UNIVERSIDAD

TECNOLOGICA
NACIONAL
FACULTAD REGIONAL ROSARIO
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA QUIMICA
CATED RA DE B I OTEC NOLO GIA
Tr a b a jo p r c ti c o n 4
Tincin y ob!r"acin #! $icroor%ani$o&'
())*
+!,! #! Ct!#ra- Ing. Eduardo Santambrosio
+!,! #! Trabajo Prctico- Ing. Marta Ortega
A./i0iar #! 1
a
- Ing. Pablo A. Garibaldi
1. OBJ ET IVOS
E0 pr!!nt! trabajo practico ti!n! por obj!ti"o brin#ar a0 a0.$no 2!rra$i!nta bica !n 0a
con,!ccin y !0 $an!jo #! !/t!n#i#o y 0a tincin #! 0o $i$o #! ac.!r#o a 0a
ob!r"acin 3.! ! #!!! r!a0i4ar&
2. FUND AME NTO
T ER IC O
2.1. T in ci n :
E !0 proc!o por !0 c.a0 0a $o05c.0a #! .n co0orant! ! a#orb!n a .na .p!r,ici!&
E0 .o #! co0orant! p!r$it! ca$biar !0 co0or #! 0a c50.0a #! 0o $icroor%ani$o
y po#!r r!a0i4ar 0a ob!r"acin !n $icrocopio ptico&
Da#o 3.! 0a bact!ria on cai inco0ora6 no pr!!ntan contrat! con !0 $!#io !n !0
c.a0 ! !nc.!ntran .p!n#i#a y no p.!#!n ob!r"ar! c0ara$!nt! in a0%7n
trata$i!nto pr!"io&
D! ac.!r#o a 0a r!accin 3.! oc.rr!6 !/it!n #i,!r!nt! tipo #! tincin-
a) Tincin simpl-
E0 co0orant! .ti0i4a#o ir"! o0o para #!notar 0a $or,o0o%8a c!0.0ar&
forma
esfrica:
se llama
Divisin a lo largo
de 2 planos
diferentes:
Divisin a lo largo de 3 planos
Coco
Ttradas regularmente:
Sarcinas
irregularmente:
Estafilococos
Forma de vara: se
llaman Bacilos
Dos bacilos untos:
Diplobacilos
Cadenas de bacilos:
Estreptobacilos
Empali!adas" Bacilos lado
con lado o en figuras en
#" $ o %
Divisin a lo largo del mismo plano"
formando cadenas cortas
2 cocos
untos:
Diplococos
& ' 2( en cadenas:
Estreptococos
!) Tincin "i#$ncial:
E0 co0orant! .ti0i4a#o pon! #! $ani,i!to #i,!r!ncia !ntr! c50.0a bact!riana o
!ntr! part! #! .na $i$a c50.0a& Eta t5cnica .ti0i4an $a #! .n co0orant! o bi!n
ci!rto r!acti"o co$p0!$!ntario para 0a tincin&
Ej!$p0o- Tincin #! Gra$6 Tincin #! 9i!20:N!!0!n6 !tc&
2.2. C% l% $a n& s
;o co0orant! $ .ti0i4a#o- a4.0 #! $!ti0!no6 crita0 "io0!ta6 a,ranina6 on
catinico y ! co$binan ,.!rt!$!nt! con co$pon!nt! c!0.0ar! car%a#o
n!%ati"a$!nt!6 co$o 0o ci#o n.c0!ico y 0o po0iacari#o ci#o <0a !n".!0ta
!/t!rna #! 0o $icroor%ani$o !tn por 0o %!n!ra0 car%a#a n!%ati"a$!nt!=&
2.'. T inci n "i # $n cia l " G$a m:
Eta tincin ! #!no$ina#a a8 por !0 bact!ri0o%o #an5 C2ritian Gra$6 3.i!n 0a
#!arro00 !n 1>44& ?obr! 0a ba! #! . r!accin a 0a tincin #! Gra$6 0a bact!ria
p.!#!n #i"i#ir! !n #o %r.po6 %ra$poiti"a y %ra$n!%ati"a <!n !t! cao6 0o
t5r$ino poiti"o y n!%ati"o no ti!n! na#a 3.! "!r con car%a !05ctrico6 ino
i$p0!$!nt! #!i%nan #o %r.po $or,o0%ico #itinto #! bact!ria=&
D!cripta !n ,or$a br!"!6 0a !c.!ncia #! 0a tincin ! 0a i%.i!nt!- !0 @roti ,ija#o
con ca0or ! tiA! 1 $in con Bio0!ta Crita06 ! 0a"a con a%.a6 ! c.br! con o0.cin
Co#a#a #.rant! 1 : ( $in& y ! 0a"a #! n.!"o con a%.a6 #!co0orar con $!4c0a
a0co2o0 !t80icoDac!tona& Ec.rrir y c.brir con ?a,ranina <co0or #! contrat!= #.rant!
1 E ( $in& ;a"ar y !car&
;a bact!ria %ra$:poiti"a y %ra$:n!%ati"a tiA!n #! ,or$a #itinta #!bi#o a 0a
"i#$ncias c%ns&i&(&i)as n la s&$(c&($a " s(s pa$"s cl(la$s& ;a par!# #!
0a c50.0a bact!riana ir"! para #ar . ta$aAo y ,or$a a0 or%ani$o a8 co$o para
pr!"!nir 0a 0ii o$tica& E0 $at!ria0 #! 0a par!# c!0.0ar bact!riana 3.! con,i!r!
ri%i#!4 ! !0 p!pti#o%0icano& ;a par!# #! 0a c50.0a %ra$:poiti"a ! %r.!a y conit!
!n "aria capa int!rcon!cta#a #! p!pti#o%0icano a8 co$o a0%o #! ci#o t!icoico&
G!n!ra0$!nt!6 >)F:*)F #! 0a par!# #! 0a c50.0a %ra$:poiti"a ! p!pti#o%0icano&
;a par!# #! 0a c50.0a %ra$:n!%ati"a6 por otro 0a#o6 conti!n! .na capa $.c2o $
#!0%a#a6 7nica$!nt! #! p!pti#o%0icano y !t ro#!a#a por .na $!$brana !/t!rior
co$p.!ta #! ,o,o08pi#o6 0ipopo0iacri#o6 y 0ipoprot!8na& ?0o 1)F : ()F #! 0a
par!# #! 0a c50.0a %ra$:n!%ati"a ! p!pti#o%0icano&
Descripcin de la tincin de GRAM-
;a c50.0a ,ija#a a0 ca0or obr! .n portaobj!to ! tiA!n6 pri$!ro con .na o0.cin
#! crita0 "io0!ta <otro co0orant! bico no on tan !,!cti"o= y on 0a"a#a
#!p.5 para 3.itar !0 !/c!o #! co0orant!& En !t! !ta#o6 to#a 0a c50.0a6 tanto
0a %ra$poiti"a co$o 0a %ra$n!%ati"a6 !tn t!Ai#a #! a4.0&
E0 portaobj!to ! c.br! !ntonc! con .na o0.cin #! yo#o:yo#.ro potico& E0
in%r!#i!nt! acti"o ! a3.8 !0 I
(
G !0 HI i$p0!$!nt! 2ac! o0.b0! !0 I
(
!n a%.a& E0 I
(
!ntra !n 0a c50.0a y ,or$a .n co$p0!jo ino0.b0! !n a%.a con !0 crita0 "io0!ta& D!
n.!"o tanto 0a c50.0a %ra$poiti"a co$o 0a %ra$n!%ati"a ! !nc.!ntran !n 0a
$i$a it.acin&
?! 00!"a a cabo #!p.5 0a #!co0oracin6 .an#o .na $!4c0a #! a0co2o0:ac!tona6
.tancia !n 0a 3.! ! o0.b0! !0 co$p0!jo I
(
:crita0 "io0!ta& A0%.no or%ani$o
<%ra$poiti"o= no ! #!co0oran6 $i!ntra 3.! otro <%ra$n!%ati"o= 0o 2ac!n& ;a
#i,!r!ncia !!ncia0 !ntr! !o #o tipo #! c50.0a !t por tanto !n . r!it!ncia a 0a
#!co0oracinG !ta r!it!ncia ! #!b! probab0!$!nt! a0 2!c2o #! 3.! !n !0 cao #!
bact!ria %ra$:n!%ati"a6 0a $!4c0a #! a0co2o0Dac!tona ! .n o0"!nt! 0ip8#ico y
#i.!0"! 0a $!$brana !/t!rior #! 0a par!# #! 0a c50.0a <y ta$bi5n p.!#! #aAar 0a
$!$brana citop0$ica a 0a 3.! ! .n! p!pti#o%0icano=& ;a #!0%a#a capa #!
p!pti#o%0icano ! incapa4 #! r!t!n!r !0 #! co$p0!jo crita0 "io0!ta:yo#o y 0a c50.0a
! #!co0ora& ;a c50.0a %ra$poiti"a6 a ca.a #! . par!#! c!0.0ar! $ !p!a
<ti!n!n $ p!pti#o%0icano y $!no 08pi#o=6 no on p!r$!ab0! a0 #io0"!nt!6
pro"ocan#o 3.! !0 #! co$p0!jo crita0 "io0!ta:yo#o 3.!#! atrapa#o #!ntro #! 0a
par!# c!0.0ar& D!p.5 #! 0a #!co0oracin 0a c50.0a %ra$poiti"a on to#a"8a
a4.0!6 p!ro 0a %ra$n!%ati"a on inco0ora&
Para pon!r #! $ani,i!to 0a c50.0a %ra$n!%ati"a ! .ti0i4a .na co0oracin #!
contrat!& Iabit.a0$!nt! ! .n co0orant! #! co0or rojo6 co$o 0a a,ranina o 0a
,.cina bica& D!p.5 #! 0a co0oracin #! contrat! 0a c50.0a %ra$n!%ati"a on
roja6 $i!ntra 3.! 0a %ra$poiti"a p!r$an!c!n a4.0!&
Bacillus anthracis (Gram positivo) Pseudomonas aeruginosa (Gram negativo)
D!b!n #!tacar! a0%.no ap!cto cr.cia0! #! 0a tincin #! Gra$-
1= E0 trata$i!nto con crita0 "io0!ta #!b! pr!c!#!r a0 trata$i!nto con yo#o& E0 yo#o
por 8 o0o ti!n! poca a,ini#a# con 0a c50.0a&
(= EI proc!o #! #!co0oracin #!b! !r corto y ! !!ncia0 .n c0c.0o pr!cio #!0
ti!$po para !"itar 3.! pi!r#an 0a tincin 0a c50.0a %ra$poiti"a&
J= C.0ti"o #! $ #! (4 2ora #! t!Ai#o p.!#!n p!r#!r . 2abi0i#a# #! r!t!n!r !0
co$p0!jo crita0 "io0!ta : yo#o&
2.*. T inci n "i # $n cia l: + ,&%"% - ci "% $ sis&n& . /IE0L1NE ELSEN)
;a par!#! c!0.0ar! #! ci!rto parito y bact!ria conti!n!n ci#o %rao
<ci#o $ic0ico= #! ca#!na 0ar%a <K) a *) to$o #! carbono= 3.! 0! con,i!r!n 0a
propi!#a# #! r!itir 0a #!co0orac8n con a0co2o0:ci#o6 #!p.5 #! 0a tincin con
co0orant! bico& Por !to ! #!no$inan ci#o:a0co2o0 r!it!nt!&
E0 ,roti ! tiA! #.rant! .no K $in con @.cina ,!nica#a ap0ican#o ca0or .a"!&
;a"ar con a%.a& D!co0orar con a0co2o0 !t80ico *KF con .n JF #! C0I conc!ntra#o&
;a"ar y t!Air #.rant! J):L) !% con A4.0 #! M!ti0!no <co0or #! contrat!=& ;a"ar y
!car&
2.2. T inci n "i # $n cia l pa$ a $)l a$ s&$ (c&( $as cl (la $s. + ,&% "% " 3i$& 4.
A0%.no %5n!ro bact!riano6 !ntr! 0o 3.! #!tacan Clostridium y Bacillus6
pro#.c!n !n . int!rior ,or$a #! r!it!ncia #!no$ina#a !pora& ?! pro#.c!n
c.an#o 0a con#icion! a$bi!nta0! on #!,a"orab0! <a%ota$i!nto #! 0o
n.tri!nt!6 t!$p!rat.ra !/tr!$a6 ra#iacion!6 co$p.!to t/ico6 !tc&=
,or$n#o! .na !pora por ca#a ,or$a "!%!tati"a& A0 ,ina0i4ar !0 proc!o #!
!poro%5n!i6 0a c50.0a "!%!tati"a ! 0ia y 0ib!ra 0a !pora a0 !/t!rior& C.an#o !0
a$bi!nt! ! ,a"orab0!6 0a !pora %!r$ina %!n!ran#o .na n.!"a ,or$a "!%!tati"a& ;a
capaci#a# #! %!r$inar p!r#.ra #.rant! aAo&
;a tincin !p!c8,ica #! !pora r!3.i!r! #o co0orant!-
1&: B!r#! $a0a3.ita- capa4 #! t!Air 0a !pora !n ca0i!nt!&
(&: ?a,ranina- co0orant! #! contrat! 3.! tiA! 0a ,or$a "!%!tati"a&
;a !n#opora6 tra 0a pri$!ra tincin6 no p!r#!rn !0 co0orant! !n !0 0a"a#o con
a%.a6 y 8 0o 2arn 0a ,or$a "!%!tati"a6 3.! 3.!#arn t!Ai#a con !0 !%.n#o
co0orant!&
'. TR ABAJ O E N E ABORAT ORIO
'.1. + a& $i als
Portaobj!to
C.br!obj!to
Microcopio ptico
?o0.cin #! crita0 "io0!ta a0 1 F
?o0.cin #! a4.0 #! $!ti0!no a0 1 F
?o0.cin #! a,ranina a0 1 F
?o0.cin #!co0orant! <a0co2o0 !t80ico y ac!tona 1-1=
?o0.cin #! I
(
D I
:
<yo#o D yo#.ro a0 )&1 F=
C.0ti"o <ca0#o o a%ar= a t!Air&
Ana #! p.nta y ana #! aro&
M!c2!ro
A0co2o0 !t80ico
Gaa
'.2. 5 $pa $a ci n "l 6& n"i "% p$) ia a la c% l% $a ci n
?! to$a .n portaobj!to pr!"ia$!nt! #!!n%raa#o y ! co0oca !n !0 c!ntro #!0
$i$o .na %ota #!0 c.0ti"o 083.i#o6 $!#iant! ana #! p0atino&
?i !0 c.0ti"o ! 0i#o6 ! co0oca pri$!ro .na %ota #! o0.cin ,iio0%ica o a%.a
#!ti0a#a !t5ri0 obr! !0 portaobj!to& ;.!%o6 con ana #! p0atino ! to$a .na co0onia
#!0 $!#io 0i#o y ! !$.0iona con 0a o0.cin ,iio0%ica& ?! !/ti!n#! con !0 ana
!n ,or$a #! capa #!0%a#a y .ni,or$!&
?! proc!#! a 0a ,ijacin #!0 !/t!n#i#o& Para !00o ! paa 0!nta$!nt! !0 portaobj!to6 !n
,or$a 2ori4onta06 obr! 0a 00a$a #!0 $!c2!ro $ant!ni!n#o !0 !/t!n#i#o 2acia arriba&
;a op!racin ! r!pit! 2ata !3.!#a# tota06 c.i#an#o !"itar 0a co$b.tin #!0
!/t!n#i#o&
'.'. T inci n
J&J&1& Tincin si!ple
?obr! !0 !/t!n#i#o !co ! co0ocan .na %ota #! a4.0 #! $!ti0!no y ! #!ja
act.ar .no $in.to&
?! !0i$ina !0 !/c!o #! co0orant! 0a"an#o con a%.a #! ,or$a .a"!6 con
ay.#a #! pi!ta& ?! !ca !0 !/t!n#i#o #! 0a ,or$a #!cripta !n J&(&
?! ob!r"a a0 $icrocopio&
J&J&(& Tincin di"erencial# M$t%d% de Gra!
?obr! !0 !/t!n#i#o r!a0i4a#o !n !0 p.nto J&(&6 ! r!a0i4a !0 i%.i!nt! trata$i!nto-
Pao #!0 proc!o
REACCION C CO;ORACION DE ;A? MACTERIA?
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS
?o0.cin #! Crita0
Bio0!ta a0 1F&
?! #!ja act.ar 1 $in.to
C50.0a co0or "io0!ta C50.0a co0or "io0!ta
?o0.cin Co#o: Io#.ra#a&
?! #!ja act.ar 1 a (
$in.to
@or$acin #!0 co$p0!jo
Co#o E Crita0 Bio0!ta
!n !0 int!rior #! 0a c50.0a
;a c50.0a p!r$an!c!n
"io0!ta
@or$acin #!0 co$p0!jo
Co#o E Crita0 Bio0!ta
!n !0 int!rior #! 0a c50.0a
;a c50.0a p!r$an!c!n
"io0!ta
?o0.cin #! a0co2o0 Ac!tona
?! #!ja act.ar ()
?!%.n#o
E0 co$p0!jo Co#o E Crita0
Bio0!ta no a0! #! 0a
C50.0a6 0a 3.! con!r"an
!0 co0or "io0!ta&
E0 co$p0!jo Co#o E Crita0
Bio0!ta ! !para #! 0a
C50.0a6 0a 3.! pi!r#!n !0
Co0or y no p.!#!n ob!r"ar!
?o0.cin #! ?a,ranina&
?! #!ja act.ar 1 a (
Min.to&
;a c50.0a con!r"an !0
Co0or Bio0!ta&
;a c50.0a #!co0ora#a !
TiA!n #! rojo&
;a"ar6 !car y ob!r"ar a0 $icrocop8o&
J&J&J& Tincin di"erencial# M$t%d% &cid% resistente#
A0 i%.a0 3.! !0 $5to#o ant!rior6 !0 !/t!n#i#o ! o$!t! a 0a accin #! "ario
a%!nt! para #i,!r!nciacin #! propi!#a#!-
Pao 1- Accin #! 0a @.cina ,!nica#a !n ca0i!nt! #.rant! 1 $in.to
Pao (- ?o0.cin A0co2o0 E Aci#o <1-1= #.rant! 1 $in.to
Pao J- Accin #!0 a4.0 #! $!ti0!no&
R!.0ta#o-
Mact!ria Aci#o R!it!nt!- co0or rojo
Mact!ria No aci#o r!it!nt!- co0or a4.0
J&J&4& Tincin di"erencial# M$t%d% de 'irt(#
?! baa !n 0a propi!#a#! #i,!r!nt! 3.! po!!n !pora y c50.0a
"!%!tati"a&
Pao 1- ?o0.cin B!r#! #! Ma0a3.ita a0 K F #.rant! ( a J $in.to
Pao (- Accin #! o0.cin #! a0co2o0 a0 N) E >) F #.rant! J) !%.n#o
Pao J- ?o0.cin ?a,ranina #.rant! 1 $in.to&
;a !pora a#3.i!r!n co0or "!r#! y 0a c50.0a "!%!tati"a ! tiA!n #! rojo&
'.*. O!s $) a cin a l mi c$% sc %pi%
J&4&1& F)nda!ent%s
E0 $icrocopio ! .n intr.$!nto ptico 3.! a$p0i,ica 0a i$a%!n #! .n
obj!to p!3.!Ao& M!#iant! .n it!$a #! 0!nt! y ,.!nt! #! i0.$inacin !
p.!#! 2ac!r "iib0! .n obj!to $icrocpico& ;o $icrocopio p.!#!n
a.$!ntar #! 1)) a ci!nto #! $i0! #! "!c! !0 ta$aAo ori%ina0&
Act.a0$!nt! !/it!n #o tipo #! $icrocopio- !0 ptico y !0 !0!ctrnico& En
!0 $icrocopio ptico !0 a.$!nto #!0 obj!to ! coni%.! .an#o .n it!$a
#! 0!nt! 3.! $anip.0a !0 pao #! 0o rayo #! 0.4 !ntr! !0 obj!to y 0o ojo&
E0 $icrocopio !0!ctrnico .ti0i4a .n rayo #! !0!ctron! contro0a#o por .n
ca$po $a%n5tico&
;o $icrocopio ptico %!n!ra0$!nt! pro#.c!n .n a.$!nto #! 1))) "!c!
!0 ta$aAo ori%ina0& E0 08$it! 0o ti!n!n !n
.na ())) "!c!&
;a 0!nt! #! .n $icrocopio ptico on !0
co0!ctor6 !0 obj!ti"o y !0 oc.0ar& ;a 0.4 3.!
!ntra !n !0 it!$a #!b! !n,ocar! obr! 0a
pr!paracin y para !to ! .ti0i4a !0
con#!na#or& E0!"an#o o bajan#o !0
con#!na#or p.!#! a0t!rar! !0 p0ano #!0
,oco #! 0.4 y !0!%ir! .na poicin 3.!
coni%a !0 ,oco pr!cio& E0 obj!ti"o ! 0a
0!nt! it.a#a c!rca #!0 obj!to 3.! !
;!nt! oc.0ar
Ojo
I$a%!n
@ina0 !n 0a
R!tina
I$a%!n
Int!r$!#ia
A.$!nta#a !
In"!rti#a
ob!r"a& E0 a.$!nto pri$ario #!0 obj!to !
pro#.ci#o por 0a 0!nt! obj!ti"o y 0a i$a%!n
! tran$it! a0 oc.0ar6 #on#! ! r!a0i4a !0
a.$!nto ,ina0&
;o $icrocopio 3.! ! .an
nor$a0$!nt! !n $icrobio0o%8a !tn
!3.ipa#o con tr! obj!ti"o- bajo po#!r6
a0to po#!r y obj!ti"o #! in$!rin& Eto
;!nt! obj!ti"o
;!nt! co0!ctora
@.!nt! #! 0.4
Obj!to a
Ob!r"ar
obj!ti"o !tn $onta#o obr! .na pi!4a 3.! ! 00a$a r!"o0"!r 3.! p.!#!
rotar! para a0in!ar !0 obj!ti"o #!!a#o con !0 con#!na#or&
;a i$a%!n ,or$a#a por !0 obj!ti"o ! ,ina0$!nt! a.$!nta#a por !0 oc.0ar& E0
a.$!nto tota0 #! .n $icrocopio co$p.!to ! !0 pro#.cto #!0 a.$!nto #!
. obj!ti"o y #! . oc.0ar& En %!n!ra06 0o a.$!nto #!0 obj!ti"o on 1)/6
4)/ y 1))/ <obj!ti"o #! in$!rin= y 0o #!0 oc.0ar K/6 1)/ y 1K/& Por 0o
tanto6 i ! trabaja con .n oc.0ar #! 1)/ y .n obj!ti"o #! 1))/6 !0 a.$!nto
tota0 !r 1) / 1)) O 1))) "!c! !0 ta$aAo ori%ina0& E0 $icrocopio
co$p.!to ! capa4 #! con!%.ir a.$!nto coni#!rab0!$!nt! $ayor! 3.!
!0 $icrocopio contr.i#o con .na o0a 0!nt!& Et! 70ti$o6 00a$a#o
$icrocopio i$p0!6 ! .a principa0$!nt! co$o 0.pa y crita0! #!
a.$!nto&
A#!$ #!0 a.$!nto6 .na propi!#a# i$portant! #! .n $icrocopio ! .
po#!r r!o0.ti"oG !to !6 0a #itancia $8ni$a a 0a 3.! ! p.!#!n "!r #o
obj!to !para#o& Bi!n! #!,ini#o por .na ,r$.0a !n 0a 3.! 0a principa0!
"ariab0! on 0 a 0o n % i t. # # ! o n # a # ! 0 a 0. 4 y 0a a p ! rt. ra n . $ 5 rica # !0
ob j!ti "o 6 p!ro !n 0a prctica6 y a.$i!n#o 0a $/i$a ca0i#a# #! 0a 0!nt!6 !
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