Se trata de una curva de referencia construida con cantidades conocidas
de una sustancia (por ejemplo la albmina srica bovina que vimos antes) que se utiliza para determinar la cantidad de esta sustancia (protenas) presente en una muestra incgnita. En muchas determinaciones se cumple una relacin proporcional entre la magnitud o intensidad de color que da una reaccin y la cantidad del reactivo que la provoca. Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de protenas en una solucin genera la aparicin de un color azul plido cuando es agregada a una mezcla reactiva, la presencia de 20 ug de protena dar lugar a que la solucin se torne azul ms oscuro y as sucesivamente.
Para realizar la experiencia debemos preparar unas diluciones seriadas de albmina srica bovina como las que hicimos antes (ser nuestro estndar o patrn) y dispondremos as de por lo menos 5 concentraciones, luego realizaremos la reaccin qumica correspondiente para desarrollar color y mediremos la intensidad de color de cada solucin. Por ej., partiendo de una solucin madre de 1mg/ml, tendremos 6 tubos as:
La relacin entre intensidad de color y concentracin de la sustancia (una medida de la cantidad de esa sustancia) es proporcional y as, si se grafica el valor de intensidad de color medido con un aparato adecuado (espectrofotmetro o colormetro) en funcin de las concentraciones crecientes de la sustancia se obtiene una recta. Es decir, a mayor cantidad de protena, mayor cantidad de producto de reaccin y por lo tanto, mayor intensidad de color.
Curva de Calibracin Dado que se ha trabajado con datos reales, los grficos que se obtienen no son tan ideales, pero esta situacin no es un obstculo ya que dentro de ciertos valores es posible trazar la recta ms probable que une una serie de puntos, con el uso de los programas de clculo de las computadoras.
Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de concentraciones posibles sino dentro de un conjunto de valores que dependen de numerosos factores dependientes del mtodo de medicin. Por otra parte, este tipo de curvas no se limita solamente a la determinacin de un elemento o compuesto qumico sino que tiene mltiples aplicaciones.