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Tema 7
Cintica Enzimtica
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1. DEFINICIONES
TEMA 7
CINTICA ENZIMTICA
2. CINTICA ENZIMTICA
3. INHIBICIONES EN REACCIONES ENZIMTICAS
CMO ACTAN LOS ENZIMAS?
MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
INHIBICIN COMPETITIVA Y NO COMPETITIVA
4. MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
REPRESENTACIONES
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DEFINICIONES
DEFINICIONES
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LAS ENZIMAS son protenas (RNA) que catalizan
reacciones qumicas en las clulas.
Cada enzima es altamente especfica para la reaccin
que cataliza.
Esta especificidad est determinada por el centro activo
de la enzima (en donde se hallan los grupos qumicos
responsables de la catlisis).
Muchas enzimas necesitan co-factores (co-reactivos, co-
sustratos) para cumplir su funcin cataltica.
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Son Protenas de alto peso molecular (macromolculas,
10
4
a 10
6
g/mol, 10
2
a 10
4
aminocidos)
Su actividad depende de la integridad de su
conformacin proteica.
Metales pueden formar parte de su centro activo, o de
otra parte de la enzima (co-factor).
Los reactivos de la reacciones catalizadas por enzimas
se denominan sustratos.
Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima
cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta
sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido
de ellos.
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Cmo actan los enzimas?
En una reaccin catalizada por un enzima:
La sustancia sobre la que acta el enzima (sustrato).
El sustrato se une a una regin concreta del enzima (centro
activo).
Un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en
contacto directo con el sustrato.
Un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente
implicados en el mecanismo de la reaccin.
Formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo
ciclo de reaccin
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Hiptesis de la Cerradura y la llave (E. Fischer, 1894)
Hiptesis del Ajuste Inducido (Daniel Koshland, 1958)
E Induce al S a configuracin aproximada al Estado de Transicin
1. UNE S
2. REDUCE E E
a a
3. IMPULSA Catalisis
4. LIBERA P
5. SE REGENERA
Cmo actan los enzimas?
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Estudio de la velocidad de reacciones catalizadas enzimticamente
La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima depende de
1. la concentracin de molculas de sustrato [S]
2. la temperatura
3. la presencia de inhibidores
4. pH del medio, que afecta a la conformacin (estructura
espacial) de la molcula enzimtica
CINTICA ENZIMTICA
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CINTICA ENZIMTICA
Aparentemente:
2
2
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Hiptesis bsicas:
enzima y sustrato forman un complejo intermedio ES
Etapa rpida Etapa lenta
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
Modelo matemtico:
Definiciones:
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
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MODELO DE MICHAELIS-MENTEN
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Representacin de Lineweaver-Burk
Representa 1/v frente a 1/s y permite determinar a partir de medidas
experimentales parmetros bsicos de la cintica enzimtica como la
constante de Michaelis y la velocidad mxima de reaccin
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Representacin de Eadie-Hofstee
[S]
v
m
K
max
V v =
Vmax
Km
v
-Km pendiente=
v
[S]
Vmax
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Representacin de Hanes-Woolf
[S]
[S]
v
-Km
K Km m
V Vmax max
1
Vmax
Pendiente =
[S]
max
V
1
max
V
m
K
v
[S]
+ =
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Vmax
Km
-1/Km Pendiente =
([S]o-[S])
t
Vmax
2,3log[S]o
t [S]
t
[S]) ([S]
K
1
K
V
[S]
[S]
log
t
2,3
o
m m
max o

=
Representacin integrada de Michaelis-Menten
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Inhibicin enzimtica: molculas diferentes del sustrato pueden
unirse al enzima reduciendo total o parcialmente su actividad
cataltica. Estas molculas reciben el nombre de inhibidores
INHIBICIN EN REACCIONES
ENZIMTICAS
Inhibidor no competitivo Inhibidor competitivo
3
3
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El inhibidor reduce la velocidad de reaccin, pero la velocidad mxima
(concentraciones de sustrato grandes) sigue siendo la misma
Inhibicin competitiva
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Inhibicin competitiva
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Inhibicin no competitiva
El inhibidor reduce la velocidad mxima pero K
m
(la afinidad del
enzima por el sustrato) sigue siendo el mismo
Inhibicin no competitiva
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MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R
(relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms
afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio
Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores
positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo.
Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los
moduladores negativos.
4
4
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Modulacin alostrica de la actividad enzimtica
Las molculas que favorecen la forma R
pero que actan sobre una regin del
enzima distinta del centro activo son los
activadores alostricos.
Si los moduladores negativos actan
en lugares distintos del centro activo
del enzima (inhibicin no competitiva)
se llaman inhibidores alostricos.