las protena quinasas las cuales actan transformando muchas de fosforilasa b
en a, y as sucesivamente.

Figura 5.5. Reacciones en cascada. Sirven de control y para amplificar


la seal inicial hasta miles de veces.

De forma resumida se puede indicar que en la regulacin


de la glucogenlisis intervienen tres factores:
a) Las seales metablicas intracelulares como la relacin
ATP/ADP; un valor alto de la misma inhibe la ruta glucogenoltica.
b) Seales hormonales. La epinefrina activa la adenil ciclasa, que a su vez activa la cascada glucogenoltica.
c) Estimulacin renal. Los impulsos neuromusculares provocan la liberacin de Ca2, el cual activa simultneamente la contraccin muscular y la fosforilasa quinasa
que inicia la activacin de la glucogenlisis.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Las reacciones en
cascada controlan y
amplifican la seal
hormonal en la degradacin del glucgeno.

El proceso inverso, la glucognesis, comienza con el intermediario central del metabolismo de carbohidratos: la glucosa
6-fosfato. La primera reaccin es la conversin de glucosa 6fosfato en glucosa 1-fosfato por la fosfoglucomutasa:
fosfoglucomutasa

glucosa 6-fosfato o glucosa 1-fosfato


'G 0c 1,74 kcal/mol
Posteriormente, la glucosa 1-fosfato se convierte en UDPglucosa. Esta reaccin, catalizada por la UDP-pirofosforilasa,
requiere UTP y es esencialmente irreversible porque el pirofosfato formado se hidroliza rpidamente por una pirofosfatasa a
dos molculas de fosfato:
UDP-pirosforilasa

glucosa 1-fosfato  UTP o


pirosfosfatasa
o UDP-glucosa  PP o 2Pi
La UDP-glucosa es la
forma de glucosa activada para la sntesis
de glucgeno.

En el segundo paso en la formacin de glucgeno la UDPglucosa es transferido al extremo no reductor de la glucosa terminal formando enlaces D (1 o 4) entre el tomo 1 del residuo
glucoslico aadido y el 4-hidrxilo del residuo glucosa de la
cadena. La reaccin es catalizada por la glucgeno sintasa:
glucogeno sintasa

UDP-glucosa  (glucosa)n o UDP  (glucosa)n  1


La glucgeno sintasa existe en dos formas: una de ellas es
poco activa en ausencia de glucosa 6-fosfato. Cuando la concentracin celular de glucosa 6-fosfato aumenta, acta como
modulador positivo de la glucgeno sintasa elevando su actividad por encima de 40 veces la inicial, favoreciendo la sntesis
de glucgeno.
La glucgeno sintasa no es capaz de originar enlaces D
(1 o 6) en los puntos de ramificacin. Sin embargo, hay una
enzima ramificante, la oligo (1,4 o 1,6) glucosil transferasa,
que transfiere segmentos de cadena de seis a siete unidades
desde el extremo en crecimiento hasta otro punto de la misma
cadena o hasta una cadena vecina. La ramificacin se fija mediante un enlace D-1,6-glucoslico. Cada ramificacin puede
ser alargada por adicin de ms unidades de glucosa hasta que
haya suficientes para transferir otras secuencias de seis a 10
unidades. El crecimiento arboriforme contina, hasta un determinado tamao sin que se conozca, hasta ahora, el mecanismo
que limita su tamao final (Fig. 5.6).
La regulacin de la biosntesis de glucgeno est relacionada coordinadamente con la de la degradacin y cuando esta
ruta se encuentra activa, como en el ejercicio, la biosntesis se
halla inhibida.

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

63

Figura 5.6. La degradacin y la sntesis de glucgeno estn relacionadas


y reguladas indistintamente.

Cuando la epinefrina desencadena la produccin de AMP-c,


se activa la protena quinasa dependiente de AMP-c. Esta enzima ejerce dos efectos simultneos: estimula la glucogenlisis
aumentando la conversin de fosforilasa b en a, y al mismo
tiempo inhibe la sntesis de glucgeno favoreciendo la conversin de glucgeno sintasa forma I en la forma D, que es virtualmente inactiva en ausencia de suficiente glucosa 6-fosfato.
Si el ATP se utiliza en la extraccin muscular, la acumulacin de AMP activa alostricamente la fosforilasa b a fin de activar el proceso glucogenoltico. Cuando desciende la actividad
muscular se reduce la utilizacin de glucosa 6-fosfato, aumentando su concentracin y activando alostricamente la glucgeno sintasa D y favoreciendo la glucognesis. Al mismo tiempo,
la glucosa 6-fosfato inhibe la fosforilasa quinasa AMP-dependiente. En el msculo en reposo, la mayor parte de la glucgeno sintasa se encuentra en la forma I (activa), mientras la fosforilasa se encuentra en la forma b (inactiva). En estas condiciones, el estado metablico del msculo es de sntesis de
glucgeno. Cuando se acumula el glucgeno, ste acta como
un regulador activando la fosforilasa quinasa y por consiguiente la glucogenlisis, e inhibiendo la glucgeno sintasa y con ello
la sntesis de glucgeno.
En la figura 5.7 se muestra el control de la glucognesis y la
glucogenlisis en el msculo. La protena quinasa AMP-c dependiente, la fructosa 6-fosfato y el propio glucgeno intervienen en la regulacin de la degradacin y biosntesis del glucgeno. Cuando ste se encuentra en exceso, activa la protena
quinasa para favorecer la glucogenlisis e inhibe la fosfatasa
para que la glucgeno sintasa permanezca en la forma inactiva
y no tenga lugar la sntesis de glucgeno. Un efecto similar apa-

Las condiciones que


activan la sntesis de
glucgeno inhiben su
degradacin y viceversa.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 5.7. El control de la glucognesis y la glucogenlisis en el msculo.

rece cuando la clula requiere energa iniciado por la epinefrina. Por otra parte, un exceso de glucosa 6-fosfato activa el
paso de la forma D a la I favoreciendo la glucognesis e inhibe
la fosfarilasa quinasa para impedir la glucogenlisis.
El control de los procesos glucognico y glucogenoltico en
el hgado es muy similar al que tiene lugar en el msculo, aunque existen algunas diferencias estructurales. La hormona que
inicia los procesos de movilizacin de la glucosa del glucgeno
heptico es el glucagn. Esta hormona es liberada por las clulas D del pncreas en respuesta a un nivel bajo de glucosa sangunea y funciona a travs del sistema protena quinasa AMP-c

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

dependiente. Como en las clulas musculares, esta enzima activa la glucogenlisis e inhibe la glucognesis, aunque la epinefrina tambin provoca estos efectos en el hgado.
En el hgado la glucosa libre acta como una sustancia reguladora y, cuando alcanza niveles superiores a los normales,
inhibe la degradacin de glucgeno y favorece la sntesis del
mismo. As, un aumento de la concentracin de glucosa activa
la fosforilasa a fosfatasa aumentando la fosforilasa b, que es la
forma poco activa en la ruta glucogenoltica, y, al mismo tiempo, activa la fosfoprotena fosfatasa para favorecer la forma I,
activa, de la glucgeno sintasa.

LOS CICLOS DE SUBSTRATO


Un par de reacciones en que el substrato de una enzima es
el producto de otra y viceversa constituye un ciclo de substrato.
Un claro ejemplo es la fosforilacin de la fructosa 6-fosfato en
direccin glucoltica a fructosa 1,6-bisfosfato y la hidrlisis de
sta nuevamente a fructosa 6-fosfato.
Antes a estos procesos se les denominaba ciclos ftiles o
intiles, porque se crea que en este reciclado no se produca
una ganancia neta de ninguno de los compuestos implicados
para poder seguir siendo metabolizados. Sin embargo, en condiciones normales, al estar dichas reacciones catalizadas por
enzimas distintas, no son activas al mismo tiempo, ya que ambas suelen estar controladas por efectos alostricos inversos.
As en las reacciones anteriores se ha demostrado que, durante
la gluconeognesis, se produce fosforilacin de la fructosa 6fosfato a fructosa 1,6-bisfosfato. Este proceso cclico se ha observado en otros pares de reacciones opuestas irreversibles.
Este hecho, que se entendi como un fallo o error en el control
metablico, se considera ahora una ventaja metablica desde
el punto de vista biolgico. As, una posibilidad es que los ciclos de substrato amplifiquen seales metablicas (Fig. 5.8).

Figura 5.8. El ciclo de sustrato fructosa 6-fosfato-fructosa 1,6-bisfosfato

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65

66

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Supongamos que la velocidad de conversin de fructosa


6-fosfato (F6P) en fructosa 1,6-bisfosfato (F1,6BP) sea 90 y la
de F1,6BP en GGP, 80, originando un flujo neto en direccin
glucoltica de 90  80 10. Imaginemos que un efector alostrico, como puede ser el AMP, incrementa la velocidad
FGP o F1,6BP en 20% siendo, por tanto, sta
90  80 u 20
100

108

y reduce inversamente la direccin F1,6BP FGP otro 20% en


80  80 u 20
100

64

El nuevo flujo ser 64  10 54, de tal manera que se habra


producido un incremento en el flujo neto de
54 u 100
10

540%

Otra posible funcin de los ciclos de substrato es la generacin de calor producido por la hidrlisis del ATP. Esto es, la
hidrlisis de ATP origina calor que sirve para mantener el entorno celular a una temperatura adecuada para que las enzimas desarrollen una actividad ptima (Fig. 5.9).

o F1,6BP operando para producir caFigura 5.9. El ciclo de substrato FGP m


lor por hidrlisis del ATP, ya que la reaccin neta es ATP o ADP  Pi
('G0c 7,3 kcal/mol).

Este hecho es de gran importancia en algunas especies de


insectos que pueden volar aunque la temperatura ambiental
est muy por debajo de la corporal.

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GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

RESUMEN
La gluconeognesis es la ruta central para la biosntesis
de carbohidratos a partir de precursores no hidrocarbonados sencillos como lactato, piruvato o algunos aminocidos.
Esta ruta es comn a la glucoltica salvo en las tres
reacciones irreversibles glucolticamente y que son sobrepasadas en reacciones energticamente favorables en direccin gluconeognica. As el piruvato es convertido en
fosfoenolpiruvato mediante la secuencia mitocondrial piruvato-oxalacetato-malato, seguida de la secuencia citoslica
malato-oxalacetato-fosfoenolpiruvato.
El segundo paso es la hidrlisis de fructosa 1,6-bisfosfato a fructosa 6-fosfato y el tercero es la hidrlisis de glucosa 6-fosfato por la glucosa 6-fosfatosa para originar glucosa. La ruta requiere seis enlaces fosfato ricos en energa
y es regulada, principalmente, por la primera enzima, la
piruvato carboxilasa. La gluconeognesis tambin se puede lograr a partir de algunos aminocidos o intermediarios
del ciclo de Krebs.
Los procesos de degradacin y sntesis del glucgeno
en clulas musculares y hepticas estn regulados con precisin y mediante seales metablicas y hormonales. Los
ciclos de substrato sirven para amplificar seales metablicas y pueden generar calor muscular local.

APLICACIONES CLNICAS
Se conocen hasta ocho enfermedades en el almacenamiento del glucgeno (Tabla 5.1). La enfermedad de Cori o de tipo
III se origina como consecuencia de una deficiencia en la enzima desramificante y, por ello, la degradacin del glucgeno
est limitada quedando molculas mayores que las normales.
Esto es, las molculas son mayores debido a que las regiones
internas del glucgeno no pueden ser degradadas por la glucgeno fosforilasa.
Despus de una alimentacin normal, el glucgeno heptico muestra una estructura normal, pero, a medida que el organismo requiere glucosa, produce glucosa 1-fosfato que la convierte en glucosa 6-fosfato y que, por hidrlisis, libera glucosa a
la sangre. Las cadenas externas del glucgeno van disminuyendo progresivamente hasta que no se puede producir ms glu-

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68

Enfermedad

Defecto enzimtico

Tejido u rgano
afectado

Glucgeno en el rgano
afectado

Caractersticas clnicas

Enfermedad de
von Gierke

Glucosa-6-fosfatasa

Hgado y rin

Cantidad aumentada;
estructura normal

Alargamiento masivo del hgado. Falla para


desarrollarse. Hipoglucemia intensa, cetosis,
hiperlipemia

II

Enfermedad de
Pompe

-1,4-Glucosidasa
(lisosmica)

Todos los rganos

Aumento masivo en cantidad;


estructura normal

Insuficiencia cardiorrespiratoria que causa la


muerte normalmente antes de los dos aos edad.

III Enfermedad de
Cori

Amilo-1,6-Glucosidasa
(enzima desramificante)

Msculos e hgado

Cantidad aumentada; ramas


externas cortas

Parecidas a los del tipo I pero ms leves

IV Enfermedad de
Anderson

Enzima ramificante
(-1,4 -1,6)

Hgado y bazo

Cantidad normal; ramas


externas muy largas

Cirrosis heptica progresiva. Insuficiencia heptica.

Enfermedad de
Mc Ardle

Fosforilasa

Msculo

Cantidad moderadamente
aumentada; estructura normal

Capacidad limitada para realizar ejercicios intensos


debido a calambres musculares dolorosos

VI Enfermedad de
Hers

Fosforilasa

Hgado

Cantidad aumentada

Parecidas a los del tipo I pero ms leves

VII Enfermedad de
Tauri

Fosfofructoquinasa

Msculo

Cantidad aumentada;
estructura normal

Parecidas a los del tipo V

VIII

Fosforilasa quinasa

Hgado

Cantidad aumentada;
estructura normal

Agrandamiento ligero del hgado. Hipoglucemia


leve

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

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Tabla 1.1 Algunas enfermedades por almacenamiento de glucgeno.

GLUCONEOGNESIS GLUCOGNESIS-GLUCOGENLISIS

cosa 1-fosfato porque las unidades de glucosa estn unidas por


enlaces D (1 o 6). En este punto la hipoglucemia estimula la
secrecin de glucagn y otras hormonas que estimulan la gluconeognesis, se produce ms glucosa y la liberacin de cidos
grasos de las clulas adiposas. Se origina cetonemia, ya que el
hgado capta una gran cantidad de cidos grasos y los convierte en cuerpos cetnicos. A los pacientes con esta enfermedad
se debe suministrar alimentos ricos en carbohidratos en pequeas y frecuentes tomas.

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69

TEMA 6

Metabolismo lipdico

Digestin, movilizacin y transporte de los lpidos.


b-oxidacin de los cidos grasos. Rendimiento
energtico de la oxidacin de los cidos grasos.
Control de la oxidacin de los cidos grasos.

Los lpidos, como grupo heterogneo de sustancias, desempean funciones muy diversas en el organismo, ya que
actan como vitaminas, hormonas, componentes de membranas biolgicas o reserva energtica, almacenndose principalmente en el tejido adiposo en forma de triacilglicridos. En el
caso de los mamferos, el metabolismo lipdico comienza con
la digestin de las grasas ingeridas en la dieta, su transporte a
travs de las lipoprotenas, su posterior almacenamiento y su
movilizacin cuando son necesarios para la obtencin de
energa. En este sentido, los cidos grasos representan la principal fuente de almacenamiento de energa en muchos organismos, ya que suponen una ventaja con relacin a los polisacridos, puesto que en los cidos grasos el carbono est casi
completamente reducido y, por lo tanto, su oxidacin genera
ms energa, en forma de ATP, que la de otros compuestos de
carbono como los glcidos.

DIGESTIN, MOVILIZACIN
Y TRANSPORTE DE LOS LPIDOS
Digestin de los lpidos
La digestin de los lpidos comienza en el estmago mediante una lipasa estable frente a cidos. La velocidad de
hidrlisis es muy lenta, los triacilglicridos son apenas digeridos a nivel gstrico, debido a que el pH del estmago es muy
cido y no puede actuar la lipasa gstrica. En la regin inferior
del estmago los triacilglicridos se mezclan con protenas, hi-

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72

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La hidrlisis de los
triacilglicridos se
produce fundamentalmente en el intestino
delgado por accin
de la lipasa pancretica.

dratos de carbono, jugo gstrico y otras sustancias; la degradacin de esta mezcla, junto con la accin motriz del estmago,
origina una sustancia denominada quimo. Al mismo tiempo
que el quimo pasa al duodeno, se mezcla con el jugo pancretico, el cual contiene sales biliares, lipasa pancretica y estearasas, as como iones bicarbonato, que neutralizan la actividad
del quimo.
La hidrlisis de los triacilglicridos se produce fundamentalmente en el intestino delgado por accin de la lipasa pancretica, esta enzima se sintetiza en el pncreas en forma de zimgeno siendo secretada al duodeno a travs del conducto linftico.
El zimgeno es activado al ser hidrolizado de forma especfica
por la tripsina, requiriendo para su actividad la presencia de sales biliares e iones Ca2. La lipasa pancretica es especfica
para steres en la posicin D del glicerol, de manera que se escinden cidos grasos de las posiciones C-1 y C-3, dando como
resultado cidos libres y E-monoacilgliceroles. La forma purificada de la enzima es fuertemente inhibida por los cidos biliares, normalmente presentes en el intestino delgado durante la
digestin de los lpidos, esta inhibicin se supera mediante la
accin de la colipasa, una protena de 12 kDa que se une tanto
a la interfase lpido-agua como a la lipasa, anclndose y activando a la enzima.
Los fosfolpidos son degradados mediante fosfolipasas especficas, que se sintetizan en el pncreas en forma de zimgenos, y son activadas como las lipasas por proteolsis mediada
por tripsina, y de igual modo que ellas requieren la presencia
de cidos biliares e iones calcio para su actividad y son inhibidas por los cidos biliares.
Las estearasas son una familia de enzimas menos especficas, que catalizan la hidrlisis de otro tipo de lpidos tales como
steres de colesterol, monoacilgliceroles u otros steres como la
vitamina A con cidos carboxlicos. A diferencia de las anteriores, estas enzimas requieren la presencia de los cidos biliares
para su actividad.
Las sales biliares emulsionan los triacilglicridos y steres
de los cidos grasos de cadena larga, hacindolos accesibles a
la accin hidroltica de las lipasas y estearasas intestinales.
Este proceso de emulsin es posible gracias a la naturaleza
anfiptica de las sales biliares, que pueden formar micelas y
stas solubilizar otros lpidos, tales como fosfolpidos y cidos
grasos.
Las micelas son transportadas desde el lumen del intestino
delgado hasta las microvellosidades de las clulas epiteliales del
mismo, localizacin en la cual los cidos grasos de cadena larga
se disocian de las micelas y difunden a travs de la membrana

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METABOLISMO LIPDICO

73

hasta el citoplasma celular. Las sales biliares son reabsorbidas


en el leon y transportadas va vena mesentrica superior a la
porta y de sta al hgado, donde entran de nuevo a formar parte de la bilis.
Los cidos grasos que llegan a la superficie de las clulas
son captados y utilizados para la produccin de energa principalmente en las mitocondrias.

Transporte de los lpidos: Lipoprotenas


Las lipoprotenas son el sistema se transporte de lpidos
por el organismo; ayudan a mantener en forma solubilizada
unos 500 mg de lpidos por cada 100 mL de sangre. Los quilomicrones, que son las lipoprotenas que transportan a los
triacilglicridos exgenos, llevan la grasa del alimento desde el
intestino a los tejidos perifricos, especialmente al corazn, el
msculo y el tejido adiposo (Fig. 6.1). Las VLDL (lipoprotenas de muy baja densidad) desempean un papel muy parecido pero para los triacilglicridos endgenos (sintetizados en el
hgado) (Fig. 6.2). Los triacilglicridos de ambas lipoprotenas

Los cidos grasos


que llegan a la superficie de las clulas
son captados y utilizados para la produccin de energa principalmente en las mitocondrias.

Figura 6.1. Destino metablico de los quilomicrones

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 6.2. Destino metablico de las VLDL. Formacin de las LDL.

Las lipoprotenas son


el sistema se transporte de lpidos por
el organismo.

Las HDL desempean


el papel de eliminar
el exceso de colesterol de los tejidos y
devolverlo al hgado
para su metabolismo
o excrecin.

se hidrolizan a glicerol y cidos grasos en las superficies internas de los capilares de los tejidos perifricos. Esta hidrlisis
comporta una activacin de la enzima extracelular lipoprotena lipasa por la apoprotena C-II. Algunos de estos cidos grasos liberados son absorbidos por las clulas prximas, mientras que otros, debido a que son bastante insolubles, forman
complejos con la albmina srica para ser transportados a clulas ms distantes. Tras la absorcin en la clula, el glicerol y
los cidos grasos pueden ser utilizados para obtener energa o,
en las clulas adiposas, utilizarse para volver a sintetizar triacilglicridos.
A partir de la VLDL se obtienen las IDL, y los quilomicrones
se transforman en restos de quilomicrones; ambos tipos de restos son captados por el hgado a travs de receptores especficos y degradados posteriormente en los lisosomas hepticos.
La apoprotena B-100 se utiliza para la sntesis de las LDL (a
partir de las IDL), siendo stas las lipoprotenas que transportan el colesterol a los tejidos (Fig. 6.2). Las HDL desempean
el papel de eliminar el exceso de colesterol de los tejidos y devolverlo al hgado para su metabolismo o excrecin.

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METABOLISMO LIPDICO

75

Movilizacin de los lpidos almacenados


El transporte de la grasa de la dieta a los lugares de reserva,
generalmente, no est regulado. La falta de control en este proceso es evidente, como lo demuestra la existencia de la obesidad en el ser humano, en la que la grasa se almacena en exceso respecto a la necesidad de aporte energtico. Sin embargo,
la liberacin de la grasa de los depsitos de almacenamiento
del tejido adiposo se controla hormonalmente, para satisfacer
las necesidades del organismo en la generacin de energa.
La liberacin de la energa metablica almacenada en los
triacilglicridos es comparable con la movilizacin de la energa
de los hidratos de carbono almacenada en el glucgeno de los
animales. El primer paso de la degradacin de la grasa, su hidrlisis a glicerol y cidos grasos, se regula hormonalmente. La primera reaccin, que estudiaremos ms adelante, se regula mediante una cascada enzimtica en la que interviene el AMP cclico (AMPc); segn cul sea el estado fisiolgico del individuo,
intervienen distintas hormonas que activan la protena quinasa,
que a su vez activa a una enzima sensible a las hormonas, denominada triacilglicerol lipasa, que acta sobre los triacilglicridos.
Los productos de hidrlisis de los triacilglicridos salen del
adipocito por difusin pasiva y llegan al plasma sanguneo,
donde los cidos grasos se unen a la albmina. Posteriormente,
los cidos grasos se liberan de la albmina y son captados por
los tejidos. Esta captacin de cidos grasos al interior de las clulas est dirigida fundamentalmente por un gradiente de concentracin. La mayor parte del glicerol liberado al torrente sanguneo se capta por las clulas hepticas, donde se utiliza como
precursor gluconeognico de la glucosa.

b-OXIDACIN DE LOS CIDOS GRASOS


Una vez hidrolizados los triacilglicridos, los cidos grasos
son oxidados por un mecanismo que Knoop (1905) denomin
E-oxidacin. La E-oxidacin consiste en la liberacin de dos
tomos de carbono a la vez (en forma de acetil-CoA) del extremo carboxlico de la molcula, oxidndose para ello el carbono
E del cido graso original. Es el principal proceso por el cual los
cidos grasos generan energa.
Varias enzimas, conocidas como oxidasas de los cidos grasos, se encuentran en las mitocondrias, ntimamente asociadas
a las enzimas de la cadena respiratoria. Estas enzimas catalizan
la oxidacin de los cidos grasos con el consiguiente desprendimiento sucesivo de molculas de acetil-CoA.

La b-oxidacin consiste en la liberacin


de dos tomos de
carbono a la vez (en
forma de acetil-CoA)
del extremo carboxlico de la molcula,
oxidndose para ello
el carbono b del cido graso original.

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76

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Secuencia de reacciones de la b-Oxidacin


La secuencia de reacciones de la E-oxidacin es la siguiente:
1 reaccin: Activacin de los cidos grasos mediante
su unin con el CoA. Es una reaccin doble que requiere la
energa del ATP. ste es el nico paso en la degradacin de los
cidos grasos que precisa la energa de dicho compuesto:
a)

Mg2

R  C H2  C H2  COOH  ATP o


tioquinasa
cido graso
o R  CH2  CH2  CO  AMP  PPi
acil-AMP
el PPi es hidrolizado por una fosfatasa.
PPi  H2O o 2 Pi

b)

R  CH2  CH2  CO  AMP  CoA a SH o


acil-AMP
o R  CH2  CH2  CO  S  CoA  AMP
acil-CoA
o 2 ADP
AMP  ATP m
El acil-CoA obtenido es el cido graso activado.

La carnitina no slo
es el transportador de
cidos grasos de cadena larga al interior
mitocondrial, sino
que, adems, cumple
la funcin de mantener separados el almacn de coenzima
A citoplasmtico del
mitocondrial.

Las enzimas acil-CoA sintetasas convierten a los cidos


grasos libres en tiosteres de coenzima A, ricos en energa. La
formacin de una molcula de acil-CoA de cadena larga tiene
lugar a travs de un intermedio, el acil-adenilato unido a la
enzima, en esta reaccin se requiere ATP, liberndose pirofosfato en el proceso. Posteriormente, el anin tiolato de la coenzima A reacciona con el tomo de carbono carbonlico del intermediario para generar el tioster acil-CoA. Por ltimo, el
acil-CoA y el AMP se liberan de la enzima, mientras que el pirofosfato resulta hidrolizado en dos molculas de fosfato (Fig.
6.3). Este proceso de activacin tiene lugar en el citoplasma
celular.

Transporte de los Acil-CoA al interior


mitocondrial: Transferencia a la carnitina
Los acil-CoA generados en el citoplasma celular no pueden
atravesar la membrana interna mitocondrial, ya que es imper-

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METABOLISMO LIPDICO

Figura 6.3. Esquema de la activacin de un cido graso. Ade

77

Adenosina.

meable a estos compuestos. Sin embargo, las siguientes etapas


de la E-oxidacin tienen lugar en la matriz mitocondrial.
Los cidos grasos de cadena corta (2-10 tomos de C) pueden atravesar libremente las membranas mitocondriales, mientras que los cidos grasos de cadena larga tienen que ser transportados a la matriz mitocondrial para ser oxidados.
El transportador de los grupos acilo es la L-carnitina (4-trimetilamino-3-hidroxibutirato). La carnitina aciltransferasa I, localizada en la cara externa de la membrana mitocondrial interna, cataliza la transferencia del grupo acilo de cadena larga
desde la molcula de acil-CoA al grupo hidroxilo de la carnitina, formndose el respectivo ster O-acilcarnitina; esta molcula es transportada al interior de la mitocondria por la protena
carnitina-acilcarnitina translocasa. La carnitina aciltransferasa
II, localizada en la cara interna de la membrana mitocondrial
interna, cataliza la transferencia del grupo acilo graso de la Oacilcarnitina a la coenzima A procedente del interior mitocondrial, regenerndose as la molcula de acil-CoA de cadena larga en el interior mitocondrial (Fig. 6.4), con lo que ya puede
comenzar la siguiente reaccin de la E-oxidacin.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 6.4. Transporte de los acil-CoA de cadena larga al interior de la


mitocondria. (A) Esquema del transporte. (B) Reacciones que se producen.

La carnitina aciltransferasa I es inhibida por el malonil-CoA,


metabolito intermedio de la lipognesis, que acta de elemento
de control para la E-oxidacin.
Este mecanismo de lanzadera requiere la existencia de reservas de coenzima A citoslicas e intramitocondriales. La car-

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METABOLISMO LIPDICO

nitina no slo es el transportador de cidos grasos de cadena


larga al interior mitocondrial, sino que adems cumple la funcin de mantener separados el almacn de coenzima A citoplasmtico del mitocondrial.
Una vez que un cido graso ha sido activado y transportado
a la matriz mitocondrial (lo que constituye la primera reaccin
del proceso), cada ciclo de oxidacin de un acil-CoA sigue la siguiente secuencia:
2 reaccin: Oxidacin (deshidrogenacin) para dar un
derivado enlico, el acil, D-E-insaturado-CoA;
3 reaccin: Hidratacin del doble enlace resultante, dando un E-hidroxiacil-CoA;
4 reaccin: Oxidacin del E-hidroxiacil-CoA por deshidrogenacin, formndose un cetoacil-CoA;
5 reaccin: Liberacin o escisin de una molcula de
acetil-CoA mediante entrada de otra molcula de
CoA a SH, y quedando formado un acil-CoA con dos
tomos de carbono menos que el cido graso original.
El acetil-CoA formado en la matriz mitocondrial procedente de
la E-oxidacin de los cidos grasos, al igual que el acetil-CoA
procedente del piruvato, entra en el ciclo de Krebs, donde se
oxida a CO2. Por lo tanto, la E-oxidacin tambin genera transportadores electrnicos reducidos, que, al reoxidarse en las mitocondrias, producen ATP a travs de la fosforilacin oxidativa
del ADP.
2 reaccin: Oxidacin (deshidrogenacin). La acil-CoA
deshidrogenasa, que lleva como cofactor el FAD, cataliza la
deshidrogenacin del acil-CoA entre los carbonos D y E.

3 reaccin: Hidratacin del doble enlace. Es una reaccin catalizada por la enoil-hidrasa o enoil-CoA hidrasa, en la
que la aparicin de un OH en el producto final dar lugar a
que exista una forma D y otra L.

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80

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

enoil-hidrasa

R  CH CH  CO  S  CoA  H2O o


acil-D-E-insaturado-CoA
OH
l
o R  CH  CH2  CO  S  CoA
L-E-hidroxiacil-CoA

L-3-hidroxiacil-CoA
Los cidos grasos se
oxidan mediante ciclos repetidos de oxidacin, hidratacin,
oxidacin y liberacin o escisin de
una molcula de acetil-CoA

4 reaccin: Oxidacin del hidroxiacil-CoA. La deshidrogenacin, catalizada por la E-hidroxiacil-CoA deshidrogenasa


con cofactor NAD, da lugar a la formacin de un cetoacilCoA. Existen dos formas de la enzima, especficas para las formas D y L del hidroxiacil-CoA.

5 reaccin: Liberacin o escisin de una molcula de


acetil-CoA. Se produce por entrada de una molcula de
coenzima A, lo que ocasiona la liberacin de acetil-CoA, y se
forma un acil-CoA con dos tomos de carbono menos que el
acil-CoA original.
tiolasa

R  CO  CH2  CO  S  CoA  CoA a SH o


E-cetoacil-CoA
o CH3  CO  S  CoA  R  CO  S  CoA
acetil-CoA
acil-CoA
El acetil-CoA se incorpora al ciclo de
Krebs, mientras que
el acil-CoA formado
vuelve a pasar otra
vez por el ciclo de la
b-oxidacin a partir
de la 2 reaccin.

El acetil-CoA se incorpora al ciclo de Krebs, mientras que el


acil-CoA formado vuelve a pasar otra vez por el ciclo de la Eoxidacin a partir de la 2 reaccin. De esta forma, un cido
graso de cadena larga (y nmero par de tomos de carbono)
puede ser degradado completamente a acetil-CoA tras sucesivas vueltas para seguir despus el ciclo de Krebs.

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METABOLISMO LIPDICO

81

RENDIMIENTO ENERGTICO DE LA
OXIDACIN DE LOS CIDOS GRASOS
Para determinar el rendimiento energtico de esta ruta metablica hay que tener en cuenta que cada conjunto de oxidaciones que da lugar a una molcula de acetil-CoA produce tambin una molcula de FADH2 (flavoprotena reducida) y un
NADH. Cada una de las flavoprotenas reducidas puede originar 2 ATP, y cada uno de los NADH puede producir 3 ATP,
cuando son procesados por la cadena de transporte de electrones. Si consideramos, por ejemplo, la oxidacin del palmitoilCoA, en donde se dan siete vueltas al ciclo, ya que en la ltima
se forman dos molculas de acetil-CoA, el rendimiento total de
la E-oxidacin sera de 129 ATP. Se obtienen ocho molculas de
acetil-CoA, que, al incorporarse al ciclo de Krebs, generaran
96 ATP, siete molculas de FADH2 que dan 14 ATP, y siete
molculas de NADH que generan 21 ATP. La suma total de
molculas de ATP sera 131, pero hay que tener en cuenta que
para la activacin del cido palmtico a palmitoil-CoA se requiere la hidrlisis de una molcula de ATP para dar AMP y PPi; la
molcula de AMP se transforma en ADP mediante hidrlisis de
otra molcula de ATP, por tanto, a los 131 ATP obtenidos hay
que restarles 2 ATP de la activacin del cido graso.
La reaccin para la degradacin global del palmitoil-CoA a
ocho unidades de acetil-CoA es la siguiente:
palmitoil-CoA  7 CoA a SH  7 FAD  7 NAD+ 
 7 H2O o 8 acetil-CoA  7 FADH2  7 NADH  7 H

La reaccin para la
degradacin global
del palmitoil-CoA a
ocho unidades de
acetil-CoA es la siguiente: PalmitoilCoA + 7 CoA ~ SH +
7 FAD + 7 NAD+ + 7
H2O o 8 Acetil-CoA
+ 7 FA D H 2 + 7
NADH + 7 H+.

Y el esquema del proceso energtico de la E-oxidacin del


palmitilCoA es:
Reaccin

ATPs producidos

Oxidacin de 7 FADH2
Oxidacin de 7 NADH
Oxidacin de 8 acetil-CoA
Activacin del ac. palmtico


o 7u 2

o 7u 3

o 8 u 12

o

Palmtico + 23 O2


o 16 CO2 + 16 H2O + 129 ATP

14
21
96
2

Hemos supuesto el proceso en condiciones ideales, es decir,


consideramos que la oxidacin de acetil-CoA en una vuelta del
ciclo de Krebs rinde 12 ATP, y que las relaciones P/O para la
oxidacin de FADH2 y NADH son 2 y 3, respectivamente.
NOTA: Otros autores consideran que cada FADH2 oxidado en la cadena respiratoria genera 1,5 ATP, mientras que por cada NADH
se forman 2,5 ATP, la oxidacin del acetil-CoA a partir del ciclo

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82

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de los cidos tricarboxlicos produce 10 ATP; de esta manera la


oxidacin del palmtico producira 106 ATP.

Otra forma de obtener el rendimiento energtico es la siguiente:


Cada vuelta produce 5 ATP, como son siete vueltas:
7u5

35 ATP

Hay que restar los 2 ATP consumidos en la activacin del


cido graso (1 reaccin)
35  2

33 ATP

Cada acetil-CoA produce 12 ATP a partir del ciclo de


Krebs. Como en el caso del palmtico se producen ocho
molculas de acetil-CoA, tenemos
12 u 8

96

Luego, la oxidacin del palmtico produce:


E-oxidacin
o
ciclo de Krebs o

33 ATP
96 ATP

129 ATP

Si consideramos que cada ATP encierra una energa de


7,3  8 kcal, la energa total almacenada ser:
7,3 8 u 129 | 940 a 1.000 kcal

Oxidacin de cidos grasos de nmero


impar de tomos de carbono
Cuando se trata de un cido graso de nmero impar de
tomos de carbono, la oxidacin se realiza de forma anloga,
pero la ltima vuelta producir una molcula de propionil-CoA
y otra de acetil-CoA en lugar de las dos de acetil-CoA.
El propionil-CoA se transforma en succinil-CoA, que ingresa
directamente en el ciclo de Krebs, mediante tres reacciones catalizadas enzimticamente (Fig. 6.5):
Los cidos grasos de nmero impar de C son poco frecuentes y generalmente tienen origen vegetal.
El rendimiento energtico de la oxidacin de un cido
graso de nmero impar de tomos de carbono, como por
ejemplo el pentadecanoato (15 C), es: de la oxidacin de las 6
molculas de acetil-CoA obtenidas se generan 6 u 12 72 ATP,
otras 12 molculas de ATP se obtienen de la oxidacin de suc-

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METABOLISMO LIPDICO

Figura 6.5. Conversin del propionil-CoA en succinil-CoA.

cinil-CoA en el ciclo de los cidos tricarboxlicos. Como en la


activacin se consumen 2 ATP, y la propionil-CoA carboxilasa
utiliza 1 ATP, nos proporcionan 84  3 81 ATP. Cada vuelta al
ciclo produce 5 ATP, como son 6 vueltas, 5 u 6  30 ATP. El
rendimiento global es de 81  30 111 ATP.

Oxidacin de cidos grasos insaturados


Los cidos grasos insaturados, como el oleico o el linoleico,
son oxidados por las mismas vas que los cidos grasos saturados, pero se presentan dos dificultades especiales.
a) En primer lugar, los dobles enlaces de los cidos grasos
insaturados naturales se encuentran en posicin cis,
mientras que los intermediarios de la E-oxidacin que
llamamos genricamente acil-D-E-insaturado-CoA han
de encontrarse en posicin trans.
b) En segundo lugar, la mayora de los cidos grasos insaturados tienen colocados los dobles enlaces de forma
que la sucesiva eliminacin de restos de acetil-CoA a
partir del extremo carboxlico acaba por producir un
compuesto acil-E-J-insaturado-CoA, en lugar de un acilD-E-insaturado-CoA, y la enzima enoil-hidrasa solamente acta sobre estos ltimos.
Estos problemas se resolvieron con el descubrimiento de
una enzima, la 'E- J-cis- 'D-E-trans-enoil-CoA isomerasa, que ca-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

taliza el desplazamiento del doble enlace desde la configuracin 'E-J-cis a la 'D-E-trans (Fig. 6.6). El producto resultante es
ya un acil-D-E-insaturado-CoA sobre el que puede actuar la
enoil-hidrasa, continuando el proceso de la E-oxidacin.

Figura 6.6. Enzimas accesorias para la E-oxidacin de los


cidos grasos insaturados.

Veamos como ejemplo la oxidacin del cido oleico: El


cido oleico tiene 18 tomos de carbono y un doble enlace en
posicin 9 (18: 1'9). El oleico comienza el ciclo de la E-oxida-

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METABOLISMO LIPDICO

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cin, y en las tres primeras vueltas se producen tres molculas


de acetil-CoA y un acil-E-J-insaturado-CoA, tambin denominado acil-'3-cis-enoil-CoA

La 'E-J-cis-'D-E-trans-enoil-CoA isomerasa transforma este


E-J-insaturado-cis en un D-E-insaturado-trans

La enoil-hidrasa transforma el D-E-insaturado-trans en el


correspondiente L-E-hidroxiacil-CoA, continuando el proceso
de la E-oxidacin sin modificaciones.
Hay que tener presente que el D-E-insaturado-CoA formado
comienza su vuelta en el proceso a partir de la 3 reaccin, con
lo cual los 2 ATP que se forman normalmente a partir del
FADH2 de la 2 reaccin, no se forman en esta ocasin. Por lo
tanto, para calcular el balance energtico de la oxidacin de
un cido graso insaturado, se calcula primero el balance
energtico de su homlogo saturado y se le restan 2 ATP por
cada doble enlace que tenga el cido graso insaturado.
Cuando se trata de la oxidacin de un cido graso poliinsaturado se necesita una segunda enzima auxiliar para com-

Para calcular el balance energtico de


la oxidacin de un
cido graso insaturado, se calcula primero el balance energtico de su homlogo
saturado y se le restan 2 ATP por cada
doble enlace que tenga el cido graso insaturado.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Mediante estas dos


enzimas auxiliares
(D b-g -cis- D a-b -transenoil-CoA isomerasa
y b-hidroxiacil-CoA
epimerasa) pueden
ser degradados todos
los cidos grasos de
la naturaleza.

pletar la degradacin. Veamos como ejemplo el cido linoleico (18: '9,12). Las tres primeras vueltas del ciclo desprenden
tres molculas de acetil-CoA, llegndose a un doble enlace
'E-J-cis o '3-cis, como en el caso del oleil-CoA. Por accin de la
'E-J-cis- 'D-E-trans-enoil-CoA isomerasa se forma el ismero
'D-E-trans, que se hidrata a continuacin al correspondiente
L-E-hidroxiacil-CoA, continuando el proceso de la E-oxidacin
para desprenderse una nueva molcula de acetil-CoA. Llegamos as a la formacin de un acil-D-E-insaturado, pero cuyo
doble enlace est en posicin cis. La enoil-hidrasa acta sobre
l igualmente pero el resultado de la hidratacin es un '-hidroxiacil-CoA en lugar del L-hidroxiacil-CoA correspondiente. Esta
irregularidad se solventa con la actuacin de una segunda enzima auxiliar, la E-hidroxiacil-CoA epimerasa, que cataliza la epimerizacin del carbono E. El compuesto resultante se oxida por
la deshidrogenasa correspondiente, y contina el proceso normal de la E-oxidacin (Fig. 6.7).
Mediante estas dos enzimas auxiliares ('E-J-cis- 'D-E-transenoil-CoA isomerasa la E-hidroxiacil-CoA epimerasa) pueden
ser degradados todos los cidos grasos de la naturaleza.

CONTROL DE LA OXIDACIN DE
LOS CIDOS GRASOS
En la mayora de las
clulas, la oxidacin
de los cidos grasos
se controla por la disponibilidad de los
propios cidos grasos
para la oxidacin.

En la mayora de las clulas, la oxidacin de los cidos grasos se controla por la disponibilidad de los propios cidos grasos para la oxidacin. En los animales, esta disponibilidad se
regula mediante el control hormonal de la movilizacin de las
grasas en los adipocitos, ya que la funcin del tejido adiposos
consiste en almacenar la grasa para que sea utilizada en otras
clulas, luego tiene sentido, desde el punto de vista metablico,
que la liberacin y la degradacin de esta grasa almacenada se
regule por hormonas, que son mensajeros extracelulares.
En el hgado, la concentracin de malonil-CoA constituye
otro mecanismo regulador que controla la captacin de acilCoA desde el citosol a las mitocondrias. En este tejido, el malonil-CoA es un inhibidor de la carnitina aciltrasferasa I, luego inhibe la oxidacin de los cidos grasos, al impedir el transporte
de stos a las mitocondrias.

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METABOLISMO LIPDICO

Figura 6.7. E oxidacin del cido linoleico (C18, '9,12).

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

RESUMEN
La movilizacin de las grasas en las clulas adiposas
tiene lugar mediante la hidrlisis enzimtica de los triacilgliceroles a cidos grasos y glicerol, el proceso se controla
hormonalmente, a travs de la fosforilacin de la lipasa
dependiente de AMPc.
Una vez hidrolizados los triacilglicridos, los cidos
grasos son oxidados por un mecanismo denominados Eoxidacin, que es un proceso mitocondrial que comporta la oxidacin escalonada y la liberacin de dos tomos de carbono simultneamente en forma de acetilCoA. Los cidos grasos se activan mediante su unin a
CoA ~ SH en una reaccin doble que requiere la energa
del ATP. Esta reaccin tiene lugar en la membrana mitocondrial externa. Los acil-CoA son transportados a
travs de la membrana interna mitocondrial por la carnitina, y son oxidados en la matriz mitocondrial por una
secuencia repetida de cuatro reacciones: oxidacin (deshidratacin) ligada al FAD, hidratacin, oxidacin (deshidrogenacin) ligada al NAD, y liberacin o fragmentacin tilica por CoA ~ SH, de tal manera que cada ciclo produce una molcula de acetil-CoA. El FADH2 y el
NADH formados en las etapas de oxidacin transfieren
sus electrones al O2 por medio de la cadena respiratoria,
mientras que el acetil-CoA formado en la reaccin de liberacin o tilisis, entra, generalmente, en el ciclo de
Krebs por condensacin con oxalacetato, y el acil-CoA
formado con dos tomos de carbono menos que el cido graso original, repite ciclo en la primera reaccin de
oxidacin.
Varias enzimas, conocidas como oxidasas de los cidos grasos, que se encuentran en las mitocondrias ntimamente asociadas a las enzimas de la cadena respiratoria, catalizan la oxidacin de los cidos grasos.
En la oxidacin de las cadenas de cidos grasos con un
nmero impar de tomos de carbono se produce una
molcula de propionil-CoA.
En la oxidacin de los cidos grasos insaturados se necesitan dos enzimas auxiliares para transformar los dobles
enlaces de la forma cis a la trans y de la posicin 'E-J a
'D-E, estas enzimas son la E-hidroxiacil-CoA epimerasa
(enoil-CoA isomerasa) y la 'E-J-cis- 'D-E-trans-enoil-CoA
isomerasa ('2-trans- '4-cis dienol-CoA-reductasa).

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METABOLISMO LIPDICO

APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Refsum
La ruta de la D-oxidacin se descubri mediante el anlisis
de un trastorno neurolgico congnito grave y poco frecuente,
denominado enfermedad de Refsum. El uso de la D-oxidacin
es secundario en lo referente a produccin de energa, pero s
es significativo en el metabolismo de los cidos grasos metilados de la dieta, uno de los ms importantes es el cido fitnico,
que es un derivado del fitol, que forma parte de la clorofila.
CH3  CH  (CH2)3  CH  (CH2)3  CH  (CH2)3  CH  CH2  COOH
l
l
l
l
CH3
CH3
CH3
CH3
El cido fitnico es un constituyente de los lpidos lcteos y
de las grasas animales, se metaboliza generalmente mediante
una D-hidroxilacin inicial, seguida de deshidrogenacin y decarboxilacin, ya que el carbono D puede oxidarse para dar el
cido pristnico, que puede degradarse siguiendo el proceso de
la E-oxidacin. En la enfermedad de Refsum, la D-oxidacin es
defectuosa, y el cido fitnico no puede convertirse en un sustrato que pueda degradarse debido al grupo 3 metilo de su
molcula. Es sta una enfermedad gentica poco comn, los
enfermos que padecen este trastorno carecen de la enzima Dhidroxilante, por lo que acumulan grandes cantidades de cido
fitnico en los tejidos y en el suero. Este hecho origina problemas neurolgicos graves, tales como la retinitis pigmentosa, la
neuropata perifrica, la ataxia cerebelosa y la sordera de tipo
nervioso.
El tratamiento consiste en seguir una alimentacin que contenga poca o ninguna clorofila; es un tratamiento difcil ya que
descarta todos los vegetales de hoja verde, la carne y el consumo de productos lcteos, sobre todo la leche procedente de
animales herbvoros, ya que estos alimentos contienen grandes
cantidades de cido fitnico. La reduccin en el consumo de
estos productos tiene como resultado la disminucin del cido
fitnico del plasma, as como la regresin de los sntomas neurolgicos.

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TEMA 7

Formacin de cuerpos
cetnicos.
Cetosis o cetognesis

Formacin de cuerpos cetnicos. Cetosis o cetognesis.

En los mamferos se producen adaptaciones metablicas en


situacin de ayuno con el fin de mantener niveles adecuados
de glucosa en sangre, ya que este compuesto es el sustrato
energtico principal del cerebro, y es imprescindible para otros
tejidos como la mdula adrenal o los eritrocitos. Cuando la situacin de ayuno est avanzada, la lipolisis del tejido adiposo
proporciona gran cantidad de cidos grasos, parte de los cuales
son utilizados por el higado para su tranformacin en actilCoA, gran parte del cual es convertido en cuerpos cetnicos.
Los cuerpos cetnicos sintetizados por el hgado son vertidos a
la sangre para ser utilizados como fuente de energa por diferentes tejidos, como el msculo y el cerebro, con lo que disminuyen las necesidades de glucosa del organismo.

FORMACIN DE CUERPOS CETNICOS.


CETOSIS O CETOGNESIS
Si el metabolismo de glcidos y lpidos est equilibrado, el
destino del acetil-CoA que proviene de la b-oxidacin, ser
su oxidacin final a CO2 y H2O mediante el ciclo del cido ctrico o bien a la biosntesis de cidos grasos. Existen circunstancias especiales como el ayuno, la diabetes o cualquier situacin de incapacidad de obtener glucosa, en las que el organismo utiliza una ruta biosinttica que garantice la
formacin necesaria de glcidos, de manera que el oxalacetato, que es la molcula inicial del ciclo del cido ctrico, se utilice para la formacin de glucosa. De esta forma la molcula
de oxalacetato no es accesible para su condensacin con el
acetil-CoA obtenido a partir de la E-oxidacin, ya que su oxi-

Los cuerpos cetnicos son acetoacetato


o cido-acetoactico,
D-3-hidroxibutirato o
cido b-hidroxibutrico y acetona.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

dacin est limitada. En estas condiciones metablicas, asociadas a una tasa elevada de oxidacin de cidos grasos, la
molcula de acetil-CoA se utiliza para la obtencin de considerables cantidades de sustancias denominadas en general
cuerpos cetnicos. Cantidades ms altas de las normales presentes en sangre o en orina constituyen la cetonemia o cetonuria, el estado metablico general, en estas condiciones, se
denomina cetosis o cetognesis, proceso que tiene lugar en
las mitocondrias, siendo el hgado el principal centro de produccin de estos compuestos.
Los cuerpos cetnicos son fundamentalmente el acetoacetato o cido acetoactico y su producto de reduccin el D-3-hidroxibutirato o cido b-hidroxibutrico que tiene caracter cido,
solubles en agua, se sintetizan, como hemos dicho anteriormente, en el hgado. La acetona que procede de la decarboxilacin espontanea del acetoacetato, tambin se considera cuerpo cetnico.
Cuando las concentraciones de acetil-CoA son elevadas, dos
moles de acetil-CoA se condensan para formar acetoacetil-CoA.

El acetoacetil-CoA puede reaccionar con otra molcula de


acetil-CoA para dar E-hidroxi-E-metilglutaril-CoA (HMG-CoA),
compuesto intermedio tanto en la biosntesis del colesterol en
el citosol, como en la formacin de cuerpos cetnicos, reaccin
catalizada por la E-hidroxi-E-metilglutaril-CoA-sintasa, enzima
condensante.

En la mitocondria el HMG-CoA produce acetoacetato y


acetil-CoA a travs de la HMG-CoA liasa, enzima desdoblante.

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FORMACIN DE CUERPOS CETNICOS. CETOSIS O CETOGNESIS

El acetoacetato experimenta una reduccin dependiente de


NADH para dar lugar a otro cuerpo cetnico, el E-hidroxibutirato o cido-E-hidroxibutrico, o bien en cantidades pequeas, se
produce una decarboxilacin espontnea formndose acetona.

La acetona puede seguir metabolizndose de dos formas:


Transformndose en actico y frmico por oxidacin:
O
ll
[OH]
CH3  C  CH3 o CH3  COOH  H  COOH
o en piruvato e ingresar en el ciclo de Krebs.

Como hemos indicado anteriormente, la cetognesis se produce fundamentalmente en el hgado, debido a las elevadas
concentraciones de HMG-sintasa de ese tejido. Los cuerpos
cetnicos difunden de la mitocondria heptica a la sangre y sta
los transporta a los tejidos perifricos, siendo utilizados como

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La cetognesis se
produce fundamentalmente en el hgado,
debido a las elevadas
concentraciones de
HMG-Sintasa de ese
tejido.

Los cuerpos cetnicos son combustibles


normales en el metabolismo aerbico y
son importantes como fuentes de energa.

La cetognesis es el
resultado de una deficiencia de los hidratos de carbono disponibles.

combustibles alternativos a la glucosa y los cidos grasos, lo que


es importante pues prolongan el perodo que un mamfero puede sobrevivir ayunando, ya que los animales son incapaces de
convertir los cidos grasos en glucosa. El acetil-CoA no puede
transformarse en piruvato u oxalacetato, reservando la glucosa
para el tejido que ms la necesita, que es el cerebro, que normalmente (en personas bien alimentadas con una dieta equilibrada) utiliza glucosa como su principal combustible, sin embargo, en ayuno o diabetes, sufre una adaptacin metablica para
utilizar la energa que genera el catabolismo de los cuerpos cetnicos, sobre todo en perodos prolongados de ayuno, los cuerpos cetnicos aportan aproximadamente el 75% de las necesidades energticas del cerebro (Fig. 7.1). No obstante, existen tejidos que utilizan el acetoacetato con preferencia a la glucosa
incluso en situaciones metablicamente normales, estos tejidos
son el msculo cardaco y la corteza renal.
Los cuerpos cetnicos son combustibles normales en el metabolismo aerbico y son importantes como fuentes de energa.
El acetoacetato puede considerarse como una forma, transportable e hidrosoluble, de unidades de acetilo. Tiene tambin el
acetoacetato una funcin reguladora, ya que niveles altos de
acetoacetato en sangre indican gran cantidad de unidades de
acetilo, y causan una disminucin en la velocidad de liplisis
del tejido adiposo.
Hemos visto anteriormente que, en condiciones normales,
la formacin de acetona es mnima, pero cuando se producen
acumulaciones patolgicas de acetoacetato, como por ejemplo
en la cetoacidosis diabtica grave, puede ser suficiente para hacer que sea detectable en el aliento de un enfermo. Luego, si el
acmulo de estos compuestos es muy elevado, se produce un
aumento de los niveles de los cuerpos cetnicos en sangre, lo
que, debido a un carcter cido, produce desequilibrios ms o
menos graves, conocidos genricamente con el nombre de cetosis o cetoacidosis, siendo la cetoacidosis diabtica la ms conocida, que lgicamente se caracteriza por una acumulacin
excesiva de cuerpos cetnicos en sangre. El organismo reacciona aumentando la excrecin de cuerpos cetnicos en la orina,
lo que implica la necesidad de la eliminacin simultnea de cationes, para mantener el equilibrio electrnico y de agua (hdrico y de electrolitos) en los tejidos, para mantener la osmolaridad, de no conseguirlo, pueden producirse deshidrataciones y
prdidas electrolticas que, en casos extremos, pueden llegar a
producir colapsos.
Podemos concluir que la cetognesis es el resultado de una
deficiencia de los hidratos de carbono disponibles, esta deficiencia tiene dos consecuencias:

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FORMACIN DE CUERPOS CETNICOS. CETOSIS O CETOGNESIS

Figura 7.1. Esquema de la formacin de cuerpos cetnicos

Causa un desequilibrio entre la esterificacin y la liplisis en


el tejido adiposo con la consiguiente liberacin de cidos grasos libres a la circulacin y elevacin de la tasa de E-oxidacin.
La carencia de glcidos, que proveen D-glicerofosfato, produce
una falta de esterificacin en los cidos grasos libres, los que
quedan sin esterificar se oxidan a CO2 y cuerpos cetnicos.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

RESUMEN
Existen circunstancias como el ayuno, la diabetes o
cualquier situacin de incapacidad de obtener glucosa,
en las que el organismo utiliza una ruta biosinttica que
garantice la formacin necesaria de glcidos, de manera
que el oxalacetato, que es la molcula inicial del ciclo
del cido ctrico, se utilice para la formacin de glucosa,
de esta forma la molcula de oxalacetato no es accesible
para su condensacin con el acetil-CoA obtenido a partir de la E-oxidacin. En estas condiciones, dicha molcula de acetil-CoA se utiliza para formar cuerpos cetnicos. Este estado metablico se denomina cetosis o cetognesis.
Los cuerpos cetnicos, compuestos de carcter cido,
solubles en agua, son el acetoacetato y el E-hidroxibutirato, se sintetizan fundamentalmente en el hgado, debido a
las elevados concentraciones de la HMG-sintasa de ese
tejido. El tercer cuerpo cetnico es la acetona que se forma en cantidades bajas por descarboxilacin del acetoacetato. Son sustratos energticos excelentes para algunos
rganos.
Los cuerpos cetnicos difunden desde la mitocondria
heptica a la sangre y sta los transporta a los tejidos
perifricos. Son combustibles normales en el metabolismo aerbico y son importantes como forma de energa
en otros tejidos, en especial el msculo cardaco y la
corteza renal.
La glucosa en condiciones normales es el combustible
principal del cerebro. No obstante, el cerebro sufre una
adaptacin metablica para utilizar cuerpos cetnicos durante el ayuno y la diabetes.
Si el acmulo de estos compuestos es muy elevado, se
produce un aumento excesivo de los niveles de los cuerpos cetnicos en sangre, y producen desequilibrios ms o
menos graves, conocidos genricamente con el nombre de
cetosis o cetoacidosis, siendo la cetoacidosis diabtica la
ms importante.
La cetognesis es el resultado de una deficiencia de los
hidratos de carbono disponibles causando un desequilibrio
entre la esterificacin y la liplisis en el tejido adiposo, los
cidos grasos que quedan sin esterificar se oxidan a CO2 y
cuerpos cetnicos.

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FORMACIN DE CUERPOS CETNICOS. CETOSIS O CETOGNESIS

APLICACIONES CLNICAS
Cetoacidosis diabtica
Cuando la alimentacin es normal, la produccin heptica
de acetoacetato y E-hidroxibutirato es mnima, de tal forma
que la concentracin sangunea de estos compuestos es muy
baja  0,2 mM. Sin embargo, la falta de alimentacin acelera
en gran medida la sntesis de estos compuestos, hasta una concentracin del orden de 3 a 5 mM. sta constituye la respuesta
normal del organismo a la escasez de glcidos y desempea
una serie de misiones fundamentales. En las primeras fases del
ayuno, la utilizacin de los cuerpos cetnicos por parte del
msculo cardaco y esqueltico reserva la glucosa para el mantenimiento del sistema nervioso central. Cuando el ayuno se
prolonga, la concentracin de cuerpos cetnicos en sangre aumenta para ser utilizados por el cerebro, permitiendo un ahorro
de glucosa. Determinadas condiciones patolgicas, de las que
la cetoacidosis diabtica es la ms importante, se caracterizan
por la produccin y acumulacin excesiva de cuerpos cetnicos
en sangre; no es extrao que se llegue a unos niveles sanguneos de los cidos acetoactico y E-hidroxibutirato de 20 mM. Al
ser ambos cidos relativamente fuertes (pKa 3,5-4), esta situacin produce una peligrosa acidosis metablica. La acumulacin excesiva de cuerpos cetnicos en la sangre en la cetoacidosis diabtica, enfermedad muy general entre los pacientes
afectados por la diabetes mellitus dependiente de insulina, proviene de su elevada tasa de produccin heptica, por lo que
supera a la capacidad de otros tejidos para utilizarlos.
La cetoacidosis diabtica es causada por una deficiencia
grande de insulina, junto con un exceso de glucagn, y viene
acompaada frecuentemente por aumento de otras hormonas
relacionadas con el estrs. Los principales transtornos metablicas son hiperglucemia, cetonemia excesiva y cetonuria. Aunque la tasa de mortalidad ha disminuido, el porcentaje oscila
entre el 6 y 10%. Al contrario que la cetosis fisiolgica, producida por inanicin, en la cual la secreccin de insulina por las
clulas E del pancreas limita la disponibilidad de cidos grasos
libres para el hgado, esta restriccin est ausente en los individuos diabticos y, como consecuencia de ello, la concentracin
de cidos grasos libres en el plasma llega a niveles muy elevados como 4 mM, lo cual impulsa la produccin heptica de
cuerpos cetnicos a la mxima velocidad.
El tratamiento de la cetoacidosis diabtica depende de la
gravedad de las anomalas metablicas y del equilibrio hdrico
y de electrolitos en los tejidos. La insulina es bsica, disminuye

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

los niveles plasmticos de glucagn, se opone a los efectos catablicos de ste en el hgado, inhibe el aporte de sustratos cetognicos y glucognicos (cidos grasos libres y aminocidos)
provenientes de la periferia, y en los tejidos diana estimula la
captacin de glucosa.

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TEMA 8

Biosntesis
de cidos grasos

Biosntesis de cidos grasos. Biosntesis de cidos


grasos saturados a partir de acetil-CoA. El complejo cido graso sintasa. Control de la sntesis de
cidos grasos.

Cuando se ingiere un exceso de hidratos de carbono, que


supera la cantidad que puede ser catabolizada y almacenada
como glucgeno por el organismo, se convierten fcilmente en
grasa, que est constituida mayoritariamente por triacilgliceroles. El exceso de glucosa se cataboliza hasta acetil-CoA mitocondrial, que es transportado al citoplasma mediante la formacin de citrato; una vez en el citoplasma celular, el acetil-CoA
es utilizado para la biosntesis de cidos grasos no esenciales,
que posteriormente pueden esterificarse con glicerol-3P para
formar triacilgliceroles, que se almacenan en el tejido adiposo.
De esta forma el exceso de hidratos de carbono es utilizado por
el organismo para incrementar sus reservas energticas en forma de depsitos de grasa en los adipocitos del tejido adiposo.

BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS


En el organismo pueden ser sintetizados todos los cidos
grasos considerados como cidos grasos no esenciales; los
esenciales tienen que ser ingeridos necesariamente en la dieta ya
que el organismo no puede generarlos. La biosntesis comienza
con el acetil-CoA proveniente del catabolismo de aminocidos
cetognicos o de los hidratos de carbono, la obtencin de estos
precursores tiene lugar en la mitocondria, mientras que la
biosntesis de cidos grasos tiene lugar extramitocondrialmente,
por lo que es necesario la existencia de un sistema de lanzadera. Aprovechando la abundancia que existe en las mitocondrias
de acetil-CoA, este compuesto se condensa con el oxalacetato

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100

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

para formar citrato, el cual es transportado por el transportador


de cidos tricarboxilicos al citosol; el citrato vuelve a escindirse
en acetil-CoA y oxalacetato. En la figura 8.1 se muestra un esquema de cmo funciona este sistema de lanzadera.
El proceso global de la sntesis de cidos grasos tiene en general tres etapas catalizadas por sistemas enzimticos distintos:
1) Biosntesis de palmitato a partir de acetil-CoA.
2) Elongacin de la cadena a partir de palmitato.
3) Desaturacin.

Figura 8.1. Sistema de transporte de los precursores para la biosntesis de cidos grasos desde la mitocondria al citosol, y acetil-CoA como intermediario entre el metabolismo de hidratos de carbono y grasas.

BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS


SATURADOS A PARTIR DE ACETIL-COA
La biosntesis de los
cidos grasos tiene
lugar en el citosol,
mientras que la oxidacin de los cidos
grasos se efecta en
las mitocondrias.

La biosntesis de los cidos grasos saturados a partir de su


precursor principal el acetil-CoA tiene lugar en todos los organismos, pero es especialmente importante en el hgado, en los
tejidos adiposos y en las glndulas mamarias de los animales
superiores.
La biosntesis de los cidos grasos tiene lugar en el citosol,
mientras que la oxidacin de los cidos grasos se efecta en
las mitocondrias. La sntesis de cidos grasos a partir del acetil-CoA se realiza gracias a un grupo de enzimas completamen-

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

te diferente del que interviene en la oxidacin de los cidos


grasos.
En la reaccin global de la sntesis de cidos grasos, que es
catalizada por un agregado de siete protenas en el citosol (seis
enzimas y una protena portadora de cidos), el complejo cido graso-sintasa, el acetil-CoA procedente de hidratos de carbono o de aminocidos es el precursor primordial de todos los
tomos de carbono de la cadena del cido graso. De las ocho
unidades de acetilo requeridas para la biosntesis del cido
palmtico, solamente una es aportada por el acetil-CoA, mientras que las otras siete llegan en forma de malonil-CoA, formado a partir de acetil-CoA y HCO3 mediante una reaccin de
carboxilacin. Un resto de acetilo y siete de malonilo experimentan pasos sucesivos de condensacin, con liberacin de
7 CO2 para formar cido palmtico, el poder reductor viene
proporcionado por el NADPH:

101

De las ocho unidades


de acetilo requeridas
para la biosntesis
del cido palmtico,
solamente una es
aportada por el acetil-CoA, mientras que
las otras siete llegan
en forma de malonilCoA, formado a partir de acetil-CoA y
CO3H mediante una
reaccin de carboxilacin.

acetil-CoA  7 malonil-CoA  14 NADPH  14 H+ o


o palmitato  7 CO2  14 NADP  8 CoA a SH  6 H2O
Al calcular la energa necesaria para la conversin global de
acetil-CoA a palmitato, debemos considerar el ATP utilizado en
la formacin del malonil-CoA:
7 acetil-CoA  7 CO2  7 ATP o
o 7 malonil-CoA  7 ADP  7 Pi  7 H
La estequiometra global para la biosntesis de palmitato
(conversin del acetil-CoA en palmitato) es:
8 acetil-CoA  7 ATP  14 NADPH  14 H o
o palmitato  8 CoA a SH  7 ADP  7 Pi 
 14 NADP  6 H2O
La nica molcula de acetil-CoA requerida en el proceso
sirve como iniciador, los dems tomos de carbono de su grupo acetilo se convierten en los tomos de carbono terminales
(15 y 16) del cido palmtico formado. Por ello, el crecimiento
de la cadena durante la sntesis de cidos grasos comienza en
el grupo carboxilo del acetil-CoA y contina con la adicin sucesiva de restos de acetilo al extremo carboxilo de la cadena
en crecimiento. Cada resto acetilo sucesivo procede de dos de
los tres tomos de carbono de un resto de cido malnico que
penetra en el sistema en forma de malonil-CoA, el tercer carbono del cido malnico, el del carboxilo no esterificado, se
pierde como CO2. El producto final es una molcula de cido
palmtico.

La estequiometra
global para la biosntesis de palmitato
(conversin del acetil-CoA en palmitato)
es: 8 Acetil-CoA + 7
ATP + 14 NADPH +
14 H+ o Palmitato +
8 CoA~SH + 7 ADP
+ 7 Pi + 14 NADP+ 6
H 2O

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102

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Una caracterstica que distingue al mecanismo de la biosntesis del cido graso consiste en que los productos intermedios
del proceso de alargamiento de la cadena son tiosteres, pero
no del CoA, como en la oxidacin del cido graso, sino de una
protena conjugada, de bajo peso molecular, denominada protena portadora de acilos (ACP, Fig. 8.2). En la mayora de las
clulas eucariticas, las siete protenas del complejo cido graso-sintetasa o sintasa, se encuentran asociadas formando un
agregado multienzimtico. En la mayora de los organismos, el
producto final es el cido palmtico, precursor de todos los
dems cidos grasos superiores saturados y de todos los cidos
grasos no saturados.

Figura 8.2. Fosfopanteteina como unidad reactiva en el ACP y el CoA.

Fuente de carbono y NADPH para


la sntesis del cido graso
La fuente primordial de todos los tomos de carbono de los
cidos grasos es el acetil-CoA, formado en las mitocondrias.
ste no puede pasar desde las mitocondrias al citosol, pero s
lo hace en forma de citrato gracias al sistema transportador de
tricarboxilatos. En el citosol, el acetil-CoA se regenera a partir
del citrato por la ATP-citrato-liasa, tambin denominada enzima citrato-escisor, que cataliza la reaccin.
ATP-citrato-liasa

citrato  ATP  CoA a SH o


o acetil-CoA  ADP  Pi  oxalacetato
Por una segunda ruta, el grupo acetilo del acetil-CoA es
transferido enzimticamente a la carnitina. La acetilcarnitina
pasa de la matriz mitocondrial y a travs de la membrana de la

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

mitocondria, al citosol; entonces se regenera el acetil-CoA por


transferencia del grupo acetilo de la acetilcarnitina al CoA del
citosol.
Por otra, parte el oxalacetato, formado en la transferencia
de grupos acetilo al citosol, debe retornar a la mitocondria. La
membrana mitocondrial es impermeable al oxalacetato, ya que
carece de transportador para este compuesto. Por ello, son necesarias una serie de reacciones para superar esa barrera (Fig.
8.3). Estas reacciones generan la mayor parte del NADPH necesario para la sntesis de cidos grasos.

Figura 8.3. Transporte de Acetil-CoA y generacin de NADPH.

En la primera, el oxalacetato es reducido a malato por el


NADH, reaccin catalizada por la malato deshidrogenasa citoslica.
o malato  NAD
oxalacetato  NADH  H m
Seguidamente, el malato es descarboxilado oxidativamente
por la enzima mlica dependiente de NADP+.
malato  NADP o piruvato  CO2  NADPH  H
El piruvato obtenido se difunde de nuevo a las mitocondrias donde es carboxilado y se reconvierte en oxalacetato por
la piruvato carboxilasa.
piruvato  CO2  ATP  H2O o
o oxalacetato ADP  Pi  H
La reaccin global es:

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104

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

NADP  NADH  ATP  H2O o


o NADPH  NAD  ADP  Pi  H
Se genera un NADPH por cada acetil-CoA transferido desde la mitocondria al citosol. Por lo tanto, se forman 8 NADPH,
al ser ocho molculas de acetil-CoA las transferidas al citosol
para la sntesis de palmitato. Las seis molculas restantes que
se requieren para este proceso se generan en el citosol a travs
de las primeras reacciones de va de las pentosas fosfato.
Pasamos a estudiar a continuacin las reacciones enzimticas responsables de la biosntesis de los cidos grasos.

1. Formacin de malonil-CoA:
Acetil-CoA-carboxilasa
En el citosol, el malonil-CoA se forma a partir del acetilCoA y el bicarbonato por accin de la acetil-CoA-carboxilasa,
complejo enzimtico que cataliza la siguiente reaccin:
O
ll
acetil-CoA-carboxilasa
CH3  C  S  CoA  ATP  HCO3 o
O
ll
o OOC  CH2  C  S  CoA  ADP  Pi  H


La acetil-CoA-carboxilasa contiene biotina como grupo


prosttico; la biotina sirve como portador intermedio de una
molcula de CO2, segn un ciclo de dos etapas:

La reaccin catalizada por la acetil-CoAcarboxilasa, que es


una enzima alostrica, es la etapa reguladora primaria o limitadora de la velocidad de la biosntesis
de cidos grasos.

La reaccin catalizada por la acetil-CoA-carboxilasa, que es


una enzima alostrica, es la etapa reguladora primaria o limitadora de la velocidad de la biosntesis de cidos grasos.

Reacciones del sistema de la cidograso-sintasa


Una vez formado el malonil-CoA a partir del acetil-CoA,
por la reaccin bastante compleja de la acetil-CoA-carboxilasa,
las reacciones siguientes de la sntesis del cido graso se realizan por una secuencia de seis etapas sucesivas, catalizadas por
las seis enzimas del sistema de la cido graso-sintasa. La sptima protena de este sistema, que por s misma no posee activi-

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

dad cataltica alguna, es la protena portadora de acilo (ACP) a


la cual est unida covalentemente la cadena de cido graso en
crecimiento.
La funcin de la protena portadora del acilo (ACP) en la
sntesis de cidos grasos es anloga a la del CoA en la oxidacin de los mismos; sirve como ancla, a la cual estn esterificados los acilos intermedios. Las reacciones implicadas en la sntesis del cido graso son las siguientes:

2. Reaccin cebadora o iniciadora

105

La funcin de la protena portadora del


acilo (ACP) en la sntesis de cidos grasos
es anloga a la del
CoA en la oxidacin
de los mismos; sirve
como ancla, a la cual
estn esterificados
los acilos intermedios.

En primer lugar el acetil-CoA reacciona con el grupo sulfhidrilo de la (ACP) por accin de una de las seis enzimas del sistema sintasa, la acetil-CoA-ACP-transacilasa que cataliza la siguiente reaccin:
o acetil-ACP  CoA a SH
acetil-CoA  ACP a SH m
Este grupo acetilo no permanece unido a la ACP, sino que
es transferido a un resto de cistena especfico perteneciente a
otra de las enzimas del complejo cido graso-sintasa, la E-cetoacil-ACP-sintasa, segn la reaccin:
o ACP a SH  acetil-sintasa
acetil-ACP  sintasa a SH m
en la que, la E-cetoacil-sintasa se designa simplemente por
sintasa. Con esta reaccin, el complejo de la cido grasosintasa queda activado (iniciado) y dispuesto para llevar a
cabo la secuencia de reacciones requeridas para unir una
unidad de dos carbonos en el proceso de prolongacin de la
cadena.

3. Etapa de la transferencia de malonilo


En la reaccin siguiente, catalizada por la malonil-CoAACP-transacilasa, el malonil-S-CoA formado en la reaccin de
la acetil-CoA-carboxilasa, reacciona con el grupo -SH de la
ACP, para formar malonil-S-ACP:
o malonil-ACP  CoA  SH
malonil-CoA  ACP  SH m
Como resultado de esta etapa y de la reaccin de cebado,
un grupo malonilo queda ahora esterificado a la ACP y un grupo acetilo lo est a un grupo-SH de la molcula de la E-cetoacil-ACP-sintasa (Fig. 8.4).

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 8.4. Las tres primeras reacciones de cada ciclo de adiccin


a la sntesis de los cidos grasos.

4. Reaccin de condensacin
Es la siguiente reaccin de la secuencia, catalizada por la
E-cetoacil-ACP-sintasa, el grupo acetilo esterificado al resto de
cistena de esta enzima es transferido al carbono 2 del grupo
malonilo de la ACP, con la liberacin del grupo carboxilo libre
del resto del malonilo, en forma de CO2.
La molcula de CO2 as liberada contiene el mismo tomo
de carbono que fue introducido como HCO3, en la reaccin de
la acetil-CoA-carboxilasa. En esencia, el HCO3 desempea un
papel cataltico en la sntesis del cido graso, puesto que se regenera en forma de CO2, a medida que cada unidad de dos
carbonos se inserta en la cadena de crecimiento del cido graso.

5. Primera reaccin de reduccin


El Acetoacetil-ACP experimenta su reduccin por el
NADPH, para formar E-hidroxibutiril-ACP. Esta reaccin est
catalizada por la E-cetoacil-ACP-reductasa:

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

O
O
ll
ll
reduccin
H3C  C  CH2  C  S  ACP  NADPH  H o
m
acetoacetil-ACP
OH
O
l
ll

o
m H3C  CH  CH2  C  S  ACP  NADP
D-b-hidroxibutiril-ACP

6. Etapa de deshidratacin
El D-E-hidroxibutiril-ACP es deshidratado al correspondiente trans-'2-enoil-ACP, esto es, el crotonil-ACP, por accin de la
enoil-ACP-deshidratasa:

7. Segunda etapa de reduccin


Despus, el crotonil-ACP es reducido a butiril-ACP por la
enoil-ACP-reductasa NADPH, (en E.col y en los tejidos animales, el donador de electrones es el NADPH).
H
O
l
ll
H3C  C C  C  S  ACP  NADPH o
l
H
crotonil-ACP
O
ll
o H3C  CH2  CH2  C  S  ACP  NADP
butiril-ACP
Esta reaccin se diferencia tambin de la correspondiente
de oxidacin del cido graso en las mitocondrias que implica a
un nucletido pirimdico en vez de una flavoprotena.
La formacin de butiril-ACP completa el primero de los
siete ciclos que conducen al palmitoil-ACP. Para iniciar el ci-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

clo siguiente, el grupo butirilo es transferido desde el ACP al


grupo  SH de la molcula de la E-cetoacil-ACP-sintasa, permitiendo as a la ACP que acepte un grupo malonilo de otra
molcula de malonil-CoA. Entonces se repite el ciclo y la etapa siguiente consiste en la condensacin del malonil-ACP
con la butiril-S-E-cetoacil-ACP-sintasa, rindiendo E-cetohexanoil-ACP y CO2.
Despus de siete ciclos completos, el producto final es el
palmitoil-ACP.
Este grupo pamitoilo puede separarse para formar cido
palmtico libre por la accin de una tiosterasa o ser transferido del ACP al CoA, o bien ser directamente incorporado en el cido fosfatdico, en la ruta que conduce a los
fosfolpidos y triacilglicridos.
En la mayora de los organismos, el sistema de la cido
graso-sintasa se detiene en la produccin de cido palmtico y no produce cido esterico, que tiene slamente
dos tomos de carbono ms.
Esta especifidad de longitud catenaria se la confiere al sistema la E-cetoacil-ACP-sintasa, que se muestra muy efectiva en aceptar el grupo tetradecanoilo (14C) de la ACP,
pero que no acepta el grupo hexadecanoilo (16C).
Adems, el Palmitoil-CoA funciona como retroinhibidor
del sistema de la cido graso-sintasa (Fig. 8.5).
Los cidos grasos con un nmero impar de tomos de carbono se forman tambin por el complejo de la cido graso-sintasa. En este caso, la sntesis es cebada por una molcula iniciadora de propionil-ACP (en vez de acetil-ACP), a la cual se
adicionan sucesivas unidades de dos carbonos, por medio de
condensaciones con el malonil-ACP.
Las etapas enzimticas que conducen a la biosntesis del
cido palmtico difieren de las implicadas en la oxidacin del
palmtico en los siguientes aspectos fundamentales.
La sntesis se produce en el citosol, la degradacin en la
matriz mitocondrial.
Los intermediarios en la sntesis de los cidos grasos estn
ligados a los grupos sulfihidrilos de una protena portadora de grupos acilo (ACP), mientras que los intermediarios
de la degradacin de los cidos grasos estn ligados a la
coenzima A.
En los organismos superiores muchas de las enzimas de la
sntesis de cidos grasos estn organizadas en un complejo multienzimtico llamado cido graso-sintasa. Las enzimas degradativas no parecen estar asociadas entre s.

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

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Los cidos grasos


con un nmero impar
de tomos de carbono se forman tambin
por el complejo de la
cido graso-sintetasa.
En este caso, la sntesis es cebada por una
molcula iniciadora
de propionil-S-ACP
(en vez de acetil-SACP), a la cual se
adicionan sucesivas
unidades de dos carbonos, por medio de
condensaciones con
el malonil-S-ACP.

Figura 8.5. Esquema de reacciones para la obtencin de palmitato.

La cadena de crecimiento del cido graso se alarga por la


adicin secuencial de unidades de dos carbonos derivados
del acetil-CoA. El donador activado de las unidades de
dos carbonos en la etapa de elongacin es el malonil-ACP.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

En las mitocondrias,
el cido palmtico y
otros cidos grasos
saturados son prolongados mediante adiciones sucesivas al
extremo carboxilo
terminal de unidades
acetilo en forma de
acetil-CoA. El malon i l -AC P n o p u e d e
sustituir al acetilCoA.

La reaccin de elongacin es empujada o est dirigida


por la eliminacin de CO2.
El reductor de la sntesis de cido graso es el NADPH,
mientras que los oxidantes en la degradacin de los cidos grasos son el NAD y el FAD.
La elongacin por el complejo de la cido graso-sintasa
se detiene en la formacin del Palmitato (C16), la elongacin posterior y la insercin de dobles enlaces adicionales
se lleva a cabo por otros sistemas enzimticos.

EL COMPLEJO CIDO GRASO SINTASA


Como se ha comentado anteriormente, las enzimas que catalizan la sntesis de cidos grasos constituyen un complejo
multienzimtico, estrechamente acoplado en clulas eucariticas, denominado cido graso sintasa (Fig. 8.6). Este complejo
contiene seis molculas, cada una de ellas tiene dos cadenas
polipeptdicas, denominadas subunidades A y B. La subunidad A contiene a la protena transportadora de acilo (ACP), la
enzima condensante y la E-cetotioster reductasa, y la subuni-

Figura 8.6. Mecanismo del complejo cido graso sintasa.

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

dad B contiene las cuatro actividades restantes: la aciltransacilasa, la maloniltransacilasa, la E-hidroxiacildeshidratasa y la


enoilreductasa, se trata de una protena o enzima multifuncional. En los tejidos de los vertebrados el complejo es ms pequeo, con dos subunidades idnticas, cada subunidad contiene una regin ACP, adems de todas las actividades enzimticas implicadas, as como una actividad que cataliza la
liberacin final del palmitato. El complejo de levaduras carece
de esta ltima actividad, ya que el producto final de la actividad de la cido graso-sintasa en las levaduras es el palmitoilCoA. En los complejos eucariticos, la ACP no es una protena pequea, como en el caso de las bacterias. Parece que la
fosofopantetena unida acta como brazo de oscilacin para
poner en contacto la porcin acilo con los distintos lugares activos de la sntesis de los cidos grasos. Actualmente se cree
que cada cadena est plegada formando tres dominios unidos
por regiones flexibles, el dominio 1 es el de entrada del sustrato y de la unidad de condensacin. El dominio 2, la unidad de
reduccin, contiene la protena portadora de acilos (ACP). El
dominio 3, la unidad de liberacin del palmitato. Al tener siete
enzimas diferentes podemos concluir que una cadena polipeptdica contiene siete centros catalticos diferentes. La sntesis catalizada por las diferentes enzimas se realiza de forma coordinada, y las distintas enzimas que forman estos complejos
estn unidos coovalentemente, quedando protegidos de reacciones competitivas. El dominio 1 de cada una de las cadenas
del dmero interacciona con los dominios 2 y 3 de la otra cadena, de esta manera, cada una de las unidades funcionales
de la cido graso-sintasa consta de dominios formados por diferentes cadenas, el lugar de accin cataltica es la interfase
entre los dominios de las cadenas opuestas. Resultan de gran
importancia para el funcionamiento de este complejo multienzimtico, la flexibilidad y la longitud mxima, unos 20 , del
fosfopanteteinilo, brazo del ACP, el sustrato de esta manera se
encuentra en el extremo de un brazo largo y flexible que puede llegar a cada uno de los diversos centros activos.

CONTROL DE LA SNTESIS
DE CIDOS GRASOS
La biosntesis de cidos grasos se controla en gran medida
por mecanismos hormonales. La insulina acta de diversas formas, uno de sus efectos consiste en estimular la entrada de glucosa en las clulas, este efecto aumenta el flujo a travs de la
gluclisis y la reaccin con la piruvato deshidrogenasa, que

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

proporciona acetil-CoA para la sntesis de cidos grasos. Por


otro lado activa al complejo piruvato deshidrogenasa, mediante su desfosforilacin a la forma activa.
Otro punto de regulacin es la transferencia de unidades
acetilo desde la matriz mitocondrial al citosol, de manera que la
actividad de la citrato liasa se controla por la fosforilacin y
desfosforilacin de la enzima, aunque no se conocen los mecanismos que intervienen en ello.
Tambin est regulada la acetil-CoA carboxilasa; la regulacin es de dos tipos:
a) Regulacin alostrica, realizada por distintos moduladores que actan de forma muy puntual, as metabolitos
como el citrato activan la enzima y otros como el palmitoil-CoA o el AMP la inhiben.
b) Modificacin covalente, existen dos formas de la enzima,
una activa y otra sin activar, el paso de una a otras est
regulado hormonalmente, la insulina la activa y el glucagn y la adrenalina la inactivan.
La acetil-CoA carboxilasa juega un papel importante en la regulacin del metabolismo de los cidos grasos (Fig. 8.7), ya
que esta enzima, como hemos dicho anteriormente, cataliza la
etapa limitante de la sntesis de los cidos grasos. Se inactiva
por fosforilacin, la modificacin de un residuo de serina por
una protena quinasa activada por AMP transforma a la carboxilasa en una forma inactiva. El AMP cclico no tiene efecto sobre esta quinasa, que es distinta a la protena quinasa A. Esta
quinasa es estimulada por el AMP e inhibida por el ATP. El grupo fosforilo en la carboxilasa inhibida es eliminado por la protena fosfatasa 2A, una de las cuatro fosfatasas importantes que
actan sobre las protenas.

Figura 8.7. La acetil-CoA carboxilasa se inactiva por fosforilacin y se activa por unin al citrato.

Por ltimo, tambin se regula la sntesis a partir de la disponibilidad de equivalentes reductores (NADPH), de los que una
gran parte provienen de la ruta de las pentosasfosfato.

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BIOSNTESIS DE CIDOS GRASOS

RESUMEN
Los cidos grasos se sintetizan en el citosol por una va
diferente a la E-oxidacin. La reaccin basada en la formacin y ruptura del citrato transporta grupos acetilo desde la mitocondria al citosol para la biosntesis. Se inicia la
sntesis con la carboxilacin del acetil-CoA hasta malonilCoA, etapa limitante, catalizada por la acetil-CoA carboxilasa, principal punto de control y regulacin de la biosntesis de los cidos grasos. Los intermediarios de la sntesis
de cidos grasos estn unidos a una protena portadora de
acilos (ACP).
El acetil-ACP y el malonil-ACP se condensan para formar acetoacetil-ACP. A continuacin sigue una reduccin,
una deshidratacin y una segunda reduccin. El reductor
en estas etapas es el NADPH. Se forma de esta manera el
butiril-ACP, que inicia un segundo ciclo de elongacin, comenzando con la adicin de una unidad de dos carbonos
procedentes del malonil-ACP. Siete ciclos de elongacin
producen palmitil-ACP, el cual se hidroliza hasta palmitato.
La sntesis de palmitato requiere ocho molculas de
acetil-CoA, 14 de NADPH y siete de ATP. Otras siete
molculas de HCO3, que realizan un papel cataltico, intervienen en la formacin de malonil-CoA y se recuperan en
forma de CO2 en la reaccin de condensacin. En organismos superiores, las enzimas que realizan la sntesis de los
cidos grasos, estn unidas covalentemente formando un
complejo enzimtico multifuncional, la acido graso sintasa.
La acetil-CoA carboxilasa, enzima limitante de la velocidad del proceso, es regulada a travs de las formas desfosforilada activa y fosforilada inactiva de la carboxilasa, el citrato la activa alostricamente.

APLICACIONES CLNICAS
Aplicaciones clnicas de los inhibidores
de la cido graso sintasa
Muchos de los cnceres habituales del ser humano, como
los carcinomas de colon, prstata, ovario, mama y endometrio, expresan elevados niveles de cido graso sintasa, la primera enzima de la sntesis de cidos grasos. As, la distinta expresin de esta enzima en los tejidos normales y los neoplsi-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

cos ha llevado a pensar que la cido graso sintasa es una diana importante en la terapia anticancergena. Estudios realizados en pacientes con carcinoma de mama indican que los niveles de la cido graso sintasa se elevan en las clulas neoplsicas, y este incremento de concentracin es proporcional al
estadio clnico del tumor, por lo que se relaciona con la virulencia del mismo.
Uno de los inhibidores de la cido graso sintasa, que actualmente se encuentra en fase de estudio, es el denominado C75,
una pequea molcula sinttica que presenta una actividad antitumoral significativa, paralela a la inhibicin de la sntesis de
cidos grasos en los tejidos tumorales, as como en los normales. Este inhibidor no produce efectos adversos en la prolilferacin celular normal de mdula sea, el tracto gastrointestinal,
la piel o los tejidos linfoides. Ello hace pensar en la utilidad de
C75 como agente antitumoral.
Por otra parte, recientes estudios realizados con ratones,
han puesto de manifiesto el efecto de los inhibidores de la cido graso sintasa, concretamente de C75 y de cerulenn, en la
inhibicin de la alimentacin y en una dramtica prdida de
peso. Parece que C75 inhibe la expresin de un neuropptido
hipotalmico decisivo en la seal profgica. Por lo tanto, la cido graso sintasa puede jugar un papel importante en la regulacin de la alimentacin, y as ser una diana terapetica decisiva en el control de la obesidad.

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TEMA 9

Metabolismo
de acilgliceroles
y esfingolpidos

Metabolismo de triacilgliceroles. Hidrlisis y


movilizacin de triacilgliceroles. Metabolismo de
glicerofosfolpidos. Metabolismo de esfingolpidos.

Los acilgliceroles son los lpidos ms abundantes en el ser


humano, ya que dentro de ellos se encuadran dos de los principales grupos lipdicos. As, son acilgliceroles los triacilgliceroles,
principales depsitos grasos del ser humano, almacenndose
principalmente en el tejido adiposo. Tambin forman parte de
los acilgliceroles los glicerofosfolpidos, componentes esenciales
de las membranas biolgicas. Por su parte, el grupo de los
esfingolpidos, componentes de la membrana plasmtica y caracterizados por la presencia de esfingosina en su estructura, incluye los cerebrsidos y los ganglisidos, cuyas molculas
incorporan cidos grasos, as como diferentes residuos de monosacridos u oligosacridos complejos.

METABOLISMO DE TRIACILGLICEROLES
Biosntesis de triacilgliceroles
Los acil-CoA, junto con el glicerol-3-fosfato, son los principales precursores de los triacilglicridos. La primera ruta predomina en el tejido adiposo, el glicerol-3-fosfato sufre dos esterificaciones sucesivas con acil-CoA, para producir diacilglicerol-3fosfato (cido fosfatdico), que es el precursor tanto de los
triacilglicridos como de los fosfoglicridos. La ruta hacia los
triacilgliceroles implica la eliminacin hidroltica del fosfato, seguida de una transferencia de otro grupo acilo procedente de
un acil-CoA.
El producto de partida es el glicerol-3-fosfato, formado
principalmente por reduccin de la hidroxiacetona fosfato y en
menores proporciones por la fosforilacin del glicerol. Puede

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116

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

tambin formarse a partir de la glicerina procedente de la degradacin de los triacilglicridos por la accin de la glicerolquinasa.

La primera etapa en la formacin de triacilgliceroles es la


esterificacin de los carbonos D y E de la glicerina (glicerol) con
dos cidos grasos, lo que da lugar a un cido fosfatdico o fosfadiato. Estas acilaciones estn catalizadas por la glicerofosfato
aciltransferasa.
A continuacin, mediante una fosfatasa especfica, el cido
fosfatdico se transforma en el diacilglicrido o diacilglicerol.

Este ltimo reacciona con una tercera molcula de acil-CoA


para formar un triacilglicrido, reaccin catalizada por la diglicrido aciltransferasa. Estas enzimas estn asociadas a un
complejo triacilglicerol sintetasa ligado a una membrana del
retculo endoplasmtico (Fig. 9.1).
En las clulas intestinales, las grasas neutras (triacilglicridos) se absorben como cidos grasos libres y monoglicridos.
Una vez dentro de la clula, los triacilglicridos son resintetizados a partir de los monoglicridos, sin que tengan que pasar
por la fase de cido fosfatdico (Fig. 9.2).

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METABOLISMO DE ACILGLICEROLES Y ESFINGOLPIDOS

Figura 9.1. Principales rutas en la biosntesis de triacilgliceroles en tejidos


de mamfero. MAG: Monoacilglicerol; 1,2 DAG: 1,2-Dialglicerol

HIDRLISIS Y MOVILIZACIN DE
TRIACILGLICEROLES
El primer paso en la recuperacin de los cidos grasos almacenados para la produccin de energa es la hidrlisis de los
triacilgliceroles, la cual es catalizada por una serie de lipasas del
tejido adiposo. La lipasa que libera el primer cido graso est
sometida a control por una serie de hormonas. Este control de
la hidrlisis de los triacilgliceroles debe guardar un equilibrio

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 9.2. Sntesis de triacilglicridos en las clulas intestinales.

con el proceso de la sntesis de triacilgliceroles, para as poder


asegurar unos depsitos energticos adecuados y evitar la obesidad. Los cidos grasos y el glicerol producidos por las lipasas
del tejido adiposo se liberan a la sangre circulante, en donde
los cidos grasos se unen a la albmina srica y son transportados a los tejidos para su uso. El glicerol regresa al hgado, en
donde se transforma en dihidroxiacetona fosfato y entra en la
va glucoltica o gluconeognica.

METABOLISMO DE GLICEROFOSFOLPIDOS
Degradacin de fosfoglicridos
La degradacin de los fosfolpidos corre a cargo de las fosfolipasas, enzimas que liberan los cidos grasos componentes
de estos compuestos. Tiene lugar de forma continua, en todos
los tejidos del organismo. Estas fosfolipasas se clasifican segn

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METABOLISMO DE ACILGLICEROLES Y ESFINGOLPIDOS

la posicin en la molcula del cido graso que liberen, en fosfolipasas A1, A2, C y D.
Las fosfolipasas estn ampliamente distribuidas en la naturaleza: se localizan tanto en el jugo intestinal como en las secreciones bacterianas o en los venenos actuando como enzimas
digestivas; por ejemplo, al fosfolipasa A2 es muy abundante en
el veneno de ciertas especies de serpientes. Estas enzimas tambin actan en la sntesis de lpidos importantes para el organismo, por ejemplo la fosfolipasa A2, que libera cido araquidnico, precursor de las prostaglandinas.
Los fosfoglicridos, mediante la accin conjunta de varias
fosfolipasas, pueden ser catabolizados hasta la formacin de
glicerol-3-fosfato. Los cidos grasos libres, como los dems productos que se van liberando en esta degradacin, pueden ser
reutilizados para la sntesis de nuevos fosfolpidos o dirigirse
hacia otras rutas metablicas.

Sntesis de fosfoglicridos
Las dos clases principales de glicerolpidos son los triacilglicridos, ya estudiados, y los glicerofosfolpidos, y dentro de
estos nos centraremos en la sntesis de los fosfoglicridos y los
esfingolpidos.
Como metabolito intermediario utilizan la molcula de cido fosfatdico al igual que los triacilgliceroles. Para la sntesis de
los fosfoglicridos se une un nucletido activado CTP (citidina
trifosfato), formando un intermediario CDP-diacilglicerol. La
porcin fosfatidilo reacciona con alcoholes de naturaleza polar,
obtenindose los fosfoglicridos como la fosfatidilserina o el
fosfatidil inositol; a partir de la fosfatidilserina se obtienen la
fosfatidil etanolamina o la fosfatidilcolina.
La sntesis de estos dos ltimos puede tambin realizarse
por otra va: la colina o la etanolamina son activadas mediante
su unin a CTP y en una reaccin posterior se unen al fosfatidato para formar los dos fosfoglicridos.

Sntesis de fosfoglicridos: Reacciones


Existen varias vas para la sntesis de fosfoglicridos, una de
las rutas de sntesis de novo comienza con la formacin de citidina difosfato diacilglicerol (CDP-diacil-glicerol) a partir de fosfotidato o cido fosfatdico y de un nucletido activado, citidina
trifosfato (CTP). Esta reaccin est favorecida por la hidrlisis
del pirofosfato (PPi).

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La porcin fosfatdico activado reacciona con el grupo hidroxilo de un alcohol polar, cuando el alcohol es serina se obtiene la fosfatidilserina. Igualmente, el fosfatidil inositol se forma por transferencia del fragmento diacilglicerolfosfato desde
el CDP-diacilglicerol al inositol.

En las bacterias, a partir de la fosfatidilserina se obtienen la


fosfatidil etanolamina o la fosfatidilcolina.
La descarboxilacin de la fosfatidilserina por una enzima
que tiene como coenzima el piridoxol fosfato produce la fosfatidiletanolamina, posteriormente el grupo amino de la fosfatidil-

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METABOLISMO DE ACILGLICEROLES Y ESFINGOLPIDOS

etanolamina sufre tres metilaciones consecutivas para formar


fosfatidilcolina. Siendo la S-adenosilmetionina, el dador de metilo en estas metilaciones.

La sntesis de estos dos ltimos compuestos puede tambin


realizarse por otra va; la colina o la etanolamina son activadas
mediante su unin a CTP, y en una reaccin posterior se unen
al fosfatidato para formar los dos fosfoglicridos.
En los mamferos, la fosfatidilcolina se sintetiza a partir de la
colina, la colina es fosforilada por el ATP hasta fosforilcolina,
que reacciona con el CTP para formar CDP-colina. La fosforilcolina de la CDP-colina se transfiere de un diacilglicerol.

Igualmente, la fosfatidiletanolamina, puede obtenerse a partir de etanolamina, que origina un intermediario CDP-etanolamina, por una serie de reacciones similares (Fig. 9.3).
Algunos fosfolpidos tiene en el C1 un radical ter en lugar
de un radical acilo, se denominan glicerileterfosfolpidos, su sntesis comienza con la hidroxicetona fosfato que es acilada con

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 9.3. Esquema de las rutas de biosntesis de los glicerofosfolpidos.

un acil-CoA, donde un derivado 1-acilo se intercambia con un


alcohol de cadena larga para formar un ter. El grupo ceto del
C2 se reduce con NADPH y el alcohol resultante se acila con un
acil-CoA de cadena larga, se elimina el grupo fosfato del C3
dando lugar a 1-aquil-2-acilglicerol, que con la CDP-colina formar un anlogo de la fosfatidilcolina, el 1-alquil-2-acil-fosfatidilcolina (ter-fosfolpido) (Fig. 9.4).

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METABOLISMO DE ACILGLICEROLES Y ESFINGOLPIDOS

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Figura 9.4. Formacin de ter fosfolpido.

METABOLISMO DE ESFINGOLPIDOS
Degradacin
El catabolismo de los esfingolpidos se produce en los lisosomas, por la accin de una familia de enzimas hidrolticas. Estas rutas tienen un gran inters a nivel mdico dada su relacin
con un grupo de enfermedades congnitas denominadas esfingolipidosis, cada una de las enfermedades se caracteriza por el
dficit de una de las enzimas de la degradacin (Tabla 9.1).
Tabla 9.1. Esfingolpidos
Enfermedad

Enzima deficitaria

Intermedio acumulado

Gangliosidosis GM1

-Galactosidasa

Ganglisido GM1

Tay-Sachs

-N-acetilhexosaminidasa

Ganglisido GM1

Fabry

-Galactosidasa A

Trihexosilceramida

Gaucher

-Glucosidasa

Glucosilceramida

Niemann-Pick

Esfingomielinasa

Esfingomielina

Lipogranulomatosis de Farber

Ceramidasa

Ceramida

Leucodistrofia de clulas globoides

-Galactosidasa

Galactosilceramida

Leucodistrofia metacromtica

Arilsulfatasa A

3-sulfogalactosil-ceramida

Sandhoff

N-acetilhexosaminidasas A y B

Ganglisido GM1 y Globsido

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los esfingolpidos, y especialmente la esfingomielina, son


componentes abundantes de la vaina de mielina que protege y
asla a las clulas del sistema nervioso central. Las esfingolipidosis o enfermedades de almacenamiento de lpidos se caracterizan por dficit de una de las enzimas de degradacin, con la
acumulacin dentro del lisosoma del sustrato de la enzima deficitaria.
La mayora de estas enfermedades son autosmicas recesivas. Debido a la gran cantidad de esfingolpidos existente en el
tejido nervioso, la mayora de las esfingolpidosis comportan un
deterioro grave de la funcin del sistema nervioso central. Una
de las ms conocidas esfingolipidosis es la denominada enfermedad de Tay-Sachs, en la que existe un dficit de la N-acetilhexosaminidasa A liposmica; fue una de las primeras enfermedades
genticas que se diagnostic con xito mediante amniocentesis.

Sntesis de esfingosina
La sntesis de esfingosina, un componente comn de los esfingolpidos, se realiza mediante la condensancin del palmitoil-CoA y serina, formando una amina de 18 tomos de carbono denominada esfingonina. A travs de una decarboxilacin y dos reducciones posteriores se obtiene la esfingosina
(Fig. 9.5). La incorporacin de un acil-CoA da origen a la

Figura 9.5. Sntesis de esfingosina.

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METABOLISMO DE ACILGLICEROLES Y ESFINGOLPIDOS

molcula de ceramida (N-acil-esfingosina). Las esfingomielinas


(N-acilesfingosina fosforilcolina) se obtienen por adicin de un
grupo fosforilo esterificado con colina, procedente de la fosfatidilcolina. Si en lugar del grupo fosfato y la colina, se produce la
incorporacin secuencial de monosacridos, se forman los distintos glucoesfingolpidos. La incorporacin de los monosacridos se realiza a travs de intermediarios activados mediante
unin a CTP o UTP, y est catalizado por las glucosil-transferasas que forman enlaces glucosdicos para producir ganglisidos
y cerebrsidos. La ceramida acta como precursor tanto de la
estingomielina como de los glucoesfingolpidos (Fig. 9.6).

Figura 9.6. Estructura general de un esfingolpido (A). Estructura de la


molcula de ceramida (X H) y de sus distintos derivados (B).

En los cerebrsidos, la glucosa o la galactosa estn unidos


al grupo hidroxilo terminal de las ceramidas. Las UDP-glucosa
o UDP-galactosa son los dadores de azcar en la sntesis de los
cerebrsidos. En los ganglisidos, un oligosacrido est unido a
la ceramida por un residuo de glucosa, son los esfingolpidos
ms complejos, el azcar cido N-acetilneuramnico (NAN) o el
N-glicolinneuramnico. Estos azcares cidos se denominan
cidos silicos. Se sintetizan a partir de fosfoenol piruvato y

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

N-acetilmanosamina-6-fosfato. Los ganglisidos se sintetizan


mediante la adicin paso a paso de residuos de azcares al
cermido. La UDP-glucosa, UDP-galactosa, UDP-N-acetilgalactosamina y el CMP-N-acetilneuraminato son los dadores activados de estos residuos de azcares. Las enzimas que intervienen
en el proceso son las glucosiltransferasas de la clula. Se han
identificado ms de 15 ganglisidos diferentes. Los ganglisidos son receptores de agentes especficos, como la toxina del
clera, que se une al ganglisido GM1, o el virus de la gripe
que reconoce la porcin de cido silico de ciertos ganglisidos. Se desconocen las funciones bioqumicas de estos esfingolpidos, se cree que los ganglisidos podran jugar un papel
informador en las interacciones intercelulares, proporcionando
determinantes de reconocimiento especficos en la superficie de
las clulas.

RESUMEN
Los triacilgliceroles se sintetizan mediante rutas sencillas en las que los grupos acilo de los acil-CoA se transfieren a los grupos hidroxilo del glicerol-3-fosfato, que sufre
dos esterificaciones sucesivas para formar diacilglicerol-3fosfato, tambin denominado cido fosfatdico, que es precursor tanto de los fosfolpidos como de los triacilglicridos. La posterior formacin de los triacilglicridos implica
la eliminacin hidroltica del fosfato seguida de una nueva
esterificacin con un acil-CoA.
Los glicerofosfolpidos, lpidos predominantes en las
membranas, se sintetizan mediante vas que parten del
fosfatidato y activan intermediarios mediante la reaccin
con la citidina trifosfato (CTP). La S-adenosilmetionina es
el donador de grupos metilo para la sntesis de la fosfatidilcolina a partir de fosfatidiletanolamina.
Los esfingolpidos (glucoesfingolpidos) se sintetizan a
partir de ceramida, es decir, del ceramido, que se forma
por acilacin de esfingosina, y la adicin sucesiva de azcares mediante la accin sucesiva de glucosiltransferasas,
que actan sobre los azcares ligados a nucletidos. Los
ganglisidos son esfingolpidos que contienen un oligosacrido con al menos un residuo de N-acetilneuraminato
o un cido silico derivado de l.
Las esfingolipidosis, tambin conocidas como enfermedades de almacenamiento de lpidos, son mayoritariamente enfermedades autosmicas recesivas, que se caracteri-

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METABOLISMO DE ACILGLICEROLES Y ESFINGOLPIDOS

zan por el dficit de una de las enzimas de degradacin de


estos compuestos, los principales sntomas son retraso en
el desarrollo psicomotor, retraso mental, ceguera y en muchos casos la muerte antes de los 3 4 aos de edad.

APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Tay-Sachs
Es la mejor conocida de las esfingolipidosis, se caracteriza
porque hay un dficit o ausencia de la N-acetilhexosaminidasa
A liposmica. Las irregularidades o anomalas en la degradacin de los ganglisidos pueden tener serias consecuencias clnicas. El dficit enzimtico causa una elevada concentracin de
ganglisidos, concretamente el denominado GM2, fundamentalmente en el cerebro. Esta concentracin de ganglisidos GM2
es mucho ms alta de lo normal porque un residuo N-acetilgalactosamina terminal se elimina muy lentamente o no se elimina. Los cambios patolgicos ms sorprendentes tienen lugar en
el sistema nervioso, ya que las neuronas se hinchan enormemente y los lisosomas aparecen repletos de lpidos.
En la enfermedad de Tay-Sachs los sntomas, por lo general, son evidentes antes de que los nios tengan un ao, la enfermedad causa por lo general degeneracin del sistema nervioso central, debilidad y retraso del desarrollo psicomotor, lo
que conlleva retraso mental, ceguera y la muerte entre el segundo y tercer ao.
Se produce en esta enfermedad una desaparicin de las clulas ganglionares y la proliferacin de las clulas gliales, y la
desmielinizacin de los nervios perifricos. El hallazgo patognmico es una mancha rojo cereza en la mcula causada por el
hinchamiento y la necrosis de las clulas ganglionares del ojo.
Esta enfermedad, como la mayora de almacenamiento de lpidos, se transmite en forma de anormalidades genticas recesivas, la anormalidad se encuentra en un cromosoma autosmico. Por lo general, los sntomas son evidentes antes de que los
nios afectados tengan un ao, a la edad de 2 aos, el nio
est demente y ciego, la muerte generalmente se produce antes
de los 3 aos de edad, como indicamos anteriormente. Dado
que no hay ninguna forma de curacin conocida de esta enfermedad, se ha centrado la atencin en la deteccin prenatal,
sta fue una de las primeras enfermedades genticas que se
diagnostic con xito durante el desarrollo del feto. Se obtiene
el lquido amniotico por amniocentesis y se analiza para ver la

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

actividad de la N-acetilhexosaminidasa A. La nica forma conocida de abordar la enfermedad cuando se detecta es la interrupcin del embarazo.
Aunque la enfermedad de Tay-Sachs es rara en la poblacin general, es relativamente frecuente en los judos americanos procedentes del centro y del este de Europa, aproximadamente 1 de cada 30 individuos es portador del gen defectuoso
y 1 de cada 300 en los americanos no judos.

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TEMA 10

Metabolismo
del colesterol

Biosntesis del colesterol. Transporte y excrecin


del colesterol. Regulacin de la biosntesis del colesterol.

El colesterol forma parte de las membranas plasmticas de


las clulas eucariotas, siendo un componente esencial para su
estabilidad estructural y funcional. Es el precursor de otros esteroides que cumplen importantes funciones fisiolgicas, tales
como cidos biliares, hormonas esteriodeas, vitamina D, etc.
Sin embargo, el aumento de los niveles de colesterol en plasma
es causa de morbilidad y de mortalidad por enfermedad cardiovascular. El deposito de colesterol en la pared arterial es el
responsable de la formacin de las placas de ateroma. Resulta
pues evidente la necesidad de una regulacin cuidadosa que
garantice todos los destinos metablicos del colesterol, sin generar patologa.

BIOSNTESIS DEL COLESTEROL


Junto al colesterol exgeno procedente de la dieta que se
absorbe en el tubo digestivo, las clulas del organismo forman
una cantidad incluso superior de colesterol endgeno. Casi todo
el colesterol endgeno que circula unido a las lipoprotenas del
plasma se forma en el hgado. Todas las clulas del cuerpo pueden sintetizar algo de colesterol, lo que estara justificado por el
hecho de ser un componente estructural de todas las membranas. La sntesis de colesterol se realiza a partir del acetil-CoA.
Las clulas de la mucosa intestinal, glndulas suprarrenales y
gnadas pueden sintetizarlo a partir del acetil-CoA, aunque fundamentalmente lo obtienen del plasma unido a las LDL.
En el hgado, principal centro de sntesis de colesterol, el
acetil CoA pasa a 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA),

Casi todo el colesterol endgeno se sintetiza en el hgado.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

que puede reducirse a mevalonato por una reductasa que necesita NADPH. Esta reaccin es limitante y constituye la clave
para regular la velocidad de sntesis del colesterol. El HMGCoA se encuentra tanto en el citoplasma como en la mitocondria del hepatocito, aunque en esta ltima constituye fundamentalmente un precursor de los cuerpos cetnicos (Fig. 10.1).

Figura 10.1. Formacin del mevalonato.

El mevalonato sufre dos fosforilaciones catalizadas por


quinasas para producir pirofosfomevalonato, que es descarboxilado mientras que se produce la hidrlisis de ATP para
producir isopentenilpirofosfato (Fig. 10.2). Este compuesto es

Figura 10.2. Sntesis de isopentenil-pirofosfato.

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METABOLISMO DEL COLESTEROL

131

un intermediario importante para la sntesis de vitamina D, la


cual requiere de la accin de la luz ultravioleta en uno de los
pasos.
A partir de este compuesto se sintetiza el escualeno mediante una serie de reacciones que comienzan con la isomerizacin del isopentenil-pirofosfato hasta dimetil-alil-pirofosfato
(Fig. 10.3).

Figura 10.3. Sntesis del escualeno.

A continuacin, ambas molcuIas se ensamblan de forma


caracterstica con perdida del resto pirofosfato de sta ltima
para dar lugar al geranil-pirofosfato. Este compuesto reacciona
de nuevo con otra molcula de isopentenil-pirofosfato, para
producir farnesil-pirofosfato. A partir de aqu, por condensacin reductora de dos molculas de farnesil-pirofosfato, mediante el concurso de NADPH se llega a la formacin del escualeno con prdida de pirofosfato.
La etapa final de la sntesis de colesterol se inicia con la ciclacin del escualeno en presencia de oxgeno molecular y
NADPH, para dar lanosterol por medio de una ciclasa. En esta
etapa se producen adems reajustes de electrones, cambios en
los dobles enlaces, eliminacin de grupos metilo, etc. de gran
complejidad (Fig. 10.4).

El isopentenil pirofosfato (IPP) es tambin un intermediario


en la sntesis de vitamina D.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 10.4. Sntesis de colesterol a partir de escualeno.

TRANSPORTE Y EXCRECIN DE COLESTEROL

La incorporacin del
colesterol a las clulas hepticas depende de receptores especficos.

El colesterol, junto con los triglicridos y fosfolpidos, altamente hidrofbicos, es transportado en los lquidos corporales
unido a protenas, en forma de agregados macromoleculares o
lipoprotenas (ver tema 12).
El colesterol heptico de origen exgeno, procedente de la
dieta, llega hasta el hepatocito vehiculizado en los remanentes
de los quilomicrones. El colesterol endgeno, por su parte, es
sintetizado en la clula heptica a partir del acetil-CoA procedente de azcares, cidos grasos y aminocidos. Una parte de
este colesterol endgeno sale del hgado en forma de LDL,
para regresar formando parte de diferentes lipoprotenas y remanentes de las mismas. Su incorporacin est mediada por
receptores especficos. El colesterol de los tejidos llega al higado a travs de las LDL, IDL y HDL. Finalmente el exceso de
colesterol heptico acta como mecanismo de autorregulacin
y es excretado en la bilis como tal o en forma de cidos biliares (Fig. 10.5).

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METABOLISMO DEL COLESTEROL

133

VLDL, LDL, HDL e


IDL son lipoprotenas
de densidad muy baja, de densidad baja,
de densidad elevada
y de densidad intermedia respectivamente.

Figura 10.5. Esquema del transporte de grasas.

REGULACIN DE LA BIOSNTESIS
DE COLESTEROL
El acetil CoA es un metabolito intermediario tanto de azcares como de cidos grasos y de algunos aminocidos, por lo
que su disponibilidad est asegurada, lo que por otra parte es
comprensible dada la importancia fisiolgica del colesterol. La
regulacin de la biosntesis es compleja y, aunque no est totalmente dilucidada, parece depender tanto del propio colesterol,
como de sus metabolitos intermediarios que actuaran sobre las
enzimas reguladoras del proceso.
El rgano donde se regula fundamentalmente la sntesis del
colesterol es el hgado. Los niveles de colesterol en plasma pueden modificarse por efecto de la dieta. El colesterol de la dieta
disminuye la sntesis y actividad de la 3-hidroxi-3-metilglutarilCoA reductasa, como hemos visto, enzima clave en la primera
etapa de la sntesis, que cataliza la formacin de mevalonato a
partir del acetil CoA. El control de la reductasa es bastante
complejo y puede hacerse a distintos niveles que incluyen la
transcripcin de la informacin del DNA, la traduccin del
RNA o sntesis de la enzima y la degradacin o prdida de su
actividad biolgica. A estos niveles actan metabolitos derivados del cido mevalnico o del colesterol, a travs de enzimas
especficas que pueden reconocerlos y actuar en consecuencia.
El exceso de grasas en la dieta tiene efecto sobre los niveles
plasmticos de colesterol. Mientras que las grasas saturadas lo
elevan de forma importante al aumentar los niveles de acetilCoA en el hepatocito, las grasas poliinsaturadas lo disminuyen
moderadamente. Estas observaciones son la base de muchas
de las estrategias dietticas actuales. Por otra parte, el aumento

La sntesis del colesterol se regula en el


hgado.

El exceso de grasas
en la dieta influye sobre los niveles de colesterol en sangre.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de colesterol en el hepatocito, aumenta la actividad de la enzima acil-colesterol-acil-transferasa (ACAT), que se encarga de


esterificar el colesterol libre. Las LDL son las principales transportadoras del colesterol en plasma, regulando la sntesis de
novo de colesterol en los tejidos. Estas lipoprotenas son captadas por el hgado a travs de receptores especficos, regulables por la propia concentracin intracelular de colesterol.
Cuando sta es elevada, no slo se impide la entrada de LDLcolesterol, sino que se bloquea la sntesis de colesterol endgeno por inhibicin enzimtica.
Una buena parte de los frmacos utilizados en el control de
los niveles plasmticos de colesterol, las estatinas, actan como
inhibidores especficos de la HMG CoA.
Una de las teoras ms aceptadas sobre la patogenia de la
aterosclerosis es la hiptesis de la reaccin de la lesin, segn
la cual, el endotelio vascular estara sometido a lesiones de repeticin que pondran en peligro su integridad. Entre las causas
de lesin endotelial, se encuentran las de tipo qumico, siendo
la hipercolesterolemia crnica la ms importante. Cuando se
pierde la integridad funcional del endotelio de revestimiento, el
tejido subendotelial queda expuesto a una serie de factores, entre otros, factores plaquetarios, lipoprotenas del plasma, hormonas, que estimulan la migracin de clulas del msculo liso
desde la tnica media arterial hacia la ntima, proliferando en
los focos de lesin donde constituyen un ncleo de tejido conectivo con acumulacin de lpidos. Es probable que el trastorno celular inicial sea la adhesin al foco aterognico de los monocitos circulantes capaces de almacenar lpidos y su transformacin posterior en macrfagos tisulares. Los principales focos
aterognicos se localizan en los puntos ms dbiles del rbol
circulatorio, sus bifurcaciones. Esto es debido a que en dichas
zonas el riesgo de lesin de la clula endotelial es mayor.

RESUMEN
La regulacin de la biosntesis del colesterol se ejerce
fundamentalmente en el hgado. El aumento de colesterol
en la dieta produce una inhibicin de la sntesis heptica,
que se lleva a cabo en la primera etapa de formacin de
mevalonato, por inhibicin de la HMG-CoA reductasa,
que acta como enzima limitante.
Por otra parte, la sntesis de colesterol tambin se ve inhibida como consecuencia del efecto que ejercen sus niveles intracelulares sobre la sntesis y expresin del receptor

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METABOLISMO DEL COLESTEROL

celular para LDL, que bloquea la incorporacin de colesterol desde dichas lipoprotenas plasmticas.

APLICACIONES CLNICAS
1. Hipercolesterolemia primaria
Es una patologa que se produce como consecuencia de un
defecto en el receptor de las LDL (protena codificada por un
gen localizado en el brazo corto del cromosoma 19). Es la enfermedad monognica ms frecuente: 1/1500 de herencia
autosmico dominante. Cursa con elevacin de LDL-Colesterol. En la clnica se caracteriza por presentar ateroesclerosis coronaria precoz, xantomas tendinosos, tuberosos, xantelasmas y
arco corneal. Las manifestaciones cutneas, como en otras enfermedades, estn en relacin con el tiempo de evolucin de la
enfermedad. Requiere tratamiento diettico (dieta pobre en colesterol y grasas saturadas y rica en grasas poliinsaturadas).
Cuando este tratamiento fracase se emplear un tratamiento
combinado de colestiramina (de primera eleccin en nios y en
mujeres en edad frtil que no usen anticonceptivos) e inhibidores de la HMG-CoA reductasa.

2. Aterosclerosis
Es un proceso patolgico conocido ya en la antigedad, habindose descrito cambios compatibles con la aterosclerosis en
las momias de la XI dinasta de los faraones. Crawford la define
como una lesin arterial muy prevalente, caracterizada por un
engrosamiento focal de la ntima constituido por acmulos de
grasas y capas de fibras finas semejantes a colgeno en proporciones variables. Mediante esta definicin puso de manifiesto
sus tres aspectos fundamentales:
La distribucin focal de las lesiones, determinada por factores hemodinmicos.
La afeccin predominante de la ntima.
La naturaleza compleja de los elementos que forman las
lesiones ateroesclerticas consistentes en lpido, tejido
conectivo necrtico y tejido fibromuscular fibroproliferado, formando este ltimo un recubrimiento que separa
los dems constituyentes del flujo sanguneo en la luz arterial.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La hiperlipidemia, y en especial la hipercolesterolemia, es


un importante factor de riesgo para el desarrollo de cardiopata
coronaria y accidente cerebrovascular. El colesterol y sus diversas fracciones son importantes factores predictores de estas enfermedades y la mortalidad que se deriva de ellas. Su capacidad predictiva depende en gran medida de la edad. En cualquier caso, el tratamiento de estas entidades comienza por la
prevencin y control de los factores de riesgo asociados.

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TEMA 11

Metabolismo
de los derivados
del colesterol

Sntesis de hormonas esteroideas. Sntesis de cidos biliares. Circulacin enteroheptica de las sales biliares. Sntesis de Vitamina D.

El destino metablico del colesterol, adems de formar parte de las membranas celulares, es servir de precursor para la
sntesis de hormonas esteroideas, cidos biliares y vitamina D.
Las hormonas esteroideas tienen efectos significativos sobre el
metabolismo de los glcidos y de las protenas de muchos tejidos. Los cidos biliares, que se sintetizan en el hgado y se almacenan y concentran en la vescula biliar, solubilizan los lpidos de la dieta y pueden ser reabsorbidos por el hgado o eliminados por el intestino delgado. La vitamina D, que acta
sobre la calcificacin de los huesos, se almacena en el hgado y
se excreta por el mismo camino que los cidos biliares.

SNTESIS DE HORMONAS ESTEROIDEAS


Todas las hormonas esteroideas proceden del colesterol. La
importancia de estos compuestos se debe a su actividad biolgica como hormonas, ms que a la utilizacin de colesterol
para su sntesis, que ocurre en cantidades pequeas. Los principales tejidos implicados en la sntesis hormonal son los ovarios, los testculos y la corteza adrenal.
El colesterol para la sntesis procede del plasma de donde
es captado en forma de LDL-colesterol, o bien se obtiene a
partir del colesterol esterificado que almacenan las clulas. En
ausencia de estas dos fuentes, se produce la sntesis "de novo
a partir de acetil-CoA.
El primer paso es la escisin de la cadena lateral para formar pregnenolona. La hidroxilacin previa en C-20 y C-22 requiere de la intervencin de una monooxigenasa dependiente

Las hormonas esteroideas, los cidos


biliares y la vitamina
D proceden del colesterol.

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138

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La pregnenolona es
precursora de varias
hormonas con gran
significado biolgico.

del citocromo P450. La ruptura entre ambos carbonos hidroxilados se produce por una desmolasa. Las tres reacciones necesitan NADPH y O2. La reaccin ocurre en la mitocondria, hasta
donde es conducido el colesterol por medio de un transportador especfico.
La corticotropina o ACTH secretada por la adenohipfisis
estimula la sntesis de pregnenolona a partir de colesterol. La
pregnenolona es el precursor de las dems hormonas esteroideas mediante una serie de transformaciones qumicas sencillas.
La progesterona se sintetiza a partir de pregnenolona en
dos etapas, en la primera el grupo hidroxilo del C-3 se transforma en 3-ceto y en la segunda, el doble enlace de C-5 pasa a
C-4 (Fig. 11.1). El cortisol se obtiene a partir de la progesterona por hidroxilacin en C-17, C-21 y C-11 (Fig. 11.2). Las enzimas que catalizan estas reacciones son muy especficas. La hidroxilacin en C-21 de la progesterona inicia la sntesis de aldosterona mientras que la hidroxilacin en C-17 inicia la
sntesis de andrgenos (Fig. 11.3).

Figura 11.1. Sntesis de progesterona y de los corticoides.

En la eliminacin de
las hormonas esteroideas intervienen los
cidos biliares.

La cadena lateral formada por C-20 y C-21 se escinde para


proporcionar androstendiona, y la testosterona se obtiene por
reduccin del grupo 17-ceto de la androstendiona. Los estrgenos se obtienen a partir de los andrgenos por aromatizacin
del anillo A y prdida del grupo metilo C-19.
Los productos terminales del metabolismo de las hormonas
esteroideas pueden determinarse en orina y constituyen indicadores importantes del nivel hormonal.
La inactivacin y eliminacin de estas hormonas requiere
de su solubilidad en hgado y rin, donde son conjugadas con
cido glucurnico o sulfatos para su excrecin final. Los productos terminales difieren segn la hormona de que se trate.
En algunos casos existen varios metabolitos terminales procedentes de una misma hormona. Su determinacin analtica es
importante en clnica.

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METABOLISMO DE LOS DERIVADOS DEL COLESTEROL

139

Figura 11.2. Sntesis de progesterona y corticoides.

SNTESIS DE CIDOS BILIARES


Con diferencia, el destino ms importante del colesterol no
membranoso es la formacin de cidos biliares (Fig. 11.4). Estos se obtienen a partir del colesterol por escisin de la cadena
lateral. Como en el caso de las hormonas esteroideas, las hidroxilacines juegan un papel fundamental. El proceso se lleva
a cabo en hgado y en una primera etapa el colesterol es convertido en 7-hidroxicolesterol por accin de una hidroxilasa especfica sobre la que actan los productos terminales que regulan la sntesis por inhibicin. A partir de este compuesto, por
sucesivas hidroxilaciones, se obtiene colil-CoA, intermedio de
los dmas cidos biliares. El grupo carboxlico terminal de la
cadena lateral activado, reacciona con el grupo amino de la gli-

Los cidos biliares se


almacenan en la vescula biliar, donde se
encuentran en forma
de sales.

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140

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 11.3. Sntesis de andrgenos y estrgenos.

Figura 11.4. Sntesis de cidos biliares.

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METABOLISMO DE LOS DERIVADOS DEL COLESTEROL

141

cina o de la taurina para formar cido glicoclico o tauroclico


respectivamente.
Los cidos biliares se almacenan en la vescula biliar formando parte de la bilis; dado el pH alcalino de la misma, se
encuentran en forma de sales biliares. Otros componentes de la
bilis son la bilirrubina, producto final de la destruccin de los
hematies, y el exceso de colesterol sintetizado en el hgado, que
utilizan este medio de transporte para su eliminacin. Lo mismo ocurre con otra serie de productos de desecho procedentes
de la sangre. Pero, adems, la bilis participa en la digestin y
absorcin de las grasas por su contenido en sales biliares que
facilitan el transporte de los lpidos en el intestino y los emulsionan facilitando la accin de las lipasas.
La bilis se sintetiza de forma continua y se almacena en la
vescula biliar hasta su secrecin al duodeno por estimulacin
hormonal cuando se requiere su accin por la presencia de
grasas en el quimo.

CIRCULACIN ENTEROHEPTICA
DE LAS SALES BILIARES
El 90% aproximadamente de las sales biliares que llegan al
intestino delgado durante la digestin son recuperadas en el
mismo, en parte por difusin y en parte por transporte activo.
Una vez absorbidas pasan a la sangre y vuelven por la vena
aorta al hgado, donde son captadas de nuevo por el hepatocito para su almacenamiento en la vescula biliar.
La recuperacin de las sales biliares permite su reutiIizacin al menos 18 veces antes de su eliminacin definitiva por
las heces. Esta recirculacin de las sales biliares desde el intestino al higado, recibe el nombre de circulacin enteroheptica y es el proceso ms importante para la formacin
de bilis.

Ms del 90% de las


sales biliares vuelven
al hgado.

SNTESIS DE VITAMINA D
La vitamina D se obtiene a partir del 7-dehidrocolesterol
por accin de la luz ultravioleta (Fig. 11.5). En el hgado es hidroxilada pasando a 25-hidroxicolecalciferol y posteriormente
en el rin, bajo la accin de la parathormona (PTH), es convertida en la forma biolgicamente activa, la 1,25 dihidroxicolecalciferol, considerada una hormona esteroidea con funciones sinrgicas a la PTH de gran importancia en la homeostasis
de calcio y fosfato.

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142

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 11.5. Sntesis y conversiones qumicas de la vitamina D.

RESUMEN
Adems de formar parte de las membranas celulares, el
colesterol es el precursor de las hormonas esteroideas, vit.
D y cidos biliares. Estos compuestos desempean funciones importantes en el organismo. Las hormonas esteroide-

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METABOLISMO DE LOS DERIVADOS DEL COLESTEROL

as y la vit. D, que tras su hidroxilacin heptica y renal se


convierte tambin en una hormona esteroidea, desempean funciones reguladoras de gran transcendencia para
el desarrollo normal del organismo, Esta es sin duda su
gran importancia, ms que el destino metablico del colesterol, que apenas supone una mnima proporcin del mismo. No ocurre lo mismo para los cidos biliares, que s representan una importante fuente de utilizacin metablica
del colesterol y su destino final como forma de excrecin.
Los cidos biliares desempean, adems, importantes funciones a travs de su incorporacin a la bilis, participando
en la digestin y absorcin de los lpidos y autorregulando
la produccin y secrecin biliar a travs de la circulacin
enteroheptica.

APLICACIONES CLNICAS
1. Colelitiasis biliar
En determinadas condiciones el colesterol de la bilis puede
precipitar formando clculos. Una de las causas ms frecuentes
es la secrecin excesiva de colesterol en la bilis, determinada
en parte por el exceso de colesterol en la dieta, ya que las clulas hepticas lo sintetizan como parte del metabolismo orgnico de las grasas. Otras veces se trata de inflamacin e infeccin
crnica del epitelio vesicular, que altera sus caractersticas permitiendo una absorcin excesiva de agua y sales biliares necesarias para mantener disuelto el colesterol. El tratamiento farmacolgico se basa en la administracin exgena de cido
quenodesoxiclico, uno de los cidos biliares naturales cuyo
efecto consiste en aumentar la formacin de bilis y reducir la
concentracin de colesterol, ayudando a su disolucin y disminuyendo la formacin de cidos biliares por el hgado, lo que
reduce simultneamente la secrecin heptica de colesterol a la
bilis. Es importante la disminucin de grasas en la dieta. En
muchas ocasiones el tratamiento debe ser quirrgico.

2. Dficit de 21-hidroxilasa
La anomala congnita ms frecuente de la produccin de
hormonas esteroideas es la deficiencia de la 21-hidroxilasa,
necesaria para la sntesis de glucocorticoides y mineralcorticoides. La disminucin en la sntesis de estos esteroides aumenta

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144

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

la secrecin de ACTH hipofisaria al disminuir el freno que realizan habitualmente las hormonas perifricas por retrocontrol.
La consecuencia es un aumento en la sntesis de progesterona
que deriva hacia la sntesis de andrgenos, produciendo virilizacin en la nia. En los nios se producen signos de madurez
sexual prematura y en ambos sexos aceleracin del crecimiento y calcificacin temprana de los nucleos de osificacin con
tallas finales pequeas. El tratamiento se basa en la administracin de glucocorticoides como terapia de sustitucin, entre
cuyas acciones se produce la disminucin de ACTH por inhibicin negativa.

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TEMA 12

Lipoprotenas

Lipoprotenas. Receptores de lipoprotenas. Metabolismo de las lipoprotenas. Regulacin de los


depsitos de colesterol en el organismo.

Las lipoprotenas estn constituidas por protenas y lpidos.


Se sintetizan en el hgado y su funcin principal es la de transportar lpidos por la sangre. Las lipoprotenas se clasifican en
cinco tipos atendiendo a su densidad. Las clulas las reconocen mediante receptores especficos de membrana. Su metabolismo es bastante complejo ya que sufren numerosas transformaciones en los tejidos, incluida la sangre, y su eliminacin o
reutilizacin depende del tipo de lipoprotena.

LIPOPROTENAS
Representan la nica forma reconocida de transporte de los
lpidos circulantes, desde su aislamiento e identificacin por
Macheboeuf.

La funcin principal
de las lipoprotenas
es la de transportar
lpidos.

Formacin y funciones. Son protenas conjugadas, con


una parte proteica o apoprotena y un grupo prosttico de naturaleza lipdica. Se forman en el hgado mayoritariamente,
que es donde se sintetizan fundamentalmente el colesterol, los
fosfolpidos y los triglicridos, a excepcin de los quilomicrones de origen intestinal que contienen los lpidos exgenos obtenidos a travs de la dieta mediante la digestin. Una de sus
principales funciones es el transporte de lpidos en sangre,
dado su caracter hidrfobo, que les impide circular de forma
libre. Las lipoprotenas de muy baja densidad transportan triglicridos sintetizados en el hgado fundamentalmente, hasta
el tejido adiposo, mientras que las dems lipoprotenas intervienen en el transporte de colesterol y fosfolpidos desde el h-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Hay cinco tipos de lipoprotenas: Quilomicrones, VLDL,


LDL, IDL y HDL.

gado a los tejidos perifricos o desde estos al hgado Las lipoprotenas se encuentran formadas por un ncleo esfrico integrado por los componentes ms apolares, triglicridos y colesterol esterificado, envueltos por una capa de fosfolpidos y colesterol libre, de forma que las porciones ms polares se
orientan hacia fuera, mientras que el ncleo hidrfobo es totalmente inaccesible a las enzimas plasmticas y ser necesario
que las lipoprotenas penetren en las clulas para que el colesterol y los triglicridos puedan ser utilizados. Envolviendo este
complejo se sitan las apoprotenas. Los lpidos y las protenas
no estn unidos covalentemente, sino que mantienen estable
su estructura gracias a interacciones hidrofbicas entre las porciones apolares de ambos, que de esta forma quedan protegidas del contacto con el agua, pero que tambin les permiten
intercambiar sus componentes entre s y con las membranas
celulares. Estos intercambios son la base del metabolismo de
las lipoprotenas. Existen una gran variedad de apoprotenas
con diferentes funciones, adems de vehiculizar los lpidos,
como servir de cofactores a enzimas plasmticas que intervienen en el metabolismo de las lipoprotenas, o contener seales
para las clulas diana de los tejidos que han de captarlos mediante receptores especficos. Se han aislado y caracterizado
distintos tipos de apoprotenas formadas por polipptidos monocatenarios sintetizadas y secretadas todas ellas en el hgado
y en el intestino.
Apo-A: I ,II y III
Apo-B: B-48 y B-100
Apo-C: I, II, III
Apo-D
Apo-E
Apo-F
Apo-G
En las lipoprotenas, varias apoprotenas primarias se asocian para dar lugar a apoprotenas secundarias.

Tipos de lipoprotenas
La separacin por ultracentrifugacin nos permite diferenciar las lipoprotenas en cinco tipos diferentes segn la densidad, que depende de la relacin lpido/protena. De menor a
mayor densidad son las siguientes:
1. Quilomicrones: Compuestos fundamentalmente por triglicridos. Contienen colesterol y fosfolpidos en pe-

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LIPOPROTENAS

2.

3.

4.

5.

147

quea proporcin. Se originan tras la digestin y absorcin de las grasas.


Lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL): Contienen
concentraciones elevadas de triglicridos y moderadas
de colesterol y fosfolpidos. El origen de los glicridos es
fundamentalmente endgeno, asegurando su transporte
desde el hgado hacia los tejidos perifricos.
Lipoprotenas de baja densidad (LDL): Son lipoprotenas
de baja densidad de las que se han extrado todos los triglicridos, dejando una concentracin elevada de colesterol y fosfolpidos.
Lipoprotenas de densidad intermedia (IDL): Son lipoprotenas de densidad intermedia de las que se han extrado gran parte de los triglicridos, de forma que las
concentraciones de colesterol y fosfolpidos estn aumentadas.
Lipoprotenas de alta densidad (HDL): Contienen una
alta proporcin de protenas y menor concentracin de
colesterol y fosfolpidos. Depuran parcialmente el colesterol de los tejidos perifricos, transportndolo al hgado
para su eliminacin.

Los quilomicrones y las VLDL son ricos en triglcridos,


mientras que las LDL y IDL lo son en colesterol. Aunque las
distintas lipoprotenas difieren por la naturaleza y proporcin
de sus componentes lipdico y proteico, se establece entre ellas
un continuo intercambio que es la base del transporte y metabolismo lipdico.

RECEPTORES DE LIPOPROTENAS
Se encuentran en la membrana de las clulas implicadas en
el metabolismo de las lipoprotenas. Su presencia permite identificar de forma especfica la porcin proteica de las lipoprotenas y desencadenar los mecanismos que en cada caso permitan la incorporacin de los lpidos a la clula diana.

Los receptores de
membrana de las lipoprotenas son de
tres clases E/B-100,
E y de HDL.

Receptores E/B-100. Se encuentran en la membrana del hepatocito y de la mayora de los tejidos perifricos. Su
mecanismo de accin es el mejor conocido. Reconocen
las apoprotenas B-100 y E. La unin apoprotena-receptor provoca la invaginacin de la membrana plasmtica y la incorporacin del complejo recin formado al
interior celular por endocitosis. Ya en el citoplasma se
produce la fusin de la vescula neoformada con un lisosoma para la degradacin de su contenido. Los produc-

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148

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

tos resultantes pasan al citoplasma, donde el colesterol,


cuando es elevado, ejerce un mecanismo de autocontrol, disminuyendo la sntesis y expresin de los receptores en la membrana, con lo que se impide la entrada de
nuevas lipoprotenas cargadas de colesterol. En el hepatocito los niveles intracelulares elevados de colesterol
provocan adems la inhibicin del sistema enzimtico
que cataliza la sntesis endgena de nuevo colesterol.
Receptores E. Se encuentran exclusivamente en el hgado y
reconocen las apo-E de las VLDL e IDL y remanentes de
los quilomicrones. Estos receptores no estn sometidos a
ningn tipo de regulacin, por lo que el hepatocito puede captar las lipoprotenas mencionadas sin limitacin
alguna.
Receptores para HDL. Son los receptores menos conocidos.
Se encuentran en el hgado, macrfagos, fibroblastos y
msculo liso de la pared arterial. Al parecer, reconocen
las apoprotenas A-I de las HDL.
Receptores scavenger. Denominados tambin basureros
por recoger las partculas alteradas, como p.e. las LDL
oxidadas que permanecen un tiempo excesivo en la circulacin. Se les relaciona con el reconocimiento y captacin de radicales libres. No reconocen lipoprotenas
funcionantes y no son regulables por los niveles de colesterol. Se localizan fundamentalmente en los macrfagos tisulares.

METABOLISMO DE LAS LIPOPROTENAS


Los quilomicrones
son las lipoprotenas
de mayor tamao; el
90% son triglicridos
que proceden de la
dieta.

Las lipoprotenas sufren numerosos cambios y transformaciones tanto en la circulacin, como en los tejidos.
Metabolismo de los quilomicrones. Se trata de los
complejos lipoproteicos circulantes de mayor tamao. Transportan lpidos de la dieta desde el intestino. Alrededor del 90%
de su contenido son triglicridos y el resto se trata de fosfolpidos y algo de colesterol libre y esterificado, con protenas de
tipo apo-B. Su origen es exclusivamente intestinal. Despus de
la ingesta de grasas en la dieta, se produce su hidrlisis a nivel
intestinal con el concurso de las lipasas pacreticas. Las sales
biliares contribuyen a la digestin emulsionando las grasas y facilitando la accin de las enzimas. Concluida la hidrlisis se
produce la absorcin en forma de colesterol libre, cidos grasos
libres, glicerol y monoglicridos, que pasan al interior del enterocito, donde se produce nuevamente su esterificacin para

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LIPOPROTENAS

formar triglicridos y steres de colesterol. En el retculo endoplsmico de stas clulas, son envueltos en apoprotenas A y
B para hacerlos hidrosolubles. El paso a travs de la membrana basal del enterocito requiere de las apoprotenas, sin las
cuales se acumularan en su interior. Desde aqu, en forma de
quilomicrones nacientes, son recogidos por el sistema linftico
y conducidos a travs del conducto torcico hasta la vena cava
superior sin sufrir el filtro heptico. Una vez en la circulacin se
produce la interaccin con las HDL realizndose un intercambio entre ambas. Las HDL les ceden colesterol esterificado y las
apo-C-III, C-II y E, de gran importancia para su degradacin,
mientras que los quilomicrones ceden a stas triglicridos, fosfolpidos y colesterol libre. Los triglicridos de los quilomicrones
proceden exclusivamente de la dieta. A nivel capilar, fundamentalmente en el tejido adiposo, msculo, glndula mamaria
y pulmn se produce la hidrlisis de los triglicridos, ya que de
esta forma no pueden pasar al interior de ninguna clula. La
enzima responsable es la lipoprotena lipasa extraheptica, situada en la cara externa del endotelio vascular y activada por
la apo-C-Il. Esta enzima se libera por la heparina activada por
la insulina. Los cidos grasos liberados son captados por las clulas de los tejidos circundantes, mientras que el glicerol es
transportado por la sangre hasta el hgado para su metabolismo. La vida media de los quilomicrones en la circulacin es
muy corta, menos de una hora en el hombre, aunque desde la
ingesta de grasas en la dieta hasta su presentacin en el plasma
pueden pasar varias horas. Como producto final del metabolismo de los quilomicrones, se forman unas partculas denominadas remanentes de quilomicrones, que apenas contienen triglicridos y s una proporcin elevada de colesterol esterificado
y apo-E que recibieron de las HDL. Las apo C-II y C-III son
ahora devueltas a las HDL de origen.
Los remanentes de los quilomicrones son captados por el
hgado gracias a la presencia de apo-E, a travs de receptores
especficos para dicha apo-protena. Ya en el interior del hepatocito se produce la hidrlisis para liberar el colesterol y los cidos grasos, que sern utilizados en la sntesis de nuevas lipoprotenas y de cidos biliares. Cuando los remanentes de los
quilomicrones exceden su concentracin fisiolgica en plasma,
o permanecen ms tiempo del acostumbrado, son fagocitados
por macrfagos del sistema reticuloendotelial.

149

En el hepatocito los
remanentes de los
quilomicrones se hidrolizan y liberan colesterol y cidos grasos.

Metabolismo de las VLDL. Adems de la dieta, otra


fuente importante de triglicridos en el hombre es la sntesis
heptica por esterificacin de cidos grasos con glicerol. Otros
tejidos adems del hgado pueden sintetizar triglicridos, pero

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150

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los cidos grasos del


hgado proceden de
la sangre y de la sntesis a partir de acetil-CoA por la acilCoA sintasa.

Las LDL son las principales lipoprotenas


transportadoras de
colesterol en la sangre.

no contribuyen a su liberacin a la sangre, a excepcin de los


enterocitos. Los cidos grasos que utiliza el hgado son captados
de la circulacin, o bien proceden de los remanentes de los quilomicrones. En su defecto son sintetizados de novo a partir de
acetil-CoA y liberados a la circulacin en forma de VLDL, cuyas
principales apoprotenas acompaantes son la apo-B-100, apoE y apo-C-II. Estos complejos lipoproteicos son de menor tamao que los quilomicrones y contienen tambin menor proporcin de triglicridos (60%) colesterol y fosfolpidos. En la circulacin se produce la activacin de la lipoprotena lipasa de
superficie de los capilares bajo la estimulacin de la apo C-II,
que hidroliza los triglicridos. El resultado es similar al descrito
para los quilomicrones. Tras la hidrlisis de los triglicridos se
producen cambios en la configuracin de las VLDL, que ceden
colesterol no esterificado, apoprotenas y fosfolpidos a las HDL,
recibiendo de ellas steres de colesterol. Las partculas residuales son ms pequeas, apenas contienen triglicridos y son ricas
en steres de colesterol. Se denominan remanentes de VLDL y
lipoprotenas de densidad intermedia o IDL. Estos remanentes
son captados por el hgado a travs de las apo-E y metabolizados. Las IDL son hidrolizadas por la lipasa heptica, enzima similar a la lipoprotena lipasa extraheptica, pero localizada en el
endotelio de los capilares del hgado. Tras la hidrlisis, las IDL
son convertidas finalmente en LDL, cuyo contenido bsico est
integrado por colesterol esterificado y escasa proporcin de colesterol libre y de triglicridos. Como apoprotenas para su reconocimiento, slo contienen apo B-100 (Fig. 12.1).

Figura 12.1. Formacin de quilomicrones en la mucosa intestinal.

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LIPOPROTENAS

Metabolismo de las LDL. Su formacin resulta de la degradacin intravascular de las VLDL. Son los principales transportadores de colesterol en la sangre. Su funcin consiste en regular la sntesis de colesterol de novo en los tejidos perifricos.
La mayor parte de las LDL van a ser captadas por el hgado a
travs de receptores especficos en la membrana del hepatocito.
El receptor de LDL reconoce la apo-B-100 de su estructura interaccionando entre s para formar el complejo lipoprotena-receptor que a continuacin se internaliza en la membrana tras la
formacin de una vescula que pasa al citoplasma celular por
endocitosis. Las vesculas que contienen LDL se fusionan en el
interior celular con lisosomas para su degradacin. La porcin
proteica produce aminocidos libres. Los steres de colesterol
son hidrolizados para producir colesterol libre y el receptor suele
reciclarse volviendo a la superficie celular, para repetir el transporte de nuevas molculas. El colesterol no esterificado es utilizado para la renovacin de la membrana, o reesterificado y almacenado en la clula. Estos steres contienen cidos grasos
monoinsaturados, a diferencia de los steres de colesterol en las
LDL, que son poliinsaturados. Por su parte, la sntesis y expresin del receptor para la LDL estn sometidos a un mecanismo
de retroalimentacin segn el cual, cuando aumenta el colesterol dentro de la clula, se produce la inhibicin de la transcripcin y traduccin de la informacin necesaria para la sntesis del
receptor y en consecuencia se bloquea la incorporacin de ms
colesterol desde las LDL plasmticas.
El aumento de colesterol en la clula inhibe la sntesis y expresin del receptor para LDL, con lo que se evita la captacin
de ms colesterol circulante. Tambin se inhibe la sntesis de la
reductasa de hidroximetilglutaril-CoA, enzima clave en la formacin de colesterol. Por otra parte se estimula la actividad de
la enzima acil-colesterol-acil-transferasa, encargada de reesteriflcar el colesterol dentro del hepatocito. El resultado de estas
acciones es disminuir la sntesis y aumentar el colesterol esterificado, que es utilizado por el hgado para la formacin de cidos biliares y nuevas lipoprotenas (Fig. 12.2). La interaccin
de las LDL en los tejidos perifricos es similar a lo descrito para
el hepatocito, ya que est mediada por el mismo tipo de receptores, regulables por los niveles de colesterol intracelular. Esta
posibilidad de captacin tisular nos da idea de su capacidad
aterognica en potencia, ya que pueden ceder en determinadas circunstancias una gran cantidad de lpidos en la pared
vascular. Una pequea proporcin de las LDL es captada por
las suprarrenales y las gnadas que tambin disponen de receptores especficos y utilizada en la sntesis de hormonas esteroideas. El resto de las LDL es aclarado en otros tejidos perif-

151

El aumento de colesterol inhibe su sntesis porque acta a nivel de la hidroximetilglutaril-CoA y del receptor para las LDL.

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152

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 12.2. Estructura de una lipoprotena de baja densidad (LDL).

ricos por mecanismos independientes de receptor. Se trata de


clulas endoteliales y macrfagos que no reconocen las LDL
normales, pero s cuando estas se alteran por oxidacin.
Las LDL que permanecen en sangre pierden triglicridos y
aumentan el colesterol.

Metabolismo de las HDL. Se trata de lipoprotenas de


alta densidad que contienen fundamentalmente fosfolpidos y
poco colesterol, como si se tratase de una fraccin de la membrana plasmtica. Su funcin consiste en captar el colesterol liberado en el plasma por las clulas que mueren y por el recambio de las membranas. Se generan tanto a nivel intestinal como
heptico en forma de HDL nacientes. La forma intestinal contiene apo-A y la heptica apo-E.
Su funcin se relaciona con un efecto protector frente a la
enfermedad coronaria, de tal forma que el riesgo es menor con
niveles elevados de HDL. Las HDL nacientes del intestino delgado se denominan HDL3, tienen forma esfrica y estn formadas por fosfolpidos, apo A-I, A-II y A-IV, encargadas de captar
y esterificar el colesterol libre de los tejidos perifricos mediante
la accin de la enzima lecitn-colesterol-acil-transferasa (LCAT)
presente en el plasma, que se encuentra unida a las HDL. El
colesterol esterificado es almacenado en el interior de las apoprotenas dando lugar a una forma madura o HDL2. Por otra
parte, las HDL intercambian colesterol esterificado y apoprotenas por triglicridos, colesterol libre y fosfolpidos que les ceden
las lipoprotenas ricas en triglicridos, es decir, los quilomicro-

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LIPOPROTENAS

nes, VLDL, IDL y remanentes, mediante la accin de una protena de transferencia de steres de colesterol (CETP). Las HDL
enriquecidas con triglicridos llegan hasta el hgado, en donde
van a ser degradadas por la lipasa heptica que las convierte
en HDL3, y finalmente son catabolizadas. Cuando el contenido
en triglicridos de las HDL es bajo, se extraen los fosfolpidos y
se liberan de nuevo a la circulacin para seguir desempeando
su funcin.

153

Las HDL incorporan


la mayor parte del colesterol que transportan al hgado, reduciendo el riesgo aterognico.

REGULACIN DE LOS DEPSITOS DE


COLESTEROL EN EL ORGANISMO
El factor ms importante para el desarrollo de aterosclerosis
es una concentracin elevada de colesterol en plasma en forma
de LDL. La concentracin de stas lipoprotenas aumenta en
relacin con la ingesta de grasas saturadas y, en menor proporcin, con la ingesta de grasas insaturadas.
Las LDL, junto con las IDL y VLDL, transportan colesterol
a los lugares de depsito en los tejidos, actuando como un sistema integrado. De ellas slo las VLDL se originan en el hgado
y contienen bsicamente triglicridos, pero a medida que circulan en plasma los liberan en los tejidos perifricos (especialmente en el tejido adiposo) para su almacenamiento o consumo energtico, bajo la accin de la lipoprotena lipasa. Tras la
liberacin de los triglicridos su densidad aumenta, transformndose en IDL. Al menos la mitad de las lDL son captadas
por el hgado (receptores apo-B-100). Las que permanecen en
sangre continan perdiendo triglicridos, aumentando su densidad y la concentracin de colesterol y fosfolpidos para convertirse en LDL (Fig. 12.3).
La composicin mayoritaria de las LDL es colesterol esterificado, fosfolpidos y colesterol libre; adems contienen apo-B100 para su reconocimiento por receptores presentes en las
membranas de la mayora de las clulas del organismo. La captacin y el metabolismo de las LDL en los tejidos no slo produce su degradacin, sino tambin el aporte de colesterol necesario para la sntesis y renovacin de la membrana celular.
Sin embargo, cuando la velocidad de produccin de colesterol
libre por este proceso supera la velocidad de utilizacin, su
concentracin en el citoplasma aumenta. Se produce en estos
casos la esterificacin y almacenamiento para otros destinos.
Adems, dentro de la clula existen dos mecanismos reguladores para evitar la sntesis de nuevo colesterol y la entrada de
ms LDL, que actan en estas situaciones conforme ya se ha
descrito.

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154

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 12.3. Esquema de la configuracin de las HDL.

Por su parte el hgado capta LDL, como cualquier otra clula del organismo, adems de las IDL, con lo que se elevan los
niveles de colesterol en el hepatocito. El exceso de coleslerol intracelular inhibe el sistema enzimtico para la sntesis de nuevo
colesterol. ste es el mecanismo heptico que funciona cuando
a nivel perifrico no se consume colesterol.
El papel de las HDL se conoce bastante menos. Su sntesis
ocurre en el hgado y en menor proporcin en el intestino durante la absorcin intestinal de las grasas. Contienen apo-A-I y
II y no contienen apo-B, lo que las diferencia respecto a las
LDL. Son reconocidas por receptores distintos y el mecanismo
de accin tambin es diferente. Recogen colesterol y apoprotenas de las lipoprotenas degradadas y de los tejidos, adems de
intercambiar coleslerol esterificado con las VLDL y quilomicrones durante su metabolismo. Las HDL incorporan la mayor
parte del colesterol, probablemente desde las membranas de
muchos tejidos y paredes arteriales, esterificndolo por la
LCAT. Este transporte inverso de colesterol desde los tejidos
hasta el hgado, al contrario del que realizan las LDL, le confiere su carcter de lipoprotena antiaterognica. La relacin
HDL/LDL es por tanto un indicador inportante de riesgo aterognico.

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LIPOPROTENAS

RESUMEN
Las lipoprotenas son complejos macromoleculares
constituidos por lpidos y protenas que representan la
nica forma de transporte de los lpidos circulantes. La
porcin lipdica est integrada por fosfolpidos, colesterol libre y esterificado, triglicridos y cidos grasos no esterificados. La parte proteica, denominada apoprotena,
est compuesta por cadenas peptdicas designadas con
las primeras letras del alfabeto en maysculas. Las lipoprotenas se diferencian entre s por la naturaleza y proporcin de su contenido en lpidos y protenas, que les
proporcionan distinta densidad y nos permiten clasificarlas en:
Quilomicrones, de origen intestinal, ricos en triglicridos procedentes de la dieta.
VLDL, de origen heptico, ricas en glicridos de origen
endgeno.
IDL y LDL son lipoprotenas ricas en colesterol procedente de la degradacin de las anteriores. Pueden
entrar en las clulas hepticas y en los tejidos perifricos gracias a receptores especficos, lo que las
hace especialmente patgenas en caso de alteracin metablica.
Los triglicridos de los quilomicrones y de las VLDL
son catabolizados en los capilares de los tejidos por la lipoprotenlipasa extraheptica para suministrar cidos
grasos para su consumo o almacenamiento. Los quilomicrones remanentes son reciclados en otras lipoprotenas o captados por el hgado. Las IDL y LDL resultantes
de la degradacin perifrica de las VLDL transportan
colesterol al hgado o a los tejidos que disponen de receptores para ellas. Los niveles de colesterol intracelulares regulan estos receptores, as como la sntesis heptica de nuevo colesterol cuando los niveles intracelulares
son altos.
Las HDL se sintetizan a nivel heptico e intestinal. Su
funcin es captar colesterol de los tejidos, esterificarlo y
transportarlo hasta el hgado para su utilizacin o degradacin.
El metabolismo de las lipoprotenas se produce a base
de intercambios y transformaciones que aseguran el transporte de los lpidos.

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155

156

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

APLICACIONES CLNICAS
Deficiencia familiar de lipoprotena lipasa
Es una enfermedad de herencia autosmica recesiva (el gen
alterado est situado en el cromosoma 8) cuya prevalencia es
1/1.000.000. Los quilomicrones estn elevados en sangre perifrica.
Se inicia en la infancia presentando crisis de dolor abdominal recidivante (pancreatitis aguda). Asimismo se observa la
presencia de xantomas eruptivos, lipemia retinalis y hepatoesplenomeglia. El suero extrado es de aspecto plido y cremoso
(suero lipmico), pero sin embargo no existe riesgo de aterosclerosis precoz.
El tratamiento consiste en una reduccin drstica de las grasas de la dieta (triglicridos de cadena media) y aportar suplementos de vitaminas liposolubles.

Hiperlipoproteinemia familiar tipo 3


o Disbetali-poproteinemia familiar
Enfermedad de herencia autosmica recesiva en la que el
paciente muestra xantomas palmares y tuberoeruptivos, as
como xantelasmas, arco corneal y ateroesclerosis precoz.
En estos individuos es pertinente descartar un hipotiroidismo oculto y/o diabetes. En sangre perifrica estarn elevados
lDL y partculas residuales de quilomicrones.
El tratamiento se fundamenta en la toma de Gemfibrozilo
pautado o cido nicotnico en personas que no respondan al
primero.

Hiperlipidemia familiar combinada


o Hiperlipidemia mltiple
Enfermedad de herencia autosmica dominante de prevalencia 1/100 que se constituye como la causa metablica ms
importante de ateroesclerosis prematura. El defecto bioqumico
primario es desconocido y determina la elevacin de VLDL y
LDL. En este caso los xantomas y xantelasmas son menos frecuentes que en otras hiperlipidemias.

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TEMA 13

Aspectos bioqumicos
de la nutricin

Requerimientos proteicos de la dieta. Digestin de


las protenas. Activacin de las enzimas proteolticas. Absorcin de pptidos y aminocidos.

Para el crecimiento y desarrollo del cuerpo, as como para el


mantenimiento de la vida, el ser humano ha de ingerir nutrientes, cuya digestin, absorcin y metabolismo le permitan la obtencin de energa y le provean de los sillares de construccin
necesarios. Estos nutrientes son sustancias qumicas que se encuentran en los alimentos, y algunos de ellos son considerados
nutrientes esenciales, ya que el organismo no puede sintetizarlos. Entre estos estn algunos aminocidos y cidos grasos, as
como minerales y vitaminas, que han de ingerirse con la dieta
en cantidades adecuadas.
Los nutrientes se clasifican en dos grandes grupos: macronutrientes y micronutrientes. Los macronutrientes se requieren
diariamente en grandes cantidades, y estn constituidos por
macronutrientes orgnicos, que son protenas, lpidos y glcidos, as como por algunos minerales como el calcio. Los macronutrientes orgnicos son los compuestos que utiliza el organismo para la obtencin de energa y la formacin de tejidos.
Todos ellos son digeridos en el tracto gastrointestinal para generar unidades bsicas: aminocidos, monosacridos, cidos
grasos y glicerol, que son absorbidos y utilizados para la biosntesis de macromolculas y la obtencin de energa. El catabolismo de monosacridos y aminocidos proporciona 4 kcal/g, y
el de cidos grasos 9 kcal/g. Las necesidades energticas de un
ser humano varan entre 1.000 y 4.000 kcal/da dependiendo
de su edad, sexo y actividad. Si la dieta proporciona ms
energa que la que se consume, el exceso se almacena en forma de grasas. Sin embargo, una dieta que no proporciona suficiente energa conduce a la prdida de peso como consecuencia de la movilizacin de las grasas y la destruccin de las pro-

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158

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

tenas musculares. Por otra parte, los macronutrientes inorgnicos son el calcio, fsforo, sdio, cloro, potasio y magnesio, as
como el agua. Todos ellos han de ingerirse diariamente en
grandes cantidades, es decir, de uno a dos gramos diarios de
minerales, y unos 2,5 litros de agua.
El grupo de micronutrientes est constituido por vitaminas y
oligoelementos, que han de ingerirse en pequeas cantidades,
pero que son esenciales en el mantenimiento de la actividad
bioqumica, ya que participan en un gran nmero de reacciones catalizadas enzimticamente, las cuales no se produciran
en su ausencia y por tanto no se podran metabolizar los macronutrientes. Las vitaminas son imprescindibles, y pueden ser
de dos tipos: vitaminas hidrosolubles, que incluyen la vitamina
C y ocho del complejo vitamnico B; y las vitaminas liposolubles: A, D, E y K. En cuanto a los oligoelementos esenciales, se
encuentran el hierro, zinc, cobre, manganeso, molibdeno, selenio, yodo y flor, que en su mayora son imprescindibles para
que muchas enzimas sean activas.
Una correcta nutricin se basa en una dieta apropiada, que
aporte los nutrientes necesarios para que el ser humano mantenga su composicin corporal y obtenga energa para desarrollar su actividad fsica. Una disminucin en la ingestin o un
aporte excesivo de nutrientes conduce a la malnutricin, como
consecuencia de un desequilibrio entre las necesidades corporales y el consumo de nutrientes.

REQUERIMIENTOS PROTEICOS DE LA DIETA

Si las fuentes energticas de un individuo


son suficientes, las
protenas de la dieta
se utilizan para el
mantenimiento, reposicin o crecimiento
de los tejidos.

Las protenas son uno de los principales macronutrientes de


la dieta y, junto con los hidratos de carbono y las grasas principalmente, constituyen una fuente de energa y de nutrientes
esenciales. Desde un punto de vista energtico, las protenas
proporcionan 4 kcal/g cuando son completamente oxidadas.
Las protenas slo se emplean como fuente energtica cuando
faltan las grasas o los hidratos de carbono exgenos o endgenos; si estos son suficientes, las protenas se utilizan para el
mantenimiento, reposicin o crecimiento de los tejidos, as
como para mantener un balance positivo de nitrgeno.
Algunos de los aminocidos que constituyen las protenas
de la dieta son esenciales para los seres humanos, concretamente nueve aminocidos no pueden ser sintetizados por el
hombre: Fenilalanina, Histidina, Isoleucina, Leucina, Lisina,
Metionina, Treonina, Triptfano y Valina. La Histidina puede
ser sintetizada por los adultos pero no por lactantes. Esta imposibilidad hace que sea necesario ingerir protenas. La cantidad

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ASPECTOS BIOQUMICOS DE LA NUTRICIN

159

de protenas que, desde un punto de vista diettico, se recomienda ingerir vara con la edad; mientras que para los lactantes se recomienda 2,2 g/kg, ya que comienzan su etapa de crecimiento, para los adultos slo es de 0,8 g/kg. Estas cantidades
lgicamente estn directamente relacionadas con la cantidad
de aminocidos esenciales que necesita un individuo en crecimiento que ha de sintetizar una gran cantidad de protenas
para sus tejidos, y un adulto que esencialmente slo ha de
mantener sus tejidos. El Food and Nutrition Board (FNB) de la
National Academy of Sciences/National Research Council de
Estados Unidos de Amrica ha estimado que la cantidad total
de aminocidos esenciales necesaria para un lactante es de
unos 715 mg /kg diarios, mientras que la de un adulto es de
unos 86 mg /kg diarios (Tabla 13.1). En este sentido, no todas
las protenas que se ingieren tienen el mismo valor biolgico, lo
que est relacionado con su coincidencia en aminocidos con
los tejidos humanos; as una coincidencia total (100%) es la de
la ovoalbmina, mientras que esta similitud es menor para las
protenas de la leche o la carne (90%), disminuyendo notablemente en el caso de cereales y verduras (40%).
Tabla 13.1. Cantidad de aminocidos esenciales (mg/kg peso corporal/da)
en funcin de la edad.
Lactante
(4-6 meses)

Nio
(10-12 aos)

Adulto

Phe y Tyr

120

24

14

His

020

Ile

088

28

10

Leu

150

44

14

Lys

099

49

12

Met y Cys

072

24

13

Tre

074

30

07

Trp

019

04

03

Val

093

28

13

Para el ser humano


hay nueve aminocidos esenciales que ha
de ingerir con la dieta: Phe, His, Ile, Leu,
Lys, Met, Tre, Trp y
Val.

Food and Nutrition Board, National Academy of Sciences/National Research Council 1989.

La cantidad diaria de protenas dietticamente recomendada que ha de ingerirse vara con la edad, el sexo, la estatura,
peso corporal y actividad metablica y fsica de los individuos;
segn el FNB en su informe de 1989, los lactantes necesitan
13-14 g, los nios 16-28 g, los hombres 45-63 g y las mujeres
46-50 g (Tabla 13.2).

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160

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Tabla 13.2. Cantidades dietticas recomendadas de protenas (g/da)


en funcin de la edad y el sexo.
Edad
(aos)

Peso
(kg)

Protenas
(g/da)

Lactantes

0,0-0,5
0,5-1,0

6
9

13
14

Nios

0,1-3,0
0,4-6,0
0,7-10,

13
20
28

16
24
28

Hombres

11-14
15-18
19-24
25-50
> 51

45
66
72
79
77

45
59
58
63
63

Mujeres

11-14
15-18
19-24
25-50
> 50

46
55
58
63
65

46
44
46
50
50

Food and Nutrition Board, National Academy of Sciences/National Research Council 1989.

Si se consumen ms
protenas de las necesarias, el exceso de
protenas se emplea
como fuente de energa, convirtindose
los aminocidos en
glucosa o cidos grasos y cetocidos

Si se consumen ms protenas de las necesarias, el exceso


de protenas se emplea como fuente de energa, convirtindose
los aminocidos en glucosa o cidos grasos y cetocidos, que
finalmente generan triacilgliceroles en el tejido adiposo si el organismo tiene suficiente grasa y glcidos para cubrir sus necesidades energticas. De esta forma, un exceso de protenas puede transformarse en un incremento del tejido adiposo.
En una situacin de ayuno, las protenas corporales de almacenamiento se degradan, y sus aminocidos se emplean
para la produccin de glucosa, la sntesis de compuestos nitrogenados no proteicos y para la sntesis de protenas secretoras,
como las enzimas digestivas o las hormonas peptdicas, as
como protenas plasmticas esenciales, incluyendo las de la defensa inmunitaria.
Aunque el estado nutricional de un individuo sea el adecuado, parte de las protenas de algunos tejidos experimentan un
recambio proteico normal, es decir, son degradadas y los aminocidos se emplean, entre otros destinos, para la nueva sntesis de protenas.

DIGESTIN DE LAS PROTENAS.


ACTIVACIN DE ENZIMAS PROTEOLTICAS
Las protenas de la dieta no pueden ser absorbidas, por ello
han de ser hidrolizadas hasta aminocidos libres y pequeos

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ASPECTOS BIOQUMICOS DE LA NUTRICIN

pptidos (di y tripptidos), los cuales pueden ser absorbidos en


el intestino y, de esta forma, pasar a la sangre. En el proceso
digestivo participan diferentes peptidasas, algunas de las cuales
actan como endopeptidasas, hidrolizando enlaces peptdicos
internos y generando fragmentos peptdicos grandes, y otras de
estas enzimas como exopeptidasas, hidrolizando los pptidos
desde su extremo carboxiterminal (carboxipeptidasas) o desde
el amino-terminal (aminopeptidasas). La gran mayora de estas
enzimas se producen como zimgenos, y han de ser activadas
hidrolticamente antes de ejercer su accin.
La digestin de las protenas comienza en el estmago,
donde el jugo gstrico origina un pH inferior a 2 debido a la
presencia de HCl. El HCl desnaturaliza la protenas, desestabilizando su estructura terciaria y hacindolas, de esta forma, ms
accesibles a los ataques enzimticos. La pepsina A es la principal proteasa del estmago, es activa a pH cido y se inactiva a
pH neutro. Es una endopeptidasa que hidroliza los enlaces
peptdicos en los que el grupo amino es aportado por Phe, Tyr
o Leu. Esta enzima es una aspartato proteasa que contiene dos
residuos de aspartato en su centro cataltico, los grupos carboxlicos de ambos son decisivos en el mecanismo cataltico.
La pepsina A se produce en el estmago en forma de zimgeno, el pepsingeno, que tiene un pptido adicional de 44 residuos en el extremo amino-terminal, que se elimina espontneamente a pH cido por hidrlisis del enlace entre Leu e Ile, generndose pepsina; la pepsina a su vez puede activar otras
molculas de pepsingeno por autocatlisis.
El proceso digestivo contina con el paso del contenido del
estmago (quimo) al duodeno, donde se vierten la secrecin
pancretica y la biliar. Ambas tienen pH alcalino (7,1-7,3 la bilis y 7,5-8 la secrecin pancretica), lo cual modifica el pH del
quimo y favorece la accin de las enzimas de la secrecin pancretica. En esta secrecin hay numerosas enzimas, algunas de
las cuales actan sobre protenas y polipptidos: tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasas A y B. Las enzimas y
zimgenos se sintetizan en las clulas acinares del pncreas y se
almacenan en el interior de grnulos unidos a membranas, los
cuales se acumulan en el pice de la clula acinar. El contenido
de los grnulos se libera en el conducto coldoco que lleva al
duodeno como respuesta a una seal hormonal o nerviosa.
Tripsina, quimotripsina y elastasa son endopeptidasas
que se secretan como zimgenos, pertenecen a la familia de las
serina proteasas, esto es, enzimas que tienen en el centro activo
un residuo de serina activado que toma parte en la catlisis, hidrolizando enlaces peptdicos. La activacin del tripsingeno
genera tripsina (Fig. 13.1), y est catalizada por la enteropep-

161

Las protenas de la
dieta no pueden ser
absorbidas y por ello
han de ser digeridas
hasta aminocidos libres y pequeos pptidos (di y tripptidos), los cuales pueden ser absorbidos en
el intestino y, de esta
forma, pasar a la sangre.

Las enzimas digestivas se sintetizan en


forma de precursores
inactivos o zimgenos, que se activan
por hidrlisis de enlaces peptdicos.

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162

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 13.1. Activacin del tripsingeno por la enteropeptidasa


en el duodeno.

Tripsina, quimotripsina y elastasa hidrolizan enlaces peptdicos en el lado carboxilo de residuos de


aminocidos especficos.

tidasa (o enteroquinasa), producida por las clulas epiteliales


del duodeno, que hidroliza un nico enlace peptdico Leu-Ile
del tripsingeno cuando ste entra en el duodeno procedente
del pncreas, liberando un hexapptido amino-terminal y
transformndolo en tripsina. La tripsina activa a otras molculas de tripsingeno, as como a otros zimgenos de la secrecin
pancretica: quimotripsingeno, proelastasa y procarboxipeptidasa; generndose de esta forma quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa.
La activacin del quimotripsingeno (Fig. 13.2), protena
formada por una nica cadena polipeptdica de 245 residuos
de aminocidos, se produce por hidrlisis del enlace Arg15Ile16 por la tripsina, formndose p-quimotripsina, enzima activa que acta sobre otras molculas de S-quimotripsina liberando dos dipptidos (14-15 y 147-148) y generando la forma
estable de la enzima, denominada a-quimotripsina, constituida por tres cadenas peptdicas unidas entre ellas por dos puentes disulfuro intercatenarios.

Figura 13.2. Activacin del quimotripsingeno por la tripsina en


el intestino delgado.

La tripsina hidroliza enlaces peptdicos de aminocidos


bsicos (Arg, Lys), la quimotripsina hidroliza aquellos en los

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ASPECTOS BIOQUMICOS DE LA NUTRICIN

que participan aminocidos sin carga (Tyr, Trp, Phe, Met, Leu)
y la elastasa hidroliza los enlaces en lo que intervienen aminocidos pequeos (Gly, Ala, Ser). Estas enzimas actan sobre
las protenas y polipptidos liberados del estmago al intestino
y generan polipptidos y pptidos de menor tamao. Por su
parte, las carboxipeptidasas A y B son exopeptidasas que
actan sobre el extremo carboxi-terminal de los pptidos generados por las endopeptidasas pancreticas, liberando aminocidos simples. Se trata de metalo proteasas, concretamente de
zinc. El resultado final de la accin de estas enzimas es la formacin de aminocidos libres y pptidos pequeos de 2-8 residuos.
Puesto que el proceso de activacin de zimgenos es irreversible, la regulacin de la actividad enzimtica se realiza mediante inhibidores especficos. El inhibidor de tripsina, que se
encuentra en la secrecin pancretica, es una protena pequea de 6 kDa, que se une fuertemente al centro activo de la
tripsina, dada su analoga con el sustrato, fomndose un complejo muy estable.
El proceso digestivo se completa con las enzimas presentes
en las secreciones intestinales (Fig. 13.3), producidas por las
glndulas de Brunner y de Lieberkhn. Estas enzimas son aminopeptidasas, exopeptidasas que hidrolizan los enlaces peptdicos prximos al extremo amino-terminal de los oligopptidos;
entre ellas estn la aminopeptidasa A, que hidroliza oligopptidos con residuo amino-terminal cido, y aminopeptidasa N
que acta cuando el citado residuo es neutro. Tambin existen

163

El proceso digestivo
se completa con las
aminopeptidasas de
las secreciones intestinales

Figura 13.3. Etapas de la digestin de las protenas de la dieta.

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164

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

dipeptidasas de diversas especificidades; algunas de estas enzimas se encuentran en el citoplasma de las clulas del epitelio
intestinal, donde pueden pasar los dipptidos va sistemas de
transporte especficos, y es en el citoplasma donde son hidrolizados hasta aminocidos libres.

ABSORCIN DE PPTIDOS Y AMINOCIDOS

El transporte de Laminocidos a travs


de la membrana luminal de las clulas en
cepillo del intestino
delgado es un transporte facilitado por
un transportador.

Las protenas de la dieta, a la vista de lo expuesto, se transforman finalmente en aminocidos libres y algunos dipptidos
en el intestino delgado, donde son absorbidos, pasando al sistema portal heptico que conduce al hgado.
El transporte de L-aminocidos (Fig. 13.4), a travs de la
membrana luminal de las clulas en cepillo del intestino delgado, es un transporte facilitado por un transportador, que se
produce a favor de gradiente de concentracin, y en muchos de
los casos es dependiente de Na+, con un mecanismo semejante al de transporte de glucosa, esto es, se genera un gradiente
electroqumico de Na, que es mantenido por la Na/K ATPasa
con hidrlisis de ATP. Se han descubierto distintos tipos de
transportadores especficos para L-aminocidos y dipptidos:
a) para aminocidos neutros con cadenas laterales polares
o cortas (Ala, Ser, Thr);

Figura 13.4. Transporte de aminocidos y dipptidos a travs del epitelio intestinal.

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ASPECTOS BIOQUMICOS DE LA NUTRICIN

165

b) para aminocidos neutros con cadenas laterales aromticas o hidrfobas (Phe, Tyr, Met, Ile, Leu, Val);
c) para iminocidos (Pro, Hyp);
d) para E-aminocidos (E-Ala, taurina);
e) para aminocidos bsicos y cistina (Arg, Lys, Cys-Cys);
f) para aminocidos cidos (Asp, Glu);
g) para dipptidos.
Los dipptidos neutros son cotransportados con un in H a
travs de la membrana luminal, y ya en el interior celular hidrolizados por dipeptidasas. Una vez en el interior citoplasmtico, los aminocidos son transportados fuera de la clula intestinal a travs de la membrana contraluminal, mediante transporte facilitado por transportador, que en muchos casos es
independiente de Na+. De esta forma los aminocidos se incorporan a la sangre por la vena porta.

Una vez en el interior


citoplasmtico, los
aminocidos son
transportados fuera
de la clula intestinal
a travs de la membrana contraluminal,
mediante un transporte facilitado por
transportador.

RESUMEN
Uno de los principales macronutrientes de la dieta son
las protenas, que constituyen una fuente tanto de energa,
proporcionando 4 kcal/g cuando se oxidan completamente, como de nutrientes esenciales. En este sentido, las protenas de la dieta aportan los nueve aminocidos esenciales para el hombre: Phe, His, Ile, Leu, Lys, Met, Tre, Trp y
Val. La cantidad de protenas que, desde un punto de vista diettico, se recomienda ingerir varan con la edad, ya
que se relaciona con la cantidad de aminocidos esenciales que necesita un individuo para sintetizar las protenas
para sus tejidos. Si se consumen ms protenas de las necesarias, el exceso se transforma en glucosa o cidos grasos y cetocidos, que finalmente pueden producir triacilgliceroles. En situacin de ayuno, algunas protenas se degradan y sus aminocidos se emplean para producir
compuestos esenciales para el organismo como glucosa,
algunas enzimas y hormonas.
Las protenas de la dieta han de ser digeridas hasta
aminocidos y pequeos pptidos, que pueden ser absorbidos en el intestino, y de esta forma pasar a la sangre. En
el proceso digestivo participan diferentes peptidasas, la
gran mayora de las cuales se producen como zimgenos.
La digestin comienza en el estmago por accin del
carcter cido del jugo gstrico y de la pepsina A, que se
produce en el estmago en forma de zimgeno, el pep-

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166

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

singeno. El proceso contina en el duodeno, donde se


vierten la secrecin pancretica y la biliar, que alcalinizan
el pH del quimo para favorecer la accin de las enzimas
de la secrecin pancretica, de ellas tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasas A y B hidrolizan protenas
y polipptidos. Todas estas enzimas se secretan como
zimgenos; la activacin del tripsingeno por la enteropeptidasa duodenal genera tripsina, la cual activa a otras
molculas de tripsingeno y a los otros zimgenos de la
secrecin pancretica: quimotripsingeno, proelastasa y
procarboxipeptidasa. El resultado de la accin de las enzimas de la secrecin pancretica es la formacin de aminocidos libres y pptidos pequeos de 2-8 residuos. La
actividad de las enzimas pancreticas est regulada por inhibidores especficos. El proceso digestivo se completa con
las enzimas de las secreciones intestinales: aminopeptidasas y dipeptidasas; algunas dipeptidasas estn en el citoplasma de las clulas del epitelio intestinal.
Por lo tanto, las protenas de la dieta se transforman finalmente en aminocidos libres y algunos dipptidos en el
intestino delgado, donde son absorbidos, pasando al sistema portal heptico que conduce al hgado. El transporte
de L-aminocidos a travs de la membrana luminal de las
clulas en cepillo del intestino delgado es un transporte facilitado por un transportador, en muchos casos, dependiente de Na; el gradiente electroqumico de Na necesario para el sistema se mantiene por accin de la Na/K
ATPasa con hidrlisis de ATP. Los dipptidos neutros son
cotransportados con un protn, y en el interior celular son
hidrolizados por dipeptidasas. Ya en el interior citoplasmtico, los aminocidos son transportados fuera de la clula
intestinal a travs de la membrana contraluminal mediante
transporte facilitado por transportador, generalmente, independiente de Na. As los aminocidos se incorporan a
la sangre de la vena porta.

APLICACIONES CLNICAS
Malnutricin proteicoenergtica
La malnutricin proteicoenergtica (MPE) o proteicocalrica se debe a una deficiencia no slo de todos los macronutrientes, sino tambin de muchos micronutrientes. Existen va-

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ASPECTOS BIOQUMICOS DE LA NUTRICIN

rios niveles de este sndrome, segn sea la insuficiencia proteica, desde la inanicin a la alimentacin insuficiente. Puede
producirse en personas de cualquier edad y procedencia, aunque los ms afectados son los lactantes y nios de pases en
vas de desarrollo. Existen tres formas clnicas de MPE:
a) la forma seca, deshidratada o marasmo;
b) la forma hmeda, edematosa o kwashiorkor; y
c) una forma combinada o kwashiorkor marsmico.
La forma clnica depende del equilibrio de la ingesta no
proteica y proteica. A su vez, dentro de cada forma, existen diversos grados: leve, moderado y grave.
El marasmo o forma seca se produce por ingesta casi nula
de nutrientes proteicos y no proteicos; los nios que la padecen
estn muy delgados debido a la prdida de msculo y grasa
corporal, y tienen hambre. La ingesta energtica es insuficiente
para las necesidades corporales y el organismo las cubre con
sus propias reservas. El glucgeno heptico se agota rpidamente, y las protenas del msculo esqueltico se utilizan va
gluconeognesis para mantener el nivel de glucosa plasmtica.
Simultneamente, los triacilglicridos del tejido adiposo se degradan a cidos grasos para proporcionar energa a algunos tejidos, pudiendo transformarse en cuerpos cetnicos para que
los utilice el cerebro.
El kwashiorkor o forma hmeda se produce al destetar al
nio antes de lo necesario, generalmente por el nacimiento de
un segundo hijo, y alimentarlo con nutrientes de baja calidad,
como gachas diluidas, por lo que frena su desarrollo; en este
caso, ms que una deficiencia energtica, se produce un deficiencia proteica importante, lo que origina el edema. Dado que
estos nios ingieren hidratos de carbono y pocas protenas, disminuye la sntesis de protenas por las vsceras, lo que provoca
hipoalbuminemia, que es la causante del edema. Este sndrome se caracteriza por edema generalizado, dermatosis escamosa, adelgazamiento, decoloracin y enrojecimiento del pelo; hgado graso agrandado, y apata irritable adems de retraso del
crecimiento.
Los nios que padecen el kwashiorkor marsmico tienen
algo ms de edema y de grasa corporal que los que padecen
marasmo.
En todas las formas de MPE se presentan infecciones, con
diversas bacterias productoras de neumona, otitis media, diarrea, enfermedad genitourinaria y sepsis. La infeccin se presenta a causa de una inmunidad deprimida. Asimismo, en la
MPE leve o moderadamente grave, hay una depleccin de los
electrlitos, en especial potasio y magnesio, y una disminucin

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de la urea sangunea; existe anemia por falta de hierro, y acidosis metablica.


En cuanto al tratamiento de nios y adultos con MPE grave, inicialmente se corrigen las anomalas de lquidos y
electrlitos y se tratan las infecciones con antibiticos; posteriormente, se proporcionan macronutrientes como tratamiento
diettico, generalmente se utilizan frmulas basadas en la leche y, finalmente, tras una semana, se puede administrar la
dieta completa.

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TEMA 14

Degradacin
de los aminocidos

Transaminacin y degradacin oxidativa. Destino


de los esqueletos carbonados de los aminocidos.

La mayor parte de la energa la obtiene el ser humano del


catabolismo de carbohidratos y grasas, pero hay un 10% que
proviene de la oxidacin del esqueleto carbonado de los aminocidos. Si la cantidad de protenas que se ingieren en la dieta o la cantidad de aminocidos provenientes del recambio
proteico normal del organismo, exceden al de aminocidos necesarios para la sntesis proteica, entonces este exceso de aminocidos ha de ser catabolizado, ya que los aminocidos no
pueden almacenarse, a diferencia de los glcidos o las grasas.
Por otra parte, las protenas del organismo tambin pueden utilizarse como combustible cuando la ingesta de hidratos de carbono es insuficiente, o hay alguna patologa que impide su utilizacin, como la diabetes mellitus.
La degradacin de aminocidos en los mamferos se produce esencialmente en el hgado. Inicialmente se produce la eliminacin del grupo D-amino de los aminocidos, y entonces el
esqueleto carbonado resultante es catabolizado, transformndose en intermediarios metablicos importantes, los cuales
pueden generar cidos grasos, cuerpos cetnicos y glucosa. En
cuanto a los grupos D-amino, se transforman mayoritariamente
en urea, que es excretada.

Los aminocidos que


exceden las necesidades de la sntesis proteica no pueden almacenarse y han de
ser catabolizados.

La degradacin de
aminocidos comienza con la eliminacin
de su grupo a-amino,
quedando el esqueleto carbonado, que es
catabolizado hasta
intermediarios metablicos importantes.

TRANSAMINACIN Y
DEGRADACIN OXIDATIVA
La transaminasas o aminotransferasas son enzimas que
catalizan la transferencia de un grupo D-amino desde un
D-aminocido a un D-cetocido. En muchos casos el D-cetocido es el D-cetoglutarato (DKG), que se transforma en glutamato

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

simultneamente a la formacin del D-cetocido del D-aminocido dador del grupo D-amino. De esta forma, mediante la formacin de glutamato a partir de D-cetoglutarato, se elimina el
grupo D-amino de muchos aminocidos.
O
NH
ll
l
H
C  COO
O
H

C
 COO
l
l
ll
l
o C  COO 
H3N  C  COO  CH2
m
CH2
l
l
l
l
CH2
R
R
CH
2
l
l
aminocido
D-cetocido
COO
COO
D-cetoglutarato
glutamato
Una de las formas de
eliminar el grupo aamino de los aminocidos est catalizada
por aminotransferasas que transfieren
un gr upo a-amino
desde un aminocido
a un a-cetocido.

En muchas reacciones de transaminacin se forma glutamato.

Entre las transaminasas, una de las ms importantes es la


aspartato aminotransferasa (AST), que cataliza la transferencia
del grupo D-amino del aspartato al D-cetoglutarato:
o oxalacetato  glutamato
aspartato  D-cetoglutarato m
Otra transaminasa importante es la alanina aminotransferasa (ALT), que cataliza la transferencia del grupo D-amino de la
alanina al D-cetoglutarato:
o piruvato  glutamato
alanina  D-cetoglutarato m
En general, una reaccin de transaminacin sigue el siguiente esquema:
O
NH
NH
O
ll
l
l
ll
H  C  COO  C  COO m
o C  COO  H  C  COO
l
l
l
l
R2
R1
R2
R1
aminocido-1

D-cetocido-2

D-cetocido-1

aminocido-2

El mecanismo cataltico de las transaminasas incluye la formacin de bases de Schiff intermediarias debido a la participacin del grupo prosttico de estas enzimas, el piridoxal fosfato
(PLP). El piridoxal fosfato procede de la Vitamina B6 o piridoxina, y en el curso de la reaccin se transforma en piridoxamina
fosfato:

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

El PLP, a travs de su grupo aldehdo, est unido en forma


de base de Schiff inicialmente a la transaminasa a travs del
grupo H-amino de una Lys especfica del centro activo (aldimina interna). En presencia de un aminocido, que es el sustrato
de la enzima, el grupo D-amino del mismo desplaza al H-amino
de la Lys, formndose una unin por base de Schiff con el aminocido (aldimina externa), que permanece unida a la enzima
por enlaces no covalentes. Esta aldimina externa, tras una desprotonacin, seguida de una reprotonacin y posterior hidrlisis, genera un D-cetocido y piridoxamina fosfato:

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La segunda etapa de la reaccin es justo el proceso contrario


al descrito. Un segundo D-cetocido reacciona con la piridoxamina fosfato unida a la transaminasa, liberndose un segundo
aminocido y regenerndose el complejo transaminasa-PLP:
o aminocido2  E-PLP
D-cetocido2  E-PMP m
El glutamato producido en las reacciones
de transaminacin
puede sufrir una desaminacin oxidativa, catalizada por la
glutamato deshidrogenasa, formndose
in amonio (NH4+).

La reaccin catalizada por las transaminasas es completamente reversible. El glutamato producido en las reacciones de
transaminacin puede sufrir una desaminacin oxidativa, catalizada por la glutamato deshidrogenasa, formndose in amonio (NH4):

Esta reaccin se produce en ambos sentidos. En la reaccin


de degradacin, en la que se libera amonio, se utiliza NAD,
mientras que en la de sntesis participa NADP. Lo ms probable es que in vivo la reaccin se produzca en la direccin de
produccin de amonio. La glutamato deshidrogenasa, que en
los vertebrados est constituida por seis subunidades idnticas,
est regulada alostricamente por nucletidos purnicos. La degradacin del glutamato para formar amonio se favorece por
ADP y GDP, indicadores de una carga energtica celular baja, y
por tanto de una necesidad de obtener energa por oxidacin
de aminocidos. Por el contrario, cuando la carga energtica es
alta, y abundan ATP y GTP, stos actan como activadores
alostricos para la sntesis de glutamato.
Si se consideran conjuntamente las reacciones catalizadas
por las transaminasas y por la glutamato deshidrogenasa, se
observa la produccin de amonio libre, que en la mayora de
los vertebrados terrestres se convierte en urea en el hgado, y es
excretada por el rin.

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

173

Los D-cetocidos resultantes de la transaminacin son degradados hasta intermediarios metablicos, los cuales pueden
utilizarse en la biosntesis de cidos grasos, cuerpos cetnicos y
glucosa.

DESTINO DE LOS ESQUELETOS


CARBONADOS DE LOS AMINOCIDOS
El esqueleto carbonado de los aminocidos obtenido tras la
transaminacin, es decir, el D-cetocido correspondiente, se degrada, transformndose en intermediarios metablicos. Los esqueletos carbonados de los 20 aminocidos se transforman en
una o varias de las siguientes molculas: piruvato, acetil-CoA,
acetoacetil-CoA, D-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y oxalacetato. Los aminocidos que al degradarse producen acetilCoA o acetoacetil-CoA se denominan cetognicos, ya que
estos compuestos generan cuerpos cetnicos. Por su parte,
aquellos aminocidos que se transforman en piruvato, D-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato u oxalacetato, se denominan
glucognicos, ya que estos compuestos pueden transformarse
en glucosa por la va gluconeognica. Los aminocidos puramente cetognicos son leucina y lisina. Otros aminocidos
como isoleucina, fenilalanina, triptfano y tirosina son tanto cetognicos como glucognicos (Fig. 14.1).

Figura 14.1. Degradacin de asparagina y aspartato. D-KG

Los esqueletos carbonados de los 20 aminocidos se transforman en una o varias


de las siguientes
molculas: piruvato,
acetil-CoA, acetoacetil-CoA, a-cetoglutarato, succinil-CoA,
fumarato y oxalacetato.

D-cetoglutarato

1. Aminocidos que se convierten en oxacelato:


asparagina y aspartato
La asparagina se transforma en aspartato por accin de
la asparaginasa. El aspartato se transamina hasta oxalacetato,
el cual puede transformarse en glucosa va gluconeognesis o
ser oxidado en el ciclo del cido ctrico para obtener energa
(Fig. 14.2).

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 14.2. Esquema general del destino metablico de los esqueletos carbonados de los aminocidos.

2. Aminocidos que se convierten en piruvato:


alanina, treonina, cistena, serina y glicina
La alanina se transforma en piruvato en un nico paso catalizado por la alanina transaminasa. La reaccin es reversible
(Fig. 14.3). El piruvato puede seguir la va gluconeognica, ge-

Figura 14.3. Transformacin de alanina en piruvato.

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

nerando glucosa; o bien puede transformarse en acetil-CoA e


incorporarse al ciclo del cido ctrico.
La treonina se degrada por tres rutas diferentes (Fig. 14.4).
Una de estas rutas conduce a la formacin de propionil-CoA,
el cual puede transformarse en succinil-CoA, que es un intermediario del ciclo del cido ctrico. Las otras dos vas degradativas conducen a la formacin de piruvato; una de ellas consiste en la oxidacin y descarboxilacin de treonina, que se transforma en aminoacetato, el cual finalmente produce piruvato.
La tercera ruta degradativa se inicia con la hidrlisis del aminocido en acetaldehdo y glicina; el acetaldehdo se transforma en acetil-CoA, el cual puede utilizarse para la sntesis de

175

El piruvato formado
en la degradacin de
Ala, Tre, Cys, Ser y
Gly, puede transformarse en glucosa por
la va gluconeognica, transformarse en
acetil-CoA e incorporarse al ciclo de
Krebs.

Figura 14.4. Rutas degradativas de treonina, glicina y serina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

cuerpos cetnicos, lo que hace de la treonina un aminocido


con cierto carcter cetognico; por su parte la glicina se transforma en serina en una reaccin de transaminacin reversible
en la que participa el tetrahidrofolato. La serina finalmente se
desamina transformndose en piruvato.
La cistena puede degradarse por dos rutas (Fig. 14.5).
Una de ellas conduce a la formacin de cisteinsulfinato, compuesto a partir del que se forma taurina con destino a la sntesis de cidos biliares. El cisteinsulfinato se transamina a E-sulfinilpiruvato, que por desulfuracin no enzimtica genera piruvato y dixido de azufre (SO2). El dixido de azufre se transforma
en sulfito (SO3 ), y por accin de la oxidasa de sulfitos, con cofactor de Mo, se forma sulfato (SO4 ). La deficiencia de oxidasa de sulfitos o del cofactor de Mo, produce en los nios
vmitos, convulsiones y retraso mental grave a las pocas semanas del nacimiento, y fallecen en los dos primeros aos. Estos
nios excretan gran cantidad de sulfitos, tiosulfatos, 5-sulfocistena, xantina e hipoxantina por la orina.
La otra ruta de degradacin de cistena consta de una transaminacin y posterior desulfuracin, formndose piruvato.

Figura 14.5. Degradacin de la cistena hasta piruvato.

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

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3. Aminocidos que se convierten en


a-cetoglutarato: prolina, arginina, glutamina,
histidina y glutamato
Prolina, arginina, glutamina e histidina se transforman en
glutamato, el cual es convertido en D-cetoglutarato bien por
transaminacin o bien por desaminacin oxidativa (Fig. 14.6).
La degradacin de la prolina comienza con una oxidacin
catalizada por la prolina oxidasa. Una patologa relacionada
con esta ruta es la hiperprolinemia, que se caracteriza por un
aumento de L-prolina en los fluidos corporales, y se transmite
con carcter autosmico recesivo. La hiperprolinemia puede
ser de dos tipos:
a) Tipo I, producida por un dficit de prolina oxidasa, y
cursa con crisis convulsivas y retraso mental;
b) Tipo II, debida a una deficiencia en la deshidrogenasa,
se observa una excrecin urinaria de pirrolina-carboxilato, y la hiperprolinemia es ms elevada en este caso.

Pro, Arg, Gln e His se


metabolizan a glutamato, el cual se transamina a a-cetoglutarato, que es un intermediario del ciclo del
cido ctrico.

Figura 14.6. Degradacin de prolina, arginina, glutamina, histidina y glutamato hasta D-cetoglutarato.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Se produce hiperaminoaciduria especfica que comprende Pro,


Hyp y Gly, y su grado es directamente proporcional a la concentracin de Pro en sangre. El tratamiento no es eficaz porque
no se puede hacer una verdadera restriccin diettica.
Sobre la arginina acta la arginasa, transformndola en ornitina y urea; la ornitina sufre una transaminacin y genera
J-semialdehdo glutmico, convergiendo as con la ruta degradativa de la Pro. La deficiencia en arginasa produce argininemia, que se hereda con carcter autosmico recesivo. Hay dos
arginasas genticamente distintas en el hombre, una es citoslica y se expresa en hgado y hemates, y la otra se localiza en
mitocondrias renales. La arginasa citoslica es la deficiente en
los enfermos con argininemia. Los lactantes suelen carecer de
sntomas los primeros meses o aos de vida, despus aparecen
progresivamente diplejia espstica con postura de tijeras de los
miembros inferiores, retraso mental progresivo, frecuentes convulsiones e incluso hepatomegalia. Todo esto es consecuencia
de una elevacin de Arg en plasma y lquido cefalorraqudeo.
La transformacin de glutamina en glutamato se produce
por desaminacin catalizada por la glutaminasa.
La primera etapa de la degradacin de la histidina est catalizada por la histidasa o histidina aminio liasa, fomndose
urocanato. La deficiencia en histidasa produce histidinemia,
que se transmite con carcter autosmico recesivo, y cuyas manifestaciones clnicas son transtornos en el lenguaje, retraso del
crecimiento o retraso mental. Sin embargo, existen individuos
con histidinemia que son asintomticos. Los niveles de His en
plasma y lquido cefalorraqudeo estn muy elevados, y en la
orina hay gran cantidad de His y cido imidazolpirvico, producto de la transaminacin de la His. Una dieta baja en His es
lo ms adecuado para estos individuos, aunque no mejora a
los enfermos con sntomas. Otra patologa asociada con esta
ruta degradativa es la acidemia urocnica, debida a deficiencia de urocanasa, y que provoca retraso mental y del crecimiento as como aciduria urocnica masiva.

4. Aminocidos que se convierten en


succinil-Co-A: metionina, valina e isoleucina
El esqueleto carbonado de Met y de dos de
los aminocidos ramificados (Val e Ile)
se transforma en succinil-CoA, un intermediario del ciclo de
Krebs.

La degradacin de la metionina (Fig. 14.7) comienza con


la reaccin catalizada por la metionina adenosiltrasferasa, que
conduce a la formacin de S-adenosilmetionina, compuesto
dador de metilos que se utiliza para la metilacin de diversos
compuestos del organismo. La homocistena se condensa con
una serina para formar cistationina, reaccin catalizada por la

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

Figura 14.7. Ruta degradativa de metionina.

cistationina E-sintasa; la cistationina es el sustrato de la cistationina J-liasa que la desamina formando cistena y D-cetobutirato. Se genera propionil-CoA, que finalmente se transforma
en succinil-CoA, que se incorpora al ciclo del cido ctrico. La
deficiencia en metionina adenosiltransferasa produce hipermetioninemia, una patologa benigna ya que no se han detectado pacientes con ausencia completa de la enzima. La deficiencia en cistationina E-sintasa produce homocistinuria
clsica o tipo I, y es el error congnito ms frecuente del
metabolismo de la metionina, que se transmite como autos-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

mico recesivo. Se produce una elevacin de homocistena, y,


como consecuencia de ello, tambin de metionina en los lquidos corporales. Las manifestaciones clnicas son numerosas, a partir de los 3 aos se produce desprendimiento del
cristalino y otras anomalias oculares, es frecuente un retraso
mental progresivo, y tambin trastornos psiquitricos y convulsiones en algunos pacientes. Tambin se producen alteraciones esquelticas como escoliosis, as como una osteoporosis generalizada. Se presenta tromboembolia de vasos grandes y pequeos, especialmente cerebrales. En cuanto al
tratamiento, pasa por la restriccin en la ingesta de metionina, y en algunos casos hay una mejora con la ingesta de vitamina B6 (piridoxal fosfato).
La valina constituye, junto con la isoleucina y la leucina, el
grupo de los aminocidos de cadena ramificada, cuyas primeras etapas de degradacin son equivalentes, y la deficiencia de
alguna de sus enzimas produce patologas comunes.
El catabolismo de los aminocidos de cadena ramificada
tienen lugar en hgado, rin, msculo, corazn y tejido adiposo, y se inicia con la entrada de estos aminocidos a la clula a travs de un transportador de membrana celular. Despus de la transaminacin reversible, catalizada por una nica transaminasa, los D-cetocidos resultantes entran en las
mitocondrias, donde sufren una descarboxilacin oxidativa
catalizada por una nica D-cetocido deshidrogenasa de cadena ramificada, que es un complejo multienzimtico, semejante al complejo piruvato deshidrogenasa, formado por una
D-cetocido descarboxilasa, una transacilasa y una dihidrolipoil deshidrogenasa. Los tiosteres de cadena ramificada resultantes de la descarboxilacin oxidativa se catabolizan por
diferentes vas.
La valina (Fig. 14.8) sufre una transaminacin y se forma el
D-cetocido, D-cetoisovalerato, que sufre la descarboxilacin
oxidativa generndose isobutiril-CoA, el cual experimenta una
oxidacin catalizada por una deshidrogenasa dependiente de
FAD, formndose metilacrilil-CoA, compuesto que, tras una serie de pasos metablicos catalizados enzimticamente, se transforma en metilmalonil-CoA, el cual por accin de una mutasa
se convierte en succinil-CoA.
La isoleucina (Fig. 14.8) es otro de los aminocidos de
cadena ramificada, su catabolismo comienza con una transaminacin para producir el correspondiente D-cetocido, el Dceto-E-metilvalerato, que experimenta la descarboxilacin
oxidativa, transformndose en D-metilbutiril-CoA, que por
accin de la deshidrogenasa dependiente de FAD se transforma en tiglil-CoA, compuesto que, tras una serie de transfor-

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

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Figura 14.8. Rutas degradativas de los aminocidos de cadena ramificada: valina, isoleucina y leucina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

maciones catalizadas enzimticamente, produce D-metilacetoacetil-CoA, compuesto que sufre una tiolisis y se escinde
en acetil-CoA y propionil-CoA, el cual finalmente genera
succinil-CoA.

5. Aminocidos que se convierten en acetil-CoA:


leucina, lisina y triptfano
La leucina (Fig. 14.8) es la tercera de los aminocidos de
cadena ramificada, y su catabolismo conduce a la formacin
de acetil-CoA y acetoacetato.

Errores congnitos del metabolismo de


los aminocidos de cadena ramificada
1. Enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce: EOJA
La valina constituye,
junto con la isoleucina y la leucina, el
grupo de los aminocidos de cadena ramificada, cuyas primeras etapas de degradacin son equivalentes, y la deficiencia de alguna de sus
enzimas produce patologas comunes.

Esencialmente, se produce por una deficiencia en el complejo deshidrogenasa de D-cetocidos de aminocidos ramificados (Val, Ile y Leu), que puede implicar a uno o a todos sus
componentes (D-cetocido descarboxilasa, transacilasa y dihidrolipoil deshidrogenasa), o bien puede afectar al pirofosfato
de tiamina (TPP), que es el cofactor de la enzima. Esta patologa se denomina EOJA por el olor dulzn propio del jarabe
de arce que exhalan los lquidos corporales, sobre todo la orina. Existen viarios tipos de EOJA:
a) EOJA clsica: Es la ms grave. Los lactantes son normales al nacer pero presentan vmitos y poca tendencia a
alimentarse, y a los pocos das letargia y coma, junto
con rigidez muscular, convulsiones, hipoglucemia y acidosis metablica. Si no se tratan, los pacientes fallecen a
las pocas semanas o meses de vida. La orina, el sudor y
el cerumen exhalan olor a jarabe de arce, lo cual es indicativo de la patologa, que cursa con elevados niveles
plasmticos de Leu, Ile y Val y descenso de los niveles
de Ala. En orina se detectan elevados niveles de Leu, Ile
y Val, as como de sus correspondientes D-cetocidos. El
tratamiento de la fase aguda consiste en eliminar los
aminocidos de cadena ramificada y sus metabolitos de
los lquidos corporales y de los tejidos mediante dilisis
peritoneal; una vez superada esta fase, ha de ingerirse
una dieta pobre en aminocidos de cadena ramificada,
para lo cual existen preparados comerciales carentes de
estos aminocidos, sin embargo, puesto que Val, Leu e

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

Ile son aminocidos esenciales para el ser humano hay


que aadir pequeas cantidades controladas a la dieta,
la cual ha de mantenerse toda la vida del paciente. Estos
individuos frecuentemente presentan daos neurolgicos
y retraso mental.
b) EOJA intermitente: En estos pacientes la actividad del
complejo deshidrogenasa es del 8 al 16% de la normal.
Los nios son aparentemente normales, pero en situaciones de estrs (infecciones u operaciones quirurgicas,
por ejemplo) presentan vmitos, letargia, coma y olor a
jarabe de arce, llegando a una situacin equivalente a la
de la EOJA clsica.
c) EOJA leve: La actividad del complejo deshidrogenasa
es 2-8% de la normal, por lo que el cuadro clnico es
ms leve que el de la forma clsica, sin embargo los niveles plasmticos de Val, Leu e Ile son elevados, y eliminan por orina los D-cetocidos correspondientes, por
lo que tienen olor a jarabe de arce. Su retraso es ligero
o moderado.
d) EOJA con respuesta a tiamina: Algunas formas de EOJA
leves o intermedias mejoran notablemente con dosis altas de tiamina (10 a 200 mg/24 h).

183

La EOJA se produce,
esencialmente, por
una deficiencia en el
complejo deshidrogenasa de a-cetocidos
de aminoacidos ramificados (Val, Lev, Ile),
o por carencia de
TPP.

Todas las formas de EOJA se transmiten con carcter autosmico recesivo. La existencia de numerosas variedades es
debido a la deficiencia en las diversas subunidades del complejo de la deshidrogenasa.
2. Acidemias orgnicas
Todos los metabolitos intermediarios del catabolismo de los
aminocidos de cadena ramificada son cidos orgnicos, y el
deficit de cualquiera de las enzimas de estas vas metablicas,
excepto de las transaminasas, origina acidosis; los cidos orgnicos que preceden al bloqueo enzimtico se acumulan en los
lquidos corporales y se eliminan por la orina, ocasionndose
una acidosis metablica intensa en los primeros das de vida.
As, existen algunas enfermedades asociadas con el catabolismo
de la leucina:

Todos los metabolitos inter mediarios


del catabolismo de
los aminocidos de
cadena ramificada
son cidos orgnicos
y, el deficit de cualquiera de las enzimas
de estas vas metablicas, excepto de las
transaminasas, origina acidosis

a) Acidemia isovalrica: se produce por deficiencia de


isovaleril-CoA deshidrogenasa, por lo que se acumula
isovaleril-CoA, que da lugar a isovalerato, que es excretado en la orina y el sudor, produciendo un olor a queso o a sudor de pies en el aliento y los lquidos corporales. Se transmite como un carcter autosmico recesivo.
Los pacientes presentan vmitos, acidosis metablica,

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184

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

letargia, convulsiones, coma, y puede sobrevenir la


muerte.
b) Aciduria 3-metilglutacnica: Se produce por una
deficiencia en la hidratasa, eliminndose por orina cido metilglutacnico; los sntomas pueden ser leves con
un ligero retraso motor hasta graves deficiencias neurolgicas.
c) Acidemia 3-hidroxi-metilglutrica (HMG): Hay un
deficit de liasa de hidroximetilglutaril-CoA que origina,
desde los primeros das o meses de vida, vmitos, hipoglucemia, acidosis metablica, deshidratacin, letargia y
coma; hay una excrecin urinaria de cido 3-hidroximetilglutrico y otros metabolistos intermedios.

El catabolismo de
Lem produce acetoacetato y acetil-CoA, y
el de Lys genera acetil-CoA, por lo que
ambos aminocidos
son estrictamente cetognicos.

Tambin se producen acidosis por deficiencias enzimticas


en el metabolismo de la isoleucina, tal es el caso del deficit de
b-cetotiolosa, es decir de la enzima que hidroliza el metilacetoacetil-CoA, que puede llegar a ocasionar una acidosis grave
en el primer ao de vida.
La lisina se degrada hasta acetil-CoA por diversas rutas
metablicas (Fig. 14.9). La ruta mayoritaria en el hgado comienza con la formacin de '-semialdehdo D-aminoadpico
en dos etapas a traves de sacaropina. La primera, catalizada
por una reductasa, consiste en la condensacin de la lisina con
D-cetoglutarato para formar sacaropina, sobre la que acta una
deshidrogenasa y libera glutamato, con lo cual se ha producido
la desaminacin del grupo H-amino de la Lys y la transformacin en aldehdo. El '-semialdehdo D-aminoadpico experimenta una oxidacin y una transaminacin dando lugar a Dcetoadipato, que por descarboxilacin oxidativa catalizada por
una deshidrogenasa genera glutaril-CoA, que se descarboxila
para formar crotonil-CoA, compuesto que se incorpora a la
ruta de la E-oxidacin de cidos grasos para formar dos molculas de acetil-CoA. Otra de las rutas degradativas comienza
con la desaminacin de la lisina, catalizada por la aminocido
oxidasa, y confluye con la anterior en la formacin de '-semialdehdo D-aminoadpico; esta ruta degradativa se produce
en el cerebro.
Entre los errores congnitos del metabolismo de la lisina
est la hiperlisinemia persistente, debida a una deficiencia
de la enzima reductasa de D-cetoglutarato-deshidrogenasa de
sacaropina, que se cree estn controlados por un nico gen, y
que se transmite con carcter autosmico recesivo; los sntomas
van desde retraso mental y fsico grave con convulsiones, hasta
la normalidad completa de los nios. La mayora de los enfermos presentan hiperlisinemia, sacaropinemia, lisinuria y saca-

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

Figura 14.9. Ruta degradativa de lisina.

ropinuria. Otra patologa es la acidemia a-cetoadpica, debida a una deficiencia en la descarboxilacin del D-cetoadipato,
que produce niveles elevados de D-cetoadpico en plasma y
orina del recien nacido, causando convulsiones, acidosis metablica leve e intenso retraso mental.
La degradacin del triptfano se produce mayoritariamente en el hgado hasta acetil-CoA. En esta ruta en la reaccin catalizada por la quinureninasa se forma alanina, que puede
transformarse en piruvato y 3-hidroxiantranilato, que es un precursor de la biosntesis de NAD y NADP. Se genera D-cetoadipato, metabolito comn con la ruta degradativa de lisina, y
desde este punto ambas vas presentan los mismos pasos metablicos hasta acetil-CoA.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

6. Aminocidos que se convierten en fumarato


y acetoacetato: fenilalanina y tirosina

En la degradacin de
Trp se produce acetilCoA y Ala, la cual
puede transformarse
en piruvato.

La fenilalanina es un aminocido esencial, y el exceso de


este aminocido ingerido en la dieta que no se utilice para la
sntesis de protenas se degrada mediante su transformacin
en tirosina (Fig. 14.11), cuyo catabolismo desemboca en la
formacin de fumarato y acetoacetato. La primera reaccin
est catalizada por la fenilalanina 4-monooxigenasa o fenilalanina hidroxilasa, que utiliza como cofactor tetrahidrobiopterina, y transforma fenilalanina en tirosina, la cual se transamina
por la tirosina transaminasa para formar 4-hidroxifenilpiruvato, que se transforma en homogentisato, que por accin de la
homogentisato 1,2-dioxigenasa produce 4-maleilacetoacetato,
compuesto que en ltimo trmino genera fumarato y acetoacetato.
La deficiencia de fenilalanina 4-monooxigenasa (fenilalanina hidroxilasa) origina uno de los errores congnitos del metabolismo ms conocido e importante, la fenilcetonuria clsica.
Esta patologa se caracteriza por una hiperfenilalaninemia
plasmtica, con valores de Phe en sangre superiores a
20 mg/dL; el exceso de Phe se transforma en cido fenilpirvico por desaminacin o en feniletilamina por descarboxilacin,
a su vez el cido fenilpirvico puede transformarse en cido fenilactico o en cido fenil-lctico, y todos estos metabolitos
aparecen elevados en sangre, orina y, en general, en los fluidos
corporales. El aumento de los niveles de Phe produce efectos
txicos sobre el transporte y metabolismo de otros aminocidos
aromticos en cerebro, lo cual junto con los metabolistos secundarios que se originan provocan la lesin cerebral. El lactante es normal al nacer, y, si no se somete a tratamiento, el retraso mental se produce lentamente. Se presentan sntomas
neurolgicos graves, y los individuos afectados tienen una coloracin clara de piel, ojos y tejidos internos por la falta de melanina, cuyo nivel desciende por la falta de tirosina, ya que la
proveniente de la dieta no es suficiente; esta deficiencia de tirosina ejerce un efecto nocivo sobre la sntesis proteica, imposibilitando el desarrollo cerebral. La determinacin de los niveles
de Phe en sangre es una prueba que se realiza a todos los recien nacidos, ya que la deficiencia gentica de esta enzima es
elevada, y la deteccin a tiempo permite prevenir el retraso
mental con que cursa esta enfermedad mediante el control de
la cantidad de Phe de la dieta; el tratamiento consiste en alimentar a los nios con una dieta sinttica baja en Phe durante
los primeros cinco aos aproximadamente, y despus continuar con restricciones en la cantidad de protenas de la dieta.

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

Figura 14.10. Degradacin del triptfano.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 14.11. Ruta degradativa de fenilalanina y tirosina.

Esta deficiencia enzimtica se transmite con carcter autosmico recesivo.


Algunos de los lactantes con niveles elevados de fenilalanina en plasma no tienen deficiencia en la hidroxilasa, sino un

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

deficit de una de las enzimas que sintetiza o reduce el cofactor tetrahidrobiopterina (BH4). Este cofactor tambien participa
en la reaccin catalizada por las hidroxilasas de triptfano y
de tirosina, que son esenciales para la biosntesis de los neurotransmisores dopamina y serotonina, por lo que la deficiencia en BH4 afecta gravemente a las funciones del sistema nervioso central. Las manifestaciones clnicas son indistinguibles
de las de la fenilcetonuria clsica, pero, aunque se aplique
una dieta adecuada, los lactantes desarrollan manifestaciones
neurolgicas. El tratamiento consiste en la administracin de
precursores de los neurotransmisores, como L-dopa y 5-dihidroxitriptfano.

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La deficiencia de fenilalanina 4-monooxigenasa (fenilalanina


hidroxilasa) origina
uno de los errores
congnitos del metabolismo ms conocido e importante, la
fenilcetonuria clsica.

La tirosina se utiliza no slo para la sntesis de protenas,


sino como precursor de dopamina, noradrenalina, adrenalina,
melanina y tiroxina, y slo aquella en exceso se metaboliza por
la ruta degradativa hasta fumarato y acetoacetato; el fumarato
se incorpora al ciclo de los cidos tricarboxlicos y el acetoacetato se transforma finalmente en acetil-CoA. Entre los errores
congnitos del metabolismo de la tirosina estn las tirosinemias, caracterizadas por niveles elevados de Tyr en los lquidos
corporales, y que pueden ser de dos tipos:
a) Tirosinemia oculocutnea o tipo II: hay una deficiencia de tirosina transaminasa citoslica heptica, que se
transmite con carcter autosmico recesivo, y provoca
un aumento de los niveles de Tyr en plasma (2050 mg/dL) y en orina, as como de metabolitos secundarios N-acetiltirosina, p-hidroxifenilpirvico y p-hidroxifenilactico, que producen retraso mental leve a moderado y lesiones cutneas y oculares. El tratamiento
consiste en una dieta pobre en tirosina y fenilalanina.
b) Tirosinemia hepatorrenal o tipo I: es un proceso autosmico recesivo, causado por una deficiencia en fumaril acetoacetasa que ocasiona la acumulacin y excrecin de Tyr y de metabolitos intermedios, ya que se acumula fumarilacetoacetato, que conduce a la de
maleilacetoacetato, compuesto qumicamente reactivo
que se une a compuestos sulfhidrilos; tambin se produce succinilacetona, a partir de fumarilacetato, que es responsable, probablemente, de las alteraciones bioqumicas. Se origina una afectacin grave del hgado, riones
y sistema nervioso central. La forma aguda de la enfermedad se manifiesta en los seis primeros meses de vida,
y puede conducir a la muerte por fallo heptico en los
primeros dos aos. La forma crnica se manifiesta despus del primer ao de vida, y la muerte suele producir-

La tirosina se utiliza
no slo para la sntesis de protenas, sino
como precursor de
dopamina, noradrenalina, adrenalina,
melanina y tiroxina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

se a los diez aos de edad por fallo heptico. El tratamiento con dieta baja en Tyr, Phe y Met no suele ser
efectivo, y el nico recurso es el transplante heptico.
La alcaptonuria se debe a una deficiencia de homogentisato 1,2-dioxigenasa, que provoca que los pacientes excreten
prcticamente toda la Tyr que ingieren en exceso en forma de
cido homogentsico por la orina. Se transmite con carcter autosmico recesivo. El cido homogentsico es incoloro, pero
con el tiempo se oxida generando un compuesto que polimeriza adquiriendo un intenso color oscuro. Inicialmente slo se
produce una orina de color oscuro, pero con el tiempo los pigmentos procedentes de la oxidacin del cido homogentsico
se depositan en los huesos, tejido conjuntivo y diveros rganos
produciendo en ellos una pigmentacin generalizada denominada ocronosis, pudindose producir artritis.

RESUMEN
Los aminocidos que exceden las necesidades de la
sntesis proteica no pueden almacenarse, y han de ser catabolizados, al igual que aquellos procedentes de las protenas del organismo que se utilizan como combustible en
algunas circustancias metablicas.
La degradacin de aminocidos se produce mayoritaritamente en el hgado. Comienza con la eliminacin del
grupo D-amino de los aminocidos, quedando el esqueleto carbonado de los mismos, que es catabolizado hasta
formar intermediarios metablicos importantes.
La eliminacin del grupo D-amino se puede producir
por transaminacin, llevada a cabo por transaminasas o
aminotransferasas que catalizan la transferencia de un grupo D-amino desde un D-aminocido a un D-cetocido. El
mecanismo cataltico de las transaminansas incluye la formacin de bases de Schiff intermediarias. El glutamato
producido en las reacciones de transaminacin puede sufrir una desaminacin oxidativa, catalizada por la glutamato deshidrogenasa, formndose in amonio (NH4), el cual,
en la mayora de los vertebrados terrestres, se convierte en
urea en el hgado, y es excretada por el rin.
Los D-cetocidos resultantes de la transaminacin son
degradados hasta intermediarios metablicos, los cuales
pueden utilizarse en la biosntesis de cidos grasos, cuerpos cetnicos y glucosa. Los esqueletos carbonados de los

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DEGRADACIN DE LOS AMINOCIDOS

20 aminocidos se transforman en una o varias de las siguientes molculas: piruvato, acetil-CoA, acetoacetil-CoA,
D-cetoglutarato, succinil-CoA, fumarato y oxalacetato. Los
aminocidos que al degradarse producen acetil-CoA o
acetoacetil-CoA se denominan cetognicos; mientras que
los que se transforman en cualquiera de los otros intermediarios son glucognicos. Los aminocidos puramente cetognicos son leucina y lisina. Otros aminocidos como
isoleucina, fenilalanina, triptfano y tirosina son tanto cetognicos como glucognicos.
Se han descubierto numerosos errores congnitos del
metabolismos en las rutas catablicas de los aminocidos,
que traen consigo deficiencias en determinadas enzimas.
Estas deficiencias enzimticas pueden producir patologias
de diversa gravedad.

APLICACIONES CLNICAS
Por el gran nmero de trastornos metablicos que se aplican a lo largo de este tema, y por su especial importancia, los
casos clnicos se han integrado en los apartados correspondientes a este captulo.

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TEMA 15

Excrecin del
nitrgeno proteico

Excrecin del nitrgeno proteico. Ciclo de la urea.


Conexin entre el ciclo de la urea y el ciclo de
Krebs.

En la especie humana el nitrgeno que se excreta procede


de las protenas de la dieta y del recambio proteico normal. La
principal forma de excrecin del nitrgeno es la urea, que se
produce en el hgado como consecuencia de un conjunto de
reacciones estructuradas cclicamente, que se denomina ciclo
de la urea. Este ciclo esta conectado con el de Krebs a travs
del fumarato y del aspartato que procede del oxalacetato por
transaminacin.

EXCRECIN DEL NITRGENO PROTEICO


En los individuos sanos correctamente alimentados, el nitrgeno que se excreta proviene de la digestin del exceso de protenas ingeridas en la dieta y del recambio proteico normal,
puesto que la protenas del organismo sufren un recambio regular, ya que la vida media de las protenas del organismo
vara de unas horas a varios das, y adems se produce una
degradacin proteica procedente de la apoptosis celular normal del organismo. Por otra parte, en determinadas situaciones
metablicas como la inanicin, se produce degradacin de las
protenas del organismo, principalmente de las musculares, con
el fin de obtener energa mediante la incorporacin de las cadenas carbonadas de los aminocidos a la gluconeognesis, y
los grupos amino de los aminocidos son transferidos a la glutamina y a la alanina. La glutamina y la alanina formadas en el
msculo pasan a sangre y son transportadas principalmente al
hgado, pero tambin al rin (Fig. 15.1).
En el msculo esqueltico y en el cardiaco se sintetiza creatina-fosfato, como fuente de fosfato de alta energa para la con-

En condiciones de
inanimacin se degradan las protenas
musculares.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 15.1. Transporte del nitrgeno producido en el msculo por


degradacin de protenas al hgado y al rin.

traccin muscular, a partir de glicina y arginina, y ATP como


dador de fosfato y de energa. La creatina-fostato posee dos
grupos amino en su estructura. La cantidad de creatina en el
organismo depende de la masa muscular, y diariamente se renueva un porcentaje concreto. Alrededor del 1-2% de la creatina-fosfato se cicla de forma no enzimtica dando creatinina,
que pasa a la sangre y es excretada por el rin, con lo cual se
elimina nitrgeno (Fig. 15.2).
En el hgado, la alanina por accin de la alanina aminotransferasa genera glutamato, y la glutamina por accin de la
glutaminasa libera NH4 y produce glutamato. El glutamato es
catalizado por la glutamato deshidrogenasa, transformndose

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EXCRECIN DEL NITRGENO PROTEICO

Figura 15.2. Sntesis de creatina y formacin de creatinina.

en D-cetoglutarato y liberando NH4. El NH4 producido en el hgado es transformado en urea, mediante el ciclo de la urea,
que es excretada por el rin.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Una parte de la alanina y la glutamina producidas en el


msculo, llega va sanguinea al rin y, mediante los mismos
sistemas enzimticos descritos en el hgado, generan amoniaco,
que es protonado a ion amonio (NH4) y excretado.

CICLO DE LA UREA
La urea es la principal forma de excrecin de nitrgeno en
los vertebrados terrestres.

La urea se sintetiza
en el hgado a travs
de una ruta metablica cclica.
La formacin de carbamoil fosfato por la
carbamoilfosfato sintetasa I, y la de citrulina, catalizada por la
ornitina transcarbamoilasa, se producen
en el interior mitocondrial.

La arginasa, que cataliza la escisin de


arginina para formar
urea en el citosol, es
una enzima exclusivamente heptica.

La urea es la principal forma de excrecin de nitrgeno en


los vertebrados terrestres, y su sntesis se produce a travs de
una va metablica denominada ciclo de la urea, que tiene lugar en el hgado, y fue la primera ruta cclica que se descubri.
Los cientficos que la propusieron fueron Hans Krebs y Kurt
Henseleit en 1932, cinco aos antes del descubrimiento del ciclo de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs. La molcula
de urea posee dos tomos de nitrgeno (CO(NH2)2), uno de
ellos procede del aspartato, y el otro se incorpora en forma de
NH4; a su vez, el tomo de carbono de la molcula es aportado
por una molcula de bicarbonato (HCO3).
En el ciclo de la urea (Fig. 15.3) participan cinco sistemas
enzimticos, los dos primeros catalizan reacciones en la mitocondria, y los tres restantes en el citosol. El ciclo de la urea inicia y finaliza en ornitina.
La primera reaccin consiste en la condensacin del amonio con el bicarbonato en la mitocondria, catalizada por la carbamoil o carbomil fosfato sintetasa I (CPSI), para formar carbamoil o carbomil fosfato, un aldehdo mixto de alta energa.
Esta reaccin, estrictamente, no forma parte del ciclo de la
urea, pero es esencial para la sntesis de este compuesto, ya
que el carbamoil fosfato es la molcula que va a incorporar
uno de los nitrgenos de la molcula de urea. La reaccin catalizada por esta enzima necesita de dos molculas de ATP,
uno para activar el bicarbonato y otro como dador del fosfato,
as como de la presencia de N-acetilglutamato como activador
alostrico. Existe otra isoenzima citoslica, denominada carbamoil fosfato sintetasa II, que participa en la biosntesis de pirimidinas.
La primera reaccin del ciclo consiste en la formacin de citrulina por la ornitina transcarbamoilasa, que cataliza la transferencia del grupo carbamoilo del carbamoil fosfato a la ornitina,
en la matriz mitocondrial. La ornitina que participa en la reaccin se produce en el citosol, y es transportada al interior mitocondrial mediante un transportador de intercambio citrulina/ornitina situado en la membrana interna mitocondrial. As mismo, la citrulina formada en la mitocondria pasa al citosol
mediante el citado transportador.

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EXCRECIN DEL NITRGENO PROTEICO

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Figura 15.3. Ciclo de la urea.

En el citosol, la citrulina se condensa con aspartato formando argininosuccinato, reaccin catalizada por la argininosuccinato sintetasa, con hidrlisis de ATP a AMP y PPi, el cual es enzimticamente hidrolizado a 2Pi.
El argininosuccinato se hidroliza, por accin de la argininosuccinato liasa, en arginina y fumarato. El fumarato es el punto
de conexin entre el ciclo de la urea y el ciclo de los cidos tricarboxlicos.
La arginina es escindida en ornitina y urea por la arginasa,
una enzima exclusivamente heptica. La ornitina producida en
el citosol vuelve a entrar en la mitocondria mediante su transportador, y as se incorpora nuevamente al ciclo. La urea es
transportada al rin para su excrecin por la orina.
Para la biosntesis de una molcula de urea es necesaria la
hidrlisis de cuatro enlaces fosfato de alta energa: tres ATP y
un PPi:

La urea sintetizada
en el hgado es transportada al rin para
su excrecin por la
orina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

HCO3  NH4  Asp  2 H2O  3 ATP o urea  2 ADP 


 2 Pi  AMP  PPi  fumarato

El ciclo de la urea
est regulado a travs
de la carbamoil fosfato sintetasa I mediante N-acetilglutamato,
que acta como activador alostrico de la
enzima.
En el rion y en la
mucosa intestinal
existen las enzimas
que permiten la sntesis de arginina.

Las cuatro primeras reacciones enzimticas de esta va, que


conducen a la sntesis de arginina, tambin se producen en
rin y mucosa intestinal, por lo que en estos tejidos la arginina formada se utiliza para la biosntesis de protenas.
El ciclo de la urea est regulado a travs de la carbamoil
fosfato sintetasa I mediante N-acetilglutamato, que acta como
activador alostrico de la enzima. La sntesis de N-acetilglutamato por la N-acetilglutamato sintetasa a partir de acetil-CoA y
glutamato, est regulada por arginina; de forma que la presencia de N-acetilglutamato indica la existencia de intermediarios y
energa disponibles para el ciclo de la urea. Adems, el ciclo se
regula mediante la induccin de las enzimas que participan en
l, lo cual se produce al aumentar los niveles de amoniaco o de
aminocidos en el hgado, lo que se origina al ingerir una dieta
rica en protenas o en situaciones de inanicin.

CONEXIN ENTRE EL CICLO DE LA UREA


Y EL CICLO DE KREBS
El fumarato formado
en el ciclo de la urea
en el citosol puede
entrar en la mitocondria, donde finalmente se transforma en
oxalacetato, que puede incorporarse al ciclo de Krebs.

El fumarato formado en el ciclo de la urea en el citosol, y


cuyos tomos de carbono provienen del aspartato, puede entrar en la mitocondria, donde por accin de la fumarasa se
transforma en malato, que por la malato deshidrogenasa forma
oxalacetato. El oxalacetato puede tener varios destinos:
A) por una parte puede transaminarse hasta aspartato, que
se incorporara nuevamente al ciclo de la urea;
B) tambin puede incorporarse a la gluconeognesis mediante su transformacin en fosfoenolpiruvato por la fosfoenolpiruvato carboxiquinasa, y dar lugar a glucosa;
C) puede continuar en el ciclo de los cidos tricarboxlicos,
oxidndose completamente va cadena de transporte
electrnico, para producir ATP.

RESUMEN
La excrecin del amoniaco que se produce en el proceso de degradacin proteica es esencial para el organismo,
ya que las deficiencias en su eliminacin provocan hiperamonemia, con elevacin de los niveles plasmticos y en l-

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EXCRECIN DEL NITRGENO PROTEICO

quido cefalorraquideo del amonio, y las graves consecuencias neurolgicas que puede ocasionar.
La degradacin de protenas, procedentes del exceso
ingerido en la dieta, del recambio proteico y la apoptosis
normales del organismo, as como de la degradacin de
protenas musculares en situaciones de inanicin, conduce
a la formacin de alanina y glutamina, que en el hgado
originan finalmente NH4, que es transformado en urea, la
cual es excretada por el rin. Tambin en el rin se produce NH4, procedente de alanina y glutamina, que es excretado. Otra forma de excrecin de nitrgeno es la formacin de creatinina en el msculo, este compuesto pasa a la
sangre y es excretado por el rin.
La formacin de urea en el hgado a partir de NH4 se
produce mediante una ruta metablica cclica denominada ciclo de la urea, parte del cual se desarrolla en la matriz
mitocondrial, y que comienza y termina en ornitina. Participan cinco sistemas enzimticos, el primero de los cuales,
que conduce a la formacin de carbamoil fosfato, no es
estrictamente parte de ciclo, pero introduce en el mismo, a
travs de esta molcula, el nitrgeno procedente del NH4.
El otro nitrgeno se incorpora a travs del grupo amino
del aspartato mediante la formacin de argininosuccinato,
compuesto que se escinde para formar arginina y fumarato. La arginasa, que escinde la arginina en urea y ornitina,
es especfica del hgado. La regulacin del ciclo se produce
por un activador alostrico, el N-acetilglutamato, de la carbamoil fosfato sintetasa I, as como por induccin enzimtica por incremento de los niveles de amoniaco o aminocidos en el hgado.
El fumarato producido en el ciclo es el nexo de unin
con el ciclo de Krebs, ya que este compuesto puede pasar
al interior mitocondrial y transformarse en oxalacetato, el
cual puede utilizarse para la sntesis de glucosa por gluconeognesis, transaminarse a aspartato y con ello incorporarse nuevamente al ciclo de la urea, o degradarse en el ciclo de Krebs para producir finalmente ATP.

APLICACIONES CLNICAS
Hiperamonemia
La hiperamonemia es la elevacin de los niveles de amonio
en sangre por encima de 30-60 PM, y conduce a prdida de

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200

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

conciencia, lesiones cerebrales, anoxia y, en ltimo trmino,


puede provocar un estado de coma, ya que el amonio atraviesa la barrera hematoenceflica. Lo ms probable es que la elevacin de los niveles de amonio modifiquen el equilibrio de la
reaccin catalizada por la glutamato deshidrogenasa, ocasionando una sntesis elevada de glutamato, con el consiguiente
descenso de los niveles de D-cetoglutarato, lo que provocara
un mal funcionamiento del ciclo de Krebs, que sera incapaz de
suministrar suficientes electrones para mantener la produccin
normal de ATP mediante fosforilacin oxidativa, producindose un dao celular irreparable y la muerte de las clulas nerviosas. Adems, el aumento de glutamato conduce a la formacin
de glutamina, producindose una depleccin de glutamato,
que es necesario en el tejido nervioso, ya que el glutamato es
tanto un neurotransmisor como un precursor de la sntesis de
J-aminobutirato (GABA), otro neurotransmisor. Por lo tanto, la
disminucin de los niveles de glutamato en el cerebro afectan
tanto a la produccin de energa como a la neurotransmisin.
La hiperamonemia se produce por una incapacidad para
formar urea, lo que motiva la elevacin de los niveles de amonio, y puede tener diversas causas:
Deficiencia hereditaria de alguna de la enzimas del
ciclo de la urea. Se conocen casos de deficiencia en
cada una de las enzimas del ciclo, lo que afecta de diversas formas al metabolismo del nitrgeno, ya que algunos
de los intermediarios que se acumulan pueden difundir
de los hepatocitos a la sangre y pasar a la orina. En general son enfermedades graves y provocan una elevada incidencia de retraso mental y muerte prematura.
A) La deficiencia en carbamoilfosfato sintetasa I, cuya actividad puede ser de 0-50% de la normal, se transmite
como autosmica recesiva, y produce hiperamonemia
de tipo I, que conduce a los neonatos a un estado
letrgico con incapacidad para alimentarse, vmitos,
hipotermia e hiperventilacin; sin tratamiento para
disminuir el nivel de amonio plasmtico se produce la
muerte. El tratamiento, mediante dilisis y administracin de benzoato y fenilacetato como frmula general,
incluye administracin de suplementos de arginina
con el fin de que active la N-acetilglutamato sintetasa
y de esta forma el activador alostrico producido acte
sobre la carbamoilfosfato sintetasa I residual.
B) La deficiencia en N-acetilglutamato sintetasa produce
de moderada a severa hiperamonemia, con estado de
coma, acidosis, hiperglicemia e hiperornitinemia. El

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EXCRECIN DEL NITRGENO PROTEICO

C)

D)

E)

F)

tratamiento incluye la administracin de carbamoil


glutamato, un anlogo de N-acetilglutamato, que activa la carbamoilfosfato sintetasa I.
La deficiencia en ornitina transcarbamoilasa es la ms
frecuente, y puesto que el gen de esta enzima est en
el cromosoma X, la deficiencia afecta ms a los varones. Cursa con retraso mental y muerte, aunque puede evitarse si se reducen a tiempo los niveles de amoniaco. La deficiencia enzimtica hace que se acumulen
glicina y glutamina, que pueden eliminarse mediante
una dieta pobre en protenas suplementada con benzoato y fenilacetato. El benzoato reacciona con la
glicina para formar hipurato, y el fenilacetato reacciona con la glutamina para formar fenilacetilglutamina;
tanto el hipurato como la fenilacetilglutamina pueden
ser excretados por la orina, y con ello se elimina el
nitrgeno.
La deficiencia en argininosuccinato sintetasa o citrulinemia se hereda con carcter autosmico recesivo, y
conduce a la elevacin de los niveles de citrulina en
sangre y a su excrecin por la orina. Las manifestaciones clnicas varian desde las formas graves (con los
sntomas descritos para la deficiencia en ornitina transcarbamoilasa) a la ausencia de sntomas, aunque el retraso mental ligero a moderado es una secuela frecuente.
La deficiencia en argininosuccinato liasa se hereda con
carcter autosmico recesivo. En la forma grave se
produce intensa hiperamonemia neonatal que puede
llevar a la muerte; en la forma subaguda se produce
retraso mental, vmitos y hepatomegalia. Todos los
sntomas son consecuencia de la elevacin de los niveles de argininosuccinato en plasma y lquido cefalorraqudeo, tambin est elevado en orina; asimismo hay
niveles plasmticos altos de glutamina y alanina. Una
forma de tratamiento de esta deficiencia, y de la deficiencia en argininosuccinato sintetasa, es la restriccin
de las protenas de la dieta junto con la administracin
de suplementos de arginina, cuya funcin es formar citrulina o argininosuccinato, que puede ser excretado
por la orina, y con ello se elimina nitrgeno; y adems
la arginina se utiliza para la sntesis de protenas y de
creatina.
La deficiencia en arginasa produce hiperargininemia,
una patologa muy poco frecuente, que se hereda con
carcter autosmico recesivo, en la que se produce

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202

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

una progresiva cuatriplejia espstica y retraso mental.


Los niveles de arginina estn elevados en plasma y liquido cefalorraqudeo, as mismo los niveles de arginina, lisina y ornitina estn elevados en orina, pero no
suele haber episodios de hiperamonemia intensa. El
tratamiento incluye una dieta baja en protenas que
excluya la arginina.
En los neonatos puede desarrollarse un estado de hiperamonemia temporal si se retrasa la aparicin de las
enzimas del ciclo. Gran parte de los prematuros con bajo
peso al nacer tienen hiperamonemia transitoria leve
(amonio 40-50 PM) durante seis a ocho semanas, son
asintomticos y no presentan deficiencias neurolgicas.
En los casos de hiperamonemia transitoria grave se alcanzan niveles de amonio en plasma de 400 PM, se puede
conseguir una recuperacin sin secuelas si se inicia rpidamente el tratamiento para la eliminacin del amoniaco,
que incluye hemodilisis y dilisis peritoneal.

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TEMA 16

Biosntesis
de aminocidos

Biosntesis de aminocidos no esenciales. Biosntesis de aminocidos esenciales.

Para un organismo, los aminocidos no esenciales son


aquellos que puede sintetizar a partir de precursores fcilmente
accesibles, mientras que los aminocidos esenciales son los
que ha de tomar en la dieta, ya que es incapaz de sintetizarlos.
Para los seres humanos existen nueve aminocidos esenciales:
histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina,
treonina, triptfano y valina.
Los compuestos precursores de los aminocidos, a partir de
los que se sintetizan sus cadenas carbonadas, son intermediarios de la gluclisis, de la va de las pentosas fosfato o del ciclo
de los cidos tricarboxlicos. Los aminocidos se pueden agrupar en seis familias segn el intermediario metablico que
acta de precursor: familia del D-cetoglutarato, familia del
3-fosfoglicerato, familia del oxalacetato, familia del piruvato, familia de fosfoenolpiruvato y eritrosa-4-fosfato, familia de la ribosa-5-fosfato (Fig. 16.1).

Los aminoacidos
esenciales para el ser
humano son His, Ile,
Lem, Lys, Met, Phe,
Tre, Trp y Val, y han
de ingerirse con la
dieta.

BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS
NO ESENCIALES
En los siguientes epgrafes se describen las rutas biosintticas de los aminocidos no esenciales para los seres humanos.

A) Familia del a-cetoglutorato


Los aminocidos que derivan del D-cetoglutarato, que es un
intermediario del ciclo de los cidos tricarboxlicos, son: glutamato (Glu), glutamina (Gln), prolina (Pro) y arginina (Arg).

El a-cetoglutarato es
el precusor de la biosintesis de Glu, Gln,
Pro y Arg.

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204

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 16.1. Agrupamiento de los aminocidos en familias segn el intermediario metablico que
acta de precursor en la biosntesis.

La glutamina acta
como dadora de nitrgeno en numerosas biosntesis.

El glutamato se sintetiza a partir de NH4 y D-cetoglutarato


por accin de la glutamato deshidrogenasa, con NADPH
como reductor. La sntesis de glutamato es una forma de incorporacin directa de amonio y con ello contribuye a su eliminacin. La glutamato deshidrogenasa se localiza en las mitocondrias del hgado, y est regulada alostricamente; el GTP
y el ATP son activadores alostricos de la sntesis de glutamato, mientras que el ADP y el GDP activan la degradacin de
glutamato.
La glutamina se sintetiza a partir de glutamato y NH4, en
una reaccin catalizada por la glutamina sintetasa (Fig. 16.2);

Figura 16.2. Sntesis de glutamina a partir de glutamato y NH4


catalizada por la glutamina sintetasa.

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BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS

tambin en este caso se incorpora amonio directamente a la


glutamina, lo cual hace de este aminocido un compuesto dador de nitrgeno en numerosas biosntesis, como la de bases
pricas o de citosina. La glutamina sintetasa se encuentra en el
hgado.
La biosntesis de prolina (Fig. 16.3) parte de glutamato y
tiene lugar mediante varios pasos metablicos, con consumo
de ATP y de NADPH. La regulacin de la ruta se produce por
retroinhibicin de la primera enzima de la va, la J-glutamil quinasa, por el producto final, la prolina.

Figura 16.3. Biosntesis de prolina.

La sntesis de arginina (Fig. 16.4), necesaria para la sntesis de protenas, se produce en el rin (que carece de arginasa), pero la primera etapa de la ruta biosinttica hasta la formacin de citrulina desde glutamato tiene lugar en la mucosa
intestinal; la citrulina es transportada al rin para producir arginina. La biosntesis se produce con consumo de ATP y de
NADPH. El control de la va es mediante retroinhibicin por
arginina sobre la primera enzima de la ruta, la N-acetilglutamato sintasa.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 16.4. Biosntesis de arginina.

B) Familia del 3-fosfoglicerato


La ruta biosinttica
de arginina se produce en mucosa intestinal hasta citrulina y
despus en rin.

El 3-fosfoglicerato es un intermediario de la glicolisis que


aporta el esqueleto carbonado de la serina, cuyo grupo amino
proviene del glutamato por transaminacin (Fig. 16.5). La re-

Figura 16.5. Ruta biosinttica de la serina.

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BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS

gulacin de la va es por el producto final, la serina, que es un


inhibidor alostrico tanto de la primera enzima de la va, la 3fosfoglicerato deshidrogenasa, como de la ltima, la 3-fosfoserina fosfatasa, ya que la 3-fosfoserina se utiliza en otros procesos biosintticos.
La glicina se forma a partir de serina en una reaccin reversible (Fig. 16.6), catalizada por la serina hidroximetiltransferasa, dependiente de piridoxal fosfato (PLP), y que requiere tetrahidrofolato (THF) como coenzima.

Figura 16.6. Biosntesis de glicina a partir de serina.

La serina y la glicina son precursores de numerosos compuestos. Etanolamina y colina, ambas componentes de los lpidos, son derivados de la serina. La glicina participa en la biosntesis de purinas, as como en la de los sistemas cclicos porfirnicos de la clorofila, el grupo hemo y la vitamina B12;
igualmente, est implicada en la biosntesis de glioxilato, el cual
puede oxidarse a oxalato, y en la de cidos biliares, creatina y
glutation.
La biosntesis de cistena a partir de serina es una va metablica que consta de dos etapas (Fig. 16.7). La va se regula
por producto final, ya que la cistena ejerce retroinhibicin sobre la serina acetil transferasa, adems de inhibir, junto con el
sulfuro, la sntesis de esta enzima.
Tambin se forma cistena en la ruta degradativa de metionina (Fig. 16.7).

Figura 16.7. Biosntesis de cistena a partir de serina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

C) Familia del oxalacetato


El oxalacetato es un intermediario del ciclo de los cidos tricarboxlicos, y a partir de l se sintetizan dos aminocidos no
esenciales, el aspartato y la asparagina (Fig. 16.8). El aspartato se produce por transaminacin con el par glutamato/D-cetoglutarato, y a partir de l se sintetiza asparagina en una reaccin catalizada por la asparagina sintetasa, con gasto de ATP y
con glutamina como dador de grupo amino. La asparagina se
sintetiza en la mayora de las clulas, una excepcin son algunas clulas leucmicas, que carecen de asparagina sintetasa.

Figura 16.8. Biosntesis de aspartato y asparagina a partir de oxalacetato.

D) Familia del piruvato


El aminocido no esencial que se
sintetiza a partir de piruvato es la alanina mediante una transaminacin reversible dependiente del par glutamato/Dcetoglutarato, catalizada por la alanina
transaminasa (Fig. 16.9). En el msculo,
el piruvato proveniente de la gluclisis
Figura 16.9. Biosntesis de alanina a partir de piruvato.
se transforma en alanina, que es transportada hasta el hgado, donde es transformada en piruvato,
que se incorpora a la gluconeognesis para generar glucosa,
necesaria para los tejidos perifricos; estas transformaciones
constituyen el ciclo de la alanina.

BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS ESENCIALES


Los aminocidos esenciales para el ser humano, los cuales
ha de ingerir en la dieta, pueden ser sintetizados por otros or-

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BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS

209

ganismos, entre ellos las bacterias y las plantas, a partir de los


precursores comentados anteriormente (Fig. 16.1).

A) Familia del oxalacetato


Las plantas superiores y las bacterias poseen una ruta de
sntesis que parte de aspartato, el cual proviene del oxalacetato,
y que se ramifica para conducir a la sntesis de lisina, treonina y
metionina. La isoleucina se sintetiza a partir de treonina.
El aspartato se transforma, por accin de una quinasa y
una deshidrogenasa, en E-semialdehdo asprtico, que por accin de la homoserina deshidrogenasa produce homoserina
(Fig. 16.10). En la bacteria E. coli existen tres aspartato quinasas y dos homoserina deshidrogenasas. La aspartato quinasa
I-homoserina deshidrogenasa I es, en realidad, una sola enzima
bifuncional que cataliza la primera etapa de la biosntesis de
treonina e isoleucina, as como la formacin de homoserina a
partir de E-semialdehdo asprtico; la aspartato quinasa II-homoserina deshidrogenasa II tambin es una enzima bifuncional, que cataliza las dos reacciones descritas, en el metabolismo
de la metionina; la aspartato quinasa III cataliza la primera etapa de la biosntesis de lisina.
La biosntesis de lisina parte de E-semialdehdo asprtico,
que reacciona con piruvato para formar 2,3-dihidrodipicolinato
por accin de la dihidrodipicolinato sintasa, a partir de este
punto se suceden otros siete pasos metablicos que conducen
a la formacin de lisina. La lisina inhibe alostericamente a la
aspartato quinasa III y adems reprime su biosntesis; igualmente, la lisina tambin inhibe alostericamente la primera etapa de la ramificacin que conduce a su biosntesis, es decir, la
catalizada por la dihidrodipicolinato sintasa.
La biosntesis especfica de metionina comienza en homoserina, que reacciona con succinil-CoA por accin de la homoserina succiniltransferasa para formar O-succinilhomoserina,
cuyo grupo succinilo es desplazado por la cistena, formndose
cistationina por accin de la cistationina J-sintasa, a continuacin se forma homocistena por liberacin de piruvato, y se incorpora un grupo metilo, donado por el N5-metiltetrahidrofolato, formndose metionina. La metionina inhibe la sntesis de la
aspartato quinasa II-homoserina deshidrogenasa II, y adems
inhibe alostricamente a la homoserina succiniltransferasa.
La homoserina tambin es el precursor de la treonina. La
homoserina sufre una fosforilacin dependiente de ATP catalizada por la homoserina quinasa, y se forma O-fosfohomoserina, cuyo fosfato es eliminado por accin de la treonina sintasa

Serina y glicina son


precursores de numerosos compuestos.

Tanto glicina como


cistena se sintetizan
a partir de serina.

La biosntesis de lisina parte de b-semialdehdo asprtico, que


procede de aspartato.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 16.10. Transformacin del aspartato en homoserina, y ramificaciones que conducen a


la sntesis de lisina, treonina y metionina. Biosntesis de isoleucina.

para formar treonina. Tanto la treonina como la homoserina inhiben alostricamente la actividad quinasa de la aspartato quinasa I-homoserina deshidrogenasa I, y la treonina tambin produce represin gnica sobre esta enzima, adems de inhibir
alostricamente la homoserina quinasa.
La isoleucina se biosintetiza a partir de treonina, cuya desaminacin, catalizada por la treonina desaminasa, genera
D-cetobutirato, al cual se transfiere un grupo hidroxietilo proveniente del pirofosfato de hidroxietiltiamina, catalizada por la
acetohidroxicido sintasa, para formar D-ceto-D-hidroxibutira-

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BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS

to, que, tras una reduccin, seguida de deshidratacin y transaminacin, genera isoleucina. La regulacin se produce por retroinhibicin de la primera etapa especfica, as, la isoleucina
inhibe a la treonina desaminasa.

B) Familia del piruvato


El piruvato es el precursor de la biosntesis de valina y leucina en plantas y bacterias en una ruta que es comn hasta la
formacin de D-cetoisovalerato (Fig. 16.11). La ruta comienza
con la transferencia de un grupo hidroxietilo del pirofosfato de
hidroxietiltiamina al piruvato, catalizada por la acetohidroxicido sintasa, para formar D-acetolactato, que se reduce en presencia de NADPH, y posteriormente se deshidrata para formar
D-cetoisovaletato. La biosntesis de valina se produce a partir
de D-cetoisovaletato por transaminacin con glutamato. En
cuanto a la biosntesis de leucina, el D-cetoisovaletato se acetila, reaccin catalizada por la D-isopropilmalato sintasa, para
formar D-isopropilmalato, que, tras una isomerizacin y una
descarboxilacin oxidativa, sufre una transaminacin dependiente de glutamato para formar leucina. La regulacin se produce por retroinhibicin, la leucina inhibe a la D-isopropilmalato sintasa.

C) Familia de fosfoenolpiruvato y eritrosa 4-fosfato


Los aminocidos aromticos (fenilalanina, tirosina y triptfano) se sintetizan a partir de fosfoenolpiruvato (PEP) y eritrosa
4-fosfato, en una ruta que conduce a la formacin de corismato, compuesto a partir del que se ramifican las rutas que conducen a fenilalanina, tirosina y triptfano (Fig. 16.12).
La sntesis de corismato comienza con la condensacin de
fosfoenolpiruvato (un intermediario de la glicolisis) y eritrosa
4-fosfato (intermediario de la ruta de las pentosas fosfato), catalizada por la 2-ceto-3-desoxi-D-arabino-heptulosonato 7-fosfato
sintasa (DHAP sintasa), para formar 2-ceto-3-desoxi-D-arabinoheptulosonato 7-fosfato (DHAP), que se cicla en una reaccin
dependiente de NAD, catalizada por la deshidroquinato sintasa, para formar 3-deshidroquinato, compuesto que, tras varios
pasos metablicos, se transforma finalmente en corismato. Las
bacterias como E. coli poseen tres deshidroquinato sintasas distintas, una se inhibe por Phe, otra por Tyr y otra por Trp.
La sntesis de fenilalanina y tirosina pasa por la transformacin del corismato en prefenato, catalizada por la corismato

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 16.11. Biosntesis de valina y leucina.

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BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS

Figura 16.12. Ruta biosinttica de fenilalanina, tirosina y triptfano.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

mutasa. El prefenato puede sufrir una deshidratacin y descarboxilacin, catalizada por la prefenato deshidratasa, que conduce a fenilpiruvato, el cual por transaminacin genera fenilalanina; pero si el prefenato experimenta una descarboxilacin
oxidativa dependiente de NAD, catalizada por la prefenato
deshidrogenasa, se transforma en 4-hidroxifenilpirvico, el cual
se transamina para formar tirosina.
La biosntesis bacteriana de triptfano parte de corismato,
que se transforma en antranilato por accin de la antranilato
sintasa, con glutamina como dador de nitrgeno. El antranilato reacciona con el 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP),
formndose N-(5c-fosforribosil)-antranilato por accin de la
antranilato fosforribosil-transferasa, que tras isomerizacin,
descarboxilacin y eliminacin de gliceraldehdo 3-fosfato, da
lugar a triptfano.
En cuanto a la regulacin de estas biosntesis, el corismato
inhibe alostricamente a la DHAP sintasa; en E. coli hay tres
isoenzimas de la DHAP sintasa, cada una de las cuales se inhibe por cada uno de los tres aminocidos aromticos. El prefenato inhibe a la corismato mutasa. La fenilalanina y la tirosina
inhiben tambin el primer paso de sus biosntesis especficas: la
Phe inhibe a la prefenato deshidratasa, y la Tyr inhibe a la prefenato deshidrogenasa. Igualmente, el triptfano inhibe a la antranilato sintasa.

D) Familia de la ribosa 5-fosfato.


La histidina puede ser sintetizada por la mayora de los microorganismos, en una ruta compleja que parte de ribosa
5-fosfato (Fig. 16.13) y tienen 11 pasos metablicos. La va comienza con la formacin de 5-fosforribosil-1-pirofosfato

Figura 16.13. Biosntesis de histidina.

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BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS

(PRPP) a partir de ribosa 5-fosfato y ATP, catalizada por la


PRPP sintetasa. El siguiente paso est catalizado por la fosforribosil transferasa, con incorporacin de ATP, para formar N1(5c-fosforribosil)-ATP; compuesto que experimenta la prdida
del pirofosfato, una deshidratacin y una isomerizacin para
formar N1-(5c-fosforribosilformimino)-5-aminoimidazol-4-carboxamida-1-ribonucletido, que, por eliminacin de 5-aminoimidazol- 4-carboxamida-1-ribonucletido y entrada de nitrgeno procedente de la glutamina, da lugar a imidazol glicerol fosfato, que, tras diversos pasos metablicos, que incluyen
transaminacin y oxidacin, origina histidina. La histidina es
un retroinhibidor alostrico de la fosforribosiltransferasa, que
cataliza la primera etapa especfica de su biosntesis.

RESUMEN
De los 20 aminocidos que constituyen las protenas,
nueve de ellos son esenciales para el ser humano, estos
son histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptfano y valina. Los seres humanos
deben ingerir estos aminocidos esenciales en la dieta.
Sin embargo, el hombre es capaz de sintetizar los otros 11
aminocidos (alanina, arginina, asprtico, asparagina, cistena, glutmico, glutamina, glicina, prolina, serina y tirosina, ste ltimo a partir de fenilalanina) a partir de intermediarios de la gluclisis y del ciclo de los cidos tricarboxlicos.
Los precursores de los aminocidos no esenciales para
el hombre son:
A) el D-cetoglutarato, del cual procede el esqueleto
carbonado de glutamato, glutamina, prolina y arginina;
B) el 3-fosfoglicerato, intermediario glicoltico a partir
del que se sintetizan la serina, la glicina y la csteina;
C) del oxalacetato proceden el aspartato y la asparagina;
D) y a partir de piruvato se sintetiza la alanina.
La regulacin de estas vas biosnteticas suele ser mediante
retroinhibicin de la primera enzima de la ruta por el producto final.
Los aminocidos esenciales para el ser humano pueden ser sintetizados por otros organismos, entre ellos las

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

bacterias y las plantas, a partir de precursores que son


compuestos intermediarios del ciclo de los cidos tricarboxlicos, de la gluclisis o de la va de las pentosas fosfato. As, a partir de oxalacetato se sintetiza aspartato, a partir del cual se producen lisina, metionina y treonina, y a
partir de sta se sintetiza isoleucina. El piruvato es el precursor de la sntesis de valina y leucina. Los aminocidos
aromticos, fenilalanina, tirosina y triptfano, se sintetizan
a partir de fosfoenolpiruvato y eritrosa 4-fosfato, en una
ruta que conduce a corismato, punto de ramificacin para
la sntesis de estos aminocidos. La histidina se sintetiza
mediante una ruta compleja que parte de ribosa 5-fosfato.
La regulacin de estas vas es compleja, en general se produce mediante inhibicin de las enzimas clave de las rutas
por el producto final.

APLICACIONES CLNICAS
Hiperglicinemia no cetsica
La glicina es un aminocido no esencial para el ser humano
que se sintetiza a partir de serina, y tambin en la ruta degradativa de treonina. El catabolismo de la glicina consiste en su
escisin en CO2 y en un grupo monocarbonado que es transferido al tetrahidrofolato para formar N5,N10-metilentetrahidrofolato, compuesto que acta como dador de grupos metilo en diversas reacciones; esta reaccin de degradacin de la glicina
est catalizada por el sistema enzimtico de degradacin de glicina, cuya deficiencia causa la hiperglicinemia no cetsica. Este
sistema enzimtico consta de cuatro subunidades polipeptdicas, en tres de las cuales se han detectado deficiencias. En esta
patologa, que se hereda como autosmica recesiva, se produce una elevacin de los niveles de glicina en los lquidos corporales, es decir, hay hiperglicinemia e hiperglicinuria moderadas
a intensas, y un aumento de la concentracin de glicina en el lquido cefalorraqudeo. Puesto que la glicina es uno de los neurotransmisores inhibidores, su incremento en lquido cefalorraqudeo puede ser una de las causas de las alteraciones neurolgicas que se observan, que incluyen retraso mental y
convulsiones. No se conoce ningn tratamiento eficaz, la reduccin de los niveles de glicina mediante transfusiones sanguneas, y la restriccin del aminocido de la dieta, as como la
administracin de folato, no modifican las alteraciones neurolgicas. En los casos ms graves, la enfermedad es mortal.

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TEMA 17

Biosntesis
de porfirinas

Biosntesis de porfirinas y del grupo hemo. Regulacin. Formacin de pigmentos biliares.

La principal funcin de los glbulos rojos o hemates consiste en servir de transportadores de hemoglobina, la cual es responsable a su vez del transporte de oxgeno desde los pulmones a los tejidos. En algunos animales inferiores la hemoglobina circula como una protena libre en el plasma, pero en los
animales superiores y en el hombre debe viajar dentro de los
hemates o eritrocitos, para evitar su filtracin a travs de los
capilares tisulares y renales. Los eritrocitos poseen la capacidad
de concentrar la hemoglobina en el lquido intracelular hasta
unos 34 g/dL. Cuando la formacin de hemoglobina es deficiente, el transporte de oxgeno disminuye y el tamao de los
hemates puede verse reducido, alterando el valor hematocrito
(porcentaje de la sangre que corresponde a las clulas, normalmente entre el 40-45%).

BIOSNTESIS DE PORFIRINAS Y
DEL GRUPO HEMO
Los anillos porfirnicos o grupos hemo, son grupos prostticos de protenas conjugadas, hemoprotenas como hemoglobina, mioglobina y citocromos de la cadena de transferencia de
electrones y de enzimas como catalasas y peroxidasas.
La estructura de los grupos hemo consiste en un anillo porfirnico plano constituido por cuatro anillos pirrol que rodean
un tomo de hierro, el cual puede establecer seis enlaces de coordinacin con atomos diferentes. Cuatro de ellos son atomos
de nitrgeno de los anillos pirrol, cuya unin permite mantener
el hierro en el plano del anillo de porfirina. Los otros dos enlaces pueden establecerse con distintos ligandos dependiendo

Los anillos porfirnicos o grupos hemo


son grupos prostticos de protenas conjugadas.

El grupo hemo consta


de un anillo porfirnico plano, formado
por cuatro anillos pirrol que rodean un
tomo de hierro.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

del tipo de hemoprotena. En la cadena de transporte de electrones existen distintos tipos de citocromos, por su estructura
proteica y por la naturaleza de los grupos sustituyentes en el
hemo. Los enlaces se producen con atomos de los aminocidos
de la cadena peptdica del citocromo. En las hemoprotenas fijadoras de oxgeno, slo uno de estos dos enlaces se establece
con la porcin apoproteica, ya que el otro es ocupado por la
molcula de oxgeno (Fig. 17.1).

Figura 17.1. Estructura del grupo hemo. Los sustituyentes son:


H3C , Metil o metilo (M);  CH CH2, vinil o vinilo (V);
 CH2  CH2COO  CH2  CH2  COOH, propionilo o propionato (P)
La biosntesis del
anillo porfirnico comienza por condensacin del aminocido
glicina y succinilCoA, que rinden delta-aminolevulinato.

La biosntesis del anillo porfirnico comienza por condensacin del aminocido glicina y succinil-CoA, intermediario del
ciclo de Krebs, para formar delta-aminolevulinato (Fig. 17.2).

Figura 17.2. Comienzo de la biosntesis del anillo porfirnico.

La reaccin es catalizada a nivel mitocondrial por una sintasa, limitante de la velocidad de reaccin. El grupo hemo inhibe
la sntesis de la enzima y bloquea su transporte hasta la mitocondria, donde se produce la catlisis.

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BIOSNTESIS DE PORFIRINAS

Figura 17.3. Sntesis de porfobilingeno.

La segunda etapa se produce por condensacin de dos


molculas de delta-aminolevulinato para proporcionar porfobilingeno, reaccin de deshidratacin con liberacin de
dos molculas de agua. Esta reaccin ocurre en el citoplasma celular.
Cuatro molculas de porfobilingeno se unen para rendir
un tetrapirrol lineal con prdida de cuatro grupos amonio. A
continuacin, por accin de otra sintasa, se produce la formacin del anillo o uroporfiringeno III. Cuando esta reaccin es
catalizada por una sintasa simple se produce en su lugar uroporfiringeno I, ismero de carcter no fisiolgico. La etapa
siguiente es catalizada por una descarboxilasa para proporcionar coproporfiringeno III, que vuelve a la mitocondria
para ser oxidado hasta protoporfirina IX, por transformacin
de dos restos de propionato en vinilo e instauracin del anillo
porfirnico.
La incorporacin del hierro se produce en forma ferrosa
por accin de una ferroquelatasa, lo que produce finalmente el
grupo hemo, al que confiere las caractersticas de coloracin
que presentan las hemoprotenas (Fig. 17.4).

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 17.4. Formacin del grupo hemo. Los sustituyentes son: A: acetilo o acetato,  CH2  COOH;
P: propionilo o propionato,  CH3  CH2  COOH; V: vinilo,  CH CH2; M: metil o metilo,  CH3.

REGULACIN
La incorporacin del
hierro se produce en
forma ferrosa

Se realizada fundamentalmente por inhibicin de la enzima


d-aminolevulnico-sintasa (Fig. 17.2), que lleva a cabo el propio grupo hemo. Este mecanismo opera de igual forma en to-

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BIOSNTESIS DE PORFIRINAS

221

dos los tejidos que sintetizan hemoprotenas. En los eritrocitos


o glbulos rojos, la enzima es inducida por la eritropoyetina,
hormona responsable de la regulacin de la eritropoyEsis o formacin de los hemates en la mdula sea. La enzima estimula
tambin la sntesis de la apoprotena por parte de los ribosomas, que se unir al grupo hemo en el citoplasma. En el hgado es el hierro el que lleva a cabo la induccin enzimtica,
aunque puede producirse por algunos esteroides e incluso en
situaciones de ayuno.

FORMACIN DE PIGMENTOS BILIARES


Los eritrocitos son clulas anucleadas, por lo que no pueden reproducirse, ni renovar las enzimas necesarias para la
obtencin de energa. Tras su formacin en la medula sea,
pasan a la circulacin, donde permanecen aproximadamente
120 das antes de su destruccin, que se produce como consecuencia de su propio desgaste y envejecimiento. La fragilidad
de la membrana celular facilita la ruptura al pasar por capilares
sinusoidales como los del bazo, lugar preferente de la destruccin o eritrocatresis. Tambin es frecuente su ruptura en hgado y mdula sea. La hemoglobina es captada por los
macrfagos y desdoblada en sus dos componentes. La porcin
proteica es hidrolizada hasta aminocidos para su utilizacin
metablica, mientras que el grupo hemo es degradado inicialmente a biliverdina por accin de una hemooxigenasa dependiente del citocromo P450. La reaccin requiere oxgeno y
NADPH, el cual tambin es necesario para la reduccin de biliverdina a bilirrubina (Fig. 17.5).
La bilirrubina es insoluble en el plasma sanguneo, por lo
que necesita de la albmina para su transporte hasta el hgado,
donde es solubilizada por unin al cido glucurnico, derivado
de la glucosa. La bilirrubina conjugada recibe el nombre de diglucurnido de bilirrubina y es almacenada en la vescula biliar
formando parte de la bilis (Fig. 17.6).
El hierro liberado, pasa al plasma donde es captado por
una protena especfica para su trasporte, la transferrina, capaz
de fijar dos atomos de hierro en estado frrico y conducirlos
hasta los lugares de utilizacin, fundamentalmente mdula
sea e hgado, o bien ser captado por la apoferritina para su
almacenamiento en forma de ferritina como hierro de depsito. Cuando la cantidad total de hierro en el organismo supera
la capacidad de almacenamiento por parte de la apoferritina,
la ferritina se condensa formando hemosiderina, compuesto
muy poco soluble que carece casi por completo de intercam-

La regulacin de la
sntesis del hemo se
produce por inhibicin de la enzima
delta-aminolevulnico-sintetasa.

La bilirrubina insoluble requiere de la albmina para su transporte hasta el hgado.

La bilirrubina soluble
o conjugada forma
parte de la bilis.

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222

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La vida media de los


eritrocitos en la circulacin es aproximadamente de 120
das.

La fragilidad de la
membrana celular facilita la eritrocatresis o rotura de los eritrocitos a su paso por
los capilares sinusoidales.

Figura 17.5. Formacin de la bilirrubina.

Figura 17.6. Solubilizacin de la bilirrubina

bio metablico. Las prdidas fisiolgicas de hierro son mnimas y su regulacin se produce a nivel de la absorcin digestiva. Slo se absorbe el hierro necesario para equilibrar las prdidas. La disminucin de los depsitos de hierro favorecen la
absorcin de la vit. C, aminocidos y citratos, mientras que la
saturacin de los depsitos inhibe la absorcin junto con los
tanatos, fitatos y fosfatos que se comportan como antinutrientes de tipo mineral.

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BIOSNTESIS DE PORFIRINAS

RESUMEN

223

La regulacin del hierro se produce a nivel


de su absorcin digestiva.

Las porfirinas se sintetizan a partir de glicina y succinil


CoA por condensacin dando delta-aminolevulinato. La
condensacin de dos molculas de dicho compuesto, rinden porfobilingeno y cuatro molculas de este ltimo
compuesto, se acoplan para formar un tetrapirrol lineal,
que se cicla para formar uroporfiringeno III. La oxidacin
y modificacin de las cadenas laterales producen protoporfirina IX, la cual adquiere un tomo de hierro por quelacin para formar el grupo hemo. La regulacin se lleva a
cabo por inhibicin de la sntesis de la enzima delta-aminolevulinato sintetasa, limitante de esta va, inhibicin que
realiza el propio grupo hemo.
La destruccin de los hemates viejos produce la liberacin del grupo hemo y su degradacin a biliverdina, que
ser reducida para formar bilirrubina soluble a nivel heptico y facilitar su excrecin a travs de la secrecin biliar.

APLICACIONES CLNICAS
Porfirias
Incluyen un grupo de enfermedades adquiridas o congnitas, de carcter autosmico dominante o recesivo, causadas
por el dficit de una enzima que interviene en la sntesis del
grupo hemo. La Porfiria eritropoytica congnita o Enfermedad de Gnther es una enfermedad de carcter autosmico recesivo, caracterizada por un defecto en la sntesis de la
enzima uroporfiringeno III cosintetasa, necesaria para la formacin de uroporfiringeno III. La enfermedad cursa con
aumento del ismero uroporfiringeno I afuncional y de sus
derivados. La destruccin prematura de los eritrocitos y la excrecin renal del uroporfiringeno I colorea la orina de forma
importante al nacimiento. El deposito en los dientes ocurre tardiamente, provocando fluorescencia rojiza o eritrodoncia por
accin de la luz ultravioleta. Existe fotosensibilidad muy grave.
El tratamiento consiste en evitar la exposicin solar y administracin de derivados hmicos que inhiben la sntesis de la enzima delta-aminosintasa y el acmulo de intermediarios no fisiolgicos. A veces es necesario la extirpacin quirrgica del
bazo para evitar la hemolsis exagerada.

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224

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Ictericias hereditarias
Incluyen un grupo de enfermedades congenitas de tipo
autosmico dominante. La ms frecuente es el sndrome de
Gilbert, que se caracteriza por un dficit parcial de glucuronil
transferasa, necesario para la conjugacin y consiguiente solubilizacin heptica de la bilirrubina. El aumento de bilirrubina
no conjugada o indirecta en plasma, es moderado y suele ser
intermitente, aumentando con el ayuno, ejercicio fsico, fiebre,
infecciones, etc. El fenobarbital disminuye los niveles plasmticos de bilirrubina por induccin enzimtica, aunque no se requiere tratamiento.

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TEMA 18

Metabolismo
de los nucletidos:
biosntesis
y degradacin

Digestin de purinas y pirimidinas: vas de recuperacin o salvamento. Biosntesis de novo de los nucletidos de purina. Biosntesis de novo de nucletidos de pirimidina. Sntesis de desoxirribonucletidos. Biosntesis de los desoxirribonucletidos de
timina. Degradacin de purinas: sntesis de cido
rico. Degradacin de pirimidinas. Frmacos anticancerosos que bloquean las vas de biosntesis de
nucletidos.

La biosntesis de los nucletidos constituye un proceso


muy importante en todas las clulas, puesto que son los precursores del ADN y ARN, el ATP y en gran medida del GTP;
son los principales transmisores de la energa qumica, e
igualmente componentes de cofactores como NAD, FAD,
coenzima A, as como de intermedios biosintticos activados
como UDP-glucosa o CDP-diacilglicerol. Algunos nucletidos,
tales como el cAMP y el cGMP, actan tambin como segundos mensajeros.
Las rutas metablicas que conducen a la formacin de nucletidos son: las vas de novo y las vas de recuperacin. La
sntesis de novo de los nucletidos empieza a partir de sus
precursores metablicos, aminocidos, ribosa-5-fosfato, CO2 y
NH3. Las rutas de recuperacin reciclan las bases libres y los
nuclesidos liberados a partir de la ruptura de los cidos nucleicos.
El anillo de purina se forma a partir de la ribosa-5-fosfato,
sobre el que se forma paso a paso un ncleo purnico, lo que
conduce a la formacin de un nucletido. El de pirimidina se
sintetiza como cido ortico u orotato, unido a ribosa-5-fosfato,
y se transforma en los nucletidos de pirimidina.
Muchas clulas disponen de mecanismos de recuperacin
o salvamento para recuperar las bases libres que resultan de la

Las rutas metablicas que conducen a


la formacin de nucletidos son: las
vas de novo y las
vas de recuperacin.
La sntesis de novo
de los nucletidos
empieza a partir de
sus precursores metablicos, aminocidos, ribosa-5-fosfato,
CO2 y NH3. Las rutas
de recuperacin reciclan las bases libres
y los nuclesidos liberados a partir de la
ruptura de los cidos
nucleicos.

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226

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

degradacin hidroltica de los nucletidos. Tanto las purinas


como las pirimidinas comparten varios precursores importantes en las vas de sntesis de novo. El 5-fosfo-D-D-ribosa-1-pirofosfato (PRPP), resulta esencial para ambos tipos de bases;
en ambas vas hay un aminocido como precursor importante:
la glicina en el caso de las purinas y el aspartato en el caso de
las pirimidinas, siendo la glutamina y el aspartato o asprtico
la fuente ms importante de grupos amino. Las concentraciones intracelulares de nucletidos estn reguladas mediante
una serie de enzimas controladas alostricamente. Los 2-desoxirribonucletidos se generan directamente a partir de los ribonucletidos.

DIGESTIN DE PURINAS Y PIRIMIDINAS:


VAS DE RECUPERACIN O SALVAMENTO

En las vas de recuperacin o rutas de salvamento utilizan los


compuestos de purinas y pirimidinas preformadas para de
nuevo sintetizar nucletidos que, de lo
contrario, se perderan como bases libres mediante la biodegradacin.

La mayora de los organismos pueden sintetizar los nucletidos a partir de los nuclesidos o las bases de las que disponen
por haberlas ingerido con los alimentos o por haberlas obtenido mediante la degradacin enzimtica de los cidos nucleicos.
Estos procesos se denominan vas de recuperacin o rutas de
salvamento, ya que en estas vas se utilizan los compuestos de
purinas y pirimidinas preformadas para de nuevo sintetizar nucletidos que, de lo contrario, se perderan como bases libres
mediante la biodegradacin.
La degradacin de los cidos nucleicos puede producirse
intracelularmente, como consecuencia de la muerte celular o,
en los animales, por la digestin de los cidos nucleicos ingeridos en los alimentos.
En los animales, la hidrlisis extracelular de los cidos nucleicos ingeridos constituye la principal va de obtencin de bases y nuclesidos. Los procesos de degradacin son similares a
los que intervienen en la digestin proteica.
La fragmentacin se inicia en los enlaces fosfodister internos, catalizada por endonucleasas, como la ribonucleasa o la
desoxirribonucleasa pancretica, que actan digiriendo los cidos nucleicos en el intestino delgado; as se generan oligonucletidos, que se fragmentan de forma exonucleotdica por accin de las enzimas denominadas fosfodiesterasas, generndose mononucletidos.
Los nucletidos pueden fragmentarse de forma hidroltica
mediante un grupo de fosfomonoesterasas denominadas nucleotidasas, dando ortofosfato y el correspondiente nuclesido,
que sufre ruptura para dar la base por accin de la nuclesido
fosforilasa.

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

Estas reacciones son reversibles, de manera que una nuclesido fosforilasa puede catalizar tambin el primer paso de
sntesis de salvamento o recuperacin de nucletidos a partir
de bases libres. Cuando esto ocurre, el nuclesido producido
puede fosforilarse por el ATP, por la accin de una nuclesido
quinasa. Si las bases o los nuclesidos no se reutilizan para la
sntesis de cidos nucleicos a travs de las rutas de salvamento,
las bases pricas y pirimidnicas continan degradndose, hasta cido rico o E-ureido propionato.
Otra ruta de salvamento o recuperacin es la que sintetiza
nuclesidos 5c-fosfato directamente a partir de las bases libres.
En esta ruta interviene una clase de enzimas denominadas fosforribosiltransferasas y un azcar fosfato activado, el 5-fosfo-DD-ribosil-1-pirofosfato (PRPP). El PRPP es un intermediario
clave en la sntesis de novo de los nucletidos pricos y pirimidnicos. Se forma por accin de la PRPP sintetasa que activa
el C1 de la ribosa-5-fosfato mediante la transferencia al mismo
del grupo pirofosfato del ATP (Fig. 18.1).

227

El PRPP es un intermediario clave en la


sntesis de novo de
los nucletidos pricos y pirimidnicos.

Figura 18.1. Sntesis de 5-fosfo-D-D-ribosil-1-pirofosfato (PRPP).

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228

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La fosforribosiltransferasa cataliza la transferencia reversible


de una base libre a la ribosa del PRPP, dando lugar a un nuclesido monofosfato y pirofosfato.

El pirofosfato se transforma en fsforo inorgnico por accin de la pirofosfatasa. Ello hace que las fosforribosil transferasas acten la mayor parte de las veces en la direccin de la
biosntesis de nucletidos.
pirofosfatasa

PPi o 2 Pi
Igualmente
adenosina fosforribosil
transferasa

PRPP  adenina o AMP  PPi

BIOSNTESIS DE NOVO DE LOS


NUCLETIDOS DE PURINA

Figura 18.2. Origen de los tomos de las purinas.

Los dos precursores de los nucletidos


purnicos de los cidos nucleicos son la
adenosina 5c-monofosfato (AMP) y la
guanosina-5c-monofosfato (GMP). Estos
nucletidos contienen respectivamente
las bases pricas adenina y guanina.
El anillo purnico se sintetiza de novo
en las clulas de los mamferos utilizando
aminocidos como dadores de C y N, y
CO2 como dador de C (Fig. 18.2).
La va de biosntesis de las purinas,
que conduce a la sntesis de inosina

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

5c-monofosfato (IMP) o cido inosnico, fue descrita por J. Buchanan y G. Robert Greenberg en la dcada de los cincuenta
consiste en diez pasos metablicos. Varias de las reacciones requieren la hidrlisis de ATP, por lo cual es un proceso caro
energticamente.
Todas las enzimas implicadas en la sntesis de los nucletidos purnicos se encuentran en el citosol de la clula. No obstante, no todas las clulas (por ejemplo, los eritrocitos) son capaces de realizar esta sntesis. La ruta biosinttica parte del 5fosfo-D-D-ribosil-1-pirofosfato (PRPP) (Fig. 18.3).
El paso limitante en la sntesis de novo de los nucletidos
de purina es la formacin de 5-fosforribosilamina (PRA) a partir de PRPP y glutamina (reaccin 1). El grupo amina, procedente de la cadena lateral de la glutamina, desplaza al grupo
pirofosfato unido al C1 del PRPP. En esta reaccin la configuracin del C1 se invierte de D a E. El enlace C-N-glicosdico resultante tiene la configuracin E, caracterstica de los nucletidos
que tienen lugar en la naturaleza. Esta reaccin se ve favorecida por la hidrlisis del pirofosfato por la pirofosfatasa para formar ortofosfrico.

229

El anillo purnico se
sintetiza de novo en
las clulas de los
mamferos utilizando
aminocidos como
dadores de C y N, y
CO2 como dador de C.

El paso limitante en
la sntesis de novo de
los nucletidos de
purina es la formacin de 5-fosforribosilamina (PRA) a partir de PRPP y glutamina.

pirofosfatasa

PPi o 2 Pi
En contra de lo que parece lgico, esto es, que el anillo
purnico se formaba en primer lugar y que despus se le una la
cadena lateral de la D-ribosa-fosfato, se ha descubierto que el
material de partida es una forma activada de la ribosa-5-fosfato, sobre el que se forma, paso a paso, un ncleo purnico, lo
que conduce directamente a la produccin de un nucletido.
Para la formacin del cido inosnico (IMP) a partir de la
D-ribosa-5-fosfato se han utilizado 5 ATP y en conjunto seis
grupos fosfato de alta energa, teniendo en consideracin que
el grupo pirofosfato desplazado del 5-fosforribosil-1-pirofosfato resulta finalmente hidrolizado a ortofosfato por una pirofosfatasa.
En la va de sntesis del IMP, existen tres etapas que son inhibidas por agentes antibacterianos especficos. El antibitico
azaserina bloquea las dos transferencias enzimticas del grupo
amino de la glutamina y compite con ella, reacciones 1 y 4.
Las sulfonamidas que inhiben el crecimiento de muchas bacterias, impiden la formacin de cido flico, reacciones 3 y 9, as,
al inhibir indirectamente la ltima etapa, impiden la biosntesis
purnica.
Las clulas de los vertebrados contienen las actividades enzimticas que catalizan varios de los pasos de esta ruta en dominios separados de enzimas multifuncionales. As en las reac-

Para la formacin del


cido inosnico (IMP)
a partir de la D-ribosa-5-fosfato se han
utilizado 5 ATP y en
conjunto seis grupos
fosfato de alta energa.

Las clulas de los


vertebrados contienen las actividades
enzimticas que catalizan varios de los pasos de esta ruta en
dominios separados
de enzimas multifuncionales.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 18.3. Sntesis del IMP (cido inosnico). R  5  P representa el grupo 5-fosfo-D-ribosilo.

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

231

Figura 18.3. (Continuacin).

ciones 2, 3 y 5 las actividades enzimticas forman parte de una


enzima o protena trifuncional. Las actividades de las reacciones 6 y 7 y las de los pasos 9 y 10 estn presentes en otras protenas bifuncionales.

Sntesis de AMP Y GMP


El cido inosnico (IMP) es el primer ribonucletido formado en la ruta de novo, es el precursor comn de la sntesis de
los cidos adenlico (AMP) y guanlico (GMP).
La conversin de IMP en AMP precisa la incorporacin de
un grupo amino procedente del aspartato. Una diferencia importante consiste en la utilizacin de GTP, en lugar de ATP,
como fuente de energa en la sntesis del adenil succinato. El
GMP se forma por oxidacin del IMP utilizando NAD e incorporando a continuacin un grupo amino procedente de la
glutamina, necesitando ATP que se hidroliza a AMP  PPi
(Fig. 18.4).

El cido inosnico
(IMP) es el primer ribonucletido formado en la ruta de novo,
es el precursor comn de la sntesis de
los cidos adenlico
(AMP) y guanlico
(GMP).

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 18.4. Sntesis de AMP y GMP a partir de IMP. Las enzimas son:
(1) adenilsuccinato sintetasa; (2) adenilsuccinato liasa; (3) IMP deshidrogenasa;
(4) XMP-glutamina amidotransferasa o GMPsintetasa. R  5  P es ribosa-5fostato.
La formacin de GMP
a partir de IMP req u i e r e AT P c o m o
fuente de energa,
mientras que la formacin de AMP a
partir de IMP requiere GTP.

Hemos visto que la formacin de GMP a partir de IMP requiere ATP como fuente de energa, mientras que la formacin
de AMP a partir de IMP requiere GTP. Esto puede interpretarse
como una relacin recproca, es decir, cuando hay suficiente
ATP en la clula, se sintetizar GMP y viceversa, cuando hay
suficiente GTP se sintetizar AMP.
En el metabolismo, los nucletidos son activos, principalmente, en forma de nuclesidos trifosfato. El GMP y el AMP se
convierten en sus correspondientes trifosfatos a travs de dos
reacciones de fosforilacin sucesivas. La conversin en los difosfatos comporta la accin de quinasas especficas dependientes de ATP:

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

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guanilato
quinasa

GMP  ATP o


m DGP  ADP
adenilato
quinasa

AMP  ATP o


m 2 ADP
La fosforilacin del ADP a ATP se produce a travs del metabolismo energtico o a partir de ADP por accin de la adenilato quinasa. El ATP es el donador de fosfato para la conversin del GDP y otros nucletidos difosfato al nivel de trifosfatos, mediante la accin de la nuclesido difosfoquinasa:
nuclesido
difosfoquinasa

GDP  ATP o


m GTP  ADP

El ATP es el donador
de fosfato para la
conversin del GDP y
otros nucletidos difosfato al nivel de trifosfatos, mediante la
accin de la nuclesido difosfoquinasa.

Regulacin de la sntesis de
nucletidos purnicos
Tres mecanismos importantes de retroinhibicin cooperan
en la regulacin de la velocidad de la sntesis de novo de nucletidos purnicos. El punto clave de regulacin es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de 5-fosforribosil-1-pirofosfato, reaccin catalizada por la glutamina-PRPP amidotransferasa, que est regulada alostricamente por los productos
finales de la ruta IMP, GMP y AMP, estos nucletidos actan
como efectores negativos. El PRPP es un efector positivo.
La glutamina-PRPP-amidotransferasa, enzima alostrica, es
un monmero de 135 Kda enzimticamente activo. En presencia de IMP, AMP o GMP, la enzima forma un dmero mucho
menos activo. La presencia de PRPP favorece la forma monomrica activa de la enzima. La enzima de tejidos humanos
tiene dos centros de fijacin de nucletidos. Uno de ellos fija
especficamente los nucletidos oxopurnicos (IMP y GMP), y el
otro fija nucletidos aminopurnicos (AMP). La fijacin simultnea de AMP y GMP o IMP produce una inhibicin sinrgica de
la enzima.
El segundo mecanismo de control en la sntesis del GMP a
partir del IMP es la IMP deshidrogenasa, enzima limitante de la
velocidad y regulada por el GMP, que acta como un inhibidor
competitivo e inhibe la formacin de XMP. De la misma forma,
una acumulacin de AMP inhibe la formacin de adenilsuccinato por la adenilsuccinato sintetasa, que es la enzima limitante
de la velocidad, actuando el AMP como inhibidor competitivo.
El tercer mecanismo consiste en que se precisa GTP para la
conversin de IMP en AMP, y se precisa ATP para la conversin de IMP en GMP, un control recproco que tiende a mante-

El punto clave de regulacin es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de


5-fosforribosil-1-pirofosfato, reaccin catalizada por la glutamina-PRPP amidotransferasa, que est
regulada alostricamente por los productos finales de la
ruta IMP, GMP y AMP.

Tanto el AMP como


el GMP son inhibidores de su propia sntesis.

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234

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

ner un balance entre la sntesis de los dos ribonucletidos.


Tanto el AMP como el GMP son inhibidores de su propia sntesis (Fig. 18.5).

Figura 18.5. Regulacin de la sntesis de las bases pricas.

La sntesis de novo
conduce a UMP en
seis pasos metablicos, se necesita la
presencia de carbamoil fosfato, aspartato y PRPP, tiene lugar
de forma distinta a la
sntesis de purinas,
puesto que el anillo
de pirimidina se forma en primer lugar y
a continuacin se engancha la ribosa-5fosfato procedente
del PRPP.

BIOSNTESIS DE NOVO DE
NUCLETIDOS DE PIRIMIDINA
Los ribonucletidos de pirimidina son la uridina 5c-monofosfato (UMP) o uridilato y la citidina 5c-monofosfato (CMP) o
citidilato, que contienen las pirimidinas uracilo y citosina, respectivamente. La sntesis de novo conduce a UMP en seis pasos metablicos, se necesita la presencia de carbamoil fosfato,
aspartato y PRPP, tiene lugar de forma distinta a la sntesis de
purinas, puesto que el anillo de pirimidina se forma en primer
lugar y a continuacin se engancha la ribosa-5-fosfato procedente del PRPP (Fig. 18.6).

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

Figura 18.6. Biosntesis de UMP.

La carbamoil fosfato sintetasa II es citoslica, y diferente de


la carbamoil fosfato sintetasa I mitocondrial del ciclo de la urea.
El carbamoil fosfato reacciona con el aspartato para dar N-carbamoilaspartato en el primer paso de la sntesis de pirimidinas.
Esta reaccin est catalizada por la aspartato carbamoil transferasa o aspartato transcarbamoilasa, y constituye la etapa determinante de la biosntesis de pirimidinas.
La formacin de orotato a partir de dihidroorotato est catalizada por una enzima mitocondrial, dihidroorotato deshidrogenasa. Las otras enzimas de la ruta se encuentran en el citosol

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236

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El carbamoil fosfato
reacciona con el aspartato para dar Ncarbamoilaspartato
en el primer paso de
la sntesis de pirimidinas. Esta reaccin
est catalizada por la
aspartato carbamoil
transferasa o aspartato transcarbamoilasa,
y constituye la etapa
determinante de la
biosntesis de pirimidinas.

El UTP es tambin un
sustrato para la sntesis de CTP, por lo
cual la clula tiene
UTP y CTP suficientes para la sntesis de
cidos nucleicos.

formando parte de protenas multifuncionales. As, las actividades de la carbamoil fosfato sintetasa II, la aspartato carbamoil
transferasa y la dihidrooratasa estn presentes en una nica
protena trifuncional (CAD), que est formada por tres cadenas
polipeptdicas idnticas, de manera que cada una de ellas contiene los centros activos para las tres reacciones. Por otra parte,
las actividades de la orotato fosforribosil transferasa y OMP
descarboxilasa se encuentran en una protena bifuncional, definida como UMP sintasa; un defecto en esta protena bifuncional conduce a un raro trastorno clnico conocido como aciduria
ortica hereditaria; se caracteriza por fuerte anemia, retraso en
el crecimiento y elevados niveles de excrecin del cido ortico. A los pacientes se les suministra uridina, que disminuye la
formacin de cido ortico. La uridina es captada por las clulas y transformada en UMP por la uridina fosfotransferasa, y
sta en UDP y posteriormente en UTP. El UTP inhibe la carbamoil fosfato sintetasa II, con lo cual la formacin de cido ortico disminuye a niveles prcticamente normales.
El UTP es tambin un sustrato para la sntesis de CTP, por
lo cual la clula tiene UTP y CTP suficientes para la sntesis de
cidos nucleicos.

La CTP sintetasa cataliza la formacin de CTP a partir de


UTP y la glutamina como dador del grupo amino (Fig. 18.7).

Regulacin de la sntesis de
nucletidos pirimidnicos
En las clulas de los
mamferos la regulacin de la sntesis se
produce a nivel de la
carbamoil fosfato sintetasa II, que es inhibida por UTP, un producto final de la va,
y activada por el
PRPP.

En las clulas de los mamferos la regulacin de la sntesis


se produce a nivel de la carbamoil fosfato sintetasa II, que es
inhibida por UTP, un producto final de la va, y activada por el
PRPP. El UMP no inhibe la carbamoil fosfato sintetasa II pero s
compite con el OMP, inhibiendo la OMP descarboxilasa. La
conversin de UTP en CTP est regulada, ya que ste ltimo
inhibe la enzima (CTP sintetasa), de forma que las clulas pueden mantener un equilibrio entre nucletidos de uridina y citidina. La regulacin de la velocidad de la sntesis en las bacterias tiene lugar a travs de la enzima aspartato transcarbamoilasa, o aspartato carbamoil transferasa, que cataliza la primera
reaccin de la secuencia, la formacin de N-carbamoil aspartato. Esta enzima resulta inhibida por el CTP, que es el producto

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

237

Figura 18.7. Biosntesis de CTP.

final de esta secuencia de reacciones. La aspartato transcarbamoilasa bacteriana consta de seis subunidades catalticas y seis
subunidades reguladoras. Las molculas de sustrato se unen a
las subunidades catalticas, mientras que el inhibidor alostrico
CTP se une a las subunidades alostricas. La enzima existe en
dos conformaciones, una activa y otra inactiva. Cuando las subunidades reguladoras estn vacas, la actividad enzimtica resulta mxima. Cuando aumentan las concentraciones de CTP,
que se une a las subunidades reguladoras, se origina un cambio en su conformacin, y como consecuencia de este cambio
se produce una conformacin inactiva de la enzima (Fig. 18.8).
La presencia de ATP previene los cambios inducidos por el
CTP y por ello evita la inhibicin (Fig. 18.9).

La regulacin de la
velocidad de la sntesis en las bacterias
tiene lugar a travs
de la enzima aspartato transcarbamoilasa,
o aspartato carbamoil transferasa, que
cataliza la primera
reaccin de la secuencia, la formacin
de N-carbamoil aspartato. Esta enzima
resulta inhibida por
el CTP, que es el producto final de esta
secuencia de reacciones.

SNTESIS DE DESOXIRRIBONUCLETIDOS
Los desoxirribonucletidos, las piezas de construccin del
ADN, contienen 2c-desoxirribosa en vez de ribosa como pentosa, no se sintetizan a partir de la desoxirribosa como elemento
de construccin, derivan de los correspondientes ribonucletidos a travs de unas reacciones en que el tomo de carbono
en posicin 2c de la D-ribosa del ribonucletido se reduce di-

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238

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 18.8. Regulacin de la sntesis de las


bases pirimidnicas.

Los desoxirribonucletidos contienen


2'-desoxirribosa en
vez de ribosa, no se
sintetizan a partir de
la desoxirribosa, derivan de los correspondientes ribonucletidos a travs de unas
reacciones en que el
tomo de carbono en
posicin 2' de la D-ribosa del ribonucletido se reduce directamente para dar lugar
al derivado 2'-desoxi.

Figura 18.9. Efecto de los moduladores alostricos CTP y


ATP en la velocidad de transformacin del aspartato en
N-carbamoilaspartado por la aspartato transcarbamoilasa.

rectamente para dar lugar al derivado 2c-desoxi. Los sustratos


para esta reaccin, catalizada por la enzima ribonucletido reductasa (NDP-reductasa), son ribonucletidos difosfato (ADP,
GDP, UDP y CDP). stos son reducidos directamente a los correspondientes desoxi-anlogos (dADP, dGDP, dUDP y dCDP)
por un sistema enzimtico mltiple (Fig. 18.10).
La reduccin de la D-ribosa de los ribonuclesidos difosfato
a 2c-desoxi-D-ribosa precisa un par de tomos de hidrgeno
que, en ltimo trmino, proporciona el NADP, pero son trasladados a la NDP-reductasa a travs de un intermedio proteico
que acta como transportador de hidrgenos, la tiorredoxina.
La tiorredoxina es una pequea protena termoestable, contiene 108 restos de aminocidos, de masa molecular 12000, tiene
dos grupos tioles en la secuencia Cys-Gly-Pro-Cys. Estos tioles
experimentan una oxidacin reversible a disulfuro, con lo que
reducen los azufres del sitio activo de la NDP-reductasa, es decir, los grupos  SH transportan tomos de hidrgeno desde el
NADPH hasta el ribonuclesido difosfato. La tiorredoxina oxidada o disulfuro se reduce por el NADPH por accin de la tio-

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

239

Figura 18.10. Reduccin de los ribonucletidos a desoxirribonucletidos.

rredoxina reductasa (M 68000), que contiene dos molculas


de FAD como cofactor. La tiorredoxina reducida es utilizada a
continuacin por la NDP reductasa para reducir los nuclesidos
difosfato (NDP) a desoxirribonuclesidos difosfato (Fig.
18.11A).
Otra fuente de equivalentes de reduccin para la NDP-reductasa es el glutatin (GSH), que acta como reductor de una
protena relacionada con la tiorredoxina, denominada glutarredoxina. La glutarredoxina reducida transfiere a continuacin el
poder reductor del glutatin a la NDP-reductasa (Fig. 18.11B).
Sea cual sea el transportador que acte como cofactor principal para la NDP reductasa, el origen ltimo de los electrones
es el NADPH.
El mecanismo de reaccin de la NDP reductasa es el ejemplo mejor caracterizado de la implicacin de radicales libres en
transformaciones bioqumicas.
La enzima presente en E. coli y en la mayor parte de los
eucariotas est formada por dos subunidades (R1 y R2). La subunidad R1 est formada por dos cadenas polipeptdicas D

La reduccin de la Dribosa de los ribonuclesidos difosfato a


2 ' - d e s o x i -D -r i b o s a
precisa un par de tomos de hidrgeno
que, en ltimo trmino, proporciona el
NADP+, pero son trasladados a la NDP-reductasa a travs de
un intermedio proteico que acta como
transportador de hidrgenos, la tiorredoxina.

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240

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 18.11. Reduccin de los ribonucletidos por la ribonucletido reductasa (NDP reductasa).

(M 87000), y la subunidad R2 por dos cadenas E (M


43000) (Fig. 18.12).
Cada una de las cadenas D de la subunidad R1 tiene los
siguientes sitios de unin:
A) Sitio cataltico, en el que existen tres Cys, dos de las
cuales participan en reacciones redox. Es el sitio donde se unen los sustratos: ADP, CDP, GDP y UDP.
B) Sitio de actividad: es uno de los centros reguladores
de la enzima; en este sitio se unen ATP o dATP.
C) Sitio de especificidad: es el segundo de los centros reguladores de la enzima, en el que se unen ATP, dATP,
dGTP o dTTP.
D) Sitio redox: donde se une glutarredoxina o tiorredoxina.
En cada una de las cadenas E de la subunidad R2 hay un
radical libre de Tyr, que participa en la catlisis, y un centro de hierro dinuclear, constituido por un tomo de oxgeno que forma un puente entre dos iones frricos.
La regulacin se realiza mediante la unin de efectores nuclesido trifosfato a dos clases de sitios reguladores en la subunidad R1. Los sitios de actividad unen ATP o dATP con una
afinidad relativamente baja, mientras que los sitios de especificidad unen ATP, dATP, dGTP o dTTP con una alta afinidad
para todos ellos.

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

Figura 18.12. Esquema de la ribonucletido difosfato reductasa (NDPreductasa).

La unin de ATP a los sitios de actividad tienden a aumentar la eficiencia cataltica de la NDP reductasa para todos los
sustratos; mientras que el dATP acta como inhibidor general
de las cuatro reacciones. La unin de los nucletidos a los sitios de especificidad modula las actividades de la enzima respecto a diferentes sustratos, de manera que se mantiene un
equilibrio en la produccin de los cuatro dNTP. As, por ejemplo, la unin de dTTP (con ATP unido en el sitio de actividad)

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242

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

activa la enzima para la produccin de GDP, pero reduce su capacidad de reducir UDP o CDP (Tabla 18.1).
Tabla 18.1. Regulacin de las actividades de la ribonucletido
reductasa de los mamferos.
Nucletido unido en

Activa la
reduccin de

Inhibe la
reduccin de

Lugar de
actividad

Lugar de
especificidad

ATP

ATP o dATP

CDP, UDP

ATP

dTTP

GDP

CDP, UDP

ATP

dGTP

ADP

CDP, UDP*

dATP

Cualquier efector

ADP, GDP,
CDP, UDP

* la unin de dGTP inhibe la reduccin de los nucletidos de pirimidina por


la enzima de mamferos pero no por la enzima de E. coli.

BIOSNTESIS DE LOS
DESOXIRRIBONUCLETIDOS DE TIMINA

La biosntesis de desoxitimidina trifosfato (dTTP) se produce,


en parte, a partir del
dUDP producido mediante la NDP reductasa, y en parte, a
partir de los nucletidos de desoxicitidina.

La primera reaccin metablica destinada especficamente


a la sntesis de ADN es la formacin de los desoxirribonucletidos difosfato catalizada por la NDP reductasa.
Una vez formados, tres de los difosfatos (dADP, dGDP y
dCDP) se convierten directamente en los correspondientes trifosfatos por accin de la nuclesido difosfatoquinasa.
La biosntesis de desoxitimidina trifosfato (dTTP) se produce, en parte, a partir del dUDP producido mediante la NDP reductasa, y en parte, a partir de los nucletidos de desoxicitidina; la proporcin vara en distintas clulas y organismos.
Las dos rutas de novo conducen a desoxiuridn monofosfato (dUMP), que es el sustrato para la sntesis de nucletidos de
timina:
1) El dUDP se fosforila a dUTP, que se rompe por una difosfohidrolasa muy activa, la dUTPasa.
2) El dCDP se defosforila a dCMP, que sufre entonces una
desaminacin a dUMP por una aminohidrolasa denominada dCMP desaminasa.
Esta ltima reaccin constituye un punto de ramificacin
para la sntesis de los dNTP pirimidnicos; la enzima requiere
dCTP como activador alostrico y se inhibe por dTTP. E. coli y
algunas otras bacterias utilizan una ruta diferente hasta dUMP:
la desaminacin se realiza a nivel del trifosfato por la dCTP desaminasa, y el dUTP resultante se rompe por la dUTPasa a
dUMP y PPi (Fig. 18.13).

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

243

Figura 18.13. Formacin del timidilato (dTMP).

El dUMP acta como sustrato para la formacin de desoxitimina monofosfato (dTMP) catalizada por la timidilato sintasa. Esta enzima transfiere una unidad de un carbono, al nivel de oxidacin de metileno, y lo reduce a nivel de metilo.
El donador del carbono es el N 5, N 10-metilentetrahidrofolato,
que en esta reaccin poco habitual acta tambin como cofactor redox, para dar dihidrofolato, como el otro producto
de la reaccin. El cofactor debe reducirse luego, por la dihidrofolato reductasa, y ha de captar otro grupo metileno, la
mayor parte de las veces a travs de la serina transhidroximetilasa o serina hidroximetil transferasa. La interrupcin de
cualquiera de estos pasos del ciclo interfiere con la formacin de nucletidos de timina. El dTMP, una vez formado, se
convierte en dTTP mediante dos fosforilaciones sucesivas
(Fig. 18.14).

El dUMP acta como


sustrato para la formacin de desoxitimina monofosfato
(dTMP) catalizada
por la timidilato sintasa. El dTMP, una
vez formado se convierte en dTTP mediante dos fosforilaciones sucesivas.

DEGRADACIN DE PURINAS:
SNTESIS DE CIDO RICO
El catabolismo de los nucletidos de purina da lugar a cido rico a travs de las siguientes rutas (Fig. 18.15):
Las rutas especficas utilizadas varan en los diversos organismos y en distintos tejidos del mismo organismo. As, por
ejemplo, el AMP o bien se desamina para producir cido
inosnico (IMP) o se hidroliza para transformarse en adenosina. La desaminacin es activa en el msculo, mientras que la
hidrlisis predomina en la mayor parte de los dems tejidos
animales.
En las rutas de degradacin, la adenosina se desamina por
la adenosina desaminada (ADA) para dar inosina. Sobre la
inosina y la guanosina acta la nuclesido de purina fosforilasa
para formar hipoxantina y guanina, respectivamente.

El catabolismo de los
nucletidos de purina
da lugar a cido rico.

La guanina se desamina a xantina por la


guanina desaminasa.
La hipoxantina se
oxida a xantina, y la
xantina a cido rico,
por accin de la xantina oxidasa.

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244

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 18.14. Transformacin del dUMP en dTMP por la timidilato sintasa


y la dihidrofolato reductasa.

La guanina se desamina a xantina por la guanina desaminasa, una enzima abundante en el cerebro y el hgado de los
mamferos.
La hipoxantina se oxida a xantina, y la xantina a cido rico, por accin de la xantina oxidasa, una flavoenzima que contiene FAD, un tomo de molibdeno y cuatro centros Fe-S. Los
electrones obtenidos de la oxidacin de los sustratos se transfieren a cada uno de estos transportadores, que finalmente reducen el O2 a H2O2, sobre la que acta una catalasa que la des-

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

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Figura 18.15. Degradacin de nucletidos de purina. Formacin de cido rico.

compone en H2O y O2, luego es el oxgeno molecular el aceptor de electrones en esta reaccin.
La forma ceto del cido rico est en equilibrio con la forma enlica, la cual a pH 7 pierde un protn para formar urato. El urato es el producto final de la degradacin de las purinas y se excreta como tal por la orina.

El cido rico es el producto final de excrecin del catabolismo de purinas en los primates, aves, reptiles e insectos. Pero
en muchos otros vertebrados el cido rico se degrada dando
alantoina y finalmente urea.
Una sobreproduccin de cido rico es la causa de la gota
(ver aplicacin clnica). La gota es una enfermedad que afecta
a las articulaciones y a los riones, provocada por una concentracin elevada de cido rico en la sangre y en los tejidos.

La degradacin de
los nucletidos de pirimidina se produce
por diversas rutas,
que conducen a la
produccin de uracilo
y timina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

DEGRADACIN DE PIRIMIDINAS

El uracilo y la timina
continan degradndose mediante reacciones anlogas, aunque los productos finales son diferentes.

Las clulas cancerosas suelen ser ms


sensibles que las clulas normales a inhibidores de la biosntesis de nucletidos.
Existe un gran nmero de agentes quimioterapeticos que actan por inhibicin
de una o ms enzimas de las rutas de
biosntesis de nucletidos.

El recambio de los cidos nucleicos da lugar a la liberacin


de nucletidos de pirimidina y purina. La degradacin de los
nucletidos de pirimidina se produce por diversas rutas (Fig.
18.16-A), que conducen a la produccin de uracilo y timina.
El uracilo y la timina continan degradndose mediante reacciones anlogas, aunque los productos finales son diferentes
(Fig. 18.16-B).
La citosina y el uracilo se degradan finalmente hasta E-alanina, NH4 y CO2. La E-alanina se utiliza en la biosntesis del
coenzima-A.
La degradacin de timina conduce a E-aminoisobutirato,
NH4 y CO2. El E-aminoisobutirato es excretado en la orina humana, y se origina exclusivamente a partir de la degradacin
de timina. Se puede, por tanto, estimar el recambio de ADN o
de los nucletidos de timina midiendo la excrecin de E-aminoisobutirato. Pacientes de cncer sometidos a quimioterapia o
radioterapia, procesos en los que se produce una elevada
muerte celular y se degrada ADN, excretan niveles aumentados
de E-aminoisobutirato.

FRMACOS ANTICANCEROSOS QUE


BLOQUEAN LAS VAS DE BIOSNTESIS DE
NUCLETIDOS
Las clulas cancergenas se multiplican ms rpidamente
que las clulas de los tejidos normales y por ello requieren ma-

Figura 18.16. (A) Rutas catablicas en el metabolismo de los nucletidos de pirimidina.

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

Figura 18.16. (B) Degradacin de pirimidinas. (Continuacin).

yor suministro de nucletidos para la sntesis de ADN y ARN.


Es por ello que las clulas cancerosas suelen ser ms sensibles
que las clulas normales a inhibidores de la biosntesis de nu-

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248

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Enzimas que resultan


tiles para la accin
de agentes farmacolgicos son la timidilato sintasa y la dihidrofolato reductasa.

Analogos estructurales del dihidrofolato,


como el metotrexato
(ameptoterina) y la
aminopterina son potentes inhibidores
competitivos de la dihidrofolato reductasa.

La utilizacin en medicina de los inhibidores de la biosntesis de nucletidos no


se limita al tratamiento del cncer.

cletidos. Existe un gran nmero de agentes quimioterapeticos que actan por inhibicin de una o ms enzimas de las rutas de biosntesis de nucletidos. Estudiaremos algunos ejemplos de estos agentes que representan a la vez una posibilidad
de tratamiento del cncer y una opcin para la mejor comprensin del mecanismo de accin de estas enzimas.
La primera serie de ejemplos se refiere a los compuestos
que inhiben las glutamina amidotransferasas. La glutamina
acta como dador de nitrgeno en distintas reacciones de la
biosntesis de nucletidos. Los centros de unin de la glutamina son parecidos en muchas de estas enzimas, y la mayora resultan fuertemente inhibidas por anlogos de la glutamina como la azaserina y la acivicina. Ambos son ejemplos
de inhibidores suicidas, y parecen ser buenos agentes anticancergenos.
Otras enzimas que resultan tiles para la accin de agentes
farmacolgicos son la timidilato sintasa y la dihidrofolato reductasa (Figs. 18.17-A y 18.17-B). Estas enzimas representan la
nica va celular para la sntesis de timina. Un inhibidor que
acta sobre la timidilato sintasa es el 5-fluorouracilo (5-FU)
(Fig. 18.17-B), un importante agente quimioterpico. En la clula, a travs de las vas de recuperacin, el 5-FU se convierte
en 5-fluorodesoxiuridilato (desoxinuclesido monofosfato)
(F-dUMP). Este anlogo de dUMP inhibe irreversiblemente a la
timidilato sintasa despus de actuar como sustrato normal durante una parte del ciclo cataltico. Durante la catlisis se forma
un complejo covalente entre F-dUMP, metilentetrahidrifolato y
el grupo sulfhidrilo de la enzima, que inhibe la timidilato sintasa. Es un ejemplo de inhibicin suicida, en la que una enzima
transforma un sustrato en inhibidor reactivo, que inmediatamente inactiva su propia actividad cataltica.
La sntesis de dTMP tambin puede bloquearse inhibiendo
la regeneracin del tetrahidrofolato. Analogos estructurales del
dihidrofolato, como el metotrexato (ameptoterina) y la aminopterina son potentes inhibidores competitivos de la dihidrofolato
reductasa (Fig. 18.17-B). El metotrexato es un frmaco valioso
en el tratamiento de muchos tumores de crecimiento rpido, tales como leucemia aguda y coriocarcinoma. Sin embargo, es
muy txico, mata rpidamente clulas en reproduccin, tanto si
son malignas como si no lo son. Las clulas de la mdula sea,
las epiteliales del tubo digestivo y los folculos pilosos son especialmente vulnerables a la accin de este antagonista del folato.
La utilizacin en medicina de los inhibidores de la biosntesis de nucletidos no se limita al tratamiento del cncer. Existen
otro tipo de inhibidores de la hidrofolato reductasa, como por
ejemplo la trimetoprima, que es un anlogo del folato con una

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

Figura 18.17. Sntesis del timidilato y metabolismo del folato como dianas de
accin quimioterpica. FdUMP nucletido derivado del Fluorouracilo.

potente actividad antibacteriana y antiprotista (protozoos fundamentalmente). La combinacin de trimetoprima y sulfametoxazol (inhibidor de la sntesis de folato) se utiliza ampliamente
para tratar procesos infecciosos.

RESUMEN
Las rutas metablicas que conducen a la formacin de
nucletidos son: las vas de novo y las vas de recuperacin. La sntesis de novo de los nucleticos empieza a partir de sus precursores metablicos, aminocidos, ribosa-5fosfato, CO2 y NH3. Las rutas de recuperacin reciclan las

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250

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

bases libres y los nuclesidos liberados a partir de la ruptura de los cidos nucleicos.
El PRPP es un intermedio clave en la sntesis de novo
de los nucletidos purnicos y pirimidnicos. El anillo de
purina se forma a partir de la ribosa-5-fosfato, sobre el que
se genera paso a paso un ncleo purnico, lo que conduce
a la formacin de un nucletido. El de pirimidina se sintetiza como cido ortico unido a ribosa-5-fosfato y se transforma en los nucletidos de pirimidina.
El cido inosnico (IMP) es el primer ribonucletido formado en la ruta de novo, es el precursor comn en la sntesis de los cidos adenlico (AMP) y guanlico (GMP); la
formacin de GMP requiere ATP como fuente de energa,
mientras que la formacin de AMP requiere GTP.
El punto clave en la regulacin de los nucletidos purnicos es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de 5fosforribolsil-1-pirofosfato, reaccin catalizada por la glutamina-PRPP amidotransferasa, que est regulada alostricamente por los productos finales de la ruta, IMP, GMP y
AMP. Tanto el AMP como el GMP son inhibidores de su
propia sntesis.
La sntesis de novo de nucletidos de pirimidina conduce a UMP, se necesita la presencia de carbamoil fosfato,
aspartato y PRPP, tiene lugar de forma distinta a la sntesis
de purinas, el anillo de pirimidina se forma en primer lugar
y a continuacin se engancha la ribosa-5 fosfato procedente del PRPP. El primer paso de la sntesis de pirimidinas es la reaccin entre el carbamoil fosfato y el aspartato
para dar N-carbamoil-aspartato, esta reaccin est catalizada por la aspartato carbamoil transferasa y constituye la
etapa determinante de esta biosntesis. Esta enzima resulta
inhibida por CTP, que es el producto final de esta sucesin
de reacciones.
Los desoxirribonucletidos contienen 2c-desoxirribosa
en vez de ribosa, no se sintetizan a partir de 2c-desoxirribosa, sino de los correspondientes ribonucletidos a travs
de unas reacciones en que el tomo de carbono en posicin 2c de la D-ribosa del ribonucletido se reduce directamente para dar lugar al derivado 2c-desoxi, para ello se
necesitan un par de tomos de hidrgeno que, en ltimo
trmino, proporciona el NADP, pero son transportados a
la NDP-reductasa a travs de un intermedio proteico que
acta como transportador de hidrgenos, la tiorredoxina.
La biosntesis de la desoxitimidina trifosfato (dTTP) se pro-

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

duce, en parte, a partir de dUDP producida mediante la


NDP-reductasa, y en parte a partir de los nucletidos de la
desoxicitidina.
La degradacin de los nucletidos de purina da lugar a
cido rico. Una sobreproduccin de cido rico es la causa de la gota. La gota es una enfermedad que afecta a las
articulaciones y a los riones. La degradacin de los nucletidos de pirimidina se produce por diversas rutas, que
conducen a la formacin de uracilo y timina, los cuales
continan degradndose mediante reacciones anlogas
dando productos finales diferentes.

APLICACIONES CLNICAS
La gota
La hiperuricemia puede producir la gota, que es una enfermedad provocada por una elevada concentracin de cido rico en la sangre y en los tejidos, y que afecta a las articulaciones
y a los riones, sobre todo en los varones. Las articulaciones se
inflaman debido a la precipitacin de cristales de urato sdico
en el lquido sinovial de las mismas, lo que produce dolor y
conduce al desarrollo de artritis. Los riones tambin resultan
afectados ya que los cristales de urato precipitan en los tbulos
renales.
La gota se debe, o bien a una sobreproduccin de nucletidos de purina, que como sabemos da lugar a una sntesis excesiva de cido rico, o bien a un deterioro de la excrecin de
cido rico a travs de los riones como consecuencia de una
enfermedad renal, o incluso por una muerte celular excesiva
que conduce a un incremento de la degradacin de cidos nucleicos, como sucede en los tratamientos de tumores malignos.
La sobreproduccin de cido rico como consecuencia de
un exceso de sntesis de purinas puede producirse por diversas
deficiencias enzimticas como actividad elevada de PRPP sintetasa, prdida de retroinhibicin de PRPP amidotransferasa y
por dficit en la enzima de recuperacin hipoxantina guanina
fosforribosiltransferasa (HGPRT).
En cuanto al desarrollo de la gota por causas no relacionadas con deficiencias enzimticas, puede citarse el deterioro de
la excrecin de cido rico. Un ejemplo es el de los pacientes
que sufren algunas formas de enfermedad de almacenamiento
de glucgeno, los cuales son generalmente gotosos. Una hipoglucemia prolongada produce la acumulacin de cidos org-

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252

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

nicos (lactato y similares), lo cual interfiere con la excrecin tubular del cido rico en el rin.
Tambin la gota es una consecuencia de la quimioterapia y
la radioterapia del cncer, debido a una sobrecarga de purinas
causada por la degradacin de los cidos nucleicos tras la
muerte celular.
La gota puede tratarse de manera eficaz por medio de una
combinacin de terapia nutricional (restriccin de la ingesta de
alimentos ricos en purinas; hgado, productos glandulares, anchoas, vino, etc.) y farmacolgica. Se consigue una mejora importante tras la utilizacin del frmaco alopurinol, un anlogo
de la hipoxantina, que inhibe la xantina oxidasa. Esta inhibicin produce la acumulacin de hipoxantina y xantina, sustancias ms solubles en agua que el cido rico, y por tanto ms
fciles de excretar que dicho cido. Se produce por ello una
mejora de la artritis

Sndrome de Lesch-Nyhan:
deficit grave de HGPRT
La ausencia total de la enzima hipoxantina-guanina fosforribosil transferasa (HGPRT) tiene consecuencias devastadoras
para el ser humano. Este trastorno fue descrito por primera vez
en 1964 por el estudiante de medicina Michael Lesch y su tutor
en la Facultad, William Nyhan.
El sndrome de Lesch-Nyhan es un rasgo ligado al sexo, ya
que el gen estructural de la HGPRT est situado en el cromosoma Y, por lo que la deficiencia prcticamente slo se presenta
en varones. Los pacientes con este trastorno presentan una artritis gotosa grave, pero tambin sufren una disfuncin aguda
del sistema nervioso, que se manifiesta en trastornos de conducta, discapacidad para el aprendizaje y comportamientos
hostiles o agresivos, a menudo contra s mismos. En los casos
en los que la deficiencia de la actividad enzimtica de HGPRT
es casi completa, los pacientes se muerden las puntas de los
dedos o los labios, causndose automutilaciones.
Existen diferentes grados de gravedad en esta enfermedad
debido al gran nmero de mutaciones distintas que afectan al
gen de la HGPRT. La hiperuricemia que se observa en este sndrome como consecuencia de una elevada sntesis de cido
rico es claramente debida a la deficiencia de la enzima
HGPRT, que impide la recuperacin de hipoxantina y guanina,
lo que trae como consecuencia un incremento de los niveles intracelulares de PRPP y la disminucin de IMP o GMP, lo que se
traduce en una mayor sntesis de novo de nucletidos purni-

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METABOLISMO DE LOS NUCLETIDOS: BIOSNTESIS Y DEGRADACIN

cos. Lo que todava est por dilucidar es la causa de los problemas neurolgicos asociados a esta deficiencia enzimtica. Se
piensa en la posibilidad de que los productos de degradacin
de las purinas, hipoxantina, xantina y cido rico, que no son
txicos para el sistema nervioso central de un adulto, s podran
resultar txicos para dicho sistema nervioso en el caso de un
individuo en desarrollo. Otra posibilidad es que el descenso de
la actividad HGPRT junto con un descenso de la actividad IMP
deshidrogenasa condujesen a una cada de los niveles intracelulares de GTP, lo que afectara a la transduccin de seales va
protenas G, a los niveles de tetrahidrobiopterina, necesaria
para la sntesis de neurotransmisores, y a la sntesis proteica.
Todo ello podra tener como resultado los trastornos neurolgicos que acompaan a este sndrome.

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253

TEMA 19

Integracin
del metabolismo
en mamferos

Absorcin, transporte y regulacin. Las bases bioqumicas de la nutricin.

Todas y cada una de las clulas de un organismo llevan una


dotacin gentica completa, sin embargo, slo se expresa una
parte de ella y, por ello, aparecen clulas y tejidos especializados. No obstante los diferentes tejidos y rganos se encuentran
interconectados entre s a travs de sustancias o mensajeros
qumicos que permiten al organismo funcionar como un conjunto coordinado. En los organismos superiores existen cuatro
sistemas de regulacin a diferentes niveles.
Los nutrientes son sustancias qumicas que se encuentran
en los alimentos, muchos pueden ser sintetizados en el organismo, mientras otros no pueden serlo y se denominan esenciales.
Entre estos ltimos se encuentran los oligoelementos y algunos
aminocidos y vitaminas. Los organismos tambin requieren la
oxidacin de los nutrientes para obtener energa para sus funciones vitales. Las necesidades energticas se distribuyen en
tres bloques que juntos representan los requerimientos totales
en condiciones fisiolgicas.

ABSORCIN, TRANSPORTE Y REGULACIN


La absorcin de nutrientes se produce fundamentalmente
en la mitad proximal del intestino delgado, aunque las porciones ms distales tambin son aptas para la absorcin (Fig.
19.1). Los mecanismos implicados en este importante proceso
son difusin pasiva y difusin facilitada, aunque para algunos nutrientes es necesario el transporte activo acoplado al Na
como ocurre p.e. con la glucosa y los aminocidos.
Las grasas se absorben en el intestino delgado previa separacin de las sales biliares que las transportan en el medio

La absorcin de iones
Na+ y Ca2+ por el intestino delgado se
produce por transporte activo. Los iones
K+, Cl y HCO3 por
difusin facilitada.

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256

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 19.1. Mecanismos implicados en la absorcin de nutrientes.

acuoso en forma de micelas. Su difusin se ve facilitada por su


solubilidad en la bicapa lipdica de la membrana del enterocito.
Una pequea proporcin de pptidos se absorben como tales
sin sufrir hidrlisis, y los disacridos son hidrolizados a monosacridos, aunque la digestin se completa por disacaridasas
en el borde en cepillo de los enterocitos. La absorcin del agua
se produce de forma pasiva siguiendo a los solutos a nivel del
intestino delgado. Su procedencia es de origen alimentario
(unos 2 L) y del gran volumen de secreciones digestivas vertidas a la luz de los distintos tramos en los que se produce la digestin (7-10 L). La absorcin de iones se produce por transporte activo para el Na, lo que ocurre fundamentalmente en
intestino delgado. Los iones de potasio, cloruro y bicarbonato
se absorben por difusin en el duodeno y el yeyuno. El cloro
puede intercambiarse de forma activa por in bicarbonato en
el colon, para neutralizar el exceso de cido producido en las
fermentaciones bacterianas. La absorcin de calcio se produce
por transporte activo mediado por la vitamina D, mientras que
el hierro se absorbe tambin a nivel del intestino delgado, pero
slo consume energa su paso desde el enterocito a la sangre,
donde es ligado a la transferrina para su transporte. La vitamina C y el HCl del jugo gstrico facilitan la absorcin intestinal
de hierro al pasar la forma frrica Fe3 a ferrosa Fe2. Las vitaminas liposolubles se absorben como las grasas. La vitamina C
dispone de un transportador especfico y se absorbe en el leon
terminal. Las vitaminas del complejo B, a excepcin de la B12,
se absorben en el intestino delgado mediante cotransporte acoplado al Na. El complejo vitamina B12 factor intrnseco se absorbe a nivel del colon por endocitosis. El trnsito intestinal a
nivel del colon es bastante ms lento que en los tramos prece-

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INTEGRACIN DEL METABOLISMO EN MAMFEROS

dentes del intestino delgado. Aqu se produce la recuperacin


del exceso de agua presente en el quimo, lo que representa
aproximadamente un volumen de 500-1.000 mL. En este segmento del intestino existen diferentes grupos de bacterias intestinales que en conjunto determinan la flora bacteriana intestinal con importantes funciones fisiolgicas, entre otras la produccin de vitamina K y la transformacin final de los cidos
biliares, bilirrubina etc. El uso indiscriminado de los antibiticos
establece autnticos desequilibrios en la flora intestinal con repercusiones clnicas de inters.
En lneas generales el proceso de absorcin se produce en
dos etapas bien diferenciadas, la primera de ellas incluye el
paso de los nutrientes hasta el interior del enterocito, y la segunda que determina su paso desde el enterocito a travs del
espacio intersticial hasta la circulacin sangunea. Esta segunda
etapa es la que puede regularse en relacin con las necesidades
del individuo. Los depositos de sustancias a nivel de las clulas
intestinales pueden perderse al cabo de varios das si no pasan
a la sangre, ya que estas clulas estn sometidas a un proceso
de renovacin cclico, cuya vida media es de unos 4-5 das. La
descamacin de las clulas de pared puede acarrear la perdida
de elementos nutricionales esenciales y, en consecuencia, generar enfermedades carenciales (Fig. 19.2).

Figura 19.2. Lugares de absorcin de los principales nutrientes.

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258

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Las grasas pasan al


sistema linftico primero y despus a la
sangre, salvando el
filtro heptico.

La mayora de los nutrientes absorbidos pasan de la mucosa intestinal a la circulacin sangunea, a travs de la vena porta que los conduce en primer lugar al hgado. El filtro heptico
se constituye como un paso esencial para la transformacin de
la mayora de los nutrientes, transformacin que permite la
adaptacin de los mismos a las necesidades del organismo, y
que inicia un proceso fisiolgico clave para la supervivencia del
organismo, el mantenimiento de la homeostasis. El hgado
es pues un rgano metablico de gran trascendencia, localizado estratgicamente entre el intestino y la circulacin sangunea. No obstante algunos nutrientes, como la mayora de las
grasas, eluden el filtro heptico al pasar del enterocito directamente a la linfa, que finalmente alcanza el torrente circulatorio
a travs del conducto torcico.
Los nutrientes as absorbidos van a ser utilizados por el organismo, sometidos previamente a pequeas o grandes transformaciones metablicas, que van a permitir su utilizacin para
obtener energa, monmeros para la sntesis de molculas propias, o simplemente su almacenamiento.
El metabolismo de los nutrientes es un conjunto de reacciones qumicas ntimamente relacionadas, de forma que cada
una de las vas metablicas est cuidadosamente regulada y todas ellas en conjunto estn ntimamente relacionadas e integradas en el denominado metabolismo corporal.
El metabolismo se ha modificado a lo largo de la evolucin,
de forma que se han ido seleccionando las especies que disponan de la mayor eficacia metablica, al disponer de mecanismos adecuados para sintetizar en cada momento las biomolculas necesarias, tanto desde el punto de vista cualitativo
como cuantitativo, y con el menor coste energtico. El resultado producido es una mayor adaptacin al medio.
Existen distintos niveles de regulacin:
1.
2.
3.
4.

Nivel
Nivel
Nivel
Nivel

somtico.
de rganos.
celular.
molecular.

1. Nivel somtico: En los mamferos, las funciones del


organismo estn reguladas por dos importantes sistemas de comunicacin intercelular o sistemas de control: el sistema nervioso (SN) y el sistema endocrino (SE), y entre ambos existen
importantes interacciones.
En el SN, cada neurona va a transmitir informacin a un
conjunto de neuronas a travs de la sinapsis, liberando un neurotransmisor que causa efectos elctricos inmediatos en la

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INTEGRACIN DEL METABOLISMO EN MAMFEROS

259

membrana post-sinptica. Por su parte, las glndulas del sistema endocrino, van a liberar sustancias muy activas, las hormonas. Estas sustancias de composicin qumica muy variada se
van a distribuir por todo el organismo a travs de la sangre,
produciendo cambios metablicos en las clulas efectoras, las
cuales se sitan lejos del punto de liberacin de la hormona,
siendo sus efectos de lenta aparicin y larga duracin en comparacin con los producidos en la comunicacin sinptica. De
esta forma el sistema endocrino cumple una funcin reguladora e integradora del metabolismo de los diferentes rganos,
modificando armnicamente la velocidad de los procesos en
los diferentes tejidos, para que de su actividad multifuncional
resulte una mejor adaptacin al medio que permita la supervivencia del organismo.
El conocimiento del control que ejerce el Sistema Nervioso
Central (S.N.C.) sobre la secrecin endocrina ha experimentado profundos cambios en los ltimos aos. Todas las hormonas hipofisarias son susceptibles de ser reguladas por el hipotlamo. Esto implica que la actividad de otras estructuras
cerebrales, incluyendo la corteza, pueden modificar el equilibrio endocrino.
Adems y por otra parte los datos publicados acerca de la
importancia de los estmulos psicofisiolgicos sobre la secrecin
hormonal, son an escasos y los conocimientos sobre estos aspectos van avanzando muy lentamente en relacin a los avances sobre la descripcin de importantes vas y conexiones cerebrales. No obstante, el gran impulso actual de la investigacin
sobre la bioqumica y fisiologa de los pptidos ha permitido
clarificar procesos endocrinos poco conocidos, y ha obligado a
replantearnos las bases de la regulacin neuroendocrina.

Las hormonas se sintetizan en un rgano


y ejercen su accin
en otro rgano o tejido diana.

2. Nivel de rganos: La regulacin va a depender tambin de las especializaciones metablicas de algunos rganos.
En los humanos la regulacin metablica vara segn el rgano
del que se trate.
Durante el proceso de diferenciacin se producen cambios
acentuados en la estructura y en la funcin celular, que se
acompaan de marcados cambios en el contenido enzimtico.
Cada clula, a excepcin de las clulas sexuales maduras (haploides) y clulas muy especializadas como los eritrocitos, posee la informacin gentica necesaria para la sntesis de todas
las enzimas presentes en el organismo y con ello la posibilidad
de llevar a cabo las diferentes rutas metablicas, sin embargo,
slo una proporcin de los genes se expresa, y lo hace en forma diferente segn el tipo de clula del que se trate. Esto implica la existencia de mecanismos precisos de control de la ex-

En las clulas somticas slo se expresa


una parte de la informacin gentica que
poseen.

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260

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

presin gnica. El mecanismo de control se encuentra bajo la


influencia de algunas hormonas. As las clulas susceptibles de
estimulacin hormonal son capaces de aumentar notablemente y de forma especifica el contenido celular de ciertas enzimas, recibiendo este fenmeno el nombre de induccin hormonal.
Aunque todas las clulas del organismo humano son capaces de llevar a cabo las rutas principales del metabolismo,
los distintos tejidos y rganos muestran caractersticas metablicas relativas a su grado de especializacin que les hace
muy eficaces.
La presencia de diferentes compartimentos en la clula eucaritica es otra forma
de regulacin.

La compartimentacin celular permite


que rutas inversas,
como gluclisis y gluconeogenesis, acten
simultneamente.

La regulacin enzimtica se realiza a


nivel de actividad y a
nivel de sntesis.

3. Nivel celular: La presencia de compartimentos en la


clula eucaritica permite la realizacin de diferentes rutas metablicas en los diferentes compartimentos. A modo de ejemplo, la gliclisis anaerobia, la va de las pentosas fosfato y la
sntesis de cidos grasos tienen lugar en el citoplasma celular,
mientras que la oxidacin de los cidos grasos, el ciclo de los
cidos tricarboxlicos y la fosforilacin oxidatva se llevan a
cabo en la mitocondria. Sin embargo, otros procesos, como
ocurre con la gluconeognesis, se van a llevar a cabo en ambos
compartimentos. De esta forma, el destino final de una biomolcula va a depender de dnde est ubicada, es decir, si se
encuentra en el citoplasma celular o en la matriz mitocondrial.
En efecto, los cidos grasos que se encuentren en el interior de
la mitocondria sern degradados rpidamente, mientras que
los que se encuentren en el citoplasma sern esterificados. De
esta forma, la compartimentacin celular produce un ahorro
energtico importante en lo que se refiere a la sntesis proteica.
As, un conjunto de enzimas podr ser utilizado en diferentes
procesos metablicos al situarse en diferentes compartimentos
celulares, dando lugar a productos finales diferentes segn el
compartimento considerado. Para lograrlo, los procesos metablicos tendrn una regulacin diferente, salvando de esta
forma el inconveniente que supondra la activacin o la inhibicin simultaneas.
4. Nivel molecular: Las molculas susceptibles de regulacin son las enzimas. La regulacin a este nivel va a ser ejercida por interacciones alostricas y modificaciones covalentes.
La concentracin de enzimas disponible por las clulas en un
momento determinado depende de la velocidad con que son
sintetizadas, pudiendo ser modificada por mecanismos de induccin y/o represin.
Todo el laborioso proceso de regulacin e integracin del
metabolismo carece de sentido sino existe un aporte de nu-

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INTEGRACIN DEL METABOLISMO EN MAMFEROS

trientes adecuado a las necesidades del organismo. Es preciso


por lo tanto introducir los aspectos bioqumicos de la nutricin.

BASES BIOQUMICAS DE LA NUTRICIN


El organismo humano precisa el aporte de alimentos desde
el nacimiento para su crecimiento, desarrollo y mantenimiento
de las funciones corporales y mentales, lo que requiere a su vez
el control de la homeostasia o mantenimiento de las condiciones vitales del medio interno.
La ingesta nutricional de un individuo debe aportar los elementos necesarios para un adecuado balance calrico, proteico, hdrico, mineral y vitamnico.
Los alimentos cumplen tres funciones bsicas:
1. Aporte de la energa necesaria, proporcionando los sustratos oxidables.
2. Formacin y mantenimiento de la estructura corporal,
aportando los monmeros necesarios para la sntesis de
molculas propias.
3. Regulacin de la actividad metablica, aportando los
elementos necesarios para la catlisis enzimtica.
Un mismo alimento puede cumplir las tres, dos o slo una
de dichas funciones, por lo que se aconseja el consumo variado de alimentos y en las cantidades adecuadas segn su composicin, para hacer frente a las demandas individuales, las
cuales varan con la edad, sexo, peso, talla, nivel de actividad
fsica, circunstancias personales como embarazo y lactancia, as
como circunstancias medioambientales como humedad, temperatura, altitud, etc.
Composicin qumica de los alimentos: Desde un
punto de vista nutricional los alimentos contienen una serie de
elementos nutritivos o nutrientes, que son utilizados por el organismo para sus procesos vitales. Incluyen los azucares, lpidos, protenas, agua, vitaminas y minerales. Slo los tres primeros aportan la energa qumica necesaria para los distintos
tipos de trabajo celular, mientras que todos ellos contribuyen a
la formacin y renovacin de las estructuras corporales y a la
regulacin de la compleja actividad metablica que tiene lugar
en todas las clulas del organismo.
Las vitaminas y minerales se requieren en cantidades muy
pequeas, por lo que se denominan micronutrientes en contraposicin a los dems elementos que se requieren en cantidades
muy superiores y que se denominan macronutrientes.

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262

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los nutrientes pueden ser de dos clases:


esenciales y no esenciales. Los esenciales
no son sintetizados
por el organismo y su
falta en la dieta puede originar carencias
o deficiencias.

Aunque todos los nutrientes deben ser aportados en una


alimentacin equilibrada, es preciso distinguir entre elementos
esenciales y no esenciales. Son nutrientes esenciales aquellos
que necesariamente hay que ingerir para no generar carencias,
ya que no pueden sintetizarse en el organismo. Se consideran
no esenciales aquellos nutrientes que pueden sintetizarse de
forma endgena.
Los requerimientos energticos constituyen uno de los
objetivos de la nutricin con el fin de proporcionar energa al
organismo para su actividad vital. Para ello se requiere la oxidacin de los nutrientes por parte de las clulas (Fig. 19.3).

Figura 19.3. Esquema general de las vas catablicas de


los nutrientes de la dieta.

El valor calrico de los nutrientes y de los alimentos que los


aportan se expresa en kilocaloras (kcal). Una kcal es la cantidad de calor necesaria para aumentar en un grado centgrado
la temperatura de un kg de agua que est a 14,5 C. Actualmente tambin se emplea el kilojulio, que es una unidad de trabajo (1 kcal 4,18 kJul).
El valor energtico de los componentes de la dieta se determina midiendo la energa liberada tras la combustin completa
de los mismos en presencia de oxgeno y en una bomba calorimtrica. Con este procedimiento se demuestra que todos los
nutrientes no poseen el mismo valor energtico, as:
1 g de azucares proporciona 4 kcal, 1 g de grasas 9 kcal y
1 g de protenas 5,3 kcal, de las que slo se aprovechan 4 por

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INTEGRACIN DEL METABOLISMO EN MAMFEROS

263

el organismo, ya que durante el metabolismo se produce urea


que an conserva cierto contenido energtico, adems de por
el efecto trmico de las protenas, que es bastante elevado.
Tambin se puede determinar el gasto energtico de una persona por calorimetra directa midiendo en una cmara aislada el
calor generado por el organismo, o bien calculando el calor
producido a partir del oxigeno consumido y del anhdrido
carbnico producido, esto es por calorimetra indirecta.
Las necesidades diarias de energa del organismo se distribuyen en tres grandes bloques, cuya suma representa los requerimientos totales en condiciones fisiolgicas:
a) Metabolismo basal.
b) Actividad fsica.
c) Accin dinamico-especfica de los alimentos.
Metabolismo basal (MB) es la energa que necesita el organismo para mantener las funciones vitales en condiciones de
reposo fsico y mental y en ayunas, en un medio de temperatura confortable. Se calcula a partir del oxgeno consumido, considerando que un litro de oxgeno equivale a 4.825 kcal por metro cuadrado de superficie corporal y por hora. En la clnica se
suele utilizar la variacin en porcentaje sobre un valor medio de
referencia. Las variaciones entre 15 y 15 se consideran normales para un valor estndar de 40 kcal/m2 h, calculado como
promedio para varones jvenes. El MB vara con la edad, sexo,
equilibrio hormonal, etc., por ser factores que inciden en la
composicin corporal individual, alcanzando los valores mximos en perodos de crecimiento. Aumentan el metabolismo basal las dietas hipercalricas e hiperproteicas, el hipertiroidismo,
la acromegalia, el S. de Cushing, la fiebre, los frmacos como la
adrenalina, la cafena, las anfetaminas y la hormona del crecimiento. Disminuyen el MB la desnutricin, el hipotiroidismo, la
insuficiencia hipofisaria, el E. de Addison y ciertos frmacos
(hipnticos, anestsicos, hipotiroideos y sedantes).

Metabolismo basal es
la energa utilizada
por el organismo en
unas condiciones determinadas.

Actividad fsica: El gasto energtico que genera la actividad fsica, para un mismo individuo, es variable y puede controlarse voluntariamente, a diferencia de lo que ocurre con la
energa del MB. Existen numerosos clculos generalmente
aceptados que tratan de orientar acerca de las necesidades de
energa para los distintos tipos de trabajo fsico en adultos normales de ambos sexos. De forma sencilla se resumen los distintos tipos de trabajo fsico en tres grupos, teniendo en cuenta las
necesidades de energa (kcal) con relacin al peso corporal (kg)
y tiempo de duracin del trabajo (horas):

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264

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Trabajo ligero (oficina, comercio,


estudiantes):
3,24 kcal/kg/hora.
Trabajo moderado (agricultura,
industria ligera):
5,70 kcal/kg/hora.
Trabajo pesado (leador, metalrgico,
atleta):
8,04 kcal/kg/hora.
De los 20 aminocidos proticos nueve
son esenciales, y deben ser propocionados por la dieta.

Adems del tiempo empleado en la actividad laboral, es


preciso contabilizar el tiempo dedicado a aquellas actividades
de ocio y tiempo libre que implican tambin un extra de
energa y que, del mismo modo, han sido calculadas y recogidas en tablas para su conocimiento y control.
En valores medios, las mujeres presentan una menor demanda de energa que los hombres debido a su composicin
corporal y, en lneas generales, a una menor tasa de trabajo fsico, que suele ser menos intenso que el del varn con todas
las reservas que suponen las excepciones. El gasto energtico
medio para mujeres adultas sanas es de 2.000-2.300 kcal, de
las cuales unas 1.200 se requieren para el metabolismo basal y
el resto para el trabajo fsico. En el hombre las necesidades medias de energa se calculan en torno a 2.100-2.400, siendo la
mitad aproximadamente para el MB y la otra mitad para el trabajo fsico.
Accin dinamico-especfica de los alimentos, tambin
denominada termognesis inducida por la dieta, incluye las
necesidades de energa planteadas por la ingesta, digestin, absorcin y metabolismo de los alimentos. Este efecto se encuentra corregido en los clculos dietticos normales por lo que no
es necesario tenerlos en cuenta a la hora de calcular las necesidades de energa individuales.
Adems de los requerimientos energticos diarios, el organismo necesita un aporte mnimo de protenas para mantener
el balance nitrogenado. Este concepto se basa en la idea de
que las protenas son los nicos macronutrientes que poseen
nitrgeno en su estructura y por lo tanto es posible establecer el
balance entre el aporte y la eliminacin de nitrgeno, el cual
ser positivo cuando la ingesta supere la eliminacin y negativo
cuando las prdidas superen la ingesta, siendo deseable un balance cero, es decir, que la ingesta y las prdidas estn en equilibrio. Los requerimientos de protenas obedecen fundamentalmente a la necesidad de aminocidos para la sntesis proteica,
por lo que es fcilmente comprensible que en determinadas
etapas del crecimiento y desarrollo (infancia, adolescencia, embarazo, lactancia), la demanda de los mismos est aumentada,
mientras que en los adultos que ya han completado las etapas

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de crecimiento, las necesidades de mantenimiento y renovacin van a ser menores. A este respecto es preciso recordar que
aproximadamente el 50% de los aminocidos proteicos son
esenciales, por lo que en caso de suministrar protenas que no
los aporten en cantidad suficiente, ser preciso suplementarlas
adecuadamente. Tambin es importante considerar que las
protenas pueden ser utilizadas para abastecer las necesidades
de energa en ausencia de otros sustratos energticos, por lo
que la funcin plstica en estos casos aumenta los requerimientos proteicos.
Para poder establecer un aporte nutricional equilibrado que
no genere ni carencias ni excedentes y que contemple los requerimientos individuales para los distintos nutrientes, es preciso tener en cuenta a modo de conclusin general lo siguiente:
Determinar el aporte energtico diario, lo que puede hacerse de forma sencilla calculando el MB y el tipo de actividad laboral y de ocio que el sujeto lleva a cabo a lo largo del da.
Una vez establecidas las Kcal/da, se distribuyen entre los
macronutrientes, teniendo en cuenta las necesidades proteicas
para mantener el balance nitrogenado. Aunque en nuestro
pas no se han establecido objetivos nutricionales, se recogen
los porcentajes que en opinin de los expertos estn ampliamente aceptados, as:
azcares ............................ 57%
grasas ............................... 30%
protenas ........................... 13% (Fig. 19.4)

Figura 19.4. Porcentaje de aporte de kcal por las distintas biomolculas.

Los azcares deben aportar la mayor parte de la energa en


cualquier tipo de dieta, administrados mayoritariamente en forma de almidones, y pequeas cantidades en forma de azucares
sencillos de absorcin rpida. El aporte de fibra debe asegurarse a travs del consumo de pan integral y legumbres, as como
de frutas y verduras crudas, que tambin van a aportar vitaminas y minerales esenciales y por tanto su consumo resulta imprescindible en una alimentacin equilibrada.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Del 30% de grasas debe reservarse un 14-15% para el cido monoinsaturado oleico y slo un 7-8% para los cidos grasos poliinsaturados y grasas saturadas respectivamente. La ingesta de colesterol debe reducirse por debajo de los 300 mg.
La ingesta de protenas para hacer frente al balance nitrogenado, supone alrededor del 14% de las necesidades totales
de energa, la mitad de las cuales deben aportarse como alimentos de origen animal y la otra mitad de origen vegetal, debiendo reducirse de forma especial el consumo de carnes rojas
y huevos.
Existen mltiples combinaciones para satisfacer estas necesidades y numerosas tablas sobre la composicin de los alimentos que recogen adems las necesidades mnimas diarias de estos nutrientes y los alimentos que los contienen. Una recomendacin general, respetando la distribucin porcentual descrita,
sera la de consumir alimentos variados, e incluir de manera
abundante alimentos crudos del grupo de las frutas y verduras,
ya que la coccin destruye muchas vitaminas.

RESUMEN
La absorcin de nutrientes se produce fundamentalmente en la mitad proximal del intestino delgado, aunque
en tramos inferiores tambin se produce absorcin, fundamentalmente de iones y del excedente de agua presente
en el quimo. La mayora de los nutrientes absorbidos pasan de la mucosa intestinal por la vena porta hasta el hgado, donde son inicialmente transformados segn las necesidades del organismo. Los lpidos sin embargo eluden
mayoritariamente el filtro heptico, alcanzando la circulacin sangunea a travs de la linfa.
Los nutrientes absorbidos son utilizados por los tejidos
para la obtencin de energa, la sntesis de molculas propias o para su almacenamiento y posterior utilizacin. Todos los procesos metablicos estn ntimamente relacionados, integrados y cuidadosamente regulados a diferentes
niveles. El sistema endocrino a travs de la secrecin hormonal controla el metabolismo celular especializado segn
el tipo de tejido, rgano, y hasta compartimento celular
donde tienen lugar las reacciones qumicas, controlando
fundamentalmente la sntesis de determinadas enzimas
que juegan un papel clave en la produccin de las diferentes vas metablicas.

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APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Hirschsprung
Se trata de un trastorno congnito que se manifiesta en la
lactancia. Cursa con distensin abdominal, ausencia de movimientos intestinales y alteraciones nutricionales como consecuencia de la obstruccin crnica del colon. La ampolla rectal
se presenta vaca a la exploracin, siendo normal el esfnter del
ano. La informacin que se obtiene tras la exploracin con
enema opaco, pone de manifiesto un segmento estrechado,
normalmente a nivel de recto o sigma, con dilatacin por encima del mismo. El tratamiento para restaurar la defecacin normal debe ser quirrgico.

Abetalipoproteinemia
La enfermedad, de carcter autosmico recesiva, se caracteriza por la falta de sntesis de apoprotena B, necesaria para
la formacin de quilomicrones VLDL y LDL, que se presentan muy disminuidas en el plasma. Los triglicridos exgenos
se acumulan en las clulas intestinales epiteliales al no poder
pasar a la linfa, lo que provoca un cuadro de mala absorcin
exclusiva de las grasas, con el consiguiente dficit en el desarrollo del paciente. Se manifiesta en el primer ao de vida
con una clnica de diarreas, distensin abdominal, anorexia y
desarrollo anormal. Ms tarde se presentan alteraciones neurolgicas con ataxia y en la adolescencia suele aparecer retinitis pigmentaria. La clnica responde a alteraciones en las
membranas celulares por hipo y dislipemia. El anlisis bioqumico muestra niveles reducidos de colesterol y triglicridos.
La biopsia intestinal confirma el depsito de lpidos en los enterocitos. El tratamiento consiste en reducir las grasas de la
dieta, aportando triglicridos de mediana cadena y vitaminas
liposolubles.

Obesidad infantil
El progresivo aumento de la obesidad infantil es actualmente uno de los problemas ms importantes de salud pblica. La inactividad creciente y el consumo excesivo de alimentos de naturaleza grasa son las principales causas. La intervencin en estos nios debe hacerse lo ms pronto posible y
deben tenerse presentes las necesidades nutricionales que im-

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

plica el propio proceso de crecimiento y desarrollo a estas


edades. El xito del tratamiento rdica en la educacin y compromiso de la familia en la modificacin de los hbitos nutricionales y de ejercicio.

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TEMA 20

Caractersticas
metablicas de los
principales rganos

Hgado. Cerebro. Corazn. Rin. Msculo esqueltico.

Todas las clulas del cuerpo humano son capaces de llevar a


cabo las rutas principales del metabolismo, si bien los distintos tejidos y rganos estn especializados en determinadas funciones,
participando de esta forma en un reparto del trabajo metablico,
cuya finalidad es mantener la mxima economa y regulacin.
Una caracterstica esencial de los organismos pluricelulares
es la diferenciacin celular que les proporciona estructuras propias, con una actividad metablica singular. No obstante todas
las clulas del cuerpo humano son capaces de llevar a cabo las
rutas principales del metabolismo, si bien, y como resultado de
la diferenciacin, los distintos tejidos y rganos estn especializados en determinadas funciones y presentan requerimientos
energticos y patrones metablicos caractersticos. La especializacin, por tanto, confiere a las clulas diferencias en su capacidad metablica que constituyen un aspecto esencial de la regulacin metablica de los diferentes rganos en el hombre. Estas
diferencias permiten una cooperacin entre tejidos y rganos
participando de esta forma en el reparto del trabajo metablico, que a su vez exige la existencia de mecanismos de comunicacin intercelular, los cuales, a travs de mensajeros qumicos
que interaccionan con receptores celulares adecuados, modifican e integran el funcionamiento metablico cuya finalidad es
la de conseguir la mxima eficacia y economa. En el presente
tema se describen brevemente las caractersticas metablicas
principales de los tejidos y rganos.

HGADO
Una vez absorbidos del tracto intestinal, los diferentes nutrientes son conducidos hasta las clulas hepticas. En el hga-

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270

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El hgado desempea
muchas funciones vitales, desde sintetizar
protenas, regular la
produccin de compuestos y transformar
o eliminar sustancias
txicas.

do, los azcares, aminocidos y lpidos sern sometidos a diferentes procesos para ser posteriormente distribuidos a travs de
la sangre a los diferentes rganos.

El hgado tiene un
papel central debido
al procesamiento y
distribucin de sustancias, y es por ello
que los dems rganos y tejidos se refieren como extrahepticos o perifricos.

1. Parte de esta biomolcula puede ser desfosforilada por


medio de la enzima glucosa 6-fosfatasa, y la glucosa libre resultante pasar a la circulacin perifrica manteniendo as la normoglucemia, cuyos niveles resultan del
equilibrio entre el consumo de glucosa por los diferentes
rganos y su produccin por el hgado. De esta manera,
el hgado es el principal responsable del mantenimiento
de un nivel constante de glucosa en sangre.
2. Otra fraccin ser degradada mediante gliclisis anaerobia, ciclo de los cidos tricarboxlicos y fosforilacin oxidativa, proporcionando energa a la clula heptica.
3. Otra parte ser utilizada para la obtencin de equivalentes de reduccin (NADPH) por medio de la va de las
pentosas fosfato.
4. Otra fraccin se transformar, en caso de no existir necesidades energticas, en glucgeno, polisacrido de reserva, mediante la accin cataltica de la glucgeno-sintetasa.
5. Finalmente y cuando exista excedente de glucosa-6-fosfato, sta ser inicialmente degradada hasta acetil-CoA y
posteriormente, a partir de este metabolito intermediario, sern sintetizados cidos grasos para su almacenamiento en el tejido celular subcutneo o en la cavidad
abdominal previo transporte.

Azcares: La mezcla de azcares libres que llegan al hgado van a ser transformados en glucosa 6-fosfato. Tal es el caso
de las hexosas fructosa, manosa y galactosa. La glucosa 6-fosfato puede seguir, al menos, cinco destinos metablicos:

Lpidos: La grasa en forma de quilomicrones pasa desde


los enterocitos a la linfa para ser vertida en el torrente circulatorio. Una parte de los lpidos que alcanzan el hgado van a ser
utilizados:
1. En la sntesis de lipoprotenas, que viajarn por la sangre
hasta los tejidos perifricos.
2. Una parte de los triglicridos ser degradada hasta cidos grasos, los cuales unidos a la albmina plasmtica
sern transportados mayoritariamente hasta el corazn y
msculo esqueltico para su utilizacin.
3. Otra parte de los cidos grasos producidos en el hgado
sern oxidados aerbicamente para la obtencin de
energa en el hepatocito.

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CARACTERSTICAS METABLICAS DE LOS PRINCIPALES RGANOS

4. Una pequea parte del acetil CoA formado en la degradacin de los cidos grasos va a rendir cuerpos cetnicos: cido acetoactico y cido beta-hidroxibutrico. Estos cidos pasarn desde la clula heptica a la circulacin para alcanzar los tejidos perifricos, donde sern
oxidados a travs del ciclo del cido ctrico.
5. Finalmente otra fraccin del acetil CoA, que se obtiene
de la degradacin de los cidos grasos en la clula heptica, ser utilizada en la sntesis de colesterol, precursor
de otros esteroides.
Aminocidos: Tras su absorcin en el tracto intestinal, los
aminocidos alcanzan el hgado, donde van a ser utilizados con
diferentes fines:
1. Parte de los mismos abandonarn la clula heptica alcanzando otros rganos a travs de la circulacin perifrica. Una vez en ellos sern utilizados en la sntesis de
nuevas protenas.
2. Otra fraccin ser utilizada por el propio hgado para la
sntesis de protenas intrnsecas y extrnsecas, que abandonarn la clula heptica para formar parte de las protenas plasmticas.
3. El exceso de aminocidos, si lo hubiere, podr ser utilizado en la produccin de glucosa mediante la gluconeognesis, si se trata de aminocios glucognicos o
mixtos. Cuando las necesidades energticas estn cubiertas, la glucosa sintetizada de esta forma se emplea
en la sntesis de glucgeno heptico para su almacenamiento. Otros aminocidos, fundamentalmente los cetognicos, sern transformados en acetil CoA, que

Figura 20.1. Destinos metablicos del piruvato.

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271

272

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

podr ser degradado a travs del ciclo de los cidos tricarboxlicos y la fosforilacin oxidativa rindiendo CO2,
H2O y ATP. El acetil CoA tambin podr ser utilizado
como precursor en la biosntesis de lpidos. Estos diferentes fines dependen de las necesidades energticas
del organismo en cada momento. El amoniaco liberado
en la degradacin de los aminocidos podr ser reutilizado en procesos de biosntesis de molculas nitrogenadas o bien ser eliminado como urea a travs del
proceso de urognesis. Algunos de los aminocidos
pueden transformarse en el propio hgado en otras biomolculas tales como porfirinas.

CEREBRO

En el ayuno prolongado el cerebro consume 2/3 de la glucosa


que produce el hgado.

El combustible preferente de las clulas nerviosas es la glucosa. El cerebro posee un metabolismo aerobio muy activo, de
tal forma que una persona adulta normal utiliza en estado de
reposo alrededor del 20% del consumo total de oxgeno. Las
neuronas apenas almacena glucgeno, lo que las hace dependientes casi segundo a segundo de la glucosa que reciben desde el torrente circulatorio. Esta glucosa procede del hgado. En
el ayuno prolongado el cerebro consume 2/3 de la glucosa que
el hgado produce, alcanzando este consumo 100 g de glucosa
al da. Si el nivel de glucosa desciende por debajo de un nivel
crtico, aun siendo este descenso poco duradero, pueden aparecer sntomas de alteraciones cerebrales que resulten graves e
incluso lleguen a ser en ocasiones irreversibles. La glucosa es
utilizada por el cerebro de forma aerbica. El ATP producido
va a ser utilizado para generar impulsos nerviosos y para la sntesis de protenas, ambos procesos son frecuentes en este rgano. El cerebro posee una concentracin muy elevada de aminocidos, algunos de los cuales son sintetizados in situ. Son especialmente abundantes el cido glutmico, la glutamina, el
cido asprtico, la glicina y el cido aminobutrico, utilizados
como neurotransmisores en la sinpsis qumica. El cerebro no
tiene capacidad para metabolizar los cidos grasos libres, sin
embargo en periodos de inanicin en los que escasea la glucosa, puede metabolizar cuerpos cetnicos y ms concretamente
cido E-hidroxibutrico. Este cido se va a producir a nivel
heptico cuando exista degradacin masiva de cidos grasos libres procedentes de la movilizacin de las reservas de triglicridos del tejido adiposo. El cido E-hidroxibutrico se oxida en
las clulas nerviosas a travs del ciclo de Krebs y posterior fosforilacin oxidativa.

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CARACTERSTICAS METABLICAS DE LOS PRINCIPALES RGANOS

273

CORAZN
El msculo cardaco presenta una intensa actividad metablica de forma permanente, la cual es de tipo aerobio. El combustible que utiliza la clula cardaca puede ser glucosa, cidos
grasos libres y cuerpos cetnicos. Todos ellos van a ser oxidados a travs del ciclo de Krebs y de la fosforilacin oxidativa.
Debido a la permanente exigencia metablica por parte del corazn, las clulas cardacas contienen un gran nmero de mitocondrias. La clula muscular miocrdica puede almacenar pequeas cantidades de fosfato de creatina, aunque no almacena
glucgeno y tampoco grasa.

El corazn tiene una


intensa actividad metablica y sus combustibles son la glucosa, los cidos grasos y los cuerpos
cetnicos.

RIN
Este rgano posee un metabolismo aerobio muy activo y
dispone de una importante flexibilidad metablica, pudiendo
utilizar como combustible: glucosa, cidos grasos, cuerpos cetnicos y aminocidos. Todos ellos van a ser degradados por el
ciclo de los cidos tricarboxlicos y fosforilacin oxidativa para
la obtencin de energa. La mayor parte de la misma ser utilizada en la produccin de orina. Efectivamente, ms de las 3/4
partes del ATP generado por el metabolismo aerobio renal
sern utilizadas para la formacin de orina, mediante la accin
de mecanismos de transporte activo (Fig. 20.2).

El rin posee un metabolismo aerobio


muy activo, pudiendo
emplear como combustible: glucosa,
cidos grasos, cuerpos cetnicos y aminocidos.

Figura 20.2. Interrelaciones metablicas durante el ayuno.

MSCULO ESQUELTICO
En condiciones de reposo el tejido muscular representa ms
del 50% de la capacidad metablica del cuerpo humano. Dicha

Los msculos almacenan cantidades importantes de fosfato


de creatina.

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274

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El tejido muscular almacena grandes cantidades de fosfato de


creatina, una sustancia de alto contenido
energtico.

proporcin aumenta considerablemente durante el desempeo


de actividad fsica intensa. El metabolismo de la fibra muscular
esqueltica se ha especializado en la produccin de ATP, para
satisfacer las demandas de energa durante la contraccin muscular. El msculo esqueltico puede emplear como combustible: glucosa, cidos grasos libres y cuerpos cetnicos. Durante
el reposo, el combustible preferente son los cidos grasos y en
menor proporcin los cuerpos cetnicos, ambos son transformados en acetil-CoA ingresando as en el ciclo del cido ctrico
donde sern totalmente degradados. Cuando el msculo
equeltico se contrae activamente, como p.e durante una carrera veloz (100 m), la cooperacin entre los distintos rganos
del cuerpo es muy limitada. De esta forma el msculo depende
de sus propias reservas de glucgeno, ATP preformado y fosfocreatina. La glucosa ser degradada hasta piruvato mediante
gliclisis anaerobia. Una pequea parte del piruvato producido
(dependiendo del grado de oxigenacin del msculo que se
contrae) se transformar en acetil-CoA, siendo utilizado para la
obtencin de energa a travs del ciclo de Krebs y fosforilacin
oxidativa, anque la mayor parte del cido pirvico producido
rendir acido lctico en los msculos que se contraen con gran
intensidad. Posteriormente y en situacin de reposo o tras la
disminucin de la intensidad del esfuerzo, el cido lctico producido difundir al torrente circulatorio para alcanzar el hgado,
donde a travs de la gluconeognesis rendir de nuevo glucosa
que ser recirculada hasta el msculo. Este ciclo se denomina
ciclo de Cori, cuyas relaciones se muestran en la figura 20.3.
El nivel de cido lctico alcanzado est directamente relacionado con la intensidad y duracin del ejercicio fsico, as
como con el grado de entrenamiento previo. El msculo esqueltico contiene una cantidad variable de glucgeno que depende del grado de entrenamiento previo y de la dieta seguida,
sobre todo cuando sta es rica en azcares. La cantidad de
glucgeno muscular es menor que la de glucgeno heptico
proporcionalmente, si bien el glucgeno muscular se emplea
slo para proporcionar energa al msculo que se contrae de
forma rpida e intensa. Esta utilizacin exclusiva es debida a
que la clula muscular a diferencia de la heptica no contiene
glucosa-6-fosfatasa, lo que significa que el glucgeno muscular
no puede ser transformado en glucosa libre, no contribuyendo
por tanto al mantenimiento de la glucemia.
Los msculos almacenan tambin cantidades importantes
de fosfato de creatina. Esta biomolcula acta como un importante tampn del nivel de ATP muscular, si bien las concentraciones de ATP-preformado junto con las de fosfato de creatina
slo pueden mantener la contraccin muscular durante unos

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CARACTERSTICAS METABLICAS DE LOS PRINCIPALES RGANOS

Figura 20.3. El ciclo de Cori.

pocos segundos, marcando el inicio de las contracciones que se


producen de manera rpida e intensa.
Por otra parte, durante el ejercicio aerbico prolongado,
como p.e. una carrera de maratn, el cuerpo no dispone de un
almacen suficiente de glucgeno para proporcionar la energa
necesaria para este tipo de esfuerzo. Se sabe que el cociente
respiratorio (proporcin entre CO2 exalado y O2 consumido)
muestra una disminucin durante ejercicios fsicos prolongados. Esto indica que, durante la actividad fsica sostenida, existe un relevo progresivo de la utilizacin de glucosa hacia la utilizacin de cidos grasos libres. La lipolsis va aumentando a
medida que las reservas de glucosa disminuyen, hasta que probablemente se produce un descenso de la glucemia, a partir
del cual el msculo oxida cidos grasos libres preferentemente,
situacin similar a la que se observa en el estado de ayuno,
aunque en esta ultima situacin la concentracin de cuerpos
cetnicos en sangre aumenta considerablemente en contraposicin a lo que ocurre durante el ejercicio fsico sostenido, lo que
podra reflejar un equilibrio entre la produccin heptica y el
consumo muscular de cuerpos cetnicos.

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276

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

RESUMEN
Una caracterstica esencial de los organismos pluricelulares consiste en el reparto del trabajo metablico entre los
distintos rganos y tejidos, lo que les confiere un relativo
grado de especializacin. De esta forma el hgado desempea un papel central en lo que se refiere al procesamiento y distribucin de los nutrientes. Por su parte el cerebro
utiliza como sustrato preferente glucosa, pudiendo metabolizar en situaciones fisiopatolgicas cuerpos cetnicos.
La energa que obtiene en forma de ATP la emplea en generar y transmitir impulsos nerviosos. El msculo cardaco
presenta un metabolismo aerbico en todo momento,
igual que el observado para el rin. ste a su vez exhibe
una importante flexibilidad metablica al servicio de la formacin de orina fundamentalmente. Por ltimo el msculo
esqueltico est especializado en producir ATP para la
contraccin muscular, pudiendo ser su metabolismo aerobio y/o anaerobio, dependiendo de la duracin, intensidad
y grado de entrenamiento previo. De todo ello se desprende que el cerebro, corazn, rin y msculo esqueltico
poseen esquemas metablicos caractersticos y estn interrelacionados metablicamente con el hgado.

APLICACIONES CLNICAS
Adaptaciones metablicas al ayuno
Las reservas de glucosa en forma de glucgeno heptico y
muscular comienzan a disminuir a las 24 horas de no ingerir
alimento. Esta situacin provoca un descenso en la secrecin
de insulina concomitante a un aumento en la secrecin de glucagn. De esta forma las reservas grasas son movilizadas para
proporcionar energa al hgado y al msculo. Debido a la falta
de glucosa, la clula heptica degrada aquellas protenas que
presentan menor utilidad. Tras la hidrlisis proteica, se utilizan
los aminocidos glucognicos y mixtos para la sntesis de glucosa a travs de la gluconeognesis. La glucosa obtenida de
novo es utilizada preferentemente por las neuronas. Por otra
parte, el agotamiento de los intermediarios metablicos del ciclo de Krebs que se utilizan en la produccin de glucosa, provoca la falta de degradacin del acetil-CoA, metabolito que
procede de la E-oxidacin de los cidos grasos. El incremento

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CARACTERSTICAS METABLICAS DE LOS PRINCIPALES RGANOS

en la concentracin de acetil-CoA en la clula heptica fuerza


la sntesis de cuerpos cetnicos que son exportados a la sangre
y utilizados como combustible por el msculo cardaco, cerebro
y dems tejidos perifricos. La degradacin de las reservas grasas en un adulto normal puede proveer de energa durante un
periodo de tiempo aproximado de unos tres meses. Cuando las
reservas grasas se agotan se produce la degradacin de protenas esenciales, lo que provoca la disfuncionalidad de corazn e
hgado y conduce finalmente a la muerte.

Diabetes Mellitus
Se trata de un sndrome crnico multifactorial, cuya principal manifestacin es la hiperglucemia, la cual es responsable de
la sintomatologa y de las complicaciones agudas y a largo plazo que durante el transcurso de la enfermedad se van a ir produciendo. Las causas de hiperglucemia se pueden resumir en
una falta de produccin de insulina o en un defecto perifrico
de la misma. Aunque se pueden diferenciar distintos tipos de
diabetes segn la etiologa, la diabetes propiamente dicha puede ser de dos clases: D.M. tipo I, tambin denominada juvenil
o insulina dependiente, en la cual la secrecin de insulina es
inexistente debido a susceptibilidad gentica (HLA), etiologa
viral o autoinmune. La presentacin suele ser brusca con evolucin hacia el coma cetoacidtico, debido a la oxidacin incompleta de cidos grasos hasta cuerpos cetnicos, responsables de la cetosis. La segunda clase de diabetes es la D.M. tipo
II del adulto o no insulina dependiente, con una importante
carga hereditaria (alta incidencia en gemelos) y resistencia tisular a la insulina por exceso de peso. Presentacin insidiosa
cuya evolucin tarda puede conducir al coma hiperosmolar. El
estilo de vida juega un importante papel en la prevencin de la
enfermedad. La determinacin de los niveles de glucemia basales y tras sobrecarga oral con glucosa son particularmente
importantes para el diagnstico, tratamiento y control de la enfermedad. En la diabetes tipo I la administracin parenteral de
la hormona es imprescindible para mantener la normoglucemia
y evitar o retrasar en la medida de lo posible las complicaciones. La diabetes tipo II se controla fundamentalmente con la
dieta, y antidiabticos orales, excepcionalmente es necesaria la
administracin de insulina.

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277

TEMA 21

La regulacin
hormonal
del metabolismo

La accin de las hormonas. Hormonas activas en


la superficie celular. Receptores. Segundos mensajeros. Hormonas activas en el interior de la clula.
Efectos biolgicos.

Las hormonas son mensajeros qumicos sintetizados por


las glndulas endocrinas y liberados a la circulacin sangunea
para producir respuestas especficas. Slo aquellos tejidos que
disponen de receptores especficos para su reconocimiento pueden responder al mensaje hormonal. Las hormonas juegan un
papel esencial en la regulacin e integracin del metabolismo,
como puede comprobarse en los captulos precedentes. Aunque
muchas hormonas modifican el metabolismo, aquellas que
actan sobre la sntesis proteica ejercen importantes efectos reguladores del mismo, a travs de modificaciones en la sntesis y
concentracin de protenas clave, p.e. determinadas enzimas.
Las hormonas de naturaleza peptdica y proteica no penetran
en la clula y se unen a receptores especficos presentes en la
membrana. Las de naturaleza lipdica atraviesan la membrana
plasmtica y ejercen su accin junto al receptor sobre el ADN.

LA ACCIN DE LAS HORMONAS


El mecanismo de accin de las hormonas se produce por fijacin a receptores celulares especficos, los cuales pueden encontrarse en la superficie celular o en su interior, bien en el ncleo o en el citoplasma. Con independencia de la localizacin
de los receptores, su unin con la hormona especfica es responsable de la puesta en marcha de una serie de reacciones
metablicas que constituyen la expresin biolgica de la accin
hormonal. Esta unin hormona-receptor, adems de especfica,
es reversible y depende tanto de la concentracin plasmtica

La accin de las hormonas se realiza por


unin a receptores
especficos que se encuentran en la superficie o en el interior
de la clula.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de la hormona como del nmero de receptores disponibles.


Las concentraciones hormonales en plasma suelen ser muy bajas y dependen del equilibrio entre la velocidad de sntesis y eliminacin de la hormona, y de su unin a transportadores especficos. Por otra parte, la concentracin celular de receptores
tambin es variable, dependiendo de la concentracin plasmtica de la hormona especfica, de forma que, cuando sta disminuye, se produce un aumento en el nmero de receptores y
viceversa. Las modificaciones en las concentraciones plasmticas de algnas hormonas ejercen un importante efecto regulador de su secrecin por este mecanismo.
Dependiendo de la naturaleza qumica y, por tanto, de las
posibilidades de difusin a travs de la membrana celular, las
hormonas interaccionan con receptores intracelulares o receptores de membrana.

HORMONAS ACTIVAS EN LA
SUPERFICIE CELULAR

En la transmisin de
la informacin hormonal participan tres
elementos: un receptor, una protena de
membrana y un segundo mensajero.

Muchas hormonas son de naturaleza peptdica y proteica


(hormonas hipofisarias y grandes pptidos no hipofisarios
como insulina, glucagn, PTH, calcitonina) lo que dificulta su
paso a travs de la membrana plasmtica. Para cumplir su funcin hormonal de comunicacin y control se unen a receptores
especficos presentes en la membrana de las clulas diana. La
unin hormona-receptor es la seal para que se produzcan una
serie de cambios en la propia membrana que permiten la transmisin de informacin hasta el interior celular.
Este mecanismo que se conoce hoy detalladamente consta
de los siguientes elementos:
1. Un receptor especfico de naturaleza proteica capaz de
cambiar su configuracin al unirse con la hormona y desencadenar su accin.
2. Una protena intrnseca de la membrana o protena G,
denominada as por su capacidad para fijar nucletidos
de guanina.
3. Segundos mensajeros capaces de transmitir la seal hormonal a la clula. Entre los mejor conocidos se encuentran los nucletidos cclicos como el AMP cclico (AMPc).

RECEPTORES
Los receptores de la superficie celular son de naturaleza
proteica y presentan al menos dos dominios diferentes, uno ex-

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LA REGULACIN HORMONAL DEL METABOLISMO

tracelular para fijacin a la hormona y otro transmembrana


para las protenas G, encargadas de conectar los receptores
con protenas efectoras responsables de una serie de reacciones
en cadena que culminan con modificaciones en la actividad
metablica de la clula, objetivo final del mensaje hormonal.
Las protenas efectoras suelen ser enzimas que catalizan la formacin de segundos mensajeros, los cuales difunden al interior
celular, o bien se trata de canales de paso para iones que tambin alcanzan el citoplasma celular.
Las protenas G estn formadas por tres subunidades distintas, una de ellas se encuentra unida a un nucletido de guanina, de donde deriva su nombre. Dicho nucletido puede estar
en forma difosfato (GDP) o trifosfato (GTP). La unin hormona-receptor provoca un cambio de conformacin en el receptor
que desencadena la interaccin con la protena G y el intercambio del nucletido GDP por GTP, con la consiguiente activacin de la protena. El complejo activo protena G-GTP puede modular positiva o negativamente la protena efectora. La
duracin del complejo activo es muy reducida (segundos) debido a la actividad GTPasa del propio complejo que produce la
transformacin de GTP en GDP y la consiguiente inactivacin.
Una de las protenas efectoras ms importante es la enzima
de membrana adenilato-ciclasa responsable del aumento intracelular de AMPc que acta como segundo mensajero.

281

Los receptores son


protenas con, al menos, dos dominios
funcionales diferentes.

El AMPc se sintetiza
a partir del ATP por
la adenilato ciclasa.

Figura 21.1. Mecanismo de accin de las hormonas peptdicas.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

SEGUNDOS MENSAJEROS
Existen distintas clases de segundos mensajeros: AMPc, GMPc,
Ca2+, etc.

Existen distintas clases de segundos mensajeros, pero los mejor estudiados son los nucletidos cclicos. Otros segundos
mensajeros son los iones calcio o determinados intermediarios
metablicos producidos en la respuesta hormonal, que modifican la permeabilidad al calcio como ocurre con el inositol-trifosfato, formado a partir de fosfatidil-inositol por accin de la
fosfolipasa C. La entrada de calcio en la clula desde el lquido
extracelular o desde el retculo endoplsmico donde se almacena, ejerce diversas funciones, p.e. es responsable de la contraccin muscular, secrecin hormonal, liberacin de neurotransmisores, etc. El calcio tambin puede activar una protena intracelular, la calmodulina, provocndole un cambio de conformacin
necesario para su accin sobre determinadas enzimas celulares.
Los nucletidos por s solos no son capaces de inducir una
respuesta celular, por lo que han de interaccionar con enzimas
protena-quinasas especficas con subunidades reguladoras
para la unin al nucletido cclico y subunidades catalticas que
quedan libres tras la unin y sirven para fosforilar enzimas celulares. Tras la fosforilacin, las enzimas pueden ser activadas o
inhibidas y, como consecuencia, se modificar la actividad celular. En general las enzimas catablicas se activan y las anablicas se inhiben.
Los principales nucletidos que actan como segundos
mensajeros son el AMPc y el GMPc, y las enzimas catalticas en
cada caso son la adenilato ciclasa y guanilato ciclasa respectivamente. Cuando cesa la accin hormonal, estas enzimas se
inactivan y los nucletidos cclicos son hidrolizados hasta AMP
y GMP por fosfodiesterasas especficas, las cuales pueden ser
moduladas por diversas sustancias, tales como prostaglandinas,
cafeina, calcio, etc.

HORMONAS ACTIVAS EN EL
INTERIOR DE LA CLULA
Las hormonas esteroideas y los derivados de la tirosina se
unen al receptor especfico en el interior
de la clula y no requieren segundos
mensajeros.

Las hormonas de naturaleza lipdica y las derivadas del


aminocido tirosina (catecolaminas y hormonas tiroideas),
pueden atravesar fcilmente la membrana plasmtica, dadas
sus caractersticas de liposolubilidad. En el interior celular se ligan a receptores especficos intracitoplasmticos o intranucleares. El complejo hormona-receptor se une al ADN para modificar la expresin gentica. La activacin de determinados genes
(rara vez la inactivacin) se traduce en la sntesis de protenas
especficas.

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LA REGULACIN HORMONAL DEL METABOLISMO

Una diferencia importante entre los receptores de membrana y los receptores intracelulares es que estos ltimos no
precisan de segundos mensajeros, si bien la interaccin hormona-receptor tiene caracteristicas similares a las descritas para las
hormonas peptdicas.
Por ltimo es preciso sealar que el complejo hormona-receptor puede tener efectos directos en el citoplasma, los cuales
son independientes de los efectos producidos sobre el nucleo
celular, donde tambin puede haber receptores para las hormonas esteroideas, como se han demostrado para las tiroideas.

Figura 21.2. Mecanismo general de activacin de las clulas diana.

EFECTOS BIOLGICOS
Las hormonas peptdicas se sintetizan en forma de precursores pre-prohormonales, en el retculo endoplsmico de las
clulas endocrinas y antes de abandonarlo se suelen fragmentar dando lugar a la prohormona, que es transferida al aparato de Golgi donde ser de nuevo fragmentada y almacenada
en grnulos de secrecin que contienen el pptido de conexin
y la hormona totalmente aislada. El estmulo o seal especfica
pone en marcha el proceso de secrecin por exocitosis.
Para las hormonas derivadas del aminocido tirosina, la sntesis ocurre en el citoplasma celular, mediante una serie de reacciones catalizadas por enzimas, que como en el caso anterior
culminan con el almacenamiento de la hormona hasta el momento de su secrecin.

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284

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 21.3. Esquema de la secrecin hormonal.

El principal mecanismo de control de la


secrecin de una hormona es el de retroinhibicin.

Las hormonas esteroideas, por el contrario, no se encuentran almacenadas en cantidades suficientes, si bien las clulas
endocrinas responsables de su secrecin contienen las enzimas
y precursores necesarios para la sntesis y liberacin casi inmediata de dichas hormonas ante la llegada de la seal especfica.
El periodo de almacenamiento previo a la secrecin hormonal, el inicio de la actividad biolgica tras la estimulacin especfica y la duracin de la misma, son factores caractersticos
de cada una de las hormonas y existen en consecuencia grandes diferencias de unas a otras.
Las hormonas peptdicas y las catecolaminas (adrenalina y
noradrenalina) circulan en sangre libremente por ser solubles
en el plasma sanguneo, mientras que las hormonas tiroideas y
esteroideas, por su escasa solubilidad, necesitan de transportadores proteicos, los cuales se comportan como almacenes circulantes de la hormona, establecindose un equilibrio dinmico entre la hormona ligada al transportador y una pequea
concentracin de hormona libre que representa la fraccin
biolgicamente activa, por ser la nica que puede unirse de
forma especfica a los receptores hormonales celulares.
El metabolismo hormonal podra definirse como la desaparicin irreversible de la hormona de la circulacin sangunea
tras su captacin especfica por la clula diana, o como la modificacin de su estructura a nivel heptico y/o renal para su total eliminacin.
Las concentraciones hormonales en plasma suelen ser muy
pequeas y se encuentran sometidas a un riguroso control. El
sistema endocrino funciona como un todo, existiendo mltiples
conexiones entre las distintas glndulas endocrinas y el otro
gran sistema de coordinacin y control de nuestro organismo,
el sistema nervioso.
El principal mecanismo de control de la secrecin hormonal es sin duda la retroinhibicin o feed-back. Prcticamente
todas las hormonas se encuentran sometidas a este mecanismo de control que se establece a travs de diferentes interme-

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LA REGULACIN HORMONAL DEL METABOLISMO

diarios, como por ejemplo, el in calcio para la secrecin de


PTH; la glucosa para la secrecin de insulina y glucagn pancreticos, as como para otras hormonas que tambin participan en el control de la glucemia, tales como catecolaminas,
hormona del crecimiento y glucocorticoides; la concentracin
y el volumen de los lquidos extracelulares para la secrecin de
ADH, etc.
Sin embargo, el ejemplo ms caracterstico de interaccin
de diferentes mecanismos de control lo constituye el eje hipotlamo-hipfisis-glndulas perifricas, en el que las hormonas
producidas por las gldulas perifricas establecen una retroinhibicin sobre las estructuras del eje neuroendocrino, controlando la produccin de las hormonas trficas que actan sobre dichas glndulas perifricas (tiroides, suprarrenales y gnadas).
Adems de estos sistemas de control, la secrecin hormonal
ocurre de forma rtmica. Los patrones rtmicos de secrecin
para las distintas hormonas son variables y estn relacionados
con fenmenos de naturaleza cclica, como son el da y la noche, el sueo y la vigilia, las estaciones del ao, etc., pudiendo
establecerse modificaciones en la frecuencia de los pulsos de
secrecin, en relacin con las diferentes etapas del crecimiento
y desarrollo del individuo.
Aunque los efectos biolgicos producidos por las hormonas
son de distinta naturaleza, los podemos agrupar bsicamente
en tres tipos:

285

Los efectos biolgicos de las hormonas


se pueden agrupar en
tres tipos.

1. Modifican la permeabilidad de la membrana celular y


facilitan la entrada de sustancias para su utilizacin
como precursores biosintticos o como compuestos
energticos.
2. Activan enzimas de membrana que desencadenan una
cascada de reacciones metablicas.
3. Activan el mecanismo de transcripcin de la informacin
gentica desde el ncleo al citoplasma a partir de la sntesis de ARN mensajero y su traduccin en la sntesis de
protenas celulares con actividad enzimtica.

RESUMEN
La gran complejidad de las reacciones qumicas que
tienen lugar en nuestro organismo, muchas de ellas en
sentidos opuestos, y que en conjunto determinan el metabolismo corporal, necesitan un control riguroso. Las reacciones qumicas se encuentran catalizadas por protenas

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286

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

enzimticas, muchas de ellas con una funcin clave en el


desarrollo de una determinada secuencia metablica. La
regulacin de estas enzimas clave permite controlar la velocidad de los diferentes procesos metablicos. El sistema
endocrino a travs de mensajeros qumicos denominados
hormonas ejerce parte del control del metabolismo. Las
hormonas actan a nivel de receptores celulares presentes
en las clulas diana. La localizacin del receptor es perifrica si se trata de hormonas hidrosolubles, o intracelular
para las hormonas lipdicas y derivadas del aminocido tirosina. Con independencia de la localizacin del receptor,
los efectos hormonales finales se traducen en la modificacin de la actividad metablica celular.
Las hormonas que actan a nivel de membrana producen cambios de configuracin en el receptor que activa
determinados mecanismos de membrana en los que estn
implicados una protena denominada G, la cual es responsable de la activacin de una enzima de membrana cuya
actividad final se traduce en el aumento de nucletidos cclicos en el interior celular con una gran importancia en el
control de enzimas clave del metabolismo celular. Los nucletidos cclicos se comportan como segundos mensajeros, siendo la hormona el primer mensajero. Existen otros
segundos mensajeros como el calcio o ciertos metabolitos
que modifican la permeabilidad inica de la membrana.
Las hormonas que pueden atravesar la membrana celular
son las hormonas lipdicas y las hormonas tiroideas que se
ligan a receptores intracelulares. El complejo hormona-receptor se fija al ADN, dando lugar a la transcripcin de genes especficos (sntesis proteica).

APLICACIONES CLNICAS
Sndrome de resistencia a la insulina
Se caracteriza por una falta de respuesta perifrica a la insulina debido a mutaciones mltiples en el receptor, y cursa con
hiperinsulinismo. Es posible diferenciar entre el tipo A, de presentacin en mujeres jovenes de talla alta con tendencia al hirsutismo facial y alteraciones del aparato reproductor, fundamentalmente del tipo ovarios poliqusticos; y el tipo B, que corresponde a mujeres mayores y se acompaa de enfermedades
del sistema inmune. Clnicamente cursa con dolores articulares,

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LA REGULACIN HORMONAL DEL METABOLISMO

alopecia, leucopenia, proteinuria y presencia de anticuerpos


antinucleares y anti-ADN. La acantosis ngricans constituye un
signo de resistencia a la insulina. Se trata de una hiperpigmentacin de la piel localizada en pliegues laterales del cuello, axilas e ingles.

Clera
Se trata de una infeccin producida por el vibrin colrico
cuyo vehculo de transmisin es el agua y algunos alimentos de
origen marino. No existen reservorios animales y son muy raros
los portadores humanos crnicos. El periodo de incubacin es
de cinco das, al cabo de los cuales se presenta un cuadro de
diarrea acuosa con prdida de moco y electrolitos que conduce
a deshidratacin, acidosis, calambres, hipotensin, shock y
muerte si no se acta con prontitud. En caso de toxiinfeccin
alimentaria el comienzo suele ser con dolor abdominal y vmitos que preceden a la diarrea. La txina proteica presenta dos
componentes, uno que permite su fijacin a la mucosa intestinal, y otro que acta sobre la protena G de la membrana disminuyendo su actividad GTPasa, responsable de la activacin
permanente de la enzima adenilato-ciclasa, la cual produce un
aumento extraordinario de AMPc que altera el transporte de iones a travs de la mucosa intestinal, provocando el escape masivo de electrolitos acompaado de grandes volmenes de
agua hacia la luz intestinal.

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287

TEMA 22

Estructura de
cromosomas y genes

Cromosomas. Genes. ADN: Estructura y propiedades. Mutaciones.

La complejidad estructural y funcional de una clula implica


el uso de una enorme cantidad de informacin, presente a lo
largo de su ciclo vital y repetida con absoluta identidad en todas y cada una de las clulas de un organismo pluricelular. Se
comprende pues la importante presencia celular de ADN,
como portador de informacin gentica, constituyendo cadenas extraordinariamente largas, que superan con mucho la propia dimensin de la clula que lo contiene. Ello plantea un importante problema de ubicacin, resuelto mediante un empaquetamiento terciario del ADN que produce como resultado la
estructura cromosmica.

CROMOSOMAS
En las clulas eucariticas, el ADN se encuentra asociado a
protenas bsicas, las histonas, formando nucleoprotenas que
se organizan de forma caracterstica para dar lugar a la cromatina nuclear. Durante la fase de divisin, la cromatina alcanza
un mayor grado de compactacin formando los cromosomas,
que estn constituidos por una nica molcula lineal de ADN,
unida a histonas en cantidades prcticamente iguales, con un
altsimo grado de empaquetamiento, cuya unidad estructural
sera el nucleosoma. Resulta sorprendente la capacidad de empaquetamiento que manifiesta el ADN. Por ejemplo, los 46 cromosomas de una clula humana contienen, en conjunto, alrededor de 7.800 Mpb en molculas de ADN que extendidas llegaran a alcanzar algo ms de 2,5 metros de longitud.
La microscopa electrnica muestra que la cromatina nuclear es una organizacin basada en cadenas de forma esfrica,

Durante la divisin
celular, la cromatina
alcanza un mayor grado de compactacin
formando los cromosomas.

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290

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los cromosomas estn constituidos por


una nica molcula
lineal de ADN unida
a histonas, cuya unidad estructural es el
nucleosoma.

unidas entre s por filamentos finos de ADN. Cada una de las


esferas corresponde a un nucleosoma, formado por una secuencia de ADN de unas 200 pb, enrollados alrededor de una
estructura proteica constituida por un octmero de histonas en
el que entran a formar parte dos de cada uno de los tipos H2A,
H2B, H3 y H4 (Fig. 22.1). Las histonas son protenas caracterizadas por la presencia muy elevada de aminocidos como lisina y arginina, que le confieren un carcter bsico, de las cuales
se distinguen cinco tipos distintos (Tabla 22.1), cuatro que entran a formar parte del nucleo central del nucleosoma y un
quinto, H1, que juega un papel importante en la conexin de
nucleosomas adyacentes.

Figura 22.1. Nucleosoma. Ncleo central.


Tabla 22.1. Tipos de Histonas.
Tipo

Aminocidos

Relacin Lys/arg

Localizacin

H1

215

20,00

Conexin

H2A

129

01,25

Ncleo

H2B

125

02,50

Ncleo

H3

135

00,72

Ncleo

H4

102

00,79

Ncleo

Las distintas especies difieren en la cantidad de ADN que


contiene el nucleosoma, oscilando entre 160 y 240 pares de
bases, pero, independientemente de esa cantidad, aparece una

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ESTRUCTURA DE CROMOSOMAS Y GENES

secuencia de longitud igual para todos ellos de 140 pb, que,


junto al octmero de histonas, constituye el ncleo central del
nucleosoma (Fig. 22.1). Esta secuencia de 140 pb organizada
como superhlice levgira de ADN ejecuta una vuelta y 3/4 sobre los cuatro pares de histonas, de tal forma que resulta unido
por su cara interior, sin que las protenas sobresalgan ni rodeen
la cadena de ADN.
Cuando la secuencia de nucletidos es algo mayor, entre
160 y 240 pb, se alcanza un nivel estructural distinto, el cromatosoma (Fig. 22.2), que difiere del anterior en que la cadena desarrolla dos vueltas sobre las histonas incorporando,
adems, un monmero de histona H1, por su parte externa,
responsable de la unin con nucleosomas adyacentes. La asociacin de varios nucleosomas unidos de esta manera constituye el polinucleosoma, que representa un nivel de organizacin ms complejo.

291

Las distintas especies


difieren en la cantidad de
ADN que
contiene el nucleosoma.

Figura 22.2. Cromatosoma.

En relacin con la estructura de los cromosomas, en las clulas eucariticas, durante la fase de divisin, una vez duplicado el contenido del ADN, se produce una condensacin del
mismo, dando lugar a los diferentes cromosomas. En la organizacin del ADN cromosmico los nucleosomas constituyen la
estructura bsica, los cuales se asocian para constituir fibras de
100 denominadas nucleofilamentos, y stos, a su vez, se empaquetan en fibras ms gruesas o solenoide de 300 o incluso

La asociacin de varios nucleosomas


constituye el polinucleosoma, el cual representa un nivel de
organizacin ms
complejo.

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292

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de 600, donde las histonas H1 interaccionan fuertemente entre


s, para que permanezcan unidos los nucleofilamentos (Fig.
22.3). Los cromosomas muestran un armazn proteico central,
de naturaleza distinta de las histonas, conocido como protenas
andamio, al que se unen las distintas fibras para que resulte
una mxima estabilizacin del conjunto.

Figura 22.3. Nucleo filamento y empaquetamiento en solenoide.

En procariotas, el cromosoma bacteriano es generalmente


circular y se muestra unido a la cara interna de la membrana.
La asociacin con protenas similares a las histonas es responsable de una organizacin en forma de cadena de cuentas que
recuerda a la de la cromatina, aunque su estabilidad es pasajera, unindose y disocindose en periodos de tiempo reducido.

GENES
Un gen es una secuencia de ADN que
se expresa de manera
especfica codificando una cadena polipeptdica, o produciendo formas estables de RNA.

Algunos genes participan en procesos de


regulacin de la expresin gnica, por lo
que se denominan secuencias reguladoras.

Un gen es una secuencia de ADN que se expresa de manera especfica, codificando una cadena polipeptdica a traves del
ARN mensajero o produciendo formas estables de ARN distintos del mensajero o participando en procesos de regulacin de
la expresin gnica. A los primeros se les denomina genes estructurales y a los segundos genes reguladores. Por regla general, los genes ocupan posiciones constantes en la cadena de
ADN y, en consecuencia, se correspondern con segmentos determinados en los cromosomas. En los virus, el material gentico es reducido y puede estar en forma de ADN o ARN (ver
tema 19 de la primera parte). En los ARN-virus el genoma es
muy reducido, siendo ms variable el tamao en los de ADN.
En las bacterias, existe normalmente un slo cromosoma circular que contiene, en la mayora de los casos, una nica copia
de cada gen; disponen, adems, de ADN extracromosmico
circular que constituye los denominados plsmidos que permanecen siempre aislados aunque, en determinadas ocasiones
pueden integrarse en el cromosoma circular, de forma tempo-

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ESTRUCTURA DE CROMOSOMAS Y GENES

ral. En conjunto, su contenido gentico es casi doscientas veces


mayor que en el caso de los virus, y su regulacin es, por lo general, a nivel de transcripcin, dependiente de una organizacin funcional denominada opern, que consiste en una secuencia reguladora con centros de control que ejercen su accin sobre un conjunto de genes estructurales.
En el caso de las clulas eucariticas la complejidad es mucho mayor, en gran medida porque el nmero de genes es del
orden de 20 veces superior al de las bacterias. En stos, es frecuente que existan regiones codificantes o exones, separadas
por fragmentos no codificantes o intrones (Fig. 22.4), cuya expresin en el ARN es posteriormente eliminada del transcrito
primario mediante cortes y empalmes durante la fase de maduracin. En el ADN de las eucariotas pueden distinguirse tres tipos de secuencias, las de elevada reiteracin, las moderadamente repetidas y las de copia nica o muy escasa, relacionadas unas con la codificacin y otras con el control, las cuales se
tratarn en el apartado siguiente.

293

En las clulas eucariotas el nmero de


genes es 20 veces superior al de las bacterias.

Figura 22.4. Estructura del gen de la ovoalbmina.


Los intrones (regiones no codificantes) se representan en azul claro.

ADN: ESTRUCTURA Y PROPIEDADES


La naturaleza qumica y configuracin del ADN ya han sido
tratadas. En este apartado se discutirn aquellos aspectos estructurales que tienen especial repercusin en la conservacin y
expresin de la informacin gentica, por una parte, la superhelicidad del ADN y, por otra, las caractersticas distintivas de
las secuencias especficas de control y codificacin que se
muestran en l.
Superenrollamiento del ADN: La mayor parte de las
molculas de ADN, tanto procariotas como eucariotas, presentan, como una caracterstica estructural, la existencia de giros
en la direccin del eje longitudinal de la cadena que se conocen como superenrollamientos, tanto en las molculas circulares como longitudinales, siempre que, en estas ltimas, los extremos permanezcan sujetos. Dos posibles caminos llevan a
esta situacin (Fig. 22.5):

Las molculas de
ADN presentan como
caracterstica estructural la presencia de
giros en la direccin
del eje longitudinal,
llamados superenrrollamientos.

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294

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 22.5. Superenrollamiento del ADN. La mayora de las molculas de


DNA que se encuentran en la naturaleza estn superenrrolladas negativamente.

La importancia de los
superenrrollamientos
guarda relacin con
la compactacin del
ADN y con la separacin transitoria de
sus filamentos para
la replica o transcripcin.

a) Si un filamento trenzado que constituye un sistema estable enrollado en hlice, es girado por uno de sus extremos en el sentido que reduce el nmero de vueltas iniciales mientras permanece el otro fijo, se introduce una
tensin que, cuando se unan posteriormente los extremos para formar un crculo, se liberar provocando un
enrollamiento aadido o superenrollamiento que se conoce como superhlice negativa.
b) De manera similar, si el giro al que se somete el filamento provoca un exceso de vueltas, cuando se unan los extremos para formar un crculo, la liberacin de la tensin
provocar un superenrollamiento, en este caso conocido
como superhlice positiva.
La forma habitual de superenrollamiento en la naturaleza es
la superhlice negativa, pero experimentalmente pueden ser
obtenidas superhlices positivas de ADN, conformacin que,
en determinadas situaciones, tambin aparece de forma transitoria in vivo. Tanto una como otra no son formas privativas de
cadenas circulares de ADN, sino que stas pueden producirse
en molculas lineales siempre que sus extremos permanezcan
anclados. En la formacin de superhlices actan un tipo de

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ESTRUCTURA DE CROMOSOMAS Y GENES

295

enzimas denominadas topoisomerasas, que, mediante corte en


puntos determinados de la hebra y posterior unin, modifican
el grado de helicidad. En procariotas, las topoisomerasas I y III
(de tipo 1) ejercen su accin sobre una de las hebras, provocando una relajacin del ADN, disminuyendo as el nmero de
superenrollamientos negativos; las topoisomerasas II (de tipo
2), dependientes de ATP, por su parte provocan cortes que
afectan a las dos hebras de la cadena, aadiendo dos superenrollamientos negativos por cada intervencin de la enzima.
Una topoisomerasa II bien conocida es la denominada girasa
de E. coli. En eucariotas, existen topoisomerasas de los tipos 1
y 2, sin embargo, las del tipo 2 no pueden introducir superenrollamientos negativos, pero s relajar los positivos, lo que, en
definitiva, tiene como efecto la consolidacin de los superenrollamientos negativos producidos en la formacin de los nucleosomas. En efecto, la conformacin del nucleosoma exige la
aparicin de un superenrollamiento negativo, cuando la cadena de ADN gira alrededor del octeto de histonas, y para compensarlo surge otro positivo deslocalizado. La eliminacin de
este ltimo por accin de topoisomerasas tipo 2 hace aumentar
la superhelicidad negativa.
La importancia del superenrollamiento del ADN no se relaciona slo con la necesidad de compactacin del ADN en la
clula, sino tambin con procesos esenciales que requieren la
separacin transitoria de los filamentos de ADN, como la replicacin o transcripcin, o la estabilizacin de determinadas
estructuras, como las cruciformes o secuencias de ADN-Z
levgiro.
Secuencias especficas: En relacin con secuencias especficas del ADN en eucariotas, a diferencia de lo que sucede
en procariotas, pueden distinguirse tres clases segn su frecuencia de repeticin: las de alta reiteracin, las moderadamente
reiteradas y las de copia nica.
Un porcentaje importante del genoma humano est constituido por secuencias que se repiten de forma reiterada. Una de
ellas de 300 pb, conocida como Alu, se encuentra repetida cerca de un milln de veces. Otras ms pequeas, denominadas
ADN satlite, se encuentran repetidas unas diez mil veces, especialmente agrupadas alrededor del centrmero del cromosoma, por lo que se ha sugerido una funcin relacionada con la
actividad de ste. Otros genes aparecen reiterados de una forma ms moderada. En el caso de los que codifican ARN ribosmico, la mayora de los eucariotas poseen 100 copias o
ms, que aparecen agrupadas en tndem, en lugares especficos del cromosoma, relacionados con los nucleolos. Otro ejem-

Un porcentaje importante del genoma humano est formado


por secuencias que se
repiten de forma reiterada.

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296

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

plo de reiteracin moderada se encuentra en los genes que codifican determinadas protenas, como los de las histonas, que
aparecen repetidos de forma variable, segn la especie, entre
algunos pares y 1.000 veces. Los genes de los cinco tipos de
histona, aparecen en una secuencia, separados por otros tantos
segmentos espaciadores, repetidos en tndem. Son caractersticas muy particulares de los genes de histonas el hecho de carecer de intrones y de secuencias finalizadoras de poliadenina
(Fig. 22.6).

Figura 22.6. Genes de histonas en el erizo de mar y en la mosca de la fruta.

Muchas protenas vienen codifcadas por


genes de una sola copia.

Por ltimo, muchas protenas vienen codificadas por genes


de una sola o muy escasas copias. Diferentes ejemplos han
sido constatados, como el gen de la fibrona de la seda, el de la
ovoalbmina o los que codifican subunidades de hemoglobina,
en los reticulocitos. Un aspecto particular en estos genes que, a
la vez, pone de manifiesto el carcter adaptable del genoma, es
el hecho de que bajo presin selectiva aumentan el nmero de
copias, amplificando as su capacidad de expresin.

MUTACIONES
Una mutacin es la
alteracin permanente de una secuencia
del ADN capaz de
modificar la informacin gentica previa.

Una mutacin es una alteracin permanente en una secuencia de ADN, capaz de modificar la informacin gentica
previa, lo que repercute en el producto final de su expresin,
codificando protenas diferentes, si es que el fenmeno afecta a
genes estructurales, o interfiriendo en procesos de control si se
trata de secuencias de regulacin de la expresin gentica. Pero
lo ms importante es su trascendencia, porque puede transmitirse a generaciones futuras a travs de procesos normales de
replicacin. El ADN genmico que contiene la informacin
gentica de la clula resulta irreemplazable, al no disponerse

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ESTRUCTURA DE CROMOSOMAS Y GENES

ms que de una o dos copias completas, segn sea su condicin de clula haploide o diploide, por lo que, ante la perspectiva de produccin de errores, existen diferentes mecanismos
de reparacin para prevenir los efectos de modificaciones espontneas inducidas por mutgenos o los fallos que tienen lugar en procesos normales de replicacin.
Los tipos de mutaciones ms frecuentes son, la sustitucin
de pares de bases por otros, la eliminacin de pares de bases,
la insercin de uno o ms pares de bases y la introduccin de
modificaciones que afectan a la disposicin de los nucletidos.
La ms comn de ellas, la sustitucin de bases, puede ser de
dos tipos: transiciones, cuando se sustituye una purina con
otra purina o una pirimidina con otra pirimidina, y transversiones, cuando se sustituye una purina con una pirimidina o
viceversa.
Existen sustancias que tienen el carcter de mutgenos qumicos, unas por ser anlogas de bases como el 5-bromo-uracilo o la 2-amino-purina, causantes de transiciones AT GC; y
otras por provocar modificaciones qumicas en las bases, por
ejemplo, la hidroxilamina, que afecta especficamente a la citosina provocando su transformacin en un derivado que se
aparea con adenina para dar lugar a una transicin CG AT.
Tambin el cido nitroso es otro agente modificador capaz de
provocar desaminaciones que transforman la adenina en hipoxantina, la citosina en uracilo y la guanina en xantina, originando transiciones AT GC.
Otros agentes tienen naturaleza fsica, como las radiaciones
ionizantes y luz ultravioleta. La luz UV provoca la aparicin de
enlaces covalentes entre timinas contiguas, dando lugar a dmeros que alteran la estructura del ADN e impiden cualquier
proceso de expresin gentica o replicacin a partir de ellos.
Las clulas tienen a su disposicin diferentes mecanismos
de correccin de errores que son bien conocidos en E. coli (Tabla 22.2):
1. Reparacin de apareamientos incorrectos: Una
enzima denominada Dam metilasa produce metilacin
en las adeninas de secuencias (5')GATC, antes de la
replicacin. Una vez que se produce sta, durante un
corto periodo de tiempo pueden ser discriminadas las
hebras molde de las hijas, hasta que finalmente acte
la enzima metilasa. Un sistema enzimtico repara los
errores de apareamiento en regiones prximas a la secuencia GATC.
2. Reparacin por eliminacin de base: Cuando la alteracin corresponde a una base modificada, como

297

Los tipos de mutaciones ms frecuentes


son: la sustitucin,
eliminacin e insercin de uno o ms
pares de bases.

Los agentes mutgenos pueden ser tanto


de naturaleza fsica
como qumica.

Los mecanismos celulares de correccin


de errores son: 1. reparacin de apareamientos incorrectos.
2. reparacin por eliminacin de bases o
de nucletidos y 3.
reparacin directa del
ADN.

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298

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Tabla 22.2. Mecanismos de correccin de ADN en E.coli.


Alteracin

Enzimas/protenas

Sistema
reparador

Apareamientos
incorrectos

Dam metilasa
ADN helicasa
SSB
ADN polimerasa III
Exonucleasa I
ADN ligasa
Protenas MutH, MutL, MutS

Reparacin de
apareamientos
incorrectos

Bases
modificadas

ADN glucosilasas
AP endonucleasas
ADN polimerasa I
ADN ligasa

Reparacin por
eliminacin de base

Alteraciones
estructurales
en el ADN

ABC escinucleasa
ADN polimerasa I
ADN ligasa

Reparacin por
eliminacin de
nucletido

Dmeros de
pirimidina,
O6-metilguanina

ADN fotoliasas
O6-metilguanina-ADN
metiltransferasa

Reparacin directa
del ADN

desaminaciones o formacin de dmeros de pirimidina, enzimas del tipo ADN glucosilasas provocan la eliminacin de la base afectada quedando, en ese lugar,
un sitio apurnico o apirimidnico (sitios AP). Posteriormente otras enzimas AP endonucleasas eliminan el
resto desprovisto de base, que es reemplazado por el
nucletido correcto por medio de ADN polimerasa I y,
finalmente, se restablece la unin de la cadena mediante ADN ligasa.
3. Reparacin por eliminacin de nucletidos: Cuando tienen lugar importantes alteraciones en la estructura
del ADN, como por ejemplo, en la formacin de dmeros de pirimidina, acta un tipo de endonucleasa especfica que provoca la eliminacin del fragmento
daado. En E. coli interviene una enzima denominada
ABC escinucleasa capaz de provocar dos cortes, uno a
cada lado del fragmento daado. La regeneracin de la
secuencia corre a cargo de enzimas ADN polimerasa I y
ADN ligasa.
4. Reparacin directa del ADN: Enzimas ADN fotoliasas,
en el caso de dmeros de pirimidina producidos por la
exposicin a luz UV y O6-metilguanina-ADN metiltransferasa, en la formacin de O6-metilguanina por alquilacin de la guanina, reparan directamente los nucletidos
alterados, sin necesidad de provocar cortes ni eliminaciones en la cadena.

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ESTRUCTURA DE CROMOSOMAS Y GENES

RESUMEN
Estructura de cromosomas y genes. En las clulas
eucariticas, el ADN se encuentra asociado a protenas
bsicas, las histonas, formando nucleoprotenas, para dar
lugar a la cromatina nuclear. Durante la fase de divisin,
la cromatina alcanza un mayor grado de compactacin
formando los cromosomas. La unidad estructural sera el
nucleosoma, formado por una secuencia de ADN de
unas 200 pb, enrollados alrededor de un octmero de histonas en el que entran a formar parte dos de cada uno de
los tipos H2A, H2B,H3 y H4. Las histonas son protenas
con un carcter bsico, de las cuales se distinguen cinco tipos distintos, cuatro entran a formar parte del nucleo central del nucleosoma y un quinto tipo, H1, juega un papel
importante en la conexin de nucleosomas adyacentes.
Un nivel estructural distinto es el cromatosoma, en el que
se incorpora un monmero H1. La asociacin de varios
nucleosomas unidos constituye el polinucleosoma. En los
cromosomas eucariticos los nucleosomas constituyen la
estructura bsica que se asocian para constituir fibras de
100 denominadas nucleofilamentos y stos, a su vez,
empaquetarse en fibras ms gruesas o solenoide de 300 o
incluso de 600. Los cromosomas muestran un armazn
proteico central conocido como protenas andamio al que
se unen las distintas fibras. En procariotas, el cromosoma
bacteriano es generalmente circular y se muestra unido a
la cara interna de la membrana. Un gen es una secuencia
de ADN que se expresa de manera especfica, codificando
una cadena polipeptdica o produciendo formas estables
de ARN distintos del mensajero, genes estructurales, o
participa en procesos de regulacin, genes reguladores.
En los virus, el material gentico es reducido y puede estar
en forma de ADN o ARN. En las bacterias existe normalmente un slo cromosoma circular con una nica copia de
cada gen. En el caso de las clulas eucariticas la complejidad es mucho mayor. En sus genes existen regiones codificantes o exones, separados por fragmentos no codificantes o intrones. El ADN tanto en procariotas como eucariotas presenta giros en la direccin del eje longitudinal de la
cadena que se conocen como superenrollamientos, cuya
forma habitual en la naturaleza es la superhlice negativa.
En su formacin actan un tipo de enzimas denominadas
topoisomerasas. En relacin con secuencias especficas

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299

300

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

del ADN en eucariotas, a diferencia de lo que sucede en


procariotas, pueden distinguirse tres clases segn su frecuencia de repeticin: las de alta reiteracin, las moderadamente reiteradas y las de copia nica. Una mutacin es
una alteracin permanente en una secuencia de ADN. Las
ms frecuentes son la sustitucin de pares de bases por
otros, la eliminacin de pares de bases, la insercin de uno
o ms pares de bases y la introduccin de modificaciones
que afectan a la disposicin de los nucletidos. Las clulas
tienen a su disposicin diferentes mecanismos de correccin de errores.

APLICACIONES CLNICAS
Las alteraciones en genes que intervienen en los sistemas
de reparacin de ADN conducen a diferentes enfermedades
que frecuentemente desembocan en cncer. El Xeroderma pigmentosum es una enfermedad gentica autosmica recesiva
que provoca una extremada sensibilidad a la luz solar y a la radiacin UV. Hace su aparicin en la infancia, con sequedad de
la piel, cicatrices y queratosis, acompaado de un desarrollo
atrofico de la dermis. El proceso finalmente suele conducir a la
aparicin de cncer de piel. En estudios sobre fibroblastos de la
piel se ha puesto de manifiesto, en los afectados por esta enfermedad, una manifiesta incapacidad para reparar los dmeros
de pirimidina producidos por efecto de la luz solar. En concreto
se ha sugerido un defecto en la escinucleasa que corta el fragmento daado.
Otras enfermedades degenerativas como el cncer colorrectal sin plipos hereditario (Sndrome de Lynch) se relacionan
con alteraciones en los sistemas de reparacin de apareamientos incorrectos de ADN. La mayora de los sujetos con predisposicin a esta enfermedad muestran mutaciones en dos genes
identificados como hMLH1 y hMSH2, cuyos equivalentes en E.
coli son las protenas MutS y MutL, que junto con MutH intervienen en procesos de reparacin de ADN. Probablemente, la
imposibilidad de codificar de forma correcta protenas dependientes de hMLH1 y hMSH2 permita la acumulacin de mutaciones que pueden afectar a genes que controlan la proliferacin celular, y con ello, la aparicin de la neoplasia.

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TEMA 23

Replicacin y
transcripcin del ADN

Replicacin del ADN. ADN polimerasas. Transcripcin. Polinucletido fosforilasa. Transcriptasa inversa y replicasas.

La conservacin y expresin de la informacin gentica exige, por una parte, la existencia de un mecanismo de copia capaz de reproducir la totalidad del contenido gentico de una
clula, y por otra, un dispositivo adecuado que traslade parte
de la informacin del ADN a molculas de ARN, para su expresin activa. Tales mecanismos son los procesos de Replicacin
y Transcripcin del ADN que constituyen pilares centrales del
flujo de informacin gentica en los seres vivos, procesos complejos que incluyen, adems, mecanismos de control y correccin, que garantizan la integridad de la informacin que en
cada momento se est transfiriendo. Ambos procesos se basan
en un ensamblaje ordenado de nucletidos siguiendo un modelo que acta de molde, y una estricta ley de correspondencias bajo la cual una secuencia determina invariablemente otra
complementaria.

REPLICACIN DEL ADN


En esencia, la replicacin es un proceso de sntesis de ADN
que permite obtener una copia exacta de otra previa que acta
como molde. Su desarrollo sigue unos principios que se mantienen en todos los seres vivos, procariotas y eucariotas:
1. Es semiconservativa. Las nuevas cadenas de ADN sintetizadas a partir de una inicial contienen una de las hebras nueva y la otra vieja. Messelson y Stahl, en 1957,
pusieron de manifiesto este hecho (Fig. 23.1), siguiendo
la duplicacin del ADN de clulas de E. coli previamente
cultivadas en un medio con istopo pesado del nitrge-

La replicacin y transcripcin del ADN


constituyen los pilares centrales del flujo
de informacin gentica en los seres vivos.

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302

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 23.1. Experimento de Messelson y Stahl que pone de


manifiesto la replicacin semiconservativa del ADN.
La replicacin del
ADN es un proceso
de sntesis que permite obtener una copia exacta de otra
previa que acta como molde.

En las clulas eucariotas la rplica se


establece a partir de
varios puntos de iniciacin en cada uno
de los cromosomas.

no N15, lo que les permita separar el ADN pesado frente


al normal. Trasladadas a un medio normal, se obtuvo
ADN despus de la primera duplicacin que, centrifugado en gradiente de densidad, formaba una nica banda
de cadenas hbridas ligeras y pesadas. En la segunda generacin, tras nueva duplicacin, el ADN centrifugado
mostraba dos bandas, una de menor densidad con ADN
ligero, y otra pesada que corresponda a ADN hbrido.
Se demostraba, pues, que la duplicacin se produca
sintetizando una nueva hebra sobre otra antecesora que
haca de molde.
2. Se desarrolla en ambos sentidos, a partir de un
punto origen en procariotas o varios en eucariotas.
El ADN circular de organismos procariotas se replica a
partir de un punto especfico, que en E. coli se conoce
como lugar oriC, a partir del cual, la maquinaria de re-

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

303

plicacin acta de forma bidireccional, constituyendo


sendas horquillas de replicacin, hasta encontrarse en el
extremo opuesto al punto de origen (Fig. 23.2).

Figura 23.2. Replicacin del ADN en E-coli, a partir de un punto de origen.

En eucariotas, la replicacin se produce a partir de varios puntos de iniciacin en cada uno de los cromosomas, lo que resulta lgico si se considera la mayor complejidad del ADN eucaritico, tanto en longitud como en
estructura.
3. La sntesis de ADN tiene lugar en direccin
5c o 3c, a cargo de ADN polimerasas, y para su inicio se requiere una pequea molcula cebadora,
habitualmente ARN. En la horquilla de replicacin, las
cadenas del ADN que se va a copiar permanecen abiertas, actuando de moldes para la insercin de desoxinucletidos trifosfato (d-NTP), por parte de la ADN polimerasa que, de esta forma, ir generando las dos cadenas hijas. Pero una caracterstica de estas enzimas es que

La sntesis de ADN
ocurre en direccin
5' o 3' y corre a cargo de ADN polimerasas.

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304

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

incorporan los nucletidos en direccin 5c o 3c, de manera exclusiva. Esto hace que una de las cadenas, la que
coincide con dicha direccin, denominada hebra conductora o gua, se sintetice de forma continua, en tanto
que la otra, la hebra rezagada, lo hace en secuencias
cortas, conocidas como fragmentos de Okazaki, que
posteriormente son unidos (Fig. 23.3). Por otra parte, la
accin de las ADN polimerasas requiere la existencia
previa de una cadena de polinucletido sobre la cual comienza a adicionar d-NTP en su extremo 3c-OH. Puesto
que ninguna enzima puede sintetizar directamente ADN,
se utiliza un pequeo fragmento cebador de ARN, sintetizado por ARN polimerasas, que forman parte del complejo de replicacin, conocidas como primasas, siendo
posteriormente eliminado por accin exonucleasa de la
ADN polimerasa I.

Figura 23.3. Sntesis de ADN en direccin 5c-3c por la ADN-polimerasa.


La replicacin del
ADN se desarrolla en
varias fases: iniciacin, elongacin y
terminacin, siendo
necesaria la intervencin de una topoisomerasa para la separacin de las cadenas
hijas.

Replicacin en procariotas: En E. coli, un complejo


equipo enzimtico que incluye polimerasas, helicasas, topoisomerasas, ligasas y primasas, entre otras, constituye una entidad
de control que se conoce como replisoma, encargada de llevar
a cabo la replicacin del ADN, proceso que se desarrolla en varias fases:
Iniciacin: El segmento oriC es una secuencia de 245 pb
que tiene caractersticas especficas (Fig. 23.4): muestra un tndem formado por tres segmentos de 13 nucletidos ricos en
pares AT y, prximas a stos, cuatro puntos de unin para la
protena adnA (Tabla 23.1), constituidos por secuencias de

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

Figura 23.4. Segmento oriC de E. coli.


Tabla 23.1. Protenas que participan en el inicio de la replicacin en E. coli.
Protenas del inicio de la replicacin en E. coli
Protena

Accin

AdnA

Separa las cadenas en el punto de inicio de la replicacin

AdnB

Accin helicasa. Desenrolla el ADN

AdnC

Colabora en la fijacin de la AdnB en el punto de inicio

HU

Protena estimuladora del inicio (tipo histona)

Primasas

Sntesis de cebadores de ARN

SSB

Estabiliza los filamentos sencillos una vez separados

ADN girasa

Disminuye la tensin de la cadena provocada por apertura

9 pb. La fijacin de esta protena inicia el proceso de separacin de las hebras de ADN, permitiendo la actuacin de adnB,
enzima helicasa que cataliza el desenrollamiento de la cadena,
y adnC, que es necesaria para la correcta fijacin de la anterior. Una vez separadas, las hebras sencillas han de ser estabilizadas, lo que se logra con la fijacin de una protena SSB. La
apertura de la cadena provoca un aumento de superhelicidad
positiva que es eliminada por la accin de una topoisomerasa,
la ADN girasa, que introduce superenrollamientos negativos.
Queda as todo preparado para que se comience la sntesis de
las nuevas cadenas, en la siguiente fase de elongacin. Un aspecto esencial es el estricto control que la clula tiene que ejercer sobre la replicacin de su ADN, que debe producirse una
sla vez en cada ciclo. Se conocen al menos dos mecanismos
que participan en el control del inicio de la replicacin, por una
parte, la formacin de un complejo inactivo adnA-ADP, por
hidrlisis del ATP, que puede ser nuevamente reactivado por
accin de fosfolpidos cidos de la membrana; y por otra, se
han identificado protenas inhibidoras de la iniciacin cromosmica, IciA, que se fijan a los segmentos de 13 pb de la secuencia iniciadora, impidiendo la accin de la protena adnA.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Elongacin: En esta fase participan diferentes enzimas que


se encuentran en la horquilla de replicacin: ADN helicasas
que desenrollan el ADN parental, ADN girasas que relajan la
tensin provocada en la cadena, protenas SSB que fijan las
hebras simples, primasas que sintetizan el ARN cebador y ADN
polimerasa III encargada de la insercin de desoxirribonucletidos trifosfato. Como se ha indicado anteriormente, la sntesis
de las cadenas de ADN se desarrolla de forma diferente, segn
sea la hebra conductora o la rezagada.
En el caso de la conductora, la sntesis tiene lugar en la misma direccin de avance de la ADN polimerasa III, por coincidir
con la orientacin 5c-3c del filamento. Una vez separados los filamentos por accin de la ADN helicasa e intervencin de la
ADN girasa, la hebra se estabiliza por fijacin de la protena
SSB. A continuacin, se sintetiza un ARN cebador por las enzimas primasas, generalmente de algunas decenas de nucletidos, momento a partir del cual la ADN polimerasa puede insertar desoxirribonucletidos, siguiendo la complementaridad de
la hebra parental.
La sntesis de la hebra rezagada muestra un procedimiento
diferente al anterior. Un conjunto de protenas que forman el
complejo regulador denominado primosoma, que contiene
adnB, adnC y primasas, entre otras; es el encargado de controlar el proceso. Puesto que su orientacin 3c-5c es contraria
a la de sntesis, el filamento molde tiene que formar un bucle
alrededor de uno de los dmeros de la ADN polimerasa III
(Fig. 23.5), con lo que la direccin de avance coincide ahora
con la direccin 5c-3c de la cadena a sintetizar, lo que permite
que se vayan insertando nucletidos. Cuando se ha sintetizado un fragmento de unos 1.000 nucletidos, se desprende de
la hebra molde, para formar un nuevo bucle ms adelante y
repetir as el proceso. Esto hace que la sntesis se lleve a cabo
de forma intermitente, produciendo los fragmentos de Okazaki. Cada uno de ellos requiere, previo al comienzo de su sntesis, un cebador que es fabricado por enzimas primasas que
forman parte del primosoma. Posteriormente son eliminados
por la accin 5c-3c exonucleasa de la ADN polimerasa I y sustituidos, por esta misma enzima, con nucletidos de desoxirribosa, restableciendo as la continuidad de la cadena. La
unin entre fragmentos se lleva a cabo por una ADN ligasa
(Fig. 23.6).
Terminacin: Corresponde a la finalizacin del proceso de
copiado y a la separacin en dos cadenas hijas. Es poco conocido, pero se sabe que es necesaria la intervencin de una ADN
topoisomerasa IV para la separacin de las cadenas sintetizadas.

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

Figura 23.5. Sntesis de la hebra rezagada. Formacin de un bucle


alrededor del dmero de ADN polimerasa III.

Replicacin en clulas eucariticas: esencialmente se


produce de manera parecida a la de los procariotas, con algunas diferencias. En relacin con la iniciacin, se han identificado, en levaduras, secuencias especficas denominadas ARS,
con longitudes de alrededor de 300 pb. En los cromosomas humanos, los puntos de iniciacin se encuentran separados entre
s por distancias no superiores a 300 kb, a partir de los cuales
tiene lugar el proceso, de forma bidireccional, desde numerosos puntos, lo que asegura una adecuada velocidad de duplicacin, teniendo en cuenta que el avance de la horquilla de replicacin es slo de unos 50 nucletidos por segundo. Se desconoce, sin embargo, la estructura de las secuencias iniciadoras.
Tambin en el equipo enzimtico se pueden sealar aspectos

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 23.6. Unin de fragmentos de Okazaki por ADN ligasa.

particulares, como ha quedado explicado anteriormente. Otros


factores de la replicacin en eucariotas lo constituyen las protenas RFA que se fijan a las hebras simples del ADN desenrolladas con una funcin similar a la de SSB en E. coli; y RFC que
colabora en la estabilidad de los complejos de replicacin.

ADN POLIMERASAS
Como ya se ha indicado, son las enzimas responsables de la
insercin especfica de d-NTP que muestran, adems, capacidad de correccin y reparacin. Se han estudiado con detalle
las ADN polimerasas de E. coli, desde el aislamiento de la primera por Kornberg, en 1955, lo que ha facilitado el conoci-

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

miento de las caractersticas propias de las que actan en otros


organismos procariotas y eucariotas.
La enzima aislada por Kornberg, denominada ADN polimerasa I, se trata de un monmero de 103 Kd, capaz de adicionar d-NTP, de forma especfica, a un extremo 3c-hidroxilo de
una cadena de ADN previa, segn la reaccin:

309

La ADN polimerasa I
es capaz de adicionar
d-NTP de forma especfica a un extremo
3'-hidroxilo de una
cadena previa de
ADN.

(ADN)n restos  d-NTP o (ADN)n  1 restos  PPi


Requiere, por tanto, la existencia de una cadena cebadora
que ofrezca un 3c-OH libre, sobre el que actuar, provocando un
ataque nucleoflico del grupo hidroxilo sobre el tomo de fsforo ms interno de un d-NTP (Fig. 23.7), que da lugar a un
puente fosfodister, con eliminacin de pirofosfato, el cual es
hidrolizado posteriormente por una pirofosfatasa. Un aspecto
esencial de su funcionamiento es el hecho de estar dirigido por
un molde, es decir, un mismo centro activo es capaz de catalizar la insercin de cualquiera de los cuatro d-NTP, pero la ubicacin simultnea de la hebra molde condiciona el proceso
para que la posibilidad de incorporacin de un desoxinucletido sea mnima si no puede aparearse con el de la otra hebra,
segn la correspondencia de Watson y Crick, por lo que el nuevo filamento sintetizado es una copia fiel del original, dependiente en todo momento de la hebra que acta como molde.
Pero no es sta la nica actividad que realiza esta enzima. Por
digestin con proteasas se obtienen dos fragmentos del mismo,
uno pequeo que manifiesta actividad 5c-3c exonucleasa, y
otro grande, denominado fragmento de Klenow, que conserva

Figura 23.7. Unin de nucleotidos por la ADN polimerasa I.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La ADN polimerasas
II est involucrada en
los procesos de reparacin del ADN.

las propiedades de ADN polimerasa y de 3c-5c exonucleasa.


Son, pues, tres las actividades a su cargo: ADN polimerasa,
3c-5c exonucleasa y 5c-3c exonucleasa, correspondiente, cada
una de ellas, a otros tantos centros activos que ocupan posiciones diferentes en la molcula (Fig. 23.8). La actividad
3c-5c exonucleasa cataliza la hidrlisis de la cadenas de ADN en
el extremo 3c donde exista un nucletido no apareado, lo que
constituye un mecanismo reparador de errores de insercin,
durante la polimerizacin. Por su parte, la actividad 5c-3c exonucleasa escinde la cadena tanto en el extremo 5c terminal
como en puntos prximos a ste, jugando un papel importante
en la correccin de errores que alteran la estructura normal del
ADN y en la eliminacin del ARN cebador durante el proceso
de replicacin.

Figura 23.8. Fragmentos obtenidos por digestin de la ADN polimerasa I.

La ADN polimerasas
III es 100 veces ms
activa para la insercin de nucletidos
que la I, siendo el
componente principal
del complejo multienzimtico responsable
de la sntesis de ADN.

Adems, se han aislado otras dos enzimas, ADN polimerasa II y ADN polimerasa III, que participan en el proceso
de replicacin de ADN. Ambas incorporan desoxinucletidos
5c-trifosfato en el extremo 3c-OH de una cadena preexistente,
manteniendo la direccin de sntesis 5c-3c y tienen, adems,
actividad 3c-5c exonucleasa. Las evidencias han puesto de
manifiesto que la ADN polimerasa II est involucrada en los
procesos de reparacin del ADN, mientras que la ADN polimerasa III es el componente principal de un complejo multienzimtico responsable de la mayor parte de la sntesis de
ADN, del que forma parte tambin la ADN polimerasa I, que
se encarga de eliminar el cebador y completa los huecos con
nuevo ADN, ademas de ejercer la misin correctora que le es
propia.
La ADN polimerasa III es un holoenzima compuesto de 10
subunidades con una eficacia para la insercin de nucletidos
del orden de cien veces mayor que la de ADN polimerasa I. El
conjunto se organiza en forma de dmero asimtrico que abraza a la cadena de ADN, formando un anillo, de manera que
ejerce su funcin deslizndose a lo largo de la cadena.
En eucariotas, tambin existen diferentes ADN polimerasas.
Se ha identificado una ADN polimerasa a, con cuatro subuni-

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

dades, una de ellas con accin primasa y otra, la mayor, donde


reside la capacidad polimerasa de la enzima. Otra enzima identificada es la ADN polimerasa d, con dos subunidades, que se
asocia a una protena nuclear denominada PCNA para constituir un complejo de sntesis que rodea a la cadena de ADN.
Las evidencias parecen apuntar a que la ADN polimerasa D tiene como misin la sntesis de la cadena rezagada, mientras que
la G podra estar dedicada a la sntesis de la cadena conductora. Tambin se conoce una ADN polimerasa e, que participa
en la reparacin del ADN.

TRANSCRIPCIN
Es el proceso por el que se sintetiza ARN, a partir de un
fragmento de ADN, iniciando as un flujo de informacin que
culmina con la sntesis de ARNm y, finalmente, de protenas;
o con la de formas estables de ARN (ARNt, ARNr, ARNnp),
con fines de regulacin o cataltico. Las secuencias de ADN
utilizadas corresponden a genes o grupos de genes que constituyen una unidad de transcripcin, precedidos de secuencias especficas de control. Un aspecto importante del proceso
es, precisamente, que el inicio de la sntesis de ARN no se
produce en puntos cualesquiera de la cadena de ADN, sino
en lugares determinados denominados promotores, que generalmente anteceden a los genes, es decir, se localizan arriba
del nucletido que inicia la sntesis, el cual es designado
como nucletido 1. Es en estos puntos donde se fijan las
ARN polimerasas, para comenzar la transcripcin. De la doble cadena del ADN, una es la que acta como molde o cadena (), que sirve de soporte y modelo para la insercin de
ribonucletidos, y la otra es la hebra codificante o cadena (),
que contiene la informacin a transferir al ARN, comenzando
desde el nucletido 1 hasta el punto de finalizacin, abajo,
en direccin 5c-3c.
La sntesis de ARN est dirigida por ARN polimerasas dependientes de ADN que, a diferencia de las ADN polimerasas,
no requieren una cadena cebadora previa. La enzima inserta
nucletidos trifosfato de ribosa (NTP) siguiendo la complementaridad con las bases de una hebra molde de ADN, con la salvedad de que el complementario de la Adenina, en el molde,
es el uracilo, en la nueva cadena. El mecanismo de reaccin es
similar al de las polimerasas de ADN, mantenindose por tanto
la direccin de sntesis 5c-3c; y una cuestin importante es que
carecen de actividad nucleasa, por lo que no estn capacitadas
para la correccin de errores.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El ARN se sintetiza a
partir de un fragmento de ADN mediante
el proceso de transcripcin.

Transcripcin en procariotas: En las bacterias, los promotores estn situados siempre aguas arriba, constituidos por
dos secuencias que, aunque varan en los diferentes promotores, muestran nucletidos que se repiten en todos ellos, lo que
permite definir las denominadas secuencias de consenso. En E.
coli, se sitan en torno a las posiciones 10 y 35 y las secuencias de consenso son, para el primero, TATAAT, que es conocida como TATA o caja de Pribnow, y, para el segundo,
TTGAC (Fig. 23.9).

Figura 23.9. Secuencias de consenso en promotores de procariotas.

El inicio de la sntesis de ARN se produce en lugares determinados de la cadena


de ADN, denominados promotores.

Las ARN polimerasas


se fijan en los puntos
promotores para comenzar la transcripcin.

Un solo tipo de ARN polimerasa dependiente de ADN se


encarga de la transcripcin en procariotas. Se trata de una holoenzima compuesta de varias subunidades (D, E, Ec, Y y V).
La subunidad V es la responsable del reconocimiento de los lugares especficos para el inicio de la sntesis, al comienzo de la
unidad de transcripcin. El proceso se desarrolla con una fase
de inicio, donde la ARN polimerasa se une al promotor provocando la separacin parcial de la cadena de ADN y la incorporacin de los dos primeros nucletidos que se aparean con sus
complementarios en la cadena molde, en el punto de comienzo
(posicin 1), y posteriormente resultan unidos por enlace fosfodister. Por lo general la sntesis comienza con la insercin de
un nucletido de adenina o guanina que conserva su carcter
de trifosfato durante todo el proceso. A partir de aqu comienza
la fase de elongacin en la que van insertndose los NTP a
medida que se desplaza la ARN polimerasa. La cadena naciente se mantiene unida, en un tramo de unos 12 nucletidos, al
ADN molde, formando un hbrido ADN-ARN que va escindindose a medida que se insertan nuevos nucletidos (Fig. 23.10),
lo que permite que la cadena de ADN vaya recuperando su estructura original. El proceso de transcripcin determina la aparicin de tensiones en el ADN, por modificacin del superenrollamiento, lo que exige la participacin de enzimas topoisomerasas. La sntesis contina hasta que determinadas secuencias
en el ADN molde y la participacin de factores proticos terminadores provocan la disociacin de la ARN polimerasa, y con
ello, la finalizacin de la transcripcin. El ARN formado constituye el transcrito primario, que tiene carcter policistrnico al

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

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Figura 23.10. Desplazamiento de la ARN polimerasa.

proceder de unidades de transcripcin compuestas por ms de


un gen.
Transcripcin en eucariotas: Aunque, sustancialmente,
el proceso tiene lugar de forma similar al de procariotas, existen diferencias importantes en cuanto a estructura de la unidad
de transcripcin, promotores y enzimas que participan; y en
cuanto a transformaciones del ARN transcrito primario en la
etapa de maduracin.
En el ncleo de las clulas eucariticas se distinguen tres
ARN polimerasas diferentes, encargadas de la sntesis de los
distintos tipos de ARN, la de Tipo I, que se encuentra en el nucleolo, preside la sntesis de ARNr de cadena grande (28s, 18s
y 5,8s), la de Tipo II, situada en el nucleoplasma, sintetiza
ARNm y ARN de pequeo tamao. Finalmente, la de Tipo III,
que tambin se encuentra en el nucleoplasma, se encarga de la
sntesis de ARNt y ARNr 5s. Todas ellas catalizan la formacin
del enlace fosfodister de la misma manera que las procariticas, mediante ataque nucleoflico del resto 3c-OH de la cadena
naciente sobre el fosfato ms interno del NTP, no requieren una
cadena cebadora, la direccin de sntesis es 5c-3c y carecen de
actividad nucleasa. Tambin existe una ARN polimerasa dependiente de ADN en las mitocondrias.
Ademas de los promotores, en las clulas eucariticas son
necesarias determinadas protenas que colaboran en la identificacin de los puntos de unin para las ARN polimerasas, la
propia fijacin de stas y el inicio de la transcripcin. Tales
protenas constituyen los denominados factores de transcrip-

La sntesis de ARN es
dirigida por ARN polimerasas dependientes de ADN.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Se distinguen tres
ARN polimerasas diferentes en el ncleo
de las clulas eucariticas que se encargan de la sntesis de
los distintos tipos de
ARN.

cin (TF), de los cuales existen tipos especficos para cada


ARN polimerasa (TFI, TFII y TFIII, respectivamente). La ARN
polimerasa II reconoce un nmero muy elevado de promotores diferentes que se localizan aguas arriba, en direccin 5c del
punto de iniciacin de la transcripcin (1). La secuencia ms
cercana, en eucariotas superiores, se localiza alrededor del nucletido -25 y corresponde a un compartimento TATA (caja de
Hogness), en cuyo reconocimiento participa el factor de transcripcin TFIID (Fig. 23.11). Este compartimento no es suficiente para mantener una actividad transcripcional elevada del
promotor y es necesaria la intervencin de otros compartimentos que se sitan por arriba, entre los nucletidos 40 y
110 (secuencias CAAT, CG y otras). La iniciacin comienza
con la fijacin de TFIID al compartimento TATA y seguidamente los restantes, TFIIA y TFIIB. A continuacin se incorpora la ARN polimerasa II y TFIIE, constituyendo el denominado
aparato bsico de transcripcin, que sintetiza ARNm a baja
velocidad. Para un mayor rendimiento se requiere la participacin de otros factores transcripcionales que acten sobre sus
respectivos centros de control. La actividad de un nmero elevado de promotores eucariticos, relacionados con genes de
tipo II, se incrementa de manera notable por intervencin de
las denominadas secuencias intensificadoras (enhancers), que
se encuentran en posiciones diversas, hacia arriba, hacia abajo o en medio de un gen. Una propiedad de stos es que slo
son activos en tipos concretos de clulas que dispongan de
protenas estimuladoras del intensificador. Por ejemplo la

Figura 23.11. (A) Localizacin de promotores en eucariotas. (B) Localizacin de los factores TFII-A, TFII-B,
TFII-D y TFII-E. La ARN-pol. II y TFII-E se unen al complejo despus de que lo hayan hecho los factores
TFII-A, D y E.

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

315

unin hormona-receptor, en el caso de hormonas esteroideas,


constituye un compuesto activador del intensificador capaz de
potenciar la transcripcin de un determinado grupo de genes.
El hecho de que la protena receptora aparezca slo en tejidos
especficos restringe la actividad del intensificador y el mbito
de intervencin de la propia hormona, a las clulas de ste.
Una situacin parecida sucede con los intensificadores virales
que, en gran medida, son la causa de la especificidad de las
infecciones vricas, en lo que se refiere tanto a hospedadores
como a tipos de tejidos susceptibles.

Procesos de maduracin del ARN


transcrito primario
Una parte del ARN transcrito de clulas procariticas y,
prcticamente, de todas las eucariticas sufre un proceso de
transformacin postranscripcional conocido como maduracin,
que puede corresponder a: cortes especficos en la cadena, adicin de secuencias nucleotdicas en ambos extremos de la cadena o transformacin de nucletidos existentes.
Los ARN ribosmicos tanto de procariotas como de eucariotas se sintetizan a partir de un precursor largo o ARN prerribosmico. Tambin los ARNt proceden de precursores ms
largos que son recortados en sus extremos 5c y 3c. En ocasiones
el precursor contiene varios ARNt que han de ser separados
mediante cortes especficos en la cadena dirigidos por enzimas
RNasas integradas por un componente protico, acompaado
en algunos casos de ARN cataltico, como en el caso de la
RNasa-P. Otras transformaciones propias de los ARNt son la incorporacin de secuencias CCA en el extremo 3c por la nucleotidil transferasa y la modificacin de bases que ocupan posiciones caractersticas, por metilacin, reduccin o desaminacin.
Los ARNm de eucariotas, a diferencia de los procariotas,
son sintetizados en molculas precursoras grandes que son sometidas a un proceso de corte y empalme hasta acabar dando
ARNm ms pequeos, aptos para la codificacin de un polipptido. La razn de esto es que los genes eucariticos contienen secuencias intercaladas no codificantes (intrones) que separan a las codificantes (exones), situacin que queda reflejada
en el transcrito primario, el cual, asimismo, contiene intrones y
exones. La eliminacin de los intrones se hace mediante cortes
y empalmes (splicing), llevado a cabo, en la mayora de los casos, por un complejo enzimtico nuclear que contiene protenas y ARN nuclear pequeo denominado espliceosoma. En
otras ocasiones se ha podido comprobar la capacidad, en de-

El ARN transcrito sufre un proceso de


transformacin postranscripcional denominado maduracin.

Los ARN ribosmicos


se sintetizan a partir
de un precursor largo
o ARN prerribosmico.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

terminados ARN, de auto-corte de intrones. Adems de los


procesos de eliminacin de secuencias no codificantes, en los
ARNm eucariticos se producen otras transformaciones, como
son: la incorporacin de un casquete en el extremo 5c de la cadena, formado por un resto de 7-metil-guanosina que se une al
nucletido 5c-terminal mediante un enlace poco frecuente
5c,5c-trifosfato; y, tambin, la unin por el extremo 3c-OH de
una secuencia de 20 a 250 nucletidos de adenina que constituye la cola poli(A).

POLINUCLETIDO FOSFORILASA
La polinucletido fosforilasa es una enzima no dependiente
de ADN que polimeriza ARN de forma aleatoria incorporando
nucletidos de ribosa
para formar un polinucletido.

Es una enzima no dependiente de ADN que polimeriza


ARN de forma aleatoria, incorporando nucletidos para formar
un polinucletido de ribosa. Fue aislada en 1955 por M. Grunberg-Manago y S. Ochoa, en bacterias. La reaccin requiere
nucletidos-5c-difosfatos, sin que puedan ser incorporados los
trifosfatos. Los nucletidos son unidos por enlace 3c,5c-fosfodister. Un aspecto caracterstico de la reaccin y que, probablemente, delata el papel de esta enzima, es su carcter fcilmente reversible, por lo que puede dirigirse en el sentido de la
hidrlisis de la cadena. Es posible que su papel en la clula sea,
en realidad, la degradacin de ARN para dar los correspondientes NDP libres.

TRANSCRIPTASA INVERSA Y REPLICASAS

En clulas eucariticas se ha identificado


una enzima similar a
la transcriptasa inversa, produciendo ADN
a partir de ARN en
los telmeros de los
cromosomas.

La biologa de los virus ha incorporado al dogma fundamental del flujo de informacin gentica nuevas posibilidades
como son la sntesis de ADN y ARN dependientes de ARN.
Como se trat en el tema 20 de la primera parte, los retrovirus son virus con ARN como material gentico, que desarrollan su ciclo de infeccin incorporndose al genoma del huesped, para lo que necesitan transcribir la informacin desde
ARN a ADN, esto es, en sentido inverso. Tal accin es llevada a
cabo por una enzima vrica denominada transcriptasa inversa o
retrotranscriptasa. Durante el proceso de infeccin, el virus introduce su genoma codificado en un ARN monohebra junto
con la enzima, que cataliza la formacin de una cadena complementaria de ADN, formando un hbrido ADN-ARN, y posteriormente degrada la cadena de ARN sustituyndola por ADN
complementario del primero, con lo que queda ultimado el duplex. Al igual que las ADN y ARN polimerasas, la transcriptasa
inversa contiene Zn2 en su molcula y, para iniciar el proceso

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

requiere un cebador, para lo que utiliza un ARNt que es introducido por el virus en el proceso de internalizacin. El ARNt se
aparea con su secuencia complementaria en el extremo 3c de la
cadena de ARN viral, permitiendo la accin de la transcriptasa
inversa que incorpora nucletidos en direccin 5c-3c al igual
que las dems polimerasas. Esta enzima carece de actividad
3c-5c correctora, por lo que su tasa de error es relativamente
elevada (1/20.000).
En clulas eucariticas se ha identificado una enzima que
utiliza un mecanismo similar a la transcripcin inversa, produciendo ADN a partir de ARN, en los telmeros de los cromosomas. El ADN telomrico plantea un problema especial, porque
al ser el ADN del cromosoma una estructura lineal, no es posible, con las enzimas habituales, situar un cebador en los extremos y, posteriormente, sustituirlo por ADN. Para evitar el acortamiento paulatino del cromosoma, por prdida de nucletidos
de los extremos, en cada ciclo de replicacin, existe una enzima, la telomerasa, constituida por protena y ARN que contiene copias de los fragmentos telomricos. Mediante una retrotranscripcin, la telomerasa incorpora ADN telomrico obtenido a partir del ARN.
Finalmente, existe otra enzima vrica capaz de sintetizar
ARN complementario a partir del ARN del virus, conocida
como ARN polimerasa dependiente de ARN o ARN replicasa. La enzima cataliza la sntesis de ARN en direccin 5c-3c,
requiriendo como molde ARN. Tienen una alta especificidad,
lo que hace que slo acten con ARN del virus.

317

La ARN replicasa o
ARN polimerasa dependiente de ARN es
capaz de sintetizar
ARN complementario
a partir de ARN viral.

RESUMEN
Replicacin del ADN: Es un proceso de sntesis de
ADN que permite obtener una copia exacta de otra previa
que acta como molde. Es semiconservativa; se desarrolla en ambos sentidos, a partir de un punto de origen en
procariotas, o varios en eucariotas; La sntesis de ADN tiene lugar en direccin 5c-3c, a cargo de ADN polimerasas,
y para su inicio se requiere una pequea molcula cebadora, habitualmente ARN. Una de las cadenas, la que
coincide con la direccin 5c-3c, denominada hebra conductora o gua, se sintetiza de forma continua, en tanto
que la otra, la hebra rezagada, lo hace en secuencias cortas, conocidas como fragmentos de Okazaki, que posteriormente son unidas. Como cebador se utiliza un pe-

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318

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

queo fragmento de ARN, sintetizado por primasas, siendo posteriormente eliminado por accin exonucleasa de la
ADN polimerasa I. ADN polimerasas: Son las enzimas
responsables de la insercin especfica de d-NTP que
muestran, adems, capacidad de correccin y reparacin.
La transcripcin es el proceso por el que se sintetiza ARN
a partir de un fragmento de ADN, partiendo de lugares especficos de la cadena de ADN denominados promotores, que generalmente anteceden a los genes, y est dirigida por ARN polimerasas dependientes de ADN. Ademas
de los promotores, en las clulas eucariticas son necesarios factores de transcripcin (TF). Maduracin del
ARN: Una parte del ARN procaritico y, prcticamente,
todos los eucariticos sufren un proceso de transformacin
postranscripcional conocido como maduracin, que puede
corresponder a cortes especficos en la cadena, adicin de
secuencias nucleotdicas en ambos extremos de la cadena
o transformacin de nucletidos existentes. Polinucletido fosforilasa: Es una enzima no dependiente de ADN
que polimeriza ARN de forma aleatoria. Transcriptasa
inversa y replicasas: Los retrovirus introducen su genoma codificado en un ARN monohebra junto con una enzima transcriptasa inversa que cataliza la formacin de
una cadena complementaria de ADN, formando un hbrido ADN-ARN, y posteriormente degrada la cadena de
ARN sustituyndola por ADN complementario del primero, con lo se obtiene un dplex completo de ADN. En clulas eucariticas se ha identificado una enzima, la telomerasa, que utiliza un mecanismo similar a la transcripcin inversa, produciendo ADN a partir de ARN, en los
telmeros de los cromosomas. La ARN polimerasa dependiente de ARN o ARN replicasa es otra enzima vrica capaz de sintetizar ARN complementario a partir del ARN
del virus.

APLICACIONES CLNICAS
Desde hace algn tiempo se ha tratado de establecer una
relacin directa entre el acortamiento de los telmeros cromosmicos y procesos de envejecimiento celular que conducen
a la prdida de vitalidad y capacidad de divisin en los tejidos.
En 1986 Howard Cooke, examinando regiones telomricas de
cromosomas sexuales humanos, observ que stas eran ms

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REPLICACIN Y TRANSCRIPCIN DEL ADN

cortas en clulas somticas que en las lneas germinales, sugiriendo que la paulatina prdida de la secuencia telomrica protectora podra limitar la capacidad de proliferacin en estos tejidos. Desde entonces se ha suscitado una controversia que
poco a poco se va despejando con trabajos que aportan una
relacin causal entre acortamiento de los telmeros y senescencia celular, comprobada tanto en envejecimiento de cultivos celulares como en tejidos humanos, in vivo. La identificacin de
la telomerasa, una nucleoprotena capaz de restaurar las secuencias telomricas, mediante transcripcin inversa, a partir
del ARN que la integra, es un mecanismo esencial para el mantenimiento de la integridad de los telmeros, que abre perspectivas insospechadas. Si el acortamiento de los telmeros constituye, de alguna manera, un reloj celular que delimita la expectativa de vida en una clula, los sistemas que lo previenen
deben apuntar hacia una inmortalizacin de sta. La mayor
parte de las clulas somticas humanas no expresan una subunidad de la telomerasa conocida como hTRT (transcriptasa inversa de la telomerasa humana), con lo que, a pesar de disponer del resto de unidades de la enzima, sta no resulta activa.
Bodnar y colaboradores han comprobado que la activacin de
la telomerasa en cultivos celulares humanos a los que se haba
incorporado genes hTRT, provocaba una elongacin artificial
en los cromosomas, por adicin de secuencias repetidas
TTAGGG, que constituyen las terminaciones normales en las
regiones telomricas, acompaada de una espectacular alteracin en la capacidad de crecimiento de las clulas. Se sabe que
los telmeros humanos pierden alrededor de 100 pb en cada
ciclo de divisin y, cuando han sido eliminadas algunas pocas
kilobases, la clula detiene su divisin y envejece. Sin embargo,
se desconoce qu mecanismo est implicado en la deteccin
del acortamiento telomrico y de qu forma interviene en el
funcionamiento celular. Lo que pocos dudan es de que este
proceso tiene que jugar un papel importante como sistema supresor tumoral en clulas que hayan alterado el patrn normal
de crecimiento. El avance en este campo de investigacin abre
nuevas perspectivas en el control de las enfermedades tumorales, pero tambin en otros campos en los que sea un aspecto
clave el mantenimiento de la vitalidad celular, como en el caso
de enfermedades crnicas degenerativas o en las alteraciones
patolgicas del envejecimiento.

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319

TEMA 24

Sntesis
de protenas

Ribosomas. Activacin de aminocidos. Iniciacin


y ciclo de elongacin. Inhibidores de la sntesis de
protenas. El cdigo gentico.

En el esquema del flujo de la informacin gentica, la traduccin constituye el ltimo paso que materializa la informacin contenida en el ADN, mediante la descodificacin de rdenes que determinan finalmente la secuencia de cadenas polipetdicas concretas. Unas molculas del tipo ARN transferente
actan como adaptadores encargados de hacer corresponder
las distintas rdenes genticas, transcritas desde el ADN a
ARNm, y dirigir la insercin de aminocidos de forma especfica, de tal manera que se establece una correspondencia entre
la secuencia de nucletidos y la cadena de aminocidos sintetizada, correspondencia que sustenta el concepto de cdigo
gentico. El orden en el que aparecen los distintos nucletidos
en el ADN es, pues, determinante de la composicin del polipptido que se sintetiza, concretamente, se sabe que cada grupo de tres constituye una orden gentica elemental que dirige
la insercin de un aminocido determinado y es conocido
como codn. El conjunto de codones responsables de la sntesis de una cadena polipeptdica completa se ordena a lo largo
de una secuencia de ADN constituyendo un gen. La sntesis de
protenas tiene lugar en fases. Tres son comunes a otros procesos de sntesis de cadenas complejas: Iniciacin, elongacin y
finalizacin. En sta han de considerarse, adems, otras fases
adicionales: una previa de carcter preparatorio, con la activacin de aminocidos, y otra, posterior a la finalizacin, que
consiste en la maduracin y plegamiento del polipptido formado. En el proceso participan ms de un centenar de molculas distintas, lo que pone de manifiesto su complejidad. Un grupo de ellas se estructuran formando los ribosomas, verdaderas
maquinarias de montaje en la sntesis de protenas en las que

La traduccin constituye el ltimo paso


para materializar la
informacin contenida en el ADN.

La sntesis de protenas tiene lugar en


tres fases: iniciacin,
elongacin y finalizacin.

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322

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

los diferentes tipos de ARNr desempean un papel activo junto


a protenas.

RIBOSOMAS
Los ribosomas son
orgnulos celulares
desprovistos de membrana, constituidos
por diferentes tipos
de ARN ribosmico
(ARNr) y protenas
que dirigen el proceso
de sntesis proteica.

Son orgnulos celulares desprovistos de membrana, constituidos en su mayor parte por diferentes tipos de ARN ribosmico (ARNr) y protenas que actan, en realidad, como un sistema multienzimtico que dirige el proceso de sntesis de protenas. En las clulas procariticas tiene un coeficiente de
sedimentacin de 70S y est formado por dos subunidades,
una grande y otra pequea, de 30S y 50S, respectivamente
(Fig. 24.1). La subunidad pequea est consituida por un ARNr
16S y 21 protenas que se identifican de la S-1 a S-21. La subunidad grande la forman dos tipos de ARNr, 5S y 23S, y 34 protenas que se conocen como L-1 a L-34. En cada una de ellas
se localizan puntos crticos donde tienen lugar los diferentes pasos de la sntesis de protenas. En la porcin pequea, se localiza el punto de unin del ARNm, prximo al extremo 3c de la
cadena de ARNr 16S. En esta misma subunidad, en una hendi-

Figura 24.1. Estructura y composicin de los ribosomas.

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SNTESIS DE PROTENAS

323

dura se sita el punto de unin de los ARNt. La subunidad 50S


muestra tres protuberancias. Entre dos de ellas se localiza la actividad peptidiltransferasa, que se encarga de la formacin del
enlace peptdico entre los aminocidos, y en la tercera, de aspecto ms estilizado, se sita el centro GTPasa, que se encarga
de dirigir los desplazamientos de ARNm y de transferentes. Ambas subunidades tienen, por tanto, forma irregular, de modo
que, cuando se acoplan, dejan entre ellas una hendidura en la
que se inserta el ARNm durante la traduccin, el cual es ledo
en direccin 5c-3c. En el ribosoma se delimitan dos regiones en
las que participan ambas subunidades, el lugar aminoacilo o locus A, donde se produce la incorporacin de los diferentes aminoacil-ARNt durante la sntesis de la cadena polipeptdica, y el
peptidilo o locus P, en el que se encuentra el ARNt inmediato
anterior unido a la cadena polipetdica en formacin, a la espera de la incorporacin de un nuevo transferente.
En eucariotas, los ribosomas son mayores, con un coeficiente de sedimentacin 80S, exceptuando los de las mitocondrias y cloroplastos que mantienen caractersticas similares a
los de procariotas. Poseen tambin dos subunidades, la menor
de 40S contiene ARNr 18S, y la mayor, 60S, con ARNr 5S,
5,8S y 28S, y en ellos tambin se delimitan regiones A y P, con
funciones especficas durante la sntesis de protenas.

ACTIVACIN DE AMINOCIDOS
Es una fase preparatoria que tiene un objetivo doble, por
una parte, capacitar a los distintos aminocidos para que puedan ser incorporados a la cadena naciente que se va a sintetizar, mediante su unin a un transportador que es el ARNt; y,
por otra, establecer un sistema de correspondencias mediado
por el por el propio ARNt, al que se unen de forma especfica,
a travs del cual puede ser interpretado el cdigo gentico.
Adems de los 20 aminocidos y otros tantos, o ms, ARNt,
participan en esta fase enzimas aminoacil-ARNt sintetasas,
cada una de ellas es especfica de la unin de un aminocido a
su ARNt correspondiente, como establecieron Paul Zamecnik y
Mahlon Hoagland en 1957. Son enzimas dependientes de ATP
y Mg2 que catalizan la reaccin:

La activacin de aminocidos permite su


incorporacin a la cadena peptdica naciente gracias a la
unin especfica a
sus ARNt a travs de
los cuales puede ser
interpretado el cdigo gentico.

aminocido  ARNt  ATP o aminoacil-ARNt 


 AMP  PPi
En la que el pirofosfato liberado es hidrolizado a fosfato
inorgnico, lo que hace que el conjunto del proceso tenga un

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324

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Tanto el tamao de
los aminocidos
como sus propiedades, juegan un papel
preponderante en la
unin con el ARNt
adecuado.

balance energtico favorable. Por lo general existe una sola


Aa-ARNt sintetasa para cada aminocido y, cuando existen
varios ARNt para un mismo aminocido, es una Aa-ARNt sintetasa comn la que los une. La reaccin tiene lugar en dos
pasos, primero se forma un aminoacil-AMP derivado por reaccin, en el centro activo, entre el grupo D-carboxilo del aminocido y el resto fosfato en 5c del AMP con liberacin de pirofosfato, procedente del ATP. En el segundo paso, se transfiere el resto aminoacilo desde el aminoacil-AMP a la adenina
que constituye el extremo 3c del ARNt correspondiente. Pueden distinguirse dos clases de enzimas, segn el curso de esta
segunda reaccin: en las de clase I, la unin se hace en el hidroxilo 2c-OH del nucletido 3c terminal del ARNt, y posteriormente es trasladado al 3c por transesterificacin. En las de clase II, la esterificacin se produce directamente sobre el 3c-OH
del ARNt.
Cada aminoacil-ARNt sintetasa resulta doblemente especfica. Por un lado, lo es de uno de los 20 aminocidos y, por
otro, de un tipo concreto de ARNt. Este hecho es de vital importancia porque permite establecer una lnea de correspondencia unvoca entre un aminocido determinado y una secuencia anticodn, caracterstica del ARNt al que se une; y es
en base a esta relacin como cada uno de los codones del
ARNm, dirige la insercin de un aminocido especfico, a
travs de la secuencia anticodn del ARNt, a la cual se acoplan. El reconocimiento del ARNt por la aminoacil-ARN sintetasa especfica, depende de nucletidos situados en posiciones crticas (Fig. 24.2), que difieren de un ARNt a otro, localizndose preferentemente en los brazos anticodn y del
aminocido; y se ha demostrado que la alteracin de tales
nucletidos modifica la capacidad de reconocimiento especfico por parte de la enzima. Otro factor que tambin influye en
el reconocimiento es la configuracin adoptada por el ARNt
y, en algunos casos, la enzima reconoce la propia secuencia
anticodn del transferente. Tambin el tamao del aminocido y sus propiedades juegan un papel preponderante en la
unin con el ARNt adecuado. La fidelidad con la que tenga
lugar el proceso de activacin de aminocidos es esencial
para el resultado final de la sntesis, puesto que a partir de
entonces no existe comprobacin ulterior en la fase ribosmica. Muchas aminoacil-ARNt sintetasas disponen de un segundo centro especfico para correccin de pruebas, que hidroliza la unin de aquellos aminocidos que no sean correctos,
sin embargo otras obtienen niveles de precisin elevados con
la propia capacidad de discriminacin que dispone el centro
activo de la enzima.

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SNTESIS DE PROTENAS

325

Cada aminoacil ARNt


sintetasa es doblemente especfica,
tanto de aminocido
como de ARNt.

Figura 24.2. Puntos crticos en el reconocimiento del ARNt(Ala) de levadura.


(DHU: dihidrouridina; I: inosina; mI: metilinosina; mG: metilguanosina;
<: pseudourinina; T: ribotimidina.

INICIACIN Y CICLO DE ELONGACIN


Iniciacin. En esta fase tienen lugar diferentes acontecimientos que comienzan con la unin del ARNm a la unidad
pequea del ribosoma, en la que intervienen factores de iniciacin, y posterior incorporacin de un ARNt iniciador que, en
procariotas, codifica la formilmetionina (f-MET) y, en eucariotas, la metionina (MET), pero en ambos casos se trata de un
transferente distinto del que introduce el aminocido metionina
en lugares intermedios durante el proceso de elongacin de la
cadena polipetdica. Finalmente, se incorpora al conjunto la
unidad grande del ribosoma, quedando todo preparado para el
ciclo de elongacin de la cadena.
En procariotas, la metionil-ARNt-sintetasa incorpora primero el aminocido y, posteriormente, es introducido un radical
formilo en el grupo D-amino de la metionina, por accin de
una transformilasa, dando lugar al definitivo N-formilmetionilARNt. En los eucariotas, aunque el aminocido no est formilado, el ARNt que acta de iniciador es distinto al que incorpo-

La fase de iniciacin
comienza con la unin
del ARNm a la unidad pequea del ribosoma y posterior incorporacin de un
ARNt iniciador.

A continuacin se incorpora al conjunto


la unidad grande del
ribosoma, quedando
todo dispuesto para
el ciclo de elongacin
de la cadena.

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326

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

ra la metionina a lo largo de la sntesis. Todos los transferentes


que se unen a la metionina, sean iniciadores o no, disponen de
un mismo anticodn (UAC) y, por tanto, su incorporacin est
dirigida por un mismo codn del ARNm que es el AUG.
El proceso de iniciacin es bien conocido en las bacterias.
La formacin del complejo de iniciacin comienza con la incorporacin a la subunidad 30S de un factor conocido como IF-3
(factor de iniciacin 3), el cual impide un ensamblaje temprano
de las unidades del ribosoma. Seguidamente se une el ARNm,
de forma que el triplete iniciador 5c-AUG queda situado en un
lugar especfico. Esto ocurre as gracias a la existencia, en el
ARNm, de secuencias iniciadoras, prximas a AUG, conocidas
como secuencias de Shine-Dalgarno (Fig. 24.3), las cuales se
aparean con regiones especficas de ARN ribosmico 16S, forzando as una localizacin concreta del triplete. Son estas secuencias las que permiten, adems, distinguir entre el triplete
iniciador y el que codifica la insercin de metionina en posiciones internas del polipptido. Como se ha indicado en la seccin anterior, en los ribosomas se consideran los lugares aminoacilo (A) y peptidilo (P). Durante el proceso de sntesis de
protenas, los diferentes aminoacil-ARNt que entran, ocupan,
en primer lugar, el locus aminoacilo, sin embargo, y debido a la
posicin en la que se dispone AUG, en el ribosoma, durante la
iniciacin, el N-formilmetionil ARNt se sita directamente en el
lugar peptidilo. El siguiente paso es la incorporacin del factor
IF-2 unido a GTP y la fijacin del f-MET-ARNt a la subunidad
30S que se une al codn de inicio AUG. El paso final de la iniciacin consiste en la incorporacin de la subunidad 50S del ribosoma que coincide con la hidrlisis del GTP y su liberacin
como GDP  Pi, y la separacin de los factores IF-2 e IF-3 dando lugar al denominado complejo de inicio.

Figura 24.3. Secuencias de Shine-Dalgarno prximas a AUG en el ARNm que codifica


la protena A del fago R17.

En las clulas eucariticas se conocen hasta nueve factores


de iniciacin distintos. Uno de ellos, la protena fijadora del
casquete de ARNm (resduo de 7-metil-guanosina en el extre-

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SNTESIS DE PROTENAS

327

mo 5c del ARNm), permite la fijacin del ARNm a la subunidad


40S. A diferencia de procariotas, el ARNm eucaritico carece
de secuencia identificadora, por lo que el triplete AUG iniciador se localiza posteriormente mediante un barrido del mensajero, en el que participan factores eIF4-A, eIF4-B y eIF4-F, y se
procede a la unin del Met-ARNt, facilitada por el factor eIF2.
La fosforilacin del eIF2, a cargo de una protena kinasa, impide su regeneracin, con lo que resulta inactivado, constituyendo as un mecanismo de regulacin de la sntesis de protenas
en eucariotas. En la incorporacin de la subunidad grande
60S, que completa la estructura del complejo de iniciacin,
participa el factor eIF5, quien promueve la eliminacin de la
subunidad 40S, de factores previamente utilizados.

Se conocen hasta nueve factores de iniciacin distintos en las


clulas eucariticas.

Elongacin. Tras las fases de activacin de aminocidos e


iniciacin, la insercin sistemtica de aminocidos para construir un pptido, segn las indicaciones codificadas por el
ARNm, tiene lugar a travs del ciclo de elongacin. El proceso
es bien conocido en bacterias. Los requisitos para su puesta en
funcionamiento son:

El ciclo de elongacin consiste en la


insercin sistemtica
de aminocidos segn la informacin
codificada por el
ARNm.

a) La presencia de un complejo de iniciacin con las caractersticas explicadas anteriormente.


b) Factores proteicos de elongacin consistentes en tres
protenas designadas como EF-G, EF-Tu y EF-Ts.
c) El aminoacil-ARNt que corresponda al siguiente codn
del ARNm, inmediato al AUG en direccin 3c, y
d) GTP.
La elongacin se desarrolla mediante tres pasos que se repiten de forma cclica (Fig. 24.4). En el primero, el aminoacilARNt se une al factor EF-Tu que, previamente, ha incorporado
GTP. A continuacin, todo el conjunto se incorpora al lugar A
del complejo de iniciacin activo. En el segundo paso, se produce la transferencia del resto aminoacilo (en este caso formilmetionina) desde el ARNt que se encuentra en el lugar P, al que
ocupa el lugar A, establecindose un enlace peptdico entre
ambos aminocidos. El grupo D-amino del aminocido que
ocupa el lugar A, ejerce una accin nucleoflica sobre el enlace
ster que une el resto aminoacilo con el ARNt del locus P, desplazndolo de ste. El resultado es que, en el lugar A, el ARNt
que lo ocupa muestra en su extremo 3c los dos aminocidos,
en el orden en el que entraron, en tanto que, en el lugar P, el
primer ARNt que se fij aparece desacilado. La actividad peptidil transferasa que cataliza la formacin del enlace peptdico
corresponde al ARN 23S y no a una protena, como puso de
manifiesto H. Noller en 1992.

El proceso de elongacin contina hasta


que se incorpora un
triplete de finalizacin.

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328

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 24.4. Ciclo de elongacin. (A) Complejo de iniciacin. (B) Incorporacin del aminoacil-ARNt siguiente, con intervencin del factor EF-Tu. (C) Unin peptdica catalizada por la peptidiltransferasa. (D) Desplazamiento del ribosoma, con posterior expulsin del ARNt desacilado.

El tercer paso corresponde a la translocacin del ribosoma


que se desplaza en direccin 3c hasta que un nuevo codn se
sita en el locus A, mientras que el ARNt con los dos aminocidos (dipeptidil-ARNt) ha pasado a ocupar el locus P y el ARNt
desacilado es liberado. Este proceso requiere la participacin
del factor EF-G o translocasa y GTP.
Ahora se est en situacin de repetir el mismo esquema,
esto es, incorporacin de un nuevo transferente que sea complementario de la secuencia codn, accin peptidil transferasa
que traslada el dipptido del lugar P al lugar A, mediante enlace peptdico, lo que da lugar a un tripptidil-ARNt y, posteriormente, nueva translocacin del ribosoma. En cada uno de estos pasos intervienen los factores indicados y GTP como apor-

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SNTESIS DE PROTENAS

te de energa. As, el ciclo se va repitiendo en tanto que el ribosoma se desplaza en direccin 3c, incorporando un nuevo
aminocido cada vez, con lo que la cadena polipeptdica se
alarga desde su extremo amino hacia el carboxilo terminal. El
mismo ARNm puede ser ledo por varios ribosomas a la vez
que constituyen un polirribosoma, lo que aumenta la eficacia
del proceso.
En eucariotas, el ciclo de elongacin sigue pasos similares, con factores denominados eEF-1D, eEF-1EJ y eEF-2, cuyas acciones se corresponden con los de procariotas EF-Tu,
EF-Ts y EF-G.
El proceso de elongacin contina hasta que se incorpora
un triplete que tiene como significado la finalizacin de la sntesis. En procariotas participan tres factores de liberacin (RF)
que intervienen en la rotura del enlace que une la cadena polipeptdica al ARNt, en la liberacin como polipptido libre y en
la separacin de las subunidades del ribosoma que, de esta forma, queda inativo. EL factor RF-1 reconoce los codones terminadores UAG y UAA, en tanto que RF-2 reconoce a UGA y
UAA En eucariotas un solo factor de liberacin eRF reconoce
los tres codones de finalizacin.
A partir de ahora, la cadena polipeptdica entrar en una
fase de maduracin en la que es sometida a plegamiento y modificaciones que incluyen proteolsis en puntos especficos, modificacin de cadenas laterales de determinados aminocidos,
formacin de enlaces covalentes entre puntos determinados,
generalmente puentes disulfuros entre restos de cistena, e incorporacin de grupos prostticos, entre las ms relevantes.

329

Durante la fase de
maduracin las protenas son sometidas
a plegamiento y modificaciones que incluyen proteolsis en
puntos especficos de
la cadena.

INHIBIDORES DE LA SNTESIS
DE PROTENAS
La posibilidad de interferir de forma especfica e irreversible
sobre la mayor parte de los procesos que constituyen la sntesis
de protenas, a travs de sustancias inhibidoras, es un fenmeno ampliamente utilizado en la naturaleza como estrategia
competitiva entre los distintos seres vivos, especialmente microorganismos. Antibiticos y toxinas integran la mayor parte del
arsenal de este tipo de sustancias. Los aminoglucsidos (estreptomicina, neomicina, tobramicina, etc.) actan inhibiendo la
sntesis bacteriana de protenas en etapas iniciales de activacin y en la formacin del complejo iniciador. La estreptomicina impide la translocacin del ribosoma a lo largo del ARNm lo
que bloquea la traduccin e impide la incorporacin de nuevos
ribosomas. Las tetraciclinas se unen a la subunidad 30S de ri-

A travs de sustancias inhibidoras se


puede interferir de
forma especfica e
irreversible a lo largo
del proceso de la sntesis de protenas.

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330

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los antibiticos y las


txinas bacterianas,
integran la mayor
parte del arsenal de
sustancias inhibidoras.

bosomas bacterianos impidiendo la incorporacin del aminoacil-ARNt al locus A y, adems, ejercen un efecto quelante sobre
el Mg2, dificultando la unin de las dos subunidades ribosmicas. Los fenicoles (cloranfenicol) bloquean la transferencia de
la cadena peptidlica del locus P al locus A, impidiendo la formacin del enlace peptdico, efecto que puede aparecer tambin en algunas clulas eucariticas, lo que explica la toxicidad
de estos frmacos.
Otro grupo de inhibidores con especial repercusin en el
hombre son las toxinas. La toxina diftrica, procedente del
Corynebacterium diphteriae, acta sobre el factor de elongacin eucaritico eEF-2, responsable de la translocacin del ribosoma. La toxina produce una ADP-ribosilacin en un resto
modificado de la histidina, denominado diftamida. La transformacin de la diftamida bloquea la capacidad de eEF-2 para
promover el desplazamiento del ribosoma sobre el ARNm.
Tambin la ricina, procedente del ricino, tiene una accin inhibidora sobre los ribosomas eucariticos.

EL CDIGO GENTICO

De los 64 tripletes de
nucletidos identificados, 61 codifican
aminocidos y tres,
UAA, UAG y UGA,
son tripletes de finalizacin, provocando
la liberacin de la cadena peptdica sintetizada.

Desde la identificacin de los cidos nuclicos como soporte de la informacin gentica, se haca evidente que el orden
en el que apareca la secuencia de nucletidos codificaba la
insercin de aminocidos en la sntesis de una cadena polipeptdica. Puesto que son 20 los aminocidos a codificar, la
mnima unidad de codificacin habra de construirse al menos
con secuencias de tres nucletidos, ya que de ello resultaran
combinaciones suficientes para este propsito (43 64). En los
aos sesenta, los trabajos realizados por Nirenberg, Mathaei y
Leder y finalmente las observaciones de Khorana contribuyeron decisivamente a la identificacin de los tripletes de nucletidos que codificaban todos los aminocidos, estableciendo
una especie de diccionario que se conoce como cdigo gentico (Tabla 24.1).
De las 64 combinaciones, 61 codifican la insercin de aminocidos y tres, UAA, UAG y UGA, se denominan codones sin
sentido, cuyo papel es indicar el punto de finalizacin del proceso, provocando la liberacin de la cadena polipeptdica, junto con los correspondientes factores de liberacin.
Una de las caractersticas ms notorias del cdigo gentico
es el hecho de que un mismo aminocido venga codificado por
varios codones, por lo que se dice que el cdigo est degenerado, sin embargo, ello no quiere decir que sea ambiguo, puesto
que un mismo triplete slo puede especificar un aminocido

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SNTESIS DE PROTENAS

331

Tabla 24.1. Cdigo gentico. En negrita se muestran resaltados


los tripletes de terminacin y el de iniciacin.
U

UUU
UUC
UUA
UUG

Fen
Fen
Leu
Leu

UUC
UUC
UCA
UCG

Ser
Ser
Ser
Ser

UAU
UAC
UAA
UAG

Tirl
Tir
Final
Final

UGU
UGC
UGA
UGG

Cis
Cis
Final
Trp

U
C
A
A

CUU
CUC
CUA
CUG

Leu
Leu
Leu
Leu

CCU
CCC
CCA
CCG

Pro
Pro
Pro
Pro

CAU
CAC
CAA
CAG

His
His
Gln
Gln

CGU
CGC
CGA
CGG

Arg
Arg
Arg
Arg

U
C
A
A

AUU
AUC
AUA
AUG

Ile
Ile
Ile
Met

ACU
ACC
ACA
ACG

Tre
Tre
Tre
Tre

AAU
AAC
AAA
AAG

Asp
Asp
Lis
Lis

AGU
AGC
AGA
AGG

Ser
Ser
Arg
Arg

U
C
A
G

GUU
GUC
GUA

Val
Val
Val

GCU
GCC
GCA

Ala
Ala
Ala

GAU
GAC
GAA

Asp
Asp
Glu

GGU
GGC
GGA

Gli
Gli
Gli

U
C
A

La secuencia de nucletidos codifica la


secuencia de aminocidos en la sntesis
peptdica.

concreto. El orden en que se lee un codn es 5c-3c, como corresponde a la direccin de avance del ribosoma, y el triplete
anticodn del ARNt se inserta en direccin 3c-5c, es decir, que
la primera base del codn se aparea con la tercera del anticodn. De los tres nucletidos del transferente, el primero de
ellos puede formar combinaciones al margen del patrn de
Watson y Crick, mediante puentes de hidrgeno ms dbiles
que las uniones A-U y G-C. Este hecho sustenta la hiptesis del
balanceo, que afecta a la unin de los ARNt al mensajero, y
que justifica la existencia de ms de un codn para la mayora
de los aminocidos. Segn esto, los dos primeros nucletidos
del codn establecen uniones estrictas, segn el modelo habitual, con el tercero y segundo del anticodn, respectivamente,
siendo responsables de la especificidad definitiva de la secuencia, en tanto que la tercera base del triplete codn puede unirse, de manera menos especfica, con el primero del anticodn,
lo que hace que un mismo aminocido pueda ser codificado
por secuencias que se diferencien en el tercero de los nuclotidos, dentro de unos lmites. As, arginina o leucina disponen de
hasta seis secuencias codificadoras, mientras que triptfano o
metionina slo de una. La hiptesis del balanceo puede esquematizarse segn cuatro relaciones establecidas por Crick:
1. Las dos primeras bases de un codn establecen uniones
estrictas con el anticodn, segn el modelo de apareamiento de Watson y Crick.
2. La primera base de un anticodn, que se aparea con la
tercera del codn, determina el nmero de codones que
pueden ser compatibles. As, cuando se trata de C o A,

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332

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

la fijacin resulta especfica y corresponde a un solo


codn; por el contrario, cuando se trata de U o G, el
mismo ARNt puede leer dos codones; y, si se trata del
nucletido modificado inosinato, el ARNt puede fijarse
hasta con tres codones diferentes.
3. Cuando un aminocido viene especificado por diferentes codones, los que difieren en las dos primeras bases
requieren ARNt distintos.
4. Para la traduccin de los 61 codones son necesarios 32
ARNt.
Como regla general, el ARNm es ledo desde el triplete iniciador AUG, hacia el extremo 3c, siguiendo la secuencia de codones, en un nico marco de lectura, es decir, considerando la
primera base contigua al AUG como inicio del triplete y as sucesivamente (Fig. 24.5), hasta llegar a un triplete terminador.
Se ha observado en virus la utilizacin de diferentes marcos de
lectura, como consecuencia de la existencia de genes solapados, es decir, genes que constituyen fragmentos de otro gen.
Otra posibilidad de modificacin del marco de lectura de un
ARNm es la edicin postranscripcional, como sucede en el caso
de la sntesis de la apolipoprotena B de la LDL (lipoprotena
de baja densidad), en el hombre, que permite la sntesis de las
formas heptica e intestinal de la misma, a partir de un nico
ARNm, por accin de una enzima citosina desaminasa intestinal, que provoca la transformacin de un codn especfico
CAA en el triplete de finalizacin UAA, resultando as la forma
corta intestinal de la protena.

Figura 24.5. Ejemplo de utilizacin de diferentes marcos de lectura en el gen D, del ADN del virus IX174,
que contiene el gen E. En la secuencia superior, la lectura a partir del triplete iniciador AUG en el ARNm
transcrito da lugar a una protena, en tanto que una modificacin en el marco de lectura que afecta al codn
UAU (tyr), es ledo como AUG (Met), lo que inicia una segunda protena.

El cdigo gentico es
universal, siendo de
aplicacin a la totalidad de los seres vivos.

El cdigo gentico tiene una vigencia universal, siendo aplicable a la totalidad de los seres vivos, con algunas excepciones
encontradas en mitocondrias, cloroplastos y algunos eucariotas
unicelulares.

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SNTESIS DE PROTENAS

RESUMEN
La traduccin constituye el ltimo paso que materializa
la informacin contenida en el ADN. Unas molculas del
tipo ARN transferente actan como adaptadores dirigiendo la insercin de aminocidos de forma especfica, de tal
manera que se establece una correspondencia entre la secuencia de nucletidos y la cadena de aminocidos sintetizada. Un grupo de tres nucletidos consecutivos, en el
ARNm, constituye una orden gentica elemental que dirige la insercin de un aminocido determinado y es conocido como codn. Los ribosomas son orgnulos celulares
desprovistos de membrana, constituidos en su mayor parte por diferentes tipos de ARN ribosmico (ARNr) y protenas que actan como un sistema multienzimtico que dirige el proceso de sntesis de protenas. La sntesis de protenas se produce en fases: Activacin de aminocidos:
con un objetivo doble, capacitar a los distintos aminocidos para que puedan ser incorporados a la cadena naciente y establecer un sistema de correspondencias que interprete el cdigo gentico. Iniciacin: que comienza con la
unin del ARNm a la unidad pequea del ribosoma, en la
que intervienen factores de iniciacin, y posterior incorporacin de un ARNt iniciador. Finalmente, se incorpora al
conjunto la unidad grande del ribosoma, quedando todo
preparado para la siguiente fase. Elongacin: donde tiene lugar la insercin sistemtica de aminocidos para
construir un pptido, segn las indicaciones codificadas
por el ARNm. Finalizacin: el proceso de elongacin
contina hasta que se incorpora un triplete que tiene
como significado la finalizacin de la sntesis. Maduracin: en la que los polipptidos sintetizados son sometidos a plegamiento y modificaciones que incluyen proteolisis, modificacin de cadenas laterales, formacin de enlaces covalentes, generalmente puentes disulfuros e
incorporacin de grupos prostticos. Inhibidores de la
sntesis de protenas: los aminoglucsidos (estreptomicina, neomicina, tobramicina, etc.) inhiben la sntesis bacteriana en etapas iniciales de activacin y en la formacin
del complejo iniciador. La estreptomicina impide la translocacin del ribosoma a lo largo del ARNm. Las tetraciclinas impiden la incorporacin del aminoacil-ARNt al locus
A y, adems, ejercen un efecto quelante sobre el Mg2, dificultando la unin de las dos subunidades ribosmicas. Los

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334

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

fenicoles (cloranfenicol) bloquean la transferencia de la cadena peptidlica del locus P al locus A. La toxina diftrica
acta sobre el factor de elongacin eucaritico eEF-2, responsable de la translocacin del ribosoma. La ricina, procedente del ricino, tiene una accin inhibidora sobre los ribosomas eucariticos. El cdigo gentico: se han identificado los tripletes de nucletidos que codifican todos los
aminocidos, lo que se conoce como cdigo gentico. De
las 64 combinaciones, 61 codifican la insercin de aminocidos y tres indican finalizacin del proceso. Se dice
que el cdigo est degenerado por el hecho de que un
mismo aminocido puede estar codificado por varios codones, pero no es ambiguo, puesto que un mismo triplete
slo puede especificar un aminocido concreto. El cdigo
gentico tiene una vigencia universal, con algunas excepciones encontradas en mitocondrias, cloroplastos y algunos eucariotas unicelulares.

APLICACIONES CLNICAS
Por lo general, el marco de lectura de un ARNm es nico y
comienza con la primera base del triplete contiguo al AUG iniciador. No obstante, en determinadas ocasiones, las modificaciones en el patrn de lectura permiten la obtencin de formas
variadas del polipptido, conservando su funcionalidad o bien
adquiriendo otra (vase el apartado Cdigo Gentico). Sin
embargo, otras variaciones en el marco de lectura del ARNm
conducen a alteraciones patolgicas como las que tienen lugar
en relacin con la sntesis de hemoglobina, como consecuencia de alteracin en los codones terminadores. Las talasemias
constituyen un conjunto de sndromes que afectan a la estructura y tamao de las cadenas D y E que integran la hemoglobina. La talasemia D se produce por mutacin en el codn terminador UAA, en posicin 142, lo que provoca cadenas de
globina D ms largas de lo normal, por lo general de 172 aminocidos, en lugar de 141. En la talasemia E0 no se sintetiza la
globina E debido a una mutacin en el codn 17 del gen, que
transforma AAG (lisina) en el terminador UAG. Los pptidos
obtenidos no tienen capacidad para constituirse como cadenas E funcionales y, en consecuencia, la globina D se acumula
precipitando y alterando la membrana celular, provocando un
sndrome hemoltico. Otras mutaciones que alteran el marco
de lectura normal del ARNm que codifica cadenas de globina

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SNTESIS DE PROTENAS

conducen, por el contrario, a situaciones de policitemia, como


en el sndrome de McKees Rocks. En este caso, la mutacin
afecta al codn en posicin 145 de la globina E, que codifica
tirosina, de UAU o UAC a los finalizadores UAA o UAG, lo
que provoca un ligero acortamiento desde 146, que son los
residuos normales, a 144. El resultado es una cadena funcional, pero con una apetencia muy elevada por el oxgeno, lo
que es compensado con un aumento de la eritropoyesis que
lleva a la situacin de policitemia.

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335

TEMA 25

Tecnologa de
ADN recombinante

Fundamentos de la clonacin. Vectores de clonacin. Estrategia de la clonacin. Aplicaciones a las


ciencias mdicas.

La tecnologa del ADN recombinante comprende una serie


de mtodos para identificar un gen (o segmentos concretos de
ADN) en un organismo, aislarlo, analizarlo, si es preciso, modificarlo y reinsertarlo dentro de otro organismo consiguiendo
que se exprese con normalidad.
Los objetivos de este conjunto de tcnicas son, principalmente:
1. Obtener grandes cantidades del producto del gen.
2. Conocer las consecuencias de una determinada modificacin del gen en el funcionamiento celular.
3. Sustituir un gen defectuoso por otro normal.
Estas tcnicas han permitido un avance considerable de la
biologa y gentica molecular, la medicina, la agricultura y la
ecologa. En medicina estn proporcionando nuevos mtodos
de diagnstico, de agentes teraputicos y revelando el mecanismo molecular de diversas enfermedades.

FUNDAMENTOS DE LA CLONACIN
El conjunto de bacterias que surgen de una bacteria aislada
en una placa de cultivo, y que se conoce como colonia, es, sencillamente, un clon. Clonar es hacer copias idnticas de unos
organismos, clulas, virus o molculas de ADN derivadas de la
replicacin de un nico progenitor gentico. Mediante la clonacin se puede disponer de cantidades suficientes de un nico
tipo de clulas.

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338

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Etapas de la clonacin:
1. C o r t e d e l A D N
genmico por sitios especficos.
2. Eleccin de molculas de ADN (vectores) capaces de
autorreplicarse.
3. Unin de los fragmentos de ADN a
los vectores.
4. Introduccin de
los fragmentos de
ADN-vector en clulas husped.
5. Seleccin e identificacin de clulas
husped con el vector e inserto adecuado.

Las enzimas de restriccin reconocen y


cortan ADN de doble
cadena por sitios especficos.

La clonacin de un gen o un fragmento de ADN implica la


separacin del resto del genoma, la unin a una molcula portadora y la insercin en un organismo para poder amplificarlo
muchas veces. Con este procedimiento se pueden obtener miles e incluso millones de copias del gen o fragmento de ADN
inicial.
La clonacin requiere bsicamente las siguientes etapas:
1. Corte del ADN genmico por sitios especficos y obtencin de los fragmentos de ADN.
2. Eleccin de molculas de ADN (vectores) capaces de
autorreplicarse y corte especfico de las mismas.
3. Unin de los fragmentos de ADN a las molculas autorreplicativas (recombinacin).
4. Introduccin de ambas en una clula husped.
5. Seleccin e identificacin de clulas husped que contienen el ADN recombinante.
El corte del genoma para obtener fragmentos de ADN se
realiza mediante enzimas de restriccin o endonucleasas de restriccin. Estas sustancias reconocen secuencias especficas de
ADN de doble cadena y cortan ambas en lugares especficos.
Las secuencias reconocidas son palindrmicas, esto es, poseen
simetra rotacional respecto a un eje. Los cortes son de dos tipos: uno en que se cortan las cadenas simtricamente respecto
a un eje y otro en que se cortan en el mismo punto. El primero
deja extremos cohesivos o adhesivos y el segundo extremos romos (Fig. 25.1).

Las palabras o frases


palindrmicas son
aquellas que son
iguales se comience
por la primera o por
la ltima letra:
Radar.
Dbale arroz a la
zorra el abad.

Figura 25.1. Especificidad de las enzimas de restriccin. La Ban H1 y


la Eco RI dejan extremos cohesivos y la HhaI romos.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

Figura 25.2. Fragmentos de ADN obtenidos de un genoma con diferentes enzimas de restriccin. Los fragmentos de mayor tamao son los de parte superior. El tamao de los fragmentos se conoce comparando con fragmentos
patrones de longitud conocida.

Se han caracterizado y purificado cientos de enzimas a la


que se denomina por una abreviatura correspondiente a la especie bacteriana de la que derivan. As, Bam de Bacillus amgloliquefaciens, Eco de Escherichia coli, Hal del Haemophilus
aegyptius, etc.
Los fragmentos de ADN resultantes dependiendo del tamao, se pueden separar por electroforesis en geles de poliacrilamida o agarosa; los geles de poliacrilamida separan fragmentos de unos mil pares de bases y los de agarosa de 15.000 a
20.000 pares de bases. Los fragmentos se separan en bandas
que se pueden visualizar aadiendo a la disolucin de los geles
colorantes como bromuro de etidio, que a la luz ultravioleta
presenta una intensa fluorescencia de color naranja. La longitud o tamao de los fragmentos de ADN se puede conocer mediante la comparacin de las bandas con fragmentos patrones
de longitud conocida (marcadores). Cada fragmento de ADN
se puede purificar cortando la banda correspondiente del gel,
eliminando la matriz del gel y el colorante.

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340

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Una sonda es un fragmento de ADN (o


ARN) monocatenario
con el fosfato final
marcado con 32P.

Para identificar en cul de las bandas se encuentra el gen o


la secuencia de ADN de nuestro inters se suele realizar una hibridacin. Esta tcnica consiste en desnaturalizar los fragmentos de ADN que aparecen en el gel despus de la eletroforesis y
transferirlos a membranas de nitrocelulosa o nylon. Las posiciones de los fragmentos en el gel se mantienen en la membrana. Despus la membrana se introduce en una disolucin que
contiene una sonda radiactiva marcada con 32P (Fig. 25.3).
Posteriormente se observa por autorradiografa el fragmento o
fragmentos de restriccin que posean una secuencia complementaria a la sonda y que, por consiguiente, haya hibridado
con ella. Esta tcnica se denomina trasferencia Southern (Sout-

Figura 25.3. Transferencia e hibridacin de ADN (o Southern blotting). Cada


banda radiactiva en la pelcula corresponde al fragmento de ADN de inters.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

341

hern blotting) en honor a su diseador E. M. Southern. De forma similar se pueden separar molculas de ARN por electroforesis en gel e identificar secuencias concretas por hibridacin.
En este caso se denomina transferencia Northern. Tambin se
puede aplicar esta tcnica para detectar una protena determinada unindola a un anticuerpo especfico y entonces se denomina transferencia Western. Resumiendo, las tcnicas Southern, Northern y Western se corresponden respectivamente
con las transferencias de ADN, ARN y protena.

VECTORES DE CLONACIN
En E. coli, el microorganismo que ms se emplea en clonacin y el mejor conocido molecular y funcionalmente, se utilizan tres vectores o vehculos de clonacin: los plsmidos, los
bacterifagos y los csmidos. Los plsmicos son molculas de
ADN circular de doble cadena extrageniomales y que se replican independientemente del cromosoma bacteriano. Su tamao oscila entre 2 y 400 kilopares de bases (Kpb), transportan genes para la inactivacin de antibiticos, produccin de
toxinas y degradacin de productos naturales. Los plsmidos
no son imprescindibles para la vida de las bacterias, algunas no
contienen ninguno y otras pueden contener hasta veinte. Se
pueden clasificar en conjugativos y no conjugativos dependiendo de si llevan o no un conjunto de genes de transferencia, denominados trans, que favorece la conjugacin bacteriana es
decir, la transferencia de material gentico de una bacteria a
otra. Los plsmidos tambin se pueden introducir sin el concurso de ningn elemento por transformacin.
Tanto en el proceso de conjugacin como en el de transformacin para detectar el ADN plsmidico, se necesita un mtodo de seleccin. La estrategia ms comn es introducir en el
plsmido un gen que la clula husped necesita para crecer
bajo determinadas condiciones o un gen que confiera resistencia frente a un antibitico, en este caso slo aquellas clulas
bacterianas que porten el plsmido sern resistentes al antibitico y podrn crecer en medios que lo contengan.
Uno de los plsmidos ms utilizados es el pBR322, que contiene genes de resistencia a la tetraciclina y a la ampicilina. El
plsmido contiene una serie de sitios especficos que pueden
ser cortados por enzimas de restriccin para introducir fragmentos de ADN. La insercin de ADN en el punto de corte de
EcoRI no altera ninguno de los dos genes de resistencia a los
antibiticos. Sin embargo, la insercin en los puntos de corte a
los Hind III, Pal 1I o Ban HI inactiva el gen de resistencia a la

Vectores de clonacin:
Plsmidos: pBR322
pBR328
Bacterifagos: Fago
l, T2, Fago m.
Csmidos.

Conjugacin bacteriana. Una bacteria


transfiere a travs de
un pili un cordn de
su genoma a otra
bacteria.

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342

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 25.4. Plsmido pBR322. Se indican los puntos de corte de algunas


enzimas de restriccin y las zonas que codifican resistencia a tetraciclina y ampicilina.

Figura 25.5. Transduccin o infeccin por fagos de una bacteria. El ADN del
fago controla el sistema metablico y replicativo bacteriano y termina por destruirla. En algunos casos el ADN del fago se inserta en el de la bacteria.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

tetraciclina, y el PstI resistencia a amplicilina. Las clulas bacterianas que contengan pBR322 con un fragmento de ADN insertado en el punto de corte de, por ejemplo, Hind III, son resistentes a la ampicilina y sensibles a la tetraciclina, y se pueden seleccionar fcilmente observando las colonias que crecen
en amplicilina y no aparecen en la placa que contiene tetraciclina. Las clulas que no portan el plsmido son sensibles a los

Figura 25.6. Identificacin de la colonia bacteriana que porta


el vector con el fragmento de ADN de inters.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 25.7. Esquema de clonacin de un fragmento de ADN procaritico en


E. coli con pBR322 (ampR ampicilina resistente, tetR tetraciclina resistente).

dos antibiticos, mientras los que lo portan, pero no llevan insertado el ADN, son resistentes a ambos.
El bacterigrafo ms utilizado como vector es el fago O. Este
bacterigrafo tiene un mecanismo muy eficaz para introducir
ms de 48 Kpb de ADN en la bacteria. El procedimiento general para clonar ADN en el fago O se basa en dos caractersticas
de su genoma:
1) Cerca de un tercio de su genoma puede ser reemplazado por ADN forneo.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

345

2) El ADN se empaqueta en partculas de fago de alrededor de 40-50 Kpb.


Cuando los fragmentos de ADN de un tamao adecuado se
ligan al ADN del fago, los ADN resultantes se pueden empaquetar dentro de partculas de fago, por adiccin de extracto
crudo de clulas bacterianas que contienen todas las protenas necesarias para ensamblar un fago completo. Ese proceso se denomina empaquetamiento in vitro. Los fagos pueden infectar bacterias de E. coli bien destruyndolas o insertando su ADN en el genoma de la bacteria. En este ltimo
caso el ADN del fago se replica junto al ADN de la clula
durante muchas generaciones. Ciertos cambios ambientales
pueden poner en marcha la expresin del ADN del fago y
desencadenan los procesos que conducen a la lisis de la
bacteria.
Los csmidos estn construidos a partir de plsmidos y genes O. Los csmidos son molculas de ADN pequeas
(5-7 Kpb), circulares y con las siguientes caractersticas:

Los csmidos estn


construidos a partir de
plsmidos y genes l.

1) Un origen de replicacin plasmdico.


2) Uno o ms marcadores seleccionables.
3) Varios sitios de restriccin donde se puede insertar el
ADN exgeno y
4) Un sitio cos, que es una secuencia de ADN del bacterifago que se necesita en el equipamiento.
Genotecas. Una genoteca es una coleccin de fragmentos
derivados del genoma de un organismo insertados en un vector de clonacin. El vector se introduce en microorganismos
(generalmente bacterias o levaduras) de tal forma que cada clula contenga un fragmento del ADN recombinante. El procedimiento se basa en romper el ADN en muchos fragmentos y,
posteriormente, clonarlos todos. Esto es, la informacin contenida en un organismo est representada en el conjunto de fragmentos de la genoteca. Los fragmentos se insertan en el ADN
de un vector previamente tratado en la misma enzima de restriccin que se ha utilizado para la rotura del ADN. La mezcla
(fragmento ADN-vector) se usa para transformar las clulas
bacterianas o se empaqueta en partculas de fago. El resultado
final es una serie de bacterias o fagos en que cada portador de
una molcula de ADN recombinante es diferente. Al conjunto
de todos ellos se le denomina genoteca, librera genmica o biblioteca genmica.
Para identificar el gen de inters en una genoteca se hacen
crecer las bacterias en medio slido de forma que en las placas
se puedan apreciar colonias bacterianas individuales.

Las genotecas son


colecciones de fragmentos obtenidos del
genoma de un organismo e insertados en
vectores de clonacin.

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346

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Posteriormente, se procede como anteriormente, esto es, se


tratan las bacterias con lcali para desnaturalizar su ADN y se
transfieren las clulas a una membrana de nitrocelulosa o nylon. Posteriormente, las placas se sumergen en una disolucin
que contiene una sonda de ADN marcada radiactivamente que
hibrida con el ADN del gen complementario. Se lava la placa y
se expone a una pelcula de rayos X, las manchas que aparecen en la pelcula indican la posicin de las colonias portadoras
del inserto de ADN de inters.

ESTRATEGIA DE LA CLONACIN
La clonacin de genes eucariotas no se
puede realizar directamente del ADN, ya
que ste est constituido por exones e intrones.

Los intrones no se traducen y las bacterias


no tienen mecanismos
para eliminarlos.

La transcriptasa inversa sintetiza ADN


partir de ARNm. El
ADN obtenido se denomina ADNc (ADN
complementario).

La clonacin de un gen es un procedimiento en teora relativamente sencillo. Si el ADN procede de una clula bacteriana,
una vez extrado y purificado se trata con una enzima de restriccin que deje extremos cohesivos. Si se elige como vector de clonacin, un plsmido (pBR322) se corta con la misma enzima de
restriccin para que queden extremos que se complementen con
los de los fragmentos de ADN. Ambos elementos se unen mediante la ADN ligasa. Los plsmidos con el inserto sufren una
primera seleccin en placas con antibiticos a los que son resistentes. Posteriormente, bien con una sonda, de forma semejante
a como se identifican los fragmentos de ADN, o bien extrayendo
el plsmido, cortndolo en la misma enzima de restriccin y realizando electroforesis se pueden seleccionar aquellas clulas bacterianas que llevan el plsmido con el inserto de ADN de inters.
La clonacin de genes eucariticos (vegetales o animales)
plante, al principio, serios problemas, puesto que la mayora
de sus genes son un conjunto de intrones y exones. Por ello, estos genes no pueden ser expresados en bacterias que carecen
de la maquinaria necesaria para cortar los intrones y eliminarlos del transcrito. Esta dificultad se supera introduciendo en la
bacteria plsmidos con fragmentos de ADN complementario
(ADNc) del ARNm. Esto es, existe una enzima denominada
transcriptasa inversa que sintetiza ADN a partir de un ARNm.
Para su accin la enzima requiere:
a) Los cuatro desoxirribonuclesidos trifosfato (dNTP);
b) ARNm purificado.
Posteriormente, se forma un doble cordn ADN-ARN que
se somete a degradacin alcalina para hidrolizar el ARN. El
ADN monocatenario o de simple cordn se trata con ADN polimerasa que requiere los 4 dNTP, un cebador o primer y la
cadena de ADN que le sirve de molde. El resultado es un fragmento de ADN bicatenario que se denomina ADNc.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

347

Figura 25.8. Sntesis de ADN complementario (ADNc) a partir de


ARNm de un rgano de mamfero.

A partir de este ADNc el procedimiento sigue el mismo camino que la clonacin de fragmentos de ADN de clulas procariticas.
Tcnicas en ingeniera gentica: PCR y secuenciacin
de ADN.
Existen dos tcnicas que han supuesto un avance espectacular en la investigacin sobre el ADN genmico:
a) La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
b) La secuenciacin de fragmentos de ADN.
Anteriormente hemos estudiado que la clonacin del ADN
genmico permite lograr dos objetivos importantes: Primero
separa cada fragmento de ADN de los dems del genoma, y
segundo, amplifica segmentos de ADN seleccionados. Despus
de que el ADN o regin particular del ADN ha sido clonado,
debe conocerse su secuencia.
La tcnica de PCR permite obtener millones e incluso miles
de millones de copias de cualquier secuencia seleccionada del
ADN genmico en unas pocas horas. Una propiedad importante de esta tcnica es que no hace falta que el segmento de
ADN elegido sea separado del ADN genmico antes de comenzar el procedimiento de amplificacin. Sin embargo, una
vez que se ha amplificado, el segmento puede separarse fcilmente del resto de ADN (que no se ha amplificado) mediante
la electroforesis en gel.

La tcnica de PCR
permite obtener millones de copias de
un fragmento de ADN
sin necesidad de separarlos previamente
del genoma.

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348

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Una mezcla de reaccin de PCR contiene:


1. Genoma o fragmento de ADN.
2. Los cuatro desoxirribonuclesido trifosfato.
3. Un primer o cebador.
4. La enzima taq.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se realiza en


un tubo de plstico de pequea capacidad (0,2 ml) al que se
aaden los siguientes componentes: El fragmento de ADN de
doble cadena que se desea amplificar, las cuatro dNTP, el primer o cebador y un ADN, polimerasa estable al calor. Esta
ADN polimerasa (taq) procede de la bacteria termfila Thermus acuaticus y es estable y activa a 72 C.
Un ciclo de PCR consta de 5 etapas, dos de ellas, la inicial y
final, se realizan solamente una vez y las tres intermedias un
nmero prefijado de veces que se denominan ciclos (entre 25 y
40) (Fig. 25.9).

Figura 25.9. Esquema de la etapa cclica de la reaccin en cadena de la ADN


polimerasa. Despus de un ciclo se amplifica el ADN dos veces; despus de 25
el fragmento de ADN se puede amplificar unas 106 veces.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

349

Las tres etapas intermedias son:


a) Separacin de las cadenas de ADN por calentamiento
(94-95 C) durante unos segundos.
b) Hibridacin de los cebadores. La disolucin se enfra
(52-54 C) para que se unan las cadenas de ADN separadas.
c) Sntesis de ADN. Se calienta la disolucin (72 C) para
que la ADN polimerasa sintetice nuevas cadenas de
ADN a partir de los cebadores.
Estas tres etapas (separacin de las hebras, hibridacin de
los cebadores y sntesis de ADN) se llevan a cabo repetitivamente cambiando nicamente la temperatura de la mezcla de
reaccin. No es necesario aadir ningn reactivo despus del
primer ciclo. El fragmento de ADN se puede ampliar segn 2n,
siendo n el nmero de ciclos; esto es, despus de 25 ciclos se
puede amplificar unas de 106 veces (Fig. 25.10).

2', 3'- didesoxirribonuclesido trifosfato.


El compuesto impide
el crecimiento de la
cadena porque carece
de grupos hidroxilo
en los carbonos 2' y
3'.

Figura 25.10. Diagrama de una reaccin de PCR tpica. Los nmeros por encima de la lnea indican la temperatura y por debajo el tiempo en minutos:
segundos.

El anlisis de la estructura del ADN se puede realizar por


varios mtodos, pero el que se utiliza casi con exclusividad en
los ltimos aos es el desarrollado por F. Sanger y colaboradores y que se denomina mtodo por interrupcin controlada de
la replicacin enzimtica.
El mtodo para secuenciar un fragmento de ADN se basa
en copiar uno de los cordones de ADN mediante la ADN polimerasa. El cebador para la sntesis es un fragmento complementario que se puede obtener por digestin con una enzima
de restriccin o por sntesis qumica. La reaccin contiene
adems los cuatro desoxirribonuclesido trifosfato, un anlogo,
2c, 3c-didesoxirribonuclesido trifostato, de una base, el cual
impide, cuando se introduce en la cadena, un crecimiento posterior de esta. Como el compuesto entra en la cadena al azar,
se producen fragmentos de distinta longitud. El proceso se repite con otra muestra del fragmento original y el anlogo cargado
con otra base diferente. Los cebadores se marcan con una sus-

3'AGTAGACATGAC
GA5' 5'TC3'
3'AGTAGACATGAC
GA5' 5'TCATC3'
3 ' A G TA G A C T G A C
GA5'
3'TCATCT6AC3'
3'AGTAGATGAC6G
A5'
5'TCATCTGAC3'

Fragmentos de ADN
de distintos tamaos
obtenidos en la sntesis de una cadena
cuando en la mezcla
de reaccin se incorpora 2,3-didesoxicitidin trifosfato.

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350

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

tancia con diferente color segn sea la base terminal, as, azul
para adenina, rojo para citosina, verde para timina y amarillo
para guanina.
Las mezclas de reaccin se juntan y se someten a electroforesis. Las bandas separadas de ADN se detectan por fluorescencia al salir del gel, y la secuencia de colores se corresponde
con la de las bases. El mtodo se realiza en un aparato automtico de secuenciacin que puede determinar de una vez cerca de un millar de bases.

APLICACIONES A LAS CIENCIAS MDICAS

Aplicaciones de la Ingeniera gentica a


las ciencias mdicas:
Conocer la funcin
y expresin de los
genes.
Obtener substancias con fines teraputicos en cantidades adecuadas.
Diagnstico precoz
de enfermedades.
Obtencin de animales transgnicos.
Terapia gnica.
Aplicaciones de la
tcnica del PCR.
Detectar virus y
bacterias en los tejidos.
Detectar cnceres
en estadios precoces.
Determinar el parentesco entre individuos.
Identificar individuos mediante la
huella dactilar del
ADN.

Los descubrimientos producidos en los ltimos aos utilizando las tcnicas de ADN recombiante o Ingeniera gentica y
los relacionados con ellas han permitido obtener un mejor conocimiento de la estructura, organizacin y expresin de los genes, y han posibilitado su aplicacin en diferentes campos de
las ciencias. En medicina la aplicacin de estas tcnicas ha
abierto nuevas esperanzas en el diagnstico, prevencin, deteccin y terapia de varias enfermedades.
Las tcnicas de ADN recombinante han permitido la insercin y expresin de genes, que codifican productos de inters
biomdico en bacterias, levaduras, y el crecimiento a escala industrial ha facilitado la obtencin de cantidades apreciables de
protenas y pptidos humanos de gran utilidad para el tratamiento de determinadas enfermedades que hasta entonces se
obtenan slo en pequeas cantidades de tejidos animales o de
cadveres.
La mayor parte de las enfermedades genticas no tienen un
tratamiento eficaz, y las que lo tienen se basan tanto en el
aporte peridico de sustancias que el organismo no puede fabricar, como en evitar la acumulacin de un producto nocivo
provocado por la carencia de la enzima necesaria para su metabolismo. Una solucin teraputica sera la insercin del gen
normal en las clulas defectuosas del individuo enfermo y su
expresin correcta; este proceso se denomina terapia gnica.
Para aplicar esta clase de terapia es necesario, principalmente,
conocer el gen defectivo y clonar el gen homlogo normal.
Posteriormente, hay que saber en qu clulas suele estar activo,
ste es punto clave del proceso porque un gen slo puede ser
insertado en clulas accesibles, por ejemplo, clulas de la sangre o de la piel. Actualmente se estn ensayando varios protocolos clnicos para el tratamiento de enfermedades genticas
como la carencia de adenosina desaminasa (ADA), la fibrosis
qustica, las anemias hemolticas, la hemofilia, etc.

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TECNOLOGA DE ADN RECOMBINANTE

La obtencin de animales transgnicos mediante la microinyeccin de embriones con el gen o por transduccin con
retrovirus ha permitido obtener fundamentalmente ratones
transgnicos que tienen gran inters como modelos de enfermedades gnicas como la enfermedad de Tay-Sachs y la Diabetes mellitus.
Por otra parte, la tcnica de PCR tambin est proporcionando una ayuda valiosa a las ciencias mdicas. Mediante esta
tcnica se pueden detectar la presencia de bacterias y virus en
la sangre y tejidos de un individuo antes de que ste desarrolle
una respuesta inmune. Tambin se pueden detectar cnceres
en un estadio temprano. En medicina forense esta tcnica permite conocer el parentesco de personas. Un simple cabello, una
pequea mancha de sangre o de semen suelen ser suficientes
para obtener cantidades adecuadas de ADN para un anlisis
posterior. Otra aplicacin interesante es en el transplante de rganos. En este proceso el aceptor rechaza el rgano cuando los
antgenos HLA del donante no son suficientemente parecidos a
los del aceptor. La amplificacin de los genes por PCR permite
determinar los tipos de HLA y comprobar sus diferencias o
analogas.

RESUMEN
La tecnologa del ADN recombinante o Ingeniera
gentica ha supuesto un desarrollo extraordinario en el conocimiento de las bases moleculares de la vida. El diseo
y construccin de molculas recombinantes se basa en el
conocimiento de los mecanismos de replicacin del ADN,
de la estructura, de la organizacin y de la regulacin de la
expresin gnica.
La clonacin de un gen o fragmento de ADN de clulas procariotas requiere un corte especfico del ADN genmico por enzimas de restriccin, y la eleccin de un vector
adecuado para unir el gen. Los vectores ms utilizados son
los plsmidos, los baceteriofagos y los csmidos. El vector
con el gen se introduce en clulas hospedadoras para su
multiplicacin. La identificacin de las clulas con el inserto de inters se suele realizar mediante sondas radiactivas
segn la tcnica de transferencia de Southern. La clonacin de genes de clulas eucariticas requiere la obtencin
previa del ADN a partir de ARNm mediante la transcriptasa inversa.

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351

352

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La informacin contenida en el ADN de un organismo


se puede fragmentar, unirse a vectores de clonacin y almacenarse. Al conjunto de todos ellos se denomina genoteca o librera de genes.
Dos tcnicas han permitido un avance espectacular de
la Ingeniera gentica: La de la reaccin en cadenada de la
polimerasa (PCR) y la secuenciacin automtica de nucletidos.
La aplicacin de las tcnicas de ADN recombinante
est mostrando su valiosa utilidad en el diagnstico y prevencin de varias enfermedades y en las nuevas terapias a
aplicar.

APLICACIONES CLNICAS
La terapia gnica en las enfermedades hereditarias se aplic
por primera vez en 1990 a una nia de cuatro aos que padeca carencia de adenina desaminasa (ADA). Esta enzima del
sistema inmunolgico y su deficiencia expone a los pacientes a
contraer fcilmente enfermedades infecciosas. El gen que codifica la ADA suele estar activo en los linfocitos, por lo que fue
relativamente fcil extraer esas clulas de la sangre del paciente
e identificarlo.
Posteriormente, se introdujo el gen correcto en clulas precursoras de los linfocitos utilizando vectores basados en retrovirus. Este proceso permiti la correccin de la enfermedad debido a la deficiencia de ADA.
Otros casos susceptibles de aplicar una terapia gnica son
aquellos en los que el gen alterado es el responsable de la produccin de una sustancia presente en la sangre, donde su funcin es necesaria, por ejemplo, en las enfermedades hemoflicas debidas a la carencia de un factor de coagulacin. En estos
caso se puede insertar el gen correcto en cualquier tipo de clula del mismo organismo con tal de que ste pueda sintetizar
el producto e introducirlo en la sangre. Hay bastantes tipos de
clulas capaces de realizar esta funcin, como las clulas del tejido conjuntivo subcutneo, de la epidermis o de los msculos.

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TEMA 26

Regulacin de
la expresin gnica

Modelo del opern. Genomas eucariticos. Protenas reguladoras de la transcripcin.

El conjunto de reacciones que tienen lugar en las clulas vivas est regulado y coordinado de forma precisa. Como se ha
visto anteriormente uno de los procesos que interviene en la
regulacin de una ruta metablica es a travs de la actividad
de sus enzimas, la cual puede ser controlada por varios factores, cambios alostricos y modificaciones covalentes. Otro proceso de control es a travs de la sntesis de enzimas, esto es, regulando la expresin gnica. Una clula de E. coli puede contener 10-15 molculas de una protena cuando utiliza un
determinado nutriente como fuente de carbono. Si en un momento determinado se cambia de nutriente, la velocidad de
sntesis de la protena puede aumentar considerablemente y
despus de un corto perodo de tiempo incrementar el nmero
de molculas por encima del millar.
La transcripcin de las enzimas de una ruta metablica suele realizarse de forma coordinada, ya que estn agrupadas
constituyendo una unidad denominada opern. La transcripcin de un opern es bloqueada por protenas represoras y activada por protenas activadoras. Los cromosomas de las clulas eucariticas son de tamao mayor que las procariticas y
poseen un nivel de organizacin ms complejo. En ellas la activacin de los genes es ms importante que la supresin. Para
que se puedan expresar es necesario que se activen mediante
la unin de factores de transcripcin o protenas reguladoras a
los centros de control del ADN.

El control de la expresin gnica de todas las clulas es a


nivel del proceso de
transcripcin.

EL MODELO DEL OPERN


Las clulas de E. coli pueden ser cultivadas en medios denominados mnimos que contienem algunas sales minerales y

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354

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Opern es el conjunto de centros de control y genes estructurales.

nutrientes como glucosa, que les sirve de fuente de carbono y


energa. En estos sencillos medios de cultivo la bacteria es capaz de sintetizar todos los componentes necesarios para crecer
y desarrollarse.
La mayora de las cepas de E. coli tambin son capaces de
crecer en lactosa, un disacrido que se encuentra en la leche;
cuando este compuesto es la nica fuente de carbono, la clula
bacteriana induce la sntesis de tres nuevas enzimas que no son
necesarias cuando utiliza la glucosa. Estas enzimas son la
E-D-galactosidasa, que hidroliza la lactosa a D-glucosa y D-galactosa, la D-galactosido permeasa, que facilita el transporte de
la lactosa en la clula, y la transcetilasa, cuya funcin fisiolgica
permanece desconocida.
El estudio con mutantes defectivos y el descubrimiento de
que las cantidades de las tres enzimas se incrementaban proporcionalmente al cambiar la lactosa por la glucosa, condujeron a F. Jacob y J. Monod a pensar que la velocidad de sntesis
de las tres enzimas estaba dirigida por unos elementos comunes diferentes de los genes que las codificaban. Estos investigadores en 1961 propusieron el modelo del opern para explica
la regulacin de la sntesis de enzimas que metabolizan la lactosa. Los elementos genticos de este modelo (Fig. 26.1) son un
gen regulador (i), los centros de control (promotor (p) y operador (o)) y los genes estructurales (z, y, a).

Figura 26.1. El opern lac y su gen regulador. Los genes estructurados son los
genes que codifican las enzimas. El promotor y el operador son los centros de
control.
El represor interactua
con el operador impidiendo la transcripcin de los genes estructurales.

Estos ltimos son los que codifican la E-galactosidasa, la


permeasa y la transacetilasa. El gen regulador codifica una protena denominada represor que puede interaccionar con el
operador y, cuando esto sucede, no se produce la transcripcin
de los genes estructurales. En estas condiciones la ARN polimerasa permanece unida al promotor. sta es la situacin cuando
las clulas de E. coli crecen en glucosa, las enzimas que metabolizan la lactosa no se sintetizan porque no son necesarias.
Sin embargo, cuando las clulas crecen en lactosa, un inductor
se une al represor, desbloqueando el operador y permitiendo
que la ARN polimerasa sintetice la ARNm de lactosa que va a
codificar las tres enzimas correspondientes. Aunque el modelo

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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

del opern implica todos los elementos genticos, se suele denominar opern lac al conjunto de los centros de control (p, o)
y los genes estructurales (x, y, z). (Fig. 26.2).

355

El inductor se une al
represor desbloqueando al operador y
permitiendo que la
ARN polimerasa
transcriba los genes
estructurales.

Figura 26.2. Esquema del mecanismo de induccin de la sntesis


de enzimas del metabolismo de la lactosa.

Cuando E. coli crece sobre lactosa, el inductor es la 1,6-alolactosa, un compuesto formado a partir de la lactosa del medio, pero pueden ser inductores los E-galactsidos, como el isopropiltiogalactosido (IPTG), que no es metabolizable.
El opern lac no slo est sujeto a un control negativo sino
que la expresin de sus genes estructurales est mediada por
un control positivo. Este control impide que, en presencia de
glucosa, se induzcan los genes implicados no slo en el catabolismo de la glucosa sino de otros azcares. Ello supone un ahorro energtico, ya que prefiere utilizar glucosa (puesto que sus
enzimas se sintetizan siempre cualquiera que sea el nutriente) a
otros compuestos en que sus enzimas deben ser inducidas para
que se sinteticen. Debido a este comportamiento, las enzimas
catablicas de la glucosa se tipifican como constitutivas y las
otras inducibles.
En E. coli existe otro mecanismo regulador denominado
represor por catabolito, por el que los genes implicados en el
catabolismo de lactosa, arabinosa y otras azcares permanecen
reprimidos en presencia de glucosa.
El efecto represor de la glucosa est mediado por el AMPc
(adenosina monofosfato cclico) y una protena denominada
CAP (del ingls, Catabolite gen-activator protein). En ausencia

El opern lac est sujeto a un control negativo y un control


positivo.

Las enzimas constitutivas se sintetizan en


presencia de cualquier fuente de carbono. Las enzimas inducibles se sintetizan
slo en presencia de
un inductor.

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356

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

de glucosa, la CAP se une en un lugar especfico cercano al


promotor lac e incrementando la transcripcin del ARN ms de
50 veces. Por lo tanto, la CAP es un elemento de regulacin
positiva sensible a los niveles de glucosa, mientras que el represor lac es un elemento de regulacin negativa sensible a los niveles de lactosa.
El efecto de la glucosa sobre la CAP est mediado por el
AMPc. La unin de la CAP se realiza cuando las concentraciones de AMPc son altas y el sitio de unin del AMPc est ocupado. En presencia de glucosa, la concentracin de AMPc disminuye, impidiendo la unin de la CAP y, por tanto, disminuyendo la expresin del opern lac. De esta forma, para que haya
una fuerte induccin del opern, se requiere tanto la presencia
de lactosa (para inactivar al represor) como la ausencia o baja
concentracin de glucosa (para incrementar la concentracin
de AMPc y facilitar la unin de la CAP). El complejo CAPAMPc estimula la transcripcin al unirse al centro promotor
(Fig. 26.3).

Figura 26.3. Estimulacin de la transcripcin por el complejo CAP-AMPc en el


opern lac. (A) En presencia de glucosa. (B) En ausencia de glucosa y presencia de lactosa.
E l c o m p l e j o CA PAMPc estimula la
transcripcin al unirse a determinados
centros promotores y
favorece la unin a
ellos de la ARN polimerasa.

La CAP y el AMPc estn implicados en la regulacin coordinada de muchos operones, sobre todo para enzimas del metabolismo de azcares. Por lo tanto, se puede resumir estos hechos indicando que los operones catablicos inducibles se encuentran bajo un doble control: un opern inductor especfico

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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

357

para cada opern y el complejo CAP-AMPc, que afecta a muchos operones. Esta red de operones con un regulador comn
se denomina reguln.
La regulacin transcripcional de los operones no slo afecta
los procesos catablicos, sino que tambin opera en la regulacin de las enzimas de las rutas anablicas, como los de la sntesis de aminocidos. A este respecto uno de los operones ms
estudiados es el de la sntesis del triptfano. En E. coli, el
ARNm transcrito del opern trp codifica las cinco enzimas que
transforman el corismato en triptfano. Estas cinco protenas se
sintetizan de manera coordinada y en cantidades equimoleculares gracias a la traduccin de su ARNm polignico. La regulacin se obtiene de la interaccin de un represor especfico sobre el operador trp codificado para el gen trpR situado lejos del
opern trp. Un complejo represor-triptfano se une fuertemente al operador e impide que la ARN polimerasa pueda unirse al
promotor trp y los genes estructurados no se transcriben.

Figura 26.4. El opern trp y su gen regulador trpR. El complejo represor tripfano se une al operador impidiendo la transcripcin de los genes estructurados.

Para comprender la velocidad con que se sintetizan los genes estructurales hay que introducir un nuevo elemento descrito por Yanofsky y col. Este elemento denominado atenuador o
centro de terminacin controlada se localiza entre el operador y el primer gen estructural, y contiene una secuencia nucleotdica especfica. Cuando el triptfano escasea, se modifica la
estructura del ADN para que la ARN polimerasa sobrepase el
atenuador y transcriba los genes estructurales (Fig. 26.5).

El atenuador o centro
de terminacin controlada est situado
entre el operador y el
primer gen estructural.

GENOMAS EUCARITICOS
Los genomas de las clulas eucariticas son mayores y tienen una organizacin estructural superior a los procariticas.
Debido a que el ADN de los organismos superiores debe codificar todas las protenas especializadas que se encuentran en los

En las clulas eucariticas el proceso de


activacin de los genes es ms importante que el de represin.

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358

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 26.5. Regulacin de la transcripcin del opern Trp. (A) En exceso de


triptfano la ARN polimerasa se para en el atenuador. (B) En ausencia o escasez de triptfano la ARN polimerasa sobrepasa el atenuador al modificarse la
estructura del ADN y se transcriben los genes estructurales.

Los genomas de la
especie humana contienen un millar de
veces ms cantidad
de ADN que E. coli.

diferentes tejidos, cabra esperar que estos organismos contuvieran una cantidad mayor de ADN de la que se encuentra en
las procariotas como E. coli. Sorprendentemente la cantidad de
ADN en las clulas eucariotas es mucho mayor de la esperada.
As, el genoma humano codifica unas 50 protenas ms que
una clula bacteriana, pero el tamao es 1.000 veces superior;
evidentemente en las eucariotas existe una gran cantidad de
ADN que no codifica protenas. Mientras que en el ADN de E.
coli hay en su prctica totalidad una copia de cada gen, algunos fragmentos del ADN contienen secuencias 105 106 veces
repetidas.
Uno de los motivos del gran tamao de los genomas eucariotas es que la mayor parte de los genes eucariotas, estn inte-

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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

rrumpidos por intrones, fragmentos de ADN que no se traducen. Tambin porque hay varios tipos de secuencias de ADN
repetidas, como son los ADN satlites y los denominados elementos Alu. Los ADN satlites se encuentran cerca de los
centrmeros de los cromosomas, que son las regiones en las
que se unen las cromtides hermanas, mientras la funcin de
las secuencias Alu es todava desconocida.
El ADN de los genomas eucariticos no est libre sino unido fuertemente a un grupo de sustancias denominadas histonas. El conjunto de ambas molculas (CNA-histonas) se denomina cromatina. Se han encontrado cinco tipos de histonas:
H1, H2A, H2B, H3 y H4. Las histonas son molculas proteicas
con una masa entre 11.000 y 21.000 daltons y, por trmino
medio, cada cuatro aminocidos uno es lisina o arginina y por
eso tienen carcter marcadamente bsico (cargados positivamente).
En 1974, Kornberg propuso que la cromatina estaba constituida por unidades repetitivas de 200 pares de bases de ADN y
de dos histonas, denominando a estas estructuras nucleosomas. Por ello, la mayor parte del ADN est enrollada por el exterior de un ncleo de histonas, y el resto del ADN une los nucleosomas adyacentes de la misma forma que un hilo une las
cuentas de un collar. Estas estructuras permiten un empaquetamiento ms compacto de ADN y una estabilizacin mayor de
los cromosomas.
La replicacin del ADN eucaritico es, como en las bacterias ,de forma semiconservativa. Sin embargo, segn se ha
demostrado por microscopia electrnica, la replicacin tiene
lugar simultneamente en varios puntos. As un cromosoma
de Drosophila tiene al menos 6.000 horquillas de replicacin por molcula de ADN. La activacin de cada punto de
iniciacin genera dos horquillas de replicacin divergentes.
Las formas elipsoides que se extienden en ambas direcciones se funden para formar las dos molculas de ADN hijas
(Fig. 26.6).
Las clulas eucariticas contienen varios tipos de ADN polimerasas. Las polimerasas D y G intervienen en la replicacin
del ADN, y las E y H en la reparacin del ADN. El modo de
accin de las enzimas es semejante al de las clulas bacterianas. Como estas requieren como intermediarios activados
cuatro desoxirribonuclesidos trifosfato, un molde (del que siguen las instrucciones) y un cebador; la sntesis tiene lugar en
direccin 5c-3c.
En el ciclo celular de las clulas eucariticas el ADN se replica durante la fase de sntesis, y los cromosomas replicados se
segregan al interior del ncleo durante la fase de mitosis (M).

359

El nmero de pares
de base en la especie
humana es de
3,9 109 y en E. coli
4,0 106.

Los nucleosomas permiten un empaquetamiento ms compacto del ADN y una estabilizacin mayor de
los cromosomas. Estn formados por unos
200 pares de bases y
dos histonas.

La replicacin del
ADN eucaritico se
realiza al mismo tiempo en diferentes puntos.

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360

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 26.6. Replicacin del ADN en las clulas eucariticas.

Entre la mitosis y la sntesis de ADN existe una fase G1 (de gap,


latencia) y entre la sntesis del ADN y la mitosis se interpone
otra fase de latencia denominada G2 (Fig. 26.7).

Figura 26.7. Ciclo celular en eucariotas. En el punto R comienza


la replicacin y en el I se inicia la mitosis.

La mitosis en la especie humana est regulada por una protena denominada CDK2, y que para su actividad requiere a
otra protena denominada cclina B.

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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

361

PROTENAS REGULADORAS DE
LA TRANSCRIPCIN
Las clulas de organismos superiores utilizan para regular la
expresin gnica algunos mecanismos similares a los de las clulas bacterianas. As, en principio, la regulacin tiene lugar,
como en las clulas procariotas, a nivel de transcripcin. Sin
embargo, las clulas de organismos superiores poseen algunas
caractersticas de control propias. Entre las ms importantes
est que la cromatina sufre mltiples cambios en la estructura
de la regin que se transcribe y que existe una separacin fsica
entre la transcripcin que tiene lugar en el ncleo y la traduccin que se realiza en el citoplasma (Fig. 26.8).

Caractersticas en la
regulacin de la expresin gnica de clulas eucariotas: La
cromatina altera la
estructura, y los procesos de transcripcin y traduccin estn separados fsicamente.

Figura 26.8. Los genes de las clulas eucariticas son un mosaico de exones
(e) e intrones (c), stos no se traducen. La transcripcin tiene lugar en el ncleo
y la traduccin en el citosol.

Uno de los sistemas de control de las clulas eucariticas lo


constituye la asociacin de mltiples protenas, denominadas
activadoras, que se unen a los genes y los controlan. Las ARN
polimerasas de estas clulas, al contrario de lo que sucede con

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362

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Las hormonas constituyen un importante


control en las clulas
eucariotas.

la de las procariotas, no pueden transcribir el ADN por s solas.


Antes deben unirse a un determinado fragmento de ADN, con
una secuencia especfica activadora para actuar elevando la
formacin del complejo transcripcional.
Un segundo control de la transcripcin lo constituyen una
serie de sustancias como las hormonas esteroideas (estradiol,
cortisol, progesterona y testosterona) y tiroideas. Estas sustancias se unen a receptores propios, activndolos y permitiendo
que dichos receptores interacten con secuencias pequeas de
ADN especficas para cada complejo hormona-receptor, que se
denominan elementos de respuesta a hormonas y favorecen la
transcripcin de sus genes (Fig. 26.9).

Figura 26.9. Control de la transcripcin por hormonas esteroides.

Un tercer grupo de reguladores transcripcionales lo constituyen las denominadas protenas con cremallera de leucina. La
caracterstica ms notable de estas protenas es la presencia de
segmentos con una longitud aproximada de 35 residuos en los
que aparecen cinco leucinas. Estas protenas forman un dmero

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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

que se mantiene unido por un D-helicoide enrollado, las leucinas estabilizan la estructura mediante interacciones hidrofbicas y enlaces de van der Waals.
Estas protenas con cremallera de leucina se unen al ADN
en lugares especficos y aproximan fragmentos de ADN para
que se unan dos secuencias y se favorezca la transcripcin.
En la especie humana, las protenas con cremallera de leucina intervienen en el efecto del AMPc sobre la transcripcin.
Los genes controlados por AMPc presentan un elemento de
respuesta a este compuesto (CRE).

363

Las protenas con cremallera de leucina estimulan la transcripcin.

Figura 26.10. Control transcripcional mediado por AMPc y la protena con


cremallera de leucina CREB. M es un mensajero que no atraviesa la membrana
celular. CRE es una secuencia de ADN de 8 pares de bases y palindrmica,
que secunda a CREB.

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364

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Una protena de unin al elemento de respuesta al AMPc, la


CREB, se une a una secuencia diana, CRE, que es una secuencia palindrnica de ocho pares de bases. La dimerizacin de
CREB a travs de su cremallera de leucina acerca fragmentos
de ADN (Fig. 26.10). El AMPc se forma como sabemos por la
accin de una cascada de reacciones que activa la protena quinasa A (PKA). La fosforilacin de CREB por medio de la protena quinasa A provoca la dimerizacin y aumenta su eficacia
como activador de la transcripcin. La CREB es una diana para
la calmodulina, la protena quinasa C y para otras quinasas.

RESUMEN
Los genes de las clulas procariticas regulan su expresin fundamentalmente a nivel de transcripcin.
Los genes que codifican las protenas inducibles se
agrupan en operones, que son unidades de expresin gnica coordinada. El opern que primero se describi fue el
lac, que contiene dos centros de control y tres genes estructurales.
El AMPc estimula la transcripcin de muchos operones
catablicos al unirse a la protena activadora de los genes
catablicos (CAP).
La expresin completa del opern lac requiere tanto un
galactosido inductor como el AMPc que se forma cuando
est ausente o escasea la glucosa. Los genes que codifican
las enzimas de las rutas biosintticas tambin estn controlados con precisin. El opern trp, que es uno de los mejores estudiados, controla la transcripcin de los genes mediante un elemento denominado atenuador o centro de
terminacin controlada.
Los cromosomas eucariticos son mucho mayores y
ms complejos que los procariticos, pero la regulacin de
su expresin gnica es tambin a nivel de la transcripcin.
Sin embargo, el ADN eucaritico se une posteriormente a
protenas bsicas denominadas histonas, tiene algunas caractersticas propias por lo que se refiere a los cambios que
sufre el genoma durante la transcripcin y la reparacin fsica entre el lugar en que se realiza este proceso y la traduccin, y posee otros sistemas de control. Entre esos, los
ms importantes son:
a) la presencia de varias protenas reguladoras o factores de transcripcin que favorezca el ensamblaje del
complejo de iniciacin;

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REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA

b) la existencia de receptores nucleares que modulan


los efectos de hormonas y otras sustancias, y
c) la accin de protenas con cremalleras de leucina
que son dimeros unidos que se estabilizan gracias a
los residuos de lisina y que aproximan fragmentos
de ADN.

APLICACIONES CLNICAS
Una patologa relacionada con la sntesis de protenas son
los trastornos denominados talasemias. Las talasemias son un
grupo de hemoglobinopatas en los cuales se reduce el nivel de
sntesis de las cadenas D o E de la hemoglobina originando una
anemia severa. El nombre deriva del griego Thalassa (que significa mar), en referencia a los muchos casos encontrados alrededor del mar mediterrneo. En la mayora de las talaseminas
la estructura primaria de las cadenas de hemoglobina es normal, lo que es anmalo es la cantidad de las cadenas D (D-talasemia) y E (E-talasemia) o de los similares a la D y la E.
Las D-talasemias pueden ser debidas a defectos en la expresin de uno o de los cuatro genes que codifican las cadenas D
de la hemoglobina. Cuando son defectuosos cuatro, se produce anemia grave o muerte del organismo en el tero. Los defectos de tres genes dan lugar a la enfermedad por la hemoglobina H (Hb H), y los eritrocitos de estas personas contienen altas concentraciones de esta hemoglobina que es un tetrmero
formado solamente por subunidades E.
Las E-talasemias pueden ser de dos tipos: la talasemia E,
en la que se sintetizan cadenas E en cantidades anormalmente
pequeas, y la talasemia E0, en la que no se detectan cadenas
E en los eritrocitos.
Los lactantes con E-talasemia presentan anemia intensa antes de los dos aos de edad. Tienen icteria, hepatoesplenomegalia y cambios esquelticos que reflejan aumentos de volumen
de la mdula sea. Estos lactantes se dice que tienen talasemia
mayor. Los portadores de un alelo de E-talasemia se dice que
tienen talasemia menor.
No se conoce ningn tratamiento eficaz para las talasemias,
por lo que la deteccin de la naturaleza de los defectos genticos es de gran importancia para el tratamiento y medidas a seguir en el curso de la enfermedad.

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365

TEMA 27

Introduccin a la
inmunologa molecular

Sistema inmunitario. Inmunoglobulinas.

El organismo est en contacto continuo con agentes microbianos, potencialmente infecciosos, como bacterias, virus, hongos y parsitos, que suponen una amenaza, ya que pueden producir alteraciones patolgicas e incluso la muerte. Para combatirlos, el cuerpo est equipado con un sistema de defensa que le
proporciona un considerable grado de inmunidad, ya que en
los individuos normales la mayora de las infecciones tienen una
duracin limitada y dejan pocas lesiones permanentes.

SISTEMA INMUNITARIO
Existen dos tipos de inmunidad:
a) inmunidad innata o inespecfica, y
b) inmunidad adaptativa o especfica.
Ambos tipos de sistemas estn estrechamente interconectados,
y estn constituidos por clulas y factores solubles.

A) Inmunidad innata o inespecfica


El cuerpo cuenta con barreras mecnicas y qumicas como
primera lnea de defensa. La principal barrera de defensa es la
piel. Adems, la mayora de los fluidos corporales contienen
componentes bactericidas, como el cido del jugo gstrico o la
lisozima de la saliva y las lgrimas.
Si los microorganismos superan estas barreras protectoras, y
penetran a travs de la piel, entran en juego las clulas fagocitarias: fagocitos (monocitos/macrfagos) y granulocitos neutrfilos. Cuando penetran, por ejemplo, bacterias en los tejidos
corporales, inicialmente actan los granulocitos neutrfilos,

El sistema inmune
inespecfico est constituido bsicamente
por la piel, los componentes bactericidas de
los fluidos corporales,
las clulas fagocitarias y las clulas NK.

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368

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El sistema inmune
adaptativo elabora
una respuesta especfica para cada agente
infeccioso.

que son atrados, en gran nmero, desde la circulacin sangunea hacia el sitio de penetracin de la bacteria mediante un
proceso denominado quimiotaxis, y fagocitan los microorganismos. El proceso de fagocitosis se ve favorecido si la superficie
del microorganismo tiene unidos factores del sistema del complemento, inmunoglobulinas o ambos, ya que los neutrfilos
tienen receptores especficos para estas molculas. La digestin
del microorganismo en el interior del neutrfilo se debe a las
enzimas hidrolticas que contiene en sus lisosomas, y a agentes
oxidantes como perxido de hidrgeno (H2O2). Todos estos
procesos van acompaados de un aumento del flujo sanguneo
en la zona de la infeccin, lo que provoca un enrojecimiento, y
de un aumento de la permeabilidad capilar para las protenas,
lo que genera tumefaccin, y son los aspectos esenciales de la
inflamacin. La capacidad de defensa de los granulocitos
neutrfilos es corta debido a que su vida media es breve, aproximadamente un da. A continuacin, la defensa la desarrollan
los macrfagos, que proceden de los monocitos circulantes en
la sangre y tienen capacidad fagocitaria. Adems de los monocitos/macrfagos circulantes, existen macrfagos en los tejidos,
donde constituyen el sistema retculo endotelial (SER). Son
clulas de vida media larga.
Otro tipo de leucocitos que se encuentran en la sangre son
las clulas asesinas naturales (NK o natural killer), especializadas en la defensa inespecfica frente a los virus. Detectan alteraciones en la superficie de las clulas infectadas por virus, se
acumulan en su superficie y las destruyen mediante la apertura
de poros, proceso denominado citotoxicidad. Tambin actan
sobre algunas clulas tumorales.
Las clulas NK son activadas por los interferones, compuestos producidos y liberados habitualmente por las propias
clulas infectadas por virus. Los interferones son un grupo de
protenas importantes en la defensa frente a infecciones vricas.
Los microorganismos patgenos tambin son atacados inespecficamente fuera de los fagocitos mediante el sistema del
complemento. El sistema del complemento es una de las principales vas efectoras del proceso de inflamacin, y conduce a la
perforacin de la pared externa de las bacterias gramnegativas.
Al mismo tiempo, la lisozima del plasma, la linfa y las secreciones corporales degradan enzimticamente la pared bacteriana.

B) Inmunidad adaptativa o especfica


Algunos microorganismo patgenos y la mayora de los virus han desarrollado, a lo largo de la evolucin, mecanismos

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

para defenderse de las clulas fagocitarias, por lo que para eliminarlos ha de intervenir el sistema inmunitario adaptativo,
que elabora una respuesta especfica para cada agente infeccioso, que normalmente basta para erradicarlo. Adems, este
sistema adaptativo guarda memoria del agente infeccioso, y
puede impedir que cause la enfermedad si se tiene un segundo
contacto con el mismo. En este sistema adaptativo cooperan
macrfagos, inmunoglobulinas y distintos tipos de linfocitos.
Los linfocitos se desarrollan a partir de clulas madre hematopoyticas pluripotenciales, que estn localizadas primariamente en los tejidos hematopoyticos: el hgado en los fetos
y la mdula sea en los adultos. Durante la vida fetal y la primera infancia, algunas clulas precursoras procedentes de los
tejidos hematopoyticos migran, por va sangunea, al timo,
donde adquieren su especificidad o competencia inmune,
transformndose en linfocitos T. En los mamferos los linfocitos B se desarrollan a partir de clulas madre en la mdula
sea. El timo y la mdula sea son rganos linfoides primarios o centrales, ya que en ellos se desarrollan los linfocitos a
partir de clulas precursoras. Algunos de los linfocitos formados
en los rganos linfoides primarios, maduran y migran, va sangunea, hacia los rganos linfoides secundarios: bazo, ganglios linfticos, amgdalas y tejido linfoide no encapsulado; desde donde se desplazan a los vasos linfticos y sanguneos por
los que circulan, para participar en la defensa inmunitaria.
Los linfocitos expresan un gran nmero de molculas distintas en su superficie, algunas de las cuales aparecen brevemente
en ciertos estadios, mientras que otras son caractersticas de
distintas lneas celulares. Estas ltimas se denominan marcadores y se designan como CD (designacin de agrupamientos o
Cluster designation). Los linfocitos T expresan el complejo polipeptdico CD3 junto con el receptor antignico TCR y se pueden subdividir en dos poblaciones diferentes:

369

En la respuesta inmune especfica participan los linfocitos T,


los linfocitos B y las
clulas presentadoras
de antgeno (APC).

Los linfocitos expresan en su superficie


molculas que caracterizan a cada linea
celular.

a) Linfocitos T colaboradores (TH), que expresan CD4


(T CD4), y reconocen a los antgenos en asociacin con
molculas clase II del Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC). A su vez, estas clulas presentan dos
poblaciones, una con funcin cooperadora, que influye sobre las clulas T y B, y otra poblacin que induce
funciones supresoras/citotxicas en las clulas CD8.
b) Linfocitos T citotxicos/supresores (TC/S), que expresan CD8 (T CD8), y reconocen a los antgenos en
asociacin con molculas clase I de MHC, las cuales se
encuentran en la superficie de todas las clulas nucleadas. Las clulas T citotxicas destruyen las clulas infec-

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370

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

tadas, forneas o malignas, mediante lisis. Los linfocitos


T supresores reprimen la respuesta inmunitaria de las clulas T y B.
Los linfocitos B presentan diversos marcadores de superficie. Expresan inmunoglobulinas, que estn insertadas en su
membrana, donde actan como receptores especficos para el
antgeno. Tambin presentan receptores del complemento para
C3b, as como receptores Fc para IgG (Fig. 27.1).

Figura 27.1. Esquema de los marcadores de superficie de clulas T y clulas B humanas.

En la respuesta inmune las clulas T CD4+


son decisivas, ya que
intervienen tanto en
la respuesta celular
como en la humoral.

Las clulas presentadoras de antgeno (APC) son una


poblacin leucocitaria heterognea. Se encuentran, de forma
primaria, en la piel, los ganglios linfticos, el bazo y el timo. En
su superficie, la mayora de las APC tienen antgenos MHC clase II, importantes para la presentacin del antgeno a las clulas
T. Son clulas APC las clulas de Langerhans de la piel, y los
macrfagos. Los macrfagos actan englobando el elemento
extrao, degradan enzimticamente sus protenas de forma
muy especfica y exhiben los fragmentos peptdicos de carcter
antignico sobre la membrana celular junto con protenas MHC
de la clase II. De esta forma, los macrfagos preparan el reconocimiento del antgeno por parte de los linfocitos T CD4.
En la respuesta inmune las clulas T CD4 son decisivas, ya
que intervienen tanto en la respuesta celular como en la humoral. Si suponemos una infeccin vrica, la respuesta inmune
celular comenzar con la ingestin del virus por una clula
presentadora de antgeno (APC), generalmente un macrfago,
que lo destruye y exhibe las protenas vricas antignicas sobre
su membrana junto con una molcula MHC clase II propia del
macrfago. Las clulas T cooperadoras CD4 (TH) se activan al
unirse simultneamente al antgeno y a la protena MHC clase

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

II, a lo cual tambin contribuye la interleuquina-1 (IL-1) segregada por el macrfago. La clula TH segrega entonces interleuquina-2 (IL-2), que induce la proliferacin de las clulas T
CD8, que tambin han reconocido al antgeno, presentado por
un macrfago en el contexto de la protena MHC clase I. Algunas de las clulas CD8, linfocitos T citotxicos, matan a las clulas infectadas que exhiben el antgeno vrico. Posteriormente,
otras clulas CD8, linfocitos T supresores, se encargan de suprimir esta respuesta citotxica, desconectando la defensa inmunitaria una vez cumplida su misin. Tras la supresin persiste una poblacin de clulas T de memoria, que probablemente
se mantengan toda la vida (Fig. 27.2).

Figura 27.2. Esquema de la respuesta inmune celular.

En la respuesta inmune humoral, una clula T cooperadora CD4 (TH) se activa, como en el caso anterior, tras reconocer el antgeno presentado por un macrfago en el contexto de
una molcula MHC clase II y por accin de la IL-1 segregada
por el macrfago. La clula T CD4 se une entonces a una clula B que haya reconocido tambin el antgeno. El contacto de

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371

372

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

la clula T CD4 estimula la maduracin, multiplicacin y diferenciacin de la clula B en un clon de clulas plasmticas que
secretan inmunoglobulinas especficas frente al antgeno, en
este ejemplo el virus, al que se unen rodendolo e inactivndolo. Las linfoquinas secretadas por la clula T CD4, entre ellas
interleuquina-2, interleuquina-4 e interleuquina-6, colaboran
en la maduracin de los linfocitos B. Las clulas B tambin
pueden reconocer antgeno libre en solucin en sangre o linfa,
pero tambin necesitan la ayuda de las clulas T CD4. Una
poblacin de clulas de memoria persiste para hacer frente rpidamente al antgeno en posteriores contactos (Fig. 27.3).

Figura 27.3. Esquema de la respuesta inmune humoral.

Otro sistema, de defensa frente microorganismos patgenos


es el sistema del
complemento, una de
cuyas vas necesita
de una respuesta humoral previa para activarse.

Otro sistema, de carcter enzimtico, que contribuye a la


defensa frente a microorganismos patgenos es el sistema del
complemento, una de cuyas vas necesita de una respuesta
humoral previa para activarse. El sistema del complemento es
un sistema enzimtico de activacin que se encuentra en el
plasma. Es una de las principales vas efectoras del proceso inflamatorio. Est formado por unas veinte protenas, y su activacin desencadena una respuesta rpida muy amplificada a
travs de un sistema de cascada, donde el producto de una reaccin es la enzima cataltica de la siguiente. La mayora de sus

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

componentes se designan con la letra C seguida de un nmero, y cuando son escindidos por una enzima, el producto de
menor tamao tiene el sufijo a y el de mayor tamao el b.
El complemento se activa por dos vas distintas:
a) la va clsica y
b) la va alternativa.
En la va clsica hay una activacin especfica que presupone
una respuesta humoral, ya que est mediada por complejos
antgeno-anticuerpo, donde el anticuerpo es IgG o IgM, hacen
falta dos molculas de IgG o una de IgM. La va alternativa es
una activacin inespecfica, se produce directamente por polisacridos y liposacridos de la pared celular bacteriana.
En la activacin especfica por la va clsica, las protenas
que intervienen se anan en tres grupos:

373

El complemento se
activa por dos vias
distintas. La clsica
est mediada por
complejos antgenoanticuerpo. La alternativa se activa por
polisacaridos de la
pared celular bacteriana.

Grupo de reconocimiento: formado por C1, protena formada por varias subunidades, una molcula de C1q, dos
de C1r y dos de C1s. El C1q est formado por 18 cadenas polipeptdicas.
Grupo de activacin: formado por las protenas C4, C2 y
C3
Grupo de ataque a membrana: constituido por las protenas C5, C6, C7, C8 y C9.
Cuando las molculas de inmunoglobulina (2 IgG o 1 IgM)
se combinan con el antgeno, sufren un cambio conformacional
que permite la fijacin, a travs de su regin Fc, de C1q. La
unin de C1q induce la activacin autocataltica de una molcula de C1r, que escinde
el otro zimgeno C1r, transformndo
lo en su forma activa C1r (la barra significa activacin): C1r
escinde las dos molculas
de C1s, transformndolas en sern
esterasas activas, C1s .

La enzima C1s acta sobre C4, que tiene un enlace tioster, y lo escinde en C4b y C4a; el C4b se une a un receptor de
superficie de la membrana plasmtica, y acta a su vez como
sitio de unin para el zimgeno
C2, que combinado con C4b
se convierte en sustrato de C1s , que lo escinde en C2a y C2b.
El
fragmento C2a se une a C4b, y as se forma el complejo

C4b2a , que es una enzima denominada convertasa de


C3. El

C3 tiene un tioster interno, que es escindido por C4b2a en


dos fragmentos, C3a y C3b. El C3a es liberado a la fase lquida y desempea el papel de mediador de la inflamacin, es
una anafilotoxina que produce liberacin de histamina por las
clulas que la almacenan, y tiene efectos quimiotcticos para
ciertos leucocitos. El fragmento C3b

se une a su receptor en la
superficie celular, junto a C4b2a , formando la enzima

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374

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

C4b2a 3b , que es la convertasa de C5, al que divide en C5a y


C5b (Fig. 27.4). El fragmento C5a pasa a la fase lquida y desempea las mismas funciones que C3a. El fragmento C5b se
une a C6 y C7, formando el complejo C5b67, que se une a la
superficie celular en un sitio distinto del sitio de la convertasa
de C5, y tambin puede trasladarse a otras clulas que carezcan de dicha enzima. A continuacin, C8 se combina con la
subunidad C5b del complejo C5b67 y se inserta en la membrana, en donde varias molculas de C9 polimerizan y se ensamblan para formar el complejo de ataque a la membrana,

Figura 27.4. Esquema de la va clsica del complemento hasta


la formacin de C5b.

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

375

ya que se produce un mbolo ltico. La lisis celular comienza


con la unin de C8, y aumenta su velocidad con la polimerizacin de C9 (Fig. 27.5).

Figura 27.5. Esquema de la formacin del complejo de ataque a membrana


(CAM), comn para la va clsica y la va alternativa del complemento.

El resultado final de la cascada del complemento es la formacin de agujeros, con un dimetro interior de unos 10 nm,
en la membrana celular. Que producen un hinchamiento celular, debido al efecto Donnan, por lo cual la clula se rompe explosivamente.
La va alternativa se desarrolla plenamente en presencia
de membranas celulares bacterianas. En la fase lquida el enlace tioster interno del componente C3 se escinde lentamente
de forma espontnea en medio acuoso, generndose una forma activa del C3 denominada C3i. Al C3i se une el factor B,
formndose C3iB, sobre el que acta el factor
D escindiendo a
B, as se libera Ba y se forma el complejo C3iBb, que es la convertasa de C3 de la va alternativa, y permanece en la fase lquida. El C3b que se genera por accin enzimtica puede unirse a la membrana de una clula bacteriana, se une a C3b el
factor B, con una elevada afinidad,
y por accin del factor D se

forma una convertasa estable C3bBb situada en la superficie


celular, que genera muchos fragmentos C3b que se unen a la

El resultado final de
la cascada del complemento es la formacin de agujeros en
la membrana celular.
Estos agujeros producen un hinchamiento
celular, debido al
efecto Donnan, por lo
cual la clula se rompe explosivamente.

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376

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Tanto la va clsica
como la alternativa
estn sometidas a
sistemas de regulacin.

membrana bacteriana, producindose la amplificacin. Esta


convertasa puede unir ms fragmentos de C3b para formar

C3bBb 3b, que es la convertasa de C5 de la va alternativa.


Una vez hidrolizado C5, se desencadena el complejo de ataque
a membrana, que es comn para ambas vas.
Tanto la va clsica como la alternativa estn sometidas a
sistemas de regulacin. La va clsica se regula mediante inhibidores. En cuanto a la va alternativa, la etapa de amplificacin no se produce si el C3b se une a la superficie de las clulas propias.

INMUNOGLOBULINAS:
ESTRUCTURA Y FUNCIN
Las inmunoglobulinas son segregadas
por las clulas plasmticas, derivados de
los linfocitos B que
han tenido contacto
con el antgeno.

Existen cinco clases


de inmunoglobulinas
(IgG, IgM, IgA, IgD,
IgE) deter minadas
por el tipo de cadena
pesada que las forma
(g, m, a, d, e).

Las inmunoglobulinas (Ig) son glicoprotenas que se encuentran en el plasma y en la fase lquida tisular de todos los
mamferos, as como, algunas de ellas, en la superficie de los
linfocitos B, donde actan como receptores de antgenos especficos.
La estructura general de una molcula de inmunoglobulina
consiste en cuatro cadenas polipeptdicas iguales dos a dos,
unidas por puentes disulfuro y enlaces no covalentes. Las de
menor tamao se denominan cadenas ligeras (L) y las de mayor tamao pesadas (H) (Fig. 27.6). Las cadenas ligeras tienen
una masa molecular de 25.000 Da, y en los vertebrados pueden ser de dos tipos, kappa (N) o lambda (O); pero en una
molcula de inmunoglobulina las dos cadenas ligeras son iguales, bien N o bien O, nunca una de cada tipo. Las cadenas pesadas tienen una masa molecular entre 50.000 y 77.000 Da,
existen cinco tipos generales de cadenas pesadas, denominadas J, P, D, G y H, cada una de las cuales define una clase de inmunoglobulinas, as tendremos cinco clases de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Adems, las inmunoglobulinas de cada una de las clases son muy
heterogneas, dentro de cada clase hay subclases, que dependen del tipo de cadena pesada que posean, as por ejemplo,
hay cuatro subclases de IgG: IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, segn
que su cadena pesada sea J1, J2, J3 o J4, respectivamente.
En la cadena ligera se distinguen dos regiones diferentes,
una regin variable (VL) desde el extremo amino terminal hasta
la mitad de la cadena (aminocidos 1 a 108), cuya secuencia
de aminocidos es variable, y una regin constante (CL) cuya
composicin en aminocidos es constante (excepto por las variaciones alotpicas e isotpicas). Cada regin VL y CL presenta
un puente disulfuro intracatenario que genera un bucle peptdi-

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

377

La estructura general
de una molcula de
inmunoglobulina consiste en cuatro cadenas polipeptdicas
iguales dos a dos,
unidas por puentes
disulfuro y enlaces no
covalentes. Las de
menor tamao se denominan cadenas ligeras (L) y las de mayor tamao pesadas
(H).

Figura 27.6. Esquema de la estructura de la IgG (A). Plegamiento caracterstico de los dominios de la cadena ligera de una inmunoglobulina, con las regiones hipervariables en el dominio VL (B). Esquema de los dominios de la molcula de IgG (C).

co de unos 60-70 aminocidos. Igualmente, en la cadena pesada hay dos regiones, una regin variable en cuanto a su secuencia de aminocidos situada en el extremo amino terminal
de la cadena, denominada VH, que abarca los primeros

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378

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La variabilidad de los
dominios variables de
cadena pesada y de
cadena ligera no es
homognea. Existen
algunos segmentos
poli-peptdicos cortos
en estas regiones
cuya variabilidad es
mucho mayor, y que
se denominan regiones hipervariables.

Los segmentos hipervariables forman el


centro de unin del
antgeno.

Los anticuerpos constan de regiones de secuencia nica que les


confieren la especificidad de unin al
antgeno, y de regiones de secuencia
constante que intervienen en las funciones activas comunes
de cada clase.

108 aminocidos, y una regin constante, CH, mucho mayor


que la de la cadena ligera. En el caso de la IgG, que puede
considerarse un anticuerpo tpico, la regin constante de cadena pesada y se subdivide a su vez en tres regiones estructuralmente distintas: CH1, CH2 y CH3. Cada una genera regiones globulares denominadas dominios. Cada uno de estos dominios
de unos 110 aminocidos presenta una estructura caracterstica
consistente en dos amplias hojas E antiparalelas unidas por el
puente disulfuro (Fig. 27.6).
En una molcula de inmunoglobulina cada cadena ligera
est unida a una pesada por un enlace disulfuro en la regin
carboxi terminal de la cadena L; a su vez, las dos cadenas pesadas estn unidas entre s por uno o varios puentes disulfuro
situados en la regin constante de cadena pesada, y esta zona
constituye la bisagra, que permite la flexibilidad de los dos
brazos de la molcula de inmunoglobulina.
La variabilidad de los dominios variables de cadena pesada
y de cadena ligera no es homognea. Existen algunos segmentos polipeptdicos cortos en estas regiones cuya variabilidad es
mucho mayor, y que se denominan regiones hipervariables. El
plegamiento de los dominios variables determina que estas regiones, situadas en las zonas de los residuos 30, 50 y 95, queden expuestas y prximas hacia el exterior de la molcula. Estos segmentos hipervariables forman el centro de unin del
antgeno, y la especificidad del anticuerpo viene determinada
por la naturaleza de sus aminocidos (Fig. 27.6).
Las inmunoglobulinas son protenas bifuncionales.
Los anticuerpos constan de regiones de secuencia nica
que les confieren la especificidad de unin al antgeno, y de regiones de secuencia constante que intervienen en las funciones
activas comunes de cada clase. Las mismas funciones efectoras
son mediadas por anticuerpos de muy distinta especificidad.

CLASES DE INMUNOGLOBULINAS
Cada clase de inmunoglobulinas presenta una funciones
biolgicas especficas.
La IgG activa el sistema del complemento,
acta como antitoxina y atraviesa la placenta.

IgG: Se encuentra slo en la forma monomrica de cuatro cadenas, su masa molecular es de 146.000 Da. Su cadena pesada es J, y existen cuatro subclases. Est distribuida entre los espacios intravascular y extravascular, la
subclase ms abundante en el suero es la IgG1 (9 mg/mL).
Entre sus funciones est la de activar el sistema del complemento, actuar como antitoxina, y en los seres humanos

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

atraviesa la placenta confiriendo inmunidad al recin nacido durante los primeros meses de vida.
IgM: Se encuentra fundamentalmente en el espacio intravascular, su concentracin plasmtica es de 1,5 mg/mL.
Su cadena pesada es P, no existen subclases, y su estructura consiste en un pentmero de la unidad bsica de cuatro
cadenas, por lo que su masa molecular es de 970.000 Da.
Las subunidades del pentmero estn unidas entre s mediante enlaces disulfuro entre los dominios CP3, as como
entre el pptido final del dominio CP4. En el pentmero
existe una cadena peptdica adicional denominada cadena J, formada por 137 aminocidos, con masa molecular
de 15.000 Da, y de estructura similar a un dominio de inmunoglobulinas, que est unida por enlaces disulfuro con
el pptido terminal de las cadenas pesadas (Fig. 27.7). La
IgM es el principal anticuerpo frente a microorganismos
infecciosos antignicamente complejos, es un agente aglutinante y citoltico muy eficaz.

379

La IgM es un agente
aglutinante y citoltico muy eficaz.

Figura 27.7. Esquema de la estructura pentamrica de la IgM,


con la cadena J en la regin central.

IgA: Su cadena pesada es D; se puede encontrar en forma monomrica y dimrica, y adems los dmeros pueden estar unidos al componente secretor. Asimismo, de la

La IgA secretora
abunda en las secreciones seromucosas.

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380

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La IgD abunda en la
superficie de los linfocitos B.

La IgE se encuentra
en la superficie de
basfilos mastocitos
y clulas de las mucosas.

IgA existen dos subclases, IgA1 e IgA2, (IgA1 3,0 mg/mL;


IgA2 = 0,5 mg/mL). Los dmeros de IgA tienen la cadena
J, unida por puente disulfuro.
Esta inmunoglobulina es la ms abundante en las secreciones seromucosas como la saliva, la leche, el calostro,
las secreciones genitourinarias y las traqueobronquiales.
En las secreciones la IgA est en forma dimrica, unida al
componente secretor, y se denomina IgA secretora (IgAs).
El componente secretor es una protena de masa molecular 70.000 Da, que se adhiere a la IgA cuando sta atraviesa el epitelio hacia las secreciones, y su funcin es proteger a la inmunoglobulina de los agentes proteolticos.
IgD: La cadena pesada de esta inmunoglobulina es G y
no existen subclases. Su masa molecular es de 185.000 Da.
Su presencia en el plasma (0,03 mg/mL) es inferior al 1%
del total de inmunoglobulinas, sin embargo abunda en la
superficie de los linfocitos B, donde se cree que participa
en la diferenciacin de ests clulas inducida por el antgeno.
IgE: La cadena pesada de la IgE es H. Su concentracin
plasmtica es muy pequea ( 0,0001 mg/mL). Se encuentra en la superficie de basfilos y mastocitos de todos
los individuos, as como en la superficie de clulas de las
mucosas, como la nasal y la bronquial. Su funcin es la
defensa frente a parsitos helmintos, pero en la sociedad
industrializada se relaciona con reacciones de hipersensibilidad inmediata como el asma o la fiebre del heno.

RESUMEN
El organismo combate los agentes infecciosos mediante
su sistema inmunitario. Existen dos tipos de inmunidad, la
innata o inespecfica y la adaptativa o especfica, ambas
estrechamente relacionadas. La inmunidad innata est
constituida por barreras mecnicas como la piel, y qumicas como los componentes bactericidas de los fluidos corporales; adems participan clulas fagocitarias como los
granulocitos neutrfilos, otras clulas fagocitarias son los
macrfagos, que proceden de los monocitos circulantes en
la sangre. Otro tipo de leucocitos que se encuentran en la
sangre son la clulas asesinas naturales, especializadas en
la defensa inespecfica frente a los virus. Tambin participa

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INTRODUCCIN A LA INMUNOLOGA MOLECULAR

en la defensa inespecfica la va alternativa del sistema del


complemento.
La inmunidad adaptativa o especfica elabora una
respuesta especfica para cada agente infeccioso, adems
guarda memoria del mismo. En este sistema adaptativo
cooperan macrfagos, inmunoglobulinas y distintos tipos
de linfocitos. El sistema inmune especfico acta a travs
de dos tipos de respuestas. En la respuesta inmune celular
participan las clulas presentadoras de antgeno (APC), clulas TH, linfocitos T citotxicos y linfocitos T supresores,
asimismo persiste una poblacin de clulas T de memoria.
En la respuesta inmune humoral participan clulas APC
que presentan el antgeno a las clulas TH, que estimula la
maduracin y proliferacin de un linfocito B que ha tenido
contacto con el antgeno, formndose clulas plasmticas
que sintetizan anticuerpos especficos frente al antgeno, al
cual se unen inactivndolo; tambin se forma una poblacin de clulas B de memoria.
Otro sistema, de carcter enzimtico, presente en el
plasma, que contribuye a la defensa frente a microorganismos patgenos es el sistema del complemento, que se
activa por dos vas: la clsica y la alternativa. La va clsica
est mediada por complejos antgeno-anticuerpo. La va alternativa, se activa por polisacridos y liposacridos de la
pared celular bacteriana. El resultado final del sistema del
complemento es la formacin de agujeros en la membrana
celular, por lo que la clula se rompe explosivamente.
Las inmunoglobulinas son glicoprotenas que se encuentran en el plasma y en la fase lquida tisular, as como,
algunas de ellas, en la superficie de los linfocitos B, donde
actan como receptores antignicos especficos. Estn formadas por cuatro cadenas polipeptdicas, iguales dos a
dos, unidas por puentes disulfuro y enlaces no covalentes.
Las de menor tamao se denominan ligeras (L) y las de
mayor tamao pesadas (H). Existen cinco tipos generales
de cadenas pesadas, cada una de las cuales define una
clase de inmunoglobulinas: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE. Cada
cadena, L o H, est constituida por varios dominios de
unos 110 aminocidos dispuestos en dos amplias hojas E
antiparalelas con un puente disulfuro intracaternario. La
cadena L tienen un dominio de secuencia de aminocidos
variable (VL) y otro de secuencia constante (CL); las cadenas H tiene un dominio VH y tres o cuatro (dependiendo
de la clase de Ig) CH. En los dominios variables (VL y VH)

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

hay unas regiones hipervariables, que constituyen el centro de unin del antgeno. Las inmunoglobulinas son protenas bifuncionales, una regin de la molcula interviene
en la unin especfica al antgeno, y otra regin distinta es
la responsable de las funciones efectoras propias de cada
clase de inmunoglobulinas.

APLICACIONES CLNICAS
Hipersensibilidad inmediata de tipo I
El trmino hipersensibilidad se refiere a una situacin en
que se produce una respuesta inmune adaptativa exagerada o
inadecuada. La hipersensibilidad de tipo I consiste en una reaccin alrgica inmediata tras la exposicin al alergeno, que es
un antgeno. Dentro de este tipo de hipersensibilidad se encuentran el asma, la fiebre del heno, los eccemas, la urticaria y las alergias a los alimentos. Estas alergias se producen
tras la estimulacin de los mastocitos sensibilizados con IgE por
parte del alergeno.
Los antgenos ambientales (alergenos), inicialmente inocuos, penetran en el organismo a travs de las mucosas y son
fagocitados y procesados por las clulas presentadoras de antgeno (CPA) locales, que los presentan a los linfocitos TH, que
secretan citocinas para inducir la proliferacin de los linfocitos
B, los cuales secretan IgE especfica frente al alergeno. La IgE
se une a los receptores de FcH de los mastocitos, por lo que stos quedan sensibilizados. Cuando el individuo tiene un contacto posterior con el alergeno, ste se une a las IgE de la superficie de los mastocitos sensibilizados entrecruzndolas, se
produce un aumento de Ca2 intracelular que induce la liberacin de mediadores almacenados, como histamina y proteasas,
as como la sntesis de mediadores lipdicos, como leucotrienos
y prostaglandinas. Los agentes quimiotcticos (interleuquina 5,
interleuquina-8 o interferon D) que liberan los mastocitos atraen neutrfilos, eosinfilos y basfilos hacia la regin de activacin; la histamina produce vasodilatacin y aumenta la permeabilidad vascular, activando, junto con algunas proteasas, el
proceso inflamatorio; finalmente, las prostaglandinas (PGD2) y
los leucotrienos (LTC4, LTD4), junto con la histamina, producen contraccin de la musculatura lisa bronquial y aumentan
las secreciones mucosas, obstruyendo las vas areas. De esta
forma se producen los sntomas clnicos de la alergia.

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TEMA 28

Estructura molecular
del msculo

Estructura de la fibra muscular esqueltica. Estructura molecular del msculo esqueltico. Mecanismo de la contraccin muscular. Control de la
contraccin muscular por calcio. El msculo cardaco. El msculo liso. Fuentes de energa en el
msculo.

De los tres tipos de msculos que tienen los animales, el


msculo esqueltico y el cardiaco se denominan estriados por
su apariencia en bandas claras y oscuras a nivel microscpico,
lo que les diferencia del msculo liso. Por otra parte, las clulas
del msculo cardiaco y del liso tienen un nico ncleo, y se denominan miocitos; las clulas del msculo esqueltico se denominan fibras musculares, y son largas y multinucleadas.
Esta variedad en estructura, tamao y funcin de los diferentes tipos de clulas musculares, tambin se refleja en el tiempo que requieren los distintos tipos de msculos para contraerse y relajarse. As, la respuesta ms rpida, en el orden de milisegundos, es la del msculo esqueltico de contraccin rpida,
y la respuesta ms lenta es la del msculo liso, que es del orden
de segundos.

Las clulas que forman el msculo esqueltico se denominan fibras musculares.


Las clulas del msculo cardaco y del
msculo liso se denominan miocitos.

ESTRUCTURA DE LA FIBRA
MUSCULAR ESQUELTICA
Las clulas cilndricas que forman el msculo esqueltico se
denominan fibras musculares, su longitud es de 1 a 40 nm y
su dimetro de unos 100 Pm. Cada fibra muscular est envuelta por una membrana celular elctricamente excitable denominada sarcolema (Fig. 28.1). Se trata de clulas plurinucleadas,
en las que el nmero de ncleos aumenta con la longitud de la
fibra. El citoplasma se denomina sarcoplasma, y contiene haces de filamentos fuertemente empaquetados, estos filamentos

En el citoplasma de
la fibra muscular
estn las miofibrillas,
compuestas por unidades repetitivas denominadas sarcmeros.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 28.1. Estructura de la fibra muscular esqueltica.

se denominan miofibrillas. Cada miofibrilla se compone de


unas 20.000 unidades que se repiten llamadas sarcmeros.
Entre las miofibrillas, y paralelas a ellas, hay numerosas mitocondrias. Una forma especializada de retculo endoplsmico, el
retculo sarcoplsmico (RS), envuelve a cada miofibrilla. El
RS est formado por tbulos membranosos longitudinales
que se disponen paralelos a las miofibrillas, y que finalizan en
canales aplastados conocidos como cisternas terminales. El RS
contiene una gran cantidad de Ca2. Por otra parte, el sarcolema de la fibra muscular presenta invaginaciones que forman el
sistema de tbulos transversales o tbulos-t, que se disponen
perpendiculares a la miofibrilla. Al final de cada sarcmero hay
una estructura de membranas denominada trada, formada por
un tbulo-t y dos cisternas terminales; cada cisterna terminal
est unida al tbulo-t por una estructura base. La contraccin
del msculo esqueltico se desencadena por un estmulo nervioso, que genera un potencial de accin que se extiende por el
sarcolema y a lo largo de la red de tbulos-t. La seal atraviesa
la unin de la trada e induce la liberacin de Ca2 del retculo
sarcoplsmico al sarcoplasma, el cual interacciona con los
sarcmeros de la fibra muscular e induce la contraccin.

ESTRUCTURA MOLECULAR DEL


MSCULO ESQUELTICO
En cuanto a la estructura del msculo esqueltico, una fibra o clula muscular contiene muchas miofibrillas paralelas,

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

cada una con un dimetro de 1 Pm, que estn inmersas en el


citosol. Una micrografa electrnica de una seccin longitudinal de una miofibrilla muestra las bandas claras y oscuras alternantes (Fig. 28.2). La unidad fundamental, denominada
sarcmero, se repite cada 2,3 Pm a lo largo del eje de la fibrilla. La banda A oscura y la banda I clara alternan con regularidad. La regin central de la banda A se denomina zona H, es
menos densa que el resto de la banda. La zona H est dividida
en dos partes iguales por un disco central denominado disco M
(o lnea M), En el centro de la banda I est el disco Z (o lnea
Z). La lnea Z marca el lmite entre cada sarcmero.

385

El sarcmero es la
unidad fundamental
de la miofibrilla. Presenta una alternancia
de bandas claras y
oscuras como consecuencia de la distribucin de los filamentos gruesos y de
los filamentos delgados.

Figura 28.2. Micrografa ptica y electrnica del msculo esqueltico.


Estructura del sarcmero.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Un filamento grueso
est formado por
unas 300 molculas
de miosina orientadas para conferirle un
carcter bipolar.

Un filamento delgado
est formado por una
cadena de actina F,
varias molculas de
tropomiosina y varias
del complejo troponina.

Las secciones transversales de una miofibrilla permiten


observar la distribucin molecular subyacente del sarcmero,
mostrando que existen dos clases de filamentos proteicos que
interaccionan entre s. Los filamentos gruesos tienen un dimetro de unos 15 nm, mientras que el de los filamentos delgados es de 9 nm. La zona H est constituida por filamentos
gruesos ordenados hexagonalmente. La banda I est formada
por un conjunto hexagonal de filamentos delgados. En la regin oscura, en los extremos de cada banda A, los filamentos
delgados y los gruesos forman interdigitaciones; cada filamento
grueso est rodeado por seis filamentos delgados, y cada filamento delgado se encuentra en el centro de tres filamentos
gruesos. El disco M, en el centro de la zona H, contiene varias
protenas, entre ellas creatina quinasa, miomesina y protena
M. Los filamentos gruesos consisten fundamentalmente en
miosina. Los filamentos delgados estn compuestos principalmente por tres protenas: actina, tropomiosina y el complejo
troponina. Los filamentos delgados y gruesos interaccionan
mediante puentes cruzados, constituidos por regiones o dominios de la molcula de miosina.
En el filamento grueso, formado por unas 300 molculas de
miosina, las molculas de miosina se orientan con sus cabezas
globulares hacia el extremo ms cercano del filamento. Esta
orientacin deja una zona desnuda, carente de cabezas globulares, en el centro del filamento, donde se localiza el disco M.
Por lo tanto, los filamentos gruesos son bipolares.
Un filamento delgado est formado por una cadena de actina F, que es un polmero lineal de monmeros de actina G, por
varias molculas de tropomiosina y varias molculas de troponina. Cada molcula de tropomiosina est en contacto con
unos siete monmeros de actina, y a cada molcula de tropomiosina se une una molcula del complejo troponina, el cual
est constituido por tres protenas diferentes: troponina T, troponina I y troponina C. En el filamento delgado todos los
monmeros de actina tienen la misma direccionalidad.

MECANISMO DE LA
CONTRACCIN MUSCULAR
Modelo de los filamentos deslizantes
La contraccin de las fibras musculares se produce por el
deslizamiento de los filamentos gruesos de miosina a lo largo
de los filamentos delgados de actina. La longitud de los filamentos gruesos y delgados no cambia durante la contraccin

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

muscular. La disminucin de la longitud del sarcmero durante


la contraccin supone un movimiento de deslizamiento en direcciones opuestas de los dos extremos de un filamento grueso
de miosina, lo cual es factible porque tanto los filamentos delgados como los gruesos tienen carcter direccional. Los filamentos delgados siempre se disponen a partir de las lneas Z de
una forma uniforme; entre dos lneas Z cualesquiera, los dos
conjuntos de filamentos de actina se disponen en direcciones
opuestas. Por otra parte, la polaridad de los filamentos gruesos
de miosina se invierte en el disco M. As, durante la contraccin los filamentos de actina a cada lado del disco M son arrastrados hacia el disco M por el deslizamiento de las cabezas de
miosina, producindose un acortamiento neto del sarcmero
(Fig. 28.3).

387

Durante la contraccin muscular los filamentos delgados a


cada lado del disco
M de un filamento
grueso son arrastrados hacia dicho disco
M por el deslizamiento de las cabezas de
miosina, acortandose
as el tamao del
sarcmero.

Figura 28.3. Acortamiento del sarcmero por deslizamiento de los filamentos


durante la contraccin muscular.

Las diferentes etapas de la contraccin muscular estn impulsadas por la actividad ATPasa de la miosina. La fuerza de la
contraccin muscular se produce por la interaccin de miosina,
actina y ATP. Durante el ciclo de contraccin el ATP interacciona con la miosina, que produce su hidrlisis en ADP y Pi , los
cuales quedan unidos a la miosina; la actina interacciona con
el complejo miosina-ADP-Pi y estimula la liberacin del Pi y a
continuacin del ADP, por lo cual la actina aumenta el nmero
de recambio de la miosina; seguidamente, un nuevo ATP se
une al complejo actomiosina provocando la disociacin de la
actina y la miosina. El complejo ATP-miosina resultante est
dispuesto para otro ciclo de catlisis (Fig. 28.4). Estas reacciones requieren la presencia de Mg2.
La energa libre de la hidrlisis del ATP se traduce en cambios conformacionales en las cabezas de miosina, que produ-

El deslizamiento de
los filamentos gruesos y delgados se
debe a cambios conformacionales en las
cabezas de miosina
como consecuencia
de hidrlisis del ATP,
catalizada por la actividad ATPasa de la
miosina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 28.4. Ciclo de catlisis de la contraccin muscular.

La contraccin muscular se desencadena


al aumentar la concentracin de Ca2+ en
el sarcoplasma.

cen el deslizamiento de los filamentos gruesos y delgados (Fig.


28.5). En el msculo en reposo, las cabezas de miosina con
ADP y Pi unidos estn disociadas de los filamentos de actina.
Cuando se produce un estmulo que conduce a la contraccin
muscular, que implica un incremento del Ca2 citoslico, las cabezas de miosina se separan del filamento grueso para unirse a
la actina del filamento delgado (etapa 1). La unin de la actina
estimula la liberacin del Pi , lo que va seguido de un cambio
conformacional crucial de la cabeza de miosina, denominado
golpe de potencia de la contraccin muscular, y de la disociacin del ADP (etapa 2); y los filamentos gruesos se mueven a
lo largo de los filamentos delgados a medida que las cabezas
de miosina se relajan pasando a una conformacin de menor
energa. Durante el golpe de potencia las cabezas de miosina
se inclinan unos 45 y su energa conformacional disminuye.
Esto mueve el filamento grueso aproximadamente 10 nm a lo
largo del filamento delgado (etapa 3). La subsecuente unin
del ATP a la miosina (etapa 4), y la hidrlisis de este ATP (etapa 5) causan la disociacin de las cabezas de miosina de los filamentos delgados y tambin hacen que las cabezas de miosina retornen a su conformacin de alta energa, esto es con su
eje longitudinal casi perpendicular al de los filamentos gruesos.
En el msculo esqueltico en contraccin este ciclo se repite a
la velocidad de cinco ciclos por segundo.

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

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Figura 28.5. Ciclo del mecanismo de contraccin del msculo esqueltico.

CONTROL DE LA CONTRACCIN
MUSCULAR POR CALCIO
El elemento desencadenante de la contraccin muscular es
el aumento de la concentracin de Ca2 en las inmediaciones
de las fibras musculares del msculo esqueltico o de los miocitos del msculo cardiaco y del msculo liso. En todos los casos,
el aumento de Ca2 se debe al flujo del mismo a travs de canales de calcio. La contraccin muscular termina cuando la
concentracin de Ca2 en el sarcoplasma disminuye por la ac-

En la fibra muscular,
el impulso del nervio
motor desencadena
la liberacin de Ca2+
del reticulo sarcoplsmico al sarcoplasma.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

cin de bombas especficas como la ATPasa de Ca2 del retculo sarcoplsmico (Fig. 28.6).

Figura 28.6. Bombas y canales de calcio.

Tanto las cisternas terminales del retculo sarcoplsmico


como los tbulos-t y el sarcolema contienen canales de
calcio. Los canales de calcio de los tbulos-t del msculo esqueltico y del msculo cardaco se denominan receptores de
dihidropiridina (DHP). El canal de calcio de las cisternas terminales del retculo sarcoplsmico se denomina receptor de
rianodina. El Ca2 es la seal que permite al msculo estriado
responder a los impulsos del nervio motor. En el msculo en
reposo la concentracin de Ca2 en el sarcoplasma es inferior a
1 PM, por lo que los centros de baja afinidad para el Ca2 de la
troponina C (Tn C) estn vacos. En estas condiciones la troponina I (Tn I) interacciona directamente con la actina del fila-

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

mento delgado para impedir la interaccin de la actina con las


cabezas S1 de miosina; adems, la Tn I y la troponina T (Tn T)
interaccionan con la tropomiosina para mantenerla alejada del
surco entre los monmeros de actina (Fig. 28.7).

Figura 28.7. Modificaciones inducidas en los filamentos por la


unin de calcio a la troponina C.

Como consecuencia del impulso nervioso, el Ca2 liberado


por el RS hace que la concentracin de Ca2 en el sarcoplasma
se eleve hasta 10 PM. A esta concentracin, se produce la
unin de Ca2 a los centros de baja afinidad de la Tn C, lo que
induce un cambio conformacional en el dominio N-terminal de

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Al aumentar la concentracin de Ca2+ en


el sarcoplasma, la
TnC sufre un cambio
conformacional que
favorece su interaccin con TnI, permitiendo as que la actina interaccione con
la miosina.

la protena, exponindose un bolsillo hidrofbico que aumenta


la afinidad de este dominio por la TnI. El aumento de la interaccin entre Tn I y Tn C produce una disminucin de la interaccin entre Tn I y actina (Fig. 28.7). El resultado es que la
tropomiosina se desliza ms profundamente en el surco del filamento delgado de actina, exponindose los sitios de unin de
miosina en la actina e inicindose el ciclo de la contraccin
muscular.
Resulta pues evidente que el Ca2 controla la contraccin
muscular por un mecanismo alsterico en el que el flujo de la
informacin transcurre en el sentido:
Ca2 o troponina o tropomiosina o actina o miosina

EL MSCULO CARDACO
En la contraccin del
msculo cardaco es
esencial la entrada de
Ca2+ extracelular para desencadenar la liberacin de Ca2+ del
reticulo sarcoplsmico, que inducir los
cambios pertinentes
en el TnC.

El msculo cardiaco, al igual que el msculo esqueltico es


estriado, y la contraccin muscular se produce mediante el sistema actina-miosina-tropomiosina-troponina. Por el contrario,
el msculo cardaco presenta ritmicidad intrnseca, es un sinitio
en el que cada miocito (50-100 Pm de longitud, 10-20 Pm de
dimetro) se comunica con los dems. El sistema de tbulos-t
est ms desarrollado que en el msculo esqueltico, pero el
retculo sarcoplsmico es mucho menos extenso, por lo que se
dispone de menos Ca2 intracelular para la contraccin muscular; los receptores de rianodina o estructuras base de las cisternas terminales son la conexin entre stas y los tbulos-t.
El Ca2 extracelular es fundamental en la contraccin del
msculo cardiaco. El Ca2 entra en los miocitos a travs de canales de calcio existentes en el sarcolema. Los que ms contribuyen cuantitativamente a la entrada de Ca2 son los canales
de calcio lentos (tipo L). Los canales de calcio rpidos (tipo
T) del sarcolema son menos numerosos que los lentos, y contribuyen a la fase inicial de aumento del Ca2 mioplasmtico. Este
incremento inicial del Ca2 en el mioplasma permite que el Ca2
acte sobre los receptores de rianodina o estructuras base
del retculo sarcoplsmico, que se abren permitiendo una salida
masiva de Ca2 al mioplasma; este mecanismo se denomina liberacin de calcio inducida por calcio (Fig. 28.8).
La salida de Ca2 del miocito se produce, principalmente,
mediante el intercambiador de Ca2+-Na+, que mantiene bajos
los niveles de Ca2 intracelular en el msculo en reposo mediante el intercambio de un Ca2 por tres Na, lo que contribuye a la relajacin. Sin embargo, este intercambiador puede funcionar en sentido inverso, as cualquier compuesto que aumen-

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

Figura 28.8. Liberacin de calcio inducida por calcio en el msculo cardiaco.

te el Na intracelular tambin incremente de modo secundario


el Ca2 intracelular y produce una contraccin ms fuerte. Se
trata de un efecto ionotrpico positivo, que puede ser desencadenado, por ejemplo, por el digital, frmaco que se utiliza para
la insuficiencia cardaca, ya que inhibe la Na/K-ATPasa produciendo un aumento del Na intracelular, y como consecuencia de Ca2.
La ATPasa de Ca2 del sarcolema es una bomba de Ca2
que contribuye a la salida de Ca2 del miocito, aunque de forma minoritaria.

EL MSCULO LISO
Las estructuras moleculares del msculo liso son muy semejantes a la de los msculos estriados, pero en l los sarcmeros
no estn alineados de la forma en que lo estn en los de apariencia estriada. Los miocitos que forman este tipo muscular
son clulas muy alargadas (100-500 Pm de longitud, 2-6 Pm
de dimetro), forman un sinctio, y el tejido tiene muy pocos
tbulos-t y un retculo sarcoplsmico rudimentario.
La contraccin del msculo liso, igual que la del estriado,
est regulada por Ca2. El Ca2 que estimula la contraccin del
msculo liso tiene un origen predominantemente extracelular, y
entra en el miocito a travs de canales de calcio del sarcolema.
Estos canales pueden abrirse por estimulacin elctrica o por la
unin de hormonas o frmacos a receptores de membrana.

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394

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La contraccin del
msculo liso se estimula por Ca2+ extracelular.

Los filamentos delgados del msculo liso


carecen del complejo
troponina.

El msculo liso tiene un tiempo de respuesta muy lento, y


en los vertebrados es el que se encarga de las contracciones involuntarias, largas y lentas de diversos rganos, incluyendo las
paredes intestinales o el tero.
Una diferencia esencial con los msculos estriados es que
carece del complejo troponina en los filamentos delgados, aunque s posee actina y tropomiosina. Adems, las cadenas ligeras de la miosina son diferentes a las del msculo estriado. A
pesar de la ausencia del complejo troponina, la contraccin del
msculo liso es dependiente de Ca2, que activa la quinasa de
cadena ligera de miosina (MLCK), una enzima que fosforila
la cadena ligera reguladora de miosina (LC2), lo cual desencadena la contraccin muscular. La relajacin del tejido se produce por desfosforilacin.
El mecanismo (Fig. 28.9) de la contraccin comienza cuando la estimulacin elctrica, desencadenada por el sistema nervioso autnomo o involuntario, abre los canales de Ca2 del
sarcolema y la concentracin de Ca2 aumenta desde 0,1 PM a
10 PM, pudiendo entonces el Ca2 unirse fcilmente a la calmodulina. La unin del complejo Ca2-calmodulina a MCLK
activa esta quinasa, que fosforila a LC2, y estimula la contraccin del msculo liso. La desactivacin de la MLCK se produce

Figura 28.9. Modelo de control de la contraccin del msculo liso. CaM: calmodulina;
MLCK: quinasa de cadena ligera de miosina; MLC: cadena ligera de miosina (LC2).

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

al descender el nivel de Ca2 mioplasmtico por accin de la


Ca2-ATPasa del sarcolema. Entonces la fosfatasa de cadena ligera defosforila a LC2 y se produce la relajacin muscular. Esta
reaccin es relativamente lenta, lo que hace que la contraccin
del msculo liso sea ms sostenida que la del estriado.
La contraccin del msculo liso est regulada por accin
hormonal. As, la unin de epinefrina (adrenalina) a los receptores del msculo liso activa la adenilato ciclasa y conduce a la
formacin de AMPc intracelular. El AMPc activa una protena
quinasa que fosforila a MLCK; la forma fosforilada de MLCK
tiene mucha menos afinidad por el complejo Ca2-calmodulina
y, por lo tanto, es fisiolgicamente inactiva. Esta inactivacin
revierte por accin de la fosfatasa de cadena ligera de miosina.

395

El aumento de la concentracin de Ca2+ en


el sarcoplasma activa
la MLCK, que fosforila la LC2, desencadenando as la contraccin muscular.

FUENTES DE ENERGA EN EL MSCULO


Para que se produzca la contraccin muscular es imprescindible el ATP. En el msculo esqueltico el ATP disponible slo
permite uno o dos segundos de contraccin, por lo que este
compuesto ha de ser renovado a partir de una o varias fuentes,
dependiendo de la situacin metablica del individuo.
Las fuentes de ATP para la contraccin muscular son (Fig.
28.10):

Figura 28.10. Esquema de la fuentes de ATP del msculo.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Dependiendo de la situacin metablica


del individuo, el msculo equeltico utilizar glucosa o cidos
grasos como sustratos para la obtencin
de ATP.

Por oxidacin de glucosa en la gluclisis. Esta glucosa


puede provenir de la glucosa sangunea o de la degradacin del glucgeno muscular. En el sarcoplasma de las clulas musculares, prximos a las bandas I del sarcmero,
hay grnulos de glucgeno, cuya degradacin, catalizada
por la glucgeno fosforilasa muscular, se activa por la elevacin de los niveles de Ca2, de AMP o por adrenalina.
Mediante fosforilacin oxidativa, para lo que es necesario
un suministro adecuado de oxgeno. En los msculos con
una elevada demanda de oxgeno existe mioglobina, lo
que les confiere color rojo. Los sustratos del metabolismo
aerbico del msculo son la glucosa, procedente de la
sangre o de la degradacin del glucgeno muscular, y los
cidos grasos procedentes de los triacilgliceroles del tejido
adiposo.
A partir de fosfato de creatina, compuesto que proporciona fosfatos de alta energa que permiten regenerar ATP a
partir de ADP durante la contraccin muscular; el fosfato
de creatina se forma a partir de creatina y ATP cuando el
msculo est relajado. La enzima que cataliza este proceso es la creatina quinasa, que forma parte de los discos M
del sarcmero.
A partir de ADP. El ATP puede formarse a partir de dos
molculas de ADP en una reaccin catalizada por la adenilato quinasa. El ADP procede de la hidrlisis del ATP
catalizada por la miosina-ATPasa durante la contraccin
muscular.

RESUMEN
Los animales poseen tres tipos de msculos, el msculo
esqueltico, el cardaco y el liso. Los dos primeros se denominan estriados. Las clulas del msculo esqueltico se
denominan fibras musculares, mientras que las del msculo cardaco y las del liso se denominan miocitos.
La fibra muscular esqueltica es una clula cilndrica
multinucleada. En el sarcoplasma se encuentran haces de
filamentos denominados miofibrillas, cada una de las cuales est formada por unidades que se repiten, denominadas sarcmeros.
El sarcmero, se repite cada 2,3 Pm a lo largo del eje
de la fibrilla, la longitud entre dos lneas Z. La banda A oscura y la banda I clara se alternan con regularidad. Esta

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ESTRUCTURA MOLECULAR DEL MSCULO

apariencia es debida a la disposicin de los filamentos


gruesos y delgados que componen las miofibrillas.
La contraccin de las fibras musculares se produce por
el deslizamiento de los filamentos gruesos de miosina a lo
largo de los filamentos delgados de actina, sin modificarse
la longitud de los filamentos, y con un acortamiento neto
del sarcmero. La contraccin es un proceso cclico en el
que se produce la hidrlisis de ATP.
La contraccin del msculo esqueltico se desencadena por un impulso nervioso, producindose la liberacin
de Ca2 del retculo sarcoplsmico al sarcoplasma. El Ca2
sarcoplasmtico se une a los centros de baja afinidad de la
Tn C, aumentando su interaccin con Tn I, lo que disminuye la afinidad de Tn I por la actina, y se desplaza la tropomiosina dejando accesibles los sitios de unin de miosina en la actina, e inicindose el ciclo de la contraccin
muscular.
En el msculo cardaco la contraccin muscular se produce mediante el sistema actina-miosina-tropomiosina-troponina, y es inducida por Ca2. En este tipo de msculo el
Ca2 extracelular es fundamental.
El msculo liso carece del complejo troponina en los filamentos delgados. La contraccin muscular est inducida
por Ca2, de origen fundamentalmente extracelular, que
activa la quinasa de cadena ligera de miosina (MLCK), enzima que fosforila la cadena ligera reguladora de miosina
(LC2), lo cual desencadena la contraccin muscular.
El ATP necesario para la contraccin muscular procede
de la oxidacin de la glucosa, proveniente de la sangre o
de la hidrlisis del glucgeno muscular, de la oxidacin de
los cidos grasos; del fosfato de creatina existente en el
msculo; o de la biosntesis de ATP a partir de ADP.

APLICACIONES CLNICAS
Control teraputico de contraccin
del msculo liso
Trastornos respiratorios como el asma o diversas alergias
producen una contraccin excesiva del msculo liso bronquial.
El tratamiento con epinefrina (adrenalina), mediante pastillas o
aerosoles inhalados, acta inhibiendo la quinasa de cadena ligera de miosina (MLCK) mediante un proceso de fosforilacin

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397

398

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

que la inactiva, ya que la forma fosforilada no puede interaccionar con el complejo Ca2-calmodulina, lo que impide la contraccin muscular, y relaja el msculo liso bronquial. Se han
desarrollado frmacos ms especficos, como el albuterol, que
actan ms selectivamente sobre los pulmones y evitan los
efectos secundarios de la epinefrina sobre el corazn.

Rigidez y rigor mortis


Cuando se produce una disminucin acusada de los niveles
de ATP en el sarcoplasma, como consecuencia de un gran nmero de ciclos de contraccin-relajacin, o por un descenso en
su sntesis por ausencia de oxgeno, como sucede en la isquemia, entonces la Ca2-ATPasa del retculo sarcoplsmico deja
de bombear Ca2 fuera del sarcoplasma, mantenindose elevados los niveles de Ca2 en el sarcoplasma, lo que hace que se
promueva la interaccin de las cabezas globulares S1 de miosina con la actina F de los filamentos delgados; adems, al no
existir ATP, no se produce la separacin de las cabezas S1 de
miosina de la actina F, esto desencadena una situacin de contraccin continuada y por tanto produce rigidez muscular.
El rigor mortis es el endurecimiento o rigidez del cuerpo que
se produce despus de la muerte. Se produce como consecuencia de los procesos descritos anteriormente, ya que despus de la muerte deja de producirse ATP, y por lo tanto no se
produce la disociacin de las cabezas S1 de miosina de la actina F de los filamentos delgados, por lo que no se presenta la
relajacin muscular.

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TEMA 29

Estructura y funcin
del nervio

Estructura y funcin del nervio. Mecanismo de


transmisin de los impulsos nerviosos. Sinapsis y
Neurotransmisores.

El sistema nervioso est compuesto por los nervios perifricos y las estructuras que configuran el sistema nervioso central
(SNC), cerebro, cerebelo, y mdula espinal. Desde un punto de
vista funcional se distingue el componente somtico y el componente vegetativo o sistema nervioso autnomo (SNA), ambos con sus respectivas porciones central y perifrica.
El SNC. se compone de todas las neuronas que conducen
estmulos desde los ncleos centrales hasta los msculos esquelticos y desde los receptores sensoriales hasta los ncleos
centrales. Los rganos internos, corazn, vasos sanguneos,
aparato digestivo, aparato genitourinario, y en general todo el
msculo liso y el tejido glandular, se encuentra inervado por
neuronas que no estn bajo el control de la voluntad, por lo
que se denomina SN autnomo o vegetativo.
El SN por lo tanto, integra tanto los ncleos centrales,
como las conducciones perifricas o nervios. Estos son: doce
pares de nervios craneales y treinta y un pares de nervios espinales. En el SN autnomo los nervios aislados suelen ser
la excepcin, tratandose bsicamente de redes nerviosas perifricas.

ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO


El nervio es un conjunto de fibras en ocasiones rodeadas de
mielina y envueltas por tejido conectivo. Este tejido forma tambin el endoneuro que envuelve cada fibra individualmente, el
perineuro que las agrupa en haces y el epineuro o envoltura
global que contiene los vasos sanguneos.

El nervio es un conjunto de fibras rodeadas o no de mielina y


envueltas en tejido
conectivo.

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400

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Las neuronas son clulas excitables, capaces de modificar su


potencial transmembrana como respuesta a diferentes estmulos.

Las fibras nerviosas son prolongaciones del soma neuronal, tanto dendrticas como axnicas, rodeadas del neurilema.
La velocidad de conduccin de los impulsos nerviosos depende del dimetro de estas fibras y de la presencia de mielina.
Las fibras gruesas mielinizadas de tipo A son las ms rpidas,
mientras que las delgadas y amielnicas de tipo C son las ms
lentas. Tanto las fibras nerviosas como el soma de las neuronas se encuentran aislados del medio extracelular por la membrana plasmtica con sus caractersticas especiales de permeabilidad.

Mecanismo de transmisin de los


impulsos nerviosos
En la mayora de las clulas del organismo existen potenciales elctricos a travs de la membrana, pero slo algunas de
ellas como las neuronas y fibras musculares, denominadas clulas excitables, son capaces de modificar estos potenciales
como respuesta a diversos estmulos. Las fibras nerviosas utilizan estos cambios como mecanismo para enviar seales o impulsos nerviosos, mientras que las fibras musculares desarrollan
una contraccin capaz de generar fuerza.

El potencial de reposo
El potencial de reposo puede calcularse
segn la ecuacin de
Goldman a partir de
las concentraciones
ionicas intra y extracelulares y de sus
permeabilidades relativas.

Consiste en una diferencia de potencial a travs de la membrana plasmtica, debido a la desigual distribucin de iones entre los compartimentos intra y extracelular. Su valor oscila en
torno a 70 mV, negativo el interior respecto al exterior. Las
causas del potencial de reposo se encuentran en la selectiva
permeabilidad de la membrana a los iones:
1. La presencia de protenas en el interior de la clula cargadas positivamente dado el carcter anftero de las
msmas y el pH celular ligeramente alcalino (7,4), establece un gradiente de concentracin de iones positivos
desde el interior hasta el exterior, responsable de la electronegatividad interna.
2. La bomba Na/KATPasa como mecanismo de transporte activo, establece una direccin preferente para el
transporte del Na hacia el exterior y K hacia el interior
celular.
3. El movimiento de los iones difusibles de Na, K y Cl,
que se mueven libremente dependiendo de su concen-

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO

401

tracin qumica y de su carga elctrica para alcanzar un


estado de equilibrio electroqumico tipo Donnan.
El potencial de reposo es pues un potencial de difusin que
puede calcularse a partir de las concentraciones de los iones intra y extracelulares y de sus permeabilidades relativas segn la
ecuacin de Goldman. Dicha ecuacin est intimamente relacionada con la de Nerst, que permite calcular la relacin existente entre la diferencia de concentracin y la diferencia de potencial a travs de la membrana para que un in permanezca
en equilibrio dinmico y por tanto su difusin neta en cualquier
direccin sea cero.
El potencial de difusin para los iones implicados segn la
ecuacin de Goldman sera:
EM(milivoltios)

61 log

C(Na ) d PNa  C(K ) d PK  C(Cl ) d PCl


C(Na ) f PNa  C(K ) f PK  C(Cl ) f PCl


Dependiendo de la carga electrica de cada in, la permeabilidad selectiva de la membrana (P) para cada uno de ellos y
la concentracin (C) de los respectivos iones dentro (d) y fuera
( f ) de la clula. El grado de implicacin de cada uno de los iones en la determinacin del potencial de reposo es proporcional a la permeabilidad de la membrana para l mismo. Por tanto, cuando la permeabilidad de la membrana es cero, excepto
para uno de ellos, la ecuacin de Goldman se iguala a la de
Nernst y el potencial de membrana quedara establecido por el
gradiente de concentracin para ese ion.
Los valores calculados con sta ecuacin se corresponden
bsicamente con los observados experimentalmente (registro
de la diferencia de potencial a travs de la membrana introduciendo un electrodo en el interior celular). Pequeas diferencias
se deben a que la ecuacin no tiene en cuenta el efecto continuo de la bomba de sodio, sin cuya actuacin las concentraciones inicas cambiaran paulatinamente hasta igualarse en ambos compartimentos intra y extracelular. Los valores del potencial de reposo no coinciden por lo tanto con los potenciales de
equilibrio de ninguno de los distintos iones aisladamente. Finalmente es importante recordar que, para generar el potencial de
reposo, el movimiento de iones es mnimo y la clula permanece elctricamente neutra, de forma que el numero de aniones y cationes en cada compartimento es el mismo. No obstante la membrana queda revestida por cargas negativas en la superficie interna y positivas en la externa, como una placa
dipolar. En esta situacin que es la de reposo, se dice que la
membrana est polarizada.

El movimiento de iones responsable del


potencial de reposo
es mnimo y la clula
mantiene la neutralidad elctrica.

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402

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

El potencial de accin

Los estmulos capaces de desencadenar


potenciales de accin
pueden ser de distinta naturaleza: fsica,
qumica o elctrica.

Se denomina potencial de accin a los cambios de potencial que se producen en la membrana como respuesta a un
estmulo. Tales cambios obedecen a la modificacin de la permeabilidad a los iones que tiene lugar cuando la clula entra
en accin enviando seales.
Los estmulos capaces de generar potenciales de accin
pueden ser de distinta naturaleza (mecnicos, qumicos o elctricos) pero han de tener la intensidad mnima necesaria, denominada intensidad umbral para modificar la permeabilidad
de reposo de forma activa (Fig. 29.1).

Figura 29.1. Esquema del potencial de accin.

Cada potencial de accin comienza pues con perdida de la


polaridad inicial y termina con la recuperacin del potencial de
reposo. Las fases que se suceden son:

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO

Fase de despolarizacin. La membrana se vuelve extraordinariamente permeable al sodio por efecto del estmulo. Se
facilita as el cambio de configuracin espacial de protenas integrales presentes en las membranas de las clulas excitables,
que funcionan como canales de paso para sodio. Estos canales
son dependientes de voltaje y por tanto sensibles a las modificaciones del potencial de reposo. Cuando la diferencia de potencial entre el interior y exterior se hace menor, aproximndose a cero, ocurre el cambio abriendose la compuerta. El mecanismo funciona como un circuito de retroalimentacin positiva.
As, un potencial de accin no se producir hasta que no se alcance el nivel de potencial de reposo que alimenta el feed-back
positivo. Es lo que se denomina umbral de excitabilidad. Superado el umbral, el sodio entra en la clula a favor de su gradiente electroqumico. Esta acumulacin de cargas positivas en
la cara interna de la membrana, invierte la polaridad de reposo, que alcanza valores de 30 mV.
Fase de repolarizacin. En milsimas de segundo los canales de sodio se cierran por efecto del mismo cambio elctrico. Comienza as la fase de repolarizacin. Los canales de sodio no volvern a abrirse hasta que la membrana alcance su
polaridad de reposo. Los canales de potasio se abren coincidiendo en el tiempo con el cierre de los anteriores, ya que son
sensibles a los cambios de voltaje que se estn produciendo, lo
que facilita la salida del ion, ahora tambin a favor de su gradiente electroqumico. De esta forma se acelera la repolarizacin. Los canales de potasio tambin se cierran espontneamente.
Otros iones como el calcio intervienen tambin en el desarrollo del potencial de accin. El calcio es un ion extracelular
para el que existen en casi todas las clulas una bomba de calcio que lo expulsa hacia el exterior. Tambin existen canales de
paso dependientes de voltaje que se activan lentamente, algunos de los cuales pueden ser compartidos por el sodio.
La concentracin de iones intra y extracelulares en general
tiene importancia en el desarrollo de los potenciales de accin
y en la excitabilidad de las membranas al influir de forma importante en los mecanismos de permeabilidad y en el nivel de
voltaje al que se activan los canales.
Despus de un potencial de accin y durante un periodo de
tiempo denominado periodo refractario, no se puede producir un nuevo potencial de accin. Este efecto se debe al tiempo
necesario para que las protenas canales del sodio recuperen su
conformacin inicial y los valores del potencial de reposo alcancen o estn muy prximos a los valores iniciales.

403

La membrana se vuelve extraordinariamente permeable al sodio


por efecto del estmulo.
Los canales de sodio
son dependientes de
voltaje y por tanto
sensibles a los cambios del potencial de
reposo.

Despus de un potencial de accin la clula permanece durante un tiempo en


periodo refractario.

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404

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Propagacin del potencial de accin


El cambio de permeabilidad para el sodio que inicia el potencial de accin en un punto cualquiera de la membrana, es
responsable de su propagacin a los puntos adyacentes, debido al flujo local de iones positivos que al entrar en la clula aumentan el voltaje por encima del umbral de excitabilidad y
consiguen la apertura de los canales adyacentes. El proceso
contina de forma explosiva pues las zonas recin despolarizadas producen a su vez flujos locales de iones con efectos similares. La propagacin no puede retroceder a los puntos anteriores ya que se encuentran en periodo refractario. Esta forma de
propagacin a lo largo de toda la fibra nerviosa recibe el nombre de impulso nervioso y se dice que sigue la ley del todo o
nada, siempre que la membrana est integra y las condiciones
sean las adecuadas (Fig. 29.2).

Figura 29.2. Propagacin de los potenciales de accin en una fibra nerviosa amielnica.

Los impulsos nerviosos permiten la comunicacin entre


neuronas y suelen tener como destino final la sinapsis.

A pesar de que no existe una direccin nica de propagacin, los impulsos nerviosos permiten la comunicacin entre
neuronas y suelen tener como destino final la sinapsis.
Se trata de una estructura funcional que permite el paso de
informacin de una neurona a otra o a un grupo de neuronas
conectadas con la primera. Existen distintos tipos de sinapsis,
pero desde una perspectva bioqumica es la sinapsis qumica

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO

405

la que utiliza neurotransmisores como mensajeros para transmitir la informacin.

SINAPSIS Y NEUROTRANSMISORES
En la sinapsis qumica se distinguen tres elementos:
1) Terminal presinptica, habitualmente es una terminal axnica y contiene las vesculas del neurotransmisor para su liberacin inmediata por exocitosis. El acoplamiento excitacin-secrecin, implica a los iones de
calcio.
2) Neurotransmisor (NT), que es liberado a la hendidura
sinptica tras la llegada de un potencial de accin por el
axn hasta la terminal presinptica. Se han propuesto
dos sistemas efectores para el NT: uno sera la consecuencia de protenas receptoras que, tras la unin, aumentaran la permeabilidad inica, mientras que el otro
dependera de la actuacin de segundos mensajeros,
como ocurre con las hormonas petdicas.
3) Terminal postsinptica, con abundantes canales inicos y receptores para las molculas del neurotransmisor.
Suele localizarse en la membrana del soma o de las dendritas. As pues, una neurona recibe miles de contactos
sinpticos, y puede enviar informacin a su vez a varias
neuronas dependiendo de lo ramificado de su axn (Fig.
29.3). La eliminacin del neurotransmisor es importante
para finalizar la accin del mensajero y puede hacerse
de dos formas diferentes, una de ellas consiste en la
inactivacin a nivel de la hendidura sinptica mediante
enzimas presentes en la terminal postsinptica. La otra
sera por captacin del neurotransmisor desde la terminal presinptica para su reutilizacin, o por clulas de la
gla para su metabolizacin y excrecin posterior.
El metabolismo de los neurotransmisores incluye la sntesis,
almacenamiento, liberacin, accin e inactivacin. Estos procesos requieren energa, lo que justifica su gran demanda por
parte de las neuronas.
Aunque los primeros neurotransmisores estudiados fueron
la acetil-colina y las catecolaminas adrenalina y noradrenalina,
por ser los ms extendidos fuera del SNC. Sin embargo la familia de los neurotransmisores ha ido creciendo a expensas de
distintos tipos de sustancias que participan en la neurotransmisin a nivel central, tales como aminocidos y derivados, pptidos, otras catecolaminas, etc., que pasamos a considerar.

En la sinapsis qumica
se distinguen tres elementos:
1. Terminal presinptica.
2. Neurotransmisor.
3. Terminal postsinptica.

La eliminacin del
neurotransmisor es
importante para finalizar la accin del
mensajero.

La sntesis de catecolaminas tiene lugar a


partir del aminocido
tirosina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 29.3. Esquema de una sinpsis qumica colinrgica.

1. Acetil-colina (Ach). Se sintetiza a partir de acetil CoA


y colina bajo la accin de la colinacetiltransferasa. El
acetil CoA procede del cido pirvico y ha de ser transportado desde su origen mitocondrial hasta el citoplasma. La colina procede de la dieta o es sintetizada a partir de la serina, aminocido no esencial. Tambin puede
captarse por la terminal presinptica despus de la
hidrlisis que realiza la acetilcolinesterasa en la membrana postsinptica (Fig. 29.4).

(CH3)3NCH2CH2OH  CH3CO SCoA

o

o

(CH3)3NCH2CH2OCO CH3  CoASH3

Figura 29.4. Sntesis de acetil-colina.

Las neuronas dopaminrgicas almacenan DA mientras que


las noradrenrgicas y
adrenrgicas transforman la DA por hidroxilacin de la cadena
lateral en noradrenalina.

2. Catecolaminas. Derivan del hidroxifenol o catecol con


una cadena lateral que contiene un grupo amino. La sntesis se produce a partir del aminocido tirosina por accin de la tirosin-monooxigenasa dependiente de
NADPH, que rinde L-DOPA, sobre la que acta una descarboxilasa para su transformacin en dopamina (DA)
(Fig. 29.5). Esta ltima enzima necesita vitamina B6 como
cofactor. Las neuronas dopaminrgicas almacenan DA,

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO

407

Figura 29.5. Sntesis de catecolaminas.

mientras que las neuronas noardrenrgicas y adrenrgicas transforman la DA en noradrenalina (NA) por hidroxilacin de la cadena lateral. Esta reaccin es catalizada
por la dopamina-beta-monooxigenasa. La NA a su vez es
convertida en adrenalina (A) por metilacin del grupo
amino terminal de la NA. La reaccin est catalizada por
la NA-metiltransferasa. Estas reacciones tienen lugar tambin en la mdula suprarrenal, capaz de liberar adrenalina y noradrenalina a la sangre, desde donde pueden
desarrollar sus acciones en calidad de hormonas. La degradacin tiene lugar por la accin de enzimas aminooxidasa (MAO), catecol-metiltransferasa y alcohol-deshidrogenasa. Algunos productos de degradacin pueden detectarse en el lquido cefalorraqudeo, sangre y orina, y
pueden determinarse analticamente como indicadores
del metabolismo de estos neurotransmisores.
3. Otras aminas. Serotonina e histamina. La serotonina
o 5-hidroxitriptamina se encuentra en muchos tejidos
aunque slo en el cerebro acta como neurotransmisor
(Fig. 29.6). Su sntesis se produce a partir del triptfano que las neuronas captan de la circulacin para su

La sntesis de serotonina se produce a partir del triptfano.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 29.6. Sntesis y degradacin de la serotonina.

La serotonina es convertida en melatonina


en la glndula pineal.

Algunos aminocidos
como GABA, c. glutmico y glicina actan como neurotransmisores.

hidroxilacin hasta 5-hidroxitriptfano, por una triptfano-monooxigenasa. La posterior descarboxilacin


para producir 5-hidroxitriptamina es catalizada por la
5-hidroxitriptfano-descarboxilasa, enzima muy abundante en el citoplasma y similar a la descarboxilasa implicada en la sntesis de catecolaminas, por lo que la
sntesis de serotonina depende de la primera enzima de
la ruta que tiene carcter limitante. La va principal
para la degradacin de serotonina requiere de las enzimas aminooxidasa y aldehidodeshidrogenasa. La metilacin o sulfatacin de la amina o sus derivados puede
inactivar la serotonina y favorecer su eliminacin. En la
glandula pineal la serotonina es convertida en una hormona, la melatonina, cuyas acciones se oponen a las
gonadotropinas.
La histamina se obtiene por descarboxilacin de la histidina (Fig. 29.7). La enzima implicada puede ser una
descarboxilasa especfica o la misma enzima implicada
en la sntesis de catecolaminas y serotonina. Su degradacin se produce por transformacin final en cido Nmetilimidazol-actico. Las enzimas implicadas secuencialmente son histamina-metiltransferasa, amina-oxidasa
y aldehdo-deshidrogenasa. La histamina tambin es un
mediador de la inflamacin, localizado fundamental-

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO

Figura 29.7. Metabolismo de la histamina.

mente en los mastocitos, presentes en la mayora de los


tejidos. A nivel gstrico participa en la secrecin de
clorhdrico mediante un mecanismo paracrino.
4. Aminocidos. El 4-aminobutirato (GABA), cido
glutmico y glicina son aminocidos que actan como
neurotransmisores. Otros aminocidos quizs tambin lo
sean, aunque no est totalmente elucidado. El cido
gamma aminobutrico est ampliamente distribuido en
el cerebro de los mamferos y su sntesis se produce por
descarboxilacin del glutamato. La glutamato-descarboxilasa es casi exclusiva de las neuronas gabrbicas. El
glutamato necesario para la sntesis del neurotransmisor
se obtiene a partir del 2-cetoglutarato por transaminacin. ste ltimo procede del ciclo de Krebs. La accin
del GABA sobre la terminal postsinptica es de caracter
inhibidor. Sin embargo, la accin del glutamato como
neurotransmisor es de caracter excitador, al igual que el
cido aspartico, cuyas molculas son muy parecidas, lo
que dificulta su diferenciacin funcional como neurotransmisores. Su accin finaliza habitualmente por captacin desde la terminal presinptica o clulas de la gla.
La glicina es un aminocido implicado en la transmisin de numerosas vas. Se sintetiza fundamentalmente
a partir de la serina mediante la enzima serina hidroxi-

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410

FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La sntesis de neuropptidos se produce en forma de precursores inactivos.

Sus acciones se relacionan con procesos


de modulacin local
ms que con la neurotransmisin.

metiltransferasa. La reaccin es reversible y el exceso de


glicina revierte el proceso hacia la formacin de serina.
Se trata de un neurotransmisor de caracter inhibidor,
que despues de ejercer sus accin sobre la terminal postsinptica suele ser captado para su reutilizacin por la
neurona presinptica.
5. ATP. El ATP tambin puede ser almacenado en la terminal presintica y liberarse tras la llegada a ella de potenciales de accin, ejerciendo como neurotransmisor. Su
inactivacin se realiza por hidrlisis en la hendidura
sinptica.
6. Neuropptidos. A partir de la dcada de los 70 numerosos pptidos se incorporan a la clasificacin de los neurotransmisores. La mayora de ellos se conocan en relacin a otro tipo de funciones fisiolgicas, entre ellas la actuacin paracrna o endocrna de algunos pptidos
intestinales en el control de la funcin digestva. Parece
ser que su sntesis se produce en forma de precursores
inactivos como ocurre con algnas hormonas, y su liberacin separa el pptido activo de los aminocidos de conexin. Una vez cumplido el mensaje se produce la hidrolisis del neuropptido por peptidasas especficas.
Algunos neuropptidos de origen hipotalmico estimulan la liberacin de hormonas adenohipofisarias, mientras que otros se almacenan en la neurohipfisis y se liberan desde all a la sangre para actuar ellos mismos
como hormonas. Otros pptidos cerebrales participan en
complejas funciones relacionadas con el aprendizaje, la
memoria o el control de la homeostasia. En general sus
acciones se relacionan con procesos de modulacin local ms que con la neurotransmisin, ya que se liberan
por neuronas que disponen adems de otro neurotransmisor. Se encuentran implicados en determinadas enfermedades neurolgicas, por lo que existe gran inters en
dilucidar todos los aspectos relativos a su metabolismo y
localizacin.

RESUMEN
El nervio es un conjunto de fibras, prolongaciones de
las neuronas, cuyas membranas se caracterizan por presentar una diferencia de potencial a su travs que se denomina potencial de reposo. El potencial de reposo se produce por una distribucin desigual de los iones entre el inte-

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL NERVIO

rior y el exterior. Esta distribucin puede variar a consecuencia de modificaciones temporales en la permeabilidad
de la membrana, cuya consecuencia es la excitacin.
Cuando el potencial de reposo alcanza un nivel crtico de
excitacin como consecuencia de un estmulo umbral, se
produce un potencial de accin. Los potenciales de accin
se transmiten a lo largo de la membrana de la fibra nerviosa y su destino final es la sinapsis. Se trata de una estructura de conexin que permite el paso de informacin de una
neurona a otra. Un elemento clave en este tipo de comunicacin es el neurotransmisor. Distintos tipos de neurotransmisores actan como mensajeros en la sinpsis, desde la acetil-colina y catecolaminas, hasta neuropptidos,
pasando por algunos aminocidos. El conocimiento de su
metabolismo incluye la sntesis, almacenamiento, liberacin, accin e inactivacin, as como su distribucin en el
sistema nervioso central (SNC) y est contribuyendo a esclarecer la funcin de los distintos grupos neuronales as
como una parte importante de la neurofisiologa y neuropatologa.

APLICACIONES CLNICAS
Enfermedad de Parkinson
Es debida a la lesin ms frecuente de los ganglios basales
del encfalo, concretamente del sistema nigro-estriatal. Los sntomas consisten en rigidez, temblor de reposo y bradicinesia.
La dopamina es el principal neurotransmisor en estas estructuras cerebrales, en las cuales se ha comprobado para los enfermos de Parkinson, una disminucin en las concentraciones
neuronales de dopamina, de las enzimas implicadas en su sntesis y degradacin y de los metabolitos intermediarios. La administracin de L-DOPA, precursor de la dopamina que puede
atravesar la barrera hematoenceflica, mejora los sntomas,
aunque es descarboxilada parcialmente en los tejidos perifricos. Para evitar este efecto se utiliza la metildopahidrazina que
inhibe la descarboxilasa y no penetra en SNC.

Epilepsia
Es una enfermedad convulsivante crnica con diferentes tipos y estados, segn se produzca o no prdida de conciencia y

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

convulsiones tnico-clnicas. Una de sus causas es la disminucin en la actividad o sntesis del GABA, neurotransmisor de
caracter inhibidor cerebral. El tratamiento requiere el empleo
de anticonvulsionantes que actuen a nivel sinptico evitando
su inactivacin inmediata y prolongando su accin.

Depresin
Es una de las alteraciones afectivas ms frecuentes, cuya
sintomatologa principal es la tristeza, acompaada de una incapacidad para interesarse por el entorno y una disminucin
de la vitalidad con inactividad y cansancio general. En ocasiones se trata de un trastorno adaptativo reaccional ante un
acontecimiento demostrable. Otras veces se puede constatar su
base gentica. Puede demostrarse tambin un defecto en la
concentracin de catecolaminas o serotonina a nivel cerebral.
Los inhibidores de la aminooxidasa (IMAO) se utilizan para aumentar la accin del neurotransmisor, sin embargo tienen efectos secundarios importantes a nivel perifrico. Se puede aumentar el tiempo de accin inhibiendo la captacin por la terminal presinptica, siendo ste el mecanismo de accin de los
antidepresivos tricclicos.

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TEMA 30

Bioqumica
de la visin

Fotorreceptores. El 11-cis retinal: estructura y funcin.

En la especie humana los receptores visuales se localizan en


el ojo, el estmulo adecuado para las clulas fotorreceptoras es
la luz, que puede definirse como la radiacin electromagntica
cuyas longitudes de onda estn comprendidas entre 770 (rojo)
y 380 (violeta). Los colores tpicos del espectro se encuentran
dentro de estos lmites. El ojo se localiza en la cuenca orbitaria,
en l podemos distinguir el globo ocular y los rganos anejos.
El globo ocular es una esfera de aproximadamente 2 cm de
diametro, cuyas paredes estn constituidas por tres membranas: esclertica, coroides y retina, sta ltima es la estructura
fotosensible del ojo y va a ser estimulada por la banda visible
del espectro de energa radiante. Las clulas fotorreceptoras
actan como transductores de la energa luminosa, a partir de
la cual van a originar una seal nerviosa que contiene un mensaje visual al alcanzar los centros nerviosos. En el interior del
globo ocular se encuentra el humor acuoso, el cristalino y el
cuerpo vtreo. Los rganos anejos protegen y permiten el movimiento del ojo. Estos son: las cejas, parpados, pestaas, aparato lacrimal y los msculos del ojo.

FOTORRECEPTORES
El proceso visual implica la participacin de fotorreceptores o clulas sensibles al estmulo luminoso. Existen dos tipos
de fotorreceptores, conos y bastones, ambos se localizan en
la retina.
Los conos se localizan casi exclusivamente en una regin
de la retina denominada fvea. Estn especializados en la estimulacin con luz abundante, proporcionando la visin en co-

Las clulas sensibles


al estmulo luminoso
son los conos y los
bastones, localizados
en la retina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Los conos son responsables de la visin en color.

Los bastones proporcionan la visin en


blanco y negro.

lor. Estos fotorreceptores se sitan muy prximos, en unidades


sensitivas pequeas que reciben el nombre de campos de recepcin. Su estimulacin produce gran agudeza visual, por lo
que poseen una gran capacidad discriminativa.
Los bastones se sitan en el resto de la retina, muy separados entre s, dando lugar a campos de recepcin amplios. Se
estimulan con poca luz (visin con luz tenue), proporcionando
visin en blanco y negro. No distinguen los colores, siendo la
agudeza visual que proporcionan muy pequea.

Figura 30.1. Seccin del ojo humano.

Las ondas luminosas


al impactar sobre los
fotorreceptores inducen en ellos cambios
qumicos que generan
impulsos nerviosos.

El pigmento visual de
los bastones es la rodopsina, formada por
retinal (forma 11-cis)
y la protena opsina.

Las ondas luminosas impactan con estos receptores produciendo cambios qumicos que generan impulsos nerviosos que
sern transmitidos hasta el cerebro.
Estos dos tipos de clulas requieren vitamina A para la formacin de los pigmentos visuales.
Los bastones pierden su pigmento fotosensible, la rodopsina o prpura visual, cuando son iluminados, por lo que, al pasar de una zona bien iluminada hacia otra en penumbra, no
podemos ver hasta pasado un cierto tiempo, el cual es necesario para sintetizar de nuevo rodopsina.
La rodopsina es un compuesto formado por retinal (aldehdo de la vitamina A unido a una protena, la opsina). El retinal
por accin de la luz se transforma en un ismero que se desprende del fotorreceptor pasando a la sangre, y en el hgado se
resintetiza de nuevo hasta retinal.

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BIOQUMICA DE LA VISIN

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Figura 30.2. Representacin esquemtica de los fotorreceptores.

En los conos existen tres pigmentos, uno sensible al rojo,


otro al verde y otro al azul. La combinacin de estos produce
toda la gama de colores que podemos ver. Los tres juntos
producen el blanco. La isomerizacin del pigmento por efecto
de la luz pone en marcha los cambios de potencial de los receptores.
El E-caroteno es un pigmento de color naranja que se encuentra en zanahorias y verduras de color verde oscuro o amarillo. Estos alimentos son buenas fuentes del pigmento. El E-caroteno es precursor de la vitamina A, siendo escindido por enzimas de la mucosa intestinal que oxidan el doble enlace
situado en el centro de la molcula, dando de esta forma dos
molculas de retinal o forma aldehdica, cada una de ellas es a
continuacin reducida a la forma alcohlica, el todo-trans-retinol o vitamina A que tambin se puede encontrar en forma de
isomero 11-cis.
El hgado, yema de huevo y leche entera son buenas fuentes de retinol preformado. La conversin de los carotenoides en
retinol raramente alcanza el cien por cien, por lo que la potencia en vitamina A de los distintos alimentos se expresa en ter-

En los conos existen


tres tipos de pigmentos conforme a su sensibilidad al color, rojo,
verde, o azul.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

Figura 30.3. Estructura del retinol.

minos de equivalentes de retinol (1 U.I. de vitamina A 1 Pg


de retinol o 6 Pg de E-caroteno y 12 Pg de otros carotenoides).
El retinol es absorbido por la mucosa intestinal donde es esterificado con un cido graso, normalmente con el cido palmtico que es el ms abundante en el organismo humano, dando
palmitato de retinol. Tras su esterificacin el retinol es transportado por el torrente circulatorio hasta el hepatocito, donde es
almacenado asociado a una protena denominada protena fijadora de retinol. La protena fijadora libera el retinol cuando
alcanza la retina, donde el todo-trans-retinol es oxidado dando
de nuevo todo-trans-retinal que posteriormente se transformar
en el isomero 11-cis-retinal debido a la accin cataltica de la
enzima retinal-isomerasa.
Los pigmentos visuales de las clulas fotorreceptoras transforman una seal luminosa en impulso nervioso. El mecanismo

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BIOQUMICA DE LA VISIN

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es el mismo para ambos tipos de fotorreceptores, si bien el proceso se ha estudiado fundamentalmente en los bastones, as
cuando la luz incide sobre el bastn, la rodopsina sufre una serie de transformaciones qumicas rpidas que conducen a la
formacin de rodopsina fotoexcitada que proporciona el nexo
de unin entre esta serie de reacciones y la respuesta elctrica.
El producto final de la transformacin ocasionada por la luz
consiste en la formacin de un complejo con el 11-cis-retinal
produciendo el pigmento visual rodopsina. Cuando la rodopsina absorbe luz, el 11-cis-retinal se isomeriza en todo-trans-retinal-opsina. En situaciones de luz y oscuridad la forma todo-

La luz transforma el
11-Cis retinal en su
isomero el todo-transretinal.

Figura 30.4. Ciclo de la rodopsina.

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

La combinacin de
los tres colores bsicos produce toda la
gama de los mismos.

La isomerizacin de
los pigmentos de los
conos por efectos de
la luz, provoca cambios en el potencial
de membrana de los
receptores generando
as los impulsos nerviosos.

trans del retinal se isomeriza a 11-cis y la rodopsina es reconstituida. El retinol es devuelto a la circulacin y se almacena en el
hgado. Cuando es necesario, el retinol entra de nuevo en la
circulacin perifrica y es captado por la retina para ser convertido en todo-trans retinal e isomerizado a 11-cis retinal. El ciclo
se completa cuando ste ltimo se combina con la opsina para
producir de nuevo rodopsina.
Todas estas reacciones se producen en la zona de membranas del segmento externo de los bastones, la cual presenta gran
nmero de invaginaciones. El acoplamiento entre los cambios
moleculares que provoca la luz y la respuesta elctrica se realiza
mediante la activacin de la transducina, una protena G especfica. Esta protena intercambia GTP por GDP, activando
una fosfodiesterasa. sta ltima a su vez cataliza el paso de
GMPc a 5c-GMP. Cuando los niveles celulares de GMPc estn
elevados (como ocurre en la oscuridad) se mantienen abiertos
los canales de sodio de la membrana y la clula esta por lo tanto relativamente despolarizada. En estas condiciones se produce una liberacin tnica de neurotransmisor por parte del
bastn. La reduccin de los niveles de GMPc debido a la incidencia de la luz determina el cierre de los canales de sodio y la
membrana se hiperpolariza, disminuyendo de esta forma la liberacin de neurotransmisor. Este cambio en la liberacin del
neurotransmisor constituye la seal que posteriormente es procesada por las clulas nerviosas de la retina. La bomba de sodio mantiene baja la concentracin de este ion en el interior celular. Durante el proceso de transduccin se produce una amplificacin de la respuesta a la luz, cada molcula activa de
rodopsina activar unas 500 molculas de transducina, cada
una de las cuales a su vez producir la hidrlisis de varios miles
de molculas de GMPc.
Los procesos en los conos son similares, aunque existen
tres tipos distintos de rodopsinas (con diferentes espectros) y
de transducina. Los diferentes tipos de pigmentos contienen
la misma fraccin de 11-cis retinal, diferencindose en sus
opsinas. La sensibilidad de los conos es inferior a la de los
bastones.
En presencia de luz, la mayor parte de la rodopsina se encuentra no conjugada y, por lo tanto, la sensibilidad a la luz es
baja. Durante el proceso de adaptacin a la oscuridad, que
dura unos cuarenta minutos, los niveles de rodopsina se incrementan, aumentando as la sensibilidad a la luz hasta unas
25.000 veces. Los conos se adaptan ms rpidamente que los
bastones, pero su sensibilidad es mucho menor. El proceso inverso, adaptacin a la luz, requiere aproximadamente cinco minutos. Debido a que durante el proceso fotoqumico se produ-

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BIOQUMICA DE LA VISIN

ce cierta perdida de vitamina A, es necesario un aporte continuo de la misma a travs de la dieta. Una deficiencia de vitamina A origina una disminucin en sus niveles sanguneos que
tiene como resultado un aumento del tiempo necesario para la
formacin de nueva rodopsina tras la exposicin a la luz. La vitamina A se almacena en el hgado en cantidades relativamente altas, por ello no es frecuente que se produzcan deficiencias
lo suficientemente graves como para causar problemas clnicos,
a menos que la carencia se prolongue de manera crnica durante periodos de tiempo relativamente largos (meses).

RESUMEN
Existen dos tipos de fotorreceptores, conos y bastones.
Las ondas luminosas impactan con estos receptores produciendo cambios qumicos que dan lugar a impulsos nerviosos que se transmiten al cerebro. Estos dos tipos de clulas requieren vitamina A para la formacin de los diferentes tipos de fotopigmentos. El E-caroteno produce dos
molculas de vitamina A (retinol). La oxidacin del retinol
en el carbono nmero 15 produce la forma aldehdica o
retinal. La rodopsina, pigmento visual, est formada por
retinal y la protena opsina. En la oscuridad, el retinal de la
rodopsina se encuentra en la forma 11-cis. Cuando son
excitadas por la luz visible las molculas de rodopsina, el
11-cis retinal experimenta una serie de transformaciones
que rinden todo-trans-retinal, el cual fuerza un cambio en
la forma de la molcula de rodopsina. Esta transformacin
conduce a una seal elctrica hacia el cerebro, que es la
base de la transduccin visual.

APLICACIONES CLNICAS
Xeroftalma o ceguera nocturna
La vitamina A interviene en el proceso de la visin y su deficiencia provoca adems de otros trastornos, ceguera nocturna. Dado que esta vitamina se almacena en el hgado, la carencia de la misma slo aparece despus de periodos prolongados
de ingestin inadecuada. La ceguera nocturna es un sntoma
precoz de carencia leve de vitamina A que consiste en que los
receptores lumnicos de los bastones no responden normalmente al estmulo luminoso. La deficiencia grave de vitamina A

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FUNDAMENTOS DE BIOQUMICA METABLICA

da lugar a una progresiva queratinizacin de la cornea, conocida como xeroftalma en sus estados avanzados. En las etapas
finales suele aparecer infeccin seguida de hemorragia ocular y
perdida permanente de visin. Los sntomas graves de carencia
de vitamina A generalmente slo se ven en pases subdesarrollados.
Por otra parte el exceso de almacenamiento de la vitamina
o hipervitaminosis es un cuadro txico. La ingesta alimentaria
de vitamina A no provoca toxicidad, por lo que la mayora de
los casos de hipervitaminosis ocurren por dosis farmacolgicas
masivas utilizadas en el tratamiento del acn o en la prevencin
de resfriados, si bien esta prctica, comn en tiempos pasados,
es relativamente rara en la actualidad.

Discromatopsias
Algunas enfermedades genticas se caracterizan por la ausencia de un tipo o ms de determinados conos, en estos casos
se encuentra alterada la sntesis de fotopigmento. La discromatopsia estar ms o menos acentuada en funcin del nmero
de pigmentos afectados y de su grado de afectacin. En cada
caso, existir ceguera para el color codificado por el tipo de
cono afectado. Este tipo de trastornos de la visin se encuentra
en aproximadamente el 10% de la poblacin, del cual el 90%
corresponde a los varones, ya que se trata de una enfermedad
gentica ligada al cromosoma X. La alteracin de los fotopigmentos puede llegar a hacerlos completamente insensibles a la
luz, en este caso se habla de ceguera total para los colores. Esta
forma de la enfermedad es muy rara y afecta solo al 0,01% de
la poblacin.

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ERRNVPHGLFRVRUJ

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