Arch Argent Pediatr 2010;108(4):343-349 / 343

RESUMEN
Uno de los avances biotecnolgicos ms impor-
tantes de las ltimas dcadas fue el desarrollo
de los animales transgnicos. En este artculo se
analiza por qu los animales transgnicos son
excelentes modelos para estudiar la funcin y
regulacin de los genes y para buscar nuevas
estrategias teraputicas para las enfermedades
humanas. Se discute su uso como biorreactores
para producir productos farmacolgicos para el
tratamiento de enfermedades y la posibilidad de
generar cerdos transgnicos como fuente alter-
nativa a la donacin de rganos.
Palabras clave: animales transgnicos, animales
knockout, animales genoprivos.
SUMMARY
One of the most important advances in biote-
chnology during the last decades was the de-
velopment of transgenic animals. In this article,
I discuss why transgenic animals are excellent
models to analyze gen function and regulation,
and to look for new therapeutic strategies for
human diseases. Moreover, their use as bio-
reactors to produce pharmaceutical products
for the treatment of human diseases, and the
possibility of generating transgenic pigs as an
alternative source of organ donors for humans
is also discussed.
Key words: transgenic animals, knockout animals.
INTRODUCCIN
Hace ya mucho tiempo que la en-
fermedad humana se considera como
el producto de la interaccin entre un
componente gentico predisponente
y un medio ambiente desencadenan-
te. La importancia de la gentica del
individuo en el desarrollo de una en-
fermedad ha hecho que cada vez se
utilice ms la gentica molecular en la
actividad clnica cotidiana (se realizan
diagnsticos por tcnicas moleculares,
se utiliza la terapia gnica como trata-
miento alternativo de algunas enfer-
medades, etc.). Sin embargo, a pesar
de estar transitando la segunda dca-
da del siglo XXI, es llamativo lo poco
que se conoce en el ambiente mdico
sobre las tcnicas surgidas de la biolo-
ga molecular, actualmente de amplio
uso en investigacin y en la prcti-
ca mdica.
1
Sin duda, de los muchos
avances que se obtuvieron en los l-
timos aos, uno de los ms promiso-
rios en la investigacin biomdica fue
el desarrollo de animales transgnicos
y de animales knockout (genoprivos).
El propsito de este artculo es co-
mentar los actuales usos de estos mo-
delos experimentales y su utilidad
biomdica en el presente y a futuro.
ANIMALES TRANSGNICOS
Se considera transgnico todo or-
ganismo vivo manipulado gentica-
mente mediante la insercin de un
gen que no forma parte de su genoma
original. Son muchas las reas en las
cuales los animales transgnicos han
aportado enormes beneficios, tal el
caso del sector pecuario, pero en este
artculo slo desarrollaremos aquellas
de relevancia biomdica.
Animales transgnicos como
modelo de enfermedades humanas:
la enfermedad como expresin
incorrecta de genes
Las caractersticas particulares de
cada tejido dependen de las prote-
nas que sus clulas expresan. Se des-
prende de esto que las enfermedades
de base gentica son el resultado de
la expresin incorrecta de los genes
especficos que codifican para tales
protenas.
Pero al hablar de expresin inco-
rrecta no nos referimos solamente a
la expresin de protenas de funcin
anmala, sino tambin a la expresin
de la protena adecuada en el lugar
Animales transgnicos: usos y limitaciones
en la medicina del siglo XXI
Transgenic animals: uses and limitations in the
21
st
century medicine
a. Servicio de
Pediatra. Hospital
Materno Infantil
de Tigre Dr.
Florencio Escard.
Docencia e
Investigacin.
Secretara de
Poltica Sanitaria y
Desarrollo Humano.
Municipalidad de
Tigre.
Correspondencia:
Dr. Brian M. Cavagnari:
bcavagna@gmail.com
Conflicto de intereses:
Ninguno que declarar.
Recibido: 1-2-10
Aceptado: 11-5-10
Dr. Brian M. Cavagnari
a
Actualizacin
344 / Arch Argent Pediatr 2010;108(4):343-349 / Actualizacin
equivocado (falla en la expresin histoespecfica),
a la expresin de la protena adecuada a destiem-
po (falla en la expresin cronoespecfica) y a la
expresin de la protena adecuada en cantidades
anormalmente altas o bajas.
2
Estas aberraciones son el resultado de muta-
ciones en cualquier regin del gen, sea sta una
regin codificante del mismo o no. Para com-
prender su alcance, debemos repasar algunas
caractersticas del gen eucariota y del flujo de in-
formacin gentica (Figura 1).
El concepto de gen es ms funcional que es-
tructural, ya que un gen no slo incluye a la re-
gin que codificar finalmente los aminocidos
de la futura protena (regin codificante), sino
que incluye a una regin no codificante o regin
reguladora (regin promotora, seales de proce-
samiento y de terminacin, entre otras).
Las regiones no codificantes tienen las se-
cuencias de ADN que le confieren al gen la ex-
presin cronoespecfica e histoespecfica de la
protena que se sintetizar a partir de la regin
codificante del gen.
El promotor del gen es una secuencia de ADN
FIGURA 1. Flujo de informacin gentica
El ADN es un polmero de nucletidos (base nitrogenada unida a una desoxirribosa fosfato). La unin de los nucletidos se
da entre el carbono en posicin 3 de la desoxirribosa de un nucletido y el carbono en posicin 5 de la desoxirribosa del
nucletido adyacente. Esto hace que los enlaces fosfodister dentro de la cadena de nucletidos posean direccionalidad. Para
sealar una posicin dentro del gen, se dice hacia 5 (hacia la izquierda de la figura) o hacia 3 (hacia la derecha de la
figura).
A: Simplificacin de la estructura de un gen eucariota. La regin codificante posee exones (numerados del 1 al 3) e intrones
(i y ii). En la regin reguladora se destacan el promotor y el enhancer o resaltador. El promotor posee un motivo TATA que es
reconocido por una serie de protenas que forman el complejo de transcripcin basal, el cual inicia la transcripcin del gen. El
resaltador puede estar en otro sitio (hacia 5o hacia 3) y en otra orientacin. A l se unen factores que determinan la velocidad
de la transcripcin.
B: Simplificacin de la estructura de un transcripto primario. En este ARN se incluyen tanto los exones como los intrones,
quienes poseen las secuencias necesarias para un correcto corte y empalme. Cabe destacar que la adicin del cap es un proceso
cotranscripcional, aunque se lo considere como una modificacin postranscripcional.
C: Simplificacin de la estructura de un ARNm maduro. Se observan las tres principales modificaciones postranscripcionales:
el corte y empalme, que elimina los intrones dejando unidos a los exones, la adicin del cap a 5 (mencionada en B) y la
poliadenilacin a 3. Este ARNm maduro ser finalmente traducido a una protena.
D: Modificaciones postraduccionales. Son un conjunto de cambios qumicos (glucosilacin, fosforilacin, metilacin, acilacin,
acetilacin, hidroxilacin, carboxilacin, ubiquitinacin, etc.) en algunos aminocidos constituyentes de las protenas que
pueden determinar, entre otras cosas, la actividad, recambio, localizacin, plegamiento y degradacin proteica, as como la
interaccin con otras protenas.
ENHANCER
TATA
PROMOTOR
Regin reguladora
Regin transcripta
Regin codicante
Regin reguladora
Transcripcin
Traduccin
Modicaciones
postranscripcionales
Modicaciones
postraduccionales
1
1
1 3 2
1 1
5
A
B
C
D
3
3
AAAAAAAA
i
i ii
ii 2 3
5
CAP
CAP
PROTENA
Protenas
modicadas
Animales transgnicos: usos y limitaciones en la medicina del siglo XXI / 345
que define el sitio de iniciacin de la transcripcin
del ADN a ARN mensajero (ARNm). Se encuentra
hacia el extremo 5 y posee, aunque no siempre, un
motivo TATA (secuencia de ADN en la regin
promotora) que ser reconocido por un complejo
proteico que finalmente acoplar a la ARN poli-
merasa II. Estas molculas de ADN-protenas for-
man el complejo de transcripcin basal, y son los
propios factores de transcripcin los que se encar-
gan de que la expresin gnica sea histoespecfica.
3
Otras estructuras que forman parte de la re-
gin regulatoria del gen son los denominados
enhancers o resaltadores, que son secuencias de
ADN que actan a distancia del sitio de iniciacin
de la transcripcin. La interaccin de estos resal-
tadores con sus factores de transcripcin provoca
cambios en la velocidad de la transcripcin. De es-
ta forma no slo se regula la expresin o no de un
determinado gen (todo o nada), sino tambin su
velocidad de transcripcin y, en consecuencia, la
mayor o menor cantidad de protena sintetizada.
Hacia 3de la regin codificante, los genes po-
seen regiones que determinan la terminacin de
la copia del ARN y tambin seales que indican
que este transcripto ser modificado mediante la
adicin de una cola de nucletidos de adeni-
na (poliA), que le otorgarn mayor estabilidad
al ARNm.
2
Ya en su regin codificante, la gran mayora de
los genes tiene exones (secuencias de nucletidos
que estarn presentes en el ARNm maduro) que
estn interrumpidos por intrones (segmentos en
la regin codificante del gen que no estarn pre-
sentes en el ARNm maduro).
La regin codificante del gen se transcribe
inicialmente a un transcripto primario (ARN
con intrones y exones) que debe sufrir varias
transformaciones para formar un ARNm madu-
ro. Una de ellas consiste en la eliminacin de los
intrones mediante un proceso de corte y empal-
me (splicing) que deje unidos a los exones. Los
intrones poseen secuencias de ADN especficas
localizadas en sus mrgenes 5 y 3, las uniones
de empalme, necesarias para un corte y empal-
me adecuado. De hecho, muchas enfermeda-
des se producen por mutaciones en las uniones
de empalme. Otras modificaciones que sufre el
transcripto primario son la adicin de una cola
de poliA en su extremo 3 y el agregado en su ex-
tremo 5 de un capuchn o cap (nucletido meti-
lado). Finalmente obtenemos un ARNm maduro,
el cual se transporta al citosol celular para ser
decodificado en los ribosomas y generar as una
protena, en el proceso denominado traduccin.
Vemos as que la informacin necesaria pa-
ra regular la expresin proteica en todos los teji-
dos, est en el ADN de los genes que conforman
los cromosomas humanos. Son los genes los que
tienen las secuencias que regulan la expresin de
estas protenas, los que determinan su adecuada
funcin, su expresin en el lugar y tiempo correc-
tos, y su cantidad.
2
Recordando entonces las distintas aberracio-
nes que se incluyen en el trmino expresin
incorrecta de las protenas y que finalmente lle-
varn al desarrollo de una enfermedad, podemos
comprender a qu nivel gnico se produce cada
una de ellas: las mutaciones en las regiones codi-
ficantes del gen dan como resultado la formacin
de protenas no funcionales o con su funcin al-
terada. Las mutaciones en las regiones regulado-
ras del gen (resaltadores y promotor), alteran el
control transcripcional adecuado del gen en cues-
tin, dando como resultado modificaciones en la
cantidad de protena sintetizada (exceso o defec-
to), as como alteraciones de la histoespecificidad
y cronoespecificidad.
2
Ante este panorama, resulta obvio que para
tener un buen conocimiento de la enfermedad es
necesario comprender la estructura y funcin de
genes especficos y tambin la manera en que es
controlada su expresin, tanto en el estado de sa-
lud como en el de enfermedad. El estudio de esta
fisiologa molecular ha entrado en una nueva fa-
se de revelacin experimental con el advenimien-
to de la transgnesis,
4
ya que estas enfermedades
pueden ser simuladas con animales knockout (ani-
males genoprivos, en donde la expresin de uno
o ms genes se ha hecho inoperativa).
Los ratones knockout son ampliamente utili-
zados para generar modelos de enfermedad hu-
mana debido a su relativo bajo costo y a su corto
perodo de gestacin,
5
pero debido a las diferen-
cias fisiolgicas entre ratones y seres humanos, se
desarrollan da a da animales transgnicos filoge-
nticamente ms cercanos al ser humano.
Al da de hoy, esta tecnologa ha permiti-
do crear una enorme cantidad de enfermeda-
des simuladas. Existen modelos de tumores
del sistema nervioso central,
6
de enfermedad de
Parkinson,
7
de espondiloartropatas,
8
de esqui-
zofrenia,
9
de esclerosis mltiple
10
y de sndrome
metablico,
11
entre muchas otras.
El usar animales de granja transgnicos no s-
lo aporta una ventaja filogentica evidente sino
que nos permite tener perodos de observacin
ms prolongados para estudiar el desarrollo de
las enfermedades humanas. Con esta premisa, se
346 / Arch Argent Pediatr 2010;108(4):343-349 / Actualizacin
protena recombinante deseada en la leche del
animal transgnico.
Actualmente, varias protenas biolgicamente
activas se han producido con animales de gran-
ja transgnicos como biorreactores. Dentro de las
ms destacadas, cabe mencionar al activador ti-
sular del plasmingeno,
22
utilizado en pacientes
con trombosis y producido en la leche de cabras
transgnicas.
En la leche de ovejas transgnicas se obtuvo
la expresin de alfa-antitripsina (tratamiento del
enfisema pulmonar y de la fibrosis qustica)
23
y de
los factores de coagulacin VIII y IX (tratamiento
de la hemofilia A y B, respectivamente).
24,25
La leche de conejos transgnicos se est uti-
lizando para la produccin de calcitonina
26
(tra-
tamiento de la osteoporosis y la hipercalcemia).
Por su parte, en la leche de vacas transgnicas
se estn sintetizando anticuerpos policlonales hu-
manos
27
y lactoferrina humana,
20
entre otras pro-
tenas de alto valor biomdico.
En la Argentina se obtiene actualmente un
alto nivel de expresin de hormona de creci-
miento humana (hasta 5 g/l) en la leche de va-
cas transgnicas.
28
Para comprender el alcance de esta tecnologa,
basta sealar que, segn se calcula, slo 2 anima-
les transgnicos cubriran la necesidad de factor
IX de toda la humanidad
29
y slo 16 vacas transg-
nicas podran satisfacer el requerimiento mundial
de hormona de crecimiento humana.
30
La compleja tarea de generar un animal de
granja transgnico, los costos de su desarrollo y los
minuciosos controles a los que deben ser sometidos
los productos obtenidos por esta va, hacen que to-
dava no se vea reflejado en el mercado todo el po-
tencial de esta tecnologa, pero cada vez se avanza
ms rpidamente para alcanzar este objetivo y ya
se vislumbran los primeros resultados. Tanto Eu-
ropa como EE.UU. han aprobado la venta en sus
mercados de la primera antitrombina alfa humana
obtenida en la leche de cabras transgnicas.
Animales transgnicos para xenotrasplantes
Actualmente, la necesidad de rganos huma-
nos para trasplantes no es cubierta por las do-
naciones, por lo que una fuente alternativa de
rganos podra reducir la distancia entre la oferta
y la demanda. Por esta razn se trabaja en opti-
mizar la donacin de rganos de animales hacia
seres humanos (xenotrasplantes).
Se sabe que el cerdo es el animal que rene las
mejores caractersticas para ser donante de rga-
nos a seres humanos: sus rganos tienen tamao,
han generado cerdos transgnicos como modelo
de retinitis pigmentosa
12
y de enfermedad de Al-
zheimer,
13
as como ovejas transgnicas como mo-
delo de fibrosis qustica.
14
Los animales transgnicos no slo permiten
estudiar la progresin natural de varias enferme-
dades, sino tambin evaluar nuevas estrategias
teraputicas para muchas enfermedades huma-
nas, de una forma imposible de realizar en seres
humanos.
5
Hoy por hoy, la generacin de animales trans-
gnicos es esencial para el estudio in vivo de la
funcin y la regulacin de los genes durante el
desarrollo, la organognesis y el envejecimiento,
as como para el estudio del normal estado de sa-
lud y el desarrollo de la enfermedad.
Animales transgnicos como biorreactores
Un buen sistema de produccin de protenas
recombinantes debe poder elaborar grandes can-
tidades de ellas, asegurar que sean biolgicamen-
te activas e idnticas a las endgenas y tener un
costo razonable.
15
A pesar del menor costo que acarrea producir
biomolculas en microorganismos como bacterias
y levaduras, estos organismos no realizan varias
de las modificaciones postraduccionales que son
requeridas para la correcta funcin in vivo de las
protenas de inters. Por este motivo, es de suma
importancia poder producir altas concentraciones
de estas protenas en animales de granja (filogen-
ticamente ms cercanos al ser humano) que fun-
cionen como biorreactores.
16
Estas protenas de alto inters biomdico pue-
den ser producidas en varios fluidos biolgicos,
como sangre, orina, lquido seminal, saliva y le-
che, en funcin del promotor que se coloque en la
construccin.
17
A modo de ejemplo, se ha podido
obtener eritropoyetina humana recombinante
18
y
alfa-1-antitripsina humana,
19
en orina de ratn,
mediante el promotor de la uromodulina.
No obstante, debido a la gran cantidad de vo-
lumen que se puede obtener y a la facilidad de la
recoleccin, el vehculo de eleccin para la expre-
sin de protenas de valor biomdico en anima-
les transgnicos es la leche. La glndula mamaria
puede expresar ms de 2 g de protena recombi-
nante por litro de leche.
20
Como existen protenas que slo se expresan
en la leche (como la casena, la lactoglobulina
y la protena acdica del suero),
21
si se introdu-
ce por recombinacin homloga el gen de una
protena de inters bajo el promotor de una de
estas protenas, se obtendr la expresin de la
Animales transgnicos: usos y limitaciones en la medicina del siglo XXI / 347
Por otra parte, se ha logrado producir lactofe-
rrina humana en la leche de vacas transgnicas.
20

La lactoferrina humana no slo tiene propiedades
antibacterianas, antifngicas y antivirales, sino que
tambin posee efectos trficos sobre el intestino. El
propsito de producir leche vacuna con lactoferri-
na humana es el de mejorar la defensa inmunol-
gica de los nios alimentados con leche de vaca.
De esta forma, vemos cmo la transgnesis se
utiliza para lograr leches para consumo humano
que puedan suplir deficiencias enzimticas de
la poblacin, que sean aptas para el consumo de
personas alrgicas y, tambin, para mejorar la ca-
lidad de la leche vacuna para aquellos nios que
no pueden ser amamantados por sus madres.
CONCLUSIN
En la actualidad, tanto los procesos fisiolgi-
cos como muchas enfermedades humanas, estn
siendo analizados desde un punto de vista cada
vez ms molecular.
La biologa molecular aplicada a la medicina
trae esperanza para el tratamiento de muchas en-
fermedades que podran llegar a ser corregidas
gracias a la biotecnologa.
Parte importante e innegable de estos avances
cientficos, que ya forman parte de nuestra vida
cotidiana, son los animales transgnicos, que da
a da ayudan a comprender la fisiopatologa de
las enfermedades humanas al mostrar cules son
los genes que se inducen o reprimen y cules las
protenas que se activan o inactivan. Existen or-
ganismos genticamente modificados que son ins-
trumentos para el ensayo de nuevas teraputicas
(frmacos, inhibidores enzimticos, anticuerpos
monoclonales, inhibidores de ARN y terapia g-
nica entre otras);
42,51
asimismo, animales que pue-
den ser potenciales donantes de rganos y que
son diseados estratgicamente para producir en
sus fluidos (principalmente en la leche) protenas
humanas que son clave para el tratamiento de
muchas enfermedades.
En plena poca de avances biotecnolgicos, se
torna casi imprescindible que el mdico genera-
lista conozca las herramientas que ayudan a en-
tender una nueva forma de ver la patologa y que
brindan enormes posibilidades de estudio y de
desarrollo teraputico. Tales herramientas ya no
forman parte de la medicina del futuro, sino de
la del presente.
Agradecimientos
El autor agradece al Dr. Diego J. Rodrguez Gil
(Universidad de Yale, Facultad de Medicina, New
anatoma y fisiologa similares a los del ser hu-
mano, los cerdos son una especie prolfica y de
rpido crecimiento, su mantenimiento es de bajo
costo y existen tcnicas de transgnesis estableci-
das, capaces de modificar la inmunogenicidad de
los rganos porcinos.
16
Uno de los principales obstculos inmunol-
gicos que surge frente a los xenotrasplantes es el
rechazo hiperagudo que se produce ante la pre-
sencia del disacrido galactosa 1-3 galactosa de
la superficie celular de varios mamferos (como
el cerdo) que no se encuentra presente en los se-
res humanos.
31
Otro inconveniente es el rechazo
vascular agudo.
32
Se han desarrollado animales transgnicos ten-
dientes a evitar la respuesta inmunitaria que ac-
tiva la cascada del complemento responsable de
estos rechazos hiperagudo y agudo. Uno de los
principales enfoques fue generar cerdos transg-
nicos que expresen algunas protenas humanas
que inhiben la cascada del complemento, como
hCD59,
33
hCD46
34
y hDAF.
35
Otro enfoque para evitar el rechazo hipera-
gudo que deviene de la reaccin inmunolgica
frente al eptope galactosa 1-3 galactosa, fue desa-
rrollar cerdos genoprivos (knockout) en los cuales
se elimin el gen de la enzima 1-3-galactosiltrans-
ferasa, lo que permite la generacin de animales
que no expresen el eptope responsable del recha-
zo hiperagudo
36
y que, por lo tanto, son candida-
tos para el xenotrasplante. Al da de hoy, se han
creado varios cerdos transgnicos como fuente de
rganos para xenotrasplantes.
37,38
Animales transgnicos como productores
de leche modicada
Otro claro ejemplo de los alcances de la trans-
gnesis es la modificacin de algunos constitu-
yentes de la leche.
Un gran porcentaje de la poblacin mundial,
especialmente la de origen asitico, presenta al-
gn grado de dficit en la actividad de la enzima
lactasa (encargada de la degradacin del princi-
pal azcar de la leche: la lactosa). En el mercado
existen frmulas comerciales de leche deslacto-
sada, pero actualmente se trabaja en el desarrollo
de animales transgnicos que lleven una copia del
gen que codifica para la enzima lactasa, de forma
tal de obtener, directamente del animal, una leche
libre de lactosa apta para el consumo humano.
39
Tambin se trabaja en el desarrollo de ani-
males genoprivos (knockout) para el gen de la
lactoglobulina, para obtener leche destinada a
consumidores alrgicos.
40,41
348 / Arch Argent Pediatr 2010;108(4):343-349 / Actualizacin
Haven, CT, EE.UU.) por la lectura crtica del ma-
nuscrito y por sus oportunas sugerencias. n
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