Universidad Santo Toms

Departamento de Ciencias Bsicas

Laboratorio de Bioqumica
Semana del 26 de Mayo al 6 de Junio del 2014.-
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PRCTICO N6
Metabolismo de Carbohidratos.
OBJETIVOS
Observar experimentalmente el proceso de metabolismo anaerbico de fermentacin.
Comprobar el efecto de inhibidores de la gliclisis.
INTRODUCCIN
Todos los seres vivos requieren un continuo aporte de nutrientes para suplir sus necesidades de
materia y energa. El principal nutriente de la clula es la glucosa, la que es catabolizada para producir
ATP, la forma ms importante de energa utilizable en la clula. El metabolismo aerbico de la glucosa
ocurre a travs de una serie de reacciones:
Gliclisis: NADH ATP Piruvato a Glu cos


Descarboxilacin oxidativa del piruvato:
NADH CO AcetilCoA Piruvato 2


Ciclo de Krebs: ATP FADH NADH CO AcetilCoA
2 2


Cadena respiratoria y fosforilacin oxidativa: O H ATP O FADH NADH
2 2 2


En ausencia o deficiencia de oxgeno, ocurre el proceso anaerbico de fermentacin, en que el
piruvato (producto de la gliclisis) se transforma en acido lctico (msculo) o etanol (levaduras y
bacterias).
Fermentacin lctica:

NAD Lactato NADH Piruvato

Fermentacin alcohlica:
2
CO NAD anol E NADH Piruvato



En presencia de suficiente oxgeno ocurre respiracin celular aerbica, en que el piruvato se
incorpora a la mitocondria y se transforma en Acetil-CoA, el cual a travs del ciclo de Krebs origina
CO
2
y coenzimas reducidas. Estas coenzimas reducidas se incorporan a la cadena respiratoria
mitocondrial donde son reoxidados por O
2
, y que consecuentemente mediante fosforilacin oxidativa
producen ATP. Esta va aerbica es la principal va de produccin de ATP. En cambio, algunas clulas
como los glbulos rojos y las bacterias anaerbicas estrictas tienen en el metabolismo anaerbico la
nica va de produccin de ATP, en tanto que otras clulas como las levaduras, que son anaerobios
facultativos, en ausencia de O
2
realizan fermentacin y en presencia de l, realizan respiracin celular.


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ACTIVIDADES
A. Fermentacin alcohlica en levaduras (Saccharomyces cerevisiae).
La fermentacin alcohlica en levaduras ocurre de acuerdo a la reaccin:
2 5 2 6 12 6
2 2 CO OH H C O H C
El etanol se acumula en el medio y el CO
2
es liberado como gas, por lo que se puede medir la
fermentacin por la produccin de CO
2
.
Procedimiento.
Soluciones y materiales:
Solucin de levadura 10%(p/v) a 43C
Solucin de glucosa 10% (p/v) a 43C
Solucin de NaF 0,1 M
Solucin rojo neutro 0,01 M
Agua destilada a 43C
Papel pH y papel parafilm
4 tubos de ensayo
Bao termorregulado a 43C

1. Prepare la siguiente batera de tubos:
TUBOS 1 2 3 4
Suspensin de levaduras 1mL 1mL 1mL 1mL
Solucin de Glucosa 1mL 1mL 1mL
Solucin de NaF 1mL
Agua destilada 2mL 1mL
Solucin rojo neutro 1mL

2. Agite por inversin para homogenizar el contenido de cada tubo.
3. Tape cada tubo hermticamente con papel parafilm. Marque el nivel de la solucin en cada tubo y
amarre con un elstico los 4 tubos. Incube en un bao termorregulado a 43C.
4. Al cabo de 30 minutos marque el nivel final de la solucin en cada tubo y mida el volumen de gas
producido con una pipeta con agua.
5. Verifique el pH en el tubo 2 con papel pH.
6. Anote y discuta sus resultados. Qu debera ocurrir en cada tubo?
7. Busque y anote la estructura de la glucosa y determine sus caractersticas.
8. Investigue para qu se utiliza el NaF y la solucin rojo neutro en esta actividad.
9. Investigue qu sucede con el CO
2
cuando pasa a la fase acuosa.








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B. Velocidad de Fermentacin.
Soluciones y materiales:
Solucin de levadura 10%(p/v)
Solucin de glucosa 10% (p/v)
Solucin de sacarosa 10% (p/v)
Solucin de azul de bromotimol
Agua destilada
Cronmetro
Bao termorregulado a 43C
Trozo de manguera flexible
Papel parafilm.
Dos tubos de ensayo

1.- Tomar dos tubos de ensayo. En el primer tubo adicionar 5 ml de sacarosa al 10% y 1 ml de cultivo
de levaduras al 10%; y en el segundo tubo adicionar 1ml de Azul de Bromotimol diluido en 4 ml de
agua destilada. Sumergir ambos tubos en bao a 43C.
2.- Conectar ambos tubos de ensayo con una manguera flexible, teniendo la precaucin de dejar la
manguera sumergida en la solucin de Azul Bromotimol. Sellar bien cada tubo con Parafilm para evitar
la fuga de gas.
3.- Cuando comience la reaccin de fermentacin, el producto gaseoso burbujear en la solucin
indicadora, por lo que Azul de Bromotimol, cambiar a un color amarillo-ocre.
4.- Tomar el tiempo que demora el azul de bromotimol en que cambie su color original a
amarillo ocre, considerando que la reaccin comienza inmediatamente despus de colocar tubos en
bao termorregulado a 43C y sellar ambos tubos.
5.- En paralelo, otro grupo realice el mismo experimento cambiando la sacarosa por glucosa al 10%.
6.- Comparta los resultados obtenidos con sus compaeros y analice.
7.- Investigue por qu cambia el color de la solucin de azul de bromotimol cul es la finalidad
de esta solucin en esta reaccin?.

ANEXO (revisar estas preguntas previo al prctico).

1.- Si en ambas experiencias experimentales est analizando el proceso de fermentacin:
a) Esquematice la reaccin exacta del metabolismo anaerbico realizado por la levadura
(gliclisis y fermentacin).
b) Cul es la finalidad del proceso de fermentacin?.
c) La fermentacin corresponde a un proceso catablico o anablico?. Fundamente.
d) Respecto a la actividad A: cul de todos los tubos analizados genera en forma adecuada
fermentacin y porqu?.
e) Respecto a la actividad B: cul es la reaccin ms rpida de fermentacin ya sea utilizando
glucosa o sacarosa y porqu?.


ESTE LABORATORIO SER EVALUADO CON QUIZ DE ENTRADA (NOTA QUIZ) Y QUIZ DE
SALIDA (equivalente a NOTA INFORME).