Extraccin de DNA total de E. Coli .

La metodologa siguiente es una de las primeras que se us para la extraccin de

DNA genmico.
Para extraer DNA total es conveniente partir de un cultivo fresco y saturado.
Debido a su gran tamao !." x #$
%
pb&' y a su extrema fragilidad su extraccin debe
reali(arse con sumo cuidado. No se debe usar el vortex en ning)n paso despu*s de que
la lisis celular tuvo lugar. +n cambio debe me(clarse por inversin del tubo eppendorff.
+ste m*todo consta de tres etapas principales, un crecimiento celular' un paso de
lisis que se efectua con liso(ima y -ritn' y un )ltimo paso de precipitacin alco.lica.
Por la gran cantidad de DNA que se logra precipitar es posible verlo como una gran
fibra que se puede extraer fsicamente enroll/ndola en un tip de micropipeta o en una
varilla de vidrio.

a) 0recer un cultivo de 1 ml overnig.t 2"30.
b) Peletear en eppendorff de #.1 ml tres veces' # min. a #!$$$ rpm.
c) 4esuspender en 5$$ ul de -+
d) 0entrifugar #min a #!$$$ rpm
e) Descartar el sobrenadante
f) 4esuspender en 5$$ ul de buffer -+ 16 & a !30 7 5$ 8 de sacarosa .
g) Agregar liso(ima slida punta de esp/tula&. 9ncubar a 2" 30 #1 min.
h) Agregar $.$1 ml +D-A $.1 :' p; <.1&.
i) Aadir $.! ml de -riton #$8. :e(clar por inversion.
j) Agregar $.< vol de isopropanol
k) 9ncubar a =5$30 #$ min.
l) -omar un tips y enrollar en el mismo el ovillo de DNA observable.
m) Pasar a otro eppendorf y de>ar secar .
n) 4edisolver el precipitado en 5$$ ul de ;
5
$
Referencias
#&:olecular cloning. ?ol #. :aniatis
5&+xperiments in :olecular @iology. 0ap # 4obert A. Blater