Figura 1-1. Micrtomo para cortar los tejidos incluidos en parana o en resina. El movimiento de la manivela (en la parte derecha de la gura) hace que el bloque que contiene el fragmento de tejido suba y baje. A cada vuelta de la manivela, el bloque avanza una de- terminada distancia (generalmente, 1-10 m), de manera que al pasar por la cuchilla deja un corte de tejido. (Cortesa de Microm.) Manivela Portabloque Bloque de parana Fragmento de tejido Cuchilla Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-2. Esquema de un microscopio ptico con sus componentes principales y con el trayecto de la luz desde la fuente lumnica hasta el ojo del observador. (Cortesa de Carl Zeiss Co.) Lmpara Lente ocular Prisma Lente objetivo Muestra Platina Condensador Filtro de luz Controles del movimento de la platina Controles de ajuste del foco Espejo Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-3. Clulas de la cresta neural en cultivo estudiadas mediante tres sistemas pticos distintos. La preparacin histolgica no ha sido teida y en las tres imgenes fotogrcas aparecen las mismas clulas; se pueden utilizar las dos clulas pigmentadas para la orientacin en cada imagen. A) Microscopia ptica convencional. B) Microscopia de contraste de fases. C) Microscopia de contraste de fases interferencial, segn Nomarski. Gran aumento. (Cortesa de S. Rogers.) C B A Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-4. Microscopia de luz polarizada. La imagen corresponde a un fragmento de mesenterio de ratn teido con el mtodo del picrosirio, que destaca las bras de colgeno. El mesenterio se co- loca sobre un portaobjetos y se observa por transparencia. Con la luz polarizada, las bras de colgeno muestran una birrefringencia intensa y aparecen brillantes o con coloracin amarilla. Aumento mediano. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-5. Principio de la microscopia confocal. La luz originada en un plano de corte atraviesa un pequeo oricio existente en un obstculo in- terpuesto y llega hasta un detector; mientras tanto, el obstculo bloquea los rayos originados en otros planos. De esta manera, en cada momento slo se visualiza un plano muy no de la muestra estudiada. Plano focalizado Detector Obstculo con oricio Lente Algunos planos focales posibles Muestra histolgica Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-6. Esquema convencional de un microscopio confocal. La iluminacin procedente de una fuente lser alcanza la muestra y se reeja. Un espejo dirige la luz reejada hacia un obstculo que posee un oricio pequeo. El obstculo bloquea la luz procedente de los planos de la muestra que quedan por delante y por detrs del plano focalizado. El lser realiza un barrido de la muestra para que sea posible la visualizacin de un rea mayor del corte histolgico. Detector Obstculo con oricio Fuentes de lser Rastreo de la iluminacin Divisor del haz luminoso Lente Muestra Plano focalizado Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-7. Microfotografa de clulas de rin de hmster en cultivo, teidas con el colorante naranja de acridina. Mediante un microscopio de uorescencia, el ADN (en el interior de los ncleos) emite una luz amarilla, mientras que el citoplasma (con abundante ARN) muestra una coloracin anaranjada. Gran au- mento. (Cortesa de A. Geraldes y J. M. V. Costa.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-8. Imagen fotogrca obtenida con el microscopio electr- nico de transmisin 906E. (Cortesa de Carl Zeiss Co.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Can de electrones Ctodo nodo Bobina elctrica Lente objetivo Lentes protectoras Placa uorescente Placa fotogrca Cmara CCD Columna Ventana de cristal Portamuestras Rejilla de cobre con tres cortes histolgicos Lente condensadora Lente intermedia Figura 1-9. Esquema correspondiente a un microscopio de transmisin con sus componentes principales. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-10. Esquema correspondiente a un microscopio electrnico de barrido con sus componentes principales. Ctodo nodo Lente condensadora Bobina elctrica Lente Rastreador Muestra Monitor Amplicador de la seal Detector de electrones Can de electrones Lente Columna Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-11. Autorradiografas correspondientes a las glndulas salivales submandibulares de un ratn inyectado previamente con 3H-fucosa 8 h antes de su sacricio. A) Con el microscopio ptico se observan grnulos negros de plata (echas) que indican las regiones celulares que presentan radiactividad. La mayor parte de la radiactividad se localiza en los grnulos citoplsmicos de las clulas de los conductos glandulares. Aumento media- no. B) Tejido preparado para su estudio con el microscopio electrnico de transmisin. Se pueden observar los grnulos de plata que aparecen como estructuras con conguracin de ovillos (echas) localizados principalmente sobre los grnulos citoplsmicos (G) y en la luz (L) de los tbulos. Gran aumento. (Cortesa de T. G. Lima y A. Haddad.) A B Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-12. Autorradiografas de cortes histolgicos de rganos de ratn inyectado con 3H-timidina. Las autorradiografas se expusieron durante un tiempo prolongado, por lo que los ncleos radiactivos aparecen fuertemente marcados y cubiertos por una gran cantidad de granos oscuros. A) Se observan numerosas clulas epiteliales en fase de divisin en la base de las glndulas intestinales, sin clulas en fase de reposo en las vellosidades. B) En un corte de ganglio linftico se puede observar que la divisin celular tiene lugar principalmente en los centros germinales de este rgano. (Cortesa de T. M. T. Zorn, M. Soto-Suazo, C.M. R. Pellegrini y W. E. Stumpf.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-13. Microfotografa de broblastos de pollo cultivados e infectados por Trypanosoma cruzi, que aparece en forma de peque- as partculas dispersas en el citoplasma (echas). A pesar de que la separacin entre las clulas no es visible, los ncleos se pueden observar fcilmente (N). Tincin de Giemsa. Aumento mediano. (Cortesa de de S. Yoneda.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Clulas intactas Clulas disociadas Ncleos Mitocondrias y lisosomas Microsomas Membranas de retculo endoplasmtico Ribosomas 1 2 4 3 5 6 Figura 1-14. La tcnica de fraccionamiento celular permite el aislamiento de los componentes de la clula mediante centrifugacin diferencial. La columna de dibujos que aparece en la parte derecha de la gura muestra los orgnulos celulares obtenidos en el fondo de cada uno de los tubos tras la centrifugacin. La fuerza de centrifugacin se expresa en unidades g, equivalentes a una unidad de la fuerza de gravedad. 1) Un fragmento de tejido que se ha troceado con una cuchilla de afeitar o con una tijera y despus se disocia mediante un homogenizador o mediante ultrasonidos. 2) El tejido disociado se mantiene en reposo durante aproximadamente 20 min para que precipiten los grumos que no se han disociado as como las bras de la matriz extracelular. 3) El sobrenadante se centrifuga a 1.000 g durante 20 min; los ncleos quedan precipitados en el fondo del tubo. 4) El sobrenadante se centrifuga a 10.000 g durante 20 min; precipitan las mitocondrias y los lisosomas. 5) El sobrenadante se centrfuga a 105.000 g durante unos 20 min; precipitan los microsomas. 6) El sobrenadante se trata con desoxicolato sdico antes de la centrifugacin; los microsomas se disocian y precipitan por separado como ribosomas y como membranas del retculo endoplasmtico rugoso. (Modicado y reproducido con autorizacin de Bloom W, Fawcett DW: ATextbook of Histology. 9. a ed. Saunders, 1968.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-15. Electromicrografas de tres fracciones celulares aisladas mediante centrifugacin en un gradiente de densidades. A) Fraccin de mitocondrias, contaminada con retculo endoplasmtico. B) Fraccin de microsomas. C) Fraccin de lisosomas. Gran aumento. (Cortesa de P. Baudhuin.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-16. La microfotografa de un corte histolgico de hueso tratado mediante una tcnica histoqumica para demostracin de iones calcio. El precipitado oscuro indica la presencia de fosfato clcico en el hueso y el cartlago calcicado. El tejido cartilaginoso no calcicado (coloracin marrn) aparece en la mitad superior de la imagen. Aumento mediano. (Microfotografa obtenida por P. A. Abrahamsohn.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-17. Microfotografa de un corte de rin tratado mediante el mtodo de Gomori para la demostracin de la enzima fosfatasa alcalina. Las localizaciones en las que se observa la presencia de la enzima (supercie celular) aparecen con coloracin oscura debido al precipitado de las sales de plomo (echas). Aumento mediano. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-18. Deteccin de la fosfatasa cida. Electromicrografa de una clula de un rin de ratn en la que aparecen tres lisosomas (L) junto a un ncleo (N). El depsito oscuro en el interior de estos orgnulos corresponde a fosfato de plomo que precipita en las zonas en donde previamente haba fosfatasa cida. Gran aumento. (Cortesa de E. Katchburian.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-19. Microfotografa correspondiente a una vellosidad intestinal teida con la tcnica del cido perydico de Schiff. La intensa coloracin del borde en cepillo de la supercie celular (echas cortas) as como del producto de secrecin de las clulas caliciformes (echas largas) se debe al elevado contenido en polisacridos en estas estructuras. Corte histolgico teido con hematoxilina (tincin de contraste). Gran aumento. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-20. Las sustancias que presentan una gran anidad por una molcula pueden marcarse y utilizarse para la iden- ticacin de dicha molcula. 1) La molcula A presenta una anidad intensa y especca por una porcin de la molcula B. 2) Si A y B se ponen en contacto, A se une a una porcin de B que reconoce. 3) La molcula A se puede unir a un marcador que sea visible mediante microscopia ptica o electrnica. El marcador puede ser un compuesto uorescente, una en- zima como la peroxidasa, una partcula de oro o un tomo radiactivo. 4) La molcula B se puede detectar en los casos en los que est presente en la clula o en la matriz extracelular incubndola con la molcula A. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-21. Algunos mtodos de separacin de las protenas: ultracentrifugacin (A) y cromatografa (B). A) Una mezcla de protenas obte- nidas a partir de clulas y de tejidos homogeneizados se centrifuga a alta velocidad durante varias horas. Las protenas se separan en bandas, segn el tamao y la densidad de sus molculas. Inmediatamente, se extrae el medio en el que se ha llevado a cabo la centrifugacin y se divide en varias fracciones que contienen las distintas protenas, para su anlisis por separado. B) Se coloca una solucin que contiene una mezcla de protenas sobre una columna ocupada por partculas que muestran propiedades diferentes. Por ejemplo, las partculas pueden presentar cargas electrostticas distintas (atraen las protenas segn su carga) o bien pueden presentar poros (actuando como un cedazo para las molculas de tamaos diferentes). Durante la migracin de las protenas en la columna, su movimiento se retrasa por la interaccin con las partculas. Cuando se ha recorrido todo el lquido de la columna, es posible recoger por separado los distintos grupos de protenas. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-22. Separacin de las protenas mediante electroforesis en gel. A) Aislamiento de las protenas. 1. Se obtienen mezclas de protenas a partir de clulas y tejidos homogeneizados y se tratan con un detergente (dodecil sulfato sdico) y con mercaptoetanol para separar las cadenas y las subunidades de protenas. 2. Las muestras se colocan la porcin superior de una placa de gel de poliacrilamida, que se somete a una corriente elctrica continua. 3. Las protenas presentan migracin a lo largo de un gel, segn su tamao y forma. Sobre el gel tambin se coloca una mezcla de protenas conocidas que sirve como patrn respecto a los pesos moleculares. B) Deteccin e identicacin de las protenas. 1. Tincin. Las protenas se tien y la intensidad de la tincin es proporcional a su concentracin. 2. Autorradiografa. Si algunas de las protenas muestran radiac- tividad, se pueden reconocer mediante autorradiografa. Para ello, se coloca una placa de rayos X sobre el gel durante un cierto tiempo y despus se revela. Las protenas radiactivas se detectan mediante la aparicin de manchas oscuras en la placa de rayos X. 3. Inmunotransferencia. Las protenas pueden transferirse desde el gel a una membrana de nitrocelulosa. Esta membrana se incuba con un anticuerpo que reconoce las protenas que pueden estar presentes en las muestras tisulares. Membrana de nitrocelulosa Protena de peso molecular conocido Muestras histolgicas Gel Gel Gel Gel Gel Fuente de energa Placa de rayos X 1 2 3 1 2 3 A B Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-23. Tcnica de inmunocitoqumica directa. 1) Molcula de inmunoglobulina (Ig). 2) Produccin de anticuerpos policlonales. La protena X de un ratn se inyecta en un animal de otra especie, por ejemplo, en un conejo. El conejo elabora Ig frente a la protena X. 3) Marcaje del anticuerpo. Las Ig del conejo se acoplan a un marcador. 4) Reaccin de inmunocitoqumica. Las Ig marcadas reconocen las diferentes porciones de la protena X presentes en un corte histolgico y se unen a stas; esta unin se puede detectar mediante el microscopio. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-24. Tcnica de inmunocitoqumica indirecta. 1) Produc- cin de un anticuerpo policlonal primario. La protena X de un ratn se inyecta en un animal de otra especie, por ejemplo, en un conejo. El conejo elabora diversas Ig contra la protena X. 2) Produccin de un anticuerpo secundario. La Ig de otro conejo (normal y no inmunizado) se asla e inyecta en un animal de una tercera especie, por ejemplo, una cabra. Se producen Ig de cabra contra Ig de conejo. Las Ig de la cabra se purican y se acoplan a un marcador. 3) Primera etapa de la reaccin inmunocitoqumica. Las Ig del conejo reconocen diversas porciones de la protena X y se unen a stas. 4) Segunda etapa de la reaccin de inmunoci- toqumica. Las Ig de cabra marcadas reconocen las Ig de conejo y se unen a ellas, lo que indica la presencia de la protena X. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-25. Microfotografa de una clula decidual de ratn cultivada in vitro. La protena desmina, que constituye lamentos inter- medios que forman parte del citoesqueleto, se detecta mediante una tcnica de inmunouorescencia (inmunocitoqumica) indirecta. La mayor parte del citoplasma est ocupada por una rejilla de lamentos intermedios. El ncleo (N) aparece en azul. Gran aumento. (Cortesa de F. G. Costa y P. A. Abrahamsohn.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-26. Microfotografa de un corte de intestino delgado en el que se ha aplicado un anticuerpo contra la enzima lisozima para la demostracin de la presencia de lisosomas en los macrfagos y en las clulas de Paneth. La coloracin marrn es el resultado de la reaccin que tiene lugar para demostrar la enzima peroxi- dasa, que es el marcador acoplado al anticuerpo secundario. Los ncleos aparecen teidos con hematoxilina (tincin de contraste). Aumento mediano. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-27. El antgeno carcinoembrionario es una protena pre- sente en diversos tumores malignos, principalmente mamarios e intestinales. Esta microfotografa es una demostracin inmu- nocitoqumica de la presencia del antgeno carcinoembrionario en un corte histolgico correspondiente a un adenocarcinoma del intestino grueso. El anticuerpo est marcado con peroxidasa, que aparece con una coloracin marrn. Tincin de contraste con hematoxilina. Aumento mediano. Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-28. Corte histolgico correspondiente a una clula acinar pancretica incubada con un anticuerpo frente a la amilasa e incu- bada de nuevo inmediatamente despus con la protena A marcada con partculas de oro. La protena A tiene una gran anidad por las molculas del anticuerpo. Las partculas de oro aparecen en forma de pequeos puntos negros sobre los grnulos de secrecin maduros y sobre los grnulos inmaduros en fase de formacin en el complejo de Golgi. Electromicrografa. Gran aumento. (Cortesa Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-29. Corte histolgico correspondiente a un tumor epitelial benigno (condiloma) estudiado mediante hibridacin in situ. Las zonas de coloracin marrn se localizan en las reas donde existe ADN del virus del papiloma humano tipo 2 (HPVII). Tincin de contraste con hematoxilina. Aumento mediano. (Cortesa de J. E. Levi.) Junqueira y Carneiro: Histologa bsica. Masson, Barcelona, 2005 Figura 1-30. Forma que adoptan diferentes estructuras tridi- mensionales cuando se seccionan en cortes finos. A) Diferentes secciones en una esfera hueca y en un tubo hueco. B) Un corte a lo largo de un nico tubo enrollado se puede observar como si fueran cortes de varios tubos. C) Los cortes efectuados a travs de una esfera slida y a travs de un cilindro slido pueden ser semejantes.