Extraccin de lutena de la flor de cempazuchitl

Objetivos
Extraer la lutena de la flor de Xempasuchitl.
Comparar el rendimiento obtenido de la extraccin de lutena de esta flor con respecto a lo
obtenido de otras flores.
Determinar la capacidad antioxidante
Objetivo opcional: Caracterizar el compuesto
Informacin
Los carotenoides son tetraterpenos naturales derivados de la unin de 8 unidades de isopreno,
que origina un esqueleto de 40 tomos de carbono. En general los carotenoides se clasifican en
dos grandes grupos: carotenoides compuestos slo de carbono e hidrgeno que se denominan
carotenos y los que contienen oxigeno que se denominan xantofilas (Rodriguez-Amaya, 2001). Los
carotenoides pueden presentar una estructura acclica, o cclica de cinco o seis carbonos en uno o
ambos extremos de la molcula. Dado el gran nmero de dobles enlaces de la cadena central, los
carotenoides pueden existir en conformaciones cis/trans, aunque la ms estable y por tanto
presente en la naturaleza es la trans.

La lutena pertenece al grupo de las xantofilas de formula general C40H56O2 y nombre
sistemtico ,-carotene-3,3-diol. La estructura se muestra en la Figura 1. Este pigmento
carotenoide es uno de los principales componentes de vegetales verdes, frutas de color naranja y
yema de huevo, donde se puede encontrar libre esterificada con cidos grasos. La fuente ms
importante (en una cantidad 20 veces mayor) son los ptalos de flores de tagete (Tagete erecta),
en donde la lutena esta qumicamente ligada a varios tipos de cidos grasos como el 4 cido
lurico, miristico y palmtico. Al saponificar el extracto de tagete, se obtiene lutena libre.
La principal fuente natural de la lutena, son los ptalos de las flores de Tagete (Tagete erecta) en
donde se encuentra formando steres con diferentes cidos grasos. La lutena, es un carotenoide
di-hidroxilado perteneciente a la clase de las xantofilas, presenta una estructura qumica con un
amplio sistema de dobles enlaces conjugados, lo que le otorga su actividad antioxidante.
La estructura de la lutena es la siguiente:

La lutena es un antioxidante biolgico que inactiva a los radicales libres producidos en la
autoxidacin de lpidos y/o atrapa oxgeno singlete. La propiedad antioxidante de los carotenoides
se relaciona con su estructura, debido a la presencia de un elevado nmero de enlaces conjugados
alternados. Los carotenoides que tienen nueve o ms enlaces dobles otorgan la mxima
proteccin, ya que los dobles enlaces permiten la absorcin de energa de especies reactivas,
canalizndola a travs de las largas cadenas de dobles enlaces que entran en resonancia, luego la
energa es liberada en forma de calor, regenerando la molcula de carotenoide a su estado inicial.

La lutena juega un importante rol en la prevencin de la degeneracin macular causada por la
edad (MDA). En el centro de la retina (regin de elevada agudeza visual) es posible visualizar una
pequea mancha amarilla llamada mcula, pigmento de la retina responsable de la visin ntida de
las imgenes. El color amarillo se debe a la presencia de carotenoides (lutena) presentes en el ojo,
zona de mayor exposicin a la luz, disminuyendo la oxidacin de protenas y lpidos.
Por otro lado, la cadena polinica es tambin la causa de la inestabilidad de la lutena incluyendo
su susceptibilidad a la oxidacin e isomerizacin. El calor, la luz y los cidos promueven la
isomerizacin de los carotenoides trans (configuracin habitual en la naturaleza) a la forma cis,
disminuyendo su valor biolgico. Dentro de los mecanismos que se pueden utilizar para su
estabilizacin, se encuentra la microencapsulacin, la cual permite la incorporacin de sustancias
activas dentro de una matriz o sistema pared con el objeto de proteger estos compuestos,
impidiendo que sufran reacciones de oxidacin debido a las condiciones ambientales,
aumentando su vida til.
Los mtodos tradicionales para la extraccin de componentes bioactivos desde plantas, incluyen:
la destilacin por vapor y la extraccin con solventes orgnicos (maceracin o tcnicas Soxhlet).
Especficamente los pigmentos carotenoides son compuestos liposolubles, que normalmente se
extraen con solventes orgnicos tales como: acetona, ter de petrleo, benceno, hexano, ter
dietlico, cloroformo, etanol y metanol. Sin embargo, los solventes presentan algunas desventajas
como: la degradacin y prdida de los componentes bioactivos, los grandes volmenes de
solventes que se utilizan, el tiempo de los procesos y el alto costo de los insumos y mano de obra,
adems de obtener extractos con residuos de solvente. El inters en alternativas a la extraccin
con solventes convencionales, tales como el dixido de carbono supercrtico (SC-CO2) es cada vez
mayor, ya que el CO2 no es inflamable y no ocasiona dao al medio ambiente.

Desarrollo experimental
Mtodo
Destilacin por arrastre de vapor y Extraccin
Material
1 Agitador de vidrio 1 Probeta de 25 mL
1 Colector 1 Refrigerante para agua con mangueras
1 Embudo de separacin Quickfit con tapn 2 Vasos de precipitados de 250 mL
1 Embudo de vidrio 2 Tubos capilares
1 Equipo adecuado para arrastre con vapor (armado: tubos, tapones, etc.) 1 Anillo metlico
1 Frasco para cromatografa 1 Esptula
1 Frasco vial 1 Mechero con manguera
2 Matraces Erlenmeyer de 150 mL 4 Pinzas de tres dedos con nuez
2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL 1 Recipiente de peltre
2 Portaobjetos 1 Tela de alambre con asbesto
Reactivos
Ptalos de flor de cempazuchitl
Diclorometano
Sosa
Mtodo opcional
Procedimiento destilacin por arrastre de vapor
Se secan los ptalos de las flores y se colocan en el matraz Erlenmeyer. Se monta el equipo como
se muestra en la Figura 1. En el matraz 1 se colocan aproximadamente 175 mL de agua
destilada (generador de vapor) y se agregan cuerpos de ebullicin. En el matraz 2 se coloca
en trozos pequeos el material del que se va a extraer el aceite esencial (cuidando que la
conexin de vidrio no se obstruya con los trozos del material que se trabajar; pues de ser
as, no habr paso de la corriente de vapor). Se calienta con el mechero el matraz 1 hasta
ebullicin, con el fin de generar el vapor que pasar al matraz 2, extrayndose de esta
manera el aceite esencial del material, el cual es inmediatamente arrastrado por el vapor de
agua en un proceso de codestilacin (la temperatura de destilacin debe ajustarse de
manera que caiga una gota por segundo). Se suspende el calentamiento cuando el
volumen del destilado sea de 120 150 mL aproximadamente.

De este destilado, se debe extraer totalmente el aceite esencial, colocando en el embudo de
separacin el destilado y separando la mayor parte de la fraccin acuosa. Al aceite
sobrenadante (unas cuantas gotas), se agregan 5 mL de diclorometano (si no es suficiente se
pueden adicionar 5 mL ms) para facilitar su separacin. La fase acuosa se desecha y el
extracto orgnico se colecta en un matraz Erlenmeyer o un vaso de precipitados, se
adiciona la cantidad necesaria de sulfato de sodio anhidro para eliminar el agua remanente.
Se filtra o se decanta el extracto seco y colquelo en un vial con proteccin de luz.





Estudios realizados han demostrado que la luz, el oxgeno y la alta temperatura promueven la
degradacin e isomerizacin de la lutena (Calvo, 2005). Uno de los mecanismos utilizados para
estabilizar la lutena es la microencapsulacin, la cual permite la incorporacin de sustancias
dentro de una matriz o sistema pared con el objeto de proteger estos compuestos, impidiendo
que sufran reacciones debido a la luz y/o al oxgeno (Pedroza, 2002).