Proyecto Uv Visble

UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUMICA
LABORATORIO DE ESPECTROSCOPIA MOLECULAR

Determinacin de nitrato y amonio en
fertilizantes, utilizando la tcnica de Anlisis
por Inyeccin en Flujo acoplada a la
Espectroscopa de Absorcin Molecular
Ultravioleta/Visible en fase gaseosa

Trabajo Especial de Grado de Licenciatura

Br. Eliana R. Guilln C.
Tutora: Dra. Maribel Valero

Mrida - Venezuela
Enero 2009

Trabajo Especial de Grado Laboratorio de Espectroscopa Molecular

i

RESUMEN
En el presente trabajo se valid un mtodo para la determinacin
secuencial de amonio y nitrato en fertilizantes mediante el uso de la tcnica de
anlisis por inyeccin en flujo acoplada a la espectroscopia de absorcin
molecular ultravioleta-visible como sistema de deteccin (FIA-EAM). En el
sistema propuesto el contenido de amonio y nitrato en las diferentes muestras
se determin mediante la conversin de los analitos a la forma de amoniaco. El
mtodo consiste en la inyeccin en dos etapas de 100 L de muestra en un
sistema en flujo. En la primera, el volumen de muestra inyectado; se mezcla
con una corriente de hidrxido de sodio 3 mol.L
-1
y posteriormente en un
serpentn (R1), la mezcla previa entra en contacto con una corriente de
hidrxido de sodio que contiene una concentracin de 13 mol.L
-1
. En este
punto, se produce cuantitativamente amoniaco a partir de amonio. La mezcla
gas-lquida, es arrastrada por una corriente de nitrgeno a un segundo
serpentn (R2) y luego a un separador de fases (SF), donde se produce la
separacin definitiva de la fase gaseosa, para finalmente ser transportada a
una celda para gases que se encuentra alineada al camino ptico del
espectrofotmetro, el cual mide la absorbancia del compuesto en fase gaseosa
a 197 nm. De esta forma se obtiene la seal de amoniaco a partir de amonio en
la muestra. En la segunda etapa la muestra inyectada en la corriente del
hidrxido de sodio 3 mol.L
-1
es dirigida mediante el uso de una vlvula
selectora (VS) hacia una columna de 17 cm de longitud rellena de Zn/Cu, la
cual permite la conversin cuantitativa de nitrato a la forma de amonio. Este
ltimo, se hace reaccionar con hidrxido de sodio 13 mol.L
-1
como fue descrito
anteriormente para la formacin cuantitativa de amoniaco. La seal obtenida en
esta etapa corresponde al amoniaco procedente del amonio y nitrato en la
muestra. La seal correspondiente al nitrato se obtiene por la diferencia de las
dos seales.

ii
El mtodo propuesto presento caractersticas analticas como: intervalo
dinmico, lmite de deteccin y cuantificacin, precisin y frecuencia de anlisis
adecuadas para el anlisis propuesto. Los estudios de recuperacin y adicin
de estndar indicaron que el mtodo es exacto y se encuentra libre de
interferencias, con lo cual constituye una alternativa interesante y vlida para la
determinacin de la concentracin de nitrato y amonio en fertilizantes
nitrogenados de origen inorgnico, que puede ser usada de forma rutinaria
para el control de calidad en las industrias del ramo.


iii

DEDICATORIA

Los vencedores son aquellos que creen en si mismos y depositan su
confianza en Dios, a quin hoy cuando estoy celebrando el logro de una de mis
anheladas metas; le dedico mi trabajo porque siempre ha estado conmigo;
dndome la fuerza necesaria para seguir adelante.

En memoria de todos los que hoy no estn, porque Dios un da me los
quit; se que donde l los tenga comparten conmigo este triunfo, primo del
alma Alfonso y Ta Francy les dedico mi logro.

A mis Padres, lo ms hermoso que poseo, a quienes debo y agradezco
todo lo que me han dado, sin pedirme nada a cambio, solo teniendo por
recompensa el sentirse felices y dichosos de lograr mi bienestar y felicidad.
Todo lo que hasta ahora he logrado en mi vida, es gracias a la sabia educacin
con la que me instruyen, porque representan para mi, el esfuerzo, sacrificio,
consuelo, enseanza, consejo oportuno, rectitud y abnegacin, este triunfo es
totalmente en honor a ustedes.

A mis hermanos Edgar y Ender y a las hermanas que la vida me regalo
Yelitza y Yucelis, quienes con cario y comprensin son el bastn que me
ayuda a seguir en pie.


iv

AGRADECIMIENTO

Hoy se hace realidad una de mis metas, pero sabia que para alcanzarla
tendra que aprender a conocer virtudes como la paciencia, constancia,
sacrificio y dedicacin. En este camino existieron momentos difciles que me
llenaron de angustia, depresin y tristeza, querindome apartar de mi sueo,
pero gracias a Dios todopoderoso y a la Santsima Virgen que me iluminaron
siempre para poder vencer estos grandes obstculos. S, que sin ayuda
probablemente no lo hubiese alcanzado, por lo cual considero que ha sido un
triunfo en conjunto y son muchas las personas especiales a las quiero
agradecer.
A Dios y a la Virgen, quienes me dieron fortaleza y me guiaron siempre
por el buen camino, dndome la mano para levantarme en cada uno de los
tropiezos y poder seguir adelante.

A mis Padres, a quienes les debo la vida, son los mejores padres del
mundo; gracias por su inmenso amor, sus esfuerzos, apoyo y por la confianza
que depositaron en m. Gracias por sacarme adelante y regalarme la
oportunidad de lograr una de mis metas, la cual constituye la herencia ms
valiosa que pudiera recibir para continuar superndome. Los Amo.

A mis hermanos y sobrinos, por ser mis amigos incondicionales, fuente
de inspiracin, motivo de superacin, con su apoyo, ayuda y cario he logrado
este sueo hoy da. Dios los bendiga.

Gracias a la profesora Maribel Valero (Tutora), por creer en m sin
conocerme y abrirme las puertas del Laboratorio de Espectroscopia Molecular
para que realizar mi trabajo especial de grado. Gracias por todo.


v
Al profesor Ali Bahsas por ser una persona ejemplar, excelente profesor,
amigo y orientador. Prof. creo que esta dems recordarle que usted para mi es
como mi padre. Le doy gracias a Dios por haberlo puesto en mi camino, quiero
decirle que puede contar siempre conmigo. Gracias por sus consejos y
excelentes enseanzas de vida y humildad. Por permitirme trabajar a su lado
durante todos estos aos. En fin Prof. No tengo nunca como pagarle todo lo
que usted ha hecho por m, bueno ya sabe que para mi seguir siendo el Dios
de la Facultad de Ciencias. Lo quiero mucho.

A Pedro y Alvaro del Labarotario de Catlisis, a Edyleiba y Marlene del
Laboratorio de Espectroscopa Molecular, a Iris y Fanny Tcnicos de los
Laboratorios de docencia, gracias por haber estado ah cada vez que los
necesite ustedes me ayudaron siempre que se los ped, muchachos mil gracias
en verdad. Dios se los pague.

A mis verdaderos amigos, si que han sido bastantes desde el J ardn de
Infancia hasta la Universidad, cada uno ocupa un espacio importante en mi
vida y un lugar especial en mi corazn, con ellos compart buenos y malos
momentos y hoy en da llenan mi mente de gratos recuerdos, nunca los
olvidar pues marcaron mi vida. Tengan siempre presente que todo lo que se
quiere en la vida se puede. Luchen por sus sueos.

A todos los integrantes del Laboratorio de Espectroscopia Molecular, por
permitirme trabajar con ellos durante todos estos meses que estuve
desarrollando mi trabajo, gracias por su amistad, asesora y apoyo.

A mis amigos del Laboratorio de Resonancia Magntica Nuclear (RMN),
por ese cario y compartir tantos momentos gratos conmigo ustedes son parte
de mi familia pues conviva con ustedes a diario, ustedes fueron testigos fieles
ms que cualquier otra persona de todo lo que he pasado para poder hacer
realidad este sueo, muchas gracias muchachos. Suerte.


vi
A la Ilustre Universidad de los Andes, mi casa de estudio, por brindarme
la oportunidad de formar parte de ella, orientndome con sus profesores,
quienes impartieron sus conocimientos para formarme como profesional.

A todas y cada una de esas personas que confiaron, creyeron en m y se
atrevieron a apostar, sabiendo que s lo lograra, hoy pueden decir que han
ganado, pues ya la espera ha terminado, a ustedes gracias por estar all
formando parte de mi vida. Lo Logr.

Eliana Guilln


i

NDICE DE CONTENIDO
Pgina
NDICE DE CONTENIDO i

NDICE DE FIGURAS iv

NDICE DE TABLAS vi

RESUMEN vii

INTRODUCCIN 1

CAPTULO I
4
EL PROBLEMA

1.1 Planteamiento del problema 4

1.2 Objetivos de la investigacin 6

1.2.1 General 6

1.2.2 Especficos 6

CAPTULO II

MARCO TERICO 7

2.1 Fundamento terico 7

2.1.1 Historia del nitrato y del amonio 7

2.1.2 Naturaleza qumica del nitrato y del amonio 8

2.1.3 Importancia del nitrato y del amonio 10

2.1.4 Usos de las sales de nitrato y de amonio 12

2.1.5 Aspectos generales de los fertilizantes 14

2.2 Antecedentes 19


ii
2.3 Hiptesis 26

2.4 Plan de trabajo 27

CAPTULO III
29
MARCO METODOLGICO
29
3.1 Parte experimental

3.1.1 Instrumentacin 29

3.1.2 Reactivos 30

3.1.3 Preparacin de la columna reductora 30

3.1.4 Activacin de la columna 31

3.1.5 Regeneracin de la columna 31

3.1.6 Preparacin de las muestras de fertilizantes 32

3.2 Metodologa propuesta 33

3.2.1 Procedimiento general 33

3.3 Espectroscopa de absorcin molecular en el
Ultravioleta/Visible
36

3.4 Tcnica de anlisis en flujo y generacin de fase
gaseosa en lnea
43

CAPTULO IV

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS 51

4.1 Estudios preliminares 51

4.2 Optimizacin del acoplamiento de sistema FIA-GFG-
EAM-UV-Vis para la determinacin de amonio
54

4.2.1 Efecto de la concentracin de hidrxido de sodio
sobre la respuesta instrumental
54

4.2.2 Efecto de los caudales de la solucin portadora
y del hidrxido de sodio sobre la seal analtica
56

4.2.3 Efecto del dimetro y longitud de los serpentines
(R1 y R2) sobre la seal analtica
57

iii
4.2.4 Efecto del flujo de nitrgeno sobre la seal
analtica
57

4.2.5 Efecto del volumen de inyeccin sobre la seal
analtica
58

4.3 Caracterizacin analtica del sistema FIA-GFG-EAM-
UV-Vis para la determinacin de amonio
59

4.4 Estudios de efectos de matriz para el in amonio 60

4.5 Estudios de recuperacin para el in amonio 61

4.6 Determinacin de nitrato 62

4.6.1 Efecto de la longitud de la columna reductora
sobre la seal analtica
62

4.7 Caracterizacin analtica para la determinacin de
nitrato
63

4.8 Estudios de efectos de matriz para el in nitrato 64

4.9 Estudios de recuperacin para el in nitrato 66

5. Anlisis de muestras reales 66

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 68

BIBLIOGRAFA 70


iv

NDICE DE FIGURAS
Fig. 1.-
Ciclo del nitrgeno
10

Fig. 2.-
Diagrama esquemtico de un sistema utilizado para la
determinacin de las tres formas de nitrgeno inorgnico
24

Fig. 3.-
Representacin esquemtica del sistema AIF-GFG-
EAM-UV-Visible
35

Fig. 4.-
El proceso de la absorcin molecular en el Ultravioleta-
Visible
38

Fig. 5.-
Diagrama de bloques de un instrumento bsico para la
Absorcin Molecular en el Ultravioleta-Visible
40

Fig. 6.-
Esquema bsico sobre el sistema de anlisis en flujo
continuo
44

Fig. 7.-
Esquema bsico del sistema de anlisis de inyeccin en
flujo (FIA)
46

Fig. 8.-
Representacin esquemtica del sistema FC-GFG-EAM-
UV-Visible
52

Fig. 9.-
Espectro de absorcin molecular del amoniaco (NH
3
)
obtenido por flujo continuo utilizando una solucin de
11,111 x 10
-2
mol NH
4
+
L
-1

53

Fig. 10.-
a) Efecto de la concentracin de hidrxido de sodio por el
canal portador (C1), b) Efecto de la concentracin de
hidrxido de sodio por el canal (C2) sobre la seal
analtica de una solucin de 1,389 x 10
-2
mol.L
-1

56

Fig. 11.-
a) Efecto del flujo de hidrxido de sodio por el canal
portador C1, b) Efecto del flujo de hidrxido de sodio por
el canal C2 sobre la seal analtica de una solucin de
1,389 x 10
-2
mol.L
-1

57

Fig. 12.-
Efecto del flujo de nitrgeno, sobre la seal analtica de
una solucin de 1,389 x 10
-2
mol.L
-1
de amonio
58


v
Fig. 13.-
Efecto del volumen de inyeccin, sobre la seal analtica
de una solucin de 1,389 x 10
-3
mol.L
-1
de amonio
59

Fig. 14.- Estudios de adicin de estndar para el in amonio 61

Fig. 15.-
Efecto de la longitud de la columna reductora, sobre la
seal analtica de una solucin de 4,03 x 10
-3
mol.L
-1
de
nitrato
63

Fig.16.- Estudios de adicin de estndar para el in nitrato 65


vi

NDICE DE TABLAS
Tabla 1.
Caractersticas de los fertilizantes ms usados
18

Tabla 2. Caractersticas de los reactivos utilizados 30

Tabla 3.
Muestras de fertilizantes nitrogenados sintticos
inorgnicos
32

Tabla 4.
Condiciones experimentales de operacin del sistema
AIF-GFG-EAM-UV-Visibles
36

Tabla 5. Absorcin por aniones inorgnicos 39

Tabla 6.
Condiciones experimentales de operacin del sistema
FC-GFG-EAM-UV-Visible
52

Tabla 7.
Caracterizacin analtica del sistema AIF-GFG-EAM-
UV-Visible para el in amonio
60

Tabla 8. Estudio de recuperacin para el in amonio 62

Tabla 9.
Caracterizacin analtica del sistema AIF-GFG-EAM-
UV-Visible para el in nitrato
64

Tabla 10. Estudio de recuperacin para el in nitrato 66

Tabla 11. Contenido de amonio y nitrato en fertilizantes 67

Br. Eliana R Guilln C 1

INTRODUCCIN
La produccin agrcola depende en gran medida de que los suelos sean
capaces de desarrollar cultivos con un buen rendimiento y esa capacidad es
establecida por su fertilidad. El contenido de nutrientes de origen natural en los
suelos, generalmente no es suficiente para lograr una adecuada productividad
y as aumentar los rendimientos de las cosechas. Por esta razn, se emplean
los fertilizantes naturales y qumicos (orgnicos e inorgnicos). El nutriente ms
utilizado es el nitrgeno, ya que ste afecta directamente los rendimientos y la
calidad de los productos. Los fertilizantes nitrogenados contienen el nitrgeno
principalmente bajo la forma de nitrgeno inorgnico (nitrato y amonio) que es
la forma que puede ser absorbida por las plantas. Sin embargo, la capacidad
de absorcin vara segn el cultivo y las tcnicas agrcolas, a fin de obtener
una mxima produccin se aplica un exceso del producto al suelo, este exceso
puede perderse por lixiviacin en forma de nitrato (NO
3
-
), por volatilizacin en
forma de amonaco (NH
3
), igualmente el amonio (NH
4
+
), puede almacenarse en
las plantas, generando problemas serios de contaminacin ambiental y
humana.
[14]
En la actualidad, el uso del nitrato como fertilizante nitrogenado en la
agricultura intensiva desencadena problemas ambientales como: la
contaminacin de las aguas, la degradacin de la capa de ozono y problemas
sanitarios como: deficiencias en la oxigenacin sangunea en lactantes o la
acumulacin de nitrosaminas, sustancia cancerigena en el estmago adulto.
Por esto, es necesario buscar un equilibrio entre la productividad agrcola y la
cosecha de calidad, manteniendo las condiciones ambientales.
[58]

El in nitrato y el amonio, pueden ser transformados, por diversos
mecanismos qumicos y biolgicos a nitrito y amoniaco respectivamente, cuyas
toxicidades estn bien documentadas.
[3,911]
Debido a esto, en la literatura se
pueden encontrar una amplia variedad de propuestas analticas para
determinar los contenidos de nitrato y amonio en diversas matrices (biolgicas,
ambientales, industriales, etc.) a fin de ser utilizadas en varios sectores con el
objeto de establecer controles o diagnsticos.
[1217]
La mayora de las
propuestas metodolgicas para la determinacin de amonio (amoniaco) y
nitrato (luego de la conversin a nitrito) se basan en el uso de la tcnica
espectrofotomtrica, utilizando las reacciones de Berthelot (reaccin de lesser)
y reaccin de Griess respectivamente.
[14,1821]

Por otra parte, la espectroscopa de absorcin molecular en fase
gaseosa (EAMFG), ha sido utilizada para la determinacin de aniones y
cationes, mediante la conversin del analito en una especie molecular voltil y
medida su mxima absorbancia en fase gaseosa. Por su parte, las tcnicas en
flujo han permitido nuevos desarrollos en EAMFG, que se caracterizan por su
simplicidad, rapidez y seguridad, superando muchos de los inconvenientes
encontrados en otros mtodos.
[22]

Dada la importancia que tienen las especies nitrogenadas inorgnicas;
en los ltimos aos el Laboratorio de Espectroscopa Molecular ha abordado
este tema en diferentes matrices; con el fin de disear metodologas rpidas,
simples, sensibles, etc., que permitan la cuantificacin de nitrato, amonio y/o
nitrito en muestras como aguas, suelos, alimentos, entre otros. Por estas
razones, es que surge la iniciativa de disear una metodologa con
caractersticas analticas adecuadas que permita la cuantificacin del in
amonio y nitrato en fertilizantes.
Con base a lo anteriormente descrito, el presente trabajo, tiene como
objetivo validar un mtodo basado en el acoplamiento de la tcnica en flujo,
generacin de fase gaseosa y deteccin por espectroscopa de absorcin
molecular ultravioleta-visible, para la determinacin de nitrato y amonio en
fertilizantes.
El presente trabajo ha sido dividido en varios captulos. El primero se
basa en el planteamiento del problema, en el cual se trata de enfocar las ideas
contextuales del problema y equivalentemente se hace referencia al por qu se
debe hacer dicho estudio; as como la limitacin en tiempo y espacio del
mismo, plantendose tambin los objetivos general y especficos que pretende
la investigacin. En el segundo se enfoca el marco referencial, el cual consta
de un fundamento terico sobre el tema planteado, incluyndose antecedentes
y planteamiento de la hiptesis. En el tercero, se incluye la instrumentacin y
reactivos utilizados, as como la metodologa usada. Adicionalmente, se
abordan algunos aspectos relacionados con la tcnica de Espectroscopa de
Absorcin Molecular y las tcnicas en flujo las cuales estn involucradas en
esta propuesta, con el objeto de poder precisar los parmetros que se deben
optimizar. En el captulo cuatro, se incluyen el anlisis y discusin de los
resultados obtenidos sobre la metodologa propuesta y finalmente se presentan
las conclusiones y recomendaciones del trabajo.

CAPTULO I
EL PROBLEMA

1.1 Planteamiento del problema
En general la comercializacin de fertilizantes en el mundo, ha tenido un
crecimiento sustancial desde que a principios del siglo XX Fritz Haber,
descubri como acortar el ciclo del nitrgeno,
[3,11]
fijando qumicamente el
elemento a altas temperaturas y presiones, creando as fertilizantes que podan
ser aadidos directamente al suelo para incrementar en forma significativa la
productividad agrcola. Sin embargo, el uso de estos productos, ha trado
algunas consecuencias negativas, ya que los mismos al ser utilizados en
exceso, incrementan el contenido de nitratos y amonio (que es el nitrgeno
asimilable para las plantas) en la solucin de los suelos, sin tomar en cuenta el
aporte de estas especies, procedentes de las cantidades de nitrgeno
orgnico. El excedente de nitrato no es retenido en grandes cantidades por los
suelos y puede ser fcilmente lavado o lixiviado, y as estar presente en las
aguas potables, que al ser utilizadas por los seres vivos puede ejercer efectos
txicos, ya que es un potente metahemoglobinizante y tiene accin
vasodilatador, tambin al ingerir aguas contaminadas por nitratos, estos
pueden ser transformados en el organismo a la forma de nitrito. La toxicidad del
nitrito, esta principalmente relacionada con su participacin directa en la
oxidacin frrica de la hemoglobina (Hb) normal, a metahemoglobina (metHb);
la cual es incapaz de transportar el oxgeno a los tejidos. Esta especie, tambin
tiene una toxicidad indirecta, ya que reacciona con aminas o amidas para
producir compuestos N-nitroso, nitrosaminas y nitrosamidas, los cuales poseen
efectos cancergenos y mutagnicos.
[69,12,23]

Las sales de amonio aplicadas, en la superficie de los suelos alcalinos
produce un gas que se escapa a la atmsfera como amoniaco,
[3]
siendo este un
compuesto txico, dependiendo de la dosis; para todo el reino animal. El
amonio tambin puede sufrir un proceso de oxidacin biolgica para
transformarse en nitratos, en este proceso, intervienen organismo autotrficos
(bacterias de los gneros Nitrosomas y Nitrobacter).
[3]

Los fertilizantes nitrogenados, contienen concentraciones elevadas de
nitrato y amonio que varan entre (6 y 19) g/kg y como se planteo
anteriormente, son utilizados en exceso en los diferentes cultivos, con el objeto
de incrementar las cosechas. Cuando la disponibilidad del fertilizante en los
suelos es alta, las plantas son capaces de absorber niveles superiores a los de
la disponibilidad inmediata, haciendo que el exceso sea almacenado en los
tejidos ms viejos de estas. Otra parte del fertilizante que queda en la solucin
de los suelos, puede perderse por lixiviacin en forma de nitrato (NO
3
-
) y por
volatilizacin en forma de amonaco (NH
3
),
[3]
lo que conlleva a un aumento
importante de estas especies en el medio ambiente con un alto riesgo de
incorporarse en la cadena alimentara.
En Venezuela, existen regiones que son explotadas desde el punto de
vista agrcola. Sin embargo, los suelos de la regin Andina en particular, suelen
ser los ms apropiados para el desarrollo de una variedad de cultivos y dichos
productos son los de mayor consumo en el pas. Estos al igual que en muchas
partes del mundo son tratados con una variedad de compuestos entre ellos
fertilizantes nitrogenados; ya que cuando se trata de producir grandes
cantidades de alimentos en menos tiempo y espacio, algunos nutrientes del
suelo suelen agotarse tras el cultivo ao tras ao en un mismo lugar,
ocasionando un mayor desgaste ecolgico. A fin de evitar esto, los agricultores
de la regin aseguran el rendimiento de sus cultivos adicionando fertilizantes
sin hacer un estudio previo de los requerimientos del suelo.
Por lo antes expuesto, es importante controlar los niveles de nitrato y
amonio que son adicionados a los diferentes tipos de suelos a travs del uso
de fertilizantes nitrogenados a fin de evitar que un exceso de los mismos pueda
producir serios problemas de contaminacin ambiental.
En los ltimos cinco aos, el Laboratorio de Espectroscopia Molecular
viene trabajando en una lnea de investigacin que se refiere al desarrollo de
nuevos diseos metodolgicos que incluye la automatizacin y/o actualizacin
de mtodos clsicos para la determinacin de nitrato y amonio en diversas
matrices con miras a la prestacin de servicios de anlisis qumico y control de
calidad para empresas productoras del sector agrcola, y usuarios de anlisis
de suelos y plantas, tanto a nivel nacional como del exterior.
En este orden de ideas, en el presente trabajo, se propone una metodologa
para la determinacin de estas especies en fertilizantes nitrogenados que son
utilizados para la produccin agrcola en la regin de los Andes Venezolanos.

1.2 Objetivos de la investigacin
1.2.1 General
Validar una metodologa que permita la determinacin de nitrato y
amonio en fertilizantes que se comercializan en la regin de los Andes
Venezolanos, basada en el acoplamiento de la tcnica de Anlisis por
Inyeccin en Flujo con Espectroscopia de Absorcin Molecular ultravioleta-
visible, mediante la generacin de una fase gaseosa en lnea.
1.2.2 Especficos
1) Utilizar una o varias reacciones qumicas para generar en lnea
amoniaco a partir de soluciones de cloruro de amonio y nitrato de sodio.
2) Seleccionar parmetros instrumentales y espectroscpicos, como flujo
de los diversos canales, serpentines de reaccin, longitud de onda, etc.
3) Seleccionar parmetros qumicos, como concentracin de reactivos.
4) Caracterizar analticamente el sistema en trminos de sensibilidad,
lmite de deteccin, concentracin mxima, concentracin mnima, etc.
5) Validar el mtodo mediante los estudios de interferencia y
recuperacin.

CAPTULO II
MARCO TERICO

2.1 Fundamento terico
2.1.1 Historia del nitrato y del amonio
El nitrgeno y sobre todo sus compuestos derivados; como el nitrato y el
amonio, son de gran inters para los seres humanos, debido a su importancia
en la atmsfera, en los procesos de la vida humana y en general de las plantas
y animales.
[3]

El nitrato en si mismo es inocuo, pero puede ser transformado por
diversos mecanismos qumicos y bioqumicos a la forma de nitrito, cuya
toxicidad esta ya verificada y afecta la salud de las personas.
[69,11,12,14]
Estos se
conocen al menos desde la edad media y son sales o esteres del cido ntrico
(HNO
3
). Con la introduccin de la plvora los pequeos yacimientos naturales
de sales de nitrato ya no eran suficientes y se pas a un proceso de fabricacin
a partir de los excrementos humanos y de animales; estos se vertan sobre un
lecho alto y bien aireado de material orgnico como rastrojos, adems se
aadan cantidades de cal. En estas condiciones se genera el nitrato de calcio,
este, por ser soluble en agua pudo ser extrado y obtenido tras la evaporacin
del lquido.
[23,24]
La adicin de carbonato potsico extrado de las cenizas de
madera, a una disolucin del nitrato clcico precipitaba el calcio en forma de su
carbonato (la cal) y el nitrato potsico se obtena tras evaporacin del
disolvente.
[24]

En relacin al in amonio (del latn ammonium) puede formar sales
amnicas cuando se une con iones negativos, estos compuestos son obtenidos
por reacciones del amoniaco con los cidos: Los antiguos sacerdotes del siglo
(XII) conocan las sales amnicas producidas por la destilacin del estircol del
camello cerca del templo de Jpiter Amn en Libia de ah su nombre, tambin
se atribuye a los egipcios su descubrimiento llamndolo amoniaco o sales
amoniacales, en memoria del dios del sol Ra Ammon.
[25]

En Europa durante la edad media el amoniaco se obtena calentando los
cueros y pezuas de bueyes y se le llamaba espritu de cuerno de ciervo. El
amoniaco tambin fue descubierto por los alquimistas quienes se encargaban
de estudiar su obtencin y propiedades, siendo Priestley quien lo aisl por
primera vez y aos ms tarde Berthollet estableci su composicin exacta.
[25]
En el siglo XIX la principal fuente de amoniaco fue la destilacin
de la hulla, era un derivado importante en la fabricacin de los
combustibles gaseosos. Hoy la mayora de sales de amonio y
nitrato se producen sintticamente a partir del nitrgeno y del hidrgeno en el
proceso de Fritz Haber.
[3,11,25]

2.1.2 Naturaleza qumica del nitrato y del amonio
El nitrato se forma en la naturaleza por la descomposicin de los
compuestos nitrogenados como las protenas, la urea, etc. En esta
descomposicin se forma amonaco o amonio, los cuales en presencia de
oxgeno son oxidados por microorganismos de tipo nitrobacter a cido ntrico
que ataca cualquier base (generalmente carbonatos) que hay en el medio
formando el nitrato correspondiente. Otra va de formacin es a travs de los
xidos de nitrgeno, que se generan en las descargas elctricas de las
tormentas a partir del nitrgeno y del oxgeno del aire, con el agua de la lluvia
de nuevo se forma cido ntrico que ataca los carbonatos y otros minerales
bsicos que se encuentran en el medio, para formar nitrato. Actualmente, se
forman tambin cantidades importantes de xidos de nitrgeno en los procesos
de combustin a alta temperatura, estos se transforman por el mismo camino
en nitrato que ha sido descrito para los xidos de nitrgeno formados
naturalmente.
[3,11,23,24,25]

El nitrato es una forma inica combinada de nitrgeno y
oxgeno en condiciones aerobias y resulta de la oxidacin
total de los compuestos del nitrgeno, el cual contiene un
tomo de nitrgeno (N) y tres tomos de oxgeno (O). El
nitrgeno en estado de oxidacin (+V) se encuentra en el centro de un tringulo
formado por los tres oxgenos. La estructura es estabilizada por efectos
mesomricos.
[24]
El smbolo qumico del nitrato es NO
3
-
y su peso molecular
igual a 62 g/mol. El in nitrato es la base conjugada del cido ntrico
(HNO
3
),
[11]
el cido ntrico es un cido fuerte el cual se disocia en agua
produciendo iones nitrato e iones hidroxonio (H
3
O
+
), el in nitrato tiene una
hibridacin sp
2
.
[23,24]
Es un in estable, soluble en agua, muy mvil, no se
absorbe en arcilla o materia orgnica por sus condiciones aninicas, y por lo
tanto, se puede lixiviar a travs del suelo y ser transportado por el agua
subterrnea. El origen del nitrato en aguas subterrneas es principalmente de
fertilizantes, sistemas spticos y almacenamiento de estircol u operaciones de
extensin, los fertilizantes nitrogenados no absorbidos por las plantas,
volatilizados o arrastrados por la corriente superficial terminan en las aguas
subterrneas en forma de nitrato. El nitrgeno procedente del estircol o de los
abonos puede perderse de manera similar de los prados, corrales, o lugares de
almacenamiento. Los sistemas spticos eliminan solamente la mitad del
nitrgeno de las aguas residuales, dejando que la otra mitad sea lavada hacia
las aguas subterrneas.
[4,11]

En cuanto al in amonio, se puede decir que es un catin
monovalente, formado a partir de la molcula amoniaco
(NH
3
), en la que el nitrgeno, que es el tomo central, cede el
par de electrones libres a un protn formando un enlace
dativo, dando as la molcula de amonio (NH
4
+
) con un peso molecular igual a
18 g/mol y cuyo nitrgeno en dicha molcula presenta una hibridacin sp
3
y
trabaja con un estado de oxidacin (-III).
[25]

El in amonio es un producto proveniente de la descomposicin de
residuos orgnicos nitrogenados (proceso de amonificacin) o de la fijacin
biolgica, debido a que dicho in posee una carga positiva en su composicin
qumica, ste puede retenerse en las partculas de arcilla del suelo cuya carga
es negativa, por lo que es relativamente inmvil en el suelo, como
consecuencia de ello y por lo general no se incorpora al agua
subterrnea.
[10,17,25]

Estos iones nombrados en lneas anteriores, se encuentran
naturalmente en el ambiente ya que los mismos forman parte del ciclo del
nitrgeno como se puede observar en la Figura 1. Las reservas de nitrgeno
elemental en la atmsfera son inagotables y se encuentran en equilibrio con las
dems formas fijadas; es decir, en la medida que este nitrgeno atmosfrico es
convertido a formas fijadas, existe una continua reposicin del nitrgeno
elemental por medio de procesos microbiolgicos y qumicos que suceden en
el suelo.
[3,11,25]

Figura 1. Ciclo del Nitrgeno

2.1.3 Importancia de los iones nitrato y amonio
El nitrgeno en su estado elemental (N
2
), es un gas inerte, incoloro,
inodoro y constituye aproximadamente el 78 % de los gases que conforman la
atmsfera; sin embargo, este nitrgeno atmosfrico no es aprovechable
directamente por la mayora de las plantas, estas principalmente lo absorben
por las races en forma de amonio (NH
4
+
) y de nitrato (NO
3
-
)
,
por lo que dichas
especies son de gran importancia para la agricultura ya que por medio de los
fertilizantes nitrogenados que las contienen, ayudan a los suelos a ser ms
frtiles y productivos al servir como abonos para los mismos.
[3,11]

Una cantidad pequea de nitrgeno atmosfrico puede ser fijada
abiticamente por procesos de ionizacin provocados por tormentas elctricas,
mayor cantidad puede fijarse mediante radiaciones csmicas y meteoritos.
Estos fenmenos proporcionan por instantes gran cantidad de energa, que
hacen reaccionar al nitrgeno con el agua, para formar amoniaco (NH
3
). Este
compuesto posteriormente es llevado al suelo por las lluvias.
[3,11]

La fijacin industrial de nitrgeno que lleva a la obtencin de fertilizantes
nitrogenados, son cuantitativamente de gran importancia, desde el punto de
vista de la agricultura comercial. Esta es la fuente ms importante de este
elemento como nutriente vegetal.
[3,11]

Los nitratos son aprovechados por las plantas que los convierten de
nuevo en compuestos orgnicos nitrogenados, como los aminocidos, por lo
tanto, son una parte esencial de los abonos, muchas plantas acumulan el
nitrato en sus partes verdes; si stas se aprovechan como alimentos cocidos
existe el peligro de que los nitratos que contengan puedan ser reducidos por
otros organismos a nitritos una vez que estos alimentos sean ingeridos.
Adicionalmente, existen algunos vegetales como las espinacas
(procesadas o no) que tienen la particularidad de que al ser almacenadas bajo
condiciones que favorezca el crecimiento de microorganismos que permiten la
reduccin del nitrato a la forma de nitrito; los cuales son txicos y a su vez
producen nitrosaminas que son cancergenas.
[3,24,2631]

El amonio es un derivado muy importante del nitrgeno, igualmente se
utiliza en fertilizantes nitrogenados los cuales son aplicados al suelo sirvindole
de abono al mismo. A travs de l se obtienen otros compuestos del ciclo del
nitrgeno como por ejemplo el amoniaco, el cual se produce igualmente en la
naturaleza por accin de bacterias de la putrefaccin y de la formacin de
amoniaco sobre la materia orgnica del suelo. Por este motivo, se percibe olor
a amoniaco en establos y corrales, donde esta accin tiene lugar.
[10,11,32]

Las cantidades de amonio (NH
4
+
) y nitrato (NO
3
-
), en la solucin del
suelo estn en funcin de las cantidades de fertilizantes comerciales
suministrados al mismo y de las cantidades de nitrgeno orgnico que se
pueden transformar a nitrgeno inorgnico, es decir, esta ltima depende del
equilibrio que afecte la relacin entre la mineralizacin y la inmovilizacin del
nitrgeno del suelo; entendindose por mineralizacin la transformacin del
nitrgeno orgnico a nitrgeno mineral (NH
4
+
, NO
3
-
, NO
2
-
). El proceso contrario
al ya descrito se denomina inmovilizacin.
[3]

Se sabe desde hace mucho tiempo que el empleo de nitrato de amonio
aumenta la acidez del suelo. A no ser, que se de el caso, de un manejo
adecuado a los fertilizantes completos, estos siempre tendrn a desarrollar un
residuo cido en los suelos, debido sobre todo a la influencia de algunos
materiales nitrogenados en especial de naturaleza amoniacal. El efecto
principal de los iones amonio (NH
4
+
) se ejerce cuando estos son nitrados por la
oxidacin, los compuestos amoniacales tienden a aumentar su acidez.
[33]

Existen otros efectos importantes de los iones amonio de menor
extensin que disminuyen el pH del suelo, por ejemplo, cuando se aade al
suelo sulfato de amonio algunos de los iones amonios son absorbidos por la
materia coloidal, reemplazando cantidades equivalentes de otros cationes.
[33]
2.1.4 Usos de las sales de nitrato y de amonio
El nitrato de potasio (KNO
3
) forma parte esencial de la plvora negra. Se
aprovecha su poder oxidante para transformar el carbono y el azufre, tambin
presentes en la mezcla de sus xidos; la energa liberada en el proceso hace
que se calienten los gases y se expandan de manera explosiva.
[24]
l nitrato
tambin forma parte esencial de muchas formulaciones de abonos, el nitrato
natural conocido tambin como nitrato de Chile, se explota desde hace mucho
tiempo en los salares del norte de ese pas y constitua un importante producto
de exportacin del mismo; hasta el desarrollo en Noruega y otros pases del
nitrato artificial (obteniendo el nitrgeno directamente del aire a travs de
medios electroqumicos). El nitrato de amonio, aparte de ser un buen abono, se
descompone de forma explosiva a la hora de calentarlo y es responsable de un
gran nmero de accidentes, mezclado con petrleo es utilizado, como
explosivo en minera. En condiciones ms controladas la descomposicin del
nitrato de amonio se utiliza para generar el xido de dinitrgeno, este se
aprovecha como anestsico y por ejemplo para espumar la nata batida
enlatada.
[23,24,34]
El nitrato de plata, es un precursor importante para los haluros
de plata utilizados como sales fotosensibles en fotografa, igualmente este tipo
de nitrato, es usado en la ciencia de la medicina para quemar la piel.
[23,24]

Como intermedio, los nitratos estn presentes en el proceso de
nitrificacin/desnitrificacin que se utilizan en las plantas depuradoras de aguas
residuales, se aprovecha el hecho que algunos microorganismos se pueden
reducir en condiciones anaerbicas el nitrato directamente a nitrgeno
elemental; as se eliminan los compuestos de nitrgeno de las aguas donde
produciran problemas de eutrofizacin.
[24,34]
En un cuerpo de agua cerrado, por
ejemplo una laguna, el proceso de eutrofizacin, es decir puede terminar por
convertir al cuerpo de agua en tierra firme. Esto ocurre porque los nutrientes
que ingresan masivamente al sistema generan una gran biomasa,
generalmente efmera que al morir se acumulan sobre el fondo y no son
totalmente consumidos por organismos degradadores (especialmente
bacterias).
[35]

Con respecto al amonio, las disoluciones de ste se emplean en usos
domsticos. A manera de ejemplo, eliminan la dureza temporal del agua y por
lo tanto son tiles en labores de lavado y limpieza con el ahorro consiguiente
de jabn.
[25,32,34]
Recientemente se ha ideado un mtodo para descomponer el
amoniaco mediante un catalizador y producir una mezcla del 75 % de
hidrgeno y 25 % de nitrgeno, en volumen que pueda utilizarse en sopletes
oxhdricos para soldar metales raros y aceros especiales. Un tubo de amoniaco
lquido, proporciona as, ms hidrgeno que el que pudiera comprimirse en el
mismo volumen. Para transporte y almacenaje resulta pues, una fuente
conveniente y compacta de hidrgeno.
[34]
El amoniaco lquido, es empleado en
mquinas frigorficas y en la fabricacin de hielo, es decir, en la produccin
industrial del fro cuando se comprime se licua y al expandirse se evapora y
absorbe el calor del medio, por lo que la temperatura disminuye.
[3]
Igualmente
se usan en la produccin de explosivos y nailon, as como en la elaboracin de
fertilizantes o abonos nitrogenados. El amoniaco, tambin se usa como
reductor sobre muchos xidos cuando se hace pasar gas sobre ellos a altas
temperaturas.
[32,34]

2.1.5 Aspectos generales de los fertilizantes
Definicin: En general, los fertilizantes se refieren a productos que
aumentan la fertilidad de los suelos al proporcionar a las plantas las principales
sustancias o mezclas qumicas naturales o sintticas, utilizadas para
enriquecer el suelo y favorecer el crecimiento vegetal.
[25,36]

Estado fsico de los fertilizantes: El estado fsico en que se presenta un
abono puede ser: slido, lquido y gaseoso, este juega un papel importante en
las condiciones de utilizacin y la eficacia del abono ya que tanto la
homogeneidad de la distribucin como su integracin ms o menos completa
en el suelo van a depender de dicha presentacin.
[36]

Los abonos slidos son los de mayor uso y suelen presentarse en las
siguientes formas:
1) Abonos en polvo: Con grado de finura variable segn el tipo de
fertilizante. Normalmente no son aconsejables, ya que su manejo resulta
molesto, entorpecen el funcionamiento de las mquinas y sufren prdidas en la
manipulacin. Sin embargo, esta forma puede ser apropiada cuando la
solubilidad en agua es escasa o nula y resulta idnea en los casos en los que
el abono se mezcla ntimamente con el suelo.
[36]

2) Abonos granulados: Aqullos en los que al menos el 90 % de las
partculas presentan un tamao de (1-4) mm, esta presentacin permite un
manejo ms cmodo, un mejor funcionamiento de las abonadoras, una
dosificacin ms exacta y una distribucin sobre el terreno ms uniforme.
[36]

3) Abonos cristalinos: Que facilitan la manipulacin y distribucin.
[36]

4) Abonos perlados: Se obtiene mediante el sistema de pulverizacin en
una torre de gran altura, transformndose en esferas de tamao muy uniforme,
al solidificarse las gotas durante la cada.
[36]

5) Abonos macrogranulados: Constituidos por grandes grnulos de (1-3)
cm de dimetro e incluso mayores, de liberacin progresiva de los elementos
nutritivos.
[36]

Dentro de los fertilizantes lquidos, los tipos ms caractersticos son los
siguientes:
1) Suspensiones: Gracias a la utilizacin de arcillas dispersas en el agua
pueden mantenerse soluciones sobresaturadas de alguna sal (generalmente
cloruro potsico) para alcanzar concentraciones totales elevadas en forma
lquida. Para mantener las suspensiones se requiere una agitacin
peridica.
[36]

2) Soluciones con presin: Soluciones acuosas de nitrgeno en las que
participa como componente el amonaco anhidro con concentracin superior a
la que se mantiene en equilibrio con la presin atmosfrica. Para su aplicacin
se requieren equipos especiales que soporten la presin adecuada.
[36]

3) Soluciones normales o claras sin presin: Soluciones acuosas que
contienen uno o varios elementos nutritivos disueltos en agua.
[36]

Los abonos lquidos ofrecen las siguientes ventajas respecto a los
slidos:
1) Su manejo es totalmente mecanizable.
2) Se alcanza un gran rendimiento en la aplicacin.
3) Se consigue una gran uniformidad en la distribucin sobre el
terreno.
Entre los abonos gaseosos nicamente se emplea el amonaco anhidro,
que es un gas a la temperatura y presin normal. Para que pase ha estado
lquido y facilitar el almacenaje y el transporte se comprime y vuelve a
transformarse en gas cuando se inyecta en el suelo.
[36]

Propiedades qumicas y fsicas de los fertilizantes: Ests determinan
tanto su comportamiento en el suelo, como su manipulacin y conservacin;
entre las que se destacan:
1) Solubilidad: La solubilidad en agua o en determinados reactivos es
determinante sobre el contenido o riqueza de cada elemento nutritivo en un
fertilizante concreto.
[36]

2) Reaccin del fertilizante sobre el pH del suelo: Viene determinada por
el ndice de acidez o basicidad del fertilizante, que se corresponde con la
cantidad de cal viva que es necesaria para equilibrar el incremento de acidez
del suelo (fertilizantes de reaccin cida) o producir un incremento de pH
equivalente (fertilizantes de reaccin bsica).
[36]

3) Higroscopicidad: Capacidad de absorber agua de la atmsfera a partir
de un determinado grado de humedad de la misma. Esta absorcin puede
provocar que una parte de las partculas se disuelvan con lo que se deshace la
estructura fsica del fertilizante. Generalmente, cuanto mayor es la solubilidad
del fertilizante en agua, mayor es su higroscopicidad.
[36]
Los Abonos o fertilizantes pueden clasificarse en:

1) Fertilizantes orgnicos: Comprende aquellas sustancias derivadas de
productos vegetales o animales, que contienen cantidades variables de los
elementos nutritivos esenciales para las plantas, tales como: Estircol vacuno,
Gallinazo, Estircol de Chivo etc.
[37]

2) Fertilizantes minerales o qumicos: Son aquellos productos obtenidos
mediante procesos qumicos, desarrollados a escala industrial, que tienen
cantidades mnimas de alguno de los elementos esenciales para las plantas.
En general son productos inorgnicos, si bien existen dentro de este grupo
algunos productos orgnicos obtenidos por sntesis (Urea).
[37]

Los fertilizantes minerales o qumicos, se dividen a su vez en fertilizantes
simples y fertilizantes compuestos, los primeros son aquellos que contienen
uno de los elementos mayores y los segundo son aquellos que contienen dos o
ms de los elementos mayores. Entre los fertilizantes simples de uso comn en
Venezuela se tiene la urea, sulfato de amonio, nitrato de amonio, cloruro de
potasio, sulfato de potasio, roca fosftica, sulfato de potasio y magnesio, nitrato
de calcio, entre otros. Y entre los fertilizantes compuestos se destacan el
fosfato diamnico, nitrato de potasio, 12-24-12 CP, 15-15-15 SP,
12-12-17/2 SP, 14-14-14 (S) CP, 12-12-17/2 Zinc CP, etc. Estas frmulas se
obtienen mediante dos procesos tales como mezcla fsica de fertilizantes
simples para producir fertilizantes compuestos, en donde se pueden separar
los componentes que integran la mezcla o combinarse mediante
procedimientos qumicos especiales para producir fertilizantes compuestos
granulados.
[37]

3) Fertilizantes portadores de micronutrientes: Los microelementos
requieren una especial atencin y cuidado porque existen lmites muy
estrechos entre el exceso y la deficiencia, ya que, solo se necesitan en
pequeas cantidades. Si se aplican dosis excesivas puede tener efectos
perjudiciales par los cultivos. Se pueden preparar fertilizantes mixtos especiales
que junto con la frmula de N, P y K contengan microelementos para aquellos
suelos y cultivos en que se sepa hay deficiencia. Tambin se emplean en
aspersiones foliares y en tratamiento de las semillas. Por ejemplo se tiene el
sulfato ferroso, sulfato de cobre, sulfato de zinc, sulfato de magnesio, brax,
molibdato sdico, etc.
[37]

4) Otros: Nitrato clcico y magnsico, nitrato de sodio, cianamida clcica
nitrada, sulfonitrato de amonio o nitrosulfato amnico, sulfonitrato de magnesio
o nitrosulfato magnsico, abonado nitrogenado con magnesio,
crotonilidendiurea, isobutilidendiurea, urea formaldehdo, dolomita, azufre
elemental, abono nitrogenado que contiene crotonoilidendiurea, abono
nitrogenado que contiene isobutilidendiurea, abono nitrogenado que contiene
urea formaldehdo, sulfato amnico con inhibidor de la nitrificacin
(diciandiamida), nitrosulfato amnico con inhibidor de la nitrificacin
(diciandiamida), sulfato amnico-urea, etc.
[36,37]

En la Tabla 1, se resumen algunas caractersticas de los fertilizantes
ms utilizados en diversos sectores.

Tabla 1. Caractersticas de los fertilizantes ms usados
Fertilizante Riqueza % Reaccin
Solubilidad
(g.l
-1
a 20C)
cido fosfrico 75 % P
2
O
5
- 52,0 Muy cida Muy soluble
cido ntrico 54 % N - 12,6 Muy cida Muy soluble
Fosfato
monoamnico
P
2
O
5
- 61,0
N - 12
cida 380
Fosfato
monopotsico
P
2
O
5
- 53,0
K
2
O - 34,0
Bsica 230
Nitrato amnico N - 33,5 cida 1970
Nitrato clcico
N - 15,5
CaO - 27,0
Bsica 1260
Nitrato potsico
K
2
O - 46,0
N - 13,0
Neutra 320
Sulfato amnico
N - 21,0
SO
3
- 60,0
cida 740
Sulfato magnsico
SO
3
- 32,5
MgO - 16,0
cida 360
Sulfato potsico
K
2
O- 50,0
SO
3
- 47,5
cida 120
Superfosfato simple P
2
O
5
- 19,0 cida 20
Superfosfato triple P
2
O
5
- 45,5 cida 40
Urea N- 45,0 Muy cida 1060
Concentracin de los fertilizantes: La riqueza de un abono suele
relacionarse con el contenido en elementos fertilizantes asimilables por las
plantas, para un determinado elemento, se expresa en tanto por ciento
fertilizantes de unidades.
[36]
En el caso de los fertilizantes simples, la riqueza
corresponde a la cantidad del nico elemento nutritivo que contiene, expresada
en porcentaje. En los fertilizantes compuestos es necesario indicar la riqueza
de todos los elementos que entran a formar parte de su composicin y en
particular de los tres elementos principales N, P y K. Para definir el fertilizante
compuesto basta indicar las tres cifras que corresponden a las riquezas de los
elementos precisamente en el orden N P K. As un fertilizante 12-24-12
contiene 12 % de nitrgeno, 24 % de P
2
O
5
y 12 % de K
2
O. Cuando este tiene,
adems otros elementos se debe indicar este en la frmula, por ejemplo:
8-24-16-2 Mg-0,2 B, contiene adems 2% de MgO y 0,2 % de Boro. En la
mayora de los pases del mundo, el contenido de cada uno de los elementos
que determinan la riqueza garantizada de cada producto, se expresa de la
siguiente forma:
- N, para todas las formas de
nitrgeno.
- K
2
O, para todas las formas de
potasio.
- P
2
O
5
, para todas las formas de
fsforo.
- CaO, para todas las formas de
calcio.
- MgO, para todas las formas de
magnesio.
- SO
3
, para todas las formas de
azufre.
- Cl, para todas las formas de cloro. - B, para todas las formas de boro.

2.2 Antecedentes
Debido a la importancia que tienen el nitrato y amonio en el desarrollo
del medio ambiente, sus determinaciones cuantitativas en una variedad de
matrices no es un tema reciente. Los mtodos reportados en la literatura
pueden ser clasificados en dos grupos: mtodos clsicos y mtodos
instrumentales.
En relacin a los mtodos clsicos estas especies son determinadas
utilizando medidas volumtricas. En este sentido, el amonio se determina
mediante la transformacin en amoniaco, utilizando una base fuerte y posterior
destilacin. El amoniaco liberado se recoge y se valora utilizando el mtodo de
Kjeldahl. Tambin el nitrato se determina utilizando este mtodo pero involucra
una etapa previa de reduccin con una aleacin de devarda (50 % de Cu, 45 %
de Al, 5% Zn) o la aleacin de Arnd (60 % de Cu, 40 % de Mg), para la
conversin a in amonio.
El mtodo de Kjeldahl se ha utilizado desde hace ms de 100 aos para
la determinacin de nitrgeno en una amplia gama de muestras de alimentos
tales como, bebidas, cereales, carnes y otros materiales biolgicos para el
clculo de contenido de protenas. Tambin se utiliza para la determinacin de
nitrgeno en aguas, suelos, fertilizantes y otras matrices.
El mtodo se basa en:
1) La conversin de compuestos nitrogenados a bisulfato amnico por
adicin de cido sulfrico concentrado en la digestin. Un ejemplo de los
cambios que ocurre es el siguiente:
2 CH
3
CH (NH
2
)-COOH + 14 H
2
SO
4
2 NH
4
HSO
4
+ 16 H
2
O + 6 CO
2
+ 12 SO
2

(alfa aminocido)
2) La neutralizacin del cido sulfrico no combinado y del bisulfato
amnico y la alcalinizacin del medio para desalojar el amoniaco, con la adicin
del hidrxido de sodio para la destilacin:
H
2
SO
4
+ 2 NaOH Na
2
SO
4
+ 2 H
2
O
NH
4
HSO
4
+ 2 NaOH Na
2
SO
4
+ 2 H
2
O + NH
3

3) La destilacin del amoniaco que al condensarse se combina con el
agua, formando hidrxido de amonio:
NH
3
+ H
2
O NH
4
OH
4) La fijacin del hidrxido de amonio por el cido brico, formando
borato de amonio:
2 NH
4
OH + H
3
BO
3
(NH
4
)
2
HBO
3
+ 2 H
2
O
5) La titulacin del borato de amonio con cido clorhdrico en presencia
de un indicador con un intervalo de transicin cido, debido a la acidez que el
in amonio presenta en el punto de equivalencia (por ejemplo 0,1 g de rojo de
metilo y 0,5 g de verde bromocresol, en 100 mL de alcohol etlico al 95 %). La
titulacin termina cuando se observe un cambio de color de azul a mbar:
(NH
4
)
2
HBO
3
+ 2 HCl 2 NH
4
Cl + H
3
BO
3

Es un mtodo oficial de anlisis y descrito en mltiples normativas como
la Asociacin Oficial de Qumicos Analticos (siglas en ingls AOAC). La
Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos US-EPA
(U.S. Environmental Protection Agency, EPA por sus siglas en ingls),
Organizacin Internacional para la Estandarizacin (International Organization
for Standardization, (siglas en ingls ISO), entre otras para la determinacin de
nitrgeno en diversas matrices incluyendo fertilizantes.
[17,38]
Uno de los mtodos
estndar utilizados en Venezuela para hacer la determinacin del nitrgeno
ntrico y amoniacal en fertilizantes, esta descrito en la norma venezolana
COVENIN 1140-77.
[39]

En cuanto a la determinacin de nitrato y amonio utilizando mtodos
instrumentales, la informacin encontrada en la literatura especializada, es muy
extensa y las diversas propuestas metodolgicas se han aplicado para el
anlisis en muestras de alimentos, agua, material biolgico, suelos, entre otros.
Los mtodos analticos desarrollados para la determinacin de estos analitos
juntos o por separado en una matriz determinada, involucran tcnicas como
electroqumicas; amperometra, voltametra y potenciometra;
[4045]
espectroscpicos; ultravioleta-visible,
[46,47]
quimioluminiscencia y fluorescencia
molecular,
[31,4850]
infrarroja
[51,52]
y tcnicas acopladas como electroforesis
capilar con deteccin UV,
[53]
cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)
con deteccin por fluorescencia, quimioluminiscencia
[48]
y cromatografa de
gases con deteccin por espectrometra de masa.
[54]

Debido a la relativa inercia que tiene el nitrato, para su determinacin
algunas de las propuestas metodolgicas utilizan al in nitrito o al xido de
nitrgeno como intermediario. En este sentido, para la conversin del nitrato a
la forma de nitrito se han propuesto diversos agentes reductores, tales como
zinc,
[55]
cadmio amalgamado,
[56]
soluciones de hidracina en presencia de cobre
como catalizador,
[57]
cadmio coperizado,
[58]
fotoinducccin,
[59]
y para la
conversin a xido de nitrgeno se han propuesto el uso de Ti (III), V (III),
Mo (VI) + Fe (II) y Cr (III).
[12]
En cuanto al amonio, el intermediario utilizado en
algunos trabajos incluye una reaccin en medio alcalino entre el in amonio y el
hipoclorito para la generacin de una fase gaseosa compuesta principalmente
por dicloroamina que posteriormente es convertida a xido de nitrgeno.
[60]
Otro
intermediario es el amonaco, que se forma a partir del in amonio en
soluciones fuertemente alcalina.

De todas las tcnicas mencionadas anteriormente, la mayora de las
propuestas analticas para determinar amonio y nitrato tienen su fundamento
en el uso de la espectroscopa de absorcin molecular en el ultravioleta/visible
(EAM) y por lo general, se utiliza la reaccin de Berthelot
[15,21]
y la reaccin de
Griess
[12,1820]
respectivamente.
En la reaccin de Berthelot, el in amonio se hace reaccionar con
hipoclorito y fenol o timol, en medio fuertemente alcalino y en algunos casos en
presencia de un catalizador, como nitroprusiato de sodio,
[61]
para formar el
indofenol o indotimol respectivamente que presentan un mximo de absorcin
en la regin del visible, entre (640 y 690) nm.
[5,21,61]

La reaccin de Griess se realiza en dos etapas (posterior a la reduccin
del nitrato a la forma de nitrito) la primera, consiste en la diazotacin de una
amina aromtica primaria con el nitrito en medio cido y la segunda
corresponde a una reaccin de acoplamiento del diazocompuesto con un
compuesto fenlico o una amina aromtica, para producir un compuesto
intensamente coloreado que tiene un mximo de absorcin en la regin del
visible. En el ao 1961 Shinn V., propuso la utilizacin de la sulfanilamida
(SUL) como reactivo para la diazotacin y el N-(1-naftil) etilenediamina (NED)
como reactivo de acoplamiento. Desde entonces, son muchos los mtodos
desarrollados que utilizan esta reaccin. De hecho, el mtodo oficial para el
anlisis de nitrito se fundamenta en su uso.
[62]
La cuantificacin de las especies,
se lleva a cabo, midiendo inicialmente el contenido de nitrito en la muestra y
posterior a la reduccin, se hace la determinacin de nitrito total que
corresponde a la reduccin de nitrato y del nitrito endgeno; y los niveles de
nitrato se determinan por diferencia de las dos seales.
Es importante mencionar que con el uso de (EAM) y la tcnica
fluorescentes se han hecho desarrollos de mtodos cinticos catalticos para la
determinacin de nitratos va reduccin de nitrito, que ofrece una mejora en la
sensibilidad y por ende en los lmites de deteccin necesarios cuando se
requieren determinaciones a niveles de trazas y ultratrazas.
[19,63,64]
En estas
propuestas la etapa previa de reduccin del nitrato, en la mayora de los casos
es realizada utilizando una columna de cadmio-coperizado.
[12,14,20,27,58]
Las
condiciones de la reduccin estn ajustadas de manera que el nitrato sea
convertido a nitrito con una eficiencia elevada, sin que contine el proceso de
reduccin a otras especies.
En general, la etapa de reduccin y la mezcla de los diferentes reactivos,
ha sido adaptada a las tcnicas de anlisis por inyeccin en flujo (Siglas en
ingls FIA), lo cual permite que el proceso de reduccin y la formacin de
productos se desarrollen en lnea. Adems, esta condicin ha permitido la
determinacin secuencial de nitrato y nitrito en aguas y alimentos.
[6568]
De igual
manera, los mtodos desarrollados para la determinacin de amonio, tienen su
fundamento en el uso de la tcnica (FIA) y en trminos generales, con el uso
de esta tcnica las diferentes propuestas han permitido solventar los problemas
clsicos encontrados con el uso de procedimientos manuales, que incluyen
tiempos de anlisis muy elevados, procedimientos tediosos de realizar,
consumo importante de reactivos y muestras as como baja reproducibilidad.
A pesar que el nitrato y el amonio se presentan juntos en una variedad
de matrices, son pocos los trabajos encontrados en la literatura donde se
efecte la determinacin de ambos por espectrometra. En algunas propuestas
incluyen la determinacin secuencial o simultnea de ambos analitos o de las
tres formas de nitrgeno inorgnico (NO
3
-
, NO
2
-
y NH
4
+
) y se fundamentan en el
uso de tcnicas acopladas como (FIA) conjuntamente con (EAM).
[61, 68]
En la
Figura 2, se observa una representacin esquemtica de un sistema tpico
(FIA-EAM).
Las metodologas propuestas incluyen una etapa de reduccin y
oxidacin del nitrato y amonio respectivamente, para su conversin a nitrito en
un sistema en lnea.
El nitrito resultante es determinado mediante la formacin del
azocompuesto que se origina a partir del uso de (SUL) y (NED), el cual es
detectado por (EAM). Para la reduccin del in nitrato, utilizan una columna de
cadmio coperizado mientras que el in amonio es oxidado con hipoclorito de
sodio en presencia de bromuro de potasio y en medio fuertemente alcalino
(NaOH). La respuesta instrumental para las tres especies, se origina por la
inyeccin de un volumen de muestra en una configuracin que permite que tres
fracciones de estas sean dirigidas a tres puntos de confluencia distintos antes
de pasar por el detector. Una primera fraccin es dirigida directamente a un
serpentn de reaccin (SR) donde se produce el azocompuesto, una segunda
fraccin de muestra es dirigida hacia otro (SR) donde se mezcla con cloruro de
potasio y EDTA, posteriormente pasa a la columna reductora y finalmente se
forma el azocompuesto; la otra fraccin de la muestra se lleva a un tercer (SR)
de reaccin y se produce la oxidacin del amonio. La seal que se obtiene son
tres picos separados en el tiempo, el primero corresponde a la cantidad de
nitrito, el segundo corresponde a la concentracin de nitrito y nitrato y un ltimo
pico corresponde a los niveles de nitrito y amonio en la muestra
respectivamente. La separacin de los picos queda determinada por los
tiempos de residencia de las distintas fracciones de muestras en las
configuraciones propuestas.

Figura 2. Diagrama esquemtico de un sistema utilizado para la determinacin de las tres
formas de nitrgeno inorgnico

Otros mtodos de anlisis por (EAM) que se han desarrollado para
determinar nitrato y amonio, tienen su fundamento en la conversin de los
analitos que inicialmente estn en solucin en una especie gaseosa, las cuales
son arrastradas por un gas inerte hacia una celda de flujo alineada en el
camino ptico del espectrofotmetro. La generacin de especies gaseosas y
deteccin por espectroscopa de absorcin molecular (por sus siglas en ingls
GPMAS) fue introducida por Syty y desarrollada por el laboratorio Crecer,
[22]

para la determinacin de aniones y cationes en solucin. Los primeros trabajos
publicados para la determinacin de amonio y nitrato por separado, utilizaron
un espectrofotmetro de absorcin atmica. En estos trabajos, la fase gaseosa
generada es transportada a una celda ubicada en el espacio normalmente
ocupado por la llama del espectrofotmetro de absorcin atmica. La seal de
absorbancia de los compuestos gaseosos se mide a la longitud de onda
seleccionada que generalmente corresponde al mximo de absorcin de los
compuestos. Sin embargo, hoy da los desarrollos analticos utilizan los
instrumentos de absorcin molecular UV-Vis con sistemas de arreglos de
diodos o los espectrofotmetros convencionales conjuntamente con la tcnica
(FIA), permitiendo que (GPMAS), sea ms simple, confiable y rpida.
El acoplamiento (FIA-GPMAS), fue utilizado recientemente por algunos
autores
[22]
para la determinacin de amonio en productos farmacuticos y la
deteccin de amonio y nitrato en aguas fortalecidas con los analitos. En la
metodologa propuesta, el amonio que inicialmente se encuentra presente en
una solucin de la muestra y el producido a partir de la reduccin del nitrato
mediante el uso de una columna de (Zn/Cu), reaccionan en un sistema en lnea
con una solucin que contiene hidrxido de sodio para formar amoniaco, el cual
finalmente es llevado a la celda de gases por un gas inerte y posteriormente se
mide la seal de absorbancia transitoria del amoniaco a una longitud de onda
de 194 nm. Para la cuantificacin de las especies es necesario realizar dos
inyecciones de muestra. En una primera inyeccin, se determina el contenido
de amonio, mientras que en una segunda inyeccin, la muestra se dirige a un
sistema de reduccin para la conversin de nitrato a amonio y posteriormente
reacciona con el hidrxido de sodio. La seal que se obtiene corresponde a la
contribucin de nitrato y el amonio que inicialmente estaba en la muestra. El
contenido de nitrato se determina por diferencia de las dos seales obtenidas.
El amonio y nitrato tambin se han determinado utilizando la tcnica FIA
con deteccin por quimioluminiscencia.
[60,6971]
Aoki y colaboradores
[60]
proponen
la determinacin sucesiva de las tres formas inorgnicas del nitrgeno,
tomando como base un desarrollo metodolgico que en 1990
[69]
fue concebido
para la determinacin de nitrito en aguas. Estas propuestas consisten en la
reduccin de nitrato y nitrito a xido ntrico y este posteriormente es arrastrado
por una corriente de un gas al recipiente de reaccin donde se combina con
ozono para producir una especie electrnicamente excitada que emite luz
cuando vuelve a su estado fundamental. Entre los sistemas reductores que se
han utilizado para la conversin del nitrito destacan iones ioduro en medio
ligeramente cido y para el nitrato hierro (II) y molibdato (II) o titanio (III) en
condiciones fuertemente cidas. Estas propuestas se diferencian en las
cantidades de cidos que se utilizan, estrategias para la separacin de las
fases involucrada (lquida-gas), incorporando en las configuraciones
propuestas membranas de poly tetrafluoretileno (PTFE) permeable al xido de
nitrgeno (NO), diferentes gases de arrastre y diferentes condiciones de
acidez.
2.3 Hiptesis
Si se tiene en consideracin las siguientes premisas:
1) La generacin de especies gaseosas, constituye una herramienta muy
valiosa ya que el analito es separado de la matriz de la muestra antes
de la lectura de absorcin, disminuyendo de manera importante posibles
interferencias qumicas y espectrales.
2) El in amonio puede ser convertido a amoniaco en medio fuertemente
bsico.
3) Existen sustancias capaces de reducir al in nitrato a amonio, como una
mezcla de Zn/Cu.
4) El amoniaco es una molcula que tiene una banda de absorcin en la
regin del ultravioleta cercano.
5) Los fertilizantes nitrogenados contienen altas concentraciones de nitrato
y amonio.
6) El nitrgeno es un gas que no absorbe en la regin de absorcin del
amoniaco.
Por tanto, se podra poner a punto una metodologa para la
determinacin de nitrato y amonio, basada en el acoplamiento de la tcnica
anlisis por inyeccin en flujo, generacin de una fase gaseosa (NH
3
) con la
espectroscopia de absorcin molecular UV-Visible.
2.4 Plan de trabajo
Revisin bibliogrfica sobre el tema.
Estudios preliminares:
- Adiestramiento en el uso y manejo de los equipos a utilizar.
- Estudio del comportamiento de absorcin de los reactivos y el amoniaco.
Determinacin de amonio:
Optimizacin de parmetros fsicos y qumicos asociados al sistema de
anlisis por inyeccin en flujo para la determinacin de amonio.
- Estudio de diversas configuraciones del sistema sobre la seal de
amoniaco.
- Efecto de la concentracin de hidrxido de sodio sobre la respuesta
instrumental.
- Efecto de los caudales de la solucin portadora y del hidrxido de sodio
sobre la seal analtica.
- Efecto de los dimetros y longitud de los serpentines (R1 y R2) en la seal
analtica.
- Efecto del flujo de nitrgeno sobre la seal analtica.
- Efecto del volumen de inyeccin sobre la seal analtica.
Caracterizacin analtica del sistema en la determinacin de amonio.
Validacin del mtodo.
- Estudios de interferencia en la determinacin de amonio.
- Estudios de recuperacin en la determinacin de amonio.

Determinacin de nitrato:
Optimizacin de parmetros fsicos asociados al sistema de anlisis por
inyeccin en flujo para la determinacin de nitrato.
- Efecto del dimetro y longitud de la columna reductora sobre la seal
analtica.
Caracterizacin analtica del sistema en la determinacin de nitrato.
Validacin del mtodo.
- Estudios de interferencias en la determinacin de nitrato.
- Estudios de recuperacin en la determinacin de nitrato.
Anlisis de las muestras reales de fertilizantes.


CAPTULO III
MARCO METODOLGICO

3.1 Parte experimental
3.1.1 Instrumentacin
Para la realizacin de este trabajo se utiliz la infraestructura disponible
en el Laboratorio de Espectroscopia Molecular. Una descripcin general de la
instrumentacin utilizada incluye:
Un espectrofotmetro de absorcin molecular en el
ultravioleta / visible marca Perkin Elmer, modelo Lambda 20. Este instrumento
est equipado con dos fuentes de radiacin (lmpara de hidrgeno y otra de
tungsteno); y un fotomultiplicador como dispositivo de deteccin.
Una celda para gases con geometra cilndrica de 2 cm de dimetro y
10 cm de longitud, equipada con ventanas de cuarzo.
Una unidad de inyeccin marca Perkin Elmer, modelo FIAS 300 que
incorpora dos bombas peristltica (P1 y P2) de ocho rodillos y cuatro canales
totalmente independientes, que utiliza tuberas de tygon para el transporte de
muestras y reactivos. Esta unidad incluye un automuestreador AS 91 con
capacidad para 150 muestras.
Un computador personal para el control del espectrofotmetro y la
unidad de inyeccin, a travs de dos programas: Winlambda y PFIAS de
Perkin Elmer.

3.1.2 Reactivos
Todos los reactivos utilizados fueron de grado analtico, sus
caractersticas se reportan en la Tabla 2. Las soluciones utilizadas fueron
preparadas con agua de alta pureza de 18 (ohms) cm
-1
de resistividad,
suministrada por un sistema Milli-Q-TOC de Millipore.
Se prepararon por separado, soluciones patrn de amonio y nitrato de
(5,556 y 1,613) x 10
-2
mol.L
-1
a partir de cloruro de amonio y nitrato de sodio.
Los reactivos fueron previamente secados en una estufa durante dos horas a
una temperatura de 110 C. Se pesaron 1,4921 g de NH
4
Cl y 0,6924 g de
NaNO
3
los cuales fueron disueltos y llevados a un volumen final de 500 mL con
agua. Las soluciones estndar de trabajo se prepararon en balones de 100 mL
por dilucin de un volumen apropiado de la solucin patrn en agua destilada.
Se prepar una solucin de sulfato de cobre 5 % (p/v) disolviendo
5,0029 g del reactivo en agua y llevado a un volumen final de 100 mL.
Se prepar una solucin de cido clorhdrico 5 mol.L
-1
, por dilucin
adecuada del reactivo concentrado.
Se prepararon cinco soluciones de hidrxido de sodio con diferentes
concentraciones del reactivo (1.5, 3, 5, 10 y 13) mol.L
-1
.
Tabla 2. Caractersticas de los reactivos utilizados
Reactivo Pureza (% p/p) Casa comercial
Hidrxido de sodio 99 Riedel-de Han
Cloruro de amonio 99,6 J.T. Baker
Nitrato de sodio 99 MERCK
Sulfato de cobre 99,9 MERCK
cido clorhdrico 37 Riedel-de Han
Zinc granular Tamao
de las partculas
(0,8 a 2) mm
100 J.T. Baker
3.1.3 Preparacin de la columna reductora
La columna de reduccin de zinc cuprificado fue preparada siguiendo
un procedimiento descrito por Haghighi.
[22]

- Se corta un tubo de tefln de 17 cm de longitud por 2 mm de dimetro
interno.
- Se introducen partculas de zinc en el interior del tubo con tamaos menores
a 2 mm.
- Se tapan los extremos del tubo con fibra de vidrio.
- Se lava la columna rellena de zinc con agua por un minuto y posteriormente
con cido clorhdrico 5 mol.L
-1
, luego se le hace pasar agua nuevamente por
dos minutos, utilizando un sistema de flujo continuo.
- Se hace pasar a travs de la columna una solucin de sulfato de cobre al
5 % (p/v), por un tiempo de un minuto o hasta que se observe la formacin de
un precipitado de color negro. Aqu se da lugar a la formacin de cobre
metlico tal y como se describe en la siguiente reaccin:

ductor Agente Cu SO Zn Zn SO Cu
V E Zn Cu Zn Cu
V E e Zn Zn
V E Cu e Cu
Re
1037 , 1
7518 , 0 2
3419 , 0 2
0
4
2 0
4
2
2 0 0 2
2 0
0 2
+ +
= + +
= +
= +
= + = +
+ +
+
+
Ec. (1)
- Finalmente se lava la columna con agua por dos minutos para remover el
exceso de cobre.
3.1.4 Activacin de la columna
Se inyecta tres veces una solucin de 4,03 x 10
-3
mol NO
3
-
L
-1
, luego se
limpia la columna con abundante agua y se hacen las inyecciones de las
soluciones de nitrato hasta obtener una seal reproducible.
3.1.5 Regeneracin de la columna
La columna de reduccin Zn/Cu fue regenerada lavando con abundante
agua y posteriormente con la solucin de sulfato de cobre, como se indic
anteriormente.

3.1.6 Preparacin de las muestras de fertilizantes
Las muestras de fertilizantes utilizadas en este trabajo fueron adquiridas
en expendidos de productos agrcolas de la ciudad de Mrida. Estas muestras
representan las diversas marcas de fertilizantes que se comercializan para la
produccin del campo en la regin Andina de Venezuela.
Con los valores de nitrgeno reportados en las etiquetas de los
productos, inicialmente se determin el contenido de nitrato y amonio en cada
uno de los fertilizantes. Una vez que se calculan los porcentajes tanto de
amonio como de nitrato, se pesaron entre 0,10 y 0,25 gramos, para el caso del
amonio y entre 0,03 y 0,12 gramos, para el caso del nitrato aproximadamente,
para cada una de las muestras descritas en la Tabla 3, las muestra pesadas se
disolvieron en agua y se llevaron a un volumen final de 100 mL.
Todas las soluciones utilizadas fueron previamente desgasificadas
antes de ser introducidas en forma directa al sistema en flujo para su
correspondiente anlisis.
Tabla 3. Muestras de fertilizantes nitrogenados sintticos inorgnicos
Muestra Composicin segn el fabricante
1
13 % nitrgeno total
8 % nitrgeno amoniacal (NH
4
+
- N)
5 % nitrgeno ntrico (NO
3
-
- N)
2
33,5 % nitrgeno total
16,8 % nitrgeno amoniacal (NH
4
+
- N)
16,7 % nitrgeno ntrico (NO
3
-
- N)
3
26 % nitrgeno total
4
+
- N)
3
-
- N)
4
13 % nitrgeno ntrico
Hecho en Israel (polvo)
5
13 % nitrgeno total
13 % nitrgeno ntrico (NO
3
-
- N)
46 % K
2
O
38 % K perlado
6
33,5 % nitrgeno total
4
+
- N)
3
-
- N)
3.2 Metodologa propuesta
3.2.1 Procedimiento general
El sistema AIF-GFG-EAM-UV-Vis, propuesto en este trabajo involucra
varias etapas:
1) Establecimiento del background del sistema.
2) Introduccin de la muestra.
3) Conversin del nitrato o amonio en amoniaco.
4) Transporte de la fase gaseosa a la celda para gases.
5) Registro de la seal analtica y procesamiento de datos.
La Figura 3, muestra el diagrama esquemtico propuesto para la
realizacin de este trabajo. Consta de dos bombas peristlticas de cuatro
canales (P1 y P2) que propulsan los flujos correspondientes de la muestra (M)
y soluciones de hidrxido de sodio a diferentes concentraciones (C1 y C2) una
vlvula de inyeccin (VI), una columna reductora (SR), dos serpentines de
reaccin (R1 y R2), una entrada de nitrgeno con su respectivo regulador de
flujo, un separador de fases gas-lquido y una celda para gases alineada al
camino ptico del espectrofotmetro UV-Visible el cual funge como detector en
el sistema. El diseo incorpora una vlvula manual selectora de canales (VS)
que permite la introduccin de la muestra y reactivos por las rutas indicadas
como a o b en la Figura 3.
Al comienzo de cada sesin de trabajo se establece el background del
sistema colocando agua destilada por el canal de la muestra (M) y soluciones
de hidrxido de sodio por el canal (C1 y C2) a temperatura ambiente, como se
indica en la Figura 3, bajo las condiciones de trabajo que se especifican en la
Tabla 4. A continuacin, se ponen en funcionamiento: Las bombas, el
espectrofotmetro, as como el sistema surtidor de nitrgeno. La bomba (P1)
permanece encendida durante todo el anlisis, propulsando un flujo constante
de soluciones de hidrxido de sodio, mientras que la bomba (P2) se activa solo
para llenar el loop de la muestra. Bajo estas condiciones se introducen al
sistema las diversas soluciones por las rutas a o b y se obtiene de esta manera
el background y el fiagrama correspondiente al blanco del sistema.
A continuacin se coloca la muestra o soluciones estndar que
contienen amonio en el canal (M), se gira la vlvula de inyeccin (VI) a la
posicin de carga y a travs de la vlvula selectora (VS), se da paso a las
soluciones por la ruta a indicada en la Figura 3. En una primera instancia el
contenido de muestra en el loop se inserta en la corriente de (C1), el cual se
mezcla en lnea con el hidrxido de sodio proveniente del canal (C2), en el
serpentn (R1). En este punto, se produce o tiene lugar la formacin del
amoniaco a partir del cloruro de amonio, tal y como se describe en la siguiente
ecuacin qumica:
NH
4
Cl
(ac)
+ NaOH
(ac)
NH
3 (g)
+ NaCl
(ac)
+ H
2
O
(l)
Ec. (2)
Posteriormente, en su camino hacia el detector, la mezcla gas-lquido es
transportada por una corriente de nitrgeno a un segundo serpentn (R2),
donde se produce la separacin parcial de las dos fases y luego a un
separador gas-lquido para una separacin definitiva. En esta etapa, la fase
lquida es conducida al drenaje y la fase gaseosa es transportada por el gas de
arrastre (N
2
) al interior de una celda para gases alineada al camino ptico del
espectrmetro UV-Visible y se obtiene la correspondiente seal analtica a una
longitud de onda de 197 nm.
La salida de la celda de gases se encuentra conectada a una trampa
que contiene una solucin cida con el fin de retener el amoniaco generado
mediante su conversin a in amonio. Esta reaccin puede ser descrita como:
NH
3 (g)
+ HCl
(ac)
NH
4
Cl
(ac)
Ec. (3)

A continuacin, se cambia la vlvula selectora (VS) para permitir el paso
de las muestras o estndares que contienen nitrato por la ruta b (Figura 3),
hacia una columna reductora (SR) que permite la conversin del nitrato a la
forma de amonio. En la columna se produce la reaccin entre el nitrato y el
cobre depositado en la superficie de las partculas de zinc. Esta reaccin puede
ser descrita como se muestra en la Ecuacin 4.
Posteriormente, el amonio procedente de la reduccin del nitrato y el
amonio que originalmente se encuentra en la muestra, son mezclados como
fue descrito anteriormente con el hidrxido de sodio. La seal de absorbancia
del amoniaco que corresponde a la conversin del nitrato se determina por
diferencia de las dos seales obtenidas.

( )
2
4
0
3 2
2 0
4 3 2
4 10 4 7
2 4
10 8 7
+ +
+
+
+ + + +
+
+ + +
Cu OH NH Cu NO O H
e Cu Cu
OH NH e NO O H
Ec. (4)
Antes de la introduccin al sistema de una nueva muestra (estndar), se
recomienda realizar una etapa de limpieza. Para ello se lava varias veces el
loop de inyeccin con agua destilada por 30 segundos, mientras circula
hidrxido de sodio por los canales (C1 y C2). Posteriormente, se carga el loop
con agua y se hace una inyeccin al sistema. La verificacin de la calidad del
blanco se puede realizar en cualquier momento, mediante la obtencin del
fiagrama del blanco entre la medida de dos muestras o estndares, durante el
ciclo de limpieza.
El criterio de medida seleccionado en el presente trabajo para la seal
instrumental fue la lectura de absorbancia en el mximo de absorcin de la
seal analtica a una longitud de onda de 197 nm.

Figura 3. Representacin esquemtica del sistema AIF-GFG-EAM-UV-Vis. M: muestra,
C1: canal portador C2: canal de NaOH, P1 y P2: bombas peristltica, VI: vlvula de inyeccin,
VS: vlvula selectora, SR: sistema reductor, R1: serpentn de reaccin, R2: serpentn de
mezcla, RF: regulador de flujo, SF: separador de fases, CG: celda para gases, TG: trampa de
gases.
Tabla 4. Condiciones experimentales de operacin del sistema AIF-GFG-EAM-
UV-Vis
Parmetro Valor Seleccionado
Concentracin de hidrxido de
sodio (C1)
3 mol.L
-1

Concentracin de hidrxido de
sodio (C2)
13 mol.L
-1

Longitud del serpentn de
reaccin y de mezcla (R1 y R2)
40 cm
Dimetro interno del serpentn de
reaccin y de mezcla (R1 y R2)
0,5 mm
Revoluciones de la bomba (P1)
60 rpm
Revoluciones de la bomba (P2) 120 rpm
Flujo del hidrxido de sodio (C1)
1,4 mL.min
-1
Flujo del hidrxido de sodio (C2)
0,8 mL.min
-1
Flujo de muestra (M) 11,6 mL.min
-1

Flujo de nitrgeno con una salida
en la bombona de 27 psi
56,7 mL.min
-1
Loop de inyeccin
100 L
Longitud de la columna de Zn/Cu 17 cm
Longitud de onda 197 nm
3.3 Espectroscopa de Absorcin Molecular en el Ultravioleta/Visible
La espectroscopa de absorcin molecular en el ultravioleta y visible
involucra transiciones electrnicas desde el estado fundamental a un nivel
electrnico excitado, de los electrones externos o de valencia de una
molcula.
[72]

La regin del Ultravioleta abarca la regin del espectro electromagntico
comprendida entre 10 y 350 nm. Sin embargo, desde el punto de vista
experimental es conveniente subdividirla en dos subregiones, a saber:
1) El Ultravioleta lejano o de vaco: Ocupa el intervalo comprendido entre
10 y 180 nm. Esta es una regin muy difcil de trabajar desde el punto de vista
experimental, por la fuerte absorcin que presentan muchos componentes
atmosfricos. Este hecho la descarta para su utilizacin en esta tcnica
instrumental.
[72]

2) El ultravioleta convencional: Abarca el intervalo de longitudes de onda
comprendido entre los 180 y 350 nm. Desde el punto de vista practico, es la
regin til del ultravioleta.
[72]

Por su parte, el visible corresponde a una regin del espectro
electromagntico, en la cual el ojo humano es sensible, est confinado al
intervalo que va desde los 350 hasta los 780 nm. Sobre la base de lo expuesto,
la espectroscopa de absorcin molecular en el ultravioleta visible se encuentra
en la zona espectral acotada entre 180 y los 780 nm.
[72]

A temperatura ambiente, la mayora de las molculas se encuentran en
el estado electrnico fundamental y ms an, tambin lo estn en el estado
vibracional basal. Bajo estas condiciones, la absorcin de un cuanto de
energa, involucra la excitacin de algn electrn externo desde E
0
hasta algn
estado electrnico excitado (E
1
*
,
E
2
*
,
etc.), en un proceso que se puede resumir
en la siguiente ecuacin:
M
0
+ h
1
M
1
*
o M
0
+ h
1
M
2
*
Ec.(5)
Dependiendo de la energa () del fotn que proporcione la fuente de
excitacin.

La molcula excitada M
1
*
o M
2
*
es inestable, por lo que tiende a liberar el
exceso de energa con rapidez para retornar al estado fundamental. Este
proceso puede llevarse a cabo mediante diversos mecanismos, que son de
mucho inters para los fundamentos de la luminiscencia molecular. Sin
embargo, este paso no es relevante dentro del proceso de la absorcin
molecular, razn por la cual no se entrar en detalle sobre la misma.
[38,72,73]

La gran cantidad de estados vibracionales y rotacionales asociados a
cada estado electrnico es lo que justifica que las bandas de absorcin
molecular sean muy ensanchadas tal y como se aprecia en la Figura 4.
Estado Electrnico Excitado
E*
2
=3
=2
=1
=0
=3
=1
=2
=0
=0
=1
=2
=3
E*
1
Estado Electrnico Excitado
M
0
+h.
2
M*
2
Estado Electrnico Fundamental
E
0
E
0 2
= h.
2
E
0 1
= h.
1
M
0
+h.
1
M*
1

Figura 4. El proceso de la absorcin molecular en el Ultravioleta-Visible

El primer punto que se plantea con real inters es establecer cuales son
los compuestos (orgnicos e inorgnicos) que presentan un comportamiento de
absorcin.
[72]

Todas las molculas orgnicas absorben radiacin ultravioleta y visible.
Sin embargo, desde el punto de vista prctico, solo algunas de ellas presentan
una absorcin que se puede definir como til en esta regin.
[72]

Las transiciones electrnicas de los electrones de valencia se resumen
en cuatro grandes grupos:
1) Transiciones
*

2) Transiciones n
*

3) Transiciones
*

4) Transiciones n
*

Los dos primeros grupos (
*
y n
*
) no presentan ninguna
utilidad ya que la energa involucrada en estas transiciones es grande
( < 200 nm) y los coeficientes de excitacin molar suelen ser bajos.
[38,72,73]

Desde el punto de vista analtico, tan solo los dos ltimos tipos de
transiciones (
*
y n
*
) tienen utilidad en la espectroscopa de
absorcin molecular en el ultravioleta-visible.
[38,72,73]

Existen diversos iones, compuestos y complejos inorgnicos que
muestran un interesante comportamiento de absorcin.
[72,73]
Entre ellos se tiene:
1) Absorcin por aniones inorgnicos.
2) Absorcin por iones de los metales de transicin.
3) Absorcin por iones lantnidos y actnidos.
4) Absorcin por transferencia de carga.

En cuanto a la absorcin por aniones inorgnicos, se puede decir que
varios aniones inorgnicos presentan picos de absorcin naturales en el
Ultravioleta, como consecuencia de transiciones del tipo n
*
. A continuacin
en la Tabla 5 se ilustran algunos ejemplos.
Tabla 5. Absorcin por aniones inorgnicos
Anin Longitud de onda
El nitrato (NO
3
-
) = 201 y 301 nm
El nitrito (NO
2
-
) = 209,280 y 360 nm
El carbonato (CO
3
=
) = 217 y 301 nm

La azida = 230 nm

La repuesta instrumental que se sigue en la Espectroscopa de
Absorcin Molecular en el Ultravioleta-Visible es la Absorcin (A), la cual se
rige por la ley de Beer-Lambert.
[38,72,73]

A = Log P
0
/ P=
()
* b * c Ec. (6)
En donde P
0
y P representan la potencia de la radiacin incidente y
transmitida respectivamente.
()
es el coeficiente de extincin molar que
depende de la naturaleza de la especie absorbente de la primera transicin
electrnica involucrada de la longitud de onda. Los trminos b y c corresponden
al paso ptico y a la concentracin respectivamente.
[72]
Los componentes
bsicos de un equipo de absorcin molecular en el ultravioleta-visible son los
siguientes:
1) Fuente de Radiacin
2) Selector de longitud de onda
3) Celda
4) Detector
5) Unidad de registro de la seal

La distribucin de estos componentes se ilustra en el diagrama de
bloques que se presenta en la Figura 5.
P
0
P

Figura 5. Diagrama de bloques de un instrumento bsico para la Absorcin Molecular en el
Ultravioleta-Visible
Fuente de radiacin: Fuentes para la regin espectral del Ultravioleta-Visible.
Selector de : Monocromador
Celdas: De plstico, vidrio y de cuarzo
Detector: Fotomultiplicador
Unidad de registro: Registrador, PC, etc.
La instrumentacin comercial se divide a su vez en instrumentos de un
solo haz y equipos de doble haz.
[38,72,73]

En cuanto a las aplicaciones de la espectroscopa de absorcin
molecular se pueden agrupar en: Anlisis Cualitativo y Anlisis
Cuantitativo.
[38,72,73]

En el anlisis cualitativo, el espectro de absorcin se caracteriza por
tener muy pocas bandas y ensanchadas, adems de una estructura fina muy
Selector
de
Detector
R Celda +
pobre. Esto sugiere que la informacin que proporciona con fines de
identificacin es bastante limitada. En ese sentido, son pocas las aplicaciones
de esta tcnica instrumental dentro del anlisis cualitativo.
[72,73]
A continuacin
se indican algunas consideraciones al respecto:
1) Hay que tener cuidado con las zonas de transparencia y las bandas
de absorcin del solvente.
[72,73]

2) Los solventes (por su polaridad) pueden causar desplazamientos en
las bandas del cromforo de inters (efecto batocrmico e hipsocrmico). Los
picos asociados a transiciones (n
*
)

se desplazan generalmente, hacia
longitudes de onda ms cortas (un desplazamiento hacia el azul) a medida que
aumenta la polaridad del disolvente. Este efecto se conoce como efecto
hipsocrmico. En los sistemas en que son posibles transiciones (
*
),

el estado excitado es ms polar que el estado basal; como resultado de esto, la
transicin (
*
), ocurrir a mayores longitudes de onda en solventes
polares que en solventes no polares. Este desplazamiento hacia el rojo del
espectro visible, se conoce como efecto batocrmico.
[72,73]

3) El espectro puede ser til para la verificacin de la presencia o
ausencia de grupos funcionales.
[72,73]

4) Determinacin de la presencia de impurezas en un solvente
particular.
[72,73]

Siguiendo en este mismo orden de ideas, se puede decir, que en
contraste con lo planteado en lneas anteriores, son mltiples las aplicaciones
que presenta la espectroscopa de absorcin molecular UV-Visible, en el
campo del anlisis cuantitativo, dicho mtodo ha recibido gran
aceptacin,
[39,72,73]
debido entre otras, a las siguientes razones:
1) Amplio campo de aplicacin: Como ya se ha mencionado, las tcnicas
espectroscpicas UV-VIS., son ampliamente empleadas, ya que son muchas
las especies que son activas en el Visible, y muchas ms las que con un
tratamiento adecuado son capaces de formar especies coloreadas. Lo mismo
puede decirse de la espectroscopa UV.
[72,73]

2) Selectividad adecuada: Aunque no es muy comn si es posible tener
interferencias en UV-Visible. Cuando esto ocurre, es posible emplear los
mtodos para anlisis de multicomponentes. Otra alternativa es aislar el analito
de la interferencia, o separar la interferencia misma.
[72,73]

3) Buena Exactitud y Precisin: En estas tcnicas espectroscpicas, es
normal tener errores relativos del 1 al 3 %, por lo cual, se puede considerar que
se tendrn resultados analticos con un mnimo de incertidumbre si se procede
en la forma correcta.
[72,73]

4) Facilidad y Conveniencia: Aunque existen instrumentos altamente
sofisticados acoplados a computadoras y con sistemas pticos y electrnicos
de alta precisin, es posible obtener resultados muy aceptables para anlisis
de rutina con instrumentos o espectrofotmetros de los ms sencillos en el
mercado, a un costo muy accesible.
[72,73]

En algunos casos la espectroscopia UV puede ser fundamental para el
estudio de ciertos problemas especficos. Por ejemplo, en la industria de los
cosmticos, tintes, colorantes, pinturas y fertilizantes. El estudio de los grupos
auxocromos y de su influencia en el desplazamiento de ciertos compuestos
qumicos hacia la regin visible hacen de esta tcnica una de las de mayor
inters en sta rea.
[38,73]

Desde el punto de vista del estudio de estereoqumica y de grupos
funcionales en una molcula orgnica, la espectroscopa ultravioleta-visible
compite con otras tcnicas, sin embargo, su aplicacin en la cuantificacin de
sustancias que absorben radiacin ultravioleta-visible la hacen una tcnica
insustituible.
[38,73]

Existe un gran nmero de mtodos, para determinar sustancias que no
tienen un nmero suficiente de grupos cromforos para que la banda de
absorcin est dentro del espectro visible; por ejemplo, cidos orgnicos,
alcoholes, fenoles, aldehdos, cetonas, etc. Muchos de este tipo de compuestos
muestran al menos una banda de absorcin en el UV cercano y tomando como
dato su longitud de onda de mxima absorbancia, se pueden cuantificar en la
misma forma en que se determina compuestos en espectroscopa visible. Estas
tcnicas analticas son de mltiples aplicaciones en bioqumica general y
bioqumica de alimentos, y esta es la razn de su importancia. En Qumica
Clnica tambin son muy utilizados los mtodos de espectroscopa UV,
utilizando para ello equipos de anlisis como los espectrofotmetros.
[38,73]
3.4 Tcnica de Anlisis en Flujo y Generacin de Fase Gaseosa en Lnea
Los avances en qumica analtica actualmente se basan en tecnologas
complejas y en el uso de instrumentos sofisticados, cuyo precio de adquisicin
y mantenimiento as como su difcil manejo las hacen inasequibles a una gran
parte de los cientficos y de los laboratorios de control. Es por ello que se ha
tratado de desarrollar nuevas tcnicas, surgiendo as el anlisis por inyeccin
en flujo el cual constituye una reciente e importante innovacin metodolgica
en qumica analtica que se caracteriza por un fundamento simple, un utillaje
barato, un manejo sencillo y cmodo y una gran capacidad para lograr unos
resultados que son sorprendentes dadas sus caractersticas: rapidez, exactitud
y precisin. Su extremada versatilidad la distingue de la mayor parte de las
nuevas tcnicas analticas.
[74]

Por una parte, puede adaptarse con sencillez a todo tipo de necesidades
sin cambios tcnicamente complejos y por otra hay que resaltar lo fcil que es
para un investigador analtico intervenir directamente en su funcionamiento.
Logrndose una optimizacin del propio sistema tcnico con el fin de controlar
las variables qumicas.
[38,72,73]

La denominacin de esta nueva modalidad de mtodos de anlisis
continuo como Anlisis por Inyeccin en Flujo fue propuesta en el primer
artculo publicado en 1975 por Ruzicka y Hansen.
[75]
La inclusin del termino
inyeccin en el nombre de la tcnica responde ms a un aspecto histrico que
actual,
[74]
ya que en los primeros sistemas de anlisis por inyeccin en flujo
realizados en 1970 por Nagy, Free y Pungir,
[76]
describen el uso de una jeringa
hipodrmica para inyectar la muestra en un flujo de reactivo. El uso de vlvulas
rotatorias que se ha dispuesto actualmente hace que se trate ms de una
insercin que de inyeccin propiamente dicha.
[74]

Si se tiene en cuenta la definicin de anlisis expuesta recientemente
por Pardue como conjunto de etapas que van desde la planificacin de la
estrategia para abordar el problema analtico hasta el tratamiento e
interpretacin de los resultados,
[74]
no es del todo correcto la inclusin de este
vocablo en el nombre de la nueva metodologa, ya que esta no abarca todas
las etapas que configuran un mtodo analtico.
En general el anlisis por inyeccin en flujo se puede definir como una
tcnica analtica basada en la manipulacin de microfluidos de muestras y
reactivos. En estos sistemas las muestras son introducidas a travs de una
vlvula de inyeccin y transportadas por los canales de flujo junto con los
reactivos hasta el detector. Los primeros sistemas de (FIA) se disearon
utilizando la espectroscopia de absorcin molecular UV/VIS, como forma de
deteccin. Sin embargo, con el pasar del tiempo, su uso se expandi de forma
exponencial, incorporando prcticamente a todas las tcnicas espectroscpicas
de deteccin (fluorescencia, quimioluminiscencia, infrarrojo, etc.) e incluso a
numerosas tcnicas electroqumicas.
[77]

Tal y como se ha indicado el (FIA) es una modalidad del anlisis de flujo
continuo (CFA), esta ltima se refiere a mtodos continuos segmentados y son
los clsicos descritos por vez primera, por Skeggs en 1957,
[74]
los cuales
corresponden aquellos procesos analticos en los que la concentracin del
analito es medida sin interrumpir un flujo de lquido o gas. En la Figura 6, se
observa un sistema primario de dicha tcnica.

Figura 6. Esquema bsico sobre el sistema de anlisis en flujo continuo
Las muestras se introducen de manera sucesiva y a intervalos regulares
de tiempo en un canal por el que fluye un lquido en el que se encuentra
disuelto el reactivo, o bien este es introducido posteriormente mediante canales
auxiliares que confluyen con el principal. Estas muestras son aspiradas
secuencialmente y entre ellas se sitan burbujas de aire que (segmentan) el
flujo establecido, incluido un ciclo de lavado.
[74]
Dicho fluido pasa a travs de
una cubeta de flujo que forma parte de un sistema de deteccin. Habitualmente
las burbujas de aire se eliminan antes de que lleguen al detector. El flujo de
salida se desprecia. La seal obtenida se recoge en un registrador y es de tipo
continuo. Cada muestra origina una seal transitoria en forma de curva, cuyas
caractersticas generalmente la altura mxima, se relacionan con el parmetro
determinado en cada muestra. La lnea de base entre curvas corresponde al
tiempo en que no pasa ninguna muestra o de su producto de reaccin por el
detector.
[74]

La tcnica (FIA) se trata en principio de un apartado de los mtodos
automticos de anlisis, pero que presenta una diferencia importante en
relacin con el conjunto de los mismos. Esta consiste en un diseo para el
anlisis de muestras inyectadas manualmente que es la situacin ms
frecuente en (FIA). De ah que sea normal hacer la distincin entre un mtodo
(FIA) ordinario y un mtodo automtico (FIA). Esta concepcin es una
caracterstica importante de la nueva metodologa que es inconcebible en los
mtodos automticos.
[74]

Entre los rasgos esenciales del Anlisis de Inyeccin en Flujo se
destacan los siguientes:
1) El flujo no esta segmentado por burbujas de aire, lo que constituye la
diferencia fundamental con los mtodos clsicos de (CFA).
[74]

2) La muestra lquida es inyectada o inserta directamente en el flujo en
lugar de ser aspirada en el mismo.
[74]

3) Se realiza un transporte del trozo inyectado a travs del sistema.
Puede tambin tener lugar un proceso fsico-qumico adicional al transporte
(reaccin qumica, dilisis, extraccin lquido-lquido etc.).
[74]

4) La dispersin o dilucin parcial del analito en este transporte puede
ser perfectamente manipulada mediante un control de las caractersticas
geomtricas e hidrodinmicas del sistema. Se produce una mezcla incompleta
pero reproducible, que da lugar a un gradiente de concentracin variable con el
tiempo a lo largo del sistema.
[74]

5) Un sistema de deteccin continua proporciona una seal transitoria,
que es convenientemente registrada.
[74]

6) En el momento de la deteccin de la seal no se ha alcanzado el
equilibrio fsico (que se supondra la homogenizacin de una porcin de flujo) ni
el equilibrio qumico (reaccin completa). Por ello las tcnicas (FIA) pueden
considerarse dentro de los mtodos cinticos de anlisis y en su modalidad de
medida a tiempo fijo.
[74]

7) El tiempo de operacin debe ser muy reproducible pues las medidas
se realizan en condiciones de no estabilidad y por tanto pequeas variaciones
del mismo pueden producir graves alteraciones de los resultados.
[74]

En cuanto a los elementos esenciales de un montaje (FIA) teniendo en
cuenta una versin primaria del mismo como se observa en la Figura 7. Consta
de las siguientes partes:

Figura 7. Esquema bsico del sistema de anlisis de inyeccin en flujo (FIA)

1) Una unidad de propulsin, que establece un flujo de caudal lo ms
constante posible de una disolucin (o de varias) que lleva disuelto un reactivo
o hace de simple portador. Puede ser una bomba peristltica, un sistema de
presin gaseosa, o bien la simple fuerza de la gravedad.
[74]

2) Un sistema de inyeccin, que permita insertar o introducir en el flujo
un volumen exactamente medido de la muestra con gran reproducibilidad de
operacin y sin interrumpir el mismo.
[74]

3) Una zona de tubo, que se llama comnmente reactor, a veces
impropiamente y que es donde tiene lugar el transporte con o sin proceso
adicional. Puede ser un tubo recto, en forma de serpentn, relleno o no de
bolitas inertes, o bien tener una cmara de mezcla, un tubo relleno de material
inerte o activo qumicamente (redox, cambio inico, enzima inmovilizada,
etc.).
[74]

4) Una celda de flujo incorporada a un instrumento de medida
(colormetro, fotmetro, fluormetro, potencimetro, etc.), que traduce la seal
contina a un registrador y un microprocesador. El flujo que sale del sistema se
desecha. A veces se pasa de nuevo por la bomba peristltica para conseguir
mayor constancia en el caudal. Para que este esquema (FIA) observado en la
Figura 7, tenga categora de automtico, es preciso incorporar un sistema de
muestreo que consiste en un muestreador tpico, un sistema de aspiracin de
muestra (normalmente con el uso de la misma bomba peristltica) y un sistema
de inyeccin controlado elctricamente y que funcione coordinadamente con el
muestreador. Un microprocesador con una interfase activa permite con
facilidad programar esta operacin.
[74]

Una tcnica muy selectiva que se ha utilizado bastante en anlisis por
inyeccin en flujo es la difusin de gases desde una corriente portadora en la
que hay un analito gaseoso hasta una corriente aceptora que contiene un
reactivo que permite su determinacin. Las separaciones tienen lugar en un
mdulo especial. Sin embargo, en esta aplicacin la membrana suele ser de un
material hidrofbico microporoso, como Tefln o polipropileno.
[78]

Es importante insistir que en los mtodos (FIA) ningn tipo de
separacin llega a ser completa, pero esto no tiene importancia, porque los
patrones y las muestras se tratan exactamente igual. Cmo ya se ha sealado
antes, en los instrumentos automticos los intervalos de tiempo son tan
reproducibles que aunque se trabaje con separaciones incompletas, no hay
prdida en la precisin y exactitud, como sucede en el caso de operaciones
manuales.
[74]

La tcnica de (FIA) provee un medio simple de automatizar una gran
cantidad de procedimientos analticos por va hmeda y algunas de sus
principales ventajas
[78]
reconocidas son:
1) Alta productividad de 60 a 200 muestras analizadas por hora.
[79]

2) Bajo costo de operacin y mantenimiento, el consumo de reactivos
qumicos por muestra analizada esta en el orden de microgramos a uno o dos
miligramos (esto tambin representa baja contaminacin ambiental). As
mismo, el consumo de muestra es del orden de decenas a una centena de
microlitros.
[79]

3) Una gran parte del mantenimiento del equipo (FIA) puede ser
realizado por el propio usuario.
[79]

4) Es aplicable a las principales tcnicas instrumentales de anlisis
qumico, tales como: Espectroscopa de absorcin atmica, (ICP),
potenciometra, espectroscopia de absorcin molecular, voltamperometra e
incluso (HPLC). En todos los casos la utilizacin de (FIA) incrementa la
productividad y reduce los costos de anlisis de manera espectacular.
[79]

5) La instrumentacin necesaria puede ser ensamblada directamente a
partir de componentes relativamente poco costosos.
[79]

En cuanto a los uso de (FIA), se puede decir que las tcnicas de anlisis
de inyeccin en flujo se han extendido ampliamente en el rea de qumica
analtica en los ltimos aos. (FIA) permite realizar anlisis rpidos, ya que la
muestra y el reactivo no deben ser mezclados homogneamente y no se
necesita esperar mucho tiempo para que la reaccin qumica ocurra, debido a
que la misma se desarrolla en sistemas en lnea que permite hacer las
mediciones. (FIA) se puede utilizar para el anlisis de un gran nmero de
muestras en un laboratorio de anlisis; la eficacia y la eficiencia en el mismo,
puede ser aumentado mediante el uso de (FIA). Esto no es slo porque los
anlisis son automatizados, sino tambin porque la cantidad de reactivos
utilizados se ver considerablemente reducido en comparacin con otras
tcnicas.
[80]

Los mtodos fotomtricos simples, estn muy extendidos en el anlisis
de agua y del medio ambiente, por lo tanto, no es sorprendente encontrar (FIA)
en los mismos, ya que esta tcnica es utilizada ampliamente en este campo de
anlisis, esta tcnica (FIA) es acoplada en la prctica a detectores pticos
como los espectrofotmetros UV/VIS o de Absorcin Atmica, entre otros, para
la determinacin de aniones y cationes y as desempear un papel importante.
Lo mismo se aplica a la industria agroqumica, donde grandes cantidades de
componentes inorgnicos deben ser analizados.
[80]

Aunque hay una gran cantidad de publicaciones que describen el uso de
la (FIA) en anlisis clnicos, en la prctica no es tan ampliamente utilizado. Esto
es sobre todo porque ya existe un uso generalizado del nivel de automatizacin
en este mbito, aunque las tcnicas son convenientes para (FIA).
[80]

Un mayor uso de (FIA) se puede esperar en el anlisis industrial en
general. Esta es usada para el anlisis en el control de calidad y vigilancia en el
interior de las aguas residuales. Un uso importante de la tcnica vendr en la
vigilancia y el control de procesos. Las ventajas que se pueden ver aqu es que
ayuda al anlisis de los datos disponibles de una manera rpida lo que significa
que puede hacer el anlisis como un proceso, ms o menos, se verifican los
datos de forma continua y se utilizar para controlar el proceso de inmediato.
[80]

Para el anlisis industrial, y de manera similar para el anlisis de
productos farmacuticos, existe un nmero cada vez mayor de los reglamentos
que significa una mayor necesidad de anlisis continuo en el control de calidad
y control de procesos. Es por ello que en estas reas, por s solo, existe la
necesidad de una mayor automatizacin por lo que el uso de (FIA) es ideal.
[80]

Anlisis bioqumico y la biotecnologa son otras reas de crecimiento en
el uso de anlisis por inyeccin en flujo. Debido a que esta rea presenta una
alta tasa de crecimiento, una gran parte de anlisis bioqumicos se realizan por
pruebas fotomtricas simples. Estas pruebas son por lo general muy
adecuadas para la automatizacin de (FIA). Muchos de los compuestos, por
ejemplo, Fosfatos, nitratos y amonio, pueden ser fcilmente determinados
usando (FIA). Ya hay mtodos preparados para el anlisis bioqumico de las
molculas ms grandes. Como por ejemplo determinar la actividad enzimtica
utilizando (FIA).
Procesos de fermentacin, incluso ms que los procesos

qumicos, requieren un complejo sistema de vigilancia para el control ptimo, a
menudo con muchos parmetros.
Los sistemas (FIA) son adecuados para optimizar el control de procesos
de fermentacin con sus rpidos tiempos de respuesta y anlisis de las tasas
altas. A menudo, en anlisis bioqumicos, una matriz puede requerir una
considerable cantidad de muestras para analizar el sustrato que contiene. Sin
embargo utilizando tcnicas (FIA) la preparacin de la muestra puede ser
automatizada.
[80]

Un problema importante en el anlisis de los alimentos son muestras con
matrices complejas. Pero con la utilizacin de determinadas tcnicas (FIA) (por
ejemplo, la difusin de gas, dilisis, etc.), estos problemas se pueden resolver
fcilmente.
[80]

De manera muy general se puede decir que la tcnica (FIA) es usada
con frecuencia en los ltimos tiempos en diferentes reas debido a las razones
antes expuestas, ya que con respecto a su aplicacin, realmente no existen
lmites. En principio, todos los procesos, todas las reacciones se pueden
desarrollar en lnea: reacciones homogneas, reacciones heterogneas,
reacciones acido-base, de oxido-reduccin, etc., procesos de extraccin de
preconcentracin, separacin de fases, etc., la limitacin esta en la imaginacin
y en la disponibilidad de accesorios.
[80]


CAPTULO IV
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

4.1 Estudios preliminares
Estudio del comportamiento de absorcin de los reactivos y el amoniaco.
La formacin de amoniaco a partir de soluciones de cloruro de amonio
puede llevarse a cabo en presencia hidrxido de sodio y a temperatura
ambiente, como fue descrito anteriormente a travs de la Ecuacin (1). En esta
reaccin, es necesario utilizar una alta concentracin de hidrxido de sodio
para garantizar la formacin cuantitativa del amoniaco.
Con el objeto de conocer el comportamiento de absorcin de los
reactivos involucrados, en la formacin del amoniaco a partir de soluciones de
cloruro de amonio, las experiencias preliminares se llevaron a cabo utilizando
un sistema de flujo continuo (FC-GFG-EAM-UV-Vis) como el que se ilustra en
la Figura 8. Consiste bsicamente en el ensamble descrito anteriormente
excepto que se elimina la vlvula de inyeccin, la columna reductora y el canal
portador (C1). Las condiciones iniciales de operacin de este sistema se
resumen en la Tabla 6 y las mismas fueron tomadas de la literatura.
[22]

La obtencin del espectro de absorcin del amoniaco en un sistema
como el indicado en la Figura 8, implica el establecimiento del background del
sistema o seal de fondo (blanco). Para esto, se hace pasar agua por el canal
de la muestra (M) y una solucin de hidrxido de sodio 13 mol.L
-1
por el canal
(C2) previamente desgasificadas. A continuacin, se ponen en funcionamiento
las bombas peristlticas (P1 y P2), el dispensador de nitrgeno y el
espectrofotmetro. En este sistema, ambas bombas permanecen encendidas
durante todo el anlisis, propulsando un flujo constante de soluciones.
Seguidamente se da la orden instrumental para que el espectrofotmetro
realice una correccin de lnea base con estas soluciones. Finalmente, se
reemplaza el agua por una solucin de cloruro de amonio y se deja que esta
entre en contacto con el hidrxido de sodio en el serpentn (R1), donde se
produce la reaccin para la formacin del amoniaco. Posteriormente la mezcla
gas-lquida es dirigida mediante una corriente de nitrgeno a un segundo
serpentn (R2), el cual permite la separacin parcial de la mezcla y de all a un
separador de fases (SF), para que finalmente la fase gaseosa que contiene el
analito alcance la celda de gases. El tiempo requerido desde la introduccin de
la muestra hasta emitir la orden instrumental para la adquisicin del espectro,
fue estimado en unos 40 segundos.

Figura 8. Representacin esquemtica del sistema FC-GFG-EAM-UV-Vis. M: muestra, C2:
canal de NaOH, P1 y P2: bombas peristltica, R1: serpentn de reaccin, R2: serpentn de
mezcla, RF: regulador de flujo, SF: separador de fases, CG: celda para gases, TG: trampa de
gases que contiene una solucin de HCl.
Tabla 6. Condiciones experimentales de operacin del sistema FC-GFG-EAM-
UV-Vis
Parmetro Valor Seleccionado
Concentracin de amonio
1,389 x 10
-2
mol.L
-1
Concentracin de hidrxido de sodio
13 mol.L
-1

Velocidad de barrido 240 nm.min
-1
Longitud del serpentn de reaccin 40 cm
Dimetro interno del serpentn de
reaccin
0,5 mm
Flujo del estndar de amonio (M) 1,1 mL.min
-1
Flujo del hidrxido de sodio (C2) 0,8 mL.min
-1
Flujo de Nitrgeno con una salida en
la bombona de 27 psi
56,7 mL.min
-1
Longitud de onda 197 nm
La Figura 9 muestra el espectro de absorcin del amoniaco obtenido a
partir de la reaccin entre el cloruro de amonio y el hidrxido de sodio (a) y de
una solucin de 13 mol.L
-1
de hidrxido de sodio (b). El amoniaco presenta un
espectro de absorcin en la regin comprendida entre 190 y 225 nm
respectivamente, caracterizado por ocho bandas cuyos mximos se ubican en
194, 197, 201, 205, 208, 212, 216 y 221 nm respectivamente. Por su parte, el
hidrxido de sodio no genera absorcin en esta regin espectral con lo cual
muestra una absoluta transparencia en esta zona donde absorbe el analito.
Con el objeto de estudiar la reproducibilidad del sistema continuo en la
adquisicin del espectro de absorcin, se tomaron cinco espectros de una
misma solucin que contena 1,389 x 10
-2
mol.L
-1
de amonio. Los resultados
obtenidos mostraron que a una longitud de onda de 194 nm, la absorbancia
vara an cuando los espectros fueron tomados bajo las mismas condiciones
experimentales. Los resultados obtenidos en estas experiencias y tomando en
cuenta que los niveles de amonio y nitrato son elevados en la matriz de
estudio, se seleccion 197 nm como la longitud de onda analtica ms
adecuada en trminos de reproducibilidad y sensibilidad para ser utilizada en el
sistema AIF-GFG-EAM-UV-Vis.
190 195 200 205 210 215 220 225
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
nm
194
197
201
205
208
212
216
221
(b)
(a)
A

Figura 9. Espectro de absorcin molecular del amoniaco (NH
3
) obtenido por flujo continuo
utilizando una solucin de 11,111 x 10
-2
mol NH
4
+
L
-1

4.2 Optimizacin del acoplamiento de sistema FIA-GFG-EAM-UV-Vis para
la determinacin de amonio
Inicialmente, se probaron diversas configuraciones que involucraban el
acoplamiento FIA-GFG-EAM-UV-Vis, con el objeto de obtener una seal
analtica, con tiempos de respuestas bajos, reproducible y con el menor
consumo de reactivo. En tal sentido, las mejores condiciones se obtuvieron con
el sistema propuesto en la Figura 3.
En esta seccin de trabajo se optimizaron los diversos parmetros
experimentales del sistema FIA-GFG-EAM-UV-Vis, con el objeto de encontrar
las mejores condiciones de anlisis para la determinacin de nitrato y amonio.
En la configuracin utilizada en este trabajo, el volumen de inyeccin de
muestra y la concentracin de hidrxido de sodio son unos de los parmetros
instrumentales que se deben estudiar ya que influyen en la respuesta
instrumental. La generacin de la especie gaseosa depende tambin de los
serpentines (R1 y R2). Es por ello la importancia de fijar los caudales de los
canales correspondientes al portador (C1) y al hidrxido de sodio (C2), as
como la longitud y dimetro interno de los serpentines.
Todos los parmetros fueron optimizados utilizando el mtodo
univariado, es decir, variacin de un parmetro a la vez. Sin embargo, tras
cada optimizacin se evalu la validez de los parmetros previamente
seleccionados. Todas estas experiencias se llevaron a cabo utilizando una
solucin de 1,389 x 10
-2
mol NH
4
+
L
-1
y utilizando la configuracin propuesta en
la Figura 3 con la vlvula selectora (VS) en una posicin que permitiera el paso
del flujo de (C1) por la ruta a.
4.2.1 Efecto de la concentracin de hidrxido de sodio sobre la respuesta
instrumental
Como se mencion anteriormente la concentracin de hidrxido de sodio
determina la cantidad de amoniaco que se forma en fase gaseosa, es por ello
que se realiz la variacin de la concentracin de este reactivo en los canales
(C1) y (C2) (Figura 3). Inicialmente se vario la concentracin del reactivo que
fluye por el canal (C1) en un intervalo de concentracin de 0 a 4 mol.L
-1
. Los
resultados encontrados se presentan en la Figura 10a. En esta se observa que
la seal del amoniaco crece en forma importante con la concentracin de
hidrxido de sodio hasta una concentracin de 1,5 mol.L
-1
a partir del cual no se
observa una variacin apreciable de la seal en el resto del intervalo. La
ausencia de seal cuando la concentracin de hidrxido de sodio es cero indica
que se requiere una etapa previa de contacto de la solucin estndar o muestra
con el reactivo antes de llegar al serpentn (R1). Sobre la base de estos
resultados, se seleccion la concentracin de hidrxido de sodio 3 mol.L
-1
por
encontrarse en la zona media donde se observa poca variacin de la seal
analtica, se minimiza un consumo importante de reactivo si se compara con el
punto extremo de la grfica y adems este valor coincide con el reportado por
otros autores.
[22]

Seguidamente, se evalu el comportamiento de la seal analtica con la
concentracin del mismo reactivo que fluye por el canal (C2) en el intervalo
comprendido entre 1,5 y 13 mol.L
-1
. A diferencia de los resultados anteriores en
la Figura 10b, se observa que a concentraciones por debajo 5 mol.L
-1
el
instrumento no tiene la capacidad de detectar la produccin de amoniaco. Sin
embargo, por encima de esta concentracin la cantidad de amoniaco que se
genera es importante y crece continuamente en el resto del intervalo. Se
seleccion una concentracin de 13 mol.L
-1
del reactivo para el resto del
trabajo, con el objeto de asegurar un exceso estequiomtrico de hidrxido de
sodio para todas las muestras y soluciones del calibrado y adems ganar
sensibilidad en la respuesta instrumental a fin de ampliar la aplicacin del
mtodo a otras matrices cuyos niveles de concentracin del analito pudieran
estar muy por debajo de los valores reportados en los fertilizantes.


Figura 10. a) Efecto de la concentracin de hidrxido de sodio en el canal portador (C1), b)
Efecto de la concentracin de hidrxido de sodio en el canal (C2) sobre la seal analtica de
-2
mol.L
-1
de amonio
4.2.2 Efecto de los caudales de la solucin portadora y del hidrxido de sodio
sobre la seal analtica
En la configuracin del sistema propuesto, los caudales de las
soluciones de trabajo se controlan mediante la eleccin del tipo de tubera
(material del que esta hecho y su dimetro interno); as como por las
revoluciones por minutos con que trabajan las bombas. En este sentido, por
razones de disponibilidad, se utiliz tubera de tygon con dimetro interno de
0,762 mm y 0,504 mm para el canal (C1 y C2) respectivamente.
Adicionalmente, fue necesario el uso de una tercera bomba peristltica para los
estudios de los caudales. El efecto de este parmetro en el canal (C1), sobre el
tiempo de anlisis as como en la forma y altura del pico de absorcin fue
estudiado en un intervalo entre 1,1 a 1,9 mL.min
-1
. La respuesta instrumental
observada de una solucin de 1,389 x 10
-2
mol.L
-1
de amonio, con la variacin
de este parmetro se muestra en la Figura 11a. En la misma se presenta dos
zonas. En la primera, la seal analtica muestra un ligero incremento con el
flujo hasta alcanzar un valor mximo, cuando el caudal es de 1,4 mL.min
-1
.
Finalmente, la seal disminuye para el resto del intervalo. Este ltimo
comportamiento es lgico, ya que un aumento en el flujo disminuye el tiempo
de premezcla de la muestra y reactivo, antes de llegar al primer serpentn y
probablemente el tiempo de residencia en (R1); disminuyendo as la cantidad
de amoniaco que se forma. Por lo anterior, se seleccion el flujo donde la seal
se hace mxima. Esto como un compromiso entre la sensibilidad y tiempo de
anlisis.
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0 1 2 3 4 5
[NaOH] mol L
-1
A
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 1 2 3 4 5
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
[NaOH] mol L
-1
A
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 12 3 4 5 6 7 8 91011121314
Posteriormente, se estudi el comportamiento de la seal analtica de
-2
mol.L
-1
de amonio, variando el caudal de (C2)
entre 0,48 y 1,1 mL.min
-1
. El resultado de este estudio se presenta en la Figura
11b y el mismo muestra que no se observa una ganancia importante de
sensibilidad con el cambio de esta variable en el intervalo estudiado. Se
seleccion el valor de 0,8 mL.min
-1
estableciendo un compromiso entre el
consumo de reactivos y tiempos de anlisis.

Figura 11. a) Efecto del flujo de hidrxido de sodio del canal portador (C1), b) Efecto del flujo de
hidrxido de sodio del canal (C2) sobre la seal analtica de una solucin de
1,389 x 10
-2
mol.L
-1
de amonio
4.2.3 Efecto del dimetro y longitud de los serpentines (R1 y R2) sobre la seal
analtica
El tiempo de contacto entre el hidrxido de sodio y la muestra o
soluciones estndar, as como el tiempo para permitir la separacin previa de la
mezcla gaseosa del seno de la solucin antes de llegar al separador de fase,
estn tambin determinados por el dimetro interno y longitud de los
serpentines (R1 y R2). Estos parmetros determinan la cantidad de amoniaco
que llega a la celda. En este sentido y sobre la base de resultados reportados
por algunos autores,
[22]
estos parmetros se fijaron en 40 cm de longitud por
0,5 mm de dimetro interno.
4.2.4 Efecto del flujo de nitrgeno sobre la seal analtica
La funcin principal del nitrgeno en la configuracin propuesta es
transportar el amoniaco generado a la celda para gases y obtener una seal
reproducible con sensibilidad adecuada y en un tiempo relativamente corto.
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
1 1.2 1.4 1.6 1.8 2
Fl ujos del portador [NaOH] mL mi n
-1
A
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1 1.2 1.4 1.6 1.8 2
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.4 0.6 0.8 1 1.2
Flujos de [NaOH] mL mi n
-1
A
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0.4 0.6 0.8 1 1.2
Con el objeto de estudiar el comportamiento de la seal de amoniaco
con la velocidad de entrada del gas nitrgeno, ste parmetro se vari entre
21,5 y 115 mL.min
-1
fijando una presin de salida del cilindro en 27 psi. Los
resultados de este estudio se muestran en la Figura 12, donde se observa que
la seal comienza en un valor mnimo, se va incrementando hasta alcanzar un
valor mximo para un flujo de 55,6 mL de N
2
min
-1
, y posteriormente disminuye
hasta llegar a un valor de cero cuando el flujo es de 115 mL N
2
min
-1
. El
incremento de la seal en la primera etapa con el aumento del flujo podra estar
relacionado con un incremento en la velocidad de transporte del analito y la
dilucin de ste por parte del nitrgeno no es importante en esta regin. Sin
embargo, con un flujo por encima de 55,6 mL N
2
min
-1
el efecto es contrario, la
dilucin del analito por el gas de arrastre es ms importante que la velocidad de
transporte lo que conlleva a tener una menor cantidad de molculas de
amoniaco en el camino ptico del espectrofotmetro. Sobre la base de esta
experiencia se seleccion el flujo de nitrgeno donde la seal alcanza un valor
mximo.

0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
15 35 55 75 95 115
Fl ujo de N
2
mL min
-1
A
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0 20 40 60 80 100 120

Figura 12. Efecto del flujo de nitrgeno, sobre la seal analtica de una solucin de
1,389x10
-2
mol.L
-1
de amonio

4.2.5 Efecto del volumen de inyeccin sobre la seal analtica
Para este estudio se utilizaron una serie de bucles loops
intercambiables en la unidad de inyeccin con volmenes entre 74,5 a 500 L.
El efecto de la respuesta instrumental con la variacin de este parmetro se
presenta en la Figura 13. En ella se observa que la seal se incrementa
continuamente con el aumento de este parmetro. Para volmenes por debajo
de 100 L no es posible observar la generacin de la especie de inters. Se
seleccion un volumen de inyeccin de 100 L para el resto del trabajo ya que
con este valor la sensibilidad que se obtiene es adecuada y adems se
requiere el uso de pequeas cantidades de muestras en la determinacin de
nitrato a fin de prolongar el tiempo de vida media de la columna reductora.
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
0.45
0.5
0.55
0 100 200 300 400 500 600
Vol umen de inyeccin L
A
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
0 100 200 300 400 500 600

Figura 13. Efecto del volumen de inyeccin, sobre la seal analtica de una solucin de
1,389 x 10
-2
mol.L
-1
de amonio
4.3 Caracterizacin analtica del sistema FIA-GFG-EAM-UV-Vis para la
determinacin de amonio
Bajo las condiciones experimentales indicadas en la Tabla 4, la seal
analtica obtenida por el mtodo propuesto mostr una relacin lineal con la
concentracin de amonio hasta 4,167 x 10
-2
mol.L
-1
. En la Tabla 7, se resumen
las caractersticas analticas obtenidas para la curva de calibracin del
amoniaco a partir de soluciones de amonio. El lmite de deteccin y
cuantificacin fue definido como tres y diez veces la desviacin estndar
(3 y 10 ) de la seal del blanco, respectivamente. La precisin del sistema
expresada mediante la desviacin estndar relativa, se obtuvo a partir de cinco
medidas independientes de una solucin estndar de 1,389 x 10
-2
mol.L
-1
del
analito y una solucin de la muestra con un contenido igual del mismo. La
frecuencia de anlisis fue estimada en 10 muestras por hora, considerando un
anlisis por triplicado de cada una.
Tabla 7. Caracterizacin analtica del sistema AIF-GFG-EAM-UV-Vis para el
in amonio
Parmetros analticos Valor
Ecuacin de la recta A= 0,0190 [NH
4
+
]
a
- 0,0061
Coeficiente de correlacin (r
2
) 0,9995
Intervalo lineal (0- 41.67) x 10
-3

Intervalo dinmico (mol.L
-1
) (0,56 - 27,78) x 10
-3

Limite de deteccin (mol.L
-1
)
b
0,008
Limite de cuantificacin
(mol.L
-1
)
c
0,027
Desviacin estndar relativa (%)
d
0,58
a [amonio] indica la concentracin de amonio en mol.L
-1
.
b Definido como la concentracin de amonio cuya seal corresponde a tres veces la desviacin
estndar del blanco.
c Definido como la concentracin de amonio cuya seal corresponde a diez veces la desviacin
estndar del blanco.
d Obtenido de diez rplicas de una solucin de 1,389x10
-2
mol [NH
4
+
] L
-1
.
4.4 Estudios de efectos de matriz para el in amonio
Con el objetivo de establecer la presencia o ausencia de interferencias
por parte de la matriz, se realiz un estudio de adicin estndar en las que se
mantuvo el volumen de muestra y el volumen final constante, mientras se
adicionaron volmenes variables de un estndar de amonio. Para ello se
prepararon una serie de soluciones a las que se les aadieron 10 mL de una
solucin de muestra de fertilizante (se tomaron de manera aleatoria 5 muestras
de fertilizantes y se prepar una solucin de cada una con una concentracin
aproximada de 5 x 10
-2
mol.L
-1
y posteriormente se mezclaron. La mezcla
resultante se utiliz para tomar los 10 mL de muestra) y se adicionaron
volmenes con cantidades conocidas y diferentes de una solucin estndar de
5,556 x 10
-2
mol NH
4
+
L
-1
.
En la Figura 14, se presentan de manera comparativa las curvas de
regresin lineal que se obtuvieron para la adicin estndar y la de calibracin
normal con estndares de amonio en medio acuoso. Al comparar las
pendientes obtenidas mediante los dos mtodos utilizando una prueba t al
95 % de confianza (p = 0,005 y n-2 grados de libertad) los resultados
encontrados indican que no existen diferencias significativas entre las mismas,
y por ende se denota la ausencia de interferencias de tipo qumico y fsico.
Estos resultados establecen que la determinacin de amonio en las diferentes
muestras de fertilizantes puede realizarse por interpolacin de la seal obtenida
de una solucin de muestra en una curva de calibracin construida a partir de
soluciones estndar del analito en medio acuoso.
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
-10 -5 0 5 10 15 20 25 30
mol [NH
4
+
] L
-1
A
(10
-3
)

Figura 14. Estudios de adicin de estndar para el in amonio

Curva de Calibracin A= 0,0190 [amonio]
*
- 0,0061
Curva de Adicin Estndar A = 0,0192 [amonio]
*
+ 0,1017
* mol [NH
4
+
] L
-1

4.5 Estudios de recuperacin para el in amonio
Para establecer la exactitud del procedimiento propuesto se realizaron
diversos estudios de recuperacin. Para esta experiencia se utilizaron dos
muestras de fertilizantes (M2 y M6) tomadas al azar y se prepar una solucin
de cada una de ellas; con una concentracin de aproximadamente de
5,556 x 10
-2
mol.L
-1
. Seguidamente se tomaron 10 mL de estas soluciones y se
colocaron en balones aforados de 100 mL, a los cuales se le adicionaron
volmenes variables de una solucin de concentracin conocida de amonio
para obtener una concentracin del analito aadido entre (5,56 y 27,78) x 10
-3

mol.L
-1
. Los resultados obtenidos con esta experiencia se presentan en la
Tabla 8. En la ltima columna se observa que los porcentajes de recuperacin
oscilan entre 98 - 103 % respectivamente. Estos resultados indican con
claridad que no existen prdidas del analito durante la preparacin y anlisis de
las muestras.
Tabla 8. Estudio de recuperacin para el in amonio
Muestra
[Amonio]
(aadido)
(mol.L
-1
)
10
-3

[Amonio]
(recuperado)
(mol.L
-1
)
10
-3
[Amonio]
(recuperado) -
[Amonio] (Inicial)
(mol.L
-1
)
10
-3

Recuperacin
(%)
2 0 5,39 ----- -----
5,56 11,06 5,67 102
13,89 18,96 13,57 98
27,78 31,11 27,22 100
6 0 5,56 ----- -----
5,56 11,21 5,66 102
13,89 19,62 14,06 101
27,78 34,03 28,47 103
4.6 Determinacin de nitrato
Todos los parmetros que se optimizaron en la determinacin de amonio
fueron utilizados para poner a punto la metodologa en la determinacin de
nitrato. Para este fin, en la configuracin propuesta se activa la vlvula
selectora para permitir el paso de la solucin portadora y muestra por la ruta b
indicada en la Figura 3.
4.6.1 Efecto de la longitud de la columna reductora sobre la seal analtica
El parmetro a optimizar en la configuracin propuesta es la longitud de
la columna reductora y por ende la cantidad de agente reductor. Para esta
experiencia se utiliz una solucin de 4,03 x 10
-3
mol.L
-1
de nitrato y se vari la
longitud de una tubera de tefln entre 7,5 a 17 cm respectivamente con un
dimetro interno de 2 mm.
En la Figura 15, se muestran los resultados obtenidos de esta
experiencia. En la misma se observa como la seal analtica se incrementa con
la longitud de la tubera (que implica mayor cantidad de agente reductor). Para
una longitud de 17 cm, se observ que la seal analtica del nitrato es la misma
que se obtiene cuando se introduce al sistema una solucin de amonio con
igual concentracin. Esto significa que la reduccin del nitrato a la forma de
amonio es 100 % cuantitativa. Sobre la base de esta experiencia se seleccion
una longitud de 17 cm para la determinacin de nitrato.
Es importante resaltar que el tiempo de vida til de la columna reductora,
depende de la cantidad de materia oxidante que pasa a travs de esta. En este
trabajo, la columna reductora comienza a evidenciar una prdida de eficiencia
tras la inyeccin de aproximadamente 200 muestras. El deterioro se manifiesta
por una disminucin en la seal analtica, as como por una prdida en la
reproducibilidad de un 10 % de la medida.
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
7 9 11 13 15 17 19
Longitud de la columna reductora [Zn/Cu] cm
A
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
6 8 10 12 14 16 18 20

Figura 15. Efecto de la longitud de la columna reductora, sobre la seal analtica de una
-3
mol NO
3
-
L
-1

4.7 Caracterizacin analtica para la determinacin de nitrato
Bajo las condiciones experimentales indicadas en la Tabla 4, la seal
analtica obtenida por el mtodo propuesto, mostr una relacin lineal con la
concentracin de nitrato hasta 1,613 x 10
-2
mol.L
-1
. En la Tabla 9, se resumen
las caractersticas analticas obtenidas para la curva de calibracin del
amoniaco a partir de soluciones de nitrato, luego de pasarlas por la columna
reductora de Zn/Cu. El lmite de deteccin y cuantificacin fue definido como
tres y diez veces la desviacin estndar (3 y 10 ) de la seal del blanco,
respectivamente. La precisin del sistema, expresada mediante la desviacin
estndar relativa, se obtuvo a partir de cinco medidas independientes de una
solucin estndar de 4,03 x 10
-3
mol NO
3
-
L
-1
y una solucin de la muestra. La
frecuencia de anlisis fue estimada en 10 muestras por hora, considerando un
anlisis por triplicado de cada muestra.
Es importante destacar que el intervalo lineal del nitrato es
aproximadamente la mitad del correspondiente al amonio. La razn de esto se
debe a que por encima de 1,613 x 10
-2
mol.L
-1
de nitrato, la cantidad de Zn/Cu
que se encuentra en la columna de 17 cm, se hace insuficiente para hacer la
conversin del in nitrato al amonio en un 100 %. Por lo tanto, para lograr una
conversin cuantitativa por encima de esta concentracin habra que aumentar
la longitud de la columna con lo cual se crea un problema de sobrepresin en el
sistema, dificultando las determinaciones del analito en estudio.
Tabla 9. Caracterizacin analtica del sistema AIF-GFG-EAM-UV-Vis para el
in nitrato
Parmetros analticos Valor
Ecuacin de la recta A= 0,0191 [NO
3
-
]
a
- 0,0021
Coeficiente de correlacin (r
2
) 0,9998
Intervalo lineal (mol.L
-1
) (0 - 16,13) x 10
-3
Intervalo dinmico (mol.L
-1
) (0,32 - 16,13) x 10
-3

Limite de deteccin (mol.L
-1
)
b
0,012
Limite de cuantificacin
(mol.L
-1
)
c
0,041
Desviacin estndar relativa (%)
d
0,76
a [nitrato] indica la concentracin de nitrato en mol.L
-1
.
b Definido como la concentracin de nitrato cuya seal corresponde a tres veces la desviacin
estndar del blanco.
c Definido como la concentracin de nitrato cuya seal corresponde a diez veces la desviacin
estndar del blanco.
d Obtenido de diez rplicas de una solucin de 4,03 x 10
-3
mol [NO
3
-
] L
-1
.
4.8 Estudios de efectos de matriz en la determinacin de nitrato
Al igual que en el caso del amonio se realizaron estudios de interferencia
para conocer la influencia de los componentes de la matriz en la formacin del
amoniaco a partir del nitrato. Los estudios de interferencia que se han
reportado en la literatura para la determinacin de nitrato utilizando columnas
de Zn/Cu, indican que algunas especies inicas como S
2-
, Ca
2+
, Cd
2+
, entre
otros
[22]
disminuyen la eficiencia de sta, obligando a una regeneracin de la
misma en perodos de tiempo ms cortos.
En este sentido, se realiz una curva de adicin estndar en la
modalidad clsica de volumen de muestra y el volumen final constante,
mientras se adicionaron volmenes variables de un estndar de nitrato. Para
ello se prepararon una serie de soluciones a las que se les aadieron 5 mL de
una solucin de muestra de fertilizante, tal y como se hizo con el in amonio
(se tomaron de manera aleatoria 5 muestras de fertilizantes y se prepar una
-2
mol.L
-1
de cada una de ellas y posteriormente se
mezclaron. La mezcla resultante se utiliz para tomar los 5 mL de muestra) y
se adicionaron volmenes con cantidades conocidas y diferentes de una
solucin estndar de 1,613 x 10
-2
mol NO
3
-
L
-1
.
En la Figura 16, se presentan de manera comparativa las curvas de
regresin lineal que se obtuvieron para la adicin estndar y la de calibracin
normal con estndares de nitrato en medio acuoso. Al comparar las pendientes
obtenidas mediante los dos mtodos utilizando una prueba t al 95 % de
confianza (p = 0,005 y n-2 grados de libertad) los resultados encontrados
indican que no existen diferencias significativas entre las mismas, y por ende
se denota la ausencia de interferencias de tipo qumico y fsico en la
determinacin de nitrato. Por lo tanto, la cuantificacin de esta especie en las
diferentes muestras de fertilizantes puede realizarse por interpolacin de la
seal obtenida de una solucin de muestra en una curva de calibracin
construida a partir de soluciones estndar del analito en medio acuoso.
-0.05
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
mol [NO
3
-
] L
-1
A
(10
-3
)

Figura 16. Estudios de adicin de estndar para el in nitrato
Curva de Calibracin A= 0,0191 [nitrato]
*
- 0,0021
Curva de Adicin Estndar

A= 0,019 [nitrato]
*
+ 0,0109
* mol [NO
3
-
] L
-1

4.9 Estudios de recuperacin para el in nitrato
Para establecer inicialmente la exactitud del procedimiento propuesto en
la determinacin del in nitrato, se realizaron diversos estudios de
recuperacin. Para esta experiencia, se utilizaron dos muestras de fertilizantes
tomadas al azar (M5 y M6), y se prepar una solucin de cada una de ellas;
con una concentracin de aproximadamente 1,613 x 10
-2
mol.L
-1
.
Seguidamente se tomaron 10 mL de la solucin correspondiente a (M5) y 5 mL
de la solucin de (M6), dichas soluciones se colocaron en aforados de 100 mL,
a los cuales se le adicionaron volmenes variables de una solucin de
concentracin conocida de nitrato para obtener una concentracin del analito
aadido entre (0,81 y 8,06) x 10
-3
mol.L
-1
. Los resultados obtenidos se resumen
en la Tabla 10 y en ellos se puede observar que en todos los casos el
porcentaje de recuperacin fue cuantitativo 100 - 101 %. Estos resultados
indican con claridad que no existen prdidas de los analitos durante la
preparacin de las muestras y anlisis de las mismas.
Tabla 10. Estudio de recuperacin para el in nitrato
Muestra
[Nitrato]
(aadido)
(mol.L
-1
)
10
-3

[Nitrato]
(recuperado)
(mol.L
-1
)
10
-3
[Nitrato]
(recuperado) -
[Nitrato](Inicial)
(mol.L
-1
)
10
-3

Recuperacin
(%)
5 0 0,81 ----- -----
1,61 2,44 1,63 100
4,03 4,88 4,07 101
8,06 8,97 8,16 101

6 0 1,62 ----- -----
0,81 2,44 0,82 101
1,61 3,25 1,63 101
4,03 5,65 4,03 100

5. Anlisis de muestras reales
Se analizaron por el mtodo propuesto seis muestras comerciales de
fertilizantes. Los resultados obtenidos para la determinacin simultnea de
amonio y nitrato se resumen en la Tabla 11. El contenido de amonio y nitrato
oscil entre 9,88 0,06 y 22,87 0,07 % (p/p), y entre 22,02 0,04 y
72,28 0,04 % (p/p) respectivamente. En la Tabla 11 se puede observar que
los valores encontrados para la concentracin de amonio y nitrato estn en el
orden de magnitud del valor reportado en la etiqueta de los productos
comerciales. En este punto es importante destacar que en la etiqueta de los
productos se reporta es el porcentaje de nitrgeno total contenido en los
mismos tal y como se muestra en la Tabla 3, por lo que es necesario realizar
clculos estequiomtricos para obtener el porcentaje de nitrato y amonio que
contienen las muestras de fertilizante en estudio y los mismos se presentan en
la Tabla 11. Destacndose que en dichas etiquetas no se da ninguna
informacin relativa al mtodo utilizado para el control de calidad de los mismos
ni la condicin de la muestra en el momento de anlisis. Por otra parte, la
exactitud del mtodo propuesto fue evaluada inicialmente de forma satisfactoria
con base a los estudios de recuperacin. La concordancia entre los resultados
obtenidos por va de la curva de calibrado y la calibracin por adicin de
estndar representan una segunda evidencia de la validez del procedimiento
utilizado.
Tabla 11. Contenido de amonio y nitrato en fertilizantes.
MUESTRA
[NH
4
+
]
Encontrado
por este
mtodo
(a)
% (p/p)
[NH
4
+
]
Reportado
en la
etiqueta
(b)
% (p/p)
[NO
3
-
]
Encontrado
por este
mtodo
(a)
% (p/p)
[NO
3
-
]
Reportado
en la
etiqueta
(b)
% (p/p)
M1 9,88 0,06 10,29 22,02 0,04 22,14
M2 20,74 0,06 21,60 71,89 0,05 73,96
M3 22,87 0,07 23,79 33,74 0,06 33,21
M4 ----- ----- 55,31 0,05 57,57
M5 ----- ----- 56,79 0,05 57,57
M6 21,58 0,07 21,60 72,28 0,04 73,96
(a)
Media desviacin estndar de tres determinaciones independientes obtenidas mediante el
procedimiento propuesto.
(b)
Valor declarado en la etiqueta del producto.


CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
En el presente trabajo se desarroll una metodologa para la
determinacin de nitrato y amonio en fertilizantes nitrogenados de origen
inorgnico. La metodologa propuesta utiliza un sistema acoplado de anlisis
por inyeccin en flujo con determinacin espectrofotomtrica y tiene por base la
reaccin entre el cloruro de amonio con el hidrxido de sodio para generar el
amoniaco gaseoso. El mtodo consiste en la inyeccin en dos etapas de
volmenes de muestra en un sistema de flujo. En la primera se determina
amonio y en la segunda nitrato. Para este ltimo el mtodo incorpora en el
sistema una columna rellena con Zn/Cu.
Se encontr que con una columna de 17 cm de longitud y 2 mm de
dimetro interno rellena de Zn/Cu es posible la reduccin en un cien por ciento
de los iones nitrato a amonio de una forma altamente reproducible y con una
eficiencia adecuada a travs de un sistema en lnea.
Los estudios realizados denotan marcadores analticos de calidad
objetivos en trminos de sensibilidad, precisin y exactitud, que compiten de
forma abierta con otras propuestas descritas en la literatura.

En relacin a la robustez del mtodo, es evidente que los parmetros
crticos del sistema son los caudales de la solucin portadora y del hidrxido de
sodio 13 mol.L
-1
. Por tal motivo, es importante mantener un control estricto
sobre los flujos de las soluciones y el estado fsico de las tuberas de tygon.
En cuanto a la columna reductora, se evalu el tiempo de vida media de
esta mediante un control en el nmero de inyecciones de muestras y
estndares de nitrato y luego de 200 inyecciones se observ cambios
significativos de la respuesta instrumental. Por cuanto se estableci como
protocolo de trabajo la regeneracin de la misma luego de estas inyecciones.
Las mayores ventajas del mtodo propuesto se relacionan a la
frecuencia de anlisis que es favorable frente a otros mtodos
espectrofotomtricos y a la selectividad que implica la separacin del analito de
la matriz mediante la generacin de una fase gaseosa, la cual elimina en una
proporcin importante la presencia de potenciales interferentes.
En cuanto a los resultados obtenidos en el anlisis de las muestras
reales de fertilizantes, se puede decir que los valores encontrados para la
concentracin de amonio y nitrato estn en el orden de magnitud del valor
reportado en la etiqueta de los productos comerciales. Al comparar los
resultados experimentales con los tericos, se observa que los valores de
concentracin obtenidos experimentalmente estn por debajo de los
reportados, estas pequeas diferencias se pueden atribuir al hecho de que no
se conoce el mtodo utilizado para el control de calidad de los fertilizantes en
estudio, ni la condicin de la muestra en el momento de anlisis.
Con relacin a los objetivos planteados en el trabajo, estos fueron
cumplidos en un cien por ciento. El mtodo desarrollado permiti declarar
aceptada la hiptesis de estudio, ya que se aplic a la determinacin de nitrato
y amonio en fertilizantes inorgnicos nitrogenados que se comercializan en la
regin de los Andes Venezolanos. Dicho mtodo analtico representa una
alternativa viable y valida, que puede ser utilizado para el anlisis de control
rutinario en este tipo de productos.
Una vez descritas las conclusiones del trabajo se recomienda la
realizacin de estudios posteriores dentro de esta lnea de investigacin en el
laboratorio de Espectroscopa Molecular, sugirindose la adaptacin del
mtodo al anlisis de estas especies en otras matrices. Sin embargo, el
protocolo de trabajo a seguir estar fundamentalmente basado en el origen de
la muestra y los niveles de concentracin de los analitos en las mismas.


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