Prcticas de Qumica Aplicada V1.

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Grado en Nutricin humana y diettica Curso 2011-2012
1
PRACTICA 1
Determinacin por espectrofotometra de la concentracin de
carbohidratos en una muestra alimentaria.

FUNDAMENTO TERICO

El trmino espectrofotometra se refiere al uso de la luz para medir las concentraciones
de sustancias qumicas.
Cuando una molcula absorbe un fotn, su energa se incrementa. Se dice que pasa a
un estado excitado. Si por el contrario emite un fotn, su energa disminuye. El estado de
menor energa de una molcula se denomina estado basal o fundamental.

En la siguiente figura se describe un esquema bsico de un espectrofotmetro:



P
o
P

Una fuente de luz se hace pasar por un monocromador. ste permite seleccionar un
haz de luz con una nica longitud de onda. Este haz de luz monocromtica incide sobre una
celda de ancho b que contiene la solucin con el analito. Si la solucin absorbe la luz, la
potencia radiante incidente (P
o
)
(1)
del haz de luz disminuye al emerger de la celda. Los
valores de la potencia radiante emergente (P) tienen que cumplir necesariamente la siguiente
relacin:



(1) La potencia radiante se define como energa por unidad de tiempo y por unidad de rea o
seccin.

- Magnitudes en Espectrofotometra

La transmitancia se define de la siguiente forma:
O
P
P
T =

En tanto, la absorbancia se define como:

P
P
T A
o
log log = =

Fuente
de luz
Monocromador
(Seleccin de
longitud de onda)
Celda con
el analito
Detector
de luz
P P
o

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Cuando no se absorbe luz, P = P
o
y por lo tanto A = 0. Cuando se absorbe 90 % del haz de
luz, 10 % de ste se transmite, por lo que P = P
o
/ 10 y A = 1.

- Ley de Beer
c b A =

Donde:
A es la absorbancia (magnitud adimensional)
es un coeficiente de proporcionalidad denominado coeficiente de extincin molar. Indica
la absorbancia de una determinada sustancia a una longitud de onda dada y se expresa
en M
-1
. cm
-1
.
b es el ancho o espesor de la celda donde se deposita la muestra y se expresa en cm.
c es la concentracin expresada en moles / Litro (M)

La ley de Beer establece que la absorbancia es proporcional a la concentracin de las
especies absorbentes. Dicha ley se verifica muy bien en un rango definido de
concentraciones ( 0.01 M). Las desviaciones aparentes de la ley de Beer en soluciones ms
concentradas pueden atribuirse a cambios en las propiedades de las especies absorbentes
de la solucin. Conforme una solucin se vuelve ms concentrada, las molculas de soluto
interactan entre s debido a su proximidad, modificando sus propiedades de absorber la luz.
De ello resulta que la grfica de Absorbancia en funcin de la concentracin pierde su
linealidad.

- Carbohidratos en mostos y reaccin de color

Los hidratos de carbono en los mostos se presentan principalmente en forma de azcares
(glucosa y fructosa). Desde el punto de vista qumico, la glucosa y fructosa son
monosacridos.

La reaccin de color para medir la concentracin de carbohidratos
solubles por espectrofotometra se basa en la utilizacin de un compuesto
llamado antrona que se disuelve en cido sulfrico concentrado. El medio
cido hidroliza el enlace glicosdico de los oligosacridos y los
monosacridos resultantes reaccionan con la antrona (estructura al margen) produciendo un
color verde azulado.

PROTOCOLO EXPERIMENTAL

AVISO IMPORTANTE: NO SE DEBE PIPETEAR NUNCA CON LA BOCA,
SE DEBE USAR SIEMPRE EL PIPETEADOR ADECUADO Y MANTENER LAS PIPETAS LIMPIAS

- Preparacin del reactivo Antrona-Acido Sulfrico.

Disolver 0.2 g de Antrona en 100 mL de Acido Sulfrico 96%. El reactivo sirve para 3-4 das
conservndolo a 0C y en botella de color topacio.
ESTE REACTIVO YA EST PREPARADO Y DEBE SER SOLICITADO AL PROFESOR

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- Preparacin de la curva de calibracin

Se preparan soluciones patrn realizando diluciones seriadas de una solucin madre de
glucosa de 200 mg/L utilizando tubos de vidrio y preparando un volumen mnimo aproximado
de 3 mL de cada una.

Las soluciones patrn que se obtendrn tendrn las siguientes concentraciones:
- 100 mg/L
- 75 mg/L EL DISOLVENTE ES AGUA DESIONIZADA (BOTELLA DE VIDRIO)
- 50 mg/L Y ES PREFERIBLE NO INTRODUCIR LA PIPETA DIRECTAMENTE
- 25 mg/L EN LA BOTELLA Y USAR UN VASO DE PRECIPITADOS
- 10 mg/L MEZCLAR BIEN POR AGITACIN CADA TUBO ANTES DE USAR

IMPORTANTE: LA PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PATRN DEBE
REALIZARSE CON MUCHA ATENCIN!!

- Preparacin de la solucin problema
Se preparan dos diluciones de un volumen mnimo de 5 mL de la solucin problema (mosto)
en tubo de ensayo usando agua desionizada como disolvente. Las diluciones finales son
1/10000 y 1/20000 y se preparan haciendo diluciones seriadas (1/10 1/100 1/1000
1/10000 1/20000).

- Determinacin de la concentracin de azcares solubles en mosto de uva

1. Se rotulan (del 1 al 10) los tubos de vidrio que se utilizarn para medir la curva de
calibracin y la muestra problema. Cada una de las soluciones patrn (incluido el blanco)
se har por uniplicado y las dos muestras problema diluidas se harn por duplicado.
Fjese en la tabla de la pgina siguiente.
2. Se agrega 1.00 mL de solucin patrn al tubo correspondiente, pudiendo emplearse la
misma pipeta en cada tubo. 1.00 mL de agua en el caso del blanco.
3. Se agrega 1.00 mL de muestra problema a los tubos correspondientes, pudiendo
emplearse la misma pipeta en cada tubo pero no se puede emplear la misma pipeta
usada en la solucin patrn.
A PARTIR DE AHORA ES IMPRESCINDIBLE EL USO DE GUANTES DE LATEX.
4. Se agregan a cada tubo 2.00 mL del reactivo de color (antrona H
2
SO
4
) situado en una
botella de color topacio para preservarlo de la luz.
5. Se agita con el agitador de tubos para homogeneizar el reactivo de color (que es muy
viscoso) y la muestra.
ATENCIN: HAY QUE SUJETAR FIRMEMENTE EL TUBO PARA QUE NO SE
SALGA EL LQUIDO (RECUERDE CONTIENE CIDO SULFRICO)
6. Se deja reposar 2 min en un bao de agua fra.
7. Se incuba a 100 C durante 10 min en un bao termostatizado.
8. Se espera hasta que los tubos alcancen la temperatura ambiente en el bao de agua fra
(5 min) y se vierten aproximadamente 2 mL en las cubetas del espectrofotmetro.
9. Se mide la absorbancia a 625 nm (zona visible) en el espectrofotmetro haciendo el cero
previamente con el blanco (tubo 10) y anote el resultado.
10. Muestre los valores al profesor y lave todo el material enjuagndolo con agua destilada.
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1 Patrn 1 1.00 mL sol. Patrn 100 mg/L 2 mL Antrona H
2
SO
4
2 Patrn 2 1.00 mL sol. Patrn 75 mg/L 2 mL Antrona H
2
SO
4

3 Patrn 3 1.00 mL sol. Patrn 50 mg/L 2 mL Antrona H
2
SO
4

4 Patrn 4 1.00 mL sol. Patrn 25 mg/L 2 mL Antrona H
2
SO
4

5 Patrn 5 1.00 mL sol. Patrn 10 mg/L 2 mL Antrona H
2
SO
4


6 y 7 Muestra 1 1.00 mL solucin Problema diluida (1/10000) 2 mL Antrona H
2
SO
4

8 y 9 Muestra 2 1.00 mL solucin Problema diluida (1/20000) 2 mL Antrona H
2
SO
4


10 Blanco 1.00 mL Agua 2 mL Antrona H
2
SO
4


- Clculos

1. Tabule los datos de concentracin (mg de carbohidrato/L) vs Absorbancia (A) en la tabla
inferior. (Indique siempre las unidades pertinentes).
2. Dibuje la grfica Absorbancia en funcin de la Concentracin (mg/L) de la solucin patrn
(colocando la variable independiente en las abscisas y la dependiente en las ordenadas).
3. Ajuste a la mejor recta posible manualmente o mejor por el mtodo de los mnimos
cuadrados con calculadora.
4. Interpole la concentracin en mg/L de los valores de la Absorbancia de las muestras
problema.
5. Multiplique el resultado por el factor de dilucin de las muestras problema y haga la media
(el factor de dilucin es el inverso de la dilucin).
6. Complete el recuadro inferior y exponga el resultado en unidades de porcentaje

Tubo Solucin Concentracin Absorbancia Concentracin [ ]

[ ] x factor de dilucin
1 Patrn 1 100 mg/L ------ ------
2 Patrn 2 75 mg/L ------ ------
3 Patrn 3 50 mg/L ------ ------
4 Patrn 4 25 mg/L ------ ------
5 Patrn 5 10 mg/L ------ ------
6 Muestra 1 ?
7 Muestra 1 ?
8 Muestra 2 ?
9 Muestra 2 ?

MEDIA



Concentracin de carbohidratos totales en el mosto = g/L
= % (p/v)
Concentracin de carbohidratos terica = % (p/v)

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PRACTICA 2

Determinacin de la concentracin de protenas en leche por
espectrofotometra mediante el mtodo de Biuret

FUNDAMENTO TERICO

El objetivo experimental es medir la absorcin de luz por muestras problema para
determinar la cantidad de protena contenida en una muestra de leche. Para ello se utilizar
un mtodo colorimtrico cuyo fundamento terico est explicado en la prctica 1.

- Protenas en la leche y reaccin de color

La Casena es la principal protena de la leche y se encuentra dispersa como un gran
nmero de partculas slidas tan pequeas que no sedimentan, y permanecen en
suspensin. Estas partculas se llaman micelas y la dispersin de las mismas en la leche se
llama suspensin coloidal.

La reaccin de color para medir la concentracin de protenas solubles por
espectrofotometra se basa en la formacin de complejos entre el in cprico y dos cadenas
polipeptdicas contiguas que tengan al menos dos enlaces peptdicos sucesivos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptdicos formando un complejo de color
violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentracin de protenas.

Esta reaccin la producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya
que se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los
aminocidos. Cuando una protena se pone en contacto
con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja
denominada biuret, de frmula:
que, en contacto con una solucin de sulfato cprico
diluida, da una coloracin violeta caracterstica.


PROTOCOLO EXPERIMENTAL

AVISO IMPORTANTE: NO SE DEBE PIPETEAR NUNCA CON LA BOCA,
SE DEBE USAR SIEMPRE EL PIPETEADOR ADECUADO Y MANTENER LAS PIPETAS LIMPIAS

- Preparacin de la curva de calibracin

Se preparan soluciones patrn realizando diluciones seriadas de una solucin madre, ya
preparada, de la protena albmina de suero bovina (BSA) de 10 mg/mL utilizando tubos de
vidrio y preparando un volumen mnimo aproximado de 5 mL de cada una.
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Las soluciones patrn que se obtendrn tendrn las siguientes concentraciones:
- 5 mg/mL
- 3 mg/mL EL DISOLVENTE ES AGUA DESIONIZADA (BOTELLA DE VIDRIO)
- 2 mg/mL Y ES PREFERIBLE NO INTRODUCIR LA PIPETA
- 1 mg/mL DIRECTAMENTE E N LA BOTELLA
- 0.5 mg/mL MEZCLAR BIEN POR AGITACIN CADA TUBO ANTES DE USAR


IMPORTANTE: LA PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES PATRN DEBE
REALIZARSE CON MUCHA ATENCIN!!

- Preparacin del reactivo de Biuret

Se preparan, en un tubo de plstico de 50 mL con tapn azul, 22 mL del reactivo diluyendo el
reactivo de Biuret comercial con NaOH al 10% (p/v) en una relacin de volmenes: 3 de
Biuret ms 2.5 volmenes de NaOH. Mezclar bien con agitacin.

- Preparacin de la solucin problema

Se preparan dos diluciones de aproximadamente 10 mL de la solucin problema (leche) en
tubo de ensayo usando agua desionizada como disolvente. Las diluciones finales son 1/10 y
1/20 y se preparan haciendo diluciones seriadas.

- Determinacin de la concentracin de protenas totales en leche

1.- Se rotulan (del 1 al 10) los tubos de vidrio que se utilizarn para medir la curva de
calibracin y la muestra problema. Cada una de las soluciones patrn (incluido el blanco)
se har por uniplicado mientras que las muestras problema diluidas se harn por
duplicado. Fjese en la tabla de la pgina siguiente.
2.- Se agregan 2.00 mL de solucin patrn al tubo correspondiente, pudiendo emplearse la
misma pipeta en cada tubo. 2.00 mL de agua en el caso del blanco.
3.- Se agregan 2.00 mL de muestra problema a los tubos correspondientes, pudiendo
emplearse la misma pipeta en cada tubo pero no se puede emplear la misma pipeta
usada en la solucin patrn.
4.- Se agregan a cada tubo 2 mL del reactivo de Biuret (sulfato de Cobre(II)-NaOH).
5.- Se mezcla con el agitador de tubos para homogeneizar el reactivo de color y la muestra.

ATENCIN: HAY QUE SUJETAR FIRMEMENTE EL TUBO PARA QUE NO SE SALGA EL
LQUIDO (RECUERDA CONTIENE HIDRXIDO SDICO) NO HACE FALTA USAR
GUANTES DE LATEX

6.- Se dejan reposar los tubos 20 minutos a temperatura ambiente para desarrollar el color.
7.- Se vierten aproximadamente 2 mL en las cubetas de plstico de espectrofotmetro.
8.- Se mide la absorbancia a 540 nm (zona visible) en el espectrofotmetro haciendo el cero
previamente con el blanco (tubo 10) y anotando el resultado.
9.- Muestre los valores al profesor y lave todo el material enjuagndolo con agua destilada.

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1 Patrn 1 2.00 mL sol. Patrn 5 mg/mL 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH

2 Patrn 2 2.00 mL sol. Patrn 3 mg/mL 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH
3 Patrn 3 2.00 mL sol. Patrn 2 mg/mL 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH
4 Patrn 4 2.00 mL sol. Patrn 1 mg/mL 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH
5 Patrn 5 2.00 mL sol. Patrn 0,5 mg/mL 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH

6 y 7 Muestra 1 2.00 mL solucin Problema diluida (1/10) 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH
8 y 9 Muestra 2 2.00 mL solucin Problema diluida (1/20) 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH

10 Blanco 2.00 mL Agua 2 mL Reactivo de Biuret-NaOH


- Clculos

1.- Tabule los datos de concentracin (mg de protena/mL) vs Absorbancia (A) en la tabla
inferior. (Indique siempre las unidades pertinentes).
2.- Dibuje la grfica: Absorbancia en funcin de la Concentracin (mg/mL) de la solucin
patrn (colocando la variable independiente en las abscisas y la dependiente en las
ordenadas).
3.- Ajuste a la mejor recta posible manualmente o mejor por el mtodo de los mnimos
cuadrados con calculadora.
4.- Interpole la concentracin en mg/mL de los valores de la Absorbancia de las muestras
problema.
5.- Multiplique el resultado por el factor de dilucin de las muestras problema y haga la
media (el factor de dilucin es el inverso de la dilucin).
6.- Complete el recuadro inferior y exponga el resultado en unidades de porcentaje.





Tubo Solucin Concentracin Absorbancia Concentracin [ ]

[ ] x factor de dilucin
1 Patrn 1 5 mg/mL ------ ------
2 Patrn 2 3 mg/mL ------ ------
3 Patrn 3 2 mg/mL ------ ------
4 Patrn 4 1 mg/mL ------ ------
5 Patrn 5 0,5 mg/mL ------ ------
6 Muestra 1 ?
7 Muestra 1 ?
8 Muestra 2 ?
9 Muestra 2 ?

MEDIA
Concentracin de Protena total en la leche = g/L
= % (p/v)
Concentracin de Protena indicada en el bote = % (p/v)
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PRACTICA 3

Determinacin de la capacidad amortiguadora de un tampn

FUNDAMENTO TERICO

Una disolucin reguladora, buffer, amortiguadora o tampn, es aquella cuyo pH se mantiene
constante, a pesar del agregado de una pequea cantidad de cido o base.
Tanto para sistemas qumicos como biolgicos, la regulacin del pH es de capital
importancia. Por ejemplo, en algunos sistemas qumicos, es necesario mantener el pH
constante para que una reaccin pueda llevarse a cabo. En Electroqumica, los potenciales
de electrodo y la presencia de especies oxidadas o reducidas de algunos metales es
dependiente del pH y, por ende, se observan cambios de potencial. De esta forma, en
algunas ocasiones, para asegurar la presencia de un metal bajo un determinado estado
redox o forma qumica, es necesario mantener el pH dentro de un rango. En los sistemas
biolgicos es fundamental el mantenimiento del pH dentro de un rango, de ello depende el
ptimo funcionamiento de algunas enzimas y el balance de la presin osmtica.

- Cmo funciona un sistema tampn?

Para comprender la forma en que un sistema tampn es capaz de mantener constante el pH,
analizaremos el caso del sistema cido actico/acetato de sodio.
La constante de disociacin del cido actico (K
a
) se puede expresar como:

K
a
= _[H
+
] [Ac

]_ (1) [H
+
] = K
a
_[HAc]_ (2)
[HAc] [Ac

]

Tomando el logaritmo negativo a ambos lados de la igualdad :

-log[H
+
] = -logK
a
+ log[Ac

]/[HAc] (3)

Que por definicin, se puede expresar como :

pH = pK
a
+ log [Ac

]/[HAc] (4)

La ecuacin (4) se conoce como ECUACIN DE HENDERSON-HASSELBACH.
De acuerdo con la misma, el pH de una disolucin que contenga un cido y su base
conjugada, depender del pKa del cido y del cociente de las concentraciones de ambas
especies. Si ambas especies se encuentran en la misma concentracin, la adicin de un
cido o una base producir poco cambio en el valor del pH.
Veamos un ejemplo numrico. Si las concentraciones del cido y su base son de 1M, el pH
de esta disolucin, de acuerdo con la ecuacin (4) ser:

pH = pK
a
= 4.76

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9
Ahora supongamos que se agregan 0.10 moles de HCl. Los H
+
del mismo reaccionarn con
la base presente de acuerdo con :

Ac

+ H
+
HAc

Observar que se ha despreciado el efecto de la disociacin del HAc. De esta manera, las
concentraciones para el cido y su base sern :

[HAc] = 1.0 + 0.1 = 1.1 M

[Ac

] = 1.0 0.1 = 0.9 M

Lo que sustituyendo en la ecuacin (4), nos da un valor de pH de 4.67. Es decir, que se
produce un cambio de tan slo 0.10 unidades de pH.

Ahora supongamos que son 0.10 moles de NaOH los que se agregan. En este caso, se
producir la neutralizacin de una cantidad equivalente del cido, de acuerdo con :

HAc + OH

Ac

+ H
2
O

Por tanto, las concentraciones del cido y su base conjugada sern :

[HAc] = 1.0 - 0.1 = 0.9 M

[Ac

] = 1.0 + 0.1 = 1.1 M

Con lo que en este caso, el pH ser de 4.84, es decir, se produce un cambio de menos de
0.1 unidades de pH.
Para comprender mejor el efecto de un sistema tampn en la regulacin del pH, basta con
calcular cul hubiera sido el pH de la disolucin despus del agregado de HCl y de NaOH.
En estos casos, por tratarse de cidos y bases fuertes, sus concentraciones sern las que
determinen el pH. Por lo tanto, luego del agregado de HCl, el pH hubiera sido:

pH = - log 0.1 = 1.0

Y luego del agregado de la sosa :

pH = 14 - pOH = 13.0


- Comparacin de distintos tampones:

En el momento de elegir un tampn, debe tenerse en cuenta previamente el valor del pH que
se desea mantener. Para ello, existen tablas donde se tienen los distintos tampones y sus
respectivos pHs. Por ejemplo, en la tabla siguiente se resumen algunos de estos valores, que
cumplen un amplio rango de pH .

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Tampn Rango de pH
NaAc/HAc 3.8-5.8
Ftalato de Na y K/Biftalato de K 4.4-6.4
H
2
CO
3
/NaHCO
3
5.3-7.3
Na
2
HPO
4
/KH
2
PO
4
6.2-8.2
Tris/HCl 7.1-9.1
Borato de Na/Ac. Brico 8.1-10.1
Na
2
CO
3
/NaHCO
3
9.3-11.3
Na
3
PO
4
/NaHPO
4
11.3-13.3
El otro punto que se debe tener en cuenta es su capacidad reguladora.

- Capacidad reguladora de un tampn.

La capacidad reguladora de un tampn permite conocer la efectividad de su accin
amortiguadora, es decir, la capacidad de mantener su pH constante con el agregado de
pequeas cantidades de cidos y bases. En 1922, se defini la capacidad reguladora de un
tampn como la cantidad de cido o base que debe agregarse al tampn para producir un
cambio de una unidad.
B = d(B)/dpH

En las curvas de variacin de capacidad reguladora de los tampones se pueden distinguir
tres zonas: una primera porcin donde la capacidad tamponadora disminuye desde un valor
mximo inicial, una segunda zona donde se observa una campana con un mximo definido
de la capacidad amortiguadora y una ltima porcin donde la capacidad amortiguadora
aumenta nuevamente.
La primera y ltima zona corresponde al cido solo sin el agregado de la sosa y al cido
neutralizado, es decir, donde predomina la presencia de la base agregada. El hecho de que
exista un valor relativamente alto de capacidad reguladora en ambas zonas indica que un
cido y una base son capaces, de por s, de regular el pH. En ambos casos, cuanto ms
fuertes sean stos, mayor ser su capacidad reguladora, puesto que el pH quedar
determinado por su concentracin.
La zona intermedia de la curva es la que nos interesa, puesto que corresponde a la
presencia en la disolucin tanto del cido como de su base conjugada. En ambos casos, se
observa que el mximo de la capacidad reguladora se da en un valor prximo al pK
a
del
cido
cido Actico pK
a
= 4.8
Bicarbonato/Carbonato pK
a
= 10.3
Carbnico/Bicarbonato pK
a
= 6.3

Volviendo a la ecuacin (4), vemos que el pH se iguala al pK
a
cuando las concentraciones
del cido y su base conjugada son iguales.
En otras palabras, la mxima capacidad reguladora se dar en un sistema tampn
compuesto por iguales concentraciones del cido y su base conjugada. En las grficas se
aprecia tambin que el rango de pH en el que se produce el mximo est en el entorno de
dos unidades. De hecho, el rango til de una disolucin tampn se considera que
corresponde a un pH dado por:
pH = pK
a
1
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11
PROTOCOLO EXPERIMENTAL


ATENCIN CADA BURETA EST PREPARADA PARA UNA DISOLUCIN DIFERENTE

LOS pH-METROS SOLO DEBEN SER CALIBRADOS UNA VEZ AL DIA Y EN PRESENCIA
DEL PROFESOR

TAMPON ACETICO-ACETATO

- Materiales y equipamiento

-Disolucin 0.1M de cido actico (50mL) a partir del Ac. Actico glacial.
-Disolucin 0.1N de NaOH (100mL) a partir de la solucin valorada 1N.
-pH-metro.
-Agitador magntico y barrita metlica.
-Pipetas y probetas
-Bureta de 25mL.
-Vaso de precipitados de 50mL.
Datos: La densidad del Ac. Actico glacial es 1,050 Kg/L
Masas molares: cido actico: 60.05 g/mol

- Procedimiento
1. Llene la bureta con la solucin de NaOH (0.1N) y enrase a 0 mL abriendo la espita.
2. Vierta 20mL de la solucin de cido actico (0.1M) en el vaso de precipitados de 50mL
con la barrita metlica.
3. Calibre el pH-metro segn las instrucciones y en presencia del profesor.
4. Coloque el vaso sobre el agitador magntico e introduzca el electrodo del pH-metro con
cuidado para que, al girar, la barrita no golpee en el electrodo. Encienda el agitador.
5. Anote el pH de la disolucin de cido actico (mL de base = 0).
6. Vierta el NaOH desde la bureta en porciones de 1 mL apuntando el pH en la tabla de la
pgina siguiente (mL Base/pH). El pH debe variar con cada adicin aunque sea poco.
7. Termine la valoracin cuando el pH llegue a un valor superior a 12.0. Si es necesario
rellene la bureta con ms solucin de NaOH controlando el volumen aadido.
8. Sin apagar el pH-metro lave el electrodo y coloque su protector.
9. Lave el vaso (atencin con la barrita) y pase las soluciones preparadas y bien etiquetadas
al otro grupo para que realicen ellos la prctica. Pasen a la prctica de sus compaeros.

- Clculos
1. Llene la tabla de datos de la pgina siguiente (mL Base/pH).
2. Traze en una grfica la relacin mL de base agregados vs. pH.
3. Seale en la grfica la zona de amortiguacin y el punto de equivalencia.
4. Determine el pH en el que se produce la mxima capacidad amortiguadora.
5. Compare el valor de pH determinado en el punto anterior con el valor de pK
a
del cido
actico.


pH en el que se produce la mxima capacidad amortiguadora =

pK
a
del cido actico =
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12
mL base pH mL base pH
0
1
2
3
4
5







TAMPON CARBONATO-BICARBONATO

- Materiales y equipamiento

-Disolucin 0.1M de carbonato de sodio (100mL) a partir del compuesto puro.
-Disolucin 0.2M de HCl (100mL) preparada a partir de la solucin de 1M.
-pH-metro.
-Agitador magntico y barrita metlica.
-Pipetas, probetas y esptula
-Bureta de 25mL.
-Vaso de precipitados de 50mL.

Datos: La Masa molar del carbonato de sodio es: 106.0 g/mol


- Procedimiento

1. Llene la bureta con la solucin de HCl (0.2M) y enrase a 0.
2. Vierta 20mL de la solucin de carbonato de sodio (0.1M) en el vaso de precipitados de
50mL con la barrita metlica.
3. Calibre el pH-metro segn las instrucciones y en presencia del profesor.
4. Coloque el vaso sobre el agitador magntico e introduzca el electrodo del pH-metro con
cuidado para que, al girar, la barrita no golpee en el eletrodo. Encienda el agitador.
5. Anote el pH de la disolucin de carbonato (mL de cido = 0).
6. Vierta el HCl desde la bureta en porciones de 0.5 mL apuntando el pH en la tabla de la
pgina siguiente (mL cido/pH). El pH debe variar con cada adicin aunque sea poco.
7. Termine la valoracin cuando el pH llegue a un valor inferior a 2.0. Si es necesario rellene
la bureta con ms solucin de HCl controlando el volumen aadido.
8. Sin apagar el pH-metro lave el electrodo y coloque su protector.
9. Lave el vaso (atencin con la barrita) y pase las soluciones preparadas y bien etiquetadas
al otro grupo para que realicen ellos la prctica. Pasen a la prctica de sus compaeros.
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- Clculos
1. Llene la tabla de datos adjunta (mL cido/pH).
2. Traze en una grfica la relacin mL de cido agregados vs. el pH.
3. Seale en la grfica las zonas de amortiguacin y los puntos de equivalencia.
4. Determine los pHs en los que se produce la mxima capacidad amortiguadora.
5. Compare el valor de los pHs determinados en el punto anterior con los valores de pK
a
del
in bicarbonato y del cido carbnico.
6. Explique las diferencias con la curva de la disolucin reguladora de Actico-acetato.

mL cido pH mL cido pH
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3

















pHs en los que se produce la mxima capacidad amortiguadora =

pK
a
del in bicarbonato = pK
a
del cido carbnico =

Describa las principales diferencias experimentales con la curva de la disolucin
reguladora de Actico-acetato y razones:____________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
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PRACTICA 4
Determinacin de la acidez de un vinagre comercial mediante una
valoracin cido-base utilizando un indicador coloreado

FUNDAMENTO TERICO

ANLISIS VOLUMTRICO

En una titulacin o valoracin volumtrica, el objetivo es determinar la concentracin de una
sustancia X en solucin. Para ello, se debe disponer de una solucin de una sustancia Y de
concentracin exactamente conocida.
La reaccin entre X (el analito) e Y (el agente valorante) debe reunir determinados requisitos
para ser empleada en una titulacin:

ser completa (es decir que debe tener una constante de equilibrio elevada)
ser rpida
poseer una estequiometra definida
no tener reacciones secundarias que interfieran con el anlisis

El procedimiento usual de las valoraciones consiste en aadir desde una bureta, pequeos
volumenes de agente valorante a un volumen conocido (toma) de la solucin de analito.
El momento dnde la cantidad de agente valorante se iguala a la cantidad de analito, se
denomina punto equivalente de la valoracin. Hallarlo es el fin ideal que se persigue en una
titulacin. Sin embargo, en la realidad, lo que se determina es el punto final, caracterizado
por un cambio brusco en alguna propiedad fisicoqumica de la solucin. Los ms usuales
consisten en observar el cambio de color de un indicador, el cambio de Absorbancia con un
espectrofotmetro o la diferencia de potencial entre pares de electrodos sumergidos en la
solucin de analito.
La diferencia entre el punto final y el punto equivalente define el inevitable error de titulacin.

- Indicadores cido - base

Los indicadores cido - base son en general cidos o bases dbiles, cuyas formas disociada
y sin disociar presentan un color diferente. Como se mencion anteriormente, se utilizan para
visualizar el punto final de una valoracin de neutralizacin.
Suponga un indicador cido de frmula HIn, con el siguiente equilibrio:

HIn H
+
+ In
-
K
a

=
[H
+
] . [In
-
]
[HIn]
Dependiendo de cual sea el valor de [H
+
], este equilibrio se encontrar desplazado hacia uno
u otro lado y por lo tanto predominar la especie HIn o la In
-
. El color que presente la solucin
depender de cual sea la especie ms abundante en la solucin.
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Cada indicador tiene un rango de pH en el cual se produce el cambio de color. El mismo
depende del valor de K
a
.
Como regla general, se acepta que un color se visualiza cuando la concentracin de la
especie responsable del mismo es por lo menos 10 veces mayor que la de la otra especie.
En base a esto, el rango de pH en el cual puede apreciarse el cambio de color del indicador,
se ubica en:
rango de pH = pK
a
1
Por lo tanto, el pH de un color a otro vara de pK
a
+1, esto significa un cambio de pH de dos
unidades y el rango de transicin de casi todos los indicadores es de dos unidades de pH.
Si una de las especies es incolora, la percepcin del color de la otra especie es mucho ms
ntida.
Habitualmente, el rango de pH en el cual vira el indicador se determina experimentalmente,
pero en el caso de que no se conozca, puede calcularse a partir de la ecuacin.

Eleccin de un indicador para una volumetra de neutralizacin
El indicador se elige de modo que el pH del punto equivalente est comprendido dentro del
rango de viraje del mismo. Como consecuencia de ello, el viraje del indicador definir un
punto final de la valoracin que no necesariamente coincide con el punto equivalente.
La siguiente tabla muestra una lista de los indicadores cido - base ms comunes, su
concentracin y el solvente dnde se preparan sus soluciones, el color de las especies cida
y bsica y el rango experimental de pH en el que viran.

Indicador

solvente pKa
(H
2
O)
Color
cido bsico
rango pH
Timolftalena EtOH al 90% 9.9 incoloro azul 10.1 - 12.0
Amarillo de Alizarina --- 11.1 amarillo violeta 10.0 - 12.0
Fenolftalena EtOH al 60% 9.3 incoloro rojo 8.0 - 10.0
Rojo Fenol --- 7.8 amarillo rojo 6.4 - 8.0
p-nitrofenol --- 6.6 incoloro amarillo 5.6 - 7.6
Verde de BromoCresol EtOH al 20% 4.7 amarillo azul 3.8 - 5.4
Rojo de Metilo EtOH al 60% 5.0 rojo amarillo 4.2 - 6.2
Anaranjado de Metilo Agua 3.5 rojo amarillo 3.1 - 4.4
Amarillo de Metilo --- 3.3 rojo amarillo 1.2 - 4.0

- Patrones Primarios

La validez de un procedimiento analtico depende del conocimiento de la cantidad de uno de
los reactivos empleados. Hasta el momento, se ha supuesto que se conoce con exactitud la
concentracin del agente valorante Y en la bureta. Se puede conocer dicha concentracin
con exactitud si se disuelve una cantidad pesada de reactivo puro en un volumen conocido
de solucin. En este caso, el reactivo puro se denomina estndar primario o patrn primario,
puesto que tiene suficiente pureza para pesarse y utilizarse directamente. Los patrones
primarios son sustancias que deben reunir determinadas caractersticas para ser empleadas
como tales, a saber:
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pureza absoluta (100,00%) o pureza elevada y conocida
las impurezas que posea eventualmente deben ser conocidas y ser inertes a la reaccin
de inters
no debe descomponerse en condiciones normales de almacenamiento
debe ser estable al secado por calentamiento o vaco
debe mantenerse inalterable al aire durante la pesada
alto peso equivalente (para disminuir los errores en la pesada)
fcil de adquirir y de bajo costo

Ejemplos:

Para estandarizar soluciones cidas
Na
2
B
4
O
7
.10 H
2
O (Brax)
Na
2
CO
3
(Carbonato de Sodio)

Para estandarizar soluciones alcalinas
H
2
C
2
O
4
.2H
2
O (cido Oxlico Dihidratado)

En la mayora de los casos no se dispone de un patrn primario como agente valorante. En
su lugar, se utiliza una solucin de un reactivo (que no constituye patrn primario) de
concentracin aproximada que se valora frente a una solucin de patrn primario. Este
procedimiento se denomina estandarizacin y determina de manera exacta la concentracin
del agente valorante a utilizarse en el anlisis.
La solucin alcalina ms empleada como agente valorante es la de NaOH. El NaOH no
constituye un patrn primario debido a que es un slido higroscpico (absorbe humedad de
la atmsfera) y presenta un peso equivalente bajo. A su vez, debe tenerse en cuenta que las
soluciones alcalinas tienen la propiedad de disolver ms fcilmente el CO
2
atmosfrico,
generndose las siguientes reacciones:

CO
2 (g)
CO
2 (ac)

CO
2 (ac)
+ H
2
O H
2
CO
3 (ac)


H
2
CO
3 (ac)
HCO
3
-
(ac)
+ H
+
(ac)

HCO
3
-
(ac)
CO
3
2-
(ac)
+ H
+
(ac)

La absorcin de CO
2
modifica la concentracin de base fuerte debido a la generacin de
Hidrogeniones en las dos disociaciones que sufre el cido Carbnico.

NOTA Las soluciones alcalinas deben almacenarse en recipientes de plstico ya que
disuelven lentamente el vidrio. No deben permanecer en las buretas ms del tiempo
necesario.
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PROTOCOLO EXPERIMENTAL


- Materiales y equipamiento

-Dilucin 1/10 de vinagre comercial en agua desionizada (50mL)
-Disolucin 0.1N de NaOH (100mL) preparada a partir de la solucin valorada 1N.
-Solucin Indicadora: Fenolftalena al 1% (p/v) en etanol (suministrada)
-Agitador magntico y barrita metlica.
-Pipetas y probetas
-Bureta de 25mL.
-Vaso de precipitados de 100mL.

- Procedimiento

1. Llene la bureta con la solucin de NaOH y enrase a 0.
2. Vierta 20mL de la dilucin de vinagre en el vaso de precipitados con la barrita metlica.
3. Coloque el vaso sobre el agitador magntico y aada 3 o 4 gotas de la solucin
indicadora. Encienda el agitador.
4. Vierta el NaOH desde la bureta gota a gota pero con fluidez.
5. Cuando se empiece a ver un primer cambio de color en la disolucin problema, aada
ms lentamente la disolucin de NaOH.
6. Cierre el paso del NaOH cuando toda la solucin haya virado de color de forma
permanente y anote el volumen de NaOH utilizado.
Si es necesario rellene la bureta con ms solucin de NaOH controlando el volumen aadido.

REPITA TODO EL PROCEDIMIENTO CON OTROS 20 mL DE VINAGRE DILUDO,
PARA ELLO DEBE LAVAR PREVIAMENTE EL VASO DE PRECIPITADOS CON AGUA
DESTILADA Y DESIONIZADA.

SI LA DIFERENCIA ENTRE LAS DOS MEDIDAS FUERA SUPERIOR A 1 ML SE DEBER
REPETIR LA PRCTICA PARA DECIDIR CUAL ES EL VALOR REAL.

Volumen de NaOH utilizado = 1
era
mL; 2 mL; (3 mL)...

Muestre los valores al profesor y despus lave el material enjuagndolo con agua destilada

- Clculos

Las reacciones qumicas de neutralizacin entre un cido y una base siempre tienen lugar
equivalente a equivalente. Por tanto en esta reaccin se cumplir:

nmero de equivalentes-gramo de cido = nmero de equivalentes-gramo de base

Y como: N = n de eq. de soluto/litro de disolucin
se tiene:
nmero de equivalentes-gramo = Normalidad x Volumen de disolucin en litros
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Y por tanto, en nuestra reaccin se cumplir: N
cido
V
cido
= N
base
V
base

y si conozco la normalidad y el volumen de base o de cido necesario para neutralizar un
volumen dado de cido o de base de concentracin desconocida, puedo determinar la
concentracin del cido o base problema.
La acidez total o grado del vinagre se define como la totalidad de los cidos voltiles y fijos
que contiene el vinagre expresada en gramos de actico por 100 mL de vinagre.

Datos: La densidad del vinagre comercial es 1008g/L
Masas molares: cido actico: 60.05 g/mol; H
2
O: 18 g/mol

1. Haga la media de las dos medidas del volumen de NaOH utilizado en la valoracin
Volumen de NaOH utilizado (media de los valores obtenidos) = mL
2. Calcule la Normalidad y la Molaridad del cido contenido en el vinagre (atencin con la
dilucin).
3. Determine la acidez total del vinagre en porcentaje peso/volumen.
4. Compare el resultado con el valor indicado en la botella.










Concentracin de Acido actico en el vinagre = N
= M
Acidez total del vinagre = % (p/v)

Acidez indicada en la botella = % (p/v)