CURSO SOBRE PARASITOLOGA PRCTICA VETERINARIA, RECOLECCIN Y CONSERVACIN DE MUESTRAS Pgina 1 de 10

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA

PARASITOLOGA PRACTICA VETERINARIA


RECOLECCIN Y CONSERVACIN DE MUESTRAS

Edison A. Cardona Z
1
. y Jorge A. Quijano C
2
.


INTRODUCCIN

Los parsitos y algunas de sus formas evolutivas, tienen diferentes localizaciones en el husped,
por lo tanto, la recoleccin y conservacin de la muestra para su identificacin depende del
parsito que se desea diagnosticar.

Para llegar a un diagnstico preciso es importante que las muestras sean recolectadas y
conservadas de una forma correcta para as evitar que el examen se dificulte o no sea correcto.

Toma de materia fecal

La recoleccin de materia fecal sirve para diagnosticar parsitos que viven en el canal
digestivo, conductos biliares y en el sistema respiratorio, donde producen huevos, larvas,
trophozoitos o quistes, que salen del husped con las heces. En ciertas ocasiones, en los
excrementos pueden verse parsitos adultos, especialmente cuando el husped tiene enteritis.
Adems, muchos caros productores de la sarna ( Sarcoptes scabiei var. canis) pueden ser
deglutidos cunado el perro se rasca o muerde por el prurito que el parsito ocasiona y de esta
forma aparecer en las heces.

Las heces destinadas al examen parasitolgico deben ser siempre frescas y tomadas
directamente del recto, con el fin de impedir la contaminacin con tierra, paja e incluso con
materia feca1 de otros animales. La muestra, de heces no debe recogerse del suelo, ya que
pueden ser invadidas por nemtodos de vida libre o caros que dificultan el diagnstico. En caso
de no poderse tomar la muestra directamente del recto, sta puede ser recogida con cuidado,
inmediatamente despus de la expulsin, evitando tornar muestras que estn en contacto con el
suelo. Sin embargo, la recoleccin de la muestra directamente del recto es lo ms conveniente,
ya que resulta ms seguro el dictamen emitido por el laboratorio.


1
Mdico Veterinario, Registro profesional. N 08097; Especialista en Diagnstico de Enfermedades Parasitarias; Magster en
Entomologa.. Doctorando en Biologa. Coordinador Lnea de Investigacin en Entomologa y Parasitologa Veterinaria, Grupo
Centauro, Categora A. COLCIENCIAS 2005. Facultad de Ciencias Agrarias Universidad de Antioquia. Medelln -
Colombia. E-mail: parasitocard61@yahoo.es

2
Mdico Veterinario, Especialista en Parasitologa Veterinaria. Profesor jubilado. Facultad de Ciencias Agrarias Universidad
de Antioquia. Medelln - Colombia

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Si las heces no estn frescas, se pueden llegar a deshidratar haciendo difcil la suspensin,
adems se desarrollan clulas aisladas que forman larvas, los ooquistes de coccidias esporulan y
en muchas ocasiones pueden no aparecer protozoos parsitos pero s huevos y larvas de moscas
que dificultan el diagnstico.

El tamao de la maestra est directamente relacionada con la especie animal y debido al
contenido alimenticio se puede asegurar una mayor cantidad de herbvoros que de carnvoros.
En trminos generales, la cantidad de heces debe ser de 20 gramos.

Si la defecacin no provee suficiente material, la muestra debe ser tomada directamente del
recto, o la defecacin puede ser inducida rpidamente con un, supositorio hecho de jabn de
barra. La muestra tambin puede ser obtenida haciendo un enema con agua, pero la dilucin
generalmente se hace indeseable. Los enemas oleosos o jabonosos no deben ser usados. Las
muestras fecales removidas de termmetros, rara vez dan una cantidad satisfactoria de la
muestra.

Las heces deben ser depositadas en frascos pequeos de boca ancha, o en cajas metlicas o de
plstico. El recipiente debe llenarse completamente para eliminar todo el aire y as disminuir la
velocidad de desarrollo y eclosin de los huevos. Si de momento se carece de estos recipientes,
las muestras pueden envolverse temporalmente en, papel celofn o parafinado pero nunca en
papel peridico.

Conservacin

Si el material fecal requiere ser transportado por varias horas, o no es posible su examen el
mismo da, se debe conservar con algn preservativo para impedir el desarrollo de huevos y
larvas. El preservativo ms til es la formalina (formol) al 10% (1 parte de formaldehido al 40%
ms tres partes de agua), la cantidad a usar es de 1 ml de formaldehido por cada 10 gramos de
muestra (8-10 veces el volumen de la muestra), de manera que el medio fijador haga contacto
con todas las partculas de heces; igualmente, algunos utilizan fijar las muestras con alcohol al
70%, aunque es de menor valor. La refrigeracin tambin mantiene las muestras en buenas
condiciones por varios das. Cuando la investigacin se refiere a la identificacin de parsitos
pulmonares o cuando haya necesidad de hacer cultivo, las materias fecales deben ir sin
ningn preservativo.

Para el examen, de coccidias se recomienda que las heces estn frescas o se conserven en una
solucin de bicromato de potasio al 2% . Si en las materias fecales se busca la presencia de la
fase de trophozoito de un protozoo (Entamoeba sp., Giardia sp. ), estas muestras se deben
examinar inmediatamente, evitando la refrigeracin o la adicin de cualquier preservativo.


Toda muestra que se enve al laboratorio para su diagnstico, debe estar bien identificada.

Cuando se desee realizar el chequeo de un hato, se puede tomar materia fecal a un 10% del total
de animales.

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Recoleccin de sangre

La sangre de los animales domsticos, puede estar invadida por varios agentes patgenos y no
patgenos . Ciertos parsitos entran a la sangre ya sea para tener una localizacin primaria en
ella, o para utilizarla corno medio de transporte a otros lugares del cuerpo donde completan su
desarrollo. Entre los parsitos que invaden la sangre se encuentran muchas especies de
protozoos (Babesia, Trypanosoma, Plasmodium, Toxoplasma, etc.) Rickettsias (Anaplasma),
algunas especies de larvas y adultos de Tremtodos (Dicrocoelium), ocasionalmente larvas de
tenias (Cysticercus cellulosae. Quiste hidatdico), varias especies de larvas y adultos de
Nemtodos (Dirofilaria, Setaria, etc), estados inmaduros y maduros de caros ( Demodex
canis).

Algunos parsitos llegan a la sangre penetrando activamente a travs de la piel o membranas
mucosas. Otros son introducidos pasivamente a travs de helmintos, picaduras de insectos,
caros y garrapatas.

La sangre circulante tal como la tomada de la vena yugular o de la vena ceflica, puede ser
considerada como no satisfactoria en cualquier infeccin, pero primordialmente en infecciones
graves puesto que hay una gran dilucin (separacin) de clulas infectadas. La sangre capilar
perifrica es ms satisfactoria, por la razn de que hay una mayor concentracin de clulas
infectadas en estos vasos sanguneos. Tambin se ha observado que en infecciones leves; los
parsitos se encuentran ms fcilmente en sangre capilar que en sangre circulante.

Sin embargo, en la mayora de las infecciones la sangre se toma de una vena superficial del
cuerpo que facilita la operacin. Para sangrar bovinos, ovinos y caprinos, se emplea la vena
yugular, la vena abdominal subcutnea y la auricular (vena marginal de la oreja); en caballos se
usa la vena yugular; en cerdos se emplea la vena cava anterior, la auricular y coccgea (mediante
corte de la punta de la cola). Los carnvoros y felinos se sangran de la vena radial y safena, pero
es mejor obtener la sangre de la vena yugular; en gallinas se usa la vena cutnea del ala o la
(regin interna del ala); los animales de laboratorio como conejos, cobayos, ratones y animales
de tamao similar se sangran ms fcilmente del corazn. Los conejos y liebres se pueden
sangrar tambin de la vena auricular. En el caso de tomar la sangre de la vena auricular, se
golpea la oreja varias veces para dilatar la vena (tambin se puede frotar la oreja con algodn
impregnado en alcohol). Luego se corta el pelo de una pequea zona, se desinfecta, la vena se
comprime fuertemente con el dedo pulgar y la aguja (puede ser calibre 18) se introduce en el
vaso sanguneo en ngulo agudo (45). Los ratones se sangran fcilmente de la cola. Para la
obtencin de la maestra de sangre es indispensable que todo el material (jeringas, agujas, tubos,
etc) est limpio y seco. A veces se requiere que todo el material sea estril. Para evitar la
transmisin de parsitos sanguneos de un animal a otro, las agujas deben estar esterilizadas y
usar una aguja para cada animal.

La muestra de sangre puede enviarse al laboratorio en un frotis sanguneo, en tubos con o sin
anticoagulante. La sangre recogida en un frasco con anticoagulante se debe agitar ligeramente
para que el anticoagulante se incorpore. El frasco no se debe llenar completamente porque se
favorece la coagulacin.

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La sangre para el diagnstico directo (preparaciones frescas, frotis, tcnica de anticuerpos
fluorescentes ) debe tomarse con anticoagulante y son suficientes 2 ml de sangre.

Para el diagnstico indirecto (Pruebas serolgicas) la sangre debe tornarse sin anticoagulante,
para que coagule y de esta manera obtener el suero sanguneo . El suero sanguneo debe
separarse del cogulo centrifugando a ms tardar 6 horas despus de la obtencin, el demorar
ms tiempo ocasiona que el suero se contamine o se obtenga hemolizado. Para el diagnstico
indirecto son suficientes 5 ml de sangre.

La sangre obtenida debe procesarse lo ms pronto posible, pero algunas veces no se examina y
en este caso es necesario conservarlas. El mtodo de conservacin (refrigeracin, congelacin,
etc) depende del tiempo que ha de transcurrir entre la obtencin de la muestra y su arribo al
laboratorio, adems, del fin para el cual se destina, la muestra.

Si las muestras han sido tomadas con material adecuado y con anticoagulante, corno el cido
etileno diaminotetractico (EDTA), pueden conservarse por 48 horas aproximadamente para el
examen hematolgico ordinario. La conservacin de la muestra puede prolongarse
refrigerndola a una temperatura de + 4 C a + 6 C, pero entre ms se demore el anlisis de la
muestra despus de su obtencin, mayor es el deterioro celular.

Cuando la sangre no es obtenida en condiciones estriles, su deterioro puede ser ms rpido por
la contaminacin bacterial. La sangre puede tambin alterarse, cuando durante la labor de toma
de muestras no se protege de moscas y rayos solares.

Los frotis sanguneos son muy estables, si son adecuadamente fijados en alcohol metlico
qumicamente puro ( metanol) y libre de humedad. Estas extensiones no coloreadas, pueden
conservarse despus de fijadas con alcohol metlico indefinidamente en el congelador. Los frotis
deben protegerse de polvo, de rayaduras, de moscas y de los rayos del sol.

Para transportar frotis sanguneos si no se tienen cajas donde se puedan guardar las lminas
separadamente en espacios individuales, deben colocarse de dos en dos con la superficie del
frotis de sangre hacia adentro y separados con cerillas o palillos introducidos entre cada uno de
los extremos de la lamina. Toda extensin de sanare debe ser correctamente identificada.

De los parsitos sanguneos, el ms sensible en cuanto a tiempo y cambio de temperatura, es
Trypanosoma. El ms resistente es Anaplasma y Babesia ocupa un lugar intermedio. Anaplasma
y Babesia pueden permanecer vivos por varias semanas a temperatura de refrigeracin y por
meses y an aos a temperatura de congelacin , especialmente si se usan medios
"Crioprotectivos". Trypanosoma rpidamente pierde motilidad y muere a temperatura de
refrigeracin. Se pueden mantener trypanosomas vivos algunas pocas horas cuando la muestra
de sangre se mantiene a temperatura corporal.

Cuando la muestra de sangre hay que conservarla en, refrigeracin por varios das, es necesario
que el material usado est completamente estril.

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El suero sanguneo puede conservarse por congelacin por mucho tiempo (1 ao a menos 20
C, y por tiempo indefinido a menos 80C). La contaminacin bacterial de los sueros que se
almacenan a temperatura de refrigeracin, se evita agregando al suero fenol al O, 5%.


Recoleccin de orina

En el sistema urinario de carnvoros y porcinos viven algunos parsitos, de ah que para su
diagnstico es necesario examinar la orina para determinar la presencia de huevos o parsitos
adultos.

Para la recoleccin de orina es necesario emplear un recipiente limpio. La toma de orina no es
siempre una tarea sencilla, la muestra se recoge durante la miccin o por sondeo y debe
depositarse en un frasco de vidrio bien cerrado para su envo al laboratorio. En las hembras lo
ms prctico es extraer la orina mediante cateterismo. En caballos y toros la orina puede
reunirse en un recipiente sujeto a la pared abdominal y frente al orificio prepucic

Parea la conservacin de la muestra se puede usar formalina al 40% (2 gotas por cada 30-40 ml
de orina), la refrigeracin preserva la muestra por corto tiempo.


Recoleccin de secrecin, vaginal, uterina y prepucial

Las muestras tomadas del aparato genital femenino y masculino de los vacunos, sirve para el
diagnstico de Tritrichomonas foetus. Este parsito puede demostrarse en las descargas
vaginales o uterinas, en las membranas fetales, placenta, en el lquido amnitico y alantoideo, en
el contenido estomacal del feto abortado, en el lquido oral u otros tejidos del feto despus del
aborto. Cuando este material no est disponible, las descargas uterinas deben ser recolectadas de
la vaca y esto es mejor hacerlo 2 a 3 das antes del siguiente calor. En el toro, el mejor origen de
material es el lavado prepucial, rara vez el lquido seminal.

En todos los procesos para la recoleccin de la muestra, se debe evitar la contaminacin con
materia, fecal, ya que sta puede dar entrada a protozoos intestinales que fcilmente pueden, ser
confundidos con Tritrichomonas foetus. Para evitar la contaminacin, tanto la vulva como el
orificio prepucial deben ser lavados antes de tomar la muestra, pero sin usar jabn ni antisptico
alguno .

La secrecin vaginal se toma de la regin vagino-cervical con ayuda de una mota de algodn
humedecido con solucin salina fisiolgica de 0.85%, o bien inyectando la misma solucin la
que seguidamente es recuperada.

La secrecin uterina se recoge por irrigacin del otero con solucin salida fisiolgica de 0.85%,
que se recupera a continuacin . No se deben tomar muestras de las vacas que estn en celo, ya
que en este momento el moco eliminado dificulta el diagnstico.

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Lavado prepucial : Antes de realizar este lavado, se debe limpiar el prepucio, cortar los pelos
alrededor del orificio prepucial y estimular la miccin. Para el lavado se utiliza solucin salina
fisiolgica de 0.85% y el frasco que contiene tal solucin debe colocarse por algunos minutos en
agua caliente, antes de realizar, dicho lavado con el fin de evitar un choque trmico que
inmovilice los parsitos.

No debe hacerse lavado prepucial hasta los siete (7) das siguientes de haberse utilizado el toro
para la monta o recoleccin, de semen. Todas las muestras en machos y en hembras deben
tomarse aspticamente y utilizar material estril.

Las Trichomonas son ms numerosas en la vagina dos a tres semanas despus de la infeccin.
En el toro, la densidad flucta y el intervalo entre extremos mximos es de 5 - 10 das .

El producto recolectado debe estar envuelto y protegido de modo que no se enfre por debajo de
5C pues de lo contrario resulta intil para la investigacin o diagnstico, por lo tanto, la
muestra no debe refrigerarse. Las trichomonas pierden rpidamente su motilidad, por
consiguiente, los exmenes microscpicos o los cultivos deben efectuarse lo ms pronto posible,
a ms tardar dentro de las 24 horas siguientes a la recoleccin de la muestra.


Recoleccin de leche

Varias especies de animales se llegan a infectar a travs del calostro y/o leche materna con
larvas de varios helmintos que llegan a la glndula mamaria por su migracin en el husped.

Entre los nemtodos que se transmiten por el calostro y/o leche estn los siguientes:
Ancylostoma caninum y Toxocara canis en el perro; Neoascaris vitulorum en vacuno;
Stroagyloides papillosus en el vacauno y la oveja; Toxocara cati en gatos; Stronyloides ransomi
en cerdos y Strongyloides westeri en equinos.

Antes de recolectar la muestra, los pezones se lavan y limpian, con una solucin antisptica. Se
eliminan las primeras gotas de calostro o leche y se recogen las ltimas en un tubo de ensayo
limpio. Cuando sea necesario se puede aplicar oxitocina. La leche se diluye con igual volmen
de solucin salina fisiolgica y se puede conservar en refrigeracin.


Recoleccin de pasto

La determinacin de la concentracin de larvas infectivas de nemtodos en los pastos es un
idicatio de la infeccin a que se hallan expuestos los animales en pastoreo. Del pasto se
recuperan larvas infectivas de nemtodos gastrointestinales de bovino, ovino, caprino y equino.
Tambin se recuperan larvas de parsitos pulmonares.

Las muestras de pastos (300-500 gramos) se toman de varios lugares del potrero a una altura
aproximada de 5 cm del suelo y en las horas de la maana, ya que los rayos del sol hacen que las
larvas busquen los lugares ms oscuros y con suficiente humedad. Las muestras recolectadas
deben procesarse rpidamente para evitar la muerte de las larvas.
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Recoleccin de Artrpodos

Los artrpodos existentes en la piel del husped pueden, ser descubiertos a simple vista o
tambin mediante examen microscpico por raspado de piel, de costras, de escaras, de ndulos y
descamaciones.

caros productores de sarna

Solo los caros de mayor tamao son perceptibles a simple vista (preferiblemente con una lupa)
y aun as solamente cuando se encuentran en la superficie de la piel o entre sta y las
descamaciones epidrmicas (en la sarna de las ovejas, del conejo y carnvoros domsticos). Este
examen por lo tanto solo tiene un carcter orientador, de ah que debe realizarse un raspado de
piel.

Raspado de piel

El material debe tomarse de varias zonas afectadas y en cantidad suficiente. En todos los casos
en que se sospeche de sarna, debe cortarse el pelo o la lana y conviene eliminar las costras o
escaras ms gruesas y superficiales.

Es ms conveniente hacer el raspado del borde de la lesin que del centro pues los caros son
ms abundantes en la periferia que en el centro. Para facilitar el raspado se humedece el rea con
glicerina al 50% (tambin puede usarse aceite mineral) y luego se hace un doblez en la piel del
animal a nivel del rea sospechosa, se raspa varias veces la parte superficial del doblez con una
hoja de bistur hasta que brote sangre libremente. El producto se deposita en una lmina
portaobjetos y se cubre con una laminilla, o tambin se puede conservar por muy corto tiempo
en un tubo de ensayo seco y limpio.

Cuando se sospeche sarna, de la oreja de perros, gatos, conejos, es suficiente desprender el
material escamoso del odo externo con un trocito de algodn tomado con unas pinzas, o
tambin con un escobilln.

Al enviar material se debe evitar la inclusin de costras secas, pelos o lana. Las muestras secas
generalmente no son de valor para la identificacin de caros. Si el material para el examen es
demasiado denso, se adiciona a la muestra hidrxido de potasio de 10% y se deja actuar por 5 a
10 minutos para luego ser examinada esta muestra.

Garrapatas

Las larvas, ninfas y adultos que se estn alimentando, pueden recogerse quitndolas
cuidadosamente del hospedador. Es importante realizar esta operacin sin daarlas, en especial
las piezas bucales que se hallan firmemente sujetas a la piel del husped. Un procedimiento til
es sujetar firmemente pero con suavidad, su cabeza con unas pinzas, volteando a la garrapata
sobre su dorso y seguidamente tirando rpidamente en direccin perpendicular a la piel.

Las garrapatas que estn en el suelo (fase no parasitaria) pueden recogerse de la hierva,
arrastrando una sbana o una toalla blanca sobre esta, lo cual debe hacerse a un paso lento.
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Los artrpodos como piojos, pulgas y larvas de dpteros, pueden recolectarse directamente del
animal utilizando pinzas, eventualmente tubos y frascos invertidos.


Recoleccin de parsitos al examen post morten.

La recoleccin de parsitos de un animal muerto debe realizarse sistemticamente y lo ms
completo posible. Para este propsito debe seguirse un esquema definido y examinar cada
rgano empezando con la superficie externa del cuerpo, luego el tejido subcutneo, las
cavidades del cuerpo, etc.

Examen del tracto gastrointestinal: Todas las secciones del canal digestivo (abomaso, intestino
delgado, intestino grueso, ciego y recto) se separan y se ligan con cordones en las extremidades
anterior y posterior de cada seccin.

La pared del abomaso se incide y el contenido se deposita en un recipiente adecuado. La mucosa
se lava bien con agua y se raspa cuidadosamente, recogiendo el agua del lavado en el mismo
recipiente donde se coloc el contenido estomacal, luego se aaden, varios litros de agua, se
mezcla y se deja en reposo por 5 a 10 minutos para que los vermes y residuos pesados se
sedimenten; seguidamente se decanta la porcin que sobrenada. Este proceso se repite hasta que
el sedimento este conformado solamente por vermes y residuos de ingesta. El sedimento se
examina cuidadosamente en un recipiente de fondo oscuro para visualizar mejor los parsitos,
los cuales por lo general son de color blanquecino, por ltimo se separan, se fijan y se
identifican.

Nota: El contenido estomacal se puede pasar a travs de una serie de tamices de diferente
dimetro para separar los residuos ms grandes. Con las otras secciones se procede de igual
manera que con el abomaso. Cada intestino se puede cortar en tres secciones para facilitar la
operacin. Es importante que cada seccin del aparato digestivo se lave y se examine
separadamente.

Recoleccin de parsitos de los pulmones: Los parsitos se remueven de los pulmones
inyectando a estos rganos de 12-15 litros (dependiendo de la especie de animal) de solucin
salina normal a 37C. Para llenar los pulmones se utiliza un embudo el cual se introduce en la
trquea. A medida que los pulmones se van llenando estos se deben masajear para que el aire
escape y la solucin llene bronquios y bronquiolos. El contenido pulmonar se vacia en un
recipiente; se vuelven a llenar los pulmones y se repite el proceso hasta que no se vean salir
parsitos. Los recipientes se dejan en reposo para que los parsitos vayan al fondo, luego se
decanta el lquido sobrenadante. Los parsitos se recuperan, se fijan y identifican.

Los parsitos pulmonares tambin, se pueden recuperar cortando longitudinalmente la trquea y
los bronquios. Para colectar los vermes localizados en las vas respiratorias mas finas se cortan
los pulmones en fragmentos pequeos , se depositan en un recipiente con solucin salina
fisiolgica y se dejan en estufa por 2-3 horas, tiempo en el cual los vermes ascienden a la
superficie de la porcin lquida.

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Examen del hgado: Las larvas de cstodos (Quiste hidatidico, Cysticercus) saltan a la vista. El
contenido de la vescula biliar se vierte a una caja de petri o a un plato de cristal y se examina.
Los capilares biliares se cortan con tijera en direccin a la periferia, luego se fragmenta el
hgado en trozos pequeos y se depositan en un recipiente lleno de solucin salina fisiolgica,
para a continuacin proceder a examinar el sedimento.

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