Tincin de Ziehl-Neelsen

Variante clsica o "en caliente"

sta y la siguiente variantes son para preparaciones citolgicas.
1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al
portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente
negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos
durante la tincin.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin con
los extendidos hacia arriba. Nunca tia ms de 12 portaobjetos a la vez.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5
minutos. Mantenga el calor durante este perodo.
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y
tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el
colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente
fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave suavemente de
manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de
agua.
5. Decolorar con alcohol-cido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como alcohol
cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos. Si no se
decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos
TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los
portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos an estn rosa,
aplique una cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3
minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos
hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en
una gradilla a que sequen al aire.
8. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la
observacin al microscopio con 100 x 100