PRINCIPIOS BASICOS DE AUTOMATIZACION

EN LABORATORIO CLINICO
LIC. WILFREDO GOCHEZ QUINTANILLA




















COORDINACION DE LABORATORIO CLINICO, UNAB JUNIO 2008.





2



PROLOGO DEL AUTOR


Al hablar de principios bsicos de automatizacin en el laboratorio clnico, estamos
refirindonos a una de las bases en las cuales se fundamentan los resultados de
muchos de los laboratorios clnicos modernos del siglo veintiuno, sin embargo es
bueno, tener una perspectiva de cmo se origino el termino de Automatizacion a
travs de la historia y como este se fue aplicando en las actividades diarias de un
laboratorio.

En la historia de la medicina y sus avances desde la edad media podemos darnos
cuenta que el efecto tecnolgico ha tenido una gran repercusin en acceder a nuevos
descubrimientos y estos a su vez han impactado sobre nuevas reas de estudio entre
ellos, muchos aplicados a la medicina, por ejemplo tenemos el perfeccionamiento del
microscopio por el holands AntonVan Leewenhoek (1668) y la repercusin que tuvo
en las actuales bases de ciencias como la microbiologa y la hematologa. As tambin
tuvo una gran impacto el descubrimiento de los alemanes Bunsen y Kirchhoff al aplicar
experimentos de fsica y qumica en el fraccionamiento del haz de luz en sus distintas
partes (nanmetros) y su aplicacin en la cuantificacin de substancias, aparato
conocido actualmente como espectrofotmetro, que a su vez tuvo un gran efecto en lo
que actualmente es la Qumica Clnica y sus aplicaciones en la cuantificacin de
distintos tipos de analitos, sustratos y enzimas.

No cabe duda que el efecto tecnolgico ha sido y seguira siendo un gran pilar para el
descubrimiento de nuevos conocimientos, ha sido, es y ser la base de donde surgi la
carrera de Laboratorio Clnico, Por lo tanto en esta pequea revisin no busca ser un
texto de referencia para algo tan amplio y profundo como puede ser la automatizacin,
sino ms bien es una gua practica de conocimientos bsicos que le sirvan al alumno
para cuando este en sus prcticas en los hospitales y se encuentra por primera vez como
un usuario de este tipo de aparatos. Una de las principales dudas con las cuales se
pueden encontrar los alumnos al asistir a los diferentes reas automatizadas de los
laboratorios de los hospitales es: En qu principio se basa ese aparato para medir esa
prueba? Cmo puedo saber si el aparato esta funcionando bien? Cules son las partes
internas del equipo? Cmo puedo usarlo para obtener un buen resultado?, etc. Estas
dudas son lgicas para alguien que inicia su carrera, tiene su respuesta desde el punto de
vista del fabricante, sin embargo es importante agregarle el fundamento cientfico.

En un laboratorio clnico como en cualquier otro laboratorio de medicin y
cuantificacin de analitos u otras substancias, son de suma importancia los resultados
que de ellos se generan, ya que servirn para la toma de decisin en el diagnostico,
evaluacin, evolucin y tratamiento de innumerables enfermedades de los pacientes, por
lo tanto es indispensable tener la plena confianza, rapidez y fiabilidad de los resultados
generados en ellos, por eso el profesional de la carrera de laboratorio clnico debe de
prepararse lo mejor posible para encarar los retos que deber de enfrentar en el siglo
veintiuno.


3
PROLOGO
PRESENTACION
INDICE

CAPITULO I:
A. Historia y definicin de la Automatizacin. Pg. 4,5
B. Aplicacin de la automatizacin al laboratorio clnico Pag.6,7,8
C. Diferentes reas de Aplicacin de la automatizacin
en el laboratorio clnico Pag. 9


CAPITULO II:

A. Automatizacin en Qumica Clnica Pag. 10
A.1 Principios generales de Espectrofotometra Pag. 10, 11,12,13,14
A.2 El entorno automatizado del rea de Qumica clnica Pag. 15
A.3 El Hardware Pag. 16
A.4 El software y el sistema LIS Pag. 17,18
A.5 Diferentes formas de clculo principio y aplicacion Pg. 19,20,21,22
B. Automatizacin en Hematologa Pag. 23
B.1 Principios generales de Citmetros Pag. 22
B. 2 Citometria de Impedancia Elctrica Pag. 23
B.3 Citometria por Flujo lser. Pag. 24

C. Automatizacin en Banco de Sangre Pag. 27

C.1 rea de Inmunodiagnostico en el banco de sangre Pag. 27
Procedimientos de ELISA Pag.28 ,29
Modo de calculo CUTT OFF Pag. 30

C.2 Automatizacin en la extraccin y separacin de componentes Pag. 31,32

CAPITULO III

A. Historia del Control de calidad Pag. 33
Conceptos bsicos del Control de Calidad Pag. 34
Concepto y estima del error pag. 33,34
A.1 El control de calidad Interno Pag. 35
A.2 El control de calidad Externo Pag. 35

A.3. Instrumentos, materiales y software de control de calidad Pag. 36
A.4. Instancias internacionales de control de calidad Pag. 37, 38


RESUMEN DE ILUSTRACIONES Pag. 40
BIBLIOGRAFA Pag. 41



4


CAPITULO I
A. HISTORIA Y DEFINICIN DE LA AUTOMATIZACIN
El concepto de mquinas automatizadas se remonta a la antigedad, con mitos de
seres mecnicos vivientes. Los autmatas, o mquinas semejantes a personas, ya
aparecan en los relojes de las iglesias medievales, y los relojeros del siglo XVIII eran
famosos por sus ingeniosas criaturas mecnicas.
Algunos de los primeros robots empleaban mecanismos de realimentacin para corregir
errores, mecanismos que siguen emplendose actualmente. Un ejemplo de control por
realimentacin es un bebedero que emplea un flotador para determinar el nivel del agua.
Cuando el agua cae por debajo de un nivel determinado, el flotador baja, abre una
vlvula y deja entrar ms agua en el bebedero. Al subir el agua, el flotador tambin
sube, y al llegar a cierta altura se cierra la vlvula y se corta el paso del agua.
El primer autntico controlador realimentado fue el regulador de Watt, inventado en
1788 por el ingeniero britnico James Watt. Este dispositivo constaba de dos bolas
metlicas unidas al eje motor de una mquina de vapor y conectadas con una vlvula
que regulaba el flujo de vapor. A medida que aumentaba la velocidad de la mquina de
vapor, las bolas se alejaban del eje debido a la fuerza centrfuga, con lo que cerraban la
vlvula. Esto haca que disminuyera el flujo de vapor a la mquina y por tanto la
velocidad.
El control por realimentacin, el desarrollo de herramientas especializadas y la divisin
del trabajo en tareas ms pequeas que pudieran realizar obreros o mquinas fueron
ingredientes esenciales en la automatizacin de las fbricas en el siglo XVIII. A medida
que mejoraba la tecnologa se desarrollaron mquinas especializadas para tareas como
poner tapones a las botellas o verter caucho lquido en moldes para neumticos. Sin
embargo, ninguna de estas mquinas tena la versatilidad del brazo humano, y no podan
alcanzar objetos alejados y colocarlos en la posicin deseada.
El desarrollo del brazo artificial multiarticulado, o manipulador, llev al moderno robot.
El inventor estadounidense George Devol desarroll en 1954 un brazo primitivo que se
poda programar para realizar tareas especficas. En 1975, el ingeniero mecnico
estadounidense Vctor Scheinman, cuando estudiaba la carrera en la Universidad de
Stanford, en California, desarroll un manipulador polivalente realmente flexible
conocido como Brazo Manipulador Universal Programable (PUMA, siglas en ingls).
El PUMA era capaz de mover un objeto y colocarlo en cualquier orientacin en un lugar
deseado que estuviera a su alcance. El concepto bsico multiarticulado del PUMA es la
base de la mayora de los robots actuales.
El diseo de un manipulador robtico se inspira en el brazo humano, aunque con
algunas diferencias. Por ejemplo, un brazo robtico puede extenderse telescpicamente,
es decir, deslizando unas secciones cilndricas dentro de otras para alargar el brazo.
Tambin pueden construirse brazos robticos de forma que puedan doblarse como la
trompa de un elefante. Las pinzas estn diseadas para imitar la funcin y estructura de
la mano humana. Muchos robots estn equipados con pinzas especializadas para agarrar
dispositivos concretos, como una gradilla de tubos de ensayo o un soldador de arco.
Las articulaciones de un brazo robtico suelen moverse mediante motores elctricos. En
la mayora de los robots, la pinza se mueve de una posicin a otra cambiando su
orientacin. Una computadora calcula los ngulos de articulacin necesarios para llevar
la pinza a la posicin deseada, un proceso conocido como cinemtica inversa.
Algunos brazos multiarticulados estn equipados con servocontroladores, o
controladores por realimentacin, que reciben datos de un ordenador. Cada articulacin
5
del brazo tiene un dispositivo que mide su ngulo y enva ese dato al controlador. Si el
ngulo real del brazo no es igual al ngulo calculado para la posicin deseada, el
servocontrolador mueve la articulacin hasta que el ngulo del brazo coincida con el
ngulo calculado. Los controladores y los ordenadores asociados tambin deben
procesar los datos recogidos por cmaras que localizan los objetos que se van a agarrar
o las informaciones de sensores situados en las pinzas que regulan la fuerza de agarre.
Cualquier robot diseado para moverse en un entorno no estructurado o desconocido
necesita mltiples sensores y controles (por ejemplo, sensores ultrasnicos o infrarrojos)
para evitar los obstculos. Los robots como los vehculos planetarios de la NASA
necesitan una gran cantidad de sensores y unas computadoras de a bordo muy potentes
para procesar la compleja informacin que les permite moverse. Eso es particularmente
cierto para robots diseados para trabajar en estrecha proximidad de seres humanos,
como robots que ayuden a personas discapacitadas o sirvan comidas en un hospital. La
seguridad debe ser esencial en el diseo de robots para el servicio humano.
En 1995 funcionaban unos 700.000 robots en el mundo industrializado. Ms de 500.000
se empleaban en Japn, unos 120.000 en Europa Occidental y unos 60.000 en Estados
Unidos. Muchas aplicaciones de los robots corresponden a tareas peligrosas o
desagradables para los humanos. En los laboratorios clnicos, los robots manejan
materiales que conlleven posibles riesgos, como muestras de sangre u orina. En otros
casos, los robots se emplean en tareas repetitivas y montonas en las que el rendimiento
de una persona podra disminuir con el tiempo. Los robots pueden realizar estas
operaciones repetitivas de alta precisin durante 24 horas al da sin cansarse. Uno de los
principales usuarios de robots es la industria del automvil. La empresa General Motors
utiliza aproximadamente 16.000 robots para trabajos como soldadura por puntos,
pintura, carga de mquinas, transferencia de piezas y montaje. El montaje es una de las
aplicaciones industriales de la robtica que ms est creciendo. Exige una mayor
precisin que la soldadura o la pintura y emplea sistemas de sensores de bajo coste y
computadoras potentes y baratas. Los robots se usan por ejemplo en el montaje de
aparatos electrnicos, para montar microchips en placas de circuito.
Las actividades que entraan gran peligro para las personas, como la localizacin de
barcos hundidos, la bsqueda de depsitos minerales submarinos o la exploracin de
volcanes activos, son especialmente apropiadas para emplear robots. Los robots tambin
pueden explorar planetas distantes. La sonda espacial no tripulada Galileo, de la NASA,
viaj a Jpiter en 1996 y realiz tareas como la deteccin del contenido qumico de la
atmsfera joviana.
Ya se emplean robots para ayudar a los cirujanos a instalar caderas artificiales, y ciertos
robots especializados de altsima precisin pueden ayudar en operaciones quirrgicas
delicadas en los ojos. La investigacin en teleciruga emplea robots controlados de
forma remota por cirujanos expertos; estos robots podran algn da efectuar
operaciones en campos de batalla distantes.
Los manipuladores robticos crean productos manufacturados de mayor calidad y
menor costo. Sin embargo, tambin pueden provocar la prdida de empleos no
cualificados, especialmente en cadenas de montaje industriales. Aunque crean trabajos
en los sectores de soporte lgico y desarrollo de sensores, en la instalacin y
mantenimiento de robots y en la conversin de fbricas antiguas y el diseo de fbricas
nuevas, estos nuevos empleos exigen mayores niveles de capacidad y formacin. Las
sociedades orientadas hacia la tecnologa deben enfrentarse a la tarea de volver a formar
a los trabajadores que pierden su empleo debido a la automatizacin y ensearles

National Aeronautic Space Agengy
6
nuevas capacidades para que puedan tener un puesto de trabajo en las industrias del
siglo XXI.


B. APLICACIN DE LA AUTOMATIZACION EN LABORATORIO CLINICO:






Fig. 1. Gustav Robert Kirchhoff (izq.) Antn Van Leewenhoek (centro) y su microscopio (Derecha)

Robert Wilhelm Bunsen (1811 1899) Qumico alemn que con su compatriota el
fsico Gustav Robert Kirchhoff, invento el espectroscopio y promovi el anlisis del
espectro que les condujo al descubrimiento del cesio y del rubidio.
Bunsen naci en Gotinga el 31 de marzo de 1911 y estudio en la universidad de esta
ciudad, entre 1836 y 1852 dio clases sucesivamente en el instituto politcnico de
Kassely en las universidades de Marburgo y Breslau (Actualmente Wroclaw, Polonia),
despus fue profesor en la universidad de Heidelberg hasta que se retiro en 1889.
Considerado uno de los ms grandes qumicos del mundo Bunsen descubri en 1843 el
antdoto que aun hoy en da se utiliza contra el arsnico. Su estudio sobre los cianuros
dobles confirmo el principio de qumica orgnica en el que la naturaleza de un
compuesto depende de los radicales que lo componen. Adems invento el mechero
Bunsen, un mechero de gas utilizado en laboratorios cientficos. Entre otros de sus
inventos estn adems el calormetro de hielo, una bomba de filtro y la clula elctrica
de cinc y carbono. Los resultados de sus estudios sobre los gases residuales se
publicaron en el clsico Mtodos gasomtricos(1857). Bunsen muri el 16 de agosto
de 1899 en Heidelberg.
Gustav Robert Kirchhoff, naci en Konigsberg (actualmente Kaliningrado, Rusia) y
estudio en la universidad de esta ciudad. Fue profesor de fsica en la universidad de
Breslau, Heidelberg y Berln. Con el qumico alemn Robert Wilhelm Bunsen,
desarrollo el espectroscopio moderno para el anlisis qumico. En 1860 los dos
cientficos descubrieron el cesio y el rubidio mediante la espectroscopia. Kirchhoff
dirigi importantes investigaciones sobre la transferencia de calor y tambin expuso dos
reglas actualmente conocidas como las leyes de Kirchhoff, con respecto a la
distribucin de la corriente en los circuitos elctricos.
En 1859, estos dos cientficos, Gustav Robert Kirchhoff y Robert Wilhelm Bunsen
fueron los primeros en descubrir que cada elemento emite y absorbe luz de colores
caractersticos, que aplicaron al anlisis qumico. Este instrumento que es uno de los dos
tipos principales de espectroscopio, est formado por una rendija, un conjunto de lentes,
7
un prisma y un ocular. La luz que va a ser analizada pasa por una lente colimadora, que
produce un haz de luz estrecho y paralelo, y a continuacin por el prisma. Con el ocular
se enfoca la imagen en la rendija, de hecho lo que se ve son una serie de imgenes de la
rendija conocidas como lneas espectrales, cada una con un color diferente, porque el
prisma separa la luz en los colores que la componen. Este descubrimiento sentara las
bases del desarrollo qumico e investigativo que diera paso al concepto de laboratorio
clnico moderno.
Para principios del siglo XX, se vislumbraba un nuevo panorama debido a las
innovaciones tecnolgicas de la poca y la electrificacin masiva en las ciudades junto
a los avances en las ciencia de la salud, se aplicaron descubrimientos en la qumica y la
fsica, que permitieron a compaas desarrollar el instrumental necesario para los
1
avances en la medicina diagnostica de la poca. As surgen compaas como la: Klett
Summer de Detroit Michigan USA con el desarrollo de su colormetro, en los aos de
1940, que fue uno de los aparatos con mas aceptacin en nuestro pas hasta a principios
de los aos 80, posteriormente surgieron otras compaas con espectrofotmetros ms
complejos, anlogos como: Perkin Elmer, Spectronic D, etc. Que fueron
modernizndose de acuerdo al avance electrnico de la poca cambiando su tecnologa
hacia equipos digitales.
La compaa Technicon introdujo en 1957 su primer analizador automatizado (1) que
fue un analizador de lotes secuencial, de canal nico y flujo continuo capaz de proveer
un solo resultado de prueba en casi 40 muestras por hora.
Fue hasta 1970 que se introdujo una competencia a este analizador por medio del
descubrimiento del Dr. Norman Anderson con su primer analizador centrfugo, sub
producto de una investigacin de la NASA (1) la innovacin de este sistema fue adems
de una alternativa al sistema continuo fue el uso de la innovacin de las tecnologas de
las computadoras. Pero fue hasta 1975 que se perfeccionaron estos aparatos con la
miniaturizacin de las computadoras y el avance en la industria de los polmetros para la
fabricacin de cubetas pticas de plstico de gran calidad.
A estos equipos se le uni el Automatic Clinical Analizar (ACA) de la compaa Dade
Behring en 1970 que fue el primer analizador discreto de flujo continuo as como el
primer instrumento en tener capacidades de acceso aleatorio mediante el cual se podan
analizar muestras fuera de secuencia de lote segn se requiera.
Otro de los hitos importantes en estos avances fueron la introduccin de tecnologas de
anlisis de micro muestra y reactivos, adems de incorporar de manera extensa la
tecnologa de computadoras en su diseo y uso, Ortho-Clinical Diagnostics, 1978(1).
Desde 1980 se ha ido desarrollando analizadores mas poderosos que incorporan
caractersticas importantes como: Software y Hardware cada vez mas sofisticados y
rpidos, fibra ptica, Lecturas policromaticas, sistemas On line para resultados
inmediatos, avances en equipos semi automatizados, etc. Pero no ha sido hasta
mediados de los aos 90 que en nuestro pas han ido avanzando este tipo de tecnologas
y logrando posicionarse en especial en los grandes hospitales, debido especialmente por
su requerimiento en manejo de mayores volmenes de muestras, necesidad de rapidez
en los resultados, necesidad de optimizacin del recurso humano de los hospitales y por
la facilidad de disposicin de presupuestos para poder adquirir estas tecnologas, no as
en los laboratorios pequeos especialmente en las periferias e interior del pas.
Otro grave problema actual es la falta de incorporacin de esta informacin en los
planes de estudio de las universidades formadoras de recursos profesionales en el pas,
existe casi un divorcio total entre contenidos universitarios y realidad en los

1 Qumica Clinica, principios, procedimientos y correlaciones Michael L. Bishop. 5 Edicin
8
establecimientos de salud, y sumado a esto esta tambin la poca preparacin que dan las
compaas distribuidoras a los personales de cada hospital, especialmente a estudiantes
o a nuevas contrataciones.



Fig.2 Equipo Hitachi 912, analizador automatizado de qumica clnica. Roche Diagnostics.


Fig. 3 Espectrofotmetro anlogo Perkin Elmer, uno de los primeros equipos usados en
los laboratorios clnicos del pas.



9


C DIFERENTES AREAS DE APLICACIN DE LA AUTOMATIZACION EN
LABORATORIO CLINICO


Desde 1995 ha habido grandes cambios en los analizadores automatizados, en efecto
estos se han vuelto ms compactos, rpidos y fciles de usar como resultado del
refinamiento en los avances electrnicos y de software de las compaas. La
automatizacin ha avanzado con caractersticas de independencia e intervencin mnima
del operador (1).
Otro avance en el campo de los analizadores es el desarrollo de la inmunoquimica
cuyas tcnicas nos permiten el ensayo de la cuantificacin de: frmacos, marcadores
tumorales, hormonas, anticuerpos especficos de enfermedades infecto contagiosas, etc.
Estos instrumentos que usan estas tcnicas como: Nefelometra, inmunoensayo
competitivo y no competitivo con deteccin de quimioluminicensia, etc.
Adems de estos avances y el desarrollo de los citmetros o contadores de clulas en
hematologia, las principales reas automatizadas en el laboratorio clnico son:

Qumica Clnica
Hematologia
Inmunodiagnostico o tamizaje
Fraccionamiento y extraccin de componentes de banco de sangre.
Etc.

Otra de las fuerzas impulsadotas de los procedimientos automatizados es la realidad
del aumento de mayor volumen de anlisis en los establecimientos y la necesidad de la
rapidez de la respuesta, adems de la necesidad de anlisis mas completos en los
perfiles de los pacientes aparentemente sanos, han ido sustituyendo a las pruebas
individuales segn los cambios dictados por polticas recientes en Medicare y Medicaid
(Sistemas de salud en USA) que conducen a nuevos diagnsticos en pacientes
asintomtico. (1)
Hay muchas ventajas en la automatizacin de las reas de laboratorio clnico, uno de
ellos es incrementar el nmero de pruebas que realiza un laboratorio clnico en un
determinado periodo de tiempo. Otro es reducir los costos por pago de mano de obra
calificada como es un profesional en laboratorio clnico para as poder reducir los costos
por prueba. Otro aspecto importante es reducir el ndice del error humano para bajar as
la variabilidad de resultados de laboratorio en laboratorio. Esto permite mejorar los
resultados en los programas de control externo de la calidad y se corrigen los errores
inherentes a la metodologa. Adems se eliminan los errores potenciales de los procesos
manuales por mal pipeteo, calculo y trascripcin de resultados. (1)
Cada vez existe mas conciencia en lo delicado de la labor de los resultados de
laboratorio clnico, por ello las inversiones en tecnologas van enfocadas en mejorar los
procesos de produccin y calidad de estos, la globalizacin ha llegado, es una realidad y
no nos permite mantenernos aislados, por esta razn no podemos quedarnos atrasados
en la competencia de los resultados y la constante medicin de los procesos analticos
para la estima del error. Es por ello que el avance de la automatizacin en las reas
hospitalarias y de laboratorios grandes y de mediano volumen muy difcilmente se va a
rezagar, por lo tanto es nuestra obligacin como profesionales conocer de una manera
tcnica y cientfica lo relacionado a estas nuevas formas de trabajar..
10

CAPITULO II:
A. AUTOMATIZACIN EN QUMICA CLINICA.

El rea de Qumica Clnica fue una de la primera rea en automatizarse,
especialmente debido al auge en el volumen de muestras manejadas en los hospitales y
al cambio de polticas en la solicitud de pruebas individuales por perfiles completos,
para chequeos ms profundos en los pacientes con diferentes patologas crnicas como
la diabetes, otros trastornos endocrinolgicos, etc. As como el nuevo concepto de
chequeos de rutina para el descubrimiento de trastornos asintomtico (Presin
Sangunea, Canceres, etc.) Esto adems de la necesidad de la rapidez y las nuevas
tendencias mundiales en la modernizacin de las metodologas y estndares de la
calidad.
Pero para poder conocer acerca de la automatizacin en el rea de Qumica Clnica es
necesario primero entender los conceptos sobre los cuales se basan estos equipos.
En el estudio de los principios de la espectrofotometra, conoceremos en que se
fundamentan las lecturas de los diferentes tipos de equipos en el rea de la qumica
clnica.
2


A 1.PRINCIPIOS GENERALES DE ESPECTROFOTOMETRIA

Tomaremos en cuenta los siguientes aspectos, para analizar este capitulo:
Conceptos bsicos
Terminologa Bsica
Principios fsicos qumicos

i. CONCEPTOS BASICOS:

I. ESPECTROFOTOMETRIA

Se le denomina Espectrofotometra a la parte de la fsica que estudia a la luz y su
descomposicin espectral, en cada uno de sus componentes y su interaccin con las
substancias (analitos, substratos, enzimas, etc) para poder cuantificar a estas a partir de
la absorcin de luz por las partculas y contrastando las con patrones de concentracin
conocida, esto gracias a la aportacin de los fsicos alemanes Bunsen y Kirchoff, que en
el ao 1853 desarrollaron el primer aparato de este gnero llamado espectroscopio.(2)

Se define por luz aquel tipo de energa electromagntica cuya velocidad es una
constante en el universo y que se desplaza a todas direcciones en forma de partculas
llamadas fotones a una velocidad de 299,792.458 km/seg. y de la cual hay dos fuentes
principales:
I- Energa de alta radiacin: Generada por las estrellas, sper novas, qusar, el sol, etc.
II- Energa de Baja radiacin: Generada por la energa Alterna o Directa. Dependiendo
de su generacin puede ser:
i. Energa Elctrica, Corriente alterna: Generacin de alta tensin: 220voltios, 110 v.
Energa Corriente Directa: utilizada por instrumentos electrnicos a 6v, 10v, 12v o
24 v.


2
Enciclopedia Encarta 2005
11


La espectrofotometra, se basa en la luz y su refraccin a travs de un prisma o filtro
intersticial para descomponerla en sus distintas partes o para poder medir y cuantificar
reacciones qumicas en substancias, llmese a estas: Analitos, Substratos o Enzimas.
(Fig. 1) A esta refraccin para descomponer en sus distintas partes a la luz se le llama
Longitud de onda y se mide en nano metros (nm). o mil millonsima parte de un metro.
(10 -9 mt.)
Para poder cuantificar una sustancia se necesita que dos fenmenos ocurran:
1) TRAMITANCIA: Es el fenmeno de transmisin de la luz en un 100% en un rango
determinado.
2) ABSORBANCIA: Es la absorcin de la luz por las substancias presentes en la cubeta
previo a una calibracin a cero con agua destilada.

ii. TERMINOLOGIA BASICA:

ABSORVANCIA: Capacidad de un analito, enzima o sustrato de absorber cierta
cantidad de luz emitida por una fuente.
TRAMITANCIA: Capacidad de trasmitir el 100% de la luz emitida por una
fuente y descompuesta en un rango especifico.
NANOMETRO: Rango de medicin equivalente a 10 (-9) de un metro o la
millonsima parte de un metro. Se utiliza para medir los distintos rangos en que
la luz se descompone.(distancia entre cresta y cresta de LO)
LUZ ULTRAVIOLETA: Es aquella que va de los 320- 410 nm. Se utiliza
generalmente para mediciones enzimtico, no es detectable al ojo humano. Fue
descubierta en 1801 por J. Ritter While.
LUZ VISIBLE: Es aquella que va de los 420- 570 nm. Se utiliza para medir
reacciones colorimtricas. Es detectable a simple ojo.
LUZ INFRAROJA: Es aquella que va de los 580 a los 800 nm.Se utiliza para
poder eliminar las coloraciones parasitas de las muestras en el modo de lectura
Bicromatico.
LINEA BASE: o cero con agua destilada, es cuando llevamos el instrumento a
cero absorbancia (100% tramitancia) para comenzar la lectura.
BLANCO REACTIVO: es la eliminacin de la coloracin natural del reactivo a
travs de le medicin de su Abs. Sin muestra aadida.
ESTANDAR O PATRON: es una solucin estable de concentracin conocida de
un analito, substrato o enzima, el cual no varia y es especifico para cada reactivo
qumico que se utiliza.

FACTOR DE CALIBRACION: Es la relacin matemtica para determinar una
concentracin a partir del valor de absorbancia de un patrn o estndar
establecido. Es igual a:
FC = Concentracion St / Absorvancia ST x Abs. Mx

GALVANOMETRO: Instrumento electrnico que mide la luz enviada por el
sensor ptico y la transforma en pulsos electrnicos directamente proporcional a
la cantidad de luz emitida, la cual se expresa en forma digital o anloga
(Instrumentos de aguja).

12
CONTROL NORMAL : Es un suero bovino o humano cuya concentracin de
Analitos, enzimas y sustratos es conocida, la cual varia a limites permisibles

Establecidos por el fabricante y expresados en Desviaciones Estndar. El valor
del control normal ronda los limites normales de los parmetros establecidos en
humanos.

CONTROL ANORMAL: Es un suero bovino o humano el cual Tiene valores
por lo general alterados o altos de los analitos, substratos o enzimas segn los
limites normales del ser humano. S e utilizan para medir la Linealidad de las
pruebas y de los equipos.


iii. PRINCIPIOS FISICOS-QUIMICOS

Reaccin qumica:
Esta se da en el tubo de ensayo o cubeta de reaccin de acuerdo con los parmetros
establecidos por el fabricante como son:
- Volumen de relacin Reactivo muestra
- Tipo de muestra a usar y forma de extraccin (Edta, citrato de Sodio, etc.)
- Pipeteado, temperatura de reaccin, Tiempo de Incubacin, Lectura.
- Forma de clculo, etc.

Al estar lista esta reaccin se procede a la cuantificacin del analito, substrato o enzima
por medio de la medicin de luz (fotones) que estas partculas presentes en la reaccin
absorben. (Esquema.1)


CUBETA DE REACCION

FUENTE LUZ _______ ______
REFRACTADA _____________ SENSOR GALVANO
xn xn OPTICO METRO
100% tramitancia xn xn Molculas reaccionando
0% ABs. xn Xn %Abs
____________

LUZ ABSORVIDA


Esquema 1. Principio de absorcin de luz por las partculas reaccionando en un porta
cubetas o tubo de ensayo de un aparato de qumica clnica.








13

La qumica clnica ha avanzado muchsimo desde el desarrollo y aplicacin del primer
espectroscopio por Bunsen y Kirchhoff (1856) convirtindose actualmente en una
sofisticada tecnologa de vanguardia que utiliza a la luz y su aplicacin en la medicin
de absorcin de substancias sean estos analitos, sustratos o enzimas de valor clnico en
el diagnostico de muchas enfermedades en el ser humano.
Realizando un vistazo desde los primeros aparatos utilizados en la qumica clnica, hasta
la actualidad, nos damos cuenta que el principio de la espectrofotometra se aplica a
todos los instrumentos antiguos y modernos. Ejemplos de algunos equipos en distintas
epocas: Desde 1940 hasta la fecha:

Klett Summers (colormetro desarrollado en 1940 por una compaa de Detroit)
Colormetro Anlogo.
Spectronic Kley- Adams digital
Spectronic Perkins Elmer
Biosystems Spectronic semi- automatizado
Bayer RA-100
Analizadores automatizados: Hitachi, Bayer, Abbot, Human, Biosystems,etc,
2002.

El principio es bsicamente el mismo en la espectrofotometra, lo que cambiado es :
Sensibilidad y presicin del mtodo
Cantidad de muestras Ej. Klett 2ml, semi-automatizados 400ul 100 ul.
Formas de clculo automatizada
Sistemas de aspiracin incorporadas
Velocidad y cantidad de muestras procesadas.
Uso de Hardware y software sofisticados
Uso de sistemas LIS (Laboratory interfase systems)
Control de calidad incorporado.
Etc.

Actualmente ha avanzado tanto este campo de la espectrofotometra que se ha
convertido un campo de batalla entre las grandes empresas mundiales por hacer
mejoras en tiempo y velocidad de procesado de muestras, as como el uso de
poderosas computadoras y micro procesadores para poder ofrecer ms formas de
clculo y anlisis On Line simultneos a la generacin de datos; ante este panorama el
profesional en laboratorio clnico actual, debe de estar conciente de los procesos y
sistemas de aseguramiento de la calidad, estandarizados mundialmente, por
instituciones y bibliografa actualizada as como el uso de software y materiales de
control que garanticen la calidad de su trabajo.(Ver captulo III)





14




Colores de la luz visible

Longitud de onda de la Color absorbido Color observado
Absorcin mxima (nm).
380 420 Violeta Amarillo - verdoso
420 440 Azul - violeta Amarillo
440 470 Azul Naranja
470 500 Verde - azuloso Rojo
500 520 Verde Prpura
520 550 Verde amarillento Violeta
550 580 Amarillo Azul - violeta
580 620 Naranja Azul
620 680 Rojo Verde - azuloso
680 780 Prpura Verde

Fig.4 Colores del espectro de luz y sus respectivos nanmetros.










15


Fig. 5 Colormetro de qumica clnica Klett Sumer. (1940)

A. 2 EL ENTORNO AUTOMATIZADO DEL AREA DE QUIMICA CLINICA
Actualmente hay que estar muy conciente de las distintas fases a las cuales se les va a
aplicar el proceso de la automatizacin, tomando en cuenta las tres fases principales de
un proceso metodolgico:
3

Fase pre- analtica
Fase Analtica
Fase post analtica
En la mayora de los procesos es lo mas comn automatizar a la fase analtica del
procedimiento metodolgico, pero siempre en la bsqueda del concepto de calidad total
actualmente se han incorporado las tres fases en un solo conjunto denominado el
Entorno automatizado del rea de qumica clnica. (3)
En este entorno hay que saber reconocer los pasos necesarios para imitar y mejorar las
tcnicas manuales. Los pasos principales en un procedimiento generalmente se pueden
enumerar:

1. Preparacin e identificacin de la muestra.
2. Medicin de la muestra y entrega.
3. Sistemas de reactivos y entrega
4. Fase de Reaccin qumica
5. Fase de Medicin.
6. Procesamiento de seal y manejo de datos.(1)





3
El control interno de la Calidad Javier Gella, Biosystems Espaa.
16

A3, 4, 5 HARDWARE SOFTWARE -LIS
La fase pre analtica comienza en la buena obtencin y preparacin de la muestra,
que es y ha sido un proceso manual en la mayora de los casos, pero actualmente se han
incorporado procesos automatizados desde el ingreso del paciente en la ventanilla de la
recepcin del laboratorio donde se le asigna un cdigo de barra y se le ingresa al
sistema donde se le asigna la cantidad de pruebas solicitadas, esta informacin llega
desde el ordenador hasta el aparato de qumica en el rea especificada a travs de un
cableado llamado Sistema de interfases de laboratorio (LIS) donde el aparato se carga
con esta informacin especifica del paciente, su cdigo de barra y las pruebas a realizar.
En el rea de recepcin, el flebotomista encargado de la sangra del paciente deber
pegar al tubo de la muestra el cdigo de barra correspondiente para que este sea llevado
hasta la separacin y cargar el suero o plasma al rotor del aparato para que este inicie la
secuencia de bsqueda con su lector de cdigo de barras. Al detectar el cdigo asignado
revisa en su memoria las pruebas asignadas y comienza a procesar el listado en una
secuencia lgica agrupando las pruebas de acuerdo a la metdica especfica.
Al finalizar el listado de trabajo este enva la informacin al computador para que este
pueda mostrar los resultados en pantalla, para una posterior validacin de la corrida, de
acuerdo a las caractersticas especificas ingresadas a la programacin previa del aparato
en deteccin de alarmas especificas del aparato y el control de calidad asignado, de
acuerdo a la corrida simultanea de calibradores y controles comerciales.
Al recibir estos resultados y analizarlos de acuerdo a los parmetros de la calidad (ver
capitulo III) se validan dejndolos listos para que nuevamente en la recepcin del
laboratorio se puedan imprimir los resultados a travs del software y el sistema de
cableado LIS donde viaja la informacin.
En conclusin podemos afirmar que las metodologas han avanzado mucho en lo que
a Automatizacin en qumica clnica respecta, los principios fsicos y qumicos de la
espectrofotometra son los mismos, pero se han hecho grandes innovaciones en estas
reas que nos traen hasta la actualidad donde hay una gran opcin de equipos
automticos y semi automticos de tamao compacto, rpidos y modernos que
conjuntan diferentes principios como los que hemos mencionado anteriormente para
poder abarcar la determinacin de los distintos sustratos, enzimas y analitos de valor
clnico, junto con la cuantificacin de las nuevas metodologas Inmunoquimicas para la
valorizacin de Marcadores tumorales como el PSA, (Antigeno prosttico especifico)
drogas teraputicas y de abuso, Hormonas, Anticuerpos especficos, Inmunoglobulinas,
etc. En fin todas las valorizaciones necesarias para la evaluacin del paciente.
Un aspecto importante en estas cuantificaciones es la relacin matemtica de la
reaccin qumica que sucede en la cubeta de reaccin, de esta forma, nos cercioramos
de la validez de la reaccin, a este conjunto de relaciones matemticas le llamamos:
Formas de Calculo.
En el proceso manual las formas de calculo generalmente se realizan por el personal que
realiza la prueba, de manera que de esta forma, se esta sujeto a caer en fallas de calculo
y errores humanos en la realizacin de estos, siendo esta una de las principales fuentes
de error post analtico.
Los modernos computadores con sus microprocesadores son una poderosa herramienta
para evitar estas fallas, estos aparatos junto con los software desarrollados por los
fabricantes de los aparatos recogen la informacin cruda (Lecturas de absorbencias,
limites de absorcin, valor de estndares, formas de calculo, etc) para procesarlas y en
algunas ocasiones especialmente en los sistemas On line, se reciben los resultados en el
17
monitor de la computadora en tiempo real en unos cuantos segundos despus de hecha
la lectura de la reaccin..
Es preciso que el futuro profesional en laboratorio clnico, estudie las principales
formas de clculo y sus aplicaciones, y que estas se incorporen a los planes de estudio
de la carrera de las distintas universidades.






Fig. 6 Equipo automatizado de Qumica Clnica marca Architect. Abbot Diagnostics









18


Fig. 7 En esta figura podemos observar el rotor de muestras con selector de cdigo de barras (Parte
inferior izquierda), adems de las cubetas de reaccin y lectura (Parte superior izquierda). Se puede ver
tambin a los brazos automatizados de dispensado de reactivo, muestras y lavados (Uno en la parte
superior izquierda y dos en la derecha). Este modelo tiene compartimientos refrigerados para reactivos (2
Parte derecha).






















19
A.5 DIFERENTES FORMAS DE CLCULO. PRINCIPIO Y APLICACIN
1. CONCEPTOS GENERALES
2. MODOS DE CLCULO
3. TIPOS DE LECTURA
4. CONTROL DE CALIDAD

1. CONCEPTOS GENERALES

El modo de clculo se define como la relacin matemtica que expresa el resultado de
la reaccin qumica que ha ocurrido en el tubo de ensayo o cubeta de reaccin, y que
sirve para cuantificar en forma exacta la cantidad de analito, substrato o enzima
presente al final de la reaccin.
4


Para que ocurra esta reaccin en forma satisfactoria, deber de tomarse en cuenta
ciertos parmetros que influencian el resultado de la misma como son:
Tiempo: Es el tiempo exacto cronometrado desde el inicio del proceso hasta el
final con la lectura del tubo o la cubeta.
Temperatura: Es la medicin de la energa calrica en forma de movimiento de
partculas, cuyas variaciones son criticas en toda reaccin. Es de suma
importancia las reacciones a 37C debido al valor clnico de estas.
PH: Potencial de hidrogeno es critico en toda reaccin.
Protocolo: o Inserto es la gua de instrucciones en el proceso de la reaccin
otorgado por el fabricante del mismo.
Reactivo 1, 2 , o ms : Son las cantidades de reactivos presentes en la reaccin.
Muestra: Es la muestra problema a la cual se le busca la concentracin y se
mezcla con los reactivos. Ej.: Suero, plasma, LCR, Orina, etc.
Lectura: Es la medicin a travs de Espectrofotometra del resultado final de la
reaccin qumica.
Longitud de Onda: Es el rango especfico expresado en manmetros (distancia
entre cresta y cresta) donde se desarrolla la mayor absorbancia del espcimen de
muestra investigado.
Etc.


Debido a este conjunto de especificaciones en cada reaccin y al desarrollo actual en
el avance de la fabricacin de los reactivos as, como de los instrumentos de medicin ,
y la capacidad de los profesionales involucrados en esta rea, es que se ha mejorado en
la clasificacin de las formas de calculo, las cuales se han agrupado en formas
especificas de acuerdo a las caractersticas de sus reactantes en alrededor de ms de 10
formas de clculo conocidas hasta hoy de las cuales cinco o mas, son las utilizadas en
el rea de cuantificacin de analitos, substratos o enzimas de valor medico.








4
Manual del usuario Bts-370 Plus Biosystems Espaa
20

2. MODOS DE CLCULO


I. PUNTO FINAL ( END POINT):Es aquella reaccin donde existe un desarrollo
de color que es directamente proporcional a la cantidad del analito o substrato
investigado y en este procedimiento pueden utilizarse uno o dos reactivos, la
absorbancia puede medirse con una (monocromtica) o dos (Bicromatica)
longitudes de onda. Se utilizan para este calculo rangos entre los 490 540 nm. (
fig. 1) Ej. Glucosa, Colesterol, Triglicrido, etc


II. MODO DIFERENCIAL (DIFERENTIAL MODE): Este modo de anlisis
requiere de dos reactivos, el reactivo 1 para el blanco de la muestra y el reactivo
2 para la reaccin global. Cada mezcla de reaccin es incubada en pocillos
separados y se realiza una nica medida de absorbancia de cada una de ellas. La
Calibracin puede basarse en el uso de calibradores o un factor dado por el
fabricante.(fig. 1) Se usa un rango de los 510 540 nm Ej. Bilirrubina Total y
directa.

III. TIEMPO FIJO (FIXED TIME): La absorbancia de la mezcla es leda a dos
tiempos fijos, despus de una incubacin, solo un reactivo puede usarse. Se
utiliza en un rango de 490 520 nm. Ej. Creatinina.

IV. MODO CINETICO ( KINETIC MODE): El modo cintico se utiliza para medir
la concentracin de actividad cataltica. La absorbancia de la mezcla de reacion
es medida por de 4- 31 veces posterior a una incubacin a una temperatura
determinada. En este procedimiento se utiliza un nico reactivo. Generalmente
la concentracin es determinado por u n factor dado por el fabricante. Se usa un
rango entre 320 340 nm. Ej. TGO, TGP, Amilasa, Ck total, Ck mb, etc.


V. MULTIESTANDAR: Este procedimiento existe una reaccin de color que es
medida como en un punto final, y que puede ser directamente proporcional o
inversamente proporcional a la concentracin del analito o substrato u hormona
que se investiga. Se construye una curva de calibracin que depender de la
prueba realizada. Se usa un rango entre los 450 510 nm. Ej. T3 , T4, TSH,
PSA, Testosterona, Insulina, etc.


VI. CUTT OFF ( CORTE): Este procedimiento se utiliza para poder realizar
lecturas basados en absorbancias de controles positivos y absorbancias de
controles negativos , utilizando estas para generar una lnea de corte para
discriminar pruebas positivas de las negativas, utilizada especialmente en el rea
de inmunodiagnostico para pruebas infecto contagiosas en los bancos de
sangre. Son mas bien utilizados en procedimientos basados en la metodologa de
ELISA. Ej. HIV, Hbag, HCV, Toxoplasma, etc.



21

3. TIPOS DE LECTURA.
La lectura se refiere a la medicin de la absorbancia de las pruebas, esto depender de la
tecnologa disponible para este fin, especficamente depender del aparato que se
disponga en el laboratorio.
Existen dos modos de lecturas para las pruebas:
Lectura Monocromtica: Se realiza una sola lectura de la absorbancia de la
mezcla despus de un tiempo determinado. Ej. Espectrofotmetros simples.
Lectura Bicromatica: Dos lecturas de la absorbancia de la mezcla despus de un
tiempo determinado simultaneas, Una con el filtro de lectura principal y la otra
con el filtro de referencia, generando dos lecturas A1 y A2 de la cual se realiza
la siguiente operacin :
A1 A2 = Absorbancia Final.
A1: Absorbancia del rango principal
A2: Absorbancia del rango de referencia

Esto se utiliza generalmente para eliminar las coloraciones parasitas* de las muestras, y
garantiza una mejor exactitud en la determinacin. (4)
* Coloracin parasita es aquella donde la muestra esta coloreada antes de reaccionar con
el reactivo especifico.

4. CONTROL DE CALIDAD.

Para garantizar plenamente la exactitud en la realizacin de estos procedimientos a
travs de estas formas de clculo es indispensable el uso de los controles de calidad, al
utilizar equipamiento semiautomatizado o automatizado estos son un requisito para cada
corrida diaria. En procedimientos manuales es importante usar estos controles para
asegurar el reporte que generemos, para ello existe los Controles Interno y Externo de la
calidad los cuales estudiaremos como todo un capitulo aparte de este estudio. (Capitulo
3).

22




Fig. 8 Analizador espectrofotmetro semi-automatizado de qumica clnica marca Bts- 330 Biosystems.
Aparato usado en laboratorio clnicos mas actualizados de bajo volumen (abajo) Espectrofotmetro marca
UNICO usado tambin en prcticas de laboratorio clnico.(Arriba)







23

B. AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA

La Hematologa fue otra de las primeras areas de laboratorio en automatizarse,
debido, entre otras razones, al aumento de los volmenes de muestras hospitalarias y a
la necesidad cada vez mas apremiante de la rapidez de los resultados,
especialmente en las salas de Emergencias y de cuidados intensivos. Un factor
importante fue el riesgo biolgico potencial en el manejo de la muestra, especialmente
desde el inicio de la epidemia del SIDA y otros virus*, y adems de la necesidad de
reducir la variacin interlaboratorial de una misma muestra.

B. 1 PRINCIPIOS GENERALES DE CITOMETROS DE HEMATOLOGIA
Fue a partir del descubrimiento patentado por Wallace Coulter (1956) que la
compaa Coulter (Becken Dickinson) la que lanzo el primer contador de clulas en
los aos 1978. (5) Desde esa fecha hasta la hoy en da, estos han avanzado
enormemente, hasta convertirse en los actuales citometros de flujo de lnea completa
que hay en la actualidad.
En la actualidad existen bsicamente dos tipos de aparatos automatizados en
hematologia:
B.2 - Citometros por impedancia elctrica
B.3 - Citometros por citometria de flujo lser.
La realizacin de la biometra hematica a travs del proceso automatizado se realiza a
travs de una secuenciacin de los pasos, este se inicia desde la aspiracin de la muestra
y su dilucin en un buffer especifico para llevar determinar generalmente los siguientes
parmetros:
-Cuantificacin de la hemoglobina (Hb)
-Cuantificacin de los eritrocitos (RBC)
-Cuantificacin de los reticulocitos y de los RBC nucleados
-Cuantificacin de los leucocitos (WBC)
-Cuantificacin plaquetaria.
La medicin de la Hb se basa en la relacin lineal entre la cantidad de luz que se
absorbe en una banda de absorcin particular y la absorcin de la muestra.( ).
Generalmente utilizando el mtodo de la cianametahemoglobina o lauril sulfato de
sodio. Los eritrocitos se miden por el mtodo de la impedancia de la abertura, tcnicas
que dispersan luz usando laser LED o tungsteno o una combinacin de las dos
tecnologas. Esta tcnica patentada por Wallace Coulter en 1956 se conoce como el
principio de Coulter y se utiliza para contar RBC, WBC y plaquetas. Un flujo de
corriente elctrica se establece a travs de una abertura de dimensiones conocidas.
Cuando una clula o partcula pasa a travs de la abertura, la clula impide el flujo de la
corriente y causa un impulso en el voltaje. Las clulas y las partculas se cuentan
registrando el nmero de pulsos de voltaje que ocurren durante un intervalo de medicin
El volumen celular se determina midiendo la magnitud del pulso que se genera, se fijan
las entradas electrnicas, permitiendo al analizador discriminar los pulsos o
cuantificaciones de los eritrocitos, de las plaquetas, detritus y del ruido elctrico. Las
correlaciones estadsticas se aplican en el software del analizador. Para evitar la
recirculacin de las clulas por las cmaras (abertura) una vez contadas se remueven de
la zona de deteccin con un lquido de arrastre.

Virus de la Hepatitis A, B, C.
24
Los leucocitos pueden contarse y diferenciarse dentro de un amplio nmero de
categoras por diversas metodologas. Segn el fabricante la zona de deteccin puede
ser: optica, de conductancia, de impedancia o una combinacin de todas. Por medio de
estas metodologas estos determinan el conteo total de los WBC y de las distintas
poblaciones de estos o formula diferencial.
Otra importante metodologa para el conteo de los WBC y los diferenciales se
determina usando citometria de flujo combinada con laser semiconductor. Se obtiene
informacin celular usando la dispersin de luz frontal para determinar el volumen
celular, la dispersin de luz lateral para evaluar la estructura interna de la clula, y la luz
fluorescente lateral para dar informacin sobre los cidos nucleicos RNA/DNA. La
ventaja de este mtodo es que tiene la capacidad de dar el recuento total de la formula
diferencial, pueden contar reticulocitos adems de reconocer todas las variantes
normales y anormales de las clulas incluyendo clulas atpicas con caractersticas de
clulas progenitoras o inmaduras.
5
.





Fig. 9 Principio de Coulter. Desarrollado por Wallace Coulter en 1956. Bsico para conteo automatizado
de clulas en hematologa.
.
En estos procesos es importante siempre el mantenimiento constante del equipo por
parte del equipo tcnico de la empresa que pertenece el equipo, para su ptimo resultado
adems de la realizacin de la corrida de los distintos controles en los tres niveles: Bajo,
Normal y Alto.
No obstante siempre es recomendable corroborar cualquier dato anormal por medio de
un proceso manual, ya que a travs de este estaramos viendo directamente a las tres
lneas celulares y es el mejor control de calidad que podemos aplicar.



5
La Ciencia del Diagnostico de Laboratorio Crocker & Burnett, 2 Edicin
25


Fig. 10 Analizador para coagulacin marca Instrumentation Laboratory ACL 100.




Fig. 11 Joseph y Wallace Coulter. Los inventores del principio coulter, Bsico para los citometros de
hematologa modernos.


26



Fig. 12 Analizador automatizado para Hematologia marca ABX Pentra 80.







Fig. 13. Reportes de histogramas de poblaciones de glbulos rojos y plaquetas anormales, macro
plaquetas, (Parte izquierda) En el control de calidad de lmina podemos observar glbulos rojos
hipocromicos y presencia de macro plaquetas. (Parte derecha)


27

C. AUTOMATIZACIN EN EL BANCO DE SANGRE

C.1-AREA DE INMUNODIAGNOSTICO EN EL BANCO DE SANGRE

Definicin:
I. Procedimientos de ELISA Automatizacin en Inmunodiagnostico
II. Modo de calculo CUTT OFF

El rea de Inmuno Diagnostico dentro de un banco de sangre central o de referencia
se convierte en una de las reas mas delicadas y especializadas, en el banco de sangre,
debido a lo delicado de sus resultados y lo importante que son en la toma de decisiones
para poder clasificar a los componentes sanguneos en aptos o disponibles para el uso
de una terapia sangunea o si hay que descartarlos debido a la presencia de un agente
patgeno potencialmente de riesgo biolgico a la vida del paciente a ser transfundido.
Debido a los riesgos potenciales de transmisin de patgenos (Sfilis, HIV, HCV,
HAbs, Tripanosoma cruzi, etc.) la Organizacin Mundial de Salud ha establecido
parmetros estrictos en el control de los Donantes, estimulando a la donacin de
voluntarios altruistas, pero podemos clasificarlos de acuerdo a la intencin de la
donacin en:
Donantes Altruistas
Donantes Familiares o Amigos (De la persona a transfundir)
Donantes comerciales

Estas categoras encierran cada una con su propio riesgo en la transmisin de
enfermedades debido al estilo de vida que llevan cada uno, siendo los Donantes
Altruistas las personas optimas para realizar una donacin sangunea. Sin embargo
siempre existen otras poblaciones de mayor riesgo que acuden a los bancos de sangre, y
no son honestos en la entrevista, engaando a los profesionales encargados de la
seleccin del donante. Por esta razn se vuelve tan importante el rea de Inmuno
diagnostico debido a que esta rea se convierte en la garante de la calidad del
componente sanguneo y de que este se encuentre libr de agentes infecciosos.*
La medicina transfucional ha avanzado en los ltimos aos, convirtindose en una
poderosa herramienta en el tratamiento de diversas enfermedades muy delicadas como
el cncer o raros trastornos en los factores de coagulacin de los pacientes, adems de
su vital importancia en la terapia de choque en los quirfanos y salas de emergencia de
todo el mundo, sin embargo hoy mas que nunca aumenta el riesgo de transmisin de
enfermedades contagiosas debido al auge de la pandemia de HIV a nivel mundial ( 32
millones de personas en el mundo) y de otras infecciones fatales como la Hepatitis A, B,
C , la enfermedad de Chagas entre otras. Debido a este problema y al avance de la
ciencia y la tcnica las diferentes compaas del mundo estn en una constante
competencia por desarrollar nuevas y mejores pruebas para el diagnostico de
enfermedades infecto contagiosas, adems de los equipos y software para el anlisis y la
interpretacin de estas. Todo esto nos lleva a que cada vez mas se pueda asegurar en los
bancos del mundo de componentes sanguneos seguros para el uso de los pacientes ms
necesitados.



Virus de la inmunodeficiencia humana, Hepatitis A,B,C, Anticuerpos para sifilis
28



I. PROCEDIMIENTO DE ELISA AUTOMATIZACIN DEL
INMUNODIAGNOSTICO.

El procedimiento de ELISA es uno de los inmuno ensayos ms seguros y utilizados
por los bancos de sangre del mundo, debido a su alta sensibilidad y especificidad en la
deteccin de anticuerpos especficos contra agentes infectos contagiosos, hormonas y
marcadores tumorales. La metodologa de ELISA y sus variantes como la
Quimioluminicescia son por hoy de las metodologas mas frecuentes en el uso de los
bancos de sangre.
La terminologa ELISA se deriva de las siglas en ingles que significa:
E nzime = Enzima
L inked =Ligada
I nmuno =Inmuno
S orved =Absorcion
A ssay =Ensayo
Inmuno ensayo ligado a absorcin de enzimas. Esta metodologa esta basada en la
deteccin de anticuerpos especficos para diferentes tipos de antgenos. Las paredes de
polieritudeno de los pocillos estn recubiertas de los antgenos de cada uno de los
agentes infecciosos, hormonas o marcadores tumorales a investigar y se ponen a
reaccionar con el suero del paciente para detectar la presencia de anticuerpos especficos
para cada uno de las diferentes pruebas. Al formarse el complejo Antigeno Anticuerpo
se realiza un lavado para poder descartar los anticuerpos inespecficos u otra sustancia
que pudiera interferir en la reaccin, Se aade un substrato y se dejan reaccionar en
incubacin para darle otro lavado para quitar el exceso de este, debe de agregarle
despus un cromgeno que dar una reaccin de color de acuerdo a la concentracin de
anticuerpos presentes en la muestra. Despus de una hora de incubacin y desarrollo
color se detiene esta con la adicin de un acido, dando una coloracin final que ser
leda en un lector de ELISA a una longitud de onda de 490 u otra dependiendo de la
tcnica. Para interpretar las lecturas ests se plotean en curvas de calibracin o para
modo de corte. Este modo cutt- off es generalmente usado para pruebas infecciosas.
Para determinar las concentraciones de las muestras o discriminar positivos de
negativos se montan estndares y controles positivos fuerte, positivo dbil y negativo de
acuerdo a la metodologa y a la prueba a realizar, y luego de acuerdo al valor cutt-off
asignado por el fabricante se determina un valor numrico o lnea de corte de donde se
determinara que muestras estn positivas y cuales son negativas, adems de las pruebas
indeterminadas o zona gris que es un porcentaje brindado por el fabricante hacia
arriba y hacia abajo del valor de la lnea de corte(Valor cutt-off), donde no se puede
determinar con certeza si son positivos o negativo. En este caso deber de repetirse la
prueba serialmente hasta que salga de esta zona y de un resultado definitivo.








29

Esquema N 2 : Secuencia de pasos para realizar un ensayo de ELISA.
Ensayo de Micro Elisa

1)Pocillo impregnado 2) Adicin del suero 3) formacin del complejo
Del Anfgeno (Ag) Anticuerpos (Acs) Antgeno -Anticuerpo


4) 1 Lavado Exceso de 5) Adicin del Sustrato 6) 2 Lavado Exceso de
Acs Sustrato


7) Adicin de Cromgena 8) Adicin de Stop 9) Lectura 490 nm






Fig. 14 .Analizador de pruebas de ELISA automtico Axsym de Abbot Diagnostics.












30


II. MODO DE CALCULO DE CORTE (CUTT OFF)

Este modo de clculo es el que se aplica a la determinacin de pruebas
infectocontagiosas como: HIV, Hepatitis A, B, C, Chagas, Toxoplasmosis IgG, IgM,
etc.
El modo Cutt Off o corte se basa en un valor de absorbancia donde a partir de all se
har un corte para descrimnar pruebas positivas y negativas.
De este modo se corrern junto a las muestras los controles positivos (fuerte y dbil) y
negativos los cuales generaran un valor de absorbancia de los positivos y negativos a los
cuales se calculara dependiendo de las absorbancia el valor cutt off y se determinaran
los positivos de los negativos. Cierto porcentaje ser el de los Indeterminados que
corresponde a cierto numero hacia abajo y hacia arriba del valor de corte, estos no se
sabe a exactitud si son positivos o negativos y deben de repetirse hasta obtener un valor
fuera de este rango o zona gris.
Hay pruebas que adems de controles positivos y negativos utilizan calibradores o
estndares de valores conocidos de la concentracin de inmunoglobulinas, que sirven
para determinar la positividad de las pruebas o para medir los resultados de las terapias,
por ejemplo en la determinacin de toxoplasmosis IgG se cuantifica con un valor de un
estndar, esto nos da un parmetro para saber si la inmunoglobulina es de memoria que
ha quedado circulando en sangre o si se ha reactivado la infeccin.
En el caso de la IgM que es un pentmero de la fase aguda solo es necesario si es
positiva o negativa la presencia de este anticuerpo.
Esquema 2. Modo cutt off (Corte)


0.60
Positivo fuerte 0.59
Control 0.58
0.57 + POSITIVOS(REACTIVOS)


Positivo dbil 0.29
Control

Zona gris 0.25
___________________________________________________ cutoff (corte)
Negativo 0.15 Zona gris
0.13 - NEGATIVOS(NO REACTIVOS)
0.07
0.05


Esquema N3. Una prueba infecto contagiosa (HIV,HCV,Toxo IgG,etc) y su
interpretacin de resultados en la forma de calculo de corte (Cutt-off) a partir de las
lecturas de controles positivos y negativos.



31



III. AUTOMATIZACIN EN LA EXTRACCIN DE COMPONENTES
SANGUNEOS

La extraccin de los componentes sanguneos est tambin en la lista de los procesos
automatizados, por medio de la utilizacin de aparatos extractores y fraccionadotes de
los diferentes componentes sanguneos.
Estos aparatos son llamados aparatos de Afresis y existen de diferentes marcas en el
mercado, entre ellos estn: Baxter, Inmunetics, Gambro, etc.
La funcin de estos aparatos en la recoleccin de componentes esta en sustituir el
proceso manual de obtencin y separacin de la sangre, por medio de la utilizacin de
estos aparatos utilizando en lugar de la bolsa tradicional de donante, un descartable
especial que va conectado en un extremo a la aguja de puncin al brazo del donante que
se conecta a un sistema de rotor centrifugo refrigerado especial para la obtencin y
separacin de los diferentes componentes como: Glbulos rojos empacados, plasma
fresco congelado, plasma rico en plaquetas y concentrado de plaquetas.
El sistema consiste generalmente de tres mdulos integrados que son el rotor extractor
refrigerado el sistema de monitoreo o software donde se controla el proceso y el sistema
de descartables donde se conecta el paciente.
Las ventajas de estos sistemas esta en su gran eficiencia en la recoleccin y separacin
de los componentes delicados como las plaquetas en mayor concentracin por mm3 que
por medio de los medios tradicionales, adems de la rapidez del proceso en la
obtencin del componente existe la enorme ventaja que algunos de estos sistemas
ofrecen la opcin del filtro leucoreductor cuyo fin principal es la disminucin de la
cantidad de clulas blancas, para evitar la sensibilizacin de los pacientes
poli transfundidos o de pacientes con problemas de inmunosupresion o con cncer,
tambin en pacientes mas delicados como los bebes. Estos filtros consisten en unos
dispositivos de cermica que captan a la mayora de glbulos blancos retenindolos en
el as evita que se vallan junto con los componentes recolectados.
La desventaja de estos mtodos esta en el precio, ya que un sistema descartable nico
uso por cada paciente anda por alrededor desde los 150 260 USD, dependiendo de la
marca comercial y los aparatos tambin son caros y delicados en su manejo y
mantenimiento, pero esta es la nueva tendencia mundial en la obtencin de
componentes sanguneos automatizad













Filtro de Ceramica que atrapa la mayoria de glbulos blancos presentes en la bolsa de plaquetas.
32


















Fig. 15. Cassette de extraccin y separacin de componentes
sanguneos de un solo uso, con sistema de
leucorreduccion.(Izquierda) Maquina centrifuga automatizada de
separacin de componentes sanguneos marca TRIMA de
GAMBRO.





























33



CAPITULO III.
A.1 INTRODUCCION AL SISTEMA DE CONTROL DE LA CALIDAD

HISTORIA:
El sistema de control de la calidad en laboratorio clnico ha avanzado muchsimo
desde sus inicios en los procesos industriales de a principios del siglo XX. Ha
evolucionado hasta introducirse en la mayora de mbitos realizados por el ser humano,
incluyendo a los procesos en el laboratorio clnico.
Historia del control de Calidad:
En el principio de los procesos de control de calidad podemos mencionar a Walter A.
Shewhart que fue un analista estadstico de la compaa Bell Telephone quien desarrollo
su obra titulada Economic control of quality of Manufactured Product publicado en
1931. En esta obra se plasmaron los procesos estadsticos bsicos para el control de la
calidad como son los valores mnimos necesarios en los procesos de rutina y la
medicin de las desviaciones de estos y sus cosos econmicos para el proceso.
Los procesos de control de calidad han sido siempre desde el principio
concernientemente al deseo de alcanzar las metas de calidad al mnimo costo. Shewart
identifico los elementos crticos en los cuales se esperan variaciones en los procesos de
rutina y la forma de cmo identificar los rompimientos en estos procesos para poder
eliminar las causas que lo originan.
Casi veinte aos despus aparecieron Levey and Jennings e introdujeron los mtodos
estadsticos de control de calidad en los laboratorios, en 1950. Siguiendo las
recomendaciones originales de Shewart hicieron un grupo de mediciones del proceso y
calcularon los promedios de rango (mximas diferencias) ploteando los promedios de
los rangos en dos distintos grficos. Adems ellos (Levey Jennigs) propusieron
realizar mediciones por duplicado de las muestras de los pacientes.
Despus de esto Henry y Segalove desarrollaron un proceso alternativo en el cual se
establece muestras de referencias que son analizadas repetidamente en mediciones que
son ploteadas directamente, este sistema es conocido actualmente como Graficas de
Levey and Jennings.
6

Desde esa poca a la fecha muchas empresas han desarrollado nuevos y mejores
productos para el aseguramiento de la calidad que son disponibles para la mayora de
pruebas de laboratorio clnico. Al mismo tiempo hay disponibilidad de mayores
conocimientos en el entendimiento de los procesos de control de calidad a travs de
literatura, software, programas estadsticos, productos, etc. y de organizaciones e
instituciones dedicadas a vigilar y fomentar los procesos multi control para evaluar e
interpretar los datos de control de calidad. Por lo tanto hoy en da hay una gran
disposicin de informacin y herramientas para alumnos y profesionales que quieran
saber ms acerca del sistema de aseguramiento de la calidad.







6
Basic QC Practices James Westgard, 2 Edicion
34




A 2. CONCEPTOS BASICOS
CONTROL DE LA CALIDAD:
Es la parte del sistema de aseguramiento de la calidad que comprende todas aquellas
tcnicas y procedimientos que se utilizan para monitorear el comportamiento de
determinados parmetros que pueden afectar los requisitos de calidad, entendiendo
como calidad a aquel dato o valor que ms se apega a la realidad de la condicin del
paciente en el momento de que fue tomada la muestra, en resumen es la bsqueda de la
verdad o del valor convencionalmente verdadero (3) en ese momento. Adems nos
permiten medir errores y alertar sobre funcionamientos incorrectos. Ejerce control sobre
la fase analtica.
Se define como Error, a todo aquel dato o valor que se aleja del valor verdadero.
Tomando en cuenta que no existe un valor verdadero absoluto, especialmente cuando se
trabajo con mediciones de analitos mdicos que son dinmicos y variantes, se conocer
a este como el valor convencionalmente verdadero.
Existen dos tipos principales de error:
Error sistemtico
Error Aleatorio
El error sistemtico es aquel que se repite o persiste constantemente durante un
tiempo determinado, hasta que las condiciones que lo originan son cambiadas. Ejemplo:
Equipos deteriorados, reactivos vencidos, calibradores defectuosos, etc.
El error aleatorio es aquel que se da por razones fortuitas y no se repite necesariamente
con periocidad, afecta la precisin adems de la calidad de los resultados. Ejemplo:
Mala toma de muestra, rotulacin equivocada, mal pipeteado, etc.
Al hablar de estima del error debe de saberse en que parte del proceso analtico se esta
aplicando dicho medicin. Existen en los procesos analticos de cuantificacin o
medicin de substancias, tres fases, que pueden afectar la calidad, las cuales son:
1. Fase Pre-analtica
2. Fase Analtica
3. Fase post-analtica
La fase pre-analtica es toda aquella previa al proceso analtico (cuantitativo) y
comprende desde que el paciente llega al laboratorio con su orden de exmenes a la
recepcin de laboratorio y la secuencia de pasos que lleva como la introduccin de datos
al sistema interlaboratorial, elaboracin de vietas de identificacin de tubos,
indicaciones previas o requisitos previos a la toma de muestra, la toma de muestra por
un profesional calificado, el uso de tubos adecuados (con o sin su respectivo
anticoagulante), hasta el traslado del rea especifica donde se procesara la muestra y la
efectiva separacin de componentes a usar dependiendo del tipo de examen a procesar.
En esta fase entran los requisitos de cadena de fri o traslado adecuados para poder
conservar intactas las muestras cuando estas son procesadas en laboratorios de
referencia.(13)
Los principales sistemas de control de calidad se aplican a la fase analtica donde se
controlaran factores crticos que afectan los resultados como son: Personal que realiza
los anlisis, equipos de anlisis (Instrumentos), reactivos, calibradores, tcnicas, etc.
En esta fase se aplican los dos tipos de control de calidad control interno y externo.
La fase post analtica consiste en el anlisis y la interpretacin de los resultados de las
lecturas crudas de los aparatos (raw readings) y la aplicacin de las distintas formas de
35
calculo y formulas para obtener los valores cuantitativos de las unidades de magnitud
que se esten aplicando en su debido momento ej. mg/dl, gr/dl, mmol/lt, UI/lt, etc. Hasta
el mecanografiado de estos resultados para entregar el reporte al paciente o al medico de
este, en esta fase no aplican los dos principales sistemas de control de la calidad.
En la actualidad y con la tendencia del uso de los equipos automatizados y semi-
automatizados, se ha reducido este tipo de practica de interpretacin manual de las
lecturas, ya que los equipos lo realizan de forma automatizada debido a la incorporacin
de sistemas computacionales (software y microprocesadores) en los aparatos, los cuales
despliegan la informacin de los resultados finales con su unidad de magnitud y rangos
de referencia, alarmas, graficas de control de la calidad, etc a las pantallas de las
computadoras para solamente ser validados por un profesional encargado para que esta
sea mandado a un impresor y despus al paciente o al medico. De esta forma se ha
reducido de gran manera el ndice de error humano al analizar las lecturas y al
mecanografiar la informacin final de los resultados.
En una situacin deseable u optima el error en la fase pre y post analtica debe de ser
eliminada o reducida a la mnima expresin para poder obtener resultados confiables.
Pero la tendencia actual en los sistemas automatizados de los laboratorios clnicos
modernos es de reducir al mnimo la injerencia del error humano y de automatizar
todo el proceso en lo que se conoce como el entorno automatizado que consiste en la
automatizacin desde la recepcin hasta la generacin y entrega de resultados. Aunque
siempre existir la intervencin humana en estos procesos, el personal deber de estar
en constante capacitacin para poder responder a los retos y reducir los errores
inherentes al proceso.
Los dos principales sistemas de control de la calidad que miden la fase analtica del
proceso son: Control interno y externo de la calidad.

2.1 TIPOS DE CONTROL DE CALIDAD
Existen muchos ms sistemas de control de calidad, aunque generalmente se trabaja
con dos tipos bsicos de control de calidad que debe poseer un laboratorio, estos son
similares en sus objetivos pero substancialmente diferentes en sus fines.

A. 1 - CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
Es de tipo prospectivo y valida las series analticas o corridas diarias, est basado en el
tiraje de los sueros comerciales y el anlisis de los resultados de acuerdo a la dispersin
de los valores con respecto al valor medio del suero o desviaciones estndares con
respecto a la media (esta informacin es brindada a travs del inserto del fabricante).
En resumen se refiere a cuanto nos alejamos del valor real del suero (hacia arriba o
abajo del valor real) y de esta manera medimos la estimacin del error.

A. 2 - CONTROL EXTERNO DE LA CALIDAD:
Es retrospectivo ofrece una estimacin del error sistemtico de los procedimientos de
medida empleados o de comparacin entre distintos laboratorios.
Estos controles son generalmente proporcionados como requisitos para funcionamiento
y licencias de apertura de laboratorios clnicos de atencin a usuarios. Por lo tanto son
instituciones gubernamentales, asociaciones de profesionales, y compaas
internacionales las que proveen este tipo de servicios. Entre las principales instituciones
tenemos por ejemplo:
-Las juntas de vigilancia de las profesiones ( Ej. JVPLC)
-The College of American Pathologist (CAP)
-La red nacional de bancos de sangre
36
- El laboratorio central del MSPAS, Dr Max Bloch
- La unidad de control de calidad del ISSS (Instituto Salvadoreo del seguro social)
- The American association of clinical chemistry (AACC)
- The American association of bank of blood (AABB)
A.3 - MATERIALES DE CONTROL , HERRAMIENTAS Y SOFTWARE

Los materiales de control de la calidad son esencialmente sueros liofilizados de matriz
variable, a los cuales ya se les conoce el valor de distintos analitos, substratos y enzimas
los cuales han sido cuantificados utiizando distintos mtodos, reactivos y equipos y
cuya informacin es proporcionada a travs de un inserto, en el cual se describe el valor
medio de la sustancia a controlar, el valor mnimo y el valor mximo de este en las
distintas metodologas y aparatos.
Los materiales de control deben de comportarse como muestras reales, ser estables bajo
las condiciones descritas por su fabricante, y tener una variacin mnima en
concentracin y composicin de un vial a otro. Casi todos los materiales de control
preparados de forma comercial son liofilizados y requieren de reconstitucin antes de
usarse. En la reconstitucin, el diluyente se debe de agregar de forma exacta y con
cuidado al mezclar. Este paso es crtico ya que el mezclado incorrecto dar como
resultado valores de los controles fuera de rango.
La mayora de controles son producen a partir de suero, los cuales pueden tener dos
diferentes matrices:
- Suero control de matriz bovina
- Suero control de matriz Humana

Los sueros de matriz bovina son mas baratos que los de matriz humana por lo cual
generalmente son los mas utilizados en muchos laboratorios, para la mayora de las
pruebas los sueros bovinos satisfacen los requisitos necesarios para monitorear la
imprecisin, pero debido a diferencias substanciales entre las protenas bovinas de las
humanas estos no son recomendados en el monitoreo de pruebas como: Ensayos
inmunoquimicos, bilirrubinas, etc.(1)
Los sueros de matriz humana son mejores que los sueros bovinos y segn algunos
autores los materiales de control deben de ser de la misma matriz de las pruebas que se
estn monitoreando ( J. Westgard), pero debido a los altos costos que generan el
tamizaje completo de los sueros en bsqueda de agentes infecciosos( virus HIV, Hbag,
HCV, etc), y a las limitantes existentes en esta materia prima por ser seres humanos, es
que los costos se elevan y no son los controles mas utilizados en los laboratorios
clnicos.
Los materiales de control deben de ser procesados como muestras problema, y sus
resultados deben de ser tomados en cuenta para poder tomar decisiones importantes
dentro de los laboratorios. En el caso del control interno de la calidad, este resultado nos
dar la pauta para poder reportar las corridas diarias que me lleguen al laboratorio en el
caso que los controles den dentro del lmite establecido. De lo contrario cuando se salen
de estos lmites se est en la obligacin de detener el reporte de la corrida diaria y
volver a calibrar de nuevo y tirar otra vez los controles hasta que estos estn dentro de
los valores permitidos de desviacin con respecto a la media.
Por esta razn el tiraje de los controles es esencial en la garanta de la calidad y
repercuten directamente en la credibilidad del laboratorio clnico. Actualmente existen
herramientas estadsticas muy buenas que a partir del uso de software nos llevan el
histrico del mes en corridas de treinta das, donde se muestran los resultados de
37
desviaciones estndar, ndices o coeficientes de variacin, coeficientes de error absoluto
y de error porcentual (Ver fig.16)
Estas estadsticas son importantes debido a que nos permiten ver a travs de los
grficos (Levey-Jennigs) las tendencias de las corridas de los controles en dos series
(una normal y una patolgica) para ver cuando los valores estn o hacia abajo o hacia
arriba de la media o si se estn repitiendo varias veces en un lado especifico de la curva,
esto nos da un panorama ms amplio y permite tener informacin muy puntual para
tomar decisiones especialmente e importante para poder detectar errores sistemticos.
Para conocer ms acerca de la interpretacin de estas curvas, existen actualmente en el
mercado literatura especializada para saber que reglas se estn violando en un proceso
especfico y qu medidas tomar para resolver estos problemas. A estas reglas se les
conoce actualmente como Reglas de Westgard, en alusin a su creador el Dr. James
O. Westgard pHD. Experto mundial y especialista de control de calidad en laboratorio
clnico.

Actualmente en laboratorio clnico existe una tendencia mundial hacia la garanta de
la calidad total en las distintas areas, debido a lo delicado que es un reporte de un
resultado, y las implicaciones legales que a esto lleva. Por esta razn existen en todo el
mundo organizaciones encargadas de la mejora en los sistemas de calidad, esto se vio
reflejado en la aprobacin en 1988 en los Estados Unidos de la ley de mejora en los
laboratorios clnicos, CLIA1988, por sus siglas en ingles, adems de otras normativas
especificas para laboratorios de cuantificacin y anlisis como la normativa ISO 17025,
entre muchas otras ms. Existen tambin organizaciones de profesionales encargados
especficamente de la calidad de sus areas como la American Asociation of Clinical
Chemistry, (AACC) la American Asociation of Bank of Blood (AABB), etc. Que
constantemente realizan reuniones anuales y eventos cientficos-culturales de formacin
continua de los profesionales asociados para poder permitirles tener una licencia que les
permita ejercer la profesin en esos campos especficos.

Al hablar de sistemas de aseguramiento de la calidad, podramos llenar varias
docenas de libros y no terminaramos de agotar el tema, pero lo importante es lograr
despertar la conciencia, (especialmente en el estudiante), de lo importante que esto es,
no solamente porque a la larga sea ms rentable ser confiable, si no porque es
ticamente correcto, ya que debido a la importancia que tienen nuestros resultados, no
podemos arriesgarnos a equivocarnos en los anlisis, ya que detrs de cada reporte
existe una vida humana de por medio, esperando por este, para tomar decisiones que
lleven al mejoramiento de la calidad de vida.
Los procesos automatizados en laboratorio clnico no pueden realizarse sin un sistema
de control de la calidad, ya que estos los traen ya insertos en sus programas y software
internos. Por esta razn debe de estudiarse al menos lo mnimo para conocer en que
consisten y como se aplican, y esto ha sido el objetivo de esta obra.









38
















































Fig. 16. Software de programa de control interno de la calidad que calcula automticamente los ndices de
error absoluto y relativo. (Abajo) Grficos de Levey-Jennigs que calculan la dispersin de los valores de
un control normal de acido rico en un periodo determinado.(Arriba).
39







Fig. 17. Alumno de laboratorio clnico en sus prcticas en el Hospital Nacional Dr. Juan Jos
Fernndez hospital nacional de la Zacamil, y algunos equipos automatizados: Pentra Abx Hematologa,
Hitachi de Roche Diagnostics, Lector de tiras de uroanlisis de Roche diagnostics.




















40
RESUMEN DE FIGURAS E ILUSTRACIONES:

1. Figura N 1: Fotografa de Gustav Robert Kirchhoff quien junto a Robert
Bumsen desarrollaron el primer espectrofotmetro. Ilustracin de Antn Van
Leewenhoek y su primer microscopio.
2. Equipo automatizado de qumica clnica marca Hitachi 912, de Roche
Diagnostics.
3. Espectrofotmetro anlogo marca Perkin Elmer.
4. Los diferentes colores del espectro de luz y sus respectivos manmetros.
5. Colormetro de qumica clnica marca Klett Sumers.
6. Equipo automatizado de qumica clnica marca Archited, de Abbott Diagnostics.
7. Rotor, Brazo automatizado, lector de cdigo de barras de Equipo Hitachi 912.
8. Espectrofotmetro manual de qumica clnica marca UNICO.
Espectrofotmetro semi automatizado marca BTS- 330, de Biosystems.
9. Principio de Coulter. En el que se basan muchos citometros de hematologia
10. Analizador automatizado para coagulacin marca Instrumentation Laboratory
ACL 100.
11. Fotografas de los creadores del efecto Coulter: Joseph y Wallace Coulter.
12. Analizador automatizado de hematologia marca Pentra 80, de ABX company.
13. Reporte de histogramas de equipo automatizado de hematologia y fotografas de
anormalidades en la lnea roja y plaquetaria.
14. Analizador automatizado de Inmunodiagnostico por ELISA marca Axsym de
Abbot Diagnostics.
15. Equipo automatizado de extraccin de componentes sanguneos y su respectivo
cassette desechable marca Trima de Gambro.
16. Software del control interno de la calidad que muestra curvas de Levey and
Jennigs marca Biosystems.
17. Alumno de la carrera de Laboratorio clnico de la UNAB, en prcticas
hospitalarias en el Hospital Nacional Dr Juan Jos Fernndez de la Zacamil,
junto a diferentes tipos de equipos automatizados.
18. Esquema N1: Principio de absorcin de luz por las partculas de un analito
reaccionando en una cubeta. Ley de Beer-Lamber.
19. Esquema N 2: Secuencia de pasos del principio de una prueba de ELISA.
20. Esquema N 3: Prueba de ELISA y su interpretacin en forma de calculo de
corte (Cutt-off) en una prueba infecto contagiosa y las lecturas obtenidas en ella,
para discriminar muestras positivas, negativas e indeterminados.














41

BIBLIOGRAFA


1.- Qumica Clnica, principios, procedimientos y correlaciones Michael Bishop
McGraw hill. 5 Edicin.

2. - La ciencia del diagnostico de laboratorio John Crocker David Burnett McGraw
Hill. 2 Edicin

3. - Basic QC practices, Training in Statistical quality control for Healthcare
Laboratories. James O. Westgard. 2 Edicin.

4.- El control interno de la calidad Javier Gellar, Biosystems Espaa.

5.- Enciclopedia Encarta 2005.

6.- www.historia de la automatizacin.com

7.- www.principio coulter.com






























42