6.

Control gnico de la expresin del citocromo

P-450 en el hgado
RAMIRO JOVER ATIENZA
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular.
Facultad de Medicina. Universidad de Valencia. Avda. Blasco Ibaez 13,
E-46010 Valencia. E-mail: Rmiro.Jover @uv.es
1. RESUMEN
La expresin de los genes del citocromo P-450 (CYP) en el hgado
depende en gran medida de factores de transcripcin que pertenecen a dos
grupos o categoras principales: 1) factores de transcripcin hepticos (Li-
ver-enriched transcripcion factors) y 2) factores de transcripcin activa-
bles por ligandos xenobiticos. Dentro del primer grupo encontramos fac-
tores de diversas familias como los C/EBP (CCAAT/Enhancer-Binding
Protein) o los HNF (Hepatocyte Nuclear Factor), que se expresan abun-
dantemente en el hgado, y que se unen a regiones reguladoras de genes
tpicamente hepticos, incluyendo los CYPs. Estos factores forman homo-
y hetero-dmeros con miembros de su familia; y muestran cooperatividad
y sinergismo con factores de otras familias modulando as su especifici-
dad y potencia trans-activadora. Pero adems de los factores de transcrip-
cin hepticos que juegan un papel clave en la expresin constitutiva de
los CYPs en el hgado, existen otros factores de transcripcin que tiene
un papel crucial en la induccin de los genes CYP por xenobiticos. Uno
de los primeros factores de transcripcin asociado con la respuesta induc-
tiva de los genes CYP que se descubri fue el receptor de hidrocarburos
aromticos policclicos, AhR (Aryl hydrocarbon Receptor), que promueve
el aumento de la transcripcin de CYPs, tales como los CYP 1A1, 1A2 y
1B, y de otros genes de enzimas de biotransformacin como la glutation-
S-transferasa y la UDP-glucuronosiltransferasa. Ms recientemente se
205
identificaron varios receptores nucleares que pueden unir xenobiticos y
que tambin juegan un papel crucial en el mecanismo de induccin de ge-
nes CYP. Estos son: I) el PXR (Pregnane X Receptor) que activa los ge-
nes de la subfamilia CYP3A en respuesta a diversos compuestos qumi-
cos incluyendo ciertos esteroides naturales y sintticos; II) el CAR
(Constitutive Androstane Receptor) que media en gran medida la induc-
cin de los genes CYP producida por el fenobarbital y otros muchos com-
puestos lipoflicos similares; y III) el PPAR (Peroxisome Proliferator-Ac-
tivated Receptor) que media la induccin de los genes CYP de la
subfamilia CYP4A por compuestos qumicos acdicos clasificados como
proliferadores de los peroxisomas y carcingenos no genotxicos. Los me-
dicamentos y xenobiticos capaces de unirse a estos receptores ocasionan
su activacin o desinhibicin, y provocan una cascada de acontecimientos
que culmina con la unin del receptor a la secuencia diana en el promo-
tor de los genes CYP y su consiguiente transactivacin por los mecanis-
mos bien conocidos de los receptores nucleares.
2. CONTROL DE LA EXPRESIN DE LOS GENES CYP
POR FACTORES DE TRANSCRIPCIN HEPTICOS
La actividad de un gen se rige por la interaccin de factores de trans-
cripcin con sus elementos de respuesta en el DNA y por la estructura de
la cromatina, que regula la accesibilidad al locus gnico.
La transcripcin se lleva a cabo por las enzimas llamadas RNA poli-
merasas cuya actividad depende de la secuencia del promotor y de las
protenas o factores reguladores (basales, activadores constitutivos e in-
ducibles) que se unen a sta, su tipo y actividad. Adems, existen otros
factores llamados co-reguladores que no se unen al DNA: los co-activa-
dores, que favorecen la transcripcin, y los co-represores, que la inhiben.
Algunos de los factores de transcripcin son ubicuos, se expresan en la
mayora de tejidos, mientras que otros estn ms restringidos y se ex-
presan solo en determinados tejidos [1].
La remodelacin de la estructura de la cromatina es esencial para la
expresin gnica. La cromatina inactiva, que no est siendo expresada,
se encuentra en forma muy compacta o condensada. Para su expresin,
esta estructura debe relajarse y hacerse accesible al complejo basal de
RAMIRO JOVER ATIENZA
206
transcripcin que contiene la RNA polimerasa. En estos procesos inter-
vienen diversos complejos multiproteicos y enzimas [2].
La regulacin transcripcional juega un papel crucial en el control de
la expresin de los genes hepticos. El conocimiento presente de la re-
gulacin transcripcional en el hgado ha derivado principalmente de los
anlisis de promotores y elementos intensificadores de genes que se ex-
presan selectivamente en hepatocitos adultos. Estos anlisis han llevado
a la identificacin de un nmero importante de factores de transcripcin,
denominados Liver-enriched transcription factors (LETF), que se expre-
san abundantemente en el hgado, si bien no son exclusivos de este teji-
do, y que se unen a regiones reguladoras de genes tpicamente hepticos
[3] (Figura 1). Los LETF se agrupan en diversas familias atendiendo a la
homologa de sus dominios de unin al DNA, que poseen secuencias de
aminocidos y estructuras caractersticas. Estos factores forman homo- y
hetero-dmeros con otros miembros de su familia; y muestran cooperati-
vidad y sinergismo con factores de otras familias modulando as su es-
pecificidad y potencia trans-activadora [3, 4].
Algunos genes se transcriben siempre a un cierto nivel denominado
constitutivo, otros pueden aumentar su actividad transcripcional (induc-
cin) mediante la interaccin con determinados factores de transcripcin
dependientes de ligando. Los factores de transcripcin LETF no estn
bajo el control de ligandos endgenos y por eso su papel es el de regu-
lar la expresin constitutiva y especfica de tejido de los genes hepticos.
A menudo encontramos que son varios los LETF que participan en
la regulacin de genes hepticos, de hecho, las regiones de DNA identi-
ficadas en los promotores de estos genes son capaces de unir dos o ms
de estos factores [4, 3]. Un ejemplo sera el gen de la albmina que se
regula por HNF1a, C/EBPa, C/EBPb y DBP [5] (Figura 1). La activi-
dad coordinada de los LETF tambin es importante para la regulacin de
los genes hepticos durante el desarrollo. Adems los LETF pueden tam-
bin jugar un papel en su auto-regulacin. Por ejemplo, hay un sitio de
respuesta a HNF4a en el promotor del gen HNF1a [6]. Esto implica me-
canismos de regulacin recproca.
Numerosos estudios recientes demuestran que muchos de los LETF
conocidos estn implicados en el control de la expresin de los genes
CYP en el hgado (Tabla 1) (Figura 1). Diversos estudios tambin de-
207
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
RAMIRO JOVER ATIENZA
208
TABLA 1
Numerosos estudios recientes demuestran que muchos de los factores
de transcripcin hepticos estn implicados en el control
de la expresin de los genes CYP en el hgado
CYP2A4 HNF4 Yokomori-N, et al. (1997) J-Steroid-Biochem-Mol-Biol 62:307-14
CYP2B1 C/EBP Park-Y & Kemper-B (1996) DNA-Cell-Biol 15:693-701
CYP2B1 C/EBP-b & -d Berg-T, et al. (2002) BBRC 293, 907-912
CYP2B1 C/EBP-b & -d Cassel-TN, et al. (2000) Mol-Cell-Biol-Res-Commun 3, 42-47
CYP2B1/2 C/EBP Luc-PV, et al. (1996) Biochem-Pharmacol 51:345-56
CYP2C HNF4 Chen-D, et al. (1994) J-Biol-Chem 269:5420-7
CYP2C HNF4 Chen-D, et al. (1994) DNA-Cell-Biol 13:771-9
CYP2C12 C/EBPa Tollet-P, et al. (1995) Mol-Endocrinol 9:1771-81
CYP2Cs HNF3g Bort-R et al. (2002) Biochem-J (submitted)
CYP2D6 HNF4 & COUP-TFI Cairns-W, et al. (1996) J-Biol-Chem 271:25269-76
CYP2D5 C/EBPb & Sp1 Lee-YH, et al. (1994) Mol-Cell-Biol 14:1383-94
CYP2D6 HNF4 Hara-H & Adachi-T (2002) Mol-Pharmacol 61, 194-200
CYP2E1 HNF1 Liu-SY & Gonzalez-FJ (1995) DNA-Cell-Biol 14:285-93
CYP3A4/7 C/EBPa & DBP Ourlin-JC, et al. (1997) J-Hepatol 26:54-62
CYP3A1 HNF4 & COUP-TF Ogino-M, et al (1999) Arch-Biochem-Biophys 362, 32-7
CYP3A4 C/EBP-b & -a Jover-R et al. (2002) FASEB-J 10.1096/fj.02-0195fje
CYP2H1 HNF1, HNF3 & C/EBP Dogra-SC & May-BK (1997) DNA-Cell-Biol 16:1407-18
CYP7A1 HNF1 Chen-J, et al. (1999) BBRC 260, 829-834
muestran que tanto la expresin de los LETF como la de los genes CYP
est estrechamente asociada al estado diferenciado del hepatocito.
Los mecanismos que gobiernan la regulacin de los genes CYP son
diversos y todava no bien conocidos. A pesar de ello, el estudio indivi-
dual del papel de diversos LETF en la expresin de los CYPs ha permi-
tido dar un primer paso hacia el conocimiento global de la compleja re-
gulacin de los CYPs por estos factores de transcripcin.
2.1. La familia C/EBP (CCAAT/Enhancer Binding Proteins)
Los C/EBPs constituyen una familia de factores de transcripcin que tie-
nen como caracterstica estructural comn una regin bsica de unin al DNA
y un dominio de dimerizacin de cremallera de leucina [7]. Los miembros
identificados de esta familia son seis (C/EBPa, C/EBPb, C/EBPd, C/EBPg,
C/EBPe, etc.). Todos ellos presentan un nivel de homologa elevado en el do-
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CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
FIGURA 1. Interacciones de factores de transcripcin hepticos (Liver-enriched
transcription factors) y factores ubicuos (NF-1, NF-Y/ACF, AP-1 y Sp1)
en el promotor de tres genes de expresin heptica
minio de dimerizacin, que se utiliza tanto para la formacin de homodme-
ros como de heterodmeros con otros miembros de la familia [8]. En su con-
junto las protenas de esta familia regulan la transcripcin de los genes im-
plicados en la diferenciacin de clulas hematopoyticas, adipocitos y
hepatocitos [7]. Los efectos pleiotrpicos de los C/EBPs se deben en buena
parte a su expresin especfica de tejido, a la modulacin de su traduccin
por escaneado ribosomal variable, a modificaciones post-transcripcionales y
a una unin al DNAde especificidad variable. Estos mecanismos tienen como
consecuencia la generacin de un gran nmero de isoformas de C/EBPs que
pueden dimerizar y unirse a los elementos de respuesta en el DNA para ac-
tivar en grado variable la transcripcin de los genes diana.
En los hepatocitos los factores C/EBP ms importantes son C/EBPa
y C/EBPb. C/EBPa parece jugar un papel general en la regulacin del
metabolismo energtico [9] y su expresin est restringida a clulas di-
ferenciadas y quiescentes, por lo que se postula que juega un papel cla-
ve en la expresin de genes de diferenciacin y proliferacin [10, 11].
Por ejemplo, C/EBPa se expresa abundantemente en hgado adulto nor-
mal, pero disminuye dramticamente (ms del 80%) en hgado en rege-
neracin [12] o en sistemas celulares proliferantes in vitro como los he-
patomas [13]. El C/EBPb se expresa tanto en hepatocitos en cultivo y
hepatomas, as como en hgado adulto normal, mientras que C/EBPd es
virtualmente indetectable. Tras un estmulo inflamatorio o por citoquinas,
sin embargo, C/EBPb y d se inducen dramticamente, mientras que los
niveles de C/EBPa disminuyen significativamente. Estos cambios en el
patrn de expresin de los distintos factores C/EBP hepticos conducirn
a la induccin transcripcional de diversos genes hepticos como los de
las protenas de fase aguda (hemopexina, haptoglobina, a1-glicoprotena
cida, amiloide A srico, protena C reactiva, etc.) [14].
Los factores C/EBP tambin participan en la regulacin de algunos
genes CYPs. Se han identificado elementos en el promotor proximal del
CYP2B1 y del CYP2B10 que unen factores C/EBP y que son necesa-
rios para la actividad constitutiva de estos genes [15-17]. De modo si-
milar, la actividad del promotor del CYP2D5 de rata se induce por
C/EBPb en clulas de hepatoma [18]. Los C/EBPs tambin podran re-
gular al CYP7A1 pero solo muestran un efecto moderado en ensayos de
transactivacin [19].
RAMIRO JOVER ATIENZA
210
Una evidencia experimental directa de la relacin causal entre la ex-
presin del factor C/EBPa y la expresin general de genes CYP, pudo
obtenerse recientemente en nuestro laboratorio con la re-expresin de
C/EBPa en el hepatoma humano HepG2. Se trata de una lnea celular
aislada de un hepatoma humano, altamente diferenciada, y que muestra
muchas caracterstica fenotpicas del hepatocito adulto pero que no ex-
presa CYPs. En esta lnea celular, los niveles de C/EBPa destacan por
ser considerablemente bajos en relacin con los hepatocitos humanos. Un
aumento en los niveles de C/EBPa, logrado al transfectar clulas HepG2
con un vector de expresin regulado a travs del promotor de la metalo-
tionena, se tradujo en la reactivacin de la expresin del CYP2B6,
CYP2C9 y CYP2D6 [20].
Tras estas evidencias iniciales investigamos con detalle el papel de
los factores C/EBP en la regulacin del CYP3A4, que es de especial re-
levancia ya que participa en el metabolismo de ms del 50% de los fr-
macos de uso comn. Mediante ensayos con genes reporteros, anlisis de
cambio de movilidad electrofortica (EMSA) y de mutagnesis dirigida,
demostramos la existencia de un sitio proximal y dos distales para la trans-
activacin del CYP3A4 por C/EBPa [21]. Tambin investigamos la re-
levancia de estos hallazgos en el contexto ms complejo del gen end-
geno con su organizacin nucleosomal. La sobreexpresin de C/EBPa
mediante vectores adenovirales caus un aumento en la expresin del
CYP3A4, 3A5 y 3A7 en clulas HepG2, confirmando el papel clave de
este LETF en la regulacin de los genes de la subfamilia CYP3A [21].
Experimentos similares demostraron que el C/EBPb es tambin un
transactivador del CYP3A4 [22]. Sin embargo, el C/EBPb puede tener
dos productos de traduccin, una protena completa denominada LAP (Li-
ver Activator Protein) y una protena truncada denominada LIP (Liver In-
hibitory Protein) que carece de dominio de transactivacin y como con-
secuencia ejerce un papel represor al dimerizar con formas activas de la
familia C/EBP. Para investigar el papel de las distintas formas C/EBP en
la regulacin del CYP3A4, desarrollamos diversos vectores adenovirales
para la expresion de los factores activadores C/EBPa, C/EBPb-LAP y
para el dominante-negativo C/EBPb-LIP. Los resultados obtenidos con
esta metodologa demuestran que C/EBPb-LIP es un represor del
CYP3A4 y que juega un papel crucial en la regulacin negativa de este
211
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
CYP por citoquinas pro-inflamatorias como la IL-6 [22, 23]. Su efecto
represor adems es mediado por competicin con las formas activadoras
C/EBPa y C/EBPb-LAP, que son factores que confieren una elevada ex-
presin heptica de los CYPs.
2.2. El HNF1a (hepatocyte nuclear factor 1a)
La familia HNF1 comprende dos miembros, HNF1a y HNF1b, pero
solo HNF1a se expresa en hepatocitos adultos. El HNF1a es un factor
de transcripcin con homeodominio, que se expresa abundantemente en
hgado pero tambin en rin, intestino, estmago y pncreas [24]. El
HNF1a est implicado en la regulacin transcripcional de un nmero de
genes hepticos, incluyendo albmina, a- y b-fibringeno, a1-antitripsi-
na, a-fetoprotena, piruvato quinasa, transtiretina, aldolasa B, apolipo-
protenas, etc. [4, 3].
El HNF1a tambin puede jugar un papel importante en la regulacin
de los genes CYP. Estudios con genes reporteros quimricos (que con-
tienen promotores de genes CYP) y de retardo en la movilidad electro-
fortica han identificado secuencias promotoras e intensificadoras de cier-
tos CYP que son dianas potenciales para el factor HNF1a. Segn estos
estudios el factor HNF1a sera un regulador positivo del CYP2E1 [25],
CYP7A1 [26], CYP1A2 [27] y CYP27 [28]. Estudios con ratones defi-
cientes en HNF1a demuestran adems que este factor regula el CYP4A
[29] y el CYP7A1 [30]. Si tenemos en cuenta que algunas de estos CYPs,
como el 2E1 o el 1A2, median la toxicidad aguda y la susceptibilidad a
ciertos carcingenos qumicos, podemos pensar que el factor HNF1a po-
dra ser tambin un elemento clave en el desarrollo de estos fenmenos.
2.3. El receptor nuclear HNF4a
El factor HNF4a (hepatocyte nuclear factor 4a) es un miembro de
la superfamilia de receptors nucleares que se expresa abundantemente en
el hgado, pero tambin en rin, intestino y pncreas [31]. El HNF4a se
clasifica como un receptor hurfano ya que no se ha identificado un cla-
ro ligando endgeno o exgeno, aunque es activado por tiosteres de ci-
RAMIRO JOVER ATIENZA
212
dos grasos y acetil CoA [32]. En cualquier caso, est bien demostrado
que este factor es tambin capaz de promover la transcripcin en ausen-
cia de ligando aadido.
HNF4a tiene una importancia capital en la regulacin de genes es-
pecficos del hgado (metabolismo de glucosa, colesterol, cidos grasos,
sntesis de factores de coagulacin) y en el proceso de diferenciacin que
conduce al fenotipo heptico adulto.
La obtencin de ratones deficientes en HNF4a ha permitido evaluar
mejor el impacto global de este factor en el control de genes hepticos
in vivo. En ratones adultos se ha demostrado que el HNF4a es absoluta-
mente imprescindible para la expresin constitutiva de algunos genes con
promotores complejos como el de la Apo-CIII, Apo-AII, L-FABP u OTC
[33, 34]. Aunque existen otros factores que contribuyen a la regulacin
de estos genes, el HNF4a tiene una influencia dominante. Este hecho est
en consonancia con su actividad remodeladora de la cromatina que debe
ser un prerrequisito para la posterior unin de otros factores. Otros estu-
dios con embriones de ratn deficientes en HNF4a han demostrado tam-
bin la dependencia de ciertos genes hepticos respecto al HNF4a. Cabe
destacar ALDO-B, Apo-CIII, Apo-AII y L-FABP [35, 36].
Junto con otros LETF, el HNF4a tambin tiene un papel importante en
la regulacin de los CYPs. El HNF4a se une en forma de homodmero a
secuencias que contienen repeticiones directas del hexmero AGGTCA, se-
paradas por una base (DR-1) [31]. Sin embargo el HNF4a tambin puede
unirse a una secuencia parecida, denominada motivo HPF-1, que se loca-
liza en la regin promotora proximal de los genes CYP2A, CYP2C y
CYP2D. Los estudios in vitro de transfeccin celular y los ensayos de unin
al DNA han demostrado que este factor juega un papel positivo en la re-
gulacin del CYP2C12 y CYP3A de rata, CYP2A4 de ratn, CYP2C1/2
de conejo, y CYP2C9, CYP2D6 y CYP3A4 humanos [37-45].
Para comprender mejor el papel del HNF4a en la regulacin general
de los CYPs humanos en el hgado realizamos un estudio en nuestro la-
boratorio utilizando hepatocitos humanos en cultivo transfectados con
RNA antisentido contra el HNF4a. Los anlisis de los diversos CYPs en
estos hepatocitos humanos deficientes en HNF4a revelaron que la ex-
presin de la mayora de genes CYP depende en mayor o menor medida
de este factor de transcripcin [46]. Los hepatocitos humano transfecta-
213
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
dos con el RNAantisentido contra el HNF4a, mostraron una prdida sig-
nificativa de la expresin del CYP3A4, CYP3A5, CYP2A6, CYP2B6,
CYP2C9 y CYP2D6, pero no se afect la expresin del CYP2E1. Nues-
tro estudio demostr que el HNF4a es un regulador general que confie-
re expresin heptica a los CYPs humanos ms relevantes en el metabo-
lismo de frmacos.
2.4. La familia HNF3
Los factores HNF3 (hepatocyte nuclear factor 3) pertenecen a la fa-
milia de factores de transcripcin HNF3/FKH que se caracterizan por un
motivo de hlice alada (winged-helix) y otro de unin al DNA muy con-
servado y homlogo a la protena hometica de Drosophila denominada
forkhead [47].
Los factores HNF3 se descubrieron por su habilidad para unirse a se-
cuencias consenso en los promotores de la a1-antitripsina y transtiretina [48].
En la subfamilia de genes HNF3 de mamferos se conocen tres iso-
formas, a, b y g. Estas protenas se expresan secuencalmente durante la
embriognesis (bag) [49] y juegan un papel determinante en la re-
gionalizacin definitiva dentro del endodermo [50]. En hepatocitos adul-
tos, el factor HNF3g es el ms relevante.
Se ha postulado que las protenas HNF3 tambin pueden situarse en
la parte superior de una jerarqua de factores de transcripcin porque son
capaces de interaccionar con la estructura de la cromatina intensificando
o permitiendo la unin de otros factores de transcripcin al DNA [51].
Los estudios con variantes HNF3 dominantes-negativas [49] y con
ratones deficientes en HNF3g [52] demuestran que los factores HNF3 jue-
gan un papel importante en la expresin de genes especficos hepticos
como la albmina, transtiretina, transferrina, PEPCK, aldolasa B y tiro-
sina aminotransferasa.
Los factores HNF3 tambin parecen jugar un papel importante en la
regulacin de los genes CYP. Se ha demostrado la importancia de estos
factores en la transactivacin y modulacin de los CYP2C6, 2C12 y 2C13
de rata [53-56], y de los CYP2H1 y 2H2 de pollo [57, 58].
RAMIRO JOVER ATIENZA
214
La presencia de mltiples sitios HNF3 en la regin promotora de
los genes de la subfamilia CYP2C humana, nos llam la atencin y nos
llev a investigar el papel del factor HNF3g en su regulacin. La co-
transfeccin de genes reporteros conteniendo los promotores de los
CYP2Cs, junto con un vector de expresin para HNF3g demostr que
este factor de transcripcin activa CYP2C8, CYP2C9 y CYP2C19. Es-
tudios adicionales de la regulacin de los genes CYP2C endgenos uti-
lizando un adenovirus recombinante para la expresin de HNF3g de-
mostr que este factor transactiva CYP2C9 y CYP2C19, pero tambin
CYP2C18, sugiriendo la existencia de sitios distales de regulacin que
pueden escapar a los anlisis con genes reporteros. Adems, nuestros
estudios demostraron que el HNF3g no transactiva el CYP2C8 endge-
no en clulas de hepatoma debido a una compactacin excesiva de la
cromatina en la zona reguladora de este gen. Nuestros resultados de-
muestran la importancia del HNF3g en la expresin especfica de los
CYP2Cs humanos en el hgado.
En estudios ms recientes investigamos el papel de este factor en la re-
gulacin del CYP3A4. Estudio previos haban demostrado que el factor he-
ptico C/EBPa era un transactivador importante de este CYP. Por el con-
trario, la sobreexpresin de HNF3g mediante vectores adenovirales no afect
a la expresin endgena del CYP3A4 en clulas HepG2 de hepatoma hu-
mano. Sin embargo, experimentos de cotransfeccin con adenovirus re-
combinantes para C/EBPa y HNF3g demostraron que el HNF3g era capaz
de potenciar de un modo muy significativo la activacin del CYP3A4 por
C/EBPa. El nivel de expresin del CYP3A4 aumenta ms de 50 veces en
presencia de los dos factores de transcripcin, mientras que en presencia de
cada uno de ellos por separado los incrementos son muchos mas modestos
(1.5-5 veces) [21]. Esta potenciacin tambin se observ en los CYPs 3A5
y 3A7, lo que sugiere que los genes CYP3A comparten mecanismos de re-
gulacin.
Se ha descrito que el HNF3 es capaz de modificar el posicionamien-
to de los nucleosomas en la cromatina [59] facilitando la unin de otros
factores de transcripcin [60]. Una posible explicacin para el efecto co-
operativo entre C/EBPa y HNF3g sera que el HNF3g acta modifican-
do la estructura de la cromatina facilitando el acceso de C/EBPa a su si-
tio de unin en el promotor del CYP3A4.
215
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
Otra caracterstica del efecto cooperativo entre C/EBPa y HNF3g es
que es un efecto especfico heptico ya que no se detecta en las clulas
no hepticas HeLa. Esto indica que HNF3g para poder ejercer su efecto
cooperativo requiere la presencia de otras protenas que se encuentran es-
pecficamente en los hepatocitos [21].
En definitiva, la expresin especfica en hgado en los genes CYP3A
parece obedecer a una actuacin directa de determinados factores de trans-
cripcin hepticos como el C/EBPa. Pero la mxima expresin de los ge-
nes CYP3A parece en cambio necesitar una actuacin coordinada de va-
rios LETFs (tal y como sera el HNF3g) y de otras protenas que se
expresan de forma exclusiva en el hgado.
2.5. Otros LETF
DBP es un factor de transcripcin de la familia bZip (regin bsica
ms cremallera de leucina) que se caracteriza adems por poseer un do-
minio PAR rico en aminocidos cidos y prolina, que contribuye a la ac-
tivacin transcripcional [61]. Este factor se identific inicialmente como
un factor de transcripcin que regulaba la expresin de la albmina a tra-
vs de la unin al sitio D existente en su promotor [62]. La expresin
de DBP aumenta durante el desarrollo y exhibe un ritmo circadiano en
su expresin [63]. Diversos estudios tambin han demostrado que el DBP
est implicado en la regulacin transcripcional de los genes CYP que
muestran patrones de expresin circadiana como el CYP2A4 y 2A5 [64],
o el CYP7A1 (colesterol 7-alfa hidroxilasa) [19]. Tambin parece estar
implicado en la activacin de los CYP2C6 y 2C7 de rata durante el co-
mienzo de la pubertad a las 4-6 semanas de vida [65].
Por ltimo, dentro del grupo de los LETFs cabe mencionar al HNF6,
que es un factor de transcripcin heptico descubierto recientemente que
pertenece a una nueva clase denominada ONECUT caracterizada por la
presencia de un dominio CUT nico (singel-cut) y un homeodominio pe-
culiar [3]. Este factor participa en la regulacin de diversos genes hep-
ticos como a1-globulina urinaria, a1-antitripsina, 6-fosfofructo-2-quina-
sa, triptofano oxigenasa y a-fetoprotena [66]. Tambin podra estar
implicado en la regulacin de algunos genes CYP como el CYP2C13 [66].
RAMIRO JOVER ATIENZA
216
3. INDUCCIN DE LOS GENES CYP POR FACTORES
DE TRANSCRIPCIN ACTIVABLES POR
LIGANDOS XENOBITICOS
Los genes CYP son nicos en el sentido de que son capaces de res-
ponder a seales tanto endgenas como exgenas cambiando su activi-
dad transcripcional y, como consecuencia, su actividad metabolizadora.
Adems de la los factores de transcripcin hepticos que juegan un pa-
pel clave en la expresin constitutiva de los CYPs en el hgado, es bien
sabido que existen otros factores de transcripcin que tiene un papel cru-
cial en la induccin de los genes CYP por xenobiticos [67-69].
Uno de los primeros factores de transcripcin asociado con la res-
puesta inductiva de los genes CYP que se descubri fue el receptor de
hidrocarburos aromticos policclicos AhR (Aryl hydrocarbon Receptor).
El receptor AhR, una vez activado, promueve el aumento de la trans-
cripcin de un conjunto de genes con elementos de respuesta en sus re-
giones promotoras. Muchos de los genes inducidos son genes de enzimas
que participan en el metabolismo de frmacos, tales como los CYP 1A1,
1A2 y 1B, la glutation-S-transferasa y la UDP-glucuronosiltransferasa
[70-72]. Ms recientemente se han identificado varios receptores nuclea-
res especficos que pueden unir xenobiticos o medicamentos inductures
y que tambin juegan un papel crucial en el mecanismo de induccin de
genes CYP.
3.1. La superfamilia de receptores nucleares
Los receptores de hormonas esteroides (estrgenos, andrgenos, pro-
gestgenos, glucocorticoides, mineralcorticoides), hormona tiroidea, reti-
noides, vitamina D, algunos cidos grasos, cidos biliares, protaglandinas,
etc. son reguladores de la transcripcin que controlan la expresin de gru-
pos de genes diana ms o menos especficos para cada mediador u hor-
mona. Estos receptores hormonales junto con otros receptores denomina-
dos hurfanos, porque su ligando es desconocido, constituyen la
superfamilia de receptores nucleares, que, con ms de 150 miembros, es el
principal grupo de factores de transcripcin inducibles en los vertebrados
[73-75]. Los receptores nucleares juegan un papel crucial en el crecimien-
217
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
to, diferenciacin, metabolismo, reproduccin y morfognesis de organis-
mos superiores. Estos receptores son un ejemplo de simplificacin extre-
ma en la transduccin de la seal: los ligandos de naturaleza lipoflica atra-
viesan la membrana plasmtica se unen a los receptores nucleares y son
transferidas directamente a los genes que regulan [73, 74, 76, 77].
Todos los receptores nucleares tienen caractersticas estructurales co-
munes, como son el dominio central de unin al DNA y el dominio de
unin al ligando en la mitad carboxilo-terminal. El Dominio de Unin al
DNA (DBD DNA Binding Domain) es la regin ms conservada. Est
organizado formando dos dedos de zinc. Su estructura tridimensional
es compacta y contiene dos hlices alfa cruciales para el reconocimiento
del DNA y para la dimerizacin entre receptores nucleares. El dominio
de unin al ligando (LBD - Ligand Binding Domain) es un dominio mul-
tifuncional. Est formado por doce hlices alfa (H1-H12) que en su par-
te central albergan una cavidad donde reside el centro hidrofbico de
unin al ligando. Las estructuras con ligando son ms compactas debido
a que se produce un cambio conformacional tras la unin [78-80].
Los receptores nucleares regulan la transcripcin mediante la unin
a secuencias especficas del DNA en los genes diana, conocidas como
elementos de respuesta hormonal (HRE-Hormone Response Elements). El
anlisis de un gran nmero de HREs ha revelado que el ncleo de estos
elementos est constituido por un hexanucletido (AGAACA o
AGG/TTCA), pero hay que tener en cuenta que estos son motivos con-
senso idealizados. Los HREs son dimricos, unen receptores dimeriza-
dos, y pueden configurarse como palndromas (), palndromas in-
vertidos () o HREs repetidos directos (), con un nmero variable
de bases espaciadoras entre ambos elementos que tambin juegan un pa-
pel importante en la especificidad [81].
Los receptores de hormonas esteroides se unen a los HREs palindr-
micos casi exclusivamente como homodmeros. En contraste, los recep-
tores no esteroideos pueden unirse a HREs con diferentes configuracio-
nes, siendo los ms potentes los configurados como repeticiones directas
(). Aunque algunos receptores no esteroideos se unen a estos ele-
mentos como homodmeros (p.e. HNF4a), la mayora lo hacen como he-
terodmeros, y en este caso la pareja o socio promiscuo es el receptor
RXR [81, 82] (Figura 2).
RAMIRO JOVER ATIENZA
218
A excepcin de la induccin de los genes de la familia CYP1, la induc-
cin del resto de genes CYP se realiza a travs de mecanismos de induccin
que implican a tres receptores nucleares. Estos son: 1) el PXR (Pregnane X
Receptor) que activa los genes de la subfamilia CYP3A en respuesta a di-
versos compuestos qumicos incluyendo ciertos esteroides naturales y sint-
ticos; 2) el CAR (Constitutive Androstane Receptor) que media en gran me-
dida la induccin de los genes CYP producida por el fenobarbital y otros
muchos compuestos lipoflicos similares; y 3) el PPAR (Peroxisome Prolife-
rator-Activated Receptor) que media la induccin de los genes CYP de la
subfamilia CYP4Apor compuestos qumicos acdicos clasificados como pro-
liferadores de los peroxisomas y carcingenos no genotxicos [67, 83].
Los medicamentos y xenobiticos capaces de unirse a estos recepto-
res ocasionan su activacin o desinhibicin, y provocan una cascada de
acontecimientos que culmina con la unin del receptor a la secuencia dia-
na en el promotor de los genes CYP y su consiguiente transactivacin por
los mecanismo bien conocidos de los receptores nucleares (Figura 2).
219
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
FIGURA 2. La induccin de muchos genes CYP se realiza a travs de mecanismos
que implican a tres receptores nucleares. Los ligandos xenobiticos capaces de unir-
se a diversos receptores nucleares ocasionan su activacin o desinhibicin, y pro-
vocan una cascada de acontecimientos que conducen a la heterodimerizacin con
el receptor RXR, a la unin a la secuencia diana o elemento de respuesta (RE) en
el promotor de los genes CYP y a su consiguiente transactivacin tras el recluta-
miento de protenas coreguladoras y de la maquinaria basal de transcripcin
3.2. El receptor PXR (Pregnane X Receptor)
Mediante la bsqueda en bases de datos de DNA utilizando secuen-
cias bien conservadas de los receptores nucleares se pudieron identificar
nuevos miembros de esta superfamilia. Este tipo de anlisis condujo al
clonaje de un nuevo receptor nuclear que recibi el nombre de Pregna-
ne X Receptor (PXR) y que se demostr se activaba por varios pregna-
nos naturales y sintticos [84-87]. El anlisis de la distribucin tisular en
ratn revel que este receptor nuclear se expresa predominantemente en
hgado pero tambin en estmago, intestino delgado, colon y rin. Un
perfil de expresin similar se vi en su ortlogo humano con la excep-
cin de la ausencia del receptor en estmago y rin [84-87].
La activacin del PXR por pregnanos es de especial relevancia ya que
se conoce desde hace tiempo que los derivados de la pregnenolona, tal
como la pregnenolona 16a-carbonitrilo (PCN), y ciertos compuestos es-
teroides son capaces de prevenir el efecto txico de ciertos frmacos [88].
Una posible explicacin para este tipo de fenmeno es que el PXR, acti-
vado por estos esteroides, induce la actividad de los enzimas de metabo-
lizacin y destoxificacin. Apoyando esta idea est el hecho de que exis-
te una correlacin entre la distribucin tisular del PXR y la de las
protenas de la subfamilia CYP3A [89-92]. Evidencias experimentales
posteriores demostraron que el PXR de ratn era capaz de heterodimeri-
zar con RXRa y unir eficientemente el motivo de DNA de repeticin di-
recta DR3 dentro del promotor proximal del CYP3A23 [87]. En huma-
nos tambin se encontr que un elemento de repeticin ER6 en la regin
promotora proximal del CYP3A4 era activado por heterodmeros PXR-
RXRa [84-86], adems un elemento modular de respuesta a xenobiti-
cos localizado en una regin intensificadora a unas 8 kb del inicio de
transcripcin tambin se demostr necesario para la mxima induccin
de la actividad CYP3A4 por PXR [93].
La regulacin del gen CYP3A4 por receptores nucleares es un tema
importante desde el punto de vista farmacolgico ya que se ha estimado
que este citocromo est implicado en el metabolismo de casi el 60% de
los medicamentos de uso comn y, por lo tanto, no es sorprendente que
su actividad est implicada en muchas de las interacciones medicamen-
tosas descritas [94, 95]. Adems de regular a los miembros de la subfa-
milia CYP3A, el PXR tambin participa en la regulacin de miembros
RAMIRO JOVER ATIENZA
220
de la subfamilia CYP2B. Se han identificado elementos DR4 en los pro-
motores de diversos genes CYP2B [96-98]. En el promotor del CYP2B1
(rata), CYP2B6 (humano) y CYP2B9 (ratn) se identific una regin de-
nominada phenobarbital-responsive enhancer module (PBREM) que de-
mostr una activacin dependiente del PXR. Los elementos de respuesta
PBREM contienen dos motivos DR4 que unen tanto PXR-RXRa como
otro heterodmero que consiste en RXRa y CAR, sugieriendo que los ge-
nes de la subfamilia CYP2B estan bajo el control de ambos receptores
nucleares, PXR y CAR [96-98].
Los activadores del PXR poseen una elevada diversidad estructural.
Adems de los metabolitos del pregnano ya descritos, encontramos glu-
cocorticoides, antiglucocorticoides (RU486), esteroides naturales como la
progesterona, as como una serie de xenobiticos tal como el clotrima-
zol, la lovastatina y el ester de bisfosfonato SR1283 [99, 87]. Aunque el
PXR de diversas especies comparten activadores comunes, hay tambin
diferencias marcadas en la activacin de los distintos ortlogos de este
receptor nuclear. Por ejemplo, la rifampicina y el SR1283 activan el PXR
de conejo y el humano, pero no el de rata o el de ratn. En consonancia,
la rifampicina induce los genes CYP3A4 (humano) y CYP3A6 (conejo)
pero no induce la isoforma de rata CYP3A23. Contrariamente, PCN, de-
xametasona y 17a-hidroxipregnenolona que son activadores potentes del
PXR de ratn pero no del humano, inducen los genes CYP3A de rata/ra-
tn pero no tienen ningn efecto en el CYP3A4 humano [100-103]. Es-
tas diferencias entre especies son debidas a propiedades intrnsecas de los
distintos ortlogos del PXR, tal como se demuestra en estudios con ra-
tones deficientes en PXR pero transgncos para el PXR humano (huma-
nized mouse) donde si existe respuesta a la rifampicina [104].
Si tenemos en cuenta el hecho de que el PXR estimula la expresin
del CYP3A, no sorprende el que exista una superposicin casi absoluta
entre los activadores del PXR y los inductores del CYP3A. La activacin
coordinada de ambas protenas por una serie de compuestos sugiere que
estas protenas pueden trabajar conjuntamente en la deteccin (PXR) y la
eliminacin (CYP3A) de xenobiticos a travs del metabolismo oxidati-
vo. Adems, si tenemos en cuenta la habilidad del CYP3A de metaboli-
zar a la mayora de frmacos, la induccin del CYP3A por PXR tambin
sugiere que los medicamentos que estimulan al PXR estn predispuestos
221
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
a causar interacciones medicamentosas en pacientes que toman diversos
medicamentos. Por ello, el screening de compuestos que se unen como
ligando y activan al PXR es un aspecto importante a tener en cuenta du-
rante el desarrollo de nuevos frmacos.
El PXR tambin regula los genes que codifican enzimas implicados
en la sntesis, transporte y metabolismo de cidos biliares. Se postula que
el PXR podra actuar como un sensor de sales biliares, como el cido li-
toclico, para regular la expresin de varios genes de un modo coordi-
nado y as prevenir la acumulacin de cidos biliares potencialmente t-
xicos [105, 106]. En este sentido el PXR al mismo tiempo que inhibe al
CYP7A1 (enzima limitante de la sntesis de cidos biliares a partir de co-
lesterol) [107, 106], induce al CYP3A, que tambin metaboliza cidos bi-
liares para facilitar su eliminacin, y al OATP2, que transporta cidos bi-
liares al interior del hepatocito para su metabolismo por CYP3A [106,
105, 104, 98].
En resumen podemos decir que el PXR juega un papel fundamental
en la proteccin del hgado contra los niveles fisiopatolgicos de cidos
biliares. As, a pesar del hecho de que la activacin del PXR por agentes
farmacolgicos puede conducir a interacciones medicamentosas, los ac-
tivadores del PXR pueden resultar tiles en el tratamiento de la enfer-
medad colesttica.
3.3. El receptor CAR (Constitutive Androstane Receptor)
Desde hace casi 40 aos se sabe que algunos CYPs se inducen en
respuesta al fenobarbital (FB) [96]. El subconjunto de genes que se esti-
mulan por FB incluye CYP2A, CYP2B, CYP2C, CYP2H, CYP3A y
CYP6A [96]. De todos ellos los CYP2B son los que mejor se transacti-
van por el FB [108, 109], un efecto que adems ocurre predominante-
mente en el hgado. El estudio de los promotores de diversos CYP2B ha
demostrado que existe una secuencia de DNA de 51-bp denominada
PBREM que media la respuesta al FB [110]. Esta secuencia PBREM se
encuentra en el promotor de diversos CYP2B como el CYP2B9/10 de ra-
tn, el CYP2B1/2 de rata y el CYP2B6 humano [111]. La conservacin
de esta secuencia entre especies sugiere que puede tener una funcin ms
generalizada en la respuesta a otros xenobiticos adems del FB. De he-
RAMIRO JOVER ATIENZA
222
cho, se ha demostrado que el PBREM puede mediar la induccin de los
CYP2B por diversos xenobiticos que han sido todos denominados phe-
nobarbital-like inducers por su habilidad de inducir la expresin de los
genes CYP2B, a pesar de no poseer semejanza estructural [112, 110, 111].
Entre los diversos inductores de este grupo encontramos un pesticida con-
taminante (TCPOBOP) que es uno de los inductores ms potentes y ms
utilizados en los estudios para descifrar los mecanismos por los que ac-
tan estos compuestos [112, 110, 111].
El hecho de que el FB y otros xenobiticos fueran capaces de esti-
mular la expresin de los CYP2Bs a travs del elemento PBREM, que
contiene secuencias de hexanucletidos DR4, sugiri que este fenmeno
deba estar mediado por un receptor nuclear. Efectivamente, los estudios
con genes reporteros conteniendo el elemento PBREM demostr que un
receptor nuclear conocido como CAR era capaz de aumentar la actividad
reportera, unindose a este elemento como un heterodmero con el re-
ceptor RXRa [113]. El receptor CAR esta estrechamente relacionado con
el PXR y se expresa predominantemente en hgado, pero tambin en in-
testino a niveles ms bajos [114, 115]. El CAR fue clasificado como un
receptor constitutivo a raz de su habilidad para transactivar genes dia-
na en ausencia de ligando aadido [114, 115], si bien ms tarde se iden-
tificaron diversos ligandos que modulan su actividad. Ciertos androsta-
nos, por ejemplo, son capaces de debilitar la asociacin entre el CAR y
sus coactivadores, por lo que reciben el nombre de agonistas inversos
[116]; por el contrario, la unin del TCPOBOP al CAR incrementa nota-
blemente el reclutamiento de sus coactivadores [117]. Diversos estudios
permiten concluir que la actividad constitutiva del CAR es de hecho in-
dependiente de ligando [118], pero eso no impide que este receptor nu-
clear medie tambin los efectos inductores del FB y de los otros induc-
tores de este grupo (Figura 3).
De modo similar a ciertos receptores esteroides en los que la adicin
del ligando promueve la acumulacin nuclear del receptor, el tratamien-
to de ratones con TCPOBOP o FB causa la translocacin del CAR des-
de el citoplasma al ncleo de los hepatocitos [119]. Aunque el mecanis-
mo de esta traslocacin no se ha descifrado completamente todava, si se
sabe que ciertos inhibidores de fosfatasas como el cido ocadico pueden
prevenir dicha translocacin en hepatocitos tratados con FB, inhibiendo
223
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
as la inducin del CYP2B [119] (Figura 3). La entrada de CAR al n-
cleo no sigue el esquema de los receptores esteroides que implica unin
del ligando, disociacin de protenas de choque trmico o inmunofilinas
y transporte al ncleo. Ms bien, los datos actuales sugieren que existe
un mecanismo especfico para mantener al CAR en el citoplasma y que
este estado es dependiente de fosforilacin. La translocacin nuclear del
CAR es adems un fenmeno con caractersticas exclusivas para cada es-
pecie. Por ejemplo, TCPOBOP provoca la translocacin nuclear del CAR
murino pero no la del ortlogo humano [96].
RAMIRO JOVER ATIENZA
224
FIGURA 3. Posibles mecanismos de induccin por fenobarbital (FB). La induccin
de la expresin de los CYP2Bs por FB y otros xenobiticos est mediada por el re-
ceptor nuclear CAR que se une al elemento PBREM como un heterodmero con el re-
ceptor RXRa. El receptor CAR es tambin capaz de activar otros elementos de res-
puesta existentes en las regiones reguladoras de otros CYPs como los CYP3A y los
2C. El CAR est secuestrado en el citoplasma formando un complejo con protenas
de choque trmico, inmunofilinas, fosfatasas, etc. Tras el tratamiento con FB se ini-
cia una transduccin de la seal en la que la desfosforilacin es un paso crtico para
la translocacin nuclear del CAR. Una vez en el ncleo el CAR podra necesitar ser ac-
tivado por fosforilacin para poder realizar correctamente su funcin transactivadora
Los estudios en ratones deficientes en CAR sugieren que este recep-
tor nuclear juega un papel central en el metabolismo de xenobiticos, ac-
tuando como sensor de un gran nmero de substancias y regulando al
mismo tiempo la actividad de los citocromos P-450 encargados de su me-
tabolizacin [120, 121].
3.4. El receptor PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated
Receptor)
Los citocromos P-450 de la subfamilia CYP4A catalizan la oxigena-
cin de cidos grasos biolgicos como el cido araquidnico y otros ei-
cosanoides. Los genes CYP4A pueden ser activados transcripcionalmen-
te en el hgado y el rin por una serie de frmacos acdicos y otros
xenobiticos como los fibratos hipolipidmicos, plastificadores industria-
les y varios contaminantes ambientales [122]. Estos compuestos inducto-
res del CYP4A se clasifican como compuestos proliferadores de los pe-
roxisomas ya que inducen marcadamente los enzimas peroxisosomales
hepticos causando un incremento notable tanto en el tamao como en el
nmero de peroxisomas celulares. Los activadores exgenos del CYP4A
no solo estimulan la proliferacin de los peroxisomas en los hepatocitos,
sino que tambin pueden inducir carcinoma hepatocelular por un meca-
nismo no genotxico, es decir, por un mecanismo que no implica dao
directo al DNA por los compuestos xenobiticos inductores o sus meta-
bolitos [123].
El receptor responsable de la induccin del CYP4A, de los enzimas
peroxisomales y de la proliferacin de los peroxisomas hepticos, se clo-
n por primera vez en 1990 y se denomin PPARa (Peroxisome Prolife-
rator-Activated Receptor a) [124]. El estudio de su distribucin tisular
demuestra que se expresa mas abundantemente en hgado, seguido de ri-
n y corazn, y esta distribucin refleja la respuesta mayor o menor de
estos tejidos a los agentes prolifereadores de peroxisomas [67].
La induccin del CYP4A y la proliferacin de los peroxisomas est
ausente en ratones deficientes en PPARa [125]. Este fenmeno esta en
consonancia con la presencia de elementos de respuesta para receptores
nucleares en la regin 5 de los genes CYP4A que unen heterodmeros
PPARa-RXRa [126, 127]. En el caso del CYP4A6 de conejo, existe por
225
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
ejemplo un intensificador potente para el PPAR localizado en la regin
comprendida entre -667 y -644 bp, que contiene cuatro repeticiones he-
xamricas imperfectas, dos de ellas organizadas como un motivo DR1,
muy similar al encontrado en otros genes activados por PPAR [128]. Para
que la unin al DNA sea efectiva, el receptor PPARa, que est en el n-
cleo de un modo constuitutivo, ha de unir en primer lugar compuestos
proliferadores de los peroxisomas o cidos grasos endgenos [129]. Ade-
ms, los heterodmeros PPAR-RXR son permisivos en el sentido que pue-
den ser activados sinergsticamente por la combinacin de compuestos
proliferadores de peroxisomas, que se unen al PPAR, y por cido 9-cis-
retinico que se une al RXRa [126].
3.5. El receptor AhR (Aryl hydrocarbon Receptor)
Aunque muchos genes CYP implicados en el metabolismo de xeno-
biticos son activados transcripcionalmente por miembros de la superfa-
milia de receptores nucleares (CAR, PXR, PPAR, etc.), la induccin de
los genes de la subfamilia CYP1A est regulada por el receptor de hi-
drocarburos aromticos policiclicos (AhR), que es un factor de trans-
cripcin de la familia bHLH-PAS (basic helix-loop-helix, Per-Arnt/AhR-
Sim homology) y que es estructuralmente distinto de los receptores
nucleares. El motivo bHLH est localizado en la regin amino terminal
y participa en la dimerizacin y unin al DNA. El motivo PAS consiste
en unos 250 aminocidos que se encuentran adyacentes al motivo bHLH
en direccin carboxilo-terminal y se cree que su funcin es la de generar
una superficie interactiva para la homo- o hetero-dimerizacin [71]. En
ausencia de ligando AhR est presente en el citosol acomplejado con las
protenas Hsp90, XAP2 (protena tipo inmunofilina) y p23 (co-chapero-
na) [130] (Figura 4). XAP2 y p23 son requeridos seguramente para man-
tener la estabilidad del complejo de choque trmico Hsp90. Tras la unin
al ligando el AhR se transloca al ncleo y se disocia del complejo Hsp90
para formar un heterodmero con la molcula Arnt [131, 130]. Este hete-
rodmero AhR/Arnt reconoce una secuencia de DNA intensificadora (en-
hancer) que se denomina XRE (xenobiotic response element) localizada
en la regin promotora del gen CYP1A1 causando un aumento de la ac-
tividad transactivadora [132] (Figura 4). En el caso del CYP1A1 de ra-
RAMIRO JOVER ATIENZA
226
tn se han encontrado seis copias de la secuencia diana XRE. La unin
de AhR/Arnt al DNA remodela la estructura de la cromatina (Figura 4) y
facilita la asociacin de otro factor de transcripcin, Sp1, con su secuen-
cia de reconocimiento en la regin promotora. Adems, el heterodmero
AhR/Arnt interacciona directamente con Sp1 y ambos factores de trans-
cripcin incrementan sinergsticamente la actividad del gen [133]. Al igual
que otros factores de transcripcin, el heterodmero AhR/Arnt se comu-
nica con los factores de transcripcin generales (GTFs) a travs de inter-
acciones con coactivadores como CBP/p300 y SRC-1 [134].
El CYP1A1 juega un papel destoxificador de compuestos aromticos
policclicos, pero su induccin puede tener tambin un efecto deletreo
ya que genera metabolitos mutagnicos y especies reactivas del oxgeno.
227
CONTROL GNICO DE LA EXPRESIN DEL CITOCROMO P-450 EN EL HGADO
FIGURA 4. Mecanismo de activacin transcripcional por hidrocarburos aromticos
policclicos. En ausencia de ligando el receptor AhR est presente en el citosol
acomplejado con las protenas Hsp90, XAP2 y p23. Tras la unin al ligando el AhR
se transloca al ncleo y se disocia del complejo Hsp90 para formar un heterod-
mero con el factor Arnt. El heterodmero AhR/Arnt reconoce una secuencia de DNA
reguladora (XRE) localizada en la regin promotora de los genes diana y causa un
aumento de la transactivacin. La unin de AhR/Arnt al DNA remodela la estruc-
tura de la cromatina y facilita la asociacin de otros factores de transcripcin y de
los factores de transcripcin generales a travs de interacciones con coactivadores
Aunque es cierto que el AhR es un receptor de xenobiticos, los estudios
recientes en ratones deficientes en AhR sugieren que este receptor juega
un papel regulador en la homeostasis y el desarrollo de animales, por lo
que se cree debe de existir un ligando intrnseco para el AhR. De hecho,
la velocidad de crecimiento de los ratones AhR-/- es mucho ms lenta
que los normales (wild-type), encontrandose retraso en el desrrollo del
hgado y del sistema inmune [135]. En ratones adultos tambin se han
encontrado diversos defectos en el fenotipo como la acumulacin de ci-
do retinico en el hgado o una estructura vascular anormal en el hgado
y el rin [136, 137].
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