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Práctica 5 - Urocultivo

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Laboratorio de Microbiología

PRÁCTICA NO.5 UROCULTIVO.
OBJETIVO.
El alumno conocerá la técnica de urocultivo realizándola paso a paso. Así mismo, comprenderá en qué casos deberá tomar mano de ésta herramienta medica con sus pacientes. Diferenciara la flora normal de la patógena y aprenderá el manejo correcto de la toma de muestra. mediante un lavado de los genitales externos, aclarado con abundante agua y secado, si es posible, con gasa estéril. Se recoge la porción media de la micción en un frasco estéril de boca ancha, desechando los primeros y los últimos mililitros. La muestra debe analizarse inmediatamente, o refrigerarse a 4°C hasta un máximo de 24 horas. . ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO PRELIMINAR. Cuando el número de muestras es muy elevado es necesario un método que permita descartar las negativas sin proceder al cultivo. Algunos de los criterios empleados son los siguientes: *Depositar una gota de la muestra de orina (que previamente se ha homogeneizado muy bien) sobre el porta, sin extenderla, dejarla secar y fijarla a la llama. *Teñirla por el método de Gram. Si se aprecia al menos una bacteria en la mayoría de los campos observados, la muestra debe cultivarse. *Considerar los resultados del examen del sedimento

FUNDAMENTO TEÓRICO.

E

l análisis microbiológico de la orina va encaminado al diagnóstico de las infecciones del aparato urinario, esencialmente cistitis y pielonefritis. También es útil para ayudar al diagnóstico de las infecciones no estrictamente urinarias, cuando afectan a tejido renal o se excretan bacterias por orina, como tuberculosis, leptospirosis o fiebre tifoidea. Es responsabilidad del médico presumir enfermedades infecciosas en sus pacientes e iniciar estudios a fin de confirmar o descartar esta presunción. RECOLECCIÓN DE MUESTRAS. La correcta recolección de muestras biológicas para su cultivo es posiblemente la etapa más importante en el aislamiento de microorganismos responsables de enfermedades infecciosas. PASOS PARA UNA CORRECTA RECOLECCIÓN DE MUESTRAS 1. La muestra para cultivo debe ser material del verdadero sitio de infección y debe recogerse con un mínimo de contaminación de tejidos, órganos o secreciones adyacentes. 2. Establecer períodos óptimos para la recolección de muestras a fin de tener la mejor oportunidad de aislar los microorganismos causantes. 3. Obtener suficiente cantidad de muestra para llevar a cabo las técnicas de cultivo solicitadas. 4. Utilizar dispositivos de recolección, recipientes para las muestras y medios de cultivo adecuados para asegurar el óptimo aislamiento de microorganismos. 5. Obtener la muestra de preferencia antes de la administración de antibióticos. 6. El envase recolector de la muestra debe estar correctamente rotulado. RECOLECCIÓN Y CULTIVO DE MUESTRAS DE ORINA. La muestra más adecuada es la primera orina de la mañana. Debe evitarse la contaminación por la microbiota normal de la uretra o del perineo,

UROCULTIVO CUANTITATIVO. El recuento de bacterias en orina es, por el momento, el método aconsejado para distinguir una infección urinaria de la contaminación por microbiota normal. Puede hacerse mediante diluciones seriadas o mediante siembra con asa calibrada. Este último método es más utilizado por su sencillez. Caso clínico Niña de 8 años que consulta por realizar orinas dolorosas en las últimas 24 horas. Fiebre de 39 C. PREGUNTAS EXPLORATORIAS. ¿ Que podría sospechar ante ésta situación? ___________________________________________ ___________________________________________ __ 2.- ¿ Consideraría usted el caso de realizar un urocultivo a la paciente? Si o No y ¿Por qué? ___________________________________________ ___________________________________________ __ 3.- ¿Cuál cree usted que sea el agente etiológico del que podría sospechar en primer caso por tratarse de una niña?

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___________________________________________ ___________________________________________ __ Material: • Muestra de orina problema. • Asa calibrada de 1 μl. • Una placa de Agar-sangre y otra de MacConkey o EMB Técnica:  Homogeneizar bien la orina mediante inversiones del frasco.  Sumergir verticalmente el asa y retirarla asegurándose que lleva una gota de orina    Sembrar con el método de estría múltiple Incubar a 37oC por 24 a 48 horas. Interpretar los resultados , anotando las características morfológicas de cada colonia diferente que haya crecido. Hacer un frotis de cada colonia diferente, y teñirlo con un Gram suprapúbica o cateterismo aséptico no llevan FLORA NORMAL FLORA PATÓGENA Staphylococcocus spp.(coagulasa -) Enterobacterias. Streptococcus viridans Enterococos. Lactobacillus spp. Staphylococcus saprophyticus. Difteroides Pseudomona aeruginosa. Neisseria spp (no patógena). Candida albicans. Cocos anaeróbicos. Staphylococcus aureus. Levaduras (algunas). Streptocuccus Beta-hemolítico. Otros Neisseria gonorrhoeae. contaminación, y debe considerarse positivo cualquier recuento. En caso de infección se procede siempre a la identificación y al antibiograma. IDENTIFICACION. Los microorganismos responsables más frecuentemente de infección urinaria varían según el origen comunitario o nosocomial de la infección. En líneas generales son: • Escherichia coli, y con mucha menor frecuencia otras enterobacterias, como Proteus, Klebsiella, Enterobacter y Serratia. • Entre los cocos Gram-positivos, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis y Staphylococcus aureus. • Microorganismos oportunistas, como Pseudomonas aeruginosa, Alcaligenes spp. Corynebacterium urealyticum y levaduras, como Candida albicans. Basándose en el aspecto de la colonia y en su tinción, proceda a identificarla según las técnicas descritas en la Práctica 2

INTERPRETACION Estimar el número de colonias y multiplicarlo por mil, para obtener el número de bacterias por ml de orina. Un recuento de más de 100.000 bacterias/ml es indicativo de infección (el número no se correlaciona con la gravedad de la misma). Un recuento de menos de 10.000 bacterias/ml hace sospechar una contaminación de la muestra, especialmente si hay varios tipos distintos de colonias, pues las infecciones urinarias son casi siempre debidas a un sólo microorganismo. Las cifras intermedias son dudosas, y requieren la consulta al clínico y la repetición del análisis. Hay que tener presente que las muestras obtenidas por punción

El estudio microbiológico de la orina, se hace cuando los signos y síntomas son sugestivos de infección de la vías.

RESULTADOS.
Características morfológicas. Tamaño Elevación Superficie Aspecto Bordes Densidad Hemólisis Consistencia Gram Morfología C AS

MORFOLOGIA MACROSCOPICA O L O N I A S MAC CONKEY CHOCOLATE

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microscópica. Agrupación.

CUESTIONARIO.
1. Explique cual es el papel de la flora normal del cuerpo humano. ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ____ 2. ¿Por qué es recomendable cultivar las muestras para determinar el microorganismo causal de la enfermedad? ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ____ 3. ¿Cuál es el paso más importante del examen de la muestras para cultivo microbiológico? ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ____ 4. ¿Por qué se debe tomar la muestra antes de la administración de antibióticos? ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ ____ 5.- La presencia de bacterias Gram (-) en orina es natural? Si o no y ¿Por qué? ¿Qué podemos esperar con este resultado? ______________________________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________________________ __

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES. _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________
INSTRUCCIONES: Marque con una paloma para indicar que el alumno realizó la actividad y con una X que no la realizó. Participación individual Nombre A B C D E

A) Al realizar la práctica toma en cuenta las medidas de seguridad.

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B) Demuestra habilidad y destreza al manejar el material de laboratorio. C) Al preguntarle sobre el tema, fundamenta correctamente su respuesta. D) Coopera con el resto del equipo para que todos realicen su práctica. E) Al término de la práctica elimina o conserva adecuadamente su material y la muestra.

Evaluación del trabajo en equipo
EQUIPO SI NO

Planificamos el trabajo Distribuimos bien las actividades El resultado fue el esperado
EVIDENCIAS SI NO

1.- Formato completo 2.- Práctica realizada 3.-Resultados de la práctica completos 4.-Material y equipo limpio 5.- Revisión bibliográfica

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