MICROBIOLOGA CLNICA

Curso 2008 - 2009 (grupo 1)

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Tema 1.- Estructura de los microorganismos. Clulas procariotas y eucariotas. Tama-
o y morfologa de las bacterias. Observacin microscpica de los microorganismos.
Tinciones. Membrana bacteriana y peptidoglicano. Bacterias Gram-positivas y Gram-
negativas. Ribosomas bacterianos. Elementos facultativos de la clula procariota. Cp-
sula y capas mucosa. Apndices bacterianos: flagelos y fmbrias. Endosporas. estruc-
tura de los virus.

1.- INTRODUCCIN

Las enfermedades infecciosas, aunque estn relativamente controladas en los pases
desarrollados, siguen siendo una de las principales causas de mortalidad en los pases en
desarrollo. A este hecho se une la aparicin de nuevas enfermedades infecciosas desco-
nocidas conocidas como enfermedades emergentes (SIDA, Legionelosis, bola, Sn-
drome Respiratorio Agudo Severo o SARS, Gripe Aviar, etc.) y la reaparicin de otras
que haban sido controladas pero que surgen de nuevo presentado nuevas resistencias
(Tuberculosis) conocidas como enfermedades re-emergentes. Por ltimo, hay que se-
alar la alta incidencia de las infecciones hospitalarias (infecciones nosocomiales) pro-
ducidas por patgenos portadores de mltiples factores de resistencia y el aumento de
los segmentos de poblacin especialmente susceptibles a enfermedades infecciosas,
para poder tener una imagen completa de la incidencia de la microbiologa en la sanidad
contempornea.

Por otro lado, la interaccin de los microorganismos que constituyen la flora (micro-
biota) normal con nuestro cuerpo es esencial para el desarrollo correcto de nuestro sis-
tema inmune y vascular. As mismo, la actividad microbiana es tambin esencial para
un correcto procesamiento y absorcin de los alimentos a nivel intestinal.

LOS MICROORGANISMOS Y LA SALUD PBLICA

Las enfermedades infecciosas tienen una relevancia especial en la salud pblica. Las
infecciones vricas o bacterianas ms frecuentes suelen pasar desapercibidas para la ad-
ministracin nacional de salud y slo se tienen datos razonablemente fiables de las en-
fermedades que, por sus especiales caractersticas, son de declaracin obligatoria.

Entre las primeras (sin declaracin obligatoria) debemos contabilizar no slo las en-
fermedades infecciosas comunes que o bien no estn incluidas en brotes epidmicos o,
si lo estn, no requieren ser declaradas individualmente; sino que tambin hay que con-
siderar, en conjunto, las infecciones producidas por lesiones que presentan normalmente
un tratamiento fcil y pronstico favorable.

La incidencia de las enfermedades infecciosas puede valorarse mediante el segui-
miento de los brotes epidmicos de enfermedades transmitidas a travs de los alimentos
y cuya declaracin sea obligatoria y mediante el seguimiento general de las enfermeda-
des de declaracin obligatoria que en 2003 supusieron ms de 1.7 millones de casos en
toda Espaa (Datos del Boletn Epidemiolgico Semanal del Instituto Carlos III) de los
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cuales la gripe (con cerca de 1,5 millones de casos en 2003
1
) y la varicela (con ms de
233.000 casos en 2003
2
) son las de mayor incidencia.

2.- CLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS.

Organismos eucariticos son aquellos en cuyas clulas puede diferenciarse un n-
cleo que contiene el material gentico separado de un citoplasma en el que se encuen-
tran diferentes orgnulos celulares.

Los microorganismos eucariticos ms relevantes en clnica incluyen ciertos anima-
les de pequeo tamao productores de enfermedades parasitarias, protozoos y hongos
unicelulares o pluricelulares.

Organismos procariticos son aquellos en los que no existe la separacin entre n-
cleo y citoplasma. Dentro de este grupo se incluyen las bacterias, a las que dedicaremos
la mayor parte del curso.

Mencin aparte merecen los virus, partculas inanimadas de material gentico prote-
gido por capas ms o menos complejas de protenas y lpidos. Carecen de actividad me-
tablica cuando se encuentran libres.

En general, las clulas procariticas son ms simples que las eucarioticas ya que es-
tas contienen membranas internas que diferencian rganos celulares (aparato de Golgi,
retculo endoplsmico, vacuolas, etc.) no presentes en las clulas procariotas. En estas el
citoplasma es continuo y se encuentra lleno de ribosomas encargados de llevar a cabo la
traduccin del mensaje gentico en protenas.

Las clulas eucariticas son el resultado de una simbiosis establecida hace muchos
millones de aos entre clulas procariticas (que han dado lugar a las mitocondrias) y
un ncleo eucaritico (el ncleo de nuestras clulas). A causa de esta simbiosis, ciertos
agentes qumicos que son activos frente a procariotas pueden resultar txicos para euca-
riotas al actuar sobre sus mitocondrias. Estas simbiosis estables entre organismos de
diferentes orgenes son relativamente frecuentes y se dan en organismos patgenos co-
mo, por ejemplo, el Plasmodium productor de la malaria o paludismo.

3.- TAMAO Y MORFOLOGA DE LAS BACTERIAS.

La forma de las bacterias puede ser esfrica (cocos), cilndrica (bacilos), de coma
(vibrios) o helicoidal (espirilos). La forma de las bacterias viene determinada princi-
palmente por la estructura de su pared celular y es una de las caractersticas que sirven
para identificarlas.


1
La acumulacin de casos de una enfermedad puede variar en distintos aos, as, la acumulacin de casos
declarados de gripe en 2004 fue de poco ms de medio milln de casos, un poco ms de un tercio de los
casos declarados en 2003 (datos de Boletn Epidemiolgico Semanal 12: 292).
2
Incidencia declarada: 178.933 en 2003 y 233.934 en 2004. (Datos del Boletn Epidemiolgico Nacional.
12: 289-296).

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Las bacterias pueden presentarse como clulas aisladas o formando grupos. Esta ca-
racterstica es tambin importante para poder identificarlas. En algunas casos la apari-
cin de las bacterias formando agrupaciones no es una caracterstica de estas in vivo
sino un efecto de ciertas tcnicas de tincin (como en el caso del gnero Staphylococcus
que aparece formando racimos en preparaciones fijadas y teidas; pero no en muestras
vivas).

Las principales formas de agrupamiento de las bacterias son las que se observan en
estreptococos y estreptobacilos (cadenas de cocos o de bacilos, respectivamente), esta-
filococos (agrupaciones en forma de racimos de cocos), diplococos (parejas de cocos)
sarcinas (agrupaciones en ttradas o en grupos de ocho cocos dispuestos en forma de
cubo).

El tamao de las clulas bacterianas es variable oscilando entre una micra (m) de
dimetro y varias decenas de longitud en las especies ms grandes. En cualquier caso,
su tamao es ms reducido que el de una clula eucaritica tpica.

4.- OBSERVACIN MICROSCPICA DE LOS MICROORGANISMOS.

Debido a su pequeo tamao, la observacin de los microorganismos ha de realizarse
mediante el uso de microscopios.

En el caso de la mayora de los microorganismos procariticos, la observacin mi-
croscpica se limita a determinar la forma, el modo de agrupamiento, el movimiento y
la presencia de algunos elementos extracelulares tales como las cpsulas. En el caso de
microorganismos eucariticos, la informacin que se obtiene de la observacin micros-
cpica es mucho mayor porque tambin lo es su diversidad morfolgica y anatmica.

Una consideracin especial requiere el mtodo de tincin de Gram que permite cla-
sificar la mayora de las bacterias en uno de dos grandes grupos cuyas caractersticas
anatmicas y fisiolgicas son diferentes.

Las tcnicas microscpicas ms frecuentes de uso en microbiologa son las de mi-
croscopa ptica normal para observar clulas fijadas y teidas, de contraste de fase
para la observacin de clulas vivas, de fluorescencia para observar clulas marcadas y
de interferencia (Nomarski) para la observacin de clulas vivas. En microscopa elec-
trnica, se usan tanto microscopios de transmisin (MET) como microscopios de ba-
rrido (MEB).

La resolucin que se alcanza en microscopa ptica est en torno a 0,2 m, en MET
puede llegar a los 0,2 nm y en MEB entre 1 y 10 nm.

5.- TINCIONES.

Como se ha indicado en el apartado anterior, la observacin microscpica de bacte-
rias proporciona una cantidad limitada de informacin debido a la reducida variabilidad
morfolgica de estos organismos. La observacin de microorganismos vivos (contraste
de fase) permite obtener informacin relativa a su movilidad y a su tamao. Sin embar-
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go, la mayor parte de la informacin microscpica deriva del examen de muestras fija-
das y teidas.

La fijacin consiste en la precipitacin de las protenas y desecacin de las muestras
mediante tcnicas fsicas o qumicas. En la prctica, la fijacin se suele realizar por ca-
lor con lo que se consigue la desnaturalizacin y desecacin al mismo tiempo que se
adhiere la muestra al portaobjetos en el que se realizar la observacin.

En la mayora de los casos, la fijacin se realiza en muestras que han sido extendidas
sobre el portaobjetos produciendo lo que se denomina un frotis.

Una vez fijada, la muestra se somete a uno o varios procesos de tincin a fin de reve-
lar la morfologa del microorganismo y algunas de sus caractersticas estructurales. En
algunos casos (como el ya citado de Staphylococcus) la fijacin puede dar lugar a agru-
paciones caractersticas de bacterias que permiten su identificacin.

Para realizar la tincin es necesario usar colorantes especficos. Los colorantes se
agrupan en bsicos que tien especialmente bacterias ya que la membrana de estas suele
tener una cierta carga elctrica negativa (a este grupo pertenecen la safranina, fucsina
bsica, cristal violeta y azul de metileno); y cidos ms adecuados para teir clulas
animales en muestras de tejidos infectados. A este ltimo grupo pertenecen la fucsina
cida, la eosina y el rojo Congo.

Para ciertos tipos de tinciones es necesario aumentar la afinidad del colorante por el
microorganismo (o estructura) utilizando substancias que actan como mordientes. Los
mordientes tambin se utilizan para aumentar el grosor de ciertas estructuras como los
flagelos de forma que puedan ser observados al microscopio cuando se tien adecuada-
mente.

Los principales tipos de tincin que se usan en microbiologa clnica son los siguien-
tes:

TINCIN SIMPLE

Permite observar la forma, tamao y agrupamiento de las bacterias usando un nico
colorante (normalmente bsico).

TINCIN DIFERENCIAL

Permiten distinguir diferentes tipos de microorganismos en funcin de sus caracters-
ticas estructurales

Tincin de Gram: es un sistema de dos tinciones simples sucesivas, separadas por
una fase de decoloracin selectiva. Permite diferenciar las bacterias que retienen el pri-
mer color (Gram-positivas) de las que no lo retienen (Gram-negativas). Esta diferencia
en comportamiento refleja diferencias estructurales y fisiolgicas entre ambos grupos de
bacterias.

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Tincin de esporas (Wirtz-Conklin): ciertos tipos de bacterias producen esporas de
resistencia cuya pared celular es caracterstica. La tincin de esporas permite detectar
este tipo de clulas lo que tiene utilidad en la identificacin del microorganismo en es-
tudio.

Tincin de Ziehl-Neelsen (cido-alcohol resistencia): es un tipo especial de tincin
que permite la identificacin de microorganismos de los grupos Mycobacterium y No-
cardia de gran relevancia clnica

Tincin de cpsulas: se trata de una tincin negativa usando tinta china que permite
determinar la presencia de cpsulas polisacardicas.

Tincin de flagelos (Leifson): permite teir flagelos usando un mordiente para in-
crementar su grosor y hacerlos visibles al microscopio ptico.

6.- MEMBRANA BACTERIANA Y PEPTIDOGLICANO.

Las bacterias presentan una membrana interna que rodea el citoplasma bacteriano y
presenta las caractersticas generales de las membranas plasmticas. Hacia el exterior de
la membrana interna, todas las bacterias (con excepcin de los micoplasmas grupo de
organismos al que pertenecen patgenos de los gneros Mycoplasma y Ureaplasma)
presentan una pared celular formada por un polmero complejo denominado peptido-
glicano. Algunos tipos de bacterias tienen una segunda membrana (membrana exter-
na) que recubre la capa de peptidoglicano por su parte exterior. En las bacterias que
tienen membrana externa (bacterias Gram-negativas), el espesor de la capa de pepti-
doglicano es ms reducido que en las que carecen de ella (bacterias Gram-positivas).
Se denomina espacio periplsmico al comprendido entre las membranas interna y ex-
terna en las bacterias Gram-negativas y al inmediatamente adyacente a la membrana
interna en el caso de las bacterias Gram-positivas.

ESTRUCTURA DE LA MEMBRANA INTERNA

La membrana interna est formada por una bicapa lipdica. En las bacterias los lpi-
dos que forman esta membrana son generalmente fosfolpidos y no se encuentran estero-
les (salvo en el caso de los micoplasmas). Esto diferencia claramente las membranas
bacterianas de las de clulas eucariticas que s tienen esteroles en sus membranas

FUNCIONES DE LA MEMBRANA INTERNA

1.- Barrera de permeabilidad selectiva: La membrana lipdica que recubre las clu-
las es impermeable a las molculas cargadas y a los iones, mientras que es permeable a
los compuestos orgnicos y molculas neutras. Por ello es una barrera de permeabilidad
que restringe el paso de los nutrientes al interior de la clula, y el de compuestos intra-
celulares al exterior.

La entrada de compuestos polares a travs de la membrana lipdica se consigue de
varias maneras:

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a.- Poros a travs de la membrana que permiten el paso selectivo de compuestos po-
lares. Estos canales suelen estar dedicados a la entrada de solutos y su entrada est im-
pulsada por la difusin libre a lo largo de un gradiente de concentracin.

b.- Transportadores que recogen del exterior molculas y las introducen al interior
consumiendo energa en el proceso. La energa motriz en este caso es ATP.

c.- En el caso de ciertos iones intracelulares, stos son transportados al exterior me-
diante sistemas de protenas transportadoras de forma que se generan gradientes trans-
membranales. La energa que impulsa este transporte deriva de la oxidacin de com-
puestos reducidos (potencial redox).

d.- En el caso de los protones (H
+
) que se acumulan en el exterior de la clula esta-
blecindose un gradiente a travs de la membrana, la entrada de estos cationes puede
realizarse a travs de canales especializados de forma que la energa que se libera como
consecuencia de la entrada de los protones (destruccin del gradiente) se emplea para la
sntesis de ATP. Estos canales son conocidos como protn-ATPasas.

e.- En el caso de protenas de membrana que han de exportarse al exterior de la clu-
la, stas tienen secuencias especiales en su extremo amino-terminal que las dirigen hacia
la membrana y son procesadas (las secuencias especiales son eliminadas) cuando se
produce el trnsito a travs de la membrana celular.

Los sistemas de transporte activo a travs de la membrana pueden clasificarse en
tres grandes grupos: uniportadores que translocan un solo tipo de molculas, simpor-
tadores que translocan una molcula asociada a otra que se mueve a lo largo de un gra-
diente de concentracin, y antiportadores que son similares a los anteriores pero en los
que la energa liberada por el transporte a favor de gradiente de concentracin se utiliza
para translocar otra molcula en direccin contraria.

2.- Soporte ordenado de sistemas enzimticos: Gran cantidad de reacciones meta-
blicas han de llevarse a cabo por conjuntos de varias enzimas que funcionan en cadena
de forma que los productos de la reaccin catalizada por una enzima son substrato de la
siguiente y as sucesivamente. Para que estas reacciones puedan funcionar eficientemen-
te, es necesario que los constituyentes de estos sistemas multienzimticos estn coloca-
dos correctamente en el espacio de forma que la transferencia de substratos entre ellos
sea la apropiada.

Las membranas biolgicas son un buen soporte de sistemas enzimticos de este tipo
ya que en ellas pueden ordenarse en dos dimensiones los constituyentes de la cadena de
enzimas. Sistemas enzimticos de membrana son los responsables de la cadena respira-
toria, los de sntesis de pared celular, los de generacin de ATP mediante sistemas de
protn-ATPasa, los de recepcin y transmisin de seales al interior celular, etc.

En la membrana interna se encuentran los sistemas enzimticos responsables de la
sntesis de la propia membrana, los sistemas receptores de seales extracelulares (siste-
mas de dos componentes formadas por un receptor de la seal y un transmisor de la se-
al al interior celular), el sistema de transporte de electrones acoplado al transporte de
protones que forma la cadena respiratoria, el sistema de protn ATP-asa responsable de
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la sntesis de ATP, el sistema enzimtico responsable de las ltimas etapas de la sntesis
de la capa de peptidoglicano y los sistemas de transporte a travs de membrana.

Debido a su naturaleza lipdica las propiedades de las membranas cambian con la
temperatura pasando de una estructura de membrana fluida a temperaturas altas (simi-
lares a las ambientales o a las del interior de los organismos donde viven) a una estruc-
tura de membrana cristalina a temperaturas bajas (del entorno de 4C). La condicin
fluida o cristalina de una membrana afecta a su actividad y, por consiguiente, al metabo-
lismo general de la clula.

La integridad de la membrana interna es vital para la clula: si la membrana se rompe
el contenido celular se pierde. Incluso pequeos poros no controlados que se produzcan
accidentalmente en la membrana pueden ser fatales ya que la generacin de la energa
celular es slo posible cuando la membrana interna est ntegra.

Debido a sus especiales caractersticas, la membrana interna es diana para la accin
de diferentes tipos de antibiticos tales como los inhibidores de la sntesis de peptido-
glicano (antibiticos -lactmicos, grupo al que pertenecen la penicilina y sus
derivados) o antibiticos formadores de poros que destruyen los gradientes
transmembranales.
La membrana interna est empujada por la presin de turgor contra la capa de pepti-
doglicano.

ESTRUCTURA DEL PEPTIDOGLICANO

El peptidoglicano es una macromolcula que rodea completamente las clulas bacte-
rianas proporcionndoles resistencia mecnica frente a la presin osmtica y confirin-
doles la forma caracterstica de los diferentes grupos bacterianos. La membrana interna
por s sola no es capaz de soportar la presin de turgor (debida a la presin osmtica) de
la clula bacteriana. El elemento de resistencia mecnica de la clula es la capa de pep-
tidoglicano.

La capa de peptidoglicano est formada por un polmero complejo denominado mu-
rena que forma una macromolcula que recubre completamente la clula.

Estructuralmente est formado por cadenas glucosdicas en las que se repite una uni-
dad elemental de N-acetil-glucosamina unida por un enlace glicosdico 14 a cido
N-acetil-murmico. Las unidades elementales estn tambin unidas entre ellas median-
te enlaces glicosdicos 14. Estas cadenas glucosdicas pueden ser de longitud varia-
ble entre las diferentes especies bacterianas y entre diferentes momentos de la vida de la
bacteria.

Las cadenas glucosdicas estn orientadas de forma paralela y estn unidas entre s
mediante puentes peptdicos formados por cadenas de aminocidos que estn unidos al
resto de cido N-acetil-murmico. La orientacin de las cadenas glicosdicas no se co-
noce con claridad todava: en algunos modelos de peptidoglicano se propone que estn
orientadas de manera perpendicular al eje mayor de la bacteria, mientras que en otros se
propone que se orientan de forma perpendicular a la superficie de la bacteria.

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Las cadenas peptdicas unidas al cido N-acetil-murmico estn formadas por ami-
nocidos en los que se observa una alternancia de restos con configuracin L y con con-
figuracin D. La presencia de D-aminocidos en estas cadenas peptdicas es de la ma-
yor importancia porque prcticamente no se encuentran aminocidos de este tipo en
otras estructuras celulares procariticas y estn ausentes en las estructuras eucariticas.

La capa de peptidoglicano presenta un grosor variable segn las especies bacterianas:
aqullas presentan una reaccin Gram-positiva tienen una gruesa capa de peptidoglica-
no, mientras que las Gram-negativas tienen una capa prcticamente monomolecular.

SNTESIS DE LA CAPA DE PEPTIDOGLICANO

El peptidoglicano se sintetiza por la accin de un conjunto de enzimas situadas en la
membrana interna de la bacteria. La actividad de estas enzimas tiene que estar perfecta-
mente regulada porque simultneamente han de abrir nuevos sitios de crecimiento de la
pared celular cuidando de que no se produzcan fallos en la contencin de la presin os-
mtica intracelular.

Existe una gran cantidad de antibiticos cuya actividad se debe a la inhibicin selec-
tiva de estas molculas de sntesis de pared celular que provocan rpidamente el estalli-
do (lisis) de la clula bacteriana. Algunos actan en etapas tempranas de la sntesis (ci-
closerina, vancomicina, bacitracina) mientras que otros, que contienen un ncleo qumi-
co conocido como anillo -lactmico y, por ello, se denominan antibiticos -
lactmicos de los que el ejemplo representativo es la penicilina, actan en las etapas
finales. Estos antibiticos slo son efectivos cuando la clula est creciendo y, por con-
siguiente, las protenas de sntesis peptidoglicano son activas.

Dada la presencia de aminocidos D en la capa de peptidoglicano, las enzimas res-
ponsables de su sntesis han de tener sus centros activos diseados de forma que puedan
reconocer los aminocidos de esta configuracin. Los antibiticos que inhiben estas
enzimas son totalmente selectivos para bacterias ya que la estructura del peptidoglicano
no se encuentra en otro tipo de clulas.

Las protenas responsables de las etapas finales de la sntesis de peptidoglicano se
conocen como PBP's, del ingls Penicillin-Binding Proteins que hace referencia a su
capacidad de unir penicilina.

FUNCIONES DEL PEPTIDOGLICANO

Proteccin osmtica: Las clulas bacterianas se encuentran en una situacin de ries-
go osmtico permanente: la alta concentracin de los solutos intracelulares crea una
gran presin osmtica que llevara a las clulas a estallar si no contaran con una cubierta
de proteccin.

En este sentido, las funciones de la capa de peptidoglicano son dos:

a.- preservar la integridad de la clula de manera que resista la presin de turgor
b.- conferir una forma definida a la clula bacteriana

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MEMBRANA EXTERNA

Ciertas bacterias presentan una segunda membrana (membrana externa) por el exte-
rior de la capa de peptidoglicano. Estas bacterias presentan una respuesta especial a la
tincin de Gram y se clasifican como Gram-negativas. La membrana externa presenta
ciertas diferencias en su estructura con las membranas clsicas. Las ms relevantes son
la presencia de un lipopolisacrido en su cara exterior y la presencia de porinas.

El lipopolisacrido es una molcula compleja que proyecta hacia el exterior de la c-
lula cadenas de polisacrido: su importancia radica en que es altamente antignico (pro-
voca una fuerte respuesta inmune, endotoxina) siendo uno de los agentes que se apun-
tan como responsables del llamado shock endotxico producido cuando las clulas
del sistema inmune entran en contacto con l.

La funcin del lipopolisacrido en las bacterias es la de incapacitar las defensas del
husped, proporcionar carga negativa a la superficie de la membrana y estabilizarla.

Las variantes de lipopolisacrido de diferentes cepas de una misma bacteria se pue-
den distinguir usando mtodos serolgicos. El antgeno de lipopolisacrido se conoce
como antgeno O.

En las bacterias Gram-positivas, carentes de membrana externa y, por tanto, de lipo-
polisacrido, una funcin equivalente (en la estabilidad de la membrana y en proporcio-
narle carga negativa) a la del lipopolisacrido la realizan los cidos teicoicos.

En la membrana externa se encuentran las porinas que abren vas de entrada de solu-
tos al interior celular. Las porinas son complejos de varias molculas de protena que
forman un canal por el que pueden atravesar la membrana externa molculas de hasta
1000 Da de tamao molecular.

La membrana externa se encuentra unida al peptidoglicano a travs de la protena co-
nocida como lipoprotena de Braun cuya parte lipdica se encuentra en la membrana y
la proteica unida covalentemente a la murena.

La membrana externa tiene unos puntos de contacto con la membrana interna que se
denominan uniones de Bayer y que se supone son importantes en el transporte a travs
e la membrana.

ESPACIO PERIPLSMICO

En las bacterias Gram-negativas, el espacio comprendido entre las membranas inter-
na y externa se denomina espacio periplsmico y comprende un volumen que rodea a la
clula conteniendo gran cantidad de enzimas que permiten procesar los nutrientes para
que puedan ser transportados al interior celular a travs de la membrana interna. Otras
enzimas importantes presentes en el espacio periplsmico son las -lactamasas respon-
sables de la destruccin de los antibiticos -lactmicos y, por tanto, de la resistencia de
ciertas bacterias a ellos.

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En las bacterias Gram-positivas no hay, en realidad, espacio periplsmico; pero se
discute si la parte ms interna del peptidoglicano puede desarrollar una funcin similar
reteniendo mediante fuerzas electrostticas molculas de enzimas equivalentes a las
periplsmicas de Gram-negativas.

7.- BACTERIAS GRAM-POSITIVAS Y GRAM-NEGATIVAS.

Como se ha indicado anteriormente, la mayora de las bacterias pueden clasificarse
en uno de dos grupos diferenciables por medio de la tincin de Gram. Las bacterias
Gram-positivas y las Gram-negativas. Estructuralmente ambos grupos se diferencian
porque las Gram-positivas carecen de membrana externa, tienen una gruesa capa de
peptidoglicano y presentan cidos teicoicos en su superficie, mientras que las Gram-
negativas tienen membrana externa portadora de lipopolisacrido y una capa de pepti-
doglicano ms fina.

En general, las bacterias Gram-negativas suelen presentar mayores problemas de per-
meabilidad a ciertos antibiticos que las Gram-positivas, debido a la doble membrana.
Sin embargo, muchas bacterias Gram-positivas presentan otros mecanismos de resisten-
cia (esporas) de los que carecen las Gram-negativas, y una mayor resistencia a antispti-
cos.

Desde el punto de vista morfolgico, las bacterias Gram-negativas suelen ser bacilos,
comas (Vibrio) o espirilos, mientras que slo en casos muy raros son cocos (Neisseria).
Dentro de las bacterias Gram-positivas encontramos cocos y bacilos.


8.- RIBOSOMAS BACTERIANOS.

Los ribosomas, tanto los procariticos como los eucariticos, estn formados por pro-
tenas y ARN; sin embargo, ambos tipos de constituyentes ribosmicos son diferentes
en procariotas y eucariotas de suerte que puede disponerse de inhibidores (antibiticos)
especficos de ribosomas procariticos que no afectan a los eucariticos y viceversa.


9.- ELEMENTOS FACULTATIVOS DE LA CLULA PROCARIOTA.

Estas ltimas cubiertas no estn presentes en todos los microorganismos y, por con-
siguiente, no pueden considerarse elementos estructurales esenciales, aunque confieren
a los microorganismos que las poseen caractersticas biolgicas particulares.

CPSULA Y CAPAS MUCOSA.

Muchas bacterias presentan en la parte exterior de sus paredes celulares otras capas
que sirven de proteccin y les facilitan la colonizacin de ambientes intracorporales.
Entre estas capas se encuentran cubiertas proteicas que forman una especie de coraza
denominada genricamente capa S, y se encuentran capas de naturaleza polisacardica
denominadas genricamente cpsulas.

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La capa S est formada por protenas y glicoprotenas y participa en la adhesin de
las bacterias a superficies, la proteccin frente a la fagocitosis y acta como barrera
frente a enzimas o substancias que pudieran daar a las bacterias que la poseen.

Las cpsulas estn formadas por polisacridos o polipptidos y participan en la ad-
hesin de las bacterias a superficies, retardan la desecacin de las bacterias en ambien-
tes secos y proporcionan proteccin frente a la fagocitosis. No solo las bacterias presen-
tan cpsulas sino que tambin han sido descritas en algunos hongos unicelulares (Cryp-
tococcus neoformans).

Una caracterstica macroscpica fcilmente observable de los microorganismos con
cpsula es que forman colonias de aspecto mucoso y liso.

Las diferentes variantes de cpsula de distintas cepas de una misma especie se pue-
den identificar mediante mtodos serolgicos. El antgeno capsular se conoce como an-
tgeno K.


10.- APNDICES BACTERIANOS: FLAGELOS Y FMBRIAS.

Las bacterias pueden poseer una serie de apndices celulares que desempean fun-
ciones diversas:

FLAGELOS

La mayora de las bacterias mviles lo son por la accin de los flagelos: estructuras
proteicas cuyas caractersticas pueden ser fcilmente detectadas por medios serolgicos
lo que permite la identificacin de microorganismos o distintas cepas de una misma
especie con facilidad. El antgeno flagelar se conoce como antgeno H.

Las bacterias flageladas pueden tener entre uno y 20 flagelos por clula. Su composi-
cin es proteica y su tamao es de unos 20 nm de dimetro y de entre 5 y 20 m de lon-
gitud.

La funcin de los flagelos es proporcionar movimiento a las bacterias. Cuando este
movimiento se dirige hacia, o en direccin opuesta, a un punto determinado se denomi-
na tactismo, distinguindose los tipos de tactismo por el agente atrayente o repetlente
(fototactismo, quimiotactismo, etc.).

Los flagelos pueden estar colocados alrededor de la clula (peritricos) o en los polos
(polares o lofotricos). El tipo de localizacin de los flagelos se puede identificar estu-
diando la forma del movimiento de la clula.

FIMBRIAS

Son pequeas fibras de naturaleza proteica denominadas que se encuentran en la su-
perficie de muchas especies de bacterias. (entre ellas muchas patgenas). Su nmero
vara entre 100 y 1000 por bacteria y su tamao entre 2 a 9 nm de dimetro y 1 a 5 m
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de longitud. Estas estructuras son de gran importancia en la adhesin de la clula bacte-
riana a las superficies que van a colonizar.

PELO F

Es un tipo especial de fimbria producido por bacterias capaces de transmitir su in-
formacin gentica a otras mediante conjugacin bacteriana. Cuando est presente hay
slo uno por clula. Su naturaleza es proteica. Su longitud llega a alcanzar las 10 m.

PROLONGACIONES DE ADHESIN

Algunos tipos de microorganismos son portadores de prolongaciones con forma de
ventosa que les permiten adherirse a las clulas animales que infectan. Esto ocurre, por
ejemplo, en ciertos micoplasmas.

11.- MATERIAL DE RESERVA

Las bacterias acumulan materiales de reserva en forma de inclusiones de polihi-
droxibutirato, polifosfato, grnulos de azufre, etc.

12.- ENDOSPORAS

Las endosporas (esporas) son formas de resistencia (a la temperatura, agentes qu-
micos y fsicos, desecacin, etc.) que presentan algunas bacterias Gram-positivas (Baci-
llus, Clostridium). La produccin de una endospora por una bacteria es un proceso lento
que requiere un tiempo considerable (horas). Se inicia como respuesta a condiciones
ambientales adversas y culmina con la muerte de la clula madre de la endospora y la
liberacin de esta.

En las esporas el material citoplsmico se ha desecado al mximo y han acumulado
ciertas molculas (cido dipicolnico) que les dotan de una gran termorresistencia. La
pared celular de las esporas es de un tipo de peptidoglicano modificado.

La forma y posicin de la endospora en la clula productora proporciona informacin
sobre qu especie es. Por consiguiente, tiene valor taxonmico.

En general, puede decirse que las esporas son de forma esfrica y suelen aparecer li-
bres, aunque en ocasiones se pueden observar en el interior de las bacterias a las que
deforman de una manera caracterstica, lo que sirve para su identificacin (Clostridium).

14.- ESTRUCTURA DE LOS VIRUS.

Los virus son un complejo grupo de estructuras que slo desarrollan una actividad
metablica cuando se encuentran en el interior de una clula husped. Por consiguiente,
se trata de parsitos obligados que no tienen vida libre. Las partculas de virus libres
metablicamente inactivas se conocen como viriones.

Los virus estn formados por una o varias molculas de material gentico (ADN o
ARN, monocatenario o bicatenario) recubiertas de una capa de protenas que forma la
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cpsida que, a su vez, puede estar recubierta por otras estructuras membranosas en cier-
tos tipos de virus. La forma de los viriones viene determinada por la que adquiere la
cpsida y, generalmente, adopta tres tipos: forma icosadrica (por ejemplo, los adeno-
virus), forma helicoidal (por ejemplo, el virus del mosaico del tabaco) o alargada (por
ejemplo, el virus bola). Dos excepciones a estas formas son algunos virus bacterianos
(bacteriofagos) que tienen cpsulas complejas, y los rhabdovirus (virus de la rabia).

Algunos virus tienen unas estructuras en forma acicular denominadas peplmeros
que les permiten adherirse a las clulas husped que infectan.

15.- PRIONES

En ciertos tipos de enfermedades neurodegenerativas tales como el Alzehimer, Par-
kinson, corea de Huntington y encefalopatas transmisibles tales la enfermedad de Creu-
feldt-J akob, el Insomnio Familiar Fatal, la encefalopata bovina transmisible y el kuru)
se observa la formacin de depsitos de protenas en el cerebro de los pacientes afecta-
dos. Estos depsitos se conocen como amiloides
34,
y estn formados por agregados de
protenas derivadas del tejido nervioso del paciente que se agregan por tener una estruc-
tura terciaria (tridimensional) alterada (no nativa). Parece ser que la transicin de la for-
ma normal no ensamblable la protena a la forma alterada patgena y ensamblable pare-
ce estar provocada por la presencia de esta ltima que induce el cambio conformacional
en las protenas nativas.

Se denominan priones a estas protenas infectivas producidas por un procesamiento
anormal de algunas protenas de la membrana de las clulas eucariticas. Como conse-
cuencia de dicho procesamiento anormal, los priones polimerizan en tejidos tales como
el nervioso dando lugar a diferente patologas.

Existen varios tipos de priones cuya secuencia de aminocidos no tiene relacin entre
s. Es decir: lo caracterstico del prin es que puede sufrir la alteracin estructural para
dar lugar al agregado amiloide, no la secuencia en s del prin.

Un ejemplo de prin es la protena PrP que en la forma nativa (PrP
sen
) no polimeriza
y es sensible a proteasas y en la alterada (PrP
res
) polimeriza y es insensible. La presencia
de PrP
res
induce el cambio de PrP
sen
a adoptar la forma PrP
res
y formar el amiloide. La
protena PrP es una glicoprotena de membrana codificada en nuestro cromosoma 20 y
cuya funcin no est clara. La enfermedad de Creufeldt-J akob es hereditaria y dominan-
te, los afectados tienen una copia de los dos genes de PrP que codifica una forma varian-
te en la que la substitucin de un a minocido da lugar al desarrollo de la enfermedad.
La inyeccin de PrP
res
en animales sanos, tambin produce el desarrollo de la enferme-
dad, a no ser que se trate de animales en los que se ha eliminado experimentalmente el
gen PrP (ver los Postulados de Kock).

Inicialmente los priones eran considerados como virus de desarrollo extremadamente
lento (lentivirus) puesto que las patologas que producan tardaban en manifestarse mu-

3
Nature 437: 197-198
4
Existen algunas otras situaciones en las que se producen depsitos amiloides, tales como la formacin
de fibrillas de
2
-microglobulina en pacientes dializados. No jay que confundir esto con la patologa
causada por priones.
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chos aos. En la actualidad, su naturaleza proteica est claramente aceptada por la co-
munidad cientfica y deben ser estudiados independientemente de los virus.