Nmero de colonias en las diferentes diluciones

Tiempo 10
-4

10
-5
10
-6
0 3340, 3245 365, 347 35, 32
15 1100, 1230 102, 113 8, 14
30 673, 652 67, 71 5, 8
Para la prctica de mutagnesis van a calcular:
1) El ttulo de clulas viables de cada tratamiento
Slo puede haber un ttulo por tratamiento, NO por dilucin.
Ejemplo:
Resultados del tratamiento con UV de la cepa E.coli W3350
La siembra se hizo por duplicado,
debemos incluir todos nuestros
resultados de todas nuestras
diluciones
3317 =
3340 + 3245 + 365 + 347 + 35 + 32
2. 2 2
2 cajas de la
dilucin 10
-4
2 cajas de la
dilucin 10
-5
2 cajas de la
dilucin 10
-6
Clculo del ttulo para el tratamiento a tiempo 0:

UFC/ml = 3317 X 1/ 10
-4
X 1/ 0.1 = 3.3 x 10
8
Supongamos que por alguna razn no tienen el nmero de colonias de
una de las cajas de alguna de las diluciones.
Nmero de colonias en las diferentes diluciones
Tiempo 10
-4

10
-5
10
-6
0 3340, 3245 365 35, 32
15 1100, 1230 102, 113 8, 14
30 673, 652 67, 71 5, 8
3309 =
3340 + 3245 + 365 + 35 + 32
2. 1 2
2 cajas de la
dilucin 10
-4
1 caja de la
dilucin 10
-5
2 cajas de la
dilucin 10
-6
Clculo del ttulo para el tratamiento a tiempo 0:

UFC/ml = 3309 X 1/ 10
-4
X 1/ 0.1 = 3.3 x 10
8
3) Grfica.- Obteniendo lo anterior tienen todo para trazar la grfica de porcentaje de
sobrevivencia contra concentracin de hidroxilamina o en su caso tiempo de irradiacin de
luz ultravioleta.

Nmero de colonias en las diferentes diluciones
Tiempo 10
-4

10
-5
10
-6
Ttulo bacteriano %
sobrevivencia
0 3340, 3245 365, 347 35, 32 3.3 x 10
8
100
15 1100, 1230 102, 113 8, 14 1.15 x 10
8
34.8
2) Porcentaje de sobrevivencia.- El 100% estara representado por el ttulo bacteriano de
nuestro testigo (obviamente al que no se le aplic ningn tratamiento). Con una sencilla regla
de tres pueden calcular los porcentajes de sobrevivencia para cada tratamiento.
4) En el cuarto da despus de haber diluido el contenido del tubo 10
0
(resultado de haber
incubado la dilucin 10
-1
de cada tratamiento), de haber sembrado e incubado; contaron
todas las colonias que crecieron y contaron las colonias mutantes.

Con estos datos les piden calcular la Frecuencia de mutacin.
FM =
Ttulo de mutantes
Ttulo de sobrevivientes
Este ttulo se calcula igual que
los ejemplos indicados en el
inciso 1).
FM =
Ttulo de mutantes
Ttulo de sobrevivientes
Nmero de mutantes en las diferentes diluciones
Tiempo 10
-4

10
-5
10
-6
0 0, 0 0, 0 0, 0
15 0, 0 1, 0 4, 0
30 0, 1 0, 0 0, 1
2.25 =
0 + 0 + 1 + 0 + 4 + 0
2. 2 2
2 cajas de la
dilucin 10
-4
2 cajas de la
dilucin 10
-5
2 cajas de la
dilucin 10
-6
Clculo del ttulo de mutantes para el tratamiento a tiempo 15:

UFC/ml = 2.25 X 1/ 10
-4
X 1/ 0.1 = 2.25 x 10
5
Ya lo que nos resta es hacer la divisin
FM =
2.25 x 10
5
3.14 x 10
8
Supongamos que el
ttulo de las
sobrevivientes fue:
= 7.16 x 10
-4
FM= 7 mutantes por cada
10 mil clulas