METODE CROMATOGRAFICE DE ANALIZA

CROMATOGRAFIA -repreznta o metoda de separare bazata pe repartta

dferentata a componentor unu amestec de separate ntre doua faze n
contact s care se stueaza ntr-un raport de mscare reatv una fata de
ceaata (denta prn termen de faza statonara s faza mobe).Separarea
cromatograca este rezutatu unor procese repetate de sorbte-desorbte a
componentor probe n faza statonara s faza moba|26| Repartta
dferentata a anator ntre cee doua faze aate n contact este controata
prn constanta de dstrbute K, descrsa prn raportu:K = C
S
/C
M
, unde Cs
repreznta concentrata anatuu n faza statonara,ar C
M
repreznta
concetrata anatuu n faza moba.
CLASIFICAREA METODELOR CROMATOGRAFICE DE ANALIZA -
Metodee cromatograce se casca dupa o sere de crter: caracterstce
zco-chmce ae proceseor sau sstemeor, natura fazeor mobe s
statonara, aspectee de ordn tehnc(dspunerea faze statonare, modu de
depasare a probe, parametr de operare), tabeu 1
1.Ce ma utzat crteru de cascare este natura sau starea de agregare a
ceor doua faze.
FAZA STATONARA poate sa e soda sau chda, n ce de a doea caz
chdu nd depus pe un suport sod.fazee statonare chde trebue sa
ndepneasca unee condt specae cum ar voattatea foarte scazuta,
mscbtate redusa cu sovent uzua,vscoztate rdcate pentru a ramane
pe un support n tmp ce faza moba curge prn cooana.
FAZA MIBILA poate un chd(L), un gaz(G) sau un ud supercrtc(FS),
nemscbe cu faza statonara. Daca faza mobe este un gaz vorbm de
cromatograe de gaze(CG), daca este un chd de cromatograe de
chde(CL), ar daca este un ud supercrtc de cromatograe de ude n
stare supercrtca (CFS), fudu supercrtc este o substanta care se aa
deasura presun s temperatur sae crtce.
Tabeu 1. Cascarea metodeor cromatograce n functe de natura fazeor
ntre anat se dstrbue dferentat
FAZA
MOBILA
FAZA
STATIONARA
DENUMIRE SIMB
OL
gaz sod Cromatograa de repartte gaz-
sod
CGS
gaz chd Cromatograa de repartte gaz-
chd
CGL
chd chd Cromatograa de repartte chd-
chd
CLL
chd sod Cromatograa de repartte chd-
sod
CLS
Fud
supercrtc
Sod sau chd Cromatograa de ude n stare
supercrtca
CFS
2.In functe de PROCESUL DE SEPARARE metodee cromatograce se mpart
n doua categor : -metode bazate pe antatea dferat a componentor(n
care sunt ncuse metodee de repartte, absorbte, schmb onc, antate);
-metode bazate pe marmea dferta a componentor(ex: excuzunea sterca)
3.Consderand MODUL DE DEPLASARE a probe se pot dstnge urmatoaree
tehnc: cromatograa prn eute, prn dzocare, frontaa s cu gour sau
vacante 4.In ceea ce prveste PARAMETRII DE OPERARE-temperatura
cooane s debtu purtatoruu-acesta pot constant sau varab, rezutand
cromatograa zoterma, cu temperatura programata(gradent de
tempertatura) sau cu debt programat(gradent de presune).
SCHEMA BLOC A UNUI CROMATOGRAF - Procesu cromatograc de
separare se reazeaza prn aternarea succesva a starorde echbru s
neechbru generate de repartta anatuu ntre faze. Sstemu
cromatograc evoueaza n sensu reazar star de echbru a
repartte(este atnsa constanta de dstrbute K, pentru ecare dntre anat).
Starea de neechbru, medat consecutva star e echbru este generata
prn mscarea faze mobe.Eementee constructve ae unu cromatrograf
sunt prezentate schematc n g. 1.
proba 3 5
1121 4 6
Fg.1-schema unu cromatograf
1-sursa de euent; 2-n|ector; 3-cooana;4-detector; 5-termostat,6-
nregstrator
1.Euentu(faza moba) are rou de a transporta proba prn cooana
cromatograca.
2.In|ectoru asgura reproductbtatea probe ntroduse n cooana. Ecenta
separar s exacttatea rezutateor depend de ntroducerea probe s dec
constructa n|ectoruu. In|ectoaree sunt dferte pentru cromatograa de
gaze s cea de chde .3.cooana cromatograca cotne a un moment dat
cee doua faze cromatograce s este ocu unde se reazeaza separarea
componenteor probe. Dn cauza nteractun moecueor cu faza statonara,
1
2
componentee dn probaraman n urma euentuu n functe de dferentee
care exsta ntre constantee echbruu de repartte ntre cee doua faze. Ca
urmare se produce o dferentere a vtezeor or de mgrare s n na
separarea.4.Scopu Detectoruu este de a pune n evdenta component ce
parasesc cooana cromatograca antrenat de faza moba. Detectoru este
pesa cea ma mportanta a unu cromatograf dupa cooana cromatograca
.Exsta 2 categor de detector : unversa s specc . Ce unversa sunt
sensb a un nr. Mare de component , ar ce specc sunt sensb numa a
anumt component .Un detector dea trebue sa ndepneasca o sere de
condt : raspuns rapd n prezenta soutuu ; stabtate n tmpu functonar
;un domenu arg de raspuns near ; sensbtate nata ; manpuare s
etaonare usoara . Detector pot dferenta s ntegra. Detector
dferenta masoara conc. nstantanee sau debtu de masa a soutuu ce
paraseste cooana cromatograca. Detector ntegra acumueaza raspuns
datorat componentor probe , ar semnau nregstrat ne ndca canttatea
totaa care a parast cooana cromatograca a un anumt moment.
Raspunsu detectoruu este functe de unee schmbar n propretate zce
ae gazuu ce paraseste cooana cromatograca n prezenta componentor
probe. Aceste schmbar pot : conductbtate termca ;onzare n acara ;
conductbtate eectrca ; onzare sub nuenta radate . 5.Termostatu-
asgura temp unforma a ntreguu system prn care crcua proba.
6.Inregstratoru-prea semnaee ampcate de crcutu detectoruu ,
nscrnd rezutatee anaze sub forma cromatograca . Cromatografee
moderne sunt conectate a un cacuator , egat a randu sau a o mprmata
care prea rou de nregstrator.
Cromatograma- repreznta rezutatu une separar cromatograme s este
generata de procesu de detectve a anator . n ordnea eute
acestora(g2.7.)Procesu de detect e consta n masurarea contnua , n
tmp , a une prop care caracterzeaza , dupa caz , totatatea sau numa
spec de anat separate n procesu cromatograc .Cromatograma
repreznta dec o dependecnt functona reprezentaba ntr-un system
bdmensona de coordonate .Pe abscsa ste reprezentat tmpu scurs dn
momentu n|ecte probe n sst romatograc s pana n momentu eute
utme spec de anat ( cea ma puternca retnuta n faza statonara ). Pe
ordonata se va reprezenta propretatea masurata.
3
1 2 4 5 Fg.2 Cromatograma
6
0
Momentu eute une spec de anat dn sst cromatograc corespunde une
varat a raspunsuu generat de sst de detecte , proportona cu masa sau
conc compusuu n cauza .Un astfe de semna produs de catre detector , n
momentu evoute unu anumt compus , este cunoscut sub numee de pic
cro!"o#r!$c . Pcu cromatograc poate caract. prn 2 tpur de
parametr :-catatv (tmpu de retente absout, tmpu de retente reatv ,
voumu de retente absout , voumu de retente reatv s factoru de
capactate ) s canttatv ( ara s natmea pcuu cromatograc ).
Tip%& '( r("()"i( !*+o&%" ,"
R
-.repre tmpu scurs de a n|ectarea probe
n sst cromatograc s pana n momentu detecte unu raspuns maxm , a
euta unea dn spece separate .
Tip%& '( r("()"i( r(&!"i/ ,"
R
-. corespunde tmpuu pe care o spece de
anat petrece n faza statonara .Dferenta dntre tmpu de retente
absoute s tmpu de retente reatv corespunde peroade de tmp pe care
soutu a petrecut-o n faza moba .Tmpu necesar frontuu de faza mobe
pt a parcurge cooana cromatograca se deneste ca nd tmpu mort (t
M
)
.Ca dente aternatva , tmpu mort poate consderat tmpu de retente
absoute a unu compus care nu se dstrbue deoc n faza statonara (ct sa
de dstrbute K nd nua ). Se stabeste n acestmod reata : "
R
0 "
R
1 "
M
Marmor t
R
respectve t
R
se pot asoca vaore V
R
s respectve V
R

,cunoscute sub numee de voum de retente absoute , respectv voum de
retente reatve .Retenta se masoara de obce n untat de tmp , dar
untate de voum sunt ma exacte .Reata dntre untatea de tmp s cea de
voum se face prn ntermedu debtuu faze mobe (D). V
R
= t
R
*D .
F!c"or%& '( c!p!ci"!"( ,2
I
)- poate dent ca marme care ndca de cate
or tmpu de repartte a spece de anat n faza statonara este ma mare
decat tmpu cat acesta se gaseste n faza mobe .2
I
0"
R
3"
M
0"
R
."
M
3"
M
M!rii&( c( c!r!c"(ri4(!4! proc(+%& '( +(p!r!r( 5 E$ci()"!.separar
cromatograce se refera a capactatea sst cromatograc de a eua anat
supus separar sub forms unor pcur exrem de nguste .Acest termen este
coreat cu nr. de echbre de repartte ntre faze , care se reazeaza pe toata
durata procesuu de separare . Pt a caract acest proces se ntroduce
notunea de taer teoretc ca nd portunea dn cooana cromatograca n
care se reazeaza un proces eementar de repartte a echbru .Lungmea
de cooana pt care o astfe de stare de echbru este atnsa poarta
denumrea de natme a taeruu teoretc (H). Intre ungmea totaa a
cooane cromatograce (L)s natmea taeruu (H) se stabeste reata :
L=H*N , unde N reprez nr taereor teoretce ae une cooane cromatograce
( este practc echvaent cu nr de star consecutve de echbru pe parcursu
separar cromatograce n acea cooana ). Nr de taere teoretce (N) poate
cacuate cu a| marmor ce caract pcu cromatograc .
N0"
R
2
3
2
016"
R
2
36
2
*
05.545"
R
2
36
2
7.5
04 "
2
R
38
2
i


S(&(c"i/i"!"(!.separar cromatograce reprez capactatea sst
cromatograc de a separa anat cu propretat extreme de asemanatoare s
este descrsa prn 9!c"or%& '( +(p!r!r( , notat cu . Factoru de separare
se refera a o pereche de anat euat consecutv dn cooana,reprezentat n
urma detecte prn doua pcur adacente. Daca =1, adca ce do anat au
aceas coecent de dstrbute, e nu pot separat s condte anatce
trebue modcate.
0:
2
3:
10
2
2
I
32
1
I
unde :K
1
s K
2
sunt coecent de repartte(dstrbute)
ntre cee doua faze, corespunzator ceor do anat separat consecutve,1 s
2; ar K
`
1
s

k
`
2
sunt factor de capactate corespunzator.
REZOLUTIA une separar cromatograce este o masura ma expcta a
graduu de separare a do compus. Rezouta cromatograca(R
s
) se
deneste ca marmea ce caract goba catatea separar, nd masuraba
prn nsas parametr care denesc pcu cromatograc
R
S
0"
R2
."
R1
32;,
1
1
2
-Unde: t
R1
s t
R2
sunt tmp de retente a ceor do
compus;
1
s
2
repr dstrbute or exprmate n untat de tmp. Daca R
s
=1,
aprox 94% dn moecuee ceor do compus vecn sunt separate. Se
consdera ca separarea este totaa atunc cand R
s
=1,5.
ANALIZA CALITATI<A SI CANTITATI<A IN CROMATOGRAFIE
ANALIZA CALITATI<A(IDENTIFICAREA SUBSTANTELOR SEPARATE) se
reazeaza a esrea dn cooana cu a|utoru detectoruu. Cromatograma
reprez succesunea de pcur cromatograce produsa de detector. Detectoru
transforma o prop a compusor da anazat n semna eectrc, proportona
cu canttatea de substanta. Identcarea componentor corespunzator
pcuror cromatograce se poate face n doua modur:-prn compararea
tmpor de retente a componentor cu a unor etaoane cunoscute n
aceeas condt expermentae; aceasta metoda nu asgura certtudnea
denttat une substante;-prn retnerea componentor euat pentru o
anaza uteroara prna ate tehnc anatce, cum ar spectometra n IR sau
spectometra de masa, contrbund astfe a cresterea procenteor de
certtudne.
Daca pentru caract sunt utzate datee de retente este necesar sa se
controeze cu gr|a parametr de curgere s de temperatura, deoarece
comparata dntre proba necunoscuta s standard se face tocma pe baza
acestor date. Intrucat foarte mut compus dfert pot avea aceas tmp(sau
voum) de retente este necesar sa se utzeze ma mute cooane cu
seectvtat dferte.
Pentru ANALIZA CANTITATI<A este foarte mportant standardzarea
condtor de ucru s cunoasterea factoruu de raspuns a detectoruu
pentru ecare component determnat. Anaza canttatva consta n tre
etape:-obtnerea comtograme;
-masurarea maxmeor(pcuror) sau a suprafeteor -nterpretare
rezutateor
Suprafata ntegrate a unu pc este drect prop cu cantatea de sout euat. Se
poate utze s natmea pcuu, dar rezutatee sunt ma putn precse.
Masurarea suprafete se face prn urmatoaree metode:metoda trunghuu,
metoda panmetrar(care consta n determnarea are cu a|utoru unu
panmetru), metoda decupar s cantarr, ntegrarea eectronca. Cacuu
rezutateor se poate face n ma mute modur: normazarea nterna,
standardzarea nterna, metoda adaosuu standard.In cadru ("o'(i '(
)or!&i4!r( comnpozta procentuaa este determnate prn masurarea are
ecaru pc s mpartrea aror ndvduae a toata ara totaa. Acest ucru
presupune ca au fost euate toate pcure probe s ca raspunsu detectoruu
este aceas pentru ecare compus.
STANDARDIZAREA INTERNA consta n adugarea a proba de anazat,
nante de a anazata, a une canttat cunoscute dntr-o substanta
standard. Se determna apo raportu dntre suprafetee pcuror substante
standard s cee ae substante de anazat, pe baza carua se poate
determna cantatea de substanta dn proba. C
i
0Ai;$

3A
S
;9
+
;C
S
Unde: C

este concentrata compusuu de anazat ; C

s
este concentrata
standarduu ; A

este ara corespunzatoare pcuu compusuu de anazat;

A
s
este ara corespunzatoare pcuu standard; f

, f
s
sunt factor de raspuns
a detectoruu pentru cee doua substante.
In cazu ("o'(i !'!o+%&%i +"!)'!r' se obtn cromatograme pentru proba
ca atare s dupa ce s-a adaugat n proba o cantate cunoscuta dn substanta
de anazat.
Dferenta dntre suprafetee ceor doua pcur cromatograce este sucenta
pentru a determna cantatea ntaa de substanta dn proba . C
i
0C
S
;A
i
3A.A
i
-unde A este ara obtnuta dupa adaugarea canttat standard.