Obtencin de la enzima:

La cascara se obtuvo de frutos de Carica papaya con dimetro medio comprendido entre 6 y
10 cm. Recogidas en plantas, que son cultivadas en jardines y quintas de Pcia. R. Senz Pea. El
tamao de frutos que se utilizaron para extraer la enzima fue el de mximo crecimiento antes
de su estado de maduracin (verdes). En la extraccin de la enzima desde la cascara se realiz
un pelado, obteniendo un pellet de 1 a 2 mm. de espesor. Se tritur para favorecer la
extraccin con buffer. La extraccin se realiz con buffer fosfato ( Na2HPO4-Ac ctrico) 0.05 N
Ph. 7.0. La muestra se filtr y se centrifug a 3000 g. Todo este proceso se realiz a 25 grados.
La protena disuelta (papana) se midi por espectrofotometra a 280 nm. La cantidad de
sustancia seca obtenida se determino por peso seco constante en estufa a 100 C. Se realiz
una curva de calibracin para comprobar la relacin.
Sustrato:
La protena de soja desgrasada (harina) que se utiliz fue la de grado comercial (Esta se
obtiene luego del proceso de extraccin de aceite en la industria). La solucin de protena
(soja) fue al 0.2% en buffer fosfato, Ph 7.0. Se disolvi y filtro con papel de filtro Watman Nro.
10.
Hidrlisis:
La temperatura de la reaccin de hidrlisis se mantuvo a 40 C con agitacin continua. Para la
evaluacin de la hidrlisis se utilizo la tcnica de la Ninhidrina (Mtodo colorimtrico). Hwang,
1975. La ninhidrina reacciona con los grupos alfa aminocidos libres de los aminocidos,
pptidos y protenas. La reaccin da una coloracin azul violeta dependiendo de la cantidad de
grupos liberados en la hidrlisis previa.
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas 2000
Mtodo: en tubos de ensayos se introdujo 5ml de la mezcla de en solucin de protenas y
enzima reaccionando. Para parar la reaccin se agreg 1ml de ninhidrina al 0.35 % en solucin
alcohlica y se lo calent entre 80 y 100 C.
Preservacin de la actividad proteoltica: Se prob la disminucin de la actividad enzimtica
conservando la enzima a 8C en heladera durante 24 horas.
Melissa Oblitas Ccahuata