27-05-2014

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Existem dois tipos de morte celular
Apoptose Necrose
Apoptose
Necrose
- clulas incham e h ruptura de
organelos
- h quebra do DNA em fragmentos de
tamanhos ao acaso
- ocorre lise da membrana plasmtica
- ocorre inflamao
- as clulas mingam, a cromatina e o
ncleo condensam-se
- h quebra do DNA em fragmentos de
tamanho mltiplo de 180 pb
- a membrana plasmtica e os
organelos mantm-se intactos
- no ocorre inflamao, os corpos
apoptticos so fagocitados pelas
clulas vizinhas ou por macrfagos
- estimulada
por sinais
fisiolgicos e
condies
patolgicas
- requer
energia
- estimulada por
toxinas, hipoxia,
condies fsicas
extremas, etc.
- no requer
energia
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Apoptose
(clula animal)
- condensao da cromatina, do ncleo
e do citoplasma

- h quebra do DNA em fragmentos
internucleosomais de tamanho
mltiplo de 180 pb

- a membrana plasmtica mantm-se
intacta, formam-se corpos apoptticos

- no ocorre inflamao, os corpos
apoptticos so fagocitados pelas
clulas vizinhas ou por um macrfago
Apoptose
(clula animal)
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Remoo do tecido entre os dgitos
Marcadores de apoptose e/ou morte
celular programada
- observao de condensao e fragmentao do
ncleo
- observao de fragmentao do DNA TUNEL
em fragmentos mltiplos de 180 pb DNA em escada
aps eletroforese
- observao de corpos apoptticos
- observao de alteraes na superfcie celular
alterao na distribuio de fosfolpidos
presena de fosfatidilserina na face externa da
membrana citoplasmtica (sinal para a fagocitose)
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- quebra do DNA durante a morte celular programada pode
deixar quebras na cadeia dupla e numa s cadeia (nicks)

- estas extremidades de cadeias do DNA podem ser detectadas
marcando as extremidades 3-OH livres com nucleotdeos
marcados com fluorocromos ou enzimas

- usada uma desoxiribonucleotdeo transferase terminal que
cataliza a polimerizao de nucleotdeos s extremidades 3-OH
livres
TUNEL
(terminal deoxyribonucleotidyl transferase (TDT)-mediated
dUTP-digoxigenin nick end labeling)
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TUNEL
(terminal deoxyribonucleotidyl transferase (TDT)-
mediated dUTP-digoxigenin nick end labeling)
Anexina V
- protena dependente do clcio que se liga fosfatidil serina
(aninica)

- anexina V- fluorocromo marca a superfcie das clulas que
iniciaram o programa de morte celular
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Morte Celular
Programada
Apoptose-
like

(essencial no
programa de
desenvolvimento
de muitas
(clulas vegetais)
PCD em PLANTAS

Regulada pelo Induzida pelo
Desenvolvimento Ambiente

Desenvolvimento do Xilema Formao do Aernquima
Remoo do Suspensor Resposta Hipersensitiva
Flores Unissexuadas
Libertao da Coifa lateral
Deiscncia da Antera
Morfognese Foliar
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Elementos condutores de xilema

Possuem um programa nico de morte celular programada, activado no
final da diferenciao
Modelo Culturas de clulas de Zinnia
in vitro xilognese
Elementos condutores de
xilema (a)
Clulas de mesfilo em
cultura (b)
Meio com auxinas e
citocininas
Clula diferenciada que
sofreu MCP (c)
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Colapso do
vacolo
Tratamento das clulas de Zinnia em cultura com cicloheximida ou
com actinomicina D, impede a morte celular.
Isto sugere que a MCP neste sistema implica - ocorrer sntese proteica
Tratar as clulas em cultura com EGTA ou outro agente quelante reduz a
morte das clulas
Isto implica a necessidade do influxo de Ca2+ para ocorrer MCP
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A- clula de mesfilo
B- a clula expande e
eventualmente divide-se
C- sntese de enzimas
hidrolticas no vacolo
D- 72h diferenciao da
parede secundria
Secreo de uma 40Kd Ser
protease
E- 6h aps o aparecimento da
parede II, a actividade da
protease crtica e activa os
canais de clcio, ocorrendo um
influxo, que por sua vez induz
a ruptura do tonoplasto.
F- 8 a 12h aps, a clula est
vazia, apenas com a parede
secundria.
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- ocorre ruptura do tonoplasto libertando-se hidrolases que vo degradar os
organelos
- ZEN1 a nuclease tipo S1 responsvel pela degradao do DNA
- Direccionada para o vacolo
- especfica das plantas
- S se expressa na fase final da diferenciao dos elementos condutores
Resumo da MCP em elementos
condutores de xilema
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clulas de
ptalas senescentes
Senescncia

A senescncia pode ser induzida pelo etileno, ABA ou metil jasmonato
Implica uma aumento em radicais de oxignio
Acumulam-se nucleases e as clulas so TUNEL positivas
Os SAGs (senescence active genes) codificam proteases de cistena
MCP durante a reproduo sexuada
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Mutantes twin, onde o desenvolvimento do embrio propriamente dito
interrompido as clulas do suspensor proliferam
O embrio suprime o desenvolvimento embrionrio do suspensor
Resposta hipersensitiva
Resposta a um agente patognico avirulento.
A acumulao de O2- e H2O2 eleva o clcio citoslico e desencadeia um
processo de morte celular mediado por proteases.
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Apoptose
No esto presentes no sistema vegetal
Bax (promotor de mcp em vertebrados)
capaz de induzir morte celular em tabaco, igual resposta
hipersensitiva.
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Plantas de Arabidopsis sobrexpressando Bax, apresentam
extensa morte celular a todos os nveis.
Estas plantas trangnicas foram
retransformadas com AtBI-1 e
voltaram a crescer normalmente.

(conservado em animais e plantas)

PNAS 2001
MCP em plantas:
Diferenciao
Senescncia
Resistncia a infeces

O clcio tem um papel central nestes processos
de execuo da morte

A capacidade da clula tomar esta deciso relevante pois a clula vegetal
processa o corpo autolticamente.

O acontecimento comum a aco do vacolo,
grande compartimento hidroltico
bomba detonada pelo clcio
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Um dos modelos aceites que a
clula recebe sinais de
sobrevivncia e de morte e a
decide se morre ou no.

O colapso do vacolo
praticamente uma marca
universal

Mas o modo de processar as
clulas mortas vai depender do
tipo de hidrolases e de toxinas
que so armazenadas no
vacolo